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Resumen
Numerosas vacunas convencionales para uso animal estn disponibles actualmente, y muchas de estas
vacunas han sido instrumentales en el control de enfermedades infecciosas de mayor importancia
econmica. Una vacuna ha sido instrumental en la erradicacin de la viruela, una importante
enfermedad humana. Sin embargo, muchas de las vacunas actuales son deficientes en eficiencia,
potencia o seguridad. Se ha reconocido que las metodologas convencionales son una limitacin para el
desarrollo adicional de las vacunas. La introduccin de los anticuerpos monoclonales, del DNA
recombinante y las tcnicas de ingeniera de protenas han facilitado un ms bien rpido incremento en
el conocimiento de los mecanismos patognicos, as como de antgenos protectores a nivel molecular.
Este conocimiento proporciona la base para el desarrollo de una nueva generacin de vacunas. Como
regla, estas vacunas contienen inmungenos purificados, o an epitopes aislados, identificados y
preparados por tcnicas moleculares biolgicas. Los esfuerzos para encontrar mejores sistemas de
aplicacin y mejores adyuvantes acompaan la investigacin sobre vacunas.
Vacunas actuales
A pesar de que no es el propsito de este artculo revisar todos los mayores hitos histricos en
microbiologa e inmunologa que han conducido al desarrollo de las vacunas actuales, se
mencionarn las contribuciones intelectuales extraordinarias de Jenner y Pasteur. En 1798, el
primer reporte de una vacuna viva segura fue publicado por el mdico Edward Jenner quien us
el virus de vacuna para proteger exitosamente contra la viruela y as inici la nueva era de la
vacunacin profilctica (1). Sin embargo, no se realiz muchos progresos hasta que el gran
qumico francs Louis Pasteur report en 1880 que Pasteurella multocida, crecida in vitro,
inmunizaba a los pollos en contra el desafo con cultivos de Pasteurella multocida virulenta.
Esto ha sido reconocido como la piedra angular de la inmunologa (2). Siguiendo estos
experimentos iniciales con lo que fue en aquel tiempo conocido como colera de aves, Pasteur
adicionalmente desarroll vacunas contra el antrax y la rabia cultivando los agentes patognicos
bajo condiciones de crecimiento desfavorables (2), y as introdujo una tcnica para la
produccin a propsito de vacunas. Una dcada ms tarde, organismos enteros qumicamente
inactivados comenzaron a ser utilizados para prevenir enfermedades de humanos; las primeras
vacunas bacteriales muertas (bacterinas) contra la fiebre tifoidea y el clera, fueron producidas
en 1896 (2).
Despus de la alentadora invencin de varias vacunas, usando ambos, organismos atenuados
y muertos, apasionantes logros se continuaron haciendo en el campo de la preparacin de
vacunas. En la parte inicial del siglo XX, se alcanzaron tambin algunos xitos en la produccin
de vacunas frente a otros patgenos y agentes bioactivos, tales como rickettsiae (3) y toxinas
de ttanos (2). Ahora, hay numerosas vacunas para uso veterinario y aproximadamente 20
vacunas para uso humano (4). Muchas de estas vacunas juegan roles importantes en limitar
serias enfermedades animales y humanas. La viruela, una de las enfermedades ms
desvastadoras en los seres humanos, ha sido erradicada igualmente a travs de vacunacin,
mientras muchas otras enfermedades han sido puestas bajo control.
Las vacunas clsicas se pueden dividir en dos grupos de acuerdo al estatus del organismo o
agente bioactivo incluido como antgeno: vivas o muertas (inactivadas). El trmino muerto se
Traducido por: Cecilia Carpio
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fibre por infeccin con el virus del dengue hemorrgico (12). En este caso el anticuerpo
especfico ha estado implicado en el incremento de la patogenicidad por facilitacin de la
entrada del virus en los macrfagos, seguido por la prdida de la funcin de los macrfagos. Se
sospecha que el mismo mecanismo se da con el VIH (13-15). Por tanto, es obvio que la idea
tradicional de usar organismos enteros no patognicos o subunidades burdamente purificadas
para estimular respuesta inmune contra agentes infecciosos patognicos tiene que ser
abandonada a favor de anlisis ms meticulosos de los mecanismos inmunoprotectores, y los
determinantes antignicos involucrados.
