Cruces Monohbridos y Dihbridos de

Drosophila Melanogaster
Informe de Ingeniera Gentica

Alumnos:
Crdenas Hurtado Rosmery

4-12-2013

Cruces Monohbridos y Dihbridos de

Drosophila Melanogaster
Objetivo
Los objetivos especficos son:
-Conocer el ciclo de vida y la morfologa de las diferentes fases del desarrollo de Drosophila.
-Distinguir las diferencias morfolgicas entre el macho y la hembra.

Introduccin
En el presente trabajo se utilizaron individuos que pertenecen a la especie Drosophila
melanogaster, y se estudio el ciclo de vida, las caractersticas del dimorfismo sexual,

la

gentica y los fenotipos/genotipos de diferentes mutantes.

Drosophila melanogaster, conocida vulgarmente como la mosca del vinagre o de la fruta, es
un excelente material de laboratorio y, por ello, ha jugado un papel muy importante en el
desarrollo de la Gentica. Entre las mltiples ventajas que ofrece,

destacan su

mantenimiento sencillo y econmico, que permite conservar un gran

nmero de lneas

interesantes por sus caractersticas genticas de una forma rutinaria,

la capacidad de

producir, en un espacio reducido, un nmero de descendientes muy elevado en una sola

generacin y la gran variedad de mutantes fenotpicos que se conocen.
Los cientficos estudian modelos biolgicos simples con el objetivo de comprender los
principios que se pueden aplicar a sistemas ms complejos. Muchas de las investigaciones
estn basadas en el estudio de los genes homlogos de Drosophila, es decir genes con
estructura y funcin similares a otros animales, incluyendo los vertebrados. Esta universalidad
permite comprender la complejidad de los sistemas biolgicos.
Brevemente, algunas de las ventajas de D. melanogaster como organismo modelo son:
Mtodo sencillo y poco costoso de crianza.
Ciclo de vida corto (10 a 14 das dependiendo de la temperatura).
Muy prolfica (cada hembra puede generar de 300 a 500 individuos).
Genoma secuenciado y anotado.
Gran cantidad de mutaciones espontneas o inducidas que han permitido hacer un
mapa gentico y citolgico completo.
Presencia de cromosomas politnicos en las glndulas salivales de las larvas de tercer
estado
Color transparente de la larva, por lo que es de gran utilidad para inmunohistoqumica.
Organismo eucariota, con sistema nervioso relativamente complejo.

 Pequeo tamao del genoma, con reducido nmero de cromosomas (n=4, 2n=8) con
un par sexual XY en el macho y XX en la hembra y 3 pares de autosomas (el
cromosoma 4 es muy pequeo con muy pocos genes funcionales).
Se puede considerar a Drosophila como cosmopolita, aunque es ms abundante en las
estaciones clidas en sitios donde se fermentan frutas como los pltanos, las uvas, etc., por lo
que es comn encontrarla en los mercados y alrededor de los depsitos de basura en las
casas. Con el objeto de utilizar Drosophila en forma adecuada para los estudios en
laboratorio, es preciso conocer los diversos estados de su desarrollo y diferenciar los sexos con
toda claridad.

El ciclo de vida de Drosophila

Las moscas Drosophila son dpteros holometbolos que durante su desarrollo pasan por las
fases de huevo, larva, pupa y, finalmente, insecto adulto (Figura 1). La duracin de su ciclo
de vida depende de varios factores ambientales, tales como la temperatura y la humedad.
A una temperatura de 25C y una humedad relativa del 60%, el ciclo de D. melanogaster
desde huevo a adulto es de unos 10 das, mientras que a 20C son necesarios 15 das para
ello. La tabla 1 muestra una cronologa aproximada del desarrollo de D. melanogaster que
nos servir para entender la planificacin de nuestros experimentos con esta especie.

