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CENTRO UNIVERSITRIO DO NORTE

Laureate Internationals Universities


ALDENORA MOTA CORRA. - 12393134
JEAN CLUDIO FELIZARDO DE SOUZA. 11406666

BIOTECNOLOGIA

MANAUS, AM
2014

ALDENORA MOTA CORRA. - 12393134


JEAN CLUDIO FELIZARDO DE SOUZA. - 11406666

BIOTECNOLOGIA

Pesquisa: Biotecnologia conceito e aplicaes.


Como requisito para a obteno da nota parcial na Disciplina
de
ENZIMOLOGIA
E
TECNOLOGIA
DAS
FERMENTAES, no 6 perodo do Curso de Graduao
em Farmcia da Faculdade Uninorte.
Professor Orientador:

NGELA LUCIA CARVALHO DE ANDRADE

MANAUS, AM
2014

SUMRIO

1.

INTRODUO .................................................................................................... 5

2.

PRODUTOS E SERVIOS DE ORIGEM BIOTECNOLGICA, EM

DIFERENTES SETORES. ......................................................................................................... 6


3.

HISTRICO Evoluo histrica da Biotecnologia ........................................... 7

4.

BIOPROCESSOS, PROCESSOS FERMENTATIVOS E INDSTRIA .......... 13


4.1 BIOPROCESSOS............................................................................................. 13
4.2 PROCESSOS FERMENTATIVOS E INDSTRIA ....................................... 14
4.2.1 PROCESSOS DESCONTNUOS ............................................................. 15
4.2.2 Processo Descontinuo Alimentado ............................................................ 16
4.2.3 Processo Contnuo ..................................................................................... 16

5.

OS MICRORGANISMOS INDUSTRIAIS ....................................................... 18


5.1 NOES SOBRE METABOLISMO PRIMRIO E SECUNDRIO (tipos de

fermentaes)........................................................................................................................ 18
5.2 MEIOS DE CULTURA E MATRIA PRIMA ............................................... 22
5.3 A ESCOLHA DA LINHAGEM....................................................................... 22
6.

TIPOS DE FERMENTAO ............................................................................ 23


6.1 TIPO 1 ASSOCIADA (FERMENTAES COM FORMAO DE

PRODUTO COM CRESCIMENTO ASSOCIADO) ........................................................... 23


6.2 TIPO 2 SEMI-ASSOCIADA (FERMENTAES COM FORMAO DE
PRODUTO COM CRESCIMENTO MISTO) ..................................................................... 24
6.3 TIPO 3 NO ASSOCIADA (FERMENTAES COM FORMAO DE
PRODUTO COM CRESCIMENTO NO ASSOCIADO) ................................................. 24
7.

OS DIFERENTES TIPOS DE BIOPROCESSOS ............................................. 25


7.1 OS PROCESSOS TRADICIONAIS ................................................................ 25
7.2 OS PROCESSOS SUBMERSOS ..................................................................... 26
7.3 OUTROS SISTEMAS SUBMERSOS ............................................................. 28

8.

DO LABORATRIO A INDSTRIA .............................................................. 29

8.1 A MUDANA DE ESCALA........................................................................... 29


8.2 A RECUPERAO DO PRODUTO .............................................................. 30
9.

OS BIOPROCESSOS NA INDSTRIA ........................................................... 30


9.1 PRODUO DE ALIMENTOS...................................................................... 31
9.2 PRODUO DE ANTIBITICOS ................................................................. 32
9.3 PRODUO DE ENZIMAS ........................................................................... 33
9.4 PRODUO DE ANTICORPOS ................................................................... 33
9.5 PRODUO DE INOCULARES ................................................................... 34
9.6 TRATAMENTO AMBIENTAL ...................................................................... 35
9.7 PRODUTOS RECOMBINANTES .................................................................. 36
CONCLUSO.................................................................................................... 38
BIBLIOGRAFIA ................................................................................................ 39

NDICE DE ILUSTRAES

FIGURA 4.1. O processo fermentativo genrico. ...................................................... 14


FIGURA 5.1. Respirao e fermentao. ................................................................... 18
FIGURAS 5.2A e 5.2B: As diversas fases do crescimento de uma populao
microbiana e a produo de metablitos. ................................................................................. 21
5.2A: As fases de crescimento de uma populao. ...................................... 21
5.2B: A produo de metablitos primrios e secundrios. ......................... 21
FIGURA 6.1. Biorreator para fermentaes em fase slida....................................... 25
FIGURA 6.2. Um processo tradicional, a produo de vinagre (Mtodo de
Orlans). ................................................................................................................................... 26
FIGURA 6.3. Modelo de biorreator utilizado em fermentaes submersas .............. 27
FIGURA 6.4. Fermentaes, agentes biolgicos e biorreatores ................................ 28
FIGURA 6.5. A mudana de escala, do laboratrio indstria ................................. 29

NDICE DE TABALAS

TABELA 1.1. Produtos e servios de origem biotecnolgica, em diferentes setores .. 6

1. INTRODUO
A biotecnologia conceitualmente, a unio de biologia com tecnologia um
conjunto de tcnicas que utiliza os seres vivos, ou partes desses, no desenvolvimento de
processos e produtos que tenham uma funo econmica e (ou) social. (FALEIRO,
ANDRADE e REIS JUNIOR, 2011)
Uma definio ampla da biotecnologia o uso de organismos vivos ou partes deles
para a produo de bens e servios. Podemos dizer que, nessa definio, enquadram-se a
biotecnologia clssica e a moderna. A biotecnologia clssica envolve um conjunto de
atividades que o homem vem desenvolvendo a milhares de ano, como a produo de
alimentos fermentados, como o po e o vinho. A chamada biotecnologia moderna envolve
tecnologias de engenharia gentica, DNA recombinante, cultura de clulas e embries para o
desenvolvimento de produtos e processos. (FALEIRO, ANDRADE e REIS JUNIOR, 2011)
A biotecnologia se embasa e interage intensamente com as cincias biolgicas,
especialmente a bioqumica, biofsica, fisiologia, gentica, microbiologia, virologia,
parasitologia, farmacologia e imunologia, entre outras. Todas estas reas so utilizadas como
disciplinas instrumentais na manipulao de microorganismos e de clulas e tecidos vivos de
animais e de plantas. A biotecnologia vale-se tambm de outras disciplinas (ecologia,
botnica e zoologia) na seleo de seres vivos naturais diretamente teis, ou que sejam bons
candidatos para manipulao gentica final, alm de ter importantes correlaes com a
qumica fina, especialmente na qumica de produtos naturais e na engenharia molecular.
(SCHWARTZMAN, et al., 1996)
A rea tambm tem uma forte interao com as engenharias (especialmente
engenharia qumica, no que tange ao desenvolvimento e operao de equipamentos e
processos de produo, controle e processamento de insumos e produtos biotecnolgicos).
(SCHWARTZMAN, et al., 1996)
Podemos resumir o conceito de biotecnologia, com base na origem da palavra: bio
significa vida, tecno significa uso prtico e aplicado da cincia e logos significa
conhecimento, ou seja, conhecimentos que usam organismos, clulas e molculas de forma
prtica na obteno de bens e servios. Podemos dizer tambm que a tecnologia que gera
produtos e processos de origem biolgica. (FALEIRO, ANDRADE e REIS JUNIOR, 2011)

2. PRODUTOS

SERVIOS

DE

ORIGEM

BIOTECNOLGICA,

EM

DIFERENTES SETORES.

J no se trata de promessas ou de perspectivas futuras; os produtos e processos


biotecnolgicos fazem parte de nosso dia a dia, trazendo oportunidades de emprego e
investimentos. Trata-se de plantas resistentes a doenas, plsticos biodegradveis, detergentes
mais eficientes, biocombustveis, e tambm processos industriais menos poluentes, menor
necessidade de pesticidas, biorremediao de poluentes, centenas de testes de diagnstico e de
medicamentos novos (Tabela 1.1). (MALAJOVICH, 2012)

TABELA 1.1. Produtos e servios de origem biotecnolgica, em diferentes setores.

SETOR
Energia

TIPO DE PRODUTOS E SERVIOS


Etanol, biogs e outros combustveis (a partir de biomassa).

Indstria

Butanol, acetona, glicerol, cidos, vitaminas etc. Numerosas enzimas para outras
indstrias (txtil, de detergentes etc.).

Meio Ambiente

Recuperao de petrleo, biorremediao (tratamento de guas servidas e de lixo,


eliminao de poluentes).

Agricultura

Pecuria

Alimentao

Sade

Adubo, silagem, biopesticidas, biofertilizantes, mudas de plantas livres de doenas,


mudas de rvores para reflorestamento. Plantas com caractersticas novas incorporadas
(transgnicas): maior valor nutritivo, resistncia a pragas e condies de cultivo adversas
(seca, salinidade, etc.).
Embries, animais com caractersticas novas (transgnicos), vacinas e medicamentos
para uso veterinrio.
Panificao (pes e biscoitos), laticnios (queijos, iogurtes e outras bebidas lcteas),
bebidas (cervejas, vinhos e bebidas destiladas) e aditivos diversos (shoyu,
monoglutamato de sdio, adoantes etc.); protena de clula nica (PUC) para raes,
alimentos de origem transgnica com propriedades novas.

