Acosta, Jess

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Informe de Laboratorio de Biologa # 7

Tema:

Efecto de la concentracin del sustrato sobre la Catalasa

Objetivo: Medir la cantidad de O2 liberado del agua oxigenada (H2O2) por reaccin de la
catalasa del hgado de pollo.
Variables:
-Variable Independiente.- La reaccin de la enzima Catalasa encontrada en el hgado de
pollo junto al agua oxigenada (H2O2). Concentracin de agua oxigenada (H2O2) de 10 V Y
20V. Tiempo cada 5 segundos
-Variable Dependiente.- La produccin de oxigeno por reaccin de la enzima catalasa en
el H2O2, obteniendo valores en ml que se mide en el tubo de ensayo. Volumen de oxgeno
en ml liberado en un tiempo fijo(cada 5 segundos)
-Variable Controlada.- El tiempo especfico, controlado en una escala de 5 segundos,
marcando el valor obtenido segn la produccin de O2. Volumen de H2O2 (20 ml), Peso del
hgado, Temperatura ambiente (26 C aproximadamente)
Marco Terico
Nuestro cuerpo produce perxido de hidrgeno para combatir la infeccin que debe estar
presente para que nuestro sistema inmunolgico funcione correctamente. Los glbulos
blancos son conocidos como leucocitos. Una sub-clase de leucocitos llamados neutrfilos
produce perxido de hidrgeno como la primera lnea de defensa contra las toxinas,
parsitos, bacterias, virus y levaduras. Mata a los microorganismos mediante su oxidacin,
lo que puede ser mejor descrito como un proceso de combustin controlada. Cuando el
perxido de hidrgeno reacciona con el material orgnico, se descompone en oxgeno y
agua.
La catalasa es
una enzima perteneciente
a
la
categora
de
las oxidorreductasas que cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202)
en oxgeno y agua.2 Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.
2 H2O2

2 H2O + O22

El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos

vivos y tiene entre otras una funcin protectora contra microorganismos patgenos,
principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en
compuestos menos peligrosos. Esta funcin la efecta esta enzima que cataliza su
descomposicin en agua y oxgeno. Adems la catalasa se usa en la industria textil para

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la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en menor medida se emplea en la

limpieza de lentes de contacto que se han esterilizado en una solucin de perxido de
hidrgeno. La ausencia congnita de catalasa es causante de una acatalasemia (o
acatalasia), laenfermedad de Takahara que se manifiesta por la ausencia de actividad de
la catalasa en los glbulos rojos y con severas infecciones gangrenosas de la boca,
pudiendo producir la prdida de los dientes y graves destrucciones de los maxilares y
regiones blandas que los cubre. Enfermedad congnita del Japn (2 de 100.00
habitantes sufren de este trastorno).
El mecanismo completo de la catalasa no se conoce, aun as la reaccin qumica se
produce en dos etapas:
H2O2 + Fe(III)-E H2O + O=Fe(IV)-E
H2O2 + O=Fe(IV)-E H2O + Fe(III)-E + O2
Donde Fe-E representa el ncleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima
que actan como cofactores.
La enzima se presenta en forma de homotetrmero y se localiza en
los peroxisomas.
Esta enzima puede actuar como una peroxidasa para mucha sustancias
orgnicas, especialmente para el etanol que acta como donante de hidrgeno.
Las enzimas de muchos microorganismos, como el Penicillium
simplicissimum, que exhiben actividad de catalasa y peroxidasa, son
frecuentemente llamadas catalasas-peroxidasas.1
El
perxido
de
hidrgeno
(H2O2),
tambin
conocido
como
agua
oxigenada, dioxogen o dioxidano, es un compuesto qumico con caractersticas de un
lquido altamente polar, fuertemente enlazado con el hidrgeno tal como el agua, que por lo
general se presenta como un lquido ligeramente ms viscoso que sta. Es conocido por ser
un poderoso oxidante.
A temperatura ambiente es un lquido incoloro con sabor amargo. Pequeas cantidades de
perxido de hidrgeno gaseoso se encuentran naturalmente en el aire. El perxido de
hidrgeno es inestable y se descompone lentamente en oxgeno y agua con liberacin de
calor. Su velocidad de descomposicin puede aumentar mucho en presencia de
catalizadores. Aunque no es inflamable, es un agente oxidante potente que puede
causar combustin espontnea cuando entra en contacto con materia orgnica o algunos
metales, como el cobre, la plata o el bronce.
El perxido de hidrgeno se encuentra en bajas concentraciones (3 a 9%) en muchos
productos domsticos para usos medicinales y como blanqueador de vestimentas y el
cabello. En la industria, el perxido de hidrgeno se usa en concentraciones ms altas para
blanquear
telas
y
pasta
de papel,
y
al
90%
como
componente
1

