APLICACIN DE TECNOLOGIAS EN FITOPATOLOGIA

Existen diversas definiciones de biotecnologa, sin embargo, todas ellas son

comunes, el trmino biotecnologa podra definirse como " la manipulacin
gentica, multiplicacin de organismos a travs de tecnologas novedosas tales
como: cultivo de tejidos e ingeniera gentica, as como la utilizacin de los
subproductos de los microorganismos, lo cual resulta en la produccin de
organismos mejorados o produccin de subproductos que pueden utilizarse de
muy diversas formas".
A pesar de que, los procesos biotecnolgicos son tan antiguos como la misma
produccin del etanol, hasta recientemente el hombre ha tratado de aprovechar
tales procesos.
La biotecnologa vegetal, est basada en un riguroso entendimiento de la biologa
molecular, uso de diversas tcnicas de cultivo de tejidos vegetales y en la
habilidad de identificar, aislar y transferir genes especficos de un organismo a
otro, la biotecnologa vegetal hace posible la propagacin clonal rpida, acelera y
amplia el lmite de mejoramiento, hace posible la produccin especializada de
productos vegetales en condicin de cultivos de tejidos.
La biotecnologa vegetal trasciende en la fitopatologa de las siguientes
maneras:
Incrementa la propagacin de plantas a travs de la propagacin clonal rpida,
para la obtencin de plantas madre libres de patgenos y subsecuentemente
proteger a las plantas hijas de los Fito patgenos.
Obtencin de nuevas variedades de plantas en las cuales se han adicionado
genes a travs de la ingeniera gentica.

Probablemente en el futuro, sea el principal vehculo para mover genes de una

planta donadora u otro organismo a plantas receptoras, particularmente
con Agrobacterium tumefaciens y el virus mosaico de la coliflor.
Para estudio de genes vegetales con resistencia a enfermedades y genes de
virulencia de los Fito patgenos es ayudado ya por ingeniera gentica y se espera
un gran avance en el futuro.
El control de muchas enfermedades de plantas estar girando alrededor de la
insercin de genes de resistencia en plantas, por tcnicas de ingeniera gentica,
o por microorganismos manipulados genticamente que puedan antagonizar
efectivamente o competir con un patgeno en particular (Control Biolgico)

Aplicacin de la Biotecnologa en la Fitopatologa

La creciente demanda de alimentos a nivel mundial exige mayor cantidad y calidad
de los productos del campo, sin embargo, la produccin eficaz de los mismos se
ha visto mermada por una serie de factores adversos, entre los que se pueden
mencionar a las plagas y las enfermedades, las cuales reducen drsticamente la
calidad y cantidad de las cosechas agrcolas.
Lo anterior ha provocado que, cientficos e investigadores se enfoquen a la
bsqueda de alternativas en los procesos de produccin agrcola, para reducir el
impacto que provocan los problemas fitosanitarios.
La biotecnologa, como ciencia emergente ha permitido grandes logros en el
bienestar del hombre ya sea en aspectos mdicos, industriales, agrcolas, etc. La
biotecnologa agrcola ofrece un beneficio potencial en la produccin de cultivos, a
travs de la multiplicacin masiva de plantas, plantas resistentes a plagas y
enfermedades, as como la manipulacin de microorganismos para el control de
plagas y enfermedades.
Tcnicas biotecnolgicas de importancia en fitopatologa
1) Tcnicas de cultivo de tejidos
a) Propagacin clonal rpida (micro propagacin).
Explantes de hojas, puntas de races, nodos, etc. Son esterilizados
superficialmente y lavados repetidamente con agua destilada estril, se colocan en
tubos que contienen un medio adecuado para su desarrollo, la utilizacin de
cultivos de puntas meristemos puede dar por resultado la generacin de plantas
libres de patgenos.

b) Cultivo de callos y clulas simples.