Antibiticos e medicamentos para diversas doenas, hormnios, vacinas, reagentes e


testes para diagnstico, tratamentos novos etc.

Fonte: MALAJOVICH; Biotecnologia 2011; 2012.

3. HISTRICO Evoluo histrica da Biotecnologia

DATA

ANTIGUIDADE

ACONTECIMENTOS FUNDAMENTAIS
Preparao e conservao de alimentos e bebidas por fermentao (po,
queijo, cerveja, vinho e vinagre); cultivo de plantas (batata, milho,
cevada, trigo etc.); domesticao de animais; tratamento de infeces
(com produtos de origem vegetal tais como p de crisntemo e
derivados de soja com fungos). (MALAJOVICH, 2012)

IDADE MDIA
Sculo XII

Destilao do lcool. (MALAJOVICH, 2012)

IDADE MODERNA
Sculo XVI

Sculo XVII

Sculo XVIII

Cronistas registram a colheita de algas para alimentao, nos lagos de


Mxico, pelos astecas. (MALAJOVICH, 2012)
Incio da produo comercial de cerveja; extrao de metais por ao
microbiana na Espanha; cultivo de fungos na Frana; Hooke descobre a
existncia de clulas (1665). (MALAJOVICH, 2012)
Invento da mquina a vapor (1752). A partir de 1750, crece o cultivo de
leguminosas na Europa e se difunde a prtica de rotao de cultivos,
aumentando a produtividade e melhorando o uso da terra.
(MALAJOVICH, 2012)

IDADE CONTEMPORNEA
Jenner inocula uma criana com um vrus que o protege contra a varola.
1797
(MALAJOVICH, 2012)

1809

1835 a 1855

1863 a 1886

Appert utiliza o calor para esterilizar e conservar comida, processo que


ser utilizado nas campanhas napolenicas. (MALAJOVICH, 2012)
Schleiden, Schwann e
(MALAJOVICH, 2012)

Virchow

enunciam

teoria

celular.

Pasteur inventa um processo para conservar alimentos sem alterar suas


propriedades organolpticas (Pasteurizao, 1863), derruba a teoria da
abiognese (1864), investiga as doenas do bicho-da-seda (1865),
identifica a levedura como o agente responsvel pela fermentao
alcolica (1876), usa microrganismos atenuados para obter vacinas
contra o antraz e a clera (1881), faz os primeiros testes de uma vacina
contra a raiva (1881). Paralelamente, Koch inicia o desenvolvimento de
tcnicas fundamentais para o estudo dos microrganismos (1876), e
enuncia quatro postulados sobre os agentes infecciosos como causa de
doenas. Em 1865 Mendel apresenta o seu trabalho Experincias de

hibridizao em plantas. (MALAJOVICH, 2012)


1887

Inaugurao em Paris do Instituto Pasteur. (MALAJOVICH, 2012)

1899

Descoberta do vrus do mosaico do tabaco; introduo do trator na


agricultura. (MALAJOVICH, 2012)
Bchner mostra que enzimas extradas da levedura podem transformar
acar em lcool. (MALAJOVICH, 2012)
Primeiro transplante de um rgo: o rim de um cachorro a outro
cachorro. (MALAJOVICH, 2012)

1900

Redescobrimento das leis da hereditariedade, j enunciadas por Mendel


em 1865, porm esquecidas. (MALAJOVICH, 2012)

1905

O primeiro transplante de crnea se realiza com sucesso; isto porque a


crnea no tem antgenos. (MALAJOVICH, 2012)

1906

Ehrlich descobre o primeiro agente quimioterpico, chamado Salvarsan,


que ser utilizado contra sfilis. (MALAJOVICH, 2012)

1892
1897

1910

1912 a 1914

Em Manchester, na Inglaterra, comeam a ser introduzidos os sistemas


de purificao de esgoto baseados na atividade microbiana.
(MALAJOVICH, 2012)
Rhm obtm a patente de uma preparao enzimtica para a lavagem de
roupas; Weizmann consegue a produo de acetona e butanol por
microrganismos. (MALAJOVICH, 2012)

1915

Morgan publica Mechanism of Mendelian Heredity. (MALAJOVICH,


2012)

1916

Imobilizam-se as enzimas, uma tcnica que facilita sua utilizao em


processos industriais. (MALAJOVICH, 2012)

1918

Morrem de gripe espanhola mais de vinte milhes de pessoas, um


nmero de vtimas superior ao da Primeira Guerra Mundial. Constroemse biodigestores para a produo de metano (China e ndia).
(MALAJOVICH, 2012)

1919

O engenheiro agrcola hngaro Ereky utiliza pela primeira vez a palavra


biotecnologia. (MALAJOVICH, 2012)

1927

Muller descobre que os raios X causam mutaes. (MALAJOVICH,


2012)

1928

F. Griffith descobre a transformao, isto a transferncia de


informao gentica de uma linhagem bacteriana a outra.
(MALAJOVICH, 2012)

1933

Comercializao do milho hbrido, isto de sementes de um milho mais

produtivo. (MALAJOVICH, 2012)


1936

Obteno de cido ctrico por fermentao. (MALAJOVICH, 2012)

1938

Na Frana, produo comercial de um biopesticida (Bacillus


thuringiensis). (MALAJOVICH, 2012)
Avanos na mecanizao do trabalho agrcola. (MALAJOVICH, 2012)

1940 a 1950
1944

Produo em grande escala da penicilina (descoberta por Fleming em


1928, desenvolvida por Florey e Chain). (MALAJOVICH, 2012)

1951

Inseminao artificial de gado utilizando smen congelado. Descoberta


da presena de genes saltatrios no milho por Brbara Mc Clintock.
(MALAJOVICH, 2012)

1953

J. D. Watson e F. Crick propem um modelo da estrutura do DNA.


(MALAJOVICH, 2012)

1959

Reinart regenera plantas de cenoura a partir de uma cultura de clulas


(calo). (MALAJOVICH, 2012)

1960

Aumento da produo de cido lctico, cido ctrico, acetona e butanol


por via fermentativa. (MALAJOVICH, 2012)

1961

Descoberta do cdigo gentico. Desenvolvimento de uma protease


alcalina para uso em sabes para a lavagem de roupas pela empresa
dinamarquesa Novo. (MALAJOVICH, 2012)

1962

Plantio de novas variedades de trigo mais produtivas, no Mxico, dando


incio ao que ser chamado de Revoluo Verde. (MALAJOVICH,
2012)

1967

Primeiro transplante de corao, na frica do Sul. O paciente sobrevive


18 dias. (MALAJOVICH, 2012)

1968

Produo industrial de aminocidos utilizando enzimas imobilizadas.


(MALAJOVICH, 2012)

1973

Havendo desenvolvido tcnicas de corte e reunio do DNA, Cohen e


Boyer transferem um gene a um organismo de outra espcie. Lanado
no Brasil o programa de produo de lcool a partir de biomassa (Prlcool). (MALAJOVICH, 2012)

1975

G. J. F. Khler e C. Milstein desenvolvem a tecnologia de hibridomas e


obtm anticorpos monoclonais. A empresa Novo produz xarope com
alto contedo de frutose por via enzimtica como adoante alternativo
sacarose. (MALAJOVICH, 2012)

1975

A Conferncia de Asilomar pede ao National Institute of Health (NIH)


que sejam estabelecidas normas para a regulao dos experimentos com

10

DNA-recombinante, o
(MALAJOVICH, 2012)

que

acontecer

meses

mais

tarde.