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antgeno de los anticuerpos se conocen como idiotipos (Id). Las regiones hipervariables de las
molculas de los anticuerpos secundarios, complementarias a los idiotipos, tienen una
configuracin del antgeno que da lugar al idiotipo (34).
Los idiotipos y antiidiotipos, como cualquier otro par de antgenos y anticuerpos, tienen una
complementaridad de llave cerradura a sus superficies tridimensionales. En 1974, la teora de la
red para regular la respuesta inmune basada en el fenmeno descrito antes fue propuesta por
Jerne (35). Jerne razon que la respuesta del hospedero a un antgeno es controlada por una
serie de reacciones idiotipo-antiidiotipo que podra incrementar o suprimir la respuesta inmune
al antgeno. Un idiotipo dado est bajo el control de un anti-Id, o Ab-2, mientras el anti-Id puede
ser regulado por otro grupo de anticuerpos conocidos como anti-anti-Id, o Ab-3. Este grupo
complejo de reacciones opera va un mecanismo de retroalimentacin para controlar la
respuesta inmune (36). Cuando el equilibrio de la interaccin idiotipo-antiidiotipo se rompe
mediante inmunizacin con un antgeno, una interaccin Id particular domina y una respuesta
inmune sera inducida (37). La propiedad inmunolgica doble de los idiotipos, tambin conocida
como Ab-1, ha sido bien documentada (36-38). El anti Id inducido cuando se usa el idiotipo
sobre Ab como antgeno es nuevamente complementario, y por tanto imita la estructura del
determinante del determinante antignico original (36). Para el diagrama vea la Figura 1.
Una nueva estrategia de vacunacin ha sido extrapolada a partir de esta teora, concretamente
empleando anti Id en las vacunas como antgenos subrogantes. Se podra inducir las
respuestas inmunes humoral y mediada por clulas (40, 41). Esto sera especialmente til
cuando solo la inmunidad a un nico epitope de un agente infeccioso es adecuada para la
proteccin. Las vacunas anti-Id tendra algunas ventajas. Primera, tal vacuna podra no
contener cido nucleico o protenas indeseables e incrementara la seguridad de la vacuna. Se
ha reportado que la vacuna anti-Id fue capaz de estimular una respuesta inmune en recin
nacidos insensibles a esa edad a antgenos polisacardeos (39). Esto proporciona una forma de
eludir la insensibilidad a antgenos bacterianos capsulares en neonatos (19, 37, 38). Las
vacunas anti-Id son buenas candidatas para la manufactura de vacunas en las cuales los
antgenos son polisacridos y carbohidratos porque estos no pueden ser producidos por
tecnologa de DNA recombinante. Con el uso de tcnicas de anticuerpos monoclonales, los
anticuerpos anti-idiotpicos se pueden hacer a partir de antgenos impuros, y, una vez que se
establecen los hibridomas requeridos, la produccin en grandes cantidades es mas bien no
cara. Alternativamente, los anti-idiotipos usados en vacunas podran ser sintetizados
qumicamente (por ingeniera de protenas) (33).
Inspirados por la teora de Jerne, Sacks iniciaron la vacuna anti-Id contra la tripanosomiasis
africana experimental (42). Desde entonces, se ha usado la anti-Id para inducir respuestas a
antgenos asociadas con un gran nmero de parsitos, bacterias y virus (Tabla 2). Se ha
mostrado que la anti-Id se liga al idiotipo desplegado en los tumores de las clulas B y causan
inhibicin del crecimiento o lisis de estos tumores sin afectar los tejidos normales (43, 44). Este
mtodo inmunoteraputico proporciona una exitante nueva va para la terapia de la leucemia
bovina, algunas formas de la leucemia felina, y otros tumores de las clulas B. A pesar de la
considerable cantidad de informacin disponible el uso de las vacunas anti-Id est an en la
fase experimental (19).