Figura 1. Ciclo de vida de Drosophila melanogaster

El apareamiento consiste en la deposicin del esperma en el receptculo seminal y el

posterior almacenamiento en la espermateca a nivel del tero de la hembra. Los huevos son
fertilizados dentro del tero y a continuacin son depositados (u ovoposicin). Al cabo de
unas horas, se desarrolla la embriognesis en la que tiene lugar una gran proliferacin y
reorganizacin celular, del huevo eclosiona una larva pequea y blanca, muy activa y voraz.
El crecimiento rpido de la larva le produce dos mudas sucesivas, al final de las cuales se
obtienen las llamadas larvas de tercer estadio. Estas larvas pierden movilidad de forma
progresiva y, finalmente, se fijan al sustrato y comienzan a transformarse en insectos adultos:
es la pupacin. Las pupas se distinguen porque la cubierta externa de la larva se va
endureciendo y oscureciendo progresivamente, hasta adquirir una tonalidad amarillenta o
anaranjada.
Una vez que ha terminado la metamorfosis que consiste en la degradacin y reabsorcin de
los tejidos de la larva y la produccin de nuevos rganos a partir de unas agrupaciones
celulares larvarias llamadas discos imaginales, el insecto adulto rompe la cubierta de la pupa
y emerge. Inmediatamente despus de la emergencia, los insectos adultos se reconocen
fcilmente porque no estn completamente pigmentados. Se ven plidos e hinchados y sus
alas an no se han desplegado.

Horas

Das

Estado del desarrollo

fecundacin: embrin

22

eclosin: primer estadio larvario

47

primera muda: segundo estadio

70

segunda muda: tercer estadio

118

Formacin del puparium

119

puparium amarillo

120

puparium pigmentado

122

muda prepupal

130

5,5

formacin de la cabeza, alas y patas

167

pigmentacin de los ojos

184

7,5

pigmentacin de las quetas

214

emergencia: adulto con alas plegadas

Tabla 1. Cronologa del desarrollo de D. melanogaster

Caractersticas del insecto adulto. Identificacin de los sexos.

Para poder realizar los cruzamientos en condiciones controladas se deben reconocer
inequvocamente los sexos y conocer el tiempo a partir del cual los individuos emergidos son
capaces de aparearse. Los adultos pueden aparearse a las pocas horas de la eclosin y las
hembras comienzan a poner huevos poco despus. La capacidad reproductora se conserva
a lo largo de toda la vida, si bien la tasa de ovoposicin desciende a partir del dcimo da.
La longevidad depende en gran parte de la disponibilidad de alimento y de la temperatura,
y pueden llegar a alcanzar hasta los tres meses de vida.
Se pueden sealar diferentes caractersticas morfolgicas que permiten distinguir fcilmente
los machos de las hembras de la especie D. melanogaster (aunque algunas de estas
caractersticas no son comunes a todas las especies del gnero). El sexo de los adultos es ms
fcil de distinguir en esta especie (Figura 2).

Figura 2. Dimorfismo sexual en Drosophila melanogaster. A) Visin dorsal de los insectos

adultos de ambos sexos. B) Visin ventral de las estructuras de las placas genitales del macho
y de la hembra adultos. C) Detalle de la pata anterior de los adultos. Los machos presentan el
peine sexual (sex combs).
Para distinguir los dos sexos hay que tener en cuenta diferentes caractersticas. En primer
lugar, en los machos se observa el peine sexual que consiste en diez cerdas gruesas en la
superficie de una de las partes de las patas anteriores (Figura 2). En segundo lugar, la
pigmentacin de la zona dorsal del extremo del abdomen es diferente en machos y
hembras: en los machos forma una mancha negra continua sobre los segmentos terminales
del abdomen (de ah le viene el nombre de "melanogaster": extremo del abdomen oscuro).
Adems, el abdomen de los machos es redondeado y presenta slo 5 segmentos, mientras
que el de las hembras es ms puntiagudo y presenta 7 segmentos. Finalmente, los machos
son algo ms pequeos.

Empleando la lupa, se observan otras caractersticas: si apretamos los individuos sobre su

dorso, aparecen los aparatos genitales. En las hembras podemos ver una placa genital de
color claro, mientras que los machos tienen una estructura oscura llamada arco genital
(Figura 2).

Componentes del medio para la reproduccion de Drosophila

polenta 66.5 g
levadura 20 g
nipagen 7 ml de solucin 46,25 g en 250 ml EtOH 100%
ac. Propinico 4 ml
agar: 10 g
sacarosa: 40 g
Esto es para 1 litro de comida

OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Observacin de moscas para el Cruce
Con ayuda del estereomicroscopio o con una lupa se pudo observar las caractersticas
Guindonos con las caractersticas morfolgicas entre machos y hembras ya mencionadas,
se obtuvieron moscas hembras y moscas machos como se indica en la figura 3.