1976

Utilizao da tcnica de hibridizao molecular no diagnstico pr-natal


da alfa talassemia. (MALAJOVICH, 2012)

1978

Genentech, Inc., a primeira empresa biotecnolgica, fundada um ano


antes por Boyer e Swanson, obtm a protena somatotropina (hormnio
de crescimento) mediante a tecnologia do DNA-recombinante.
(MALAJOVICH, 2012)
Nasce na Inglaterra Louise Brown, o primeiro beb de proveta.
(MALAJOVICH, 2012)

1979

Produo de hormnio do crescimento humano utilizando a tecnologia


do DNA-recombinante. (MALAJOVICH, 2012)

1980

A Suprema Corte de Justia dos Estados Unidos aprova o princpio de


patentes para as formas de vida de origem recombinante. As primeiras
patentes so de A. N. Chakrabarty, para um microrganismo para
biorremediao de petrleo, e de H. Cohen e S.Boyer, pelo processo de
1973. K. Mullis inventa a tcnica da Reao em Cadeia de Polimerase
(PCR) cuja patente ser obtida por Cetus, Inc. em 1985 e vendida em
1991 a Hoffman-La Roche, Inc. por 300 milhes de dlares.
(MALAJOVICH, 2012)

1981

Obteno da primeira planta geneticamente modificada. Obteno da


primeira linhagem de clulas-tronco de camundongo. (MALAJOVICH,
2012)

1982

A insulina humana de origem recombinante da Genentech, Inc.


comercializada. Uma licena ser obtida mais tarde pela empresa Eli
Lilly, que a vender com o nome de Humulina. A primeira vacina de
DNA-recombinante para o gado comercializada na Europa.
(MALAJOVICH, 2012)

1983

Realizam-se as primeiras experincias de Engenharia Gentica em


plantas (petnia). Syntex Corporation recebe a aprovao da Food and
Drug Administration (FDA) de um teste para Chlamydia trachomatis
baseado na utilizao de anticorpos monoclonais. Isolado o vrus HIV
no Instituto Pasteur (Frana) e no NIH (National Institute of Health,
Estados Unidos). (MALAJOVICH, 2012)

1984

A. Jeffreys introduz a tcnica do Fingerprint (impresses digitais), que,


um ano depois, ser utilizada pelos tribunais para a identificao de
suspeitos. Clonagem e sequenciamento do genoma do HIV pela empresa
Chiron Corp. (MALAJOVICH, 2012)

1986

A Environmental Protection Agency (EPA) dos Estados Unidos aprova


a liberao de plantas de tabaco transgnicas. Um grupo de especialistas
em segurana em Biotecnologia da Organizao para a Cooperao

11

Econmica e o Desenvolvimento (OECD) declara que a previsibilidade


das mudanas genticas obtidas por Engenharia Gentica
frequentemente maior que a correspondente s tcnicas tradicionais, e
que os riscos associados com organismos transgnicos podem ser
avaliados do mesmo modo que os riscos associados aos outros
organismos. Aprovada a primeira vacina biotecnolgica para uso
humano, trata-se de Recombivax-HB, contra a hepatite B.
(MALAJOVICH, 2012)
1987

Advanced Genetic Sciences libera em campo bactrias DNA


recombinante (Frostban) que inibem a formao de gelo nos cultivos de
morango, na Califrnia; a FDA aprova o fator ativador de
plasminognio, obtido por engenharia gentica, para o tratamento de
ataques cardacos. (MALAJOVICH, 2012)

1988

A Universidade de Harvard obtm a patente de um rato transgnico


desenvolvido especialmente para o estudo do cncer; na mesma dcada,
os europeus obtero a patente de outro rato transgnico, sensvel a
substncias carcinognicas. Genencor International Inc. obtm a patente
de um processo que permite obter enzimas (proteases) resistentes a
alvejantes (processo bleach) para a fabricao de sabes para a lavagem
de roupas. (MALAJOVICH, 2012)

1989

Com a criao do National Center for Human Genome Research se


inicia o mapeamento do genoma humano. (MALAJOVICH, 2012)

1990

Primeira experincia de terapia gnica para uma doena rara (ADA) em


uma menina de quatro anos. Pfizer comercializa Chy-Max TM, uma
enzima de origem recombinante para a preparao de queijos.
GenPharm International, Inc. consegue uma vaca transgnica que
produz no leite protenas humanas para alimentao infantil. A
Universidade da Califrnia (UCSF) e a Universidade de Stanford
contabilizam 100 patentes relativas ao DNA-recombinante.
(MALAJOVICH, 2012)

1992

Uma tcnica, elaborada por cientistas americanos e britnicos, permite


testar anormalidades como a fibrose cstica e a hemofilia em embries in
vitro. A FDA declara que os alimentos de origem transgnica no
demandam uma regulao especial. (MALAJOVICH, 2012)

1993

Aprovada a utilizao do hormnio de crescimento bovino rBGH/rBST,


produzido por Monsanto Co., para aumentar a produo de leite.
(MALAJOVICH, 2012)

1994

Lanamento no mercado do tomate FlavSavr, que, devido inativao


de um gene, amadurece na planta. (MALAJOVICH, 2012)

1995

Decifrado o primeiro genoma de uma bactria, Haemophilus influenzae.


(MALAJOVICH, 2012)

12

1996

Sequenciado o primeiro genoma de um organismo eucarionte, a


levedura Saccharomyces cerevisiae. Desenvolve-se o primeiro
GeneChip (Stanford, Affymetrix). (MALAJOVICH, 2012)

1997

No Reino Unido, nasce Dolly, uma ovelha clonada, e, meses mais tarde,
uma segunda ovelha, Polly, clonada e geneticamente modificada. Os
cultivos transgnicos so introduzidos em vrios pases.
(MALAJOVICH, 2012)

1998

Contabilizam-se mais de 1.500 empresas de Biotecnologia nos Estados


Unidos e mais de 3.000 no mundo. Clulas-tronco embrionrias so
utilizadas para regenerar tecidos. (MALAJOVICH, 2012)
Sequenciamento do primeiro genoma animal, o verme Caenorrabditis
elegans. Isolada a primeira linhagem de clulas-tronco embrionrias
humanas. (MALAJOVICH, 2012)

1999

Sequenciamento do primeiro cromossomo humano. Pesquisadores


descobrem que as clulas-tronco podem ser induzidas a se diferenciar
em diversos tipos celulares. (MALAJOVICH, 2012)

2000

O rascunho do sequenciamento do genoma humano anunciado


simultaneamente por Collins, do Consrcio do Genoma Humano, e
Venter, da Celera Inc. Sequenciados tambm o genoma da mosca
Drosophila melanogaster, o primeiro genoma de uma planta
(Arabidopsis thaliana) e, no Brasil, o de uma bactria que ataca os
ctricos (Xylella fastidiosa). (MALAJOVICH, 2012)

2001

O rascunho do sequenciamento do Genoma Humano publicado


simultaneamente nas revistas Science e Nature. Sequenciamento do
genoma de plantas de interesse agronmico para os pases em
desenvolvimento (arroz, banana). Sequenciamento do genoma de
bactrias de importncia agronmica. Obteno de clulas sanguneas a
partir de clulas-tronco embrionrias. (MALAJOVICH, 2012)

2002

Completados o rascunho do proteoma funcional da levedura e o


sequenciamento do genoma do agente e do vetor transmissor da malria.
Identificam-se mais de 200 genes envolvidos na diferenciao das
clulas-tronco. Descoberta da participao de molculas de RNA na
regulao de vrios processos celulares. Em diversos pases inicia-se a
utilizao de clulas-tronco adultas para o tratamento experimental de
diversas doenas leucemia, mal de Chagas, diabetes e anemia
falciforme). (MALAJOVICH, 2012)

2003

Comercializao como mascote, do GloFish, um peixe transgnico que


brilha na escurido, originalmente criado para detectar poluentes.
Clonagem de vrios tipos de animais e de espcies ameaadas de
extino. (MALAJOVICH, 2012)

2004

Comercializao de novos medicamentos (Avastin ou bevacizumab) e


testes de diagnsticos. (MALAJOVICH, 2012)

13

2006

2007

O grupo de pesquisadores liderado por S. Yamanaka consegue induzir a


pluripotencialidade celular em clulas somticas. (MALAJOVICH,
2012)
As autoridades europeias de segurana alimentar concluem que os genes
marcadores de resistncia aos antibiticos no apresentam riscos
relevantes para a sade humana ou animal nem para o meio ambiente.
(MALAJOVICH, 2012)

2008

Pesquisadores japoneses desenvolvem a primeira


geneticamente modificada. (MALAJOVICH, 2012)

rosa

azul,

2010

Autorizada na Unio Europeia a comercializao da batata transgnica


Amflora (BASF) para uso industrial. Pesquisadores do Instituto Craig
Venter constroem a primeira clula sinttica. (MALAJOVICH, 2012)

4. BIOPROCESSOS, PROCESSOS FERMENTATIVOS E INDSTRIA

4.1 BIOPROCESSOS

Os bioprocessos, processos de natureza biolgica, surgiram como tecnologia


emergente e promissora, revelando-se como processos eco-compatveis (PEREIRA Jr., 2009).
(MALAJOVICH, 2012)
A produo de vinhos e cervejas o primeiro processo fermentativo desenvolvido
em escala industrial. Ao longo do sculo XX, a expanso da Microbiologia Industrial
possibilitou, mediante o desenvolvimento de processos baseados no metabolismo microbiano,
a produo de diversas substncias (acetona, butanol, etanol, cido ctrico, antibiticos etc.).
Atualmente, as fermentaes encontram aplicaes novas, tanto no tratamento ambiental
como na produo de alimentos e aditivos, de produtos qumicos e de medicamentos.
(MALAJOVICH, 2012)
Por motivos histricos, ainda hoje o termo processos fermentativos se aplica em
biotecnologia a qualquer processo microbiano operado em grande escala, independentemente
de ser ou no uma fermentao. E o termo fermentador se usa como sinnimo de biorreator,
designando o recipiente onde ocorre o processo (Figura 4.1). (MALAJOVICH, 2012)

14

FIGURA 4.1. O processo fermentativo genrico.