Un callo es una masa desorganizada de clulas alargadas no diferenciadas, se
produce cuando un explante se coloca en un medio rico en auxinas, si estos callos
se colocan en un medio balanceado de auxinas y citocininas se producen
embriones, y por consiguiente se pueden desarrollar brotes y races, los cuales
pueden dar una planta completa. Esta tcnica se ha usado comnmente para
estudiar el comportamiento de los patgenos, especialmente los obligados, as
como los posibles papeles de las sustancias secretadas (toxinas) por los mismos,
tambin se usa para estudiar las barreras estructurales y bioqumicas de defensa
de las plantas.
c) Protoplastos vegetales.
Los protoplastos son clulas, de las cuales la pared celular ha sido removida por
digestin enzimtica, con enzimas degradadoras de la pared (0.5% de pectinasa,
2% de celulasa y de 8 a 13% de manitol). Con esta tcnica se pueden obtener
hbridos somticos si existe fusin de protoplastos, en el cual uno de ellos puede
existir informacin gentica para resistencia aun en especies diferentes.
2) Tcnicas de ingeniera gentica
Probablemente la mayora de las tcnicas utilizadas en biotecnologa molecular y
biologa molecular vegetal sean usadas en relacin al desarrollo de enfermedades
y su control.
La biologa molecular de varios patgenos ha recibido tremenda atencin debido a
que pueden usarse como vehculos de material gentico dentro del genoma de las
plantas.
a)

Clonamiento de genes.

Consiste en el aislamiento y multiplicacin de un gen individual o secuencia de

genes por insercin dentro de una bacteria o levadura donde puede ser replicado,
permite la produccin de grandes cantidades de ungen o su RNAm, para estudiar
la estructura del gen y la secuencia que regula su expresin, para re sintetizar o
modificar el gen y para mover el gen en otro organismo que puede producir
entonces el producto codificado por el gen. Lo anterior puede lograrse mediante:
-Clonamiento de DNA complementario de RNAm
-Clonamiento de genes de DNA genmico.

b) Vectores para clonar genes en plantas.

Los vectores son organismos o agentes que pueden transferir material gentico de
un organismo a otro donador a otro receptor; de tal forma que el material gentico
sobreviva y se exprese en la clula receptora.
Vectores de material gentico:
i) Plsmidos
ii) Virus, especialmente el virus del mosaico de la coliflor y geminivirus
iii) Elementos transponibles (transponsones) Tn5 y Tn7
Sin embargo algunos de estos vectores, especialmente los virales y plsmidos
bacterianos, tambin infectan las clulas con material gentico indeseable, o bien
no existen vectores adecuados para algunos hospederos.
En tales casos se requiere el uso de sistemas de liberacin, tales sistemas
pueden ser qumico mecnicos:
1) Incorporacin de piezas de DNA en fragmentos de cromosomas o en
plsmidos, mezclando protoplastos con cido nucleico en presencia de cationes
como poly-L-ornitina o polietilenilgicol.
2) Electroporacion o electro transformacin. Consiste en el tratamiento de una
mezcla de protoplastos vegetales y DNA con pulsos cortos elctricos, los cuales
temporalmente puncionan la membrana de la clula y permiten la entrada del
DNA. El DNA puede entonces expresarse y el protoplasto puede regenerarse en
una planta.
3) Micro inyeccin. Inyeccin directa del cido nucleico en las clulas vegetales
4) Biobalistica. El proceso se basa en la aceleracin de micro partculas
embebidas de DNA, a velocidades tales que permiten su paso a travs de la pared
y membrana celular y la integracin de la informacin dentro de las clulas de los
tejidos bombardeados; este mtodo debe considerar variables biolgicas como el
uso de construcciones genticas adecuadas, es decir con promotores fuertes y
expresables en el tejido transformable.
Con cualquiera que sea el mtodo de transformacin de plantas, se busca la
incorporacin de genes que expresen resistencia a las enfermedades de las
plantas, considerndose estas como plantas "transgnicas".