Figura 3. Proceso de observacin de caractersticas

En el primer cruce F1:
Se obtuvo 77 de color canela
con alas normales y 23 color
caf con alas normales.

Genotipo
Moscas canela con
alas normales
Moscas cafs con
alas normales

Observado

Esperados

77

75

23

25

(Ob-Esp)^2/Esp
0.053
0.16

Ho: los resultados obtenidos tienen una proporcin de 3:1

Ha: los resultados obtenidos no tienen una proporcin de 3:1
GL=1
X2= 0.213
0.213 se encuentra dentro de la zona de no rechazo de la Ho los resultados
obtenidos corresponden a un cruce monohbrido con un 5% de significancia.

En el segundo cruce F2:

Figura 4. Diferencias morfolgicas vistas desde un estereomicroscopio de las dos cepas

utilizadas para el cruce di hibrido, comparadas con fotografas ms claras de moscas
sacadas del programa Drosophila Genetics Lab, Version 6,2. A y C. mosca de cuerpo de
color canela y alas normales, (A hembra y C macho). B y D. mosca de cuerpo de color caf y
alas atrofiadas (B macho y D hembra).

Se obtuvo 58 moscas color normal (canela)

con alas normales, 21 cuerpo caf con alas
normales, 16 canelas con alas atrofiadas o
cortas y 8 color caf con alas cortas

APLICACIN DEL CHI - CUADRADO

Fenotipo
Cuerpo y alas
normales
Alas normales cuerpo
canela
Alas atrofiadas
cuerpo normal
Alas atrofiadas
cuerpo canela

Prueba de X2
Observado
Esperados

(Ob-Esp)^2/Esp
0.071

58

56

21

19

0.21

16

19

0.47

0.16

Ho: los resultados obtenidos tienen una proporcin de 9:3:3:1

Ha: los resultados obtenidos no tienen una proporcin de 9:3:3:1
GL=3
X2= 0.91
0.91 se encuentra dentro de la zona del no rechazo de la Ho los resultados
obtenidos corresponden a un cruce dihibrido con un 5% de significancia.

DISCUSIN
Debido a que el medio en donde se encontraba el cruce para la F2 sufri varios
percances como por ejemplo al momento de realizar el primer cruce (ya que se realiz
dos veces), este medio se volvi liquido y fue matando a las moscas poco a poco
debido a que sus patas se pegaron en el medio volvindose una trampa para ellas.

CONCLUSIONES:
A travs de este proyecto se pudo comprobar las leyes postuladas por Mendel.
El cruce F1 revel que cada organismo diploide posee dos alelos para una
caracterstica, estos alelos se segregan cuando se forman los gametos y un
alelo va hacia cada gameto.
El cruce monohbrido reforz el concepto de dominancia ya que en la F1 dos
alelos diferentes estn presentes en un genotipo pero en el fenotipo se observa
solo el rasgo codificado por uno de ellos (el alelo dominante)

RECOMENDACIONES:
Evitar dejar escapar las moscas ya que se pueden reproducir en el ambiente y
esto implicara un cambio en la naturaleza, as mismo no mezclar entre especies
de moscas a fin de conservar especies puras en los frascos.
En caso de mezclar lneas de moscas y se dese obtener nuevamente razas
puras se debe aislar hembras vrgenes y a partir de stas crear una nueva
poblacin.
Para los cruces se recomienda una proporcin de 3:1 de hembras y machos
respectivamente
Se recomendara realizar los cruces con un menor nmero de moscas.

 La temperatura ideal para la reproduccin es de 27C adems se recomienda

mantenerlas en lugares oscuros.

BIBLIOGRAFIA
Ashburner,M.,Drosophila:a laboratory handbook and manual, Cold Spring Harbor,
NY:cold Spring Harbor Laboratory Press., 2 vols, 1989.
Base de datos de Drosophila,FLYBASE: URL: www.flybase.org [consulta : 1 diciembre
2014]
Garner, E. J., Simmons, M. J., & Snustad, D. P. (2003). Principios de gentica. Mexico:
Limusa Wiley.
Klug, S.W. CONCEPTOS DE GENETICA. Pearson. Prentice Hall. Octava edicin. Madrid.
2006. pp. 704 - 719.
OBrien, M. 2009. Drosophila Genetics Lab Version 6.27. En lnea: www.newbyte.com