FONTE: http://slideplayer.com.br/slide/1652988/

4.2 PROCESSOS FERMENTATIVOS E INDSTRIA

Em termos gerais a fermentao implica na utilizao de microorganismos na


transformao da matria orgnica catalisada por enzimas.
A humanidade convive com processos fermentativos desde de 5000 a. C na sua
utilizao para obteno de vinho, queijo e outros derivados do leite. Os egpcios j utilizao
da fermentao da cevada para a obteno de uma espcie de cerveja e, 4000 a. C, a levedura
da cerveja j est sendo utilizada para panificao. No Mxico os astecas costumavam
cultivar alga de gnero Spurilina para consumo prprio (WARD, 1991).
Hoje em dia, diversos produtos utilizados nas indstrias qumicas, farmacutica e de
alimentos so obtidos por processos fermentativos. Estes metabolismos podem ser gerados
pelo metabolismo primrio (ex etanol) ou secundrio (ex antibiticos) do microrganismo
cultivado e ao lado da produo de biomassa, enzimas e protenas em geral, eles so
responsveis pela evoluo tecnolgica e desenvolvimento em pesquisas na rea (WARD,
1991).

15

As fermentaes podem ser conduzidas por processos descontnuos, descontnuos


alimentados ou contnuos, bem como, por variaes destes processos. (WARD, 1991;
BORZANI, 2001)
Independente do modo de operao utilizado, o desenvolvimento de processos
fermentativos para a produo de enzimas por micro organismos tornou-se vivel a obteno
de novos sistemas enzimticos. (PARK, 1975)
Novos processos que fossem economicamente viveis com reprodutibilidade e
confiabilidade aumentariam a necessidade de controle e melhor acompanhamento do
processo. Porm maiores progressos resultariam de uma melhor compreenso da fisiologia
bacteriana, interaes do microrganismo com o meio e sua habilidade em manipular fluxos
metablicos. (BUCKLAND, LILLY, 1993)

4.2.1 PROCESSOS DESCONTNUOS

Os cultivos descontnuos podem ser considerados como tendo um sistema fechado,


exceto pela aerao e controle de pH atravs da adio de cidos e bases, que contm uma
quantidade limitada de meio, e no qual o inoculo passa por um nmero de fases, o que pode
ser observado pela curva de crescimento celular. Em processos descontnuo ou semicontnuos, todo substrato fornecido no inicio da fermentao, enquanto que nos demais
processos, o substrato adicionado ao longo do cultivo.
A principal desvantagem da fermentao descontnua, quando utilizada pra produo
de bioprodutos associados ao crescimento celular que a formao eficiente do produto
ocorre somente durante uma parte do ciclo de fermentao, o que promove uma produtividade
menor do que a obtida por processos que consigam prolongar este perodo (WIN, 1996).
Em cultivos descontnuos, as elevadas concentraes de aucares podem resultar
numa represso chamada Efeito Crabtree, na qual as enzimas da respirao microbiana so
inibidas e a produo de etanol aumentada. Este problema ode ser resolvido atravs do cultivo
descontinuo-alimentado, onde os nutrientes essenciais podem ser alimentados conforme a
necessidade do microrganismo durante o cultivo. (WIN et al., 1995)
A quantidade de biomassa alcanada em um processo descontnuo depende da
concentrao inicial de substrato limitante do crescimento e da eficcia do microrganismo
para converter o substrato em matria celular.

16

4.2.2 PROCESSO DESCONTINUO ALIMENTADO

Pode ser definida como sendo o processo no qual um ou mais nutrientes so supridos
ao meio (adicionados no fermentador) durante cultivo e, no qual os produtos permanecem no
reator at o final do cultivo.
Caractersticas do sistema descontnuo alimentado (batelada alimentada):

Neste sistema possvel o controle das concentraes dos nutrientes (substratos) no


fermentador atravs do controle da vazo de alimentao, o que propicia a manuteno
de uma concentrao de substrato favorvel ao processo.

Alternativa cada vez mais empregada nos processos biotecnolgicos.

Apresenta algumas vantagens como: possibilidade de nveis baixos de determinados


substratos inibidores como metanol, etanol, cido actico entre outros.

Nveis baixos de glicose, permitindo assim, reduzir o efeito da represso catablica na


sntese de vrias enzimas indutivas.

Possibilidade de controle dos nveis de substratos indutores.

Possibilidade de obteno de elevadas produtividades tanto em clulas quanto em


produtos metablicos.

Reposio de gua perdida por evaporao durante o processo


Obs.: processos industriais de longa durao (2 semanas) operados a 1 vvm podem
chegar perdas de 25 %.

4.2.3 PROCESSO CONTNUO

Caracteriza-se por uma alimentao de forma contnua de meio de cultura a uma


dada vazo constante, o volume da reao deve ser mantido constante atravs da retirada
sistemtica de caldo fermentado, a manuteno deste volume vital para que o sistema atinja
a condio de estgio estacionrio (Steady state), onde, neste estado, as variveis do
processo (concentrao de clulas, de substrato limitante e produto) so constantes. Portanto,
este tipo de fermentao permite a operao do sistema durante longos perodos de tempo no
seu estado estacionrio, que proporciona algumas vantagens. O sistema de manuteno do
volume constante determinado por transbordamento (ladro), podendo ou no ser
instaladas bombas de alta vazo na sada dos fermentadores.

17

Um dos grandes problemas enfrentados em processos aerados a grande formao


de espumas, que podem prejudicar o processo fermentativo alterando o volume, para isto,
basta a utilizao de antiespumantes, semelhante ao processo de fermentao descontnua, h
tambm a possibilidade de ao mecnica para a quebra das espumas formadas, em
fermentadores grandes esses problemas so minimizados, contudo, em fermentadores de
pequena escala podem tornar-se problemas crticos, sendo de vital importncia este controle
da vazo e de retirada do caldo fermentado.

Como todo processo, envolve vantagens e desvantagens, iremos aqui, comparar o


processo contnuo com o descontnuo. As vantagens so:

Aumento da produtividade do processo, reduzindo os tempos mortos (no


produtivos).

Obteno de caldo fermentado uniforme.

Manuteno das clulas em um mesmo estado fisiolgico, o que proporciona um forte


estudo para a otimizao dos processos.

Menor necessidade de mo-de-obra.

Maior facilidade no emprego de mecanismos de controle avanados.

No entanto, h algumas desvantagens:

Maior investimento inicial de planta operacional.

Podem ocorrer mutaes gnicas espontneas.

Maior possibilidade de contaminao devido ser um sistema aberto.

Dificuldade de manter a homogeneidade do reator em baixas vazes e dificuldade de


operao no estado estacionrio devido as variveis de processo.

Mesmo com estas desvantagens, este processo muito utilizao na fermentao


alcolica, em escala industrial, utiliza-se da reciclagem de clulas, ou seja, um processo
contnuo em mltiplos estgios, permitindo a obteno de elevados rendimentos e grande
produtividade. Outro ponto importante a possibilidade do tratamento de resduos gerados
pelo processo atravs de reatores de fluxo ascendente do tipo UASB, muito utilizados em
fbricas de cerveja e refrigerantes; h de ser lembrado tambm, que, em escala industrial, por
serem reatores grandes, os processos so no asspticos.

18

5. OS MICRORGANISMOS INDUSTRIAIS

5.1 NOES SOBRE METABOLISMO PRIMRIO E SECUNDRIO (tipos de


fermentaes)

Denominamos metabolismo o conjunto de reaes qumicas de degradao


(catabolismo) e de sntese (anabolismo) de substncias em um organismo. As primeiras
liberam energia, as outras a consomem. (MALAJOVICH, 2012)
As clulas e a maioria dos microrganismos retiram dos compostos orgnicos a
energia que precisam, para a manuteno de sua estrutura e para suas atividades. Nas vias
catablicas, a degradao de compostos orgnicos em molculas menores libera energia; uma
parte desta ser acumulada sob a forma de ATP (trifosfato de adenosina), e a restante
dissipada como calor. (MALAJOVICH, 2012)
Respirao e fermentao so as principais vias catablicas (Figura 5.1). A
quantidade de energia liberada e os produtos finais diferem se a oxidao do composto
orgnico for total ou parcial. Na gliclise, a glicose degradada at uma molcula de trs
carbonos, o piruvato. Em presena de oxignio, a entrada do piruvato no ciclo de Krebs e a
fosforilao oxidativa permitem a quebra total da glicose em CO2 e H2O, liberando uma
grande quantidade de energia sob a forma de ATP (respirao aerbia). (MALAJOVICH,
2012)
FIGURA 5.1. Respirao e fermentao.
Na respirao, onde o ltimo aceptor de eltrons o oxignio, a oxidao de glicose se
completa at chegar a CO2 e H2O, produzindo 36-38 molculas de ATP. Na fermentao, o
ltimo aceptor de eltrons o piruvato ou algum outro derivado, produzindo 2 ATP.
(MALAJOVICH, 2012)

