UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR

DE SAN MARCOS
FACULTAD DE QUMICA E
INGENIERA QUMICA
BIOQUMICA
FRED GARCA ALAYO, Ph. D.
Mg. JUAN CARLOS WOOLCOTT HURTADO

CATLISIS ENZIMTICA
Establece las relaciones que existen entre la
velocidad de la reaccin enzimtica y las
concentraciones del sustrato.
Tener en cuenta 3 hechos experimentales
principales:
1) El sustrato (S) forma con la enzima E, un
complejo intermediario transitorio [ES].
2) La velocidad de la reaccin en el tiempo t,
velocidad de desaparicin del substrato,
- dS o aparicin de producto, dP
dt
dt

ENZIMAS MICHALELIANAS
Vm

A=Intervalo de tiempo para el

cual dP/t es constante

Curva de aparicin del producto en funcin del tiempo.

Los estudios de cintica corresponden siempre a la parte
lineal de la curva; lo que implica el trabajar a velocidades
iniciales.
K1
K3
E+S
[ ES ]
E+P
K2

CINTICA DE MICHALELIS-MENTEN
3) Para una concentracin de substrato dado, el estudio de
las variaciones de la velocidad inicial de reaccin en
funcin de la concentracin de enzima muestra que esta
variacin no es lineal.
Vm
v

B Intervalo de concentra donde es

aplicable de las ecuaciones de velocidad

[S]

Para los estudios cinticos es necesario situarse en las condiciones

que corresponden al principio de la curva, donde es lineal,
concentraciones bajas de enzimas.

CINTICA DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS

[v]

d[ s]
v = dt , t > 0

s
Concepto de velocidad inicial

VARIABLES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD

DE UNA REACCIN ENZIMTICA

1. Concentracin de enzima
2. Concentracin de substrato

3. pH
4. Temperatura
5. Efectores (Activadores e Inhibidores)

Efecto de la concentracin de enzima: relacin lineal

.
..

.
.
.

.
.

.
.
.

[E]

CICLO CATALTICO
DE UNA ENZIMA

ES
E
EP

Una cintica lineal implica

un proceso regenerativo,
cclico

Efecto de la concentracin de substrato

.
.
.
.
.

.
[s]

Una cintica hiperblica implica un proceso saturante:

Hay un nmero limitado de sitios en la enzima

para fijar substrato; una vez que estn ocupados
todos, por mucho que aumente la concentracin
de
substrato,
la
velocidad
permanecer
constante tendiendo a un valor asinttico

E+S

k+1
k-1

ES

k+2

E+P

DESCRIPCIN DINMICA DE LA CATLISIS ENZIMTICA

E+S

k+1

ES

k+2

E+P

k-1
s = [S]
x = [ES]
e = [E]
e0 = [ES] + [E] = x + e

ds/dt = - k+1es + k-1x

de/dt = - k+1es + (k-1 + k+2) x
dx/dt = k+1es - (k-1 + k+2) x
dp/dt = k+2 x
e0 = e + x

El sistema de ecuaciones diferenciales que describe la

dinmica del sistema

E+S

k+1

ES

k+2

E+P

k-1
No admite solucin analtica. Para describirlo recurrimos a:
- Simulaciones numricas
- Hiptesis que lo simplifiquen

SIMULACIN NUMRICA DEL SISTEMA

E+S

k+1

k-1

ES

k+2

E+P

HIPTESIS DE MICHAELIS - MENTEN

E+S

k+1

ES

k+2

E+P

k-1
- La primera parte del mecanismo,

k+1

E+S

ES

k-1
Tiene lugar mucho ms rpidamente que la segunda:

ES

k+2

E+P

Hiptesis de
Michaelis-Menten

E S es e0 xs
Km

ES x
x

Equilibrio rpido

e0 s
x
Km s

v k2 x

k 2 e0 s
v
Km s

Vmax s
v
Km s

k2e0 Vmax

HIPTESIS DE BRIGGS Y HALDANE

Postulan un estado estacionario
La velocidad de formacin del complejo [ES] es igual a
su velocidad de descomposicin en todas direcciones
(formacin de P y aumento de sustrato).
Velocidad de formacin es [ES] = K1 [E] [S]
Velocidad de desaparicin de
[ES] = K2 [ES] + K3 = [ES] = (K2 + K3) [ES]
El estado estacionario se describe entonces
K2 + K3
[ES]
K1 [E] [S]= (K2 + K3) [ES]; [E] =
=
K1
[S]
con Km = K2 + K3 / K1

 La enzima en la reaccin es [ ET ] = [ E ] + [ ES ]
Si sustituimos [ E ] por su valor, se tiene:
K2 + K3

[ ET ] = [ ES ] (1 +

X
K1

[ ET] [ S ]
[ ES ] =
K2 + K3 + [ S ]
K1

)
[S]

 La velocidad de formacin del producto esta dado por:

v = K3 [ ES ]
K3 [ ET ]

[S]

v=
K2 + K3 + [ S ]
K1
K2 + K3 / K1 = Km
Cuando la concentracin del sustrato tiende al infinito, la
velocidad inicial tiende hacia K3 [ ES ] K3 ET o sea hacia
velocidad mxima Vm, toda la enzima se encuentra bajo
la forma [ E ]. Reemplazando tenemos:
Vm [ S ]
v=
Km + [ S ]

dx
0 k 1es k 1 k 2 x
dt

k1es k1 e0 xs k1 k2 x
e0 s
e0 s
x

k 1 k 2
Km s
s
k 1

Vmax s
v
Km s

v k2 x

k2e0 Vmax

Hiptesis de
estado estacionario

Tanto con las suposiciones de Michaelis-Menten como con

las de estado estacionario, llegamos a la ecuacin

Vmaxs
v=
Km + s

La nica diferencia radica en el significado de Km:

Km = k-1/k+1 en mecanismo de M.M.
Km = (k-1 + k+2)/k+1 en mecanismo de E.E.