http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa

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de combustibles para cohetes y para fabricar espuma de caucho y sustancias qumicas

orgnicas. En otras reas, como en la investigacin, se utiliza para medir la actividad de
algunas enzimas, como la catalasa.
Concentracin de Sustrato.- En toda reaccin enzimtica, si se incrementa la
concentracin del sustrato se produce un aumento de la velocidad de formacin del
producto, tendente a restablecer el equilibrio qumico entre la concentracin del sustrato y
la del producto. En este proceso la enzima no vara. Se puede explicar considerando que, al
abundar ms las molculas del sustrato, son ms probables los encuentros o choques entre
estas molculas y la enzima. Si la concentracin del sustrato es excesiva, la velocidad de
reaccin no aumentar, debido a que todas las enzimas estn en forma de complejo (E-S).
En ciertos casos se producir un tipo se inhibicin enzimtica en la que dos sustratos se
unen a la vez a la enzima, inutilizndola.
Materiales:

Balanza de laboratorio de triple brazo, capacidad: 2610 gr (

Matriz de Kitasato
Bistur
Tapn de caucho con orificio en el centro 7 1/2
2 pinzas con doble nuez
1 probeta de 20 ml
1 manguera plstica 30 cm
500 ml de agua oxigenada de 10 V y 20 V
1 marcador permanente
1 Soporte universal
1 pipeta graduada en ml (10/0,1 ml +.0,1) 10 ml
2 papeles filtro
Ampolla de decantacin
1 cronmetro +- seg
56 gr de hgado de pollo
1 par de guantes
3 tubos de ensayo
1 agitador
1 gradilla
1 cuba de hidrodinamia

Procedimiento:

1. Introducir la ampolla de decantacin al orificio del tapn de caucho.

2. Sujetar el matriz de kitasato al soporte universal con la pinza de doble nuez.

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3. Con la ayuda del bistur cortar el hgado de pollo en trozos y pesarlos en la

balanza de triple brazo.(Usar guantes para manipular el hgado de pollo).
4. Anotar el peso del hgado de pollo que puede variar entre 8,00gr y 9,00 gr por
cada trozo.
5. Medir la cantidad de H2O2 20 ml con la ayuda de la pipeta de 10 ml y
depositarla en la ampolla de decantacin.
6. Colocar un trozo de hgado de pollo (8,00gr-9,00gr) al matriz de kitasato y
taponarlo que ya se encuentra con la ampolla de decantacin introducida.
7. Sujetar la ampolla de decantacin al soporte universal con la pinza de doble
nuez.
8. Conectar el tubo de desprendimiento con la manguera de 30 cm, la misma que
llega a la cuba de hidrodinamia con agua potable
9. Llenar el tubo de ensayo con agua potable y taparlo con el dedo pulgar e
invertirlo dentro de la cuba.

Obtencin de datos brutos:

Tabla N1
Volumen de O2 en ml, liberado por la reaccin entre el hgado (catalasa) de pollo y H2O2
a 10 V entre 20s
Tiempo/segundos
1 segundo

Prueba 1

Prueba 2

Prueba 3

ml de O2 liberado
0,1 ml
6,6 ml
4,5 ml
10,7 ml
1,2 ml

ml de O2 liberado
0,1 ml
0 ml
6,2 ml
14,7 ml
2,1 ml

ml de O2 liberado
0,1 ml
4.3 ml
5,7 ml
9,5 ml
3,5 ml

5 s
10 s
15 s
20 s
Peso en gr. del trozo
9,4 gr
9 gr
9,1 gr
hgado ( 0.1 gr)
Incertidumbre: En la prueba 2, durante los 5 primeros segundos no se present O2 por lo tanto no
descenda el agua del tubo de ensayo.
Tabla N2

Volumen de O2 en ml, liberado por la reaccin entre el hgado (catalasa) de pollo y el

perxido de hidrogeno (H2O2) a 20 V entre 10s
Tiempo/segundos

Prueba 1

Prueba 2

Prueba 3

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1 segundo
5s
10 s
Peso en gr. del trozo
de hgado ( 0,1 gr)

ml de O2 liberado
0,1 ml
17,7 ml
4,8 ml

ml de O2 liberado
0,1 ml
22,9 ml
0 ml

ml de O2 liberado
0,1 ml
21,0 ml
2 ml

9,1 gr.

8,9 gr

8,8 gr

Incertidumbre: En la prueba 2, a los 5 primeros segundos se vaco casi por completo el

tubo de ensayo pero quedo ml de agua debido que se encontraba inclinado.

Procesamiento de datos brutos:

Media aritmtica:

Media aritmtica:

n: nmero de muestra

Tabla N3
Aplicacin de la media aritmtica en los tiempos 5s, 10s, 15s y 20s de O2 liberado por la
reaccin entre el hgado de pollo (catalasa) y H2O2 a 10 V de las tres tomas respectivamente.

