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Problemas de Enzimologia

Srie 4
1. Adicionou-se uma quantidade constante de enzima a uma srie de meios de 10 mL
com diferentes concentraes de substrato. As velocidades iniciais, representadas na
tabela abaixo, so determinadas medindo o nmero de moles, ou micromoles, de
substrato consumido (ou produto produzido) por minuto. Responda s seguintes
perguntas sem recorrer a mtodos de representao grfica:
a)
b)
c)
d)
e)
f)

Qual o valor de Vmax para esta concentrao de enzima ?


Qual o valor de Km para este enzima ?
Mostre se a reaco segue ou no uma cintica Michaeliana.
Qual a concentrao de enzima livre para [A]=5.010-3 ?
Quais as velocidades iniciais para valores de [A] iguais a 1.010-6 e 1.010-1M ?
Calcule a quantidade total de produto produzida durante os primeiros 5 min de
reaco para [A]=2.010-3 M. Poderia fazer-se o mesmo clculo para
[A]=2.010-6 M ?
g) Suponha que a concentrao de enzima em cada mistura era aumentada 4 vezes,
qual seria o valor de Km ? E o de Vmax ? Qual seria o valor de v para
[A] = 2.010-6 M ?

[A] (M)
5.010-2
5.010-3
5.010-4
5.010-5
5.010-6
5.010-7

v (mol/min)
0.25
0.25
0.25
0.20
0.071
0.0096

2. O Km de um certo enzima 1.010-5 M, sendo o comportamento do sistema


Michaeliano. Para uma concentrao de substrato de 0.10 M, a velocidade inicial de
reaco de 37 molmin-1 para uma determinada concentrao de enzima. No
entanto, a mesma velocidade de reaco de 37 molmin-1 observada quando a
concentrao de substrato de 0.010 M.
a) Usando a equao de Michaelis-Menten, mostre porque que a velocidade de
reaco no afectada por uma reduo de uma ordem de grandeza na concentrao
de substrato.
b) Calcule v como fraco de Vmax para concentraes de substrato de 0.20 Km, 0.50
Km, 1.0 Km, 2.0 Km, 4.0 Km, 10.0 Km
c) A partir dos resultados da alnea anterior, esboce um grfico de v/Vmax em funo
de [A]/Km . Qual ser o melhor intervalo de valores de [A] para estudar a dependncia
de v com [A] ou determinar o valor de Km

3. Pretende-se desenhar um ensaio enzimtico de forma a ser pouco sensvel a


pequenas variaes na concentrao de substrato. Qual dever ser o valor de [A]/Km
para que uma variao de 10% na concentrao de substrato resulte numa variao de
v inferior a 1% ?
4. A anidrase carbnica do eritrcito (M.M. 30000) tem um dos mais altos
turnovers (kcat) que se conhece. A reaco que cataliza a hidratao reversvel do
CO2:

H 2 CO3 ,
H 2 O + CO 2

que um passo muito importante no transporte do CO2 dos tecidos para o pulmo. Se
10.0 g de anidrase carbnica pura catalisarem a hidratao de 0.30 g de CO2 em 1
minuto a 37 oC e velocidade mxima Vmax, qual ser o kcat da anidrase carbnica (em
unidades de min-1) ?
5. Um enzima michaeliano apresenta os seguintes parmetros cinticos: k1=5.0x107
M-1s-1, k-1=2.0x104 s-1 , k2=4.0x102 s-1 . Calcule o Km (segundo o modelo de BriggsHaldane) e o Ks para esta reaco. Pode considerar-se que h manuteno de um
estado de pr-equilbrio entre enzima, subtrato e complexo enzima-substrato ?
6. Num estudo cintico da enzima fumarase de corao de porco, determinaram-se
parmetros para a reaco directa Km = 1.7 mM e Vmax = 0.25 mMs-1. Para a reaco
inversa determinaram-se os parmetros Km = 3.8 mM e Vmax = 0.11 mMs-1. Numa
amostra de fumarase de provenincia diferente, os parmetros determinados foram Km
= 1.6 mM e Vmax = 0.024 mMs-1 para a reaco directa e Km = 1.2 mM e Vmax = 0.012
mMs-1 para a reaco inversa. Comente estes resultados.
7. Um estudo de velocidades iniciais de catlise de uma esterase para uma mistura
racmica de substratos mostraram que o enantimero L era o substrato verdadeiro,
consumido totalmente para dar produto, enquanto o enantimero D podia ser
recuperado intacto no final da reaco. Com base nestes resultados, a cintica da
reaco foi analisada, assumindo que o enantimero D no tinha qualquer efeito sobre
o enzima, e estimou-se um Km de 2 mM para o enantimero L. Estudos posteriores
mostraram que o enantimero D tem efeito sobre a reaco, actuando como inbidor
competitivo, com um Kic igual ao Km. Em face desta ltima concluso, qual deveria
ser o valor correcto para o Km inicialmente estimado ?
8. Para uma reaco sujeita a inibio pelo produto, a equao da curva de progresso
dada por

kcat [E]0 t = (1 K mA K mP )([A]0 [A]) + K mA (1 + [A]0 K mP ) ln ([A]0 [A])


a) Verifique que a forma diferenciada desta equao corresponde equao da
inibio pelo produto.
app
b) Escreva as expresses para K mapp e Vmax
e verifique em que condies podem
estes valores ser negativos.