3.0 Vacunas vivas atenuadas y virales recombinantes
En el pasado, muchas vacunas atenuadas fueron producidas pasando el agente etiolgico a
travs de un hospedero no natural, y fueron usadas exitosamente sin el conocimiento de la
base gentica subyacente. Avances recientes en gentica viral y biologa molecular
proporcionan la base para la construccin racional de mutantes atenuados estables para usar
en inmunoprofilaxis.
3.1 Atenuacin por mutacin
La atenuacin se puede alcanzar tericamente mediante cualquier mutacin que disminuya la
capacidad de replicarse de un virus en un hospedero. Se estableci que en el caso del virus de
la rabia, la atenuacin est asociada con la sustitucin de un solo aminocido (79). Una
propiedad esencial de cualquier vacuna viral viva atenuada es la estabilidad de la atenuacin
del fenotipo. La reversin a la patogenicidad ocurre primariamente por supresin, por ej,
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mediante el desarrollo de un segundo sitio de mutacin que corrige el defecto causado por las
mutaciones originales. Por tanto, la atenuacin del fenotipo debe ser estabilizada induciendo
tantas mutaciones como sean consistentes con la viabilidad e inmunogenicidad satisfactoria
(79). Los mutantes por supresin, tales como aquellos usados recientemente para el virus de la
pseudorrabia (gen suprimido el de la timidina quinasa)(81,82), debe ser estable porque la
ausencia de un gen no puede ser sustituido por una mutacin en cualquier sitio del genoma. Se
ha mostrado que los mutantes de supresin del virus del herpes simplex han reducido la
capacidad de ser reactivados a partir de las clulas de los gnglios (83). La eliminacin de un
gen adicional en el caso del virus de la pseudorabia hace a la respuesta inmune a esta vacuna
vrica distinguible de aquella contra los virus salvajes (81). Este es un rasgo muy deseable para
los esfuerzos de erradicacin porque los cerdos infectados con virus salvajes de pseudorabia
albergan el virus patognico de por vida, con la posibilidad de derramamiento en cualquier
momento.
3.2. Seleccin de epitopes mutantes usando anticuerpos monoclonales neutralizantes
La atenuacin tambin se puede alcanzar seleccionando mutantes espontneos de un virus
que resiste neutralizacin por anticuerpos monoclonales neutralizantes (nAb). Sin embargo,
solo unos pocos de estos mutantes exhiben atenuacin, y ms bien pueden revertir fcilmente.
El hecho de que los mutantes resistentes a la neutralizacin por mAB de retrovirus
neurovirulentos son estables (80) indica que este enfoque podra ser frutfero con al menos
algunos virus.
Anticuerpo neutralizante (NAb) es un anticuerpo que defiende a la clula de un antgeno o
cuerpo infeccioso inhibiendo o neutralizando cualquier efecto que tenga biolgicamente. Ej. la
antitoxina de la difteria que puede neutralizar los efectos biolgicos de la toxina de la difteria.
3.3 Virus recombinantes usados como vectores para antgenos protectores heterlogos
Los virus recombinantes que expresan genes forneos de organismos patognicos son un caso
especial de vacunas virales vivas. Tales vacunas no han sido licenciadas an, pero las altas
expectaciones por estas vacunas se reflejan en los intensos esfuerzos de investigacin ahora
en camino en muchos laboratorios preocupados con vacunas contra importantes patgenos
veterinarios y humanos. Con el uso de tecnologa de DNA recombinante, se puede construir
virus genticamente alterados portadores de genes forneos que codifican para determinantes
antignicos de otros patgenos. Los genes forneos se deben expresar sobre la superficie de
aquellos virus, y los virus se deben replicar en una especie vacunada sin ningn efecto
peligroso para el hospedero. En el proceso de infeccin limitada por s misma con el virus
recombinante, los animales vacunados sern inmunizados concomitantemente contra el agente
del cual se adquiri el gen forneo.