SIGNIFICADO DE LA CONSTANTE Km
1. Constante de equilibrio de disociacin del complejo ES
(en condiciones de equilibrio rpido)
2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el
substrato (en condiciones de equilibrio rpido)

3. Mide la funcin de fijacin (en cond. de equilibrio

rpido)
4. Concentracin de substrato para la que la velocidad se
hace igual a la mitad de la mxima (s0.5)
5. Se define para una pareja enzima-substrato
6. Se mide en unidades de concentracin

Significado de la constante Vmax = k+2 e0

1. Velocidad asinttica para s

2. Directamente proporcional a la concentracin de enzima

(hoy se prefiere caracterizar a la enzima por k+2)
3. Mide funcin de transformacin cataltica
4. Se expresa en unidades de velocidad

Representacin directa

Vmax

100

80

60

Vmx s
v
Km s

40

20

s
0
0

20

Km

40

60

80

100

Representacin recproca doble

(Lineweaver - Burk)
0.04

1/v
0.03

1/Vmax
-1/Km

0.02

1 Km 1 1

v Vmx s Vmx

0.01

0.00
-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

0.6

1/s

Representacin s -s/v
(Eadie - Hofstee)
1.2

s/v
1.0

0.8

0.6

s
1
Km

s
v Vmx
Vmx

0.4

-Km
0.2

0.0
-20

20

40

60

80

100

120

Representacin v/s - v
(Wong - Hanes)

Vmax

100

v
v Km Vmx
s

80

60

40

20

v/s
0
0

10

12

14

16

EFECTO DEL pH
v

pH

 Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas
laterales de sus aminocidos.
Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica
positiva, negativa o neutra.
Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus
cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la
ms adecuada para la actividad cataltica (Figura de la derecha).
Este es el llamado pH ptimo

EFECTO DEL pH

1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo:

- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato
2. Sobre la transformacin cataltica del substrato
3. Sobre la estructura de la protena enzimtica

NH
-

H3N

COO

Arg

NH

CH2

CH

CH2
COO+

H3N

Lys
CH

Succinato y centro activo de SDH pH 7

NH
+

COOH

C
H3 N

NH

CH2

CH

CH2
COOH
+

H3 N
CH

Succinato y
centro activo de SDH,
pH 2

NH
C
COO-

H2N

NH

CH2

CH

CH2
COOH2N
CH
Succinato y
centro activo de SDH,
pH 13

EFECTO DE LA TEMPERATURA
v

En el efecto de la temperatura hay dos componentes:

1. Aceleracin de la reaccin segn la ecuacin

de Arrhenius

k = A exp (-Ea/RT)
2. Desnaturalizacin trmica de la protena

ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
Las
molculas
enzimticas
oligomricas, pueden tener varios
sitios activos.
El sitio activo participa de una clase y
tambin de otra reacciones.
La Sintetasa de los cidos grasos
presenta 7 dominios.

ENZIMAS MULTIFUNCIONALES

REACCIONES DE DOS SUSTRATOS.

Hay aparte de las reacciones unimoleculares, hay procesos
bimoleculares
El proceso bimolecular puede tener resultados diferentes,
cuando dos sustratos dan por resultado un producto.
Bi-uni: S1+ S2
P
O cuando dos sustratos forman dos productos
Bi-Bi: S1+ S2
P1 + P2
El modelo unimolecular an es aplicable a estas reacciones
siempre que uno de los sustratos sea excesiva, de modo que no
sea limitante

MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones

interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa).
R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms
afinidad.
Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==> T (Figura
inferior):

 Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R.

Son los llamados moduladores positivos.
El propio sustrato es a menudo un modulador positivo.
Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin del
enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos (Figura inferior
izquierda).
Activador alostrico: favorece la unin
del sustrato

Inhibidor alostrico: impide la unin del

sustrato

Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son

los moduladores negativos. Si estos moduladores actan en lugares distintos del
centro activo del enzima se llaman inhibidores alostricos (Figura superior
derecha) .

EFECTO DE LA MODIFICACIN COVALENTE SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMTICA
Otros enzimas pasan de una forma menos activa a otra ms activa unindose
covalentemente a un grupo qumico de pequeo tamao como el Pi o el AMP.
Tambin se da el caso inverso, en el que un enzima muy activo se desactiva al
liberar algn grupo qumico.
En las enzimas de las vas degradativas del metabolismo, la forma fosforilada es
ms activa que la no fosforilada, mientras que en las vas biosintticas ocurre lo
contrario.
En las figuras inferiores se ilustra la activacin de una protena por fosforilacin.
Elementos de la reaccin

El enzima no fosforilado es
inactivo

El enzima fosforilado es
activo

GRACIAS