Existen ejemplos de plantas transgnicas con resistencia a plagas y

enfermedades.
Broglie et al en 1991, lograron obtener plantas de tabaco transgnicas con
resistencia a Rhizoctonia solani, cuando se construy el gen hibrido de quitinasa,
por el reemplazamiento de la regin regulatoria 5de un gen de endoquitinasa,
CH5B con la regin promotora del virus mosaico de la coliflor 35 s, las plantas
expresaron constituitivamente el gen de quitinasa. Estas plantas se transformaron
con los plsmidos pK35CHN695, pk35CHN641 y pKNK.
Asimismo Yoneyama y Anzai en 1994, encontraron que introduciendo el gen de la
enzima detoxificante de tabtoxina, derivado de Pseudomonas Syringae pv.
tabaci, confiere resistencia a tabaco cuando es atacado por esta bacteria.
Tecnicas de diagnosticos de fitopatogenos.
La tecnologa de hibridacin del cido nucleico e inmuno ensayos, estn entre los
primeros productos de la biotecnologa agrcola como pruebas de identificacin,
que han impactado en el manejo de los cultivos.
a) Inmuno ensayos.
Ensayo de hibridacin dot-blot. En esencia consiste en colocar una muestra de
cido nucleico desnaturalizado de plantas sanas y plantas infectadas en una
membrana de nitrocelulosa. La membrana se incuba varios minutos con una
solucin de pre hibridacin (mezcla de DNA no homologo y protena), despus se
remueve la solucin de pre hibridacin la cual contiene una sonda especifica de
DNA. La hibridacin entre el DNA de la membrana y la sonda es detectada por
una auto radiografa sobre pelcula de rayos X.
Restriccin de la longitud de los fragmentos polimrficos (RFLPs). Un anlisis de
RFLPs incluye el aislamiento y purificacin de DNA genmico o de organelos,
seguidos por digestin del DNA purificado con enzimas de restriccin. Las
enzimas (comnmente Bam Hi, EcoR1, HindIII y Pst1) cortan el DNA en
secuencias de reconocimiento especfico de 4 o 6 nucletidos. Los fragmentos son
separados por geles de agarosa.
Anticuerpos mono y policlonales. En esta un epitope es la parte que reacciona con
el anticuerpo, entre estas se encuentran los ensayos de inmunoabsorbencia de
enzimas conjugadas (ELISA) e inmunoflourescencia (IF), por ejemplo la infeccin
latente de Clavibacter michiganensis subs michiganensis, puede detectarse en
plantas de tomate, aun cuando estas sean asintomticas.

Polimorfismos del DNA amplificado al azar (RAPDs). Los RAPDs son generados
en base a una modificacin de la tcnica de la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR). No usa oligonucleotidos especficos a diferencia del par de
oligos que se usan en PCR (uno izquierda y otro derecho)
b) Sondas de cidos nucleicos.
La tecnologa de hibridacin del cido nucleico que se usa rutinariamente en
diagnsticos humanos, ha emergido como una alternativa viable y practica en el
diagnstico de Fito patgenos.
Sin duda alguno, uno de los ejemplos sobresalientes del uso de la biotecnologa
aplicada a la agricultura es el control biolgico de enfermedades, el cual no es
propiamente nuevo, sin embargo recientemente este fenmeno se ha
aprovechado con fines prcticos, ya sea incrementando las poblaciones naturales
a travs de la modificacin de las condiciones del suelo o de la filoxera, con la
introduccin de microorganismos antagnicos o bien mediante la mejora por
ingeniera gentica de un microorganismo.
Cualquiera que sea el mtodo de control siempre ser una alternativa importante.
Por ejemplo Bacillus subtilis ha controlado eficientemente la enfermedad del
marchitamiento de la sanda causada por Fusarium oxysporum f sp Niveum.

REVISION BIBLIOGRAFICA

http://www.oocities.org/fitopatologia/biotecnologia.htm
http://www2.inia.cl/medios/biblioteca/ta/NR36237.pdf
http://www.infoagro.com/semillas_viveros/semillas/biotecnologia.htm
http://www.tecnicaindustrial.es/tifrontal/a-1006-Innovacion-tecnologica-plantas-desaladorasosmosis-inversa.aspx
http://blogs.creamoselfuturo.com/bio-tecnologia/2011/01/18/biotecnologia-de-plantas/