Mucha de la investigacin hecha hasta aqu ha sido con el virus vaccinia como vector. Los
rasgos biolgicos que influenciaron el intenso inters en el virus vaccinia incluyen un DNA
genmico cercano a 200,000 pares de bases que permite el reemplazo de muchos genes sin
afectar la capacidad del virus para crecer en cultivo de tejidos (59). El virus vaccinia tambin
tiene un sistema de transcripcin codificado por el virus con secuencias regulatorias nicas,
aparente ausencia de empalme de RNA (exclusin de algunas secuencias de nucletidos del
mRNA despus de la transcripcin del DNA), y un sitio citoplasmtico de replicacin (60). El
procedimiento para la insercin del gen inmunizante forneo en el virus vaccinia es descrito
esquemticamente en la Figura 2.
El protocolo para insertar genes forneos en el virus vaccinia involucra, primero, el clonaje
molecular de aquel gen. El gen que codifica para el determinante antignico de inters
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Fig. 1. Mtodo para construir un vector para vacuna vrica que porta un gen seleccionado de otro virus. TK = gen de
timidin quinasa del virus de vaccinia; BudR = Bromodeoxiuridina; codones de inicio ATG y parada-TAA para la
traduccin denotan la secuencia fornea de DNA a ser insertada en el virus de vaccinia.
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El uso de virus vaccinia recombinante tiene varias ventajas sobre los otros tipos de vacunacin.
El rasgo ms importante es su capacidad para estimular la inmunidad humoral y mediada por
clulas (19, 62,64). Se ha demostrado que el virus recombinante sonsaca ambas respuestas
inmunes, la primaria y la secundaria (61). Ms an los productos expresados por el virus
vaccinia recombinante estn adecuadamente glicosilados, procesados, y transportados a las
membranas, y consecuentemente imitan el estado nativo de los antgenos. Los genes nativos
son expresados por tanto en una manera similar a la sntesis nativa y estos presentan un
autntico antgeno para el sistema inmune (59). Esto no es cierto para los productos preparados
por expresin del gen en vectores de expresin procariotes y eucariotes. La estabilidad trmica,
la economa de manufactura y la facilidad de administracin son ventajas adicionales de estas
vacunas. La posibilidad de incluir genes responsables para la inmunizacin y excluir genes que
podran causar efectos laterales indeseables proporciona una base para la mayor seguridad de
estas vacunas. Se pueden tambin insertar mltiples genes en el virus vaccinia para producir
vacunas polivalentes para agentes que exhiben un nmero de protenas inmunognicas (62).
El obstculo ms serio para licenciar estas vacunas ha sido la preocupacin pblica sobre la
seguridad de la posible liberacin medioambiental de virus recombinantes. Hay una
preocupacin adicional con las vacunas recombinantes de vaccinia, la cual se basa en la
patogenicidad del mismo virus vaccinia no alterado para humanos con funciones inmune
mediadas por clula daadas. Se conoce que el virus vaccinia causa infecciones severas,
generalizadas raras en individuos con inmunodeficiencias del tipo mediado por clulas. As la
posibilidad de esparcirse de estos virus desde animales vacunadoa a humanos, a pesar de ser
remota, presenta otro obstculo para licenciarla. Sin embargo, se han emprendido intentos para
atenuar exitosamente el virus de vaccinia, esperanzadoramente pavimentando la va para
licenciar exitosamente estas vacunas (63).
Durante unos pocos aos pasados, otros virus tales como el adenovirus y el virus del herpes
han sido explorados como vectores. Se mostr al virus aviar como un vector adecuado para
especies aviar y no aviar (64). Las bacterias entercas apatognicas tienen algn potencial
como vectores, particularmente contra patgenos entricos y en situaciones donde la ruta
intestinal de vacunacin podra ser ventajosa (65).
El virus vaccinia es an el ms ampliamente usado con el propsito de producir vacunas
recombinantes. Las principales razones son: la capacidad para crecer en el laboratorio; la
estabilidad en preparaciones liofilizadas; amplio rango de hospederos; facilidad de
administracin (escarificacin u oralmente); y, lo ms importante, un gran genoma que permite
que ms de 25000 pares de bases sean insertaqdas y expresadas relativamente con facilidad.
