INDICE

INTRODUCCIN.......................................................................................................................................... 1
1.1

Mutaciones y mutgenos ............................................................................................................... 1

Nitritos y nitratos ........................................................................................................................................ 1

Nitrosacin .................................................................................................................................................... 2

3.1

via exgena.......................................................................................................................................... 3

3.2

Reacciones de nitrosacin endgenas ...................................................................................... 3

TOXICIDAD DE NITRITOS, NITRATOS Y NITROSAMINAS ........................................................... 4

4.1

Aumento de metahemoglobinemia. .......................................................................................... 4

4.2

Formacin de nitrosaminas en adultos..................................................................................... 5

Mecanismos de accin de las nitrosaminas ..................................................................................... 5

Mecanismos genotxicos del NO ....................................................................................................... 8

6.1

Mecanismos de dao directo al ADN por especies reactivas derivadas del NO

(RNOS)................................................................................................................................................................. 8
6.1.1

Formacin endgena de N-nitrosaminas carcinognicas ........................................ 8

6.1.2

Desaminacin de bases ......................................................................................................... 9

6.1.3

Oxidacin de bases ............................................................................................................... 10

6.2

Modificacin indirecta de la secuencia del ADN por las RNOS .................................... 10

6.2.1
7

El xido ntrico en la iniciacin y promocin tumoral.............................................. 11

Bibliografa .................................................................................................................................................. 12

NDICE DE ILUSTRACIONES
Ilustracin 1: Exposicin de compuestos N-nitroso ............................................................................... 2
Ilustracin 2: vas de formacin endgena............................................................................................... 4
Ilustracin 3: Formacin de productos electroflicos por la degradacin de los compuestos
N-nitroso................................................................................................................................................................. 6
Ilustracin 4: Desaminacin mediada por el N2O3. ................................................................................. 8
Ilustracin 5: Mecanismos mutagnicos del NO, mediados por sus especies reactivas
(RNOS). .................................................................................................................................................................... 9

Bioqumica Aplicada

Grupo C

ACCIN MUTAGNICA DE LOS NITRITOS

1
1.1

INTRODUCCIN
MUTACIONES Y MUTGENOS
La informacin gentica es transmitida de una clula a su sucesora por la precisa
duplicacin de las cadenas del cido desoxirribonucleico (ADN), en un proceso que
es comn a todos los seres vivos, desde simples bacterias hasta complejos animales
o plantas. Alteraciones en la informacin gentica ocurren como resultado de
pequeas alteraciones en la estructura de la molcula de ADN, Los agentes
mutagnicos (qumicos o fsicos) interactan con el ADN causando cambios en su
estructura. Este cambio puede ser una prdida, adicin o reemplazo de bases,
alterndose as la secuencia del ADN y afectando la fidelidad del mensaje gentico
(Trossero & Caffarena, 2006)

NITRITOS Y NITRATOS
Tanto los nitritos como los nitratos son denominados en conjunto compuestos NNitrosos, se sabe que estos compuestos producen compuestos de nitrosacin, como
las nitrosaminas, las cuales se pueden formar de diferentes maneras como ingerir
estos compuestos en la dieta, durante la biotransformacin del humo del tabaco o por
la produccin endgena en el medio gstrico.
Los nitritos que se ingieren generalmente se combinan con aminas y amidas naturales
en los alimentos o dentro del organismo humano dando lugar a la formacin de
nitrosaminas, debido a sus altos niveles en la dieta contribuyen a la incidencia de
cncer. (BVSDE) Los compuestos N Nitroso son mutgenos que ejercen sus efectos
cancergenos a travs de la formacin de iones diazonio electrofilicos, capaces de
promover la alquilacin del ADN.
Se originan como consecuencia de la reaccin de las aminas secundarias (aromticas y
alifticas) con el cido nitroso HNO2.