FONTE: https://biogeo10.wordpress.com/category/fermentacao-respiracao/

19

Mediante a reduo do piruvato ou de algum de seus derivados (fermentao), vrios


microrganismos geram outras substncias orgnicas: acetona, butanol, etanol, cido lctico,
cido actico, glicerol etc. (MALAJOVICH, 2012)
Estas reaes ocorrem geralmente em ambientes onde o substrato abundante, sendo
pequena a quantidade de energia obtida. Dependendo das condies ambientais, isto , da
presena ou ausncia de oxignio, algumas leveduras e bactrias (assim como as clulas
musculares) podem respirar ou fermentar. (MALAJOVICH, 2012)

A respirao e algumas fermentaes so representadas mediante equaes, como a


seguir:

Respirao aerbia: (MALAJOVICH, 2012)


C6H12O6 + 6 O2 +38 ADP + 38Pi

6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP

Glicose

Fermentao alcolica (leveduras como S. cerevisiae e algumas bactrias):


(MALAJOVICH, 2012)
C6H12O6 + 2 ADP + 2Pi

CH3 CH2OH + CO2 + 2 ATP

Glicose

Fermentao

Etanol

lctica

(bactrias

como

Streptococcus

Lactobacillus):

(MALAJOVICH, 2012)
C6H12O6 + 2 ADP + 2Pi
Glicose

CH3 CHOH COOH + 2 ATP


cido lctico

No metabolismo, os caminhos de degradao se cruzam com os de sntese. Outras


molculas (aminocidos, cidos graxos) podem entrar em determinados pontos da via
catablica da glicose, convergindo para a produo de energia e de pequenas molculas
simples (CO2, H2O e NH3). Inversamente, alguns dos compostos intermedirios do
catabolismo so os pontos de partida para vias anablicas. (MALAJOVICH, 2012)
Entretanto, as vias metablicas no so reversveis: o caminho seguido na
degradao de uma substncia parcial ou totalmente diferente do caminho de sntese
correspondente, podendo inclusive ocorrer em compartimentos celulares diferentes. Esta
separao facilita a regulao enzimtica do metabolismo que ocorre com o menor
desperdcio de matria e energia. (MALAJOVICH, 2012)

20

Alm das vias metablicas primrias, que so comuns a todos os microrganismos,


existem outras vias metablicas secundrias especficas. A ativao de umas e/ou de outras
depende do microrganismo e das condies em que ele se desenvolve em seu ambiente
natural ou em que ir ser cultivado. (MALAJOVICH, 2012)
Os metablitos primrios esto relacionados com o crescimento dos microrganismos
e a transformao de nutrientes em biomassa; sendo os principais exemplos o etanol, o cido
lctico ou os aminocidos. (MALAJOVICH, 2012)
J os metablitos secundrios, mesmo sendo desnecessrios no metabolismo
microbiano, permitem a sobrevivncia em ambientes extremamente competitivos que contam
com escassos nutrientes. So metablitos secundrios os antibiticos, os alcaloides, os
pigmentos, algumas enzimas e toxinas. (MALAJOVICH, 2012)
De um modo geral, quando os microrganismos se desenvolvem em um meio com
uma quantidade limitada de nutrientes, a populao passa por diversas fases (Figura 5.2A).
(MALAJOVICH, 2012)

Fase lag: perodo de adaptao em que, apesar de no se multiplicar, os


microrganismos sintetizam enzimas e constituintes celulares. (MALAJOVICH,
2012)

Fase log: a populao cresce de maneira exponencial, sendo sintetizados


numerosos metablitos primrios. (MALAJOVICH, 2012)

Fase estacionria: devido ao esgotamento dos nutrientes e acumulao de


excretas, algumas clulas morrem, enquanto outras se dividem. No fim da fase
log e incio da fase estacionria comeam a serem sintetizados os metablitos
secundrios. (MALAJOVICH, 2012)

Fase de declnio: sem a renovao dos nutrientes, as clulas morrem em um


tempo varivel. (MALAJOVICH, 2012)

Com vistas ao desenvolvimento de um bioprocesso, a escolha do microrganismo ter


que ser feita em funo de suas vias metablicas; e as condies de cultivo dependero do
objetivo da fermentao, um metablito primrio ou um metablito secundrio (Figura 5.2B).
(MALAJOVICH, 2012)

21

FIGURAS 5.2A e 5.2B: As diversas fases do crescimento de uma populao microbiana e a


produo de metablitos. (MALAJOVICH, 2012)

5.2A: As fases de crescimento de uma populao. (MALAJOVICH, 2012)

FONTE: http://www.uff.br/enzimo/images/stories/ensino/FCMgreen1.png

5.2B: A produo de metablitos primrios e secundrios. (MALAJOVICH, 2012)


Os nutrientes do meio permitem a multiplicao celular e a formao do metablito primrio,
que pode ser utilizado pelas clulas para sintetizar o metablito secundrio (a); este pode
tambm ser sintetizado diretamente a partir de alguma substncia do meio (b).
(MALAJOVICH, 2012)

FONTE: Adaptado do livro: MALAJOVICH; Biotecnologia 2011; 2012.

22

5.2 MEIOS DE CULTURA E MATRIA PRIMA

Segundo (MALAJOVICH, 2012) a composio do meio de cultura depende das


necessidades metablicas do microrganismo escolhido. Este deve conter todos os nutrientes
necessrios nas concentraes adequadas, que variam em funo do microrganismo e do
objetivo do processo. Em geral, os meios de cultura utilizados no laboratrio incluem:

gua. (MALAJOVICH, 2012)

Uma fonte de energia e de carbono: glicose, amido etc. (MALAJOVICH, 2012)

Uma fonte de nitrognio: inorgnica (sulfato de amnia, nitrato de potssio etc.),


orgnica (asparragina, succinato de amnia, glutamato, ureia etc.) ou complexa
(farinha de soja, peptona etc.). (MALAJOVICH, 2012)

Sais minerais, tais como fosfato de potssio (K2HPO4 ou KH2PO4), sulfato de


magnsio (MgSO4 7H2O), cloreto de clcio (CaCl2) etc. (MALAJOVICH,
2012)

Elementos-trao:

ferro,

zinco,

mangans,

cobre,

cobalto,

molibdnio.

(MALAJOVICH, 2012)
Com vistas a uma explorao comercial, os meios definidos so substitudos na
indstria por matrias-primas de baixo custo como, por exemplo, soro de leite, melao de
cana ou de beterraba, amido de milho etc. Em alguns casos, a matria-prima passa por um
tratamento prvio com mtodos fsicos e/ou qumicos. (MALAJOVICH, 2012)
No caso de se tratar de um processo enzimtico, o meio dever levar, alm do
substrato adequado, os elementos necessrios para que a enzima possa desenvolver sua
atividade cataltica (precursores, cofatores etc.). (MALAJOVICH, 2012)

5.3 A ESCOLHA DA LINHAGEM

De um modo geral, para que o cultivo em um fermentador resulte economicamente


vivel, o microrganismo deve ser capaz de se multiplicar rapidamente, sintetizando grande
quantidade do produto a partir de uma matria-prima barata. Existem Bancos e Colees de
Cultura que vendem esse tipo de linhagens de microrganismos como culturas puras,
geneticamente estveis e aptas para o cultivo em grande escala.
Apesar de terem sido isoladas do meio ambiente, as linhagens industriais diferem
substancialmente das linhagens originais, em virtude de uma srie de alteraes genticas
(mutaes, recombinaes) obtidas no laboratrio. Algumas vias metablicas, especialmente

23

as do metabolismo secundrio, podem ter sido alteradas, de maneira a aumentar ao mximo a


sntese do produto desejado e evitar a produo de algumas substncias desnecessrias.
Em geral, por estar to selecionadas geneticamente, tendo inclusive algumas vias
metablicas anuladas ou desbalanceadas, estas linhagens sobrevivem pouco tempo no meio
ambiente. Porm, como norma geral, as linhagens industriais no devem ser patognicas nem
produzir toxinas. A produo de medicamentos ou de vacinas um caso especial que exige
medidas de segurana estritas.
Os microrganismos constituem um grupo biolgico muito diversificado e, ainda,
pouco conhecido, por isso existem muitas expectativas em relao prospeco de linhagens
em ambientes extremos ou pouco usuais. No se precisa desenvolver um processo novo para
cada microrganismo que apresente alguma caracterstica comercial interessante. A tendncia
atual de transferir os genes correspondentes a algum dos microrganismos conhecidos,
adaptados s condies industriais.