Tiempo en s ( 0,1s)

Clculo del promedio de O2 en ml de las

tres pruebas efectuadas.

5s

Incertidumbre: En la prueba 2, durante los 5

primeros segundos no se present O2 por lo tanto no
descenda el agua del tubo de ensayo y no forma parte
del clculo de la media debido a que es 0 ml,

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10s

15s

20s

Tabla N4
Aplicacin de la media aritmtica en los tiempos 5s y 10s de O2 liberado por la reaccin entre el
hgado de pollo (catalasa) y H2O2 a 20 V de las tres tomas respectivamente.

Tiempo en s (

1s)

Clculo del promedio de O2 en ml de las

tres pruebas efectuadas.

5s

10s

Incertidumbre: En la prueba 2, a los 5

primeros segundos se vaco casi por completo
el tubo de ensayo pero quedo ml de agua debido
que se encontraba inclinado entonces se coloc
0 ml a los 10 s no formando en el procedimiento
de la media.

Acosta, Jess

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Presentacin de datos procesados:

Tabla N5
Presentacin de nivel de O2 producido durante las tres tomas (tiempo) respectivo por
accin de la enzima catalasa con el H2O2 EN 10V.
Tiempo en s ( 0,1s)

Promedio de O2 en ml

5s
10s
15s
20s

Tabla N6

Presentacin de nivel de O2 producido durante las tres tomas (tiempo) respectivo por
accin de la enzima catalasa con el H2O2 EN 20V.
Tiempo en s ( 0,1s)

Promedio de O2 en ml

5s
10s

Incertidumbre: En la prueba 2, a los 5 primeros segundos se vaco casi por completo el

tubo de ensayo pero quedo ml de agua debido que se encontraba inclinado entonces se
coloc 0 ml a los 10s no formando en el procedimiento de la media.

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Grafico N1

Produccin de O2, Reaccin de la Enzima

Catalasa en H2O2 de 10V.
Produccin de O2 en mililitros

14
12

11,63ml

10
8
5,45ml

5,46ml

4
2,26ml

2
0
5

10

15

20

Tiempo en segundos

Grafico N2

Produccin de O2, Reaccin de la Enzima

Catalasa en H2O2 de 20V
Produccin de O2 en mililitros

25
20,53ml

20
15
10
5

3,4ml

0
0

Tiempo en segundos

10

12

Acosta, Jess

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Conclusin.Luego de tener listos y presentes los datos cualitativos se puede decir ahora que la
produccin de oxigeno liberado por la accin del contacto de la enzima Catalasa (la cual
encontramos en el hgado de pollo) con el perxido de hidrogeno (Agua Oxigenada H2O2)
pero con la utilizacin de diferentes volmenes o rango de este compuesto qumico
artificial. Dando as que segn el grafico 1 la primera liberacin de oxigeno por parte del
H2O2 de 10V donde deja claro un produccin promedio de 5 ml por cada 5 segundo hasta
que termine el tubo de ensayo con agua de vaciarse pero comparado con la liberacin de O 2
por parte del H2O2 con volumen de 20 nos damos cuenta cuan mayor es su produccin
segn muestra la grfica 2, que solo en un lapso promedio de 6 segundo ya se ha producido
una cantidad de 20 ml, terminado de vaciar este tubo de ensayo de capacidad de 23 ml en
menos de 8 segundo aproximados.
Esto demuestra la efectividad de una sola molcula de catalasa es capaz de desdoblar 5
millones de molculas de perxido de hidrgeno en un minuto a 0 C de temperatura. La
enzima CATALASA del hgado al tener contacto con el perxido de hidrgeno, rompe la
molcula liberando oxgeno; durante la reaccin salen burbujas a la superficie pero la tapa
del frasco impide que estas salgan quedando el gas dentro.
Limitantes.La falta de un control exacto del tiempo, el cual no se determinaba bien a causa de la rpida
produccin de Oxigeno especialmente al aumentar el volumen del perxido de hidrogeno.
Propuestas.Es de realizar ms conteos seguidos para determinar ms datos, y utilizar el perxido de
hidrogeno en ms volmenes para calcular cunto oxigeno pueden producir.

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Anexos

Colocacin de los 20 ml de Perxido de Hidrogeno.

Produccion de Oxigeno en ml

Medicin de los ml obtenidos en el tubo de ensayo

Acosta, Jess

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Bibliografa
* http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa
* http://es.wikipedia.org/wiki/Per%C3%B3xido_de_hidr%C3%B3geno
* http://html.rincondelvago.com/mecanismos-de-control-de-la-actividad-enzimatica.html