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Grupo C

NITROSACIN
El organismo humano generalmente puede quedar expuesto a nitrosaminas por dos
vas y de esta manera puede incrementar la posibilidad de generar un potencial
carcinognico.
a) La primera va es la denominada exgena y se presenta a travs del medio
ambiente que rodea al organismo. Es decir, en la atmosfera existen aminas
libres que pueden reaccionar con xidos de nitrgeno, generando condiciones
acidas. Tambin se han observado altas concentraciones de nitrosaminas en
humo de tabaco y en diferentes bebidas o alimentos como por ejemplo:
cereales, carnes rojas y blancas, pescado y quesos.
b) La segunda va es la llamada endgena o in vivo, la cual es ms significativa y
comn. Consiste en la posible formacin de nitrosaminas en el tracto
gastrointestinal del hombre, al reaccionar precursores no cancergenos como
son los compuesto amino ( de aminocidos, protenas y amidas) con los
nitritos, gases nitrosos o nitratos (Martinez, 2008)
Ilustracin 1: Exposicin de compuestos N-nitroso

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3.1

Grupo C

VIA EXGENA
Los nitritos y nitratos, son los compuestos ms utilizados para el color de las carnes
curadas. Tambin tiene accin microbiana, especialmente junto al NaCl, son
importantes por ejemplo en el caso de productos crnicos no estriles,
especialmente para evitar las infecciones con clostridium botulismo. Su efecto es
dependiente del pH y proporcional a la concentracin de HNO2.
La contaminacin de agua con nitrato puede ser de origen natural, ejemplo: Por los
pozos ciegos, cmaras spticas, etc., o por la fertilizacin de suelos para cultivos; los
nitratos son buenos indicadores de contaminacin microbiolgica del agua donde
existen pozos spticos cercanos a los pozos agua de bebida. (Secretaria de ciencia
y tecnologia- Universidad de Catamarca)

3.2

REACCIONES DE NITROSACIN ENDGENAS

La formacin endgena de las NA puede darse por diversos mecanismos biolgicos
mediados por cidos, bacterias o vas celulares. Estas reacciones pueden darse en
diversos sitios del organismo, como el estmago, la vejiga urinaria, y el intestino
delgado y grueso. Muchos compuestos N-nitroso son formados en el interior del
organismo mediante reacciones de nitrosacin, sobre todo en el medio cido del
estmago. La accin de nitritos y xidos de nitrgeno con compuestos nitrogenados
secundarios y terciarios en alimentos tambin lleva a la formacin de compuestos Nnitroso.
La nitrosacin para dar derivados N-nitroso no slo es posible en relacin a
alimentos: tambin sustancias usadas como herbicidas pueden sufrir la reaccin en el
jugo gstrico. Las especies alquilantes dainas para el ADN, luego de la nitrosacin,
son las correspondientes lactonas, y que la reactividad en aminocidos (Trossero &
Caffarena, 2006)

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Ilustracin 2: vas de formacin endgena

TOXICIDAD DE NITRITOS, NITRATOS Y NITROSAMINAS

Los riesgos ms importantes derivados de nitratos y nitritos son dos:

4.1

AUMENTO DE METAHEMOGLOBINEMIA.
Hay dos tipos principales de metahemoglobinemia: la primaria o congenia, que es
hereditaria, y la secundaria que es producida por sustancias toxicas. Esto se puede
deber a diversos compuestos capaces de oxidar la hemoglobina in vitro a travs de
intermediarios metablicos.
Hay dos formas de metahemoglobinemia hereditaria.

La primera forma la transmiten ambos padres, quienes generalmente no

padecen la enfermedad en s, pero portan el gen que la causa. Ocurre cuando
hay un problema con una enzima llamada citocromo b5 reductasa.

La segunda forma de la metahemoglobinemia hereditaria, llamada enfermedad

de la hemoglobina M, es causada por defectos en la molcula de la
hemoglobina en s. Slo uno de los padres necesita transmitirle al hijo el gen
anormal para que ste herede la enfermedad.