6. TIPOS DE FERMENTAO

As fermentaes so agrupadas em trs tipos distintos de processo:


6.1 TIPO 1 ASSOCIADA (FERMENTAES COM FORMAO DE
PRODUTO COM CRESCIMENTO ASSOCIADO)

Neste tipo de fermentao, a formao do produto ocorre em paralelo, ou quase, com


o crescimento do agente e com o consumo do substrato. Produto e substrato se relacionam
praticamente por estequiometria.
No processo associado o produto derivado diretamente do metabolismo primrio,
usado para a produo de energia. O crescimento, o catabolismo de carboidratos e a formao
do produto ocorrem ao mesmo tempo. A TRODOFASE (fase de crescimento) e a IDIOFASE
(fase de formao do produto) no so separadas. Exemplos: fermentao alcolica (etanol), a
produo aerbica de leveduras, a fermentao ltica por Lactobacillus homofermentativos.

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6.2 TIPO 2 SEMI-ASSOCIADA (FERMENTAES COM FORMAO DE


PRODUTO COM CRESCIMENTO MISTO)

Neste caso, o crescimento do microrganismo parcialmente separado da formao


do produto. H duas fases: na primeira, a velocidade especfica de formao do produto
inversamente relacionada com o crescimento do agente e com a utilizao do substrato; na
segunda, a velocidade especfica de formao do produto est em boa correlao com as
velocidades especficas de consumo de substrato (S) e crescimento (X).
O produto derivado de um substrato usado no metabolismo primrio, mas segue
uma rota colateral. A trofofase e a idiofase so separadas. Em fermentao em batelada este
tipo de cintica possui dois pontos importantes:
a) crescimento celular acompanhado de alto consumo de substrato e pouca ou
nenhuma formao de produto
b) o crescimento diminui e a formao do produto comea acompanhada de um alto
consumo de substrato.
Exemplos: produo de cido ctrico e a fermentao glucnica.

Metabolismo Primrio

Produto

6.3 TIPO 3 NO ASSOCIADA (FERMENTAES COM FORMAO DE


PRODUTO COM CRESCIMENTO NO ASSOCIADO)

Aqui, a formao do produto retardada, somente se iniciando, quando a reproduo


celular do agente cessa ou est em franco declnio e o substrato foi quase ou totalmente
consumido.
O metabolismo primrio e a formao do produto ocorrem em tempos separados. O
produto no derivado do catabolismo, mas de rotas anfiblicas. Neste tipo de fermentao, o
metabolismo primrio ocorre acompanhado do consumo de substrato, aps isto o produto
formado por reaes do metabolismo intermedirio.
Neste tipo de processo frequentemente as condies timas para o crescimento
celular no so as mesmas para a formao do produto e a fermentao pode ser dividida em

25

duas etapas, onde na primeira se d condies para as clulas crescerem e aps alterasse a
temperatura, pH, quantidade de oxignio ou concentrao de nutrientes para favorecer a
formao do produto.
Exemplos: fermentao penicilnica, outros processos de produo de antibiticos e tambm
vitaminas.

7. OS DIFERENTES TIPOS DE BIOPROCESSOS

7.1 OS PROCESSOS TRADICIONAIS

Algumas fermentaes se desenvolvem sobre resduos agroindustriais ou florestais,


como gros, palha, bagao, serragem etc. Este tipo de fermentao em meio slido umedecido
utilizada na produo de alimentos como, por exemplo, o levedo da massa na panificao, a
maturao de queijos por ao de fungos (Roquefort, Gorgonzola), o cultivo de fungos, a
fermentao do cacau, do caf e do ch etc. Na sia, a preparao do koji, soja fermentada,
a base de alimentos tradicionais como o tofu, o miss, o shoyu e o sak.
Em alguns lugares, estas fermentaes ainda ocorrem artesanalmente, dentro de
folhas de bananeira e cestas de bambu ou mesmo em montes; tambm existem hoje
equipamentos sofisticado com bandejas, colunas, frascos e tambores rotativos, alguns
totalmente automatizados (Figura 6.1).

FIGURA 6.1. Biorreator para fermentaes em fase slida.

FONTE: MALAJOVICH; Biotecnologia 2011; 2012.

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Outra variante interessante do processo fermentativo a produo tradicional de


vinagre (Processo Francs ou de Orlans) em barris de carvalho. O vinho inoculado com
bactrias do gnero Acetobacter que formam na superfcie a "me do vinagre", uma pelcula
que flutua, presa a um quadriculado de madeira que a impede de afundar. Deste modo, o
microrganismo cresce na superfcie de um meio lquido, em contato simultneo com o ar e
com o meio.
O processo fornece excelentes vinagres, mas lento e exige muito espao, sendo a
capacidade de cada barril de 200 litros (Figura 6.2). Existem outros processos semelhantes,
conduzidos por fungos, que formam uma pelcula de miclio na superfcie do lquido.

FIGURA 6.2. Um processo tradicional, a produo de vinagre (Mtodo de Orlans).

FONTE: http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAT1AAA/producao-vinagre-maca

7.2 OS PROCESSOS SUBMERSOS

Atualmente, a maioria dos processos industriais se desenvolve em cubas de vidro ou


de ao de at 20 litros. Os agentes biolgicos se encontram submersos no meio de cultivo que
ocupa, aproximadamente, 75% da cuba. s vezes necessrio injetar ar, e em muitas
fermentaes se forma espuma.
O desenho do biorreator deve se adequar ao objetivo do processo, respondendo
eventualmente a diversos imperativos, tais como a esterilizao do sistema, a aerao e

27

homogeneizao do meio, o acrscimo de nutrientes e de aditivos antiespuma, a manuteno


do pH etc.
Os modelos de fermentadores mais utilizados com microrganismos contam com
aerao e agitao mecnica. Esta facilita a distribuio dos nutrientes na cuba, mas gera calor
que deve ser eliminado mediante a circulao de gua fria (Figura 6.3). Se o processo exigir
assepsia, esta ser conseguida mediante:

A esterilizao do meio, dentro ou fora do fermentador.

A desinfeco ou esterilizao do equipamento, por injeo de vapor ou


mediante o calor gerado por serpentinas, sendo esta medida extensiva a todos os
ductos de entrada e sada e s vlvulas correspondentes.

A esterilizao do ar, mediante filtros adequados.

Em outros tipos de biorreatores, em coluna ou torre, a homogeneizao depende da


injeo de ar (Figura 6.4). Os tanques podem chegar a 3.000 m3 de capacidade como, por
exemplo, os fermentadores para a produo de protenas de clula nica, da Imperial
Chemical Industries (ICI), no Reino Unido.

FIGURA 6.3. Modelo de biorreator utilizado em fermentaes submersas.

FONTE: http://pt.slideshare.net/JooVitorApolinrioFer/figuras-boas-tanque-agitados

28

7.3 OUTROS SISTEMAS SUBMERSOS

Os sistemas submersos so apropriados para o cultivo de microrganismos livres, mas


resultam pouco econmicos quando se trabalha com clulas ou enzimas caras. A imobilizao
em fermentadores menores, seja por adeso a um suporte inerte, seja por incluso dentro de
um polmero que permita o contato com o meio de cultura, alm de simplificar a purificao
do produto permite a reutilizao das clulas ou das enzimas, que permanecem dentro do
biorreator (Figura 6.4).
O crescimento da populao microbiana, ou a quantidade do produto formado so
monitorados a partir de amostras extradas ao longo do processo. Existem fermentadores
adaptados s necessidade de cada agente biolgico e de cada tipo de processos.
FIGURA 6.4. Fermentaes, agentes biolgicos e biorreatores.

FONTE: MALAJOVICH; Biotecnologia 2011; 2012.

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8. DO LABORATRIO A INDSTRIA

8.1 A MUDANA DE ESCALA

A capacidade de uma cuba varia entre 1 e 10 l para um fermentador de laboratrio,


chegando a 5.000 l em uma planta piloto e 100.000 l em uma planta industrial.
Uma operao simples de laboratrio pode ser impraticvel, ou pouco econmica,
quando realizada em grande escala. No laboratrio, aps as primeiras experincias realizadas
na bancada, o processo passa a ser estudado em um biorreator de at 10 litros de capacidade,
onde se analisam as variveis fsico-qumicas em outra escala.
Ao aumentar o tamanho do equipamento, altera-se a relao superfcie/volume, de
modo que as condies de operao do fermentador na planta piloto devero ser ajustadas at
se aproximar das correspondentes a um processo comercial. Se a experincia na planta piloto
for bem-sucedida, o processo poder ser desenvolvido em um fermentador industrial (Figura
6.5).

FIGURA 6.5. A mudana de escala, do laboratrio indstria.


A mudana de escala entre o processo laboratorial e o processo industrial cria vrios
problemas de ndole tecnolgica.

FONTE: MALAJOVICH; Biotecnologia 2011; 2012.

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A automatizao do monitoramento e do controle da fermentao permite que a


informao relativa aos parmetros fsicos e qumicos (pH, temperatura, oxignio, velocidade
de agitao, o nvel do meio etc.) seja recolhida on-line por sondas e sensores. Para que o
processo se aproxime das condies ideais, a informao analisada em relao a um modelo
previamente estabelecido. Como este se elabora a partir da experincia obtida com cubas
menores (laboratrio, piloto), os ajustes mudana de escala so de grande complexidade.

