ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

PRACTICA 4: PREPARARCION DE MEDIOS DE CULTIVO
Docente: QF Miguel A. Valdivia C.
INTRODUCCIN
I.-REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES DE LOS MICROORGANISMOS
Los microorganismos de acuerdo a sus requerimientos nutricionales se clasifican en
general en autotrficos y heterotrficos.
-Microorganismos autotrficos: son aquellos que obtienen su energa de la oxidacin de
sustancias inorgnicas simples
-Microorganismos heterotrficos: Son aquellos que requieren de compuestos orgnicos ms
complejos como fuente de carbono y nitrgeno, requieren del suministro de protenas,
carbohidratos, lpidos, vitaminas, sales inorgnicas y otros factores de crecimiento para la
sntesis de compuestos estructurales y citoplasmticos en su desarrollo.
II.-MEDIOS DE CULTIVO
Son sustancias nutritivas lquidas o slidas, que se utilizan en el laboratorio para el
crecimiento de los microorganismos, pudiendo ser similares a sustratos naturales, en los cuales
estos crecen normalmente
COMPOSICION
Sus componentes bsicos deben satisfacer las mnimas exigencias nutricionales para el
desarrollo microbiano y varan segn el tipo de bacteria.
Incluyen agua, nutrientes como fuentes de nitrgeno, carbono y energa. Se consideran
adems para el crecimiento, necesidades de oxgeno (aerobios), CO2 parcial o total y
condiciones ptimas de pH y temperatura de incubacin.
UTILIDAD
Los medios de cultivo de acuerdo a su naturaleza pueden ser orgnicos e inorgnicos. La
mayora de los medios de cultivo empleados para el desarrollo inicial y aislamiento de
microorganismos heterotrficos, son ricos en componentes proteicos: pptidos, peptonas,
proteosas, aminocidos, sales inorgnicas como fosfatos y trazas de K y Mg.
El agar es el agente solidificante de un nutriente lquido, al igual que la gelatina y su
principal componente es un polisacrido de cadena larga, mayormente constituido por Dgalactopiranosa.

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CLASIFICACION
Segn su composicin y objetivos se clasifican de la siguiente manera:
1.-MEDIOS COMUNES
Aquellos que contienen los mnimos componentes nutricionales para organismos
heterotrficos no exigentes. Pueden ser:
-Medios lquidos: caldo nutritivo
-Medios slidos: nutrientes compuestos de un medio lquido base, al que se le agregan
sustancias orgnicas de poco o nulo valor nutritivo como el agar o gelatina, para dar al medio la
consistencia de gel.
Ejemplo: agar nutritivo. Un medio as nos permite el aislamiento de bacterias no exigentes al
estado de pureza, a partir de una fuente problema
-Medios semislidos: compuesto por cualquiera de los medios lquidos antes mencionados, a
los que se le adiciona una cantidad suficiente de agar para obtener un estado de gel blando.
Principalmente se usa para estudios de motilidad macroscpica.
2.-MEDIOS ENRIQUECIDOS O SUPLEMENTADOS
Preparados para satisfacer los requerimientos nutricionales de bacterias ms exigentes. Se
componen de un medio basal ordinarios suplementado con factores de crecimiento como
sangre, vitaminas, extracto de levadura, caldo TSA etc. Pueden ser:
-Medios lquidos: caldo BHI, caldo TSA
-Medios slidos: Agar BHI, agar sangre, agar chocolate.
3.-MEDIOS SINTETICOS DEFINIDOS O QUIMICAMENTE DEFINIDOS
Son preparados exclusivamente de sustancias qumicas.
-Medios sintticos simples: contienen carbono como fuente de energa, una fuente inorgnica
de nitrgeno; fosfato o sulfato y varias otras sales minerales. Ejemplo: medio mnimo de Davis
-Medios sintticos complejos: incorporan aminocidos, purinas, pirimidinas y otros factores de
crecimiento para cepas exigentes
4.-MEDIOS ESPECIALES
Son aquellos que adems de contener los requerimientos nutricionales bsicos, llevan en
su composicin sustancias inhibidoras con carcter selectivo y compuestos especficos e
indicadores para poner de manifiesto los principales caracteres bioqumicos esenciales para el
diagnstico especfico. Comprenden:
-Medios de enriquecimiento: Que favorecen el crecimiento de uno o un grupo de
microrganismos en particular e inhiben en lo posible a otros de la microflora acompaante.
Ejemplo: Agua peptonada alcalina (APA), Caldo tetrationato
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-Medios selectivos: Que favorecen el aislamiento de un determinado grupo de microrganismos
mediante la obtencin de colonias. Todos son utilizados en condiciones slidas, Ejemplo: Agar
Chapman, Agar MitisSalivarius, Agar McConkey, Agar EMB, Agar SS
-Medios diferenciales: Empleados para detectar reacciones bioqumicas con carcter
diferencial de grupos, gneros y especies microbianas. Ejemplo: Agar TSI, Agar LIA, Citrato de
Simmons, Medio SIM.
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
Objetivos:
-Preparar medios de cultivo comunes. Agar nutritivo
-Preparar medios selectivos: Agar McConkey
Materiales:
-Medios de cultivo deshidratados
-Balanza ordinaria
-Un matraz Erlenmeyer de un litro de capacidad, con tapn de algodn
-Una probeta graduada de un litro de capacidad
-Agua destilada
-Varillas o baguetas de vidrio
-Placas Petri
-Papel indicador de pH
Procedimiento
1. Pesar la cantidad requerida de los medios a preparar
2.

Colocar la cantidad pesada en el matraz Erlenmeyer,

adicionar agua destilada en la proporcin requerida.
Homogenizar la mezcla mediante la varilla de vidrio

3.

Colocar el matraz dentro de una olla con agua, y poner

todo sobre un trpode provisto de una rejilla de asbesto. Calentar la muestra, empleando la
llama del mechero, hasta lograr la total disolucin de los ingredientes

4. Disueltos los componentes, enfriar a 50 55 C. Verificar el pH

5. Esterilizar a la autoclave a 15 lb de presin, 121C por 15 minutos. Terminado el tiempo de
esterilizacin, esperar que la aguja del manmetro descienda y extraer los medios
6. Los medios slidos sometidos al proceso de esterilizacin y enfriados a 5055 C, deben de
repartirse en promedio de 12 a 15 ml (altura de 0.3 cm) en placas Petri estriles en
condiciones aspticas; cuando los medios se solidifican, invertir las placas para evitar que el
agua de condensacin se acumule sobre la superficie del agar.
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7. Incubar las placas a 37C por 24 horas, para mantener la esterilidad

8. Rotular datos: nombre del medio y fecha de preparacin

CUESTIONARIO
1.- Evolucin de los medios de cultivo a travs del tiempo
2.- Investigar las formulas e indicar componentes proteicos, las sales y el fundamento de uso
de los siguientes medios de cultivo:
a. Agar TCBS
b. Agar McConkey
c. Agar SS
d. Agar XLD
e. Caldo lactosado
f.

Agar TSI

g. Agar Sabouraud
h. Agar TSA
i.

Agar EMB

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