La metahemoglobinemia secundaria o adquirida es ms comn y ocurre en algunas

personas despus de la exposicin a ciertos qumicos y drogas, como:
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Anestsicos como benzocana

Benceno

Ciertos antibiticos (entre ellos, dapsona y cloroquina)

Nitritos (usados como aditivos para evitar que las carnes se daen)
( University of Maryland, 2014)

4.2

FORMACIN DE NITROSAMINAS EN ADULTOS.

Las nitrosaminas son compuestos estables que solo se descomponen en presencia
de luz o en ambientes cidos, en contraste, estas son mucho menos estables en
soluciones acuosas y estables en soluciones bsicas. La estructura general de los
componentes N-nitroso se presenta a continuacin:
(

Estas se pueden dividirse en dos clases con diferentes propiedades qumicas:

a) Nitrosaminas donde R1 y R2 pueden ser alquilos o grupos de alquilos.
b) Nitrosamidas donde R1 es un alquil o grupo alquil y R2 es un grupo acil.
La principal ruta qumica a la formacin de nitrosaminas son las reacciones de
aminas secundarias con cido ntrico en presencia del ion nitrito. El cido nitroso
anhdrido N2O3 y preferentemente el cido nitroso HNO2 son los agentes
nitrosilantes para las Aminas secundarias ya que la formacin de nitrosaminas es
dependiente de la concentracin de aminas y HNO2. (Antn & Lizaso)
Los estudios realizados in vivo han revelado que distintas N-nitrosaminas, entre ellas
las dialquiladas, actan inhibiendo la actividad enzimtica microsomial, reduciendo la
actividad de la glutation-S-transferasa hasta un 80%. El efecto txico favorece y
potencia la mutagenicidad y carcinogenicidad de las N-N-nitrosaminas, debido a
que los cambios enzimticos que provocan conlleva un aumento de compuestos
mutagnicos a partir de las mismas (AESAN, 2007)

MECANISMOS DE ACCIN DE LAS NITROSAMINAS

El desarrollo de los carcinomas por las N-nitrosaminas se debe a la induccin de
mutaciones en clulas somticas de rganos diana para la actividad nitrosamnica. Las

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N-nitrosaminas requieren actividad metablica para transformarse en mutgenos, ya

que por s mismas no pueden reaccionar con el DNA. En consecuencia en el
mecanismo de carcinognesis se contempla la siguiente secuencia:

Exposicin a la nitrosamina.

Activacin metablica de la misma.

Interaccin con el DNA u otros componentes de la clula.

Las nitrosamidas se hidrolizan sin la participacin de enzimas y alquilan todos los

tejidos que penetran. Los sitios de alquilacin de las bases nitrogenadas ms
relacionadas con el proceso de carcinognesis parecen ser la O6 y N7 guanidinas.
Para ejercer su efecto mutagnico las nitrosamidas lo hacen directamente, pero las
nitrosaminas requieren activacin metablica por va enzimtica.
Ilustracin 3: Formacin de productos electroflicos por la degradacin de los compuestos N-nitroso

La habilidad de la clula para reparar este error antes de la divisin celular es un

factor crtico para evitar el desarrollo de tumores. El metabolito activo de
dimetilnitrosamina es producido por oxidacin generando ion carbonio el cual es el
principal agente alquilante que afecta el material gentico.

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La actividad metablica est catalizada por enzimas que oxidan las N-nitrosaminas
(entre ellas NDMA, NDEA y NPYR) a compuestos genotxicos por diferentes
enzimas P450, especialmente P450 2E1 produciendo metilaciones en el DNA y
hepatotoxicidad. La activacin metablica por la CYP2E1 y 2A6 comienza con una
reaccin de -hidroxilacin del tomo de carbono prximo al grupo nitrosamino
rindiendo una - hidroxinitrosamina muy inestable (vida media alrededor de 10
segundos) que, rpidamente, se disocia en un aldehdo y una alquilnitrosamina
cuyos subsiguientes metabolitos son tambin agentes alquilantes y su reaccin con
el DNA se considera como punto clave en la induccin de mutaciones y, por
consiguiente, para la iniciacin de la carcinognesis
En el caso particular de la NDMA ( N-Nitrosodimetilamina) , el in metanodiazonio,
resultante de la activacin metablica de esta N-nitrosamina, es el agente
alquilante responsable de producir metilaciones en diferentes sitios de las bases
nitrogenadas, especficamente en las posiciones N-7, N-3, N-1, N2 y O6 de la
guanina; N-3, O2 y O4 de la tiamina y uridina; N-3, O2 y N4 de la citosina y N-1, N-7,
N-3 y N-6 de la adenina. (AESAN, 2007)
Las proporciones relativas de los tomos de N y O dependen del agente alquilante
y de la especificidad de la enzima P450 implicada en la activacin de la NUniversidad Nacional de San Agustn