8.2 A RECUPERAO DO PRODUTO

A recuperao do produto representa uma frao considervel do custo de um


processo fermentativo. Se o produto for secretado fora da clula, estar disperso em um
volume grande de gua e ser necessrio separ-lo por decantao ou filtrao. Mas se o
produto permanecer dentro das clulas, estas tero que ser desintegradas para proceder a sua
extrao.
O produto se concentra por sedimentao, precipitao, filtrao, centrifugao,
extrao por solventes, destilao, evaporao do solvente e secagem. Se a purificao for
necessria, esta envolver outros procedimentos, como a cristalizao e os mtodos
cromatogrficos.
Um problema a considerar o despejo dos resduos de uma fermentao, alguns dos
quais podem representar um perigo para o meio ambiente como, por exemplo, o vinhoto
resultante da produo de etanol ou o soro das indstrias de laticnios. Existem formas de
tratamento, como o crescimento de biomassa sobre resduos industriais, que eliminam o
problema e ainda permitem a obteno de mais um produto.

9. OS BIOPROCESSOS NA INDSTRIA

Os bioprocessos so utilizados por numerosas indstrias na produo de bens e


servios, em vrios setores produtivos (indstria, meio ambiente, sade).

Produo de biomassa: onde o objetivo a produo em grande quantidade de


biomassa de bactrias, leveduras ou fungos. A biomassa de levedura pode ser utilizada
no processo de panificao; j a biomassa da microalga Spirulina pode ser utilizada no
enriquecimento de alimentos.

Produo de metablitos celulares: visa produo em larga escala de produtos de


metabolismo celular. Eles podem ser intra ou extracelulares.

31

Produo de protenas recombinantes: atravs da engenharia gentica possvel


manipular genes e introduzi-los em microrganismos de forma a chegar a produtos que
antes eram produzidos em outras clulas ou ainda melhorar a especificidade de uma
enzima.

Produo de enzimas: so os produtos celulares mais usados na indstria. Elas podem


ser extradas de animais ou plantas, mas a produo por microrganismos pode fornecer
uma maior rendimento.

Biotransformao de compostos: h a transformao de substncias do meio em


outras. Esse recurso bastante til principalmente na rea ambiental, onde possvel
fazer com que microrganismos retirem substncias txicas do meio e convertam a
produtos de toxicidade menor.

9.1 PRODUO DE ALIMENTOS

Os microrganismos so amplamente utilizados na produo de alimentos, tanto para


consumo humano como animal. Aqui sero discutidos alguns exemplos de produtos de
fermentao na indstria alimentcia.
Antigamente, a produo de pes era feita guardando-se um pouco das sobras da
ltima formada para servir como inculo para a prxima. Atualmente, encontra-se levedura
(fermento) comercialmente, sendo selecionadas as cepas mais produtivas para tal atividade. A
produo de biomassa de levedura para a panificao feita em meio lquido contendo
melao ou licor de milho, com pH 4-5 e aerao. Ao final do cultivo as clulas so
recuperadas por centrifugao e filtrao.
adicionado um pouco de leo vegetal para agir como plastificante, e a biomassa
moldada na forma de blocos e embalada para comercializao (NAJAFPOUR, 2007).
Na produo de queijos necessria a formao do coalho, que causada pela ao da
renina sobre a casena do leite. O tipo de bactria ltica inoculada tambm pode fornecer um
sabor e odor caracterstico. Queijos como o Cheddar e o suo so maturados atravs do
crescimento anaerbico de bactrias lticas em seu interior. J queijos como o Limburger so
maturados por bactrias e outros microrganismos contaminantes que crescem na superfcie.
Queijos como o blue e o Roquefort so maturados pelos fungos Penicillium inoculados no
queijo. Derivados do leite como a manteiga, o iogurte, o kefir e o kumiss tambm so
produzidos atravs da fermentao (TORTORA et al., 2006).

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Pode ocorrer tambm de o prprio microrganismo ser o alimento. No entanto um prrequisito bsico para utilizao de biomassa de microrganismos como alimento e
medicamento a aprovao de sua segurana toxicolgica. Alguns microrganismos podem
produzir toxinas que podem fazer mal ao organismo de quem a ingerir (SILVA et al., 2007).
Cogumelos so um dos tipos de organismos utilizados na alimentao. Seu uso
bastante difundido em vrios pases, principalmente asiticos, onde eles so consumidos na
forma de ch, extratos ou em conjunto com outras ervas. Seu uso se d principalmente devido
a propriedades antibacterianas, antifngicas, antivirais, imunomoduladoras, antialergnicas,
anti-inflamatrias, antiaterognico e antitumoral, hipolipidemica e hipoglicemica. (LIMA et
al., 2007)

9.2 PRODUO DE ANTIBITICOS

Antibiticos so produtos secundrios do metabolismo que, em contato com outros


microrganismos, podem inibir o crescimento do mesmo.
No ramo dos antibiticos, um dos principais a penicilina, onde h a produo de
praticamente 33 milhes de toneladas mtricas anuais movimentando praticamente US$ 400
milhes. A venda mundial dos trs principais grupos de antibiticos (penicilina,
cefalosporina, tetraciclina e eritromicina) gera US$ 4,2 bilhes por ano (NAJAFPOUR,
2007).
No incio dos anos 40, Alexander Fleming notou a produo de penicilina pelo fungo
Penicillium notatum, a qual inviabilizou a cultura de Staphylococcus aureus.
Atualmente, a produo desse antibitico feita por uma outra espcie, Penicillium
chrysogenum, pois assim h a formao de uma maior quantidade de produto
(aproximadamente 1000 vezes mais). J antibiticos como a estreptomicina so produzidos
por Actinomicetos. O cultivo submerso tambm favoreceu a produo de antibiticos em larga
escala (NAJAFPOUR, 2007).
Para a produo de penicilina, podem ser utilizados resduos industriais como
melao. As etapas de produo consistem basicamente em:
1. Preparao do inculo.
2. Preparao e esterilizao do meio.
3. Inoculao do meio no fermentador.
4. Aerao forada com ar estril durante a incubao.
5. Aps a fermentao h a remoo do miclio formado.

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6. Extrao e purificao da penicilina.


A penicilina produzida a partir da L-cistena e L-valina. A produo se d de forma
no ribossomal, por meio de um dipeptdeo composto de L--aminoadpico (L- - AAA) e Lcistena ou um produto de degradao da cistationina. Aps, ela se conecta a L-valina atravs
de uma epimerizao. O produto da ciclizao do tripeptdeo a isopenicilina N. A
benzilpenicilina produzida no intercmbio de L- - AAA com cido fenilactico ativado.
(LIMA et al., 2001)
Dos antibiticos de origem microbiana, somente 123 so produzidos por
fermentao, o resto produzido de forma sinttica ou semi-sinttica. As bactrias produzem
um nmero de 950 antibiticos, j os actinomicetos pruduzem 4600 antibiticos, e os fungos
1600 (LIMA et al., 2001).

9.3 PRODUO DE ENZIMAS

As enzimas so amplamente utilizadas na indstria. Como exemplo pode-se citar o


uso de amilases para a produo de xaropes do amido de milho, na produo de papis e na
produo de glicose de amidos. No entanto, pode-se utilizar o microrganismo inteiro para o
processo ou somente a enzima. Percebendo isso, indstrias resolveram se especializar
somente na produo de enzimas (TORTORA et al, 2006).
Vrios fungos sintetizam e excretam grandes quantidades de enzimas no meio de
cultivo. Culturas como a de Aspergillus, Penicillium, Mucor e Rhizopus so bastante
utilizadas na indstria (NAJAFPOUR, 2007).
A produo de enzimas em larga escala se d principalmente atravs da fermentao
submersa, embora em pases orientais chega-se a utilizar fermentao semi-slida (LIMA et
al., 2001). Elas podem ser separadas do meio de cultivo aps a fermentao atravs de
solventes como etanol ou adio de sais inorgnicos como sulfato de amnio (NAJAFPOUR,
2007).

9.4 PRODUO DE ANTICORPOS

Anticorpos so protenas da famlia das imunoglobulinas, que so sintetizadas


normalmente pelo corpo de animais de forma a responder a molculas estranhas. necessrio
haver uma grande produo de anticorpos, pois sua demanda bastante elevada. E para isso,
as plantas de produo tm aumentado em tamanho e quantidade nas ltimas dcadas.