Los virus quimricos de Vaccinia han sido construidos para expresar la glicoprotena de la
estomatitis vesicular (66), la hemaglutinina del virus de la influenza (67, 68), la protena de la
envoltura del retrovirus (69), la glicoprotena del virus de la rabia (70), y las protenas HA y F del
virus de la peste bovina (71). La lista de patgenos humanos importantes, los componentes
inmunizantes los cuales fueron expresados mediante los virus recombinantes de vaccinia,
incluyen la glicoprotena del virus Lassa (72), la glicoprotena del virus herpes simplex, las
protenas HA y F del virus del sarampin (75), la protena F del virus sincitial humano (76),
antgeno de superficie del virus de la hepatitis B (77), y la protena de la cubierta de HTLVIII/LAV (61). Todos estos virus recombinantes protegieron a animales experimentales contra el
desafo con los virus virulentos correspondientes.
4.0 Adjuvantes
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La palabra adyuvante viene del latin adjuvare que significa ayudar o incrementar. Los
adjuvantes son compuestos que incrementan la respuesta inmune especfica contra antgenos
coinoculados.
El tamao pequeo de los antgenos producidos mediante las nuevas tecnologas dio como
resultado baja inmunogenicidad, y esto ha conducido a actividad investigativa incrementada
sobre los viejos adyuvantes inmunolgicos, as como a investigacin para adjuvantes nuevos y
ms potentes. A pesar de que la teora sobre los adyuvantes es inmensa, el propsito de este
prrafo es listar las reas de alta actividad investigativa en coneccin con la nueva generacin
de vacunas.
En 1936 Freund desarroll una emulsin de agua en aceite mineral conteniendo micobacteria
muerta, creando as uno de los ms potentes adyuvantes conocidos, el adyuvante completo de
Freund (FCA). A pesar de ser el adyuvante estndar de oro, FCA causa reacciones locales
severas y es considerado txico para uso humano. La emulsin de aceite en agua sin la adicin
de micobacterias se conoce como el adyuvante de Freund incompleto y, siendo menos txico,
ha sido usado en formulaciones de vacunas humanas.
Los adyuvantes de Freunds incompletos (FIA) y completos (FCA) son los candidatos ms
poderosos.Los FCA contienen micobacterias muertas, adems de aceite mineral y emulsificante
presente en FIA. Los efectos laterales indeseables causados por el componente micobacterial
del FCA se puede reducir mediante el uso de derivados del componente activo del
peptidoglicano micobacteral. Otros candidatos que estn en uso o bajo consideracin son la
preparacin de lpido metabolizado, liposomas sintticos y dipptido muramlico sinttico,
hidrxido de aluminio, saponinas que incluyen Quil A y ISCOMs (complejos
inmunoestimulantes), cpsulas biodegradables de liberacin lenta, surfactantes plurnicos
polimricos de bloque, estearil tirosina y estructuras relacionadas, lipopolisacridos bacteriales
y linfocinas (84-90).
En los 1950s, Johnson et al encontr que los lipopolisacridos (LPS) de bacterias Gramnegativas exhibieron actividad adyuvante y los LPS detoxificados o compuestos relacionados
tales como los lpidos A han sido usados como adyuvantes en estudios humanos.
Roles de los adyuvantes
Los adyuvantes se pueden usar para varios propsitos:
i.
Para incrementar la inmunogenicidad de antgenos recombinantes o altamente purificados.
ii.
Para reducir la cantidad de antgeno o el nmero de inmunizaciones necesitadas para
inmunidad protectora.
iii.
Para mejorar la eficacia de las vacunas en recin nacidos, ancianos y personas
inmunodeprimidas;
iv.
O como sistemas de aplicacin de antgeno para la absorcin de antgenos por la mucosa.
El modo de accin de los adyuvantes est bajo investigacin intensiva. Se ha sugerido que los
macrfagos son los blancos primarios para la accin de los adyuvantes y son estimulados para
liberar interleucina 1 que acta sobre las clulas ayudadoras T (Th) y tambin es importante en
las respuestas de las clulas B. Los adyuvantes pueden incrementar la eficiencia de la
interaccin de las clulas B con clulas accesorias y puede aumentar la actividad de las clulas
Th (24).
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