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nitrosamina en los diferentes tejidos. Se ha podido comprobar que el dao

genmico ms significativo es la metilacin de los nucletidos de guanina,
aceptndose que la formacin de O6-metilguanina es la responsable de la
carcinognesis inducida por la NDMA. (AESAN, 2007)

MECANISMOS GENOTXICOS DEL NO

Actualmente se considera que el NO es capaz de generar lesiones en la secuencia
primaria del ADN y otras biomolculas, y de esta forma mediar el surgimiento y
desarrollo tumoral. Los mecanismos por los cuales este gas puede producir esos
daos son explicados a partir de los efectos deletreos de las especies reactivas
derivadas de l.

6.1

MECANISMOS DE DAO DIRECTO AL ADN POR ESPECIES REACTIVAS

DERIVADAS DEL NO (RNOS)

6.1.1 Formacin endgena de N-nitrosaminas carcinognicas

Las N-nitrosaminas son compuestos qumicos con potencial carcinognico
reconocido, debido a que pueden ser metabolizadas a fuertes agentes
alquilantes.15 Se sintetizan mediante la reaccin del agente electroflico N2O3con
aminas bigenas segn la primera reaccin representada en la figura
Ilustracin 4: Desaminacin mediada por el N2O3.

La formacin endgena de estos compuestos se ha demostrado en lneas celulares

de hepatocitos inmortalizados con el virus de los simios SV 40 Tag.

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6.1.2 Desaminacin de bases

Las N-nitrosaminas de aminas primarias pueden generar iones diazonium, los que
se hidrolizan espontneamente a alcoholes como se representa en la reaccin de
la figura.
Ilustracin 5: Mecanismos mutagnicos del NO, mediados por sus especies reactivas (RNOS).

La presencia de este tipo de aminas en la estructura de las bases nitrogenadas

indica que estas pueden ser desaminadas por el NO va N2O3, generndose
alteraciones puntuales con potencial mutagnico.
Experimentos in vitro han aportado evidencias, las cuales sugieren que la
desaminacin de bases por este mecanismo parece tener un patrn de mutaciones
dirigido fundamentalmente a las bases pricas, aunque tambin se pueden afectar
las pirimidnicas.19 Las mutaciones ms comunes son las transiciones guanina (G) a
adenina (A) y viceversa. Tambin es frecuente la formacin de bases modificadas
como la oxanina, derivada de la guanina, que puede producir entrecruzamientos
inespecficos ADN-protenas. De esta manera se afecta la integridad del ADN por 2
mecanismos diferentes: provocar inestabilidad genmica por el entrecruzamiento
entre las protenas-ADN y actuar como un sustrato suicida para enzimas
reparadoras de este dao.
Se ha observado in vitro una mayor frecuencia de alteraciones en simples que en
dobles cadenas de oligonucletidos, eso sugiere que este mecanismo mutagnico

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se produce cuando las bases se encuentran desprotegidas en eventos celulares

como la replicacin y la transcripcin, en los que la doble hlice se abre.
6.1.3 Oxidacin de bases
Experimentos en macrfagos activados en cultivos celulares muestran dao
oxidativo y por desaminacin del ADN. El anlisis del destino del NO en estas
clulas mostr que la mayor parte pasaba a la generacin de peroxinitrito (ONOO-);
un fuerte agente oxidante.
El tratamiento de plsmidos de ADN con ONOO- sinttico y su insercin en
sistemas biolgicos para su replicacin y posterior anlisis, mostraron un espectro
de mutaciones puntuales; fundamentalmente transversiones de guanina a timina (T)
y de guanina a citosina (C).
El poder oxidante de esta especie es suficiente tambin como para daar
directamente al azcar y provocar sitios sin bases en el ADN, adems de oxidar y
modificar las bases generando especies difciles de reparar. La formacin de estas
lesiones ocurren con ms frecuencia en simples que en dobles cadenas, siendo
reparada por la formamidopirimidina-DNA glicosilasa.
6.2

MODIFICACIN INDIRECTA DE LA SECUENCIA DEL ADN POR LAS RNOS

Algunos autores han sugerido que tanto la desaminacin, oxidacin y ruptura de
cadenas del ADN por las RNOS requiere de concentraciones muy elevadas,
situacin que muy raramente se dara en humanos. Adems, in vivo los
antioxidantes como el ascorbato y el glutatin (GSH) son abundantes, lo que
disminuye las posibilidades de acumularse RNOS a concentraciones suficientes
como para producir dao al ADN directamente. Es por ello que se han sugerido
otras hiptesis.
Una hiptesis muy prometedora se basa en la inhibicin de los sistemas
enzimticos reparadores de las lesiones en el ADN y de esta manera favorecer el
dao indirectamente.
Las RNOS poseen una elevada afinidad por el grupo tiol (-SH) de la cistena.Lo
anterior sugiere que aquellas enzimas con cistenas crticas para su actividad,

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pueden ser inhibidas por estas especies reactivas. Otros grupos nucleoflicos como
el hidroxilo (-OH) de la tirosina y el amino (-NH2) de la lisina, tambin son
potencialmente modificables.
Jaiswal y otros (2001), observaron que las lneas celulares de colangiocarcinoma y
colangiocitos transfectados con el gen de la NOS inducible , eran incapaces de
reparar la lesin 8-oxo-G. Esta lesin es reparada por las enzimas Fpg y 8-oxoguanina glicosilasa, enzimas que resultaron inhibidas por el NO y sus especies
reactivas. Estas evidencias pudieran explicar los resultados de Jaiswal y otros.
Otras enzimas inhibidas por el NO resultaron ser las ADN alquiltransferasas
reparadoras de los residuos metilados de G y T (O6-metil guanina y O4-metil
timina),y la enzima ADN ligasa. La inhibicin de esta ltima pudiera explicar el
hecho de que cuando las clulas se exponen al NO, se observe un elevado nmero
de rupturas de cadenas de ADN.
6.2.1 El xido ntrico en la iniciacin y promocin tumoral
Todos los mecanismos hasta ahora expuestos explican, desde diferentes puntos de
vista, los efectos mutagnicos del NO. Estas mutaciones bien colocadas pudieran
provocar la inactivacin de genes supresores de tumores y la activacin de
oncogenes y de esta forma participar en diferentes etapas del proceso
carcinognico. Quizs el ejemplo ms evidente de esto lo constituye el gen para la
protena p53, el cual se encuentra mutado en alrededor de 50 % de todos los
tumores humanos.
Estudios previos presentaron in vitro mutaciones de importancia biolgica en el
gen p53 inducidas por el NO y la metilacin. Posteriormente se demostr que en
estadios iniciales del carcinoma de pulmn existe una correlacin significativa entre
la actividad de las NOS y las mutaciones presentes en dicho gen.5
Aunque en estos estudios no se analiz la funcionabilidad del producto gnico, la
hiptesis es suficiente como para plantear que el NO, en situaciones como la
inflamacin, puede provocar la inactivacin del gen p53 y favorecer al menos de
este modo el surgimiento y desarrollo tumoral. (Daz Arce, 2004)

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BIBLIOGRAFA

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