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Tambm nessa poca houve o desenvolvimento de anticorpos recombinantes que so


produzidos in vitro em grande quantidade como se fossem produzidos por clulas in vivo.
Isso foi obtido atravs da procura de clulas com alto coeficiente de produtividade
(SCHEPER & HU, 2006).
O cultivo em batelada raramente utilizado nesse caso, exceto em escala
laboratorial. mais frequente o uso de batelada alimentada ou cultivo contnuo com reteno
de clulas (SCHEPER & HU, 2006).
A produo de anticorpos monoclonais tem sido bastante estudada, principalmente a
potencialidade de seu uso como uma droga teraputica devido a sua especificidade de ligao.
Dentro da farmacoterapia, anticorpos monoclonais tem sido utilizados no tratamento de
doenas

infecciosas

(SynagisTM),

cncer

(HerceptinTM)

doenas

autoimunes

(RemicadeTM). No entanto, esses tratamentos ainda continuam sendo muito caros devido ao
processo de produo. Eles eram prduzidos antigamente em camundongos, mas atualmente
possvel produzir alguns tipos em Escherichia coli atravs de tcnicas de DNA recombinante
(SCHEPER & HU, 2006).

9.5 PRODUO DE INOCULARES

A biotecnologia no utilizada na agricultura somente atravs de organismos


vegetais geneticamente modificados. tambm bastante importante a tcnica de produo de
inoculantes agrcolas. Ela consiste na utilizao de microrganismos para melhorar o solo em
que ocorrer o cultivo, propiciando a fertilizao natural do solo, reduzindo os danos causados
por doenas, estimulando o crescimento vegetal e reduzindo a carga de inseticidas que podem
eventualmente permanecer no solo.
bastante utilizado nessa rea o fato de que algumas bactrias e fungos podem fazer
simbiose com vegetais. Bactrias como Bradyrhizobium e Rhizobium so importantes na
simbiose com leguminosas como soja e feijo, auxiliando na fixao do nitrognio
atmosfrico. Fungos so utilizados na micorrizao das razes de Pinus sp. e Eucaliptus sp.,
auxiliando na fixao e crescimento de mudas no ambiente (LIMA et al., 2001).
Para a fixao de nitrognio, so utilizadas culturas isoladas de bactrias (usualmente
Rhizobium) que consigam formar ndulos de fixao nas razes de leguminosas. As
caractersticas do solo onde ocorrer o plantio tambm importante para selecionar uma cepa
que seja adequada para aquelas condies de temperatura e pH. Pode ocorrer tambm uma

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competio entre bactrias do inculo e bactrias naturais do solo, inviabilizando o seu


desenvolvimento.
Outra caracterstica importante da linhagem a ser usada que as clulas microbianas
devem suportar as condies de produo industrial, se multiplicando de forma significativa
nos tanques cultivo.
Sobre os inoculantes a base de fungos, so utilizados microrganismos de ao
mutualstica, formando associaes com razes de vegetais superiores. Dependendo do tipo de
colnias formadas nas razes, os fungos podem ser classificados como endomicorrizas
(quando h penetrao na raiz) ou ectomicorrizas.
A seleo de microrganismos pode ocorrer de espcies naturais, a fim de se encontrar
o organismo que propicia uma melhor associao. A produo em grande quantidade na
indstria ocorre atravs de cultivos em estado slido ou submerso. O primeiro tipo apresenta
problemas quanto ao controle de pH, temperatura e disponibilidade de oxignio e substrato.
Essas condies j podem ser melhor ajustadas durante o cultivo submerso (LIMA et al.,
2001).

9.6 TRATAMENTO AMBIENTAL

Um processo industrial geralmente apresenta a produo de alguns produtos


indesejveis, e esses resduos devem ser descartados de uma forma apropriada para no
danificar o ambiente. Um modelo de indstria ideal seria aquele em que no haveria nenhum
resduo e ocorreria uma integrao de todos os processos (o resduo de um processo poderia
servir de substrato pra outro). ZANETE, 2007, utilizou esse princpio para modelar uma
biorrefinaria integrada, onde, por exemplo, um resduo como bagao de cana poderia ser
utilizado tanto na produo de energia quanto no cultivo de microorganismos para a produo
de etanol.
Com a constante preocupao da populao com relao preservao do meio
ambiente, deve-se prestar muita ateno aos resduos industriais a providenciar tratamento
adequado para cada tipo.
Para compostos biodegradveis pode-se fazer uso da biodegradao, onde
microrganismos fazem a decomposio de compostos, desde que eles tenham a maquinaria
enzimtica necessria (LIMA et al., 2001). Outra utilizao o fenmeno de absoro de
metais txicos do ambiente por microrganismos (por exemplo, algas), pois podem suportar

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quantidades um pouco mais elevadas. A utilizao de biofiltros no tratamento de gases


txicos tambm tem sido bastante estudada (MOOYOUNG & CHISTI, 1994).
A diferena do tratamento biolgico de efluentes lquidos, slidos e gasosos com
relao aos outros processos discutidos anteriormente que a escala de operao geralmente
muito maior e os microrganismos so utilizados em culturas mistas, muitas vezes sem
esterilizao (MOO-YOUNG & CHISTI, 1994).

9.7 PRODUTOS RECOMBINANTES

Atravs da tecnologia do DNA recombinante foi possvel aumentar a quantidade de


produtos resultantes da fermentao realizada por microrganismos.
Por essa tcnica consegue-se induzir em um microrganismo a produo de uma
protena heterloga que originalmente pertencia a outro organismo. Alguns exemplos bem
sucedidos so a produo de insulina humana, de hormnio do crescimento e de interferon
pela bactria Escherichia coli (WALKER & GINGOLD, 1997). Um exemplo de processo
recombinante est na figura 18, onde os genes de origem externa, como, por exemplo, tecido
animal, so inseridos em microrganismos atravs de tcnicas de biologia molecular.
Os organismos mais utilizados nesse processo so Escherichia coli, Bacillus subtilis,
leveduras, clulas cultivveis de eucariotas superiores, como de inseto e de mamferos. As
bactrias da espcie E. coli so amplamente utilizadas devido facilidade de crescimento e
produo. Existem alguns fatores importantes durante uma fermentao que utiliza um gene
recombinante, como:

Modificaes ps-traducionais.

Modo de secreo do produto.

Minimizao da degradao do produto.

Proteo da expresso do gene estrangeiro.

Controle do incio de sua sntese durante a fermentao.


(WALKER & GINGOLD, 1997)

Para conseguir a expresso de genes eucariticos em bactrias, deve-se levar em


conta que esses genes possuem sequncias de exons e introns. Portanto deve-se modificar a
sequncia de modo a ter somente os cdons que devem ser codificados em aminocidos.
Protenas originrias de organismos eucariticos podem no ter sua produo exata em
microrganismos tambm devido presena de algumas modificaes ps-traducionais, como
glicosilao, o que no feito por muitas bactrias. Outros fatores a serem observados so a

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frequncia de cdons utilizados pelo organismo (codon usage bias), pois, como o cdigo
gentico degenerado (apresentando mais de um cdon codificando o mesmo aminocido),
cada organismo utiliza um cdon preferencialmente em relao a outro.
Para que o gene de interesse seja inserido na bactria de interesse, necessria a
utilizao de vetores genticos. Existe um vetor mais recomendado dependendo do objetivo
desejado. Plasmdios so pequenos segmentos de DNA circulares que apresentam replicao
autnoma, dentro dos quais podem ser inseridas sequncias gnicas pequenas (at 10kb).
Bacterifagos j aceitam sequncias maiores (de 20 a 40 kb). Existem tambm os cosmdios,
fosmdios e cromossomos de levedura artificiais (YAC).
A insero de material gentico exgeno por meio de vetores de clonagem muito
importante na metagenmica, que a anlise genmica de comunidades microbianas
independentes de cultivo. Muitos microrganismos no conseguem se desenvolver bem em
meios de cultivo artificiais, mas ao mesmo tempo podem conter sequncias gnicas
importantes para o desenvolvimento de alguns processos. Para se fazer uso delas pode-se
fazer uma extrao do DNA ambiental, ou seja, coleta-se uma poro do meio ambiente e
extrai-se o DNA de todos os microrganismos ali presentes. Em seguida constri-se uma
biblioteca genmica de todos os segmentos de DNA obtidos, fazendo uma fragmentao das
sequncias, inserindo os pedaos em E. coli atravs de Plasmdios e selecionando aquelas
bactrias que sofreram transformao. Atravs de um screening seletivo das bactrias
recombinantes, possvel achar bactrias que realizam processos metablicos de interesse que
so realizados de forma mais eficiente ou que antes s podiam ser realizados no meio natural.

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CONCLUSO

A biotecnologia e sua vasta abrangncia so de grande importncia dentro da


sociedade. A medicina, a agricultura, o setor farmacutico, o setor de alimentos e os demais
setores em que atua cresceram muito nos ltimos anos, a tecnologia que a acompanha
tambm, est sempre frente com inovaes.
As indstrias hoje se beneficiam dos processos da biotecnologia, pelo fato de ter
aperfeioado e ajudado muito nos processos de fabricao de produtos de bens em grande
escala. Principalmente a indstria alimentcia, agricultura e no setor farmacutico.
O crescimento da tecnologia na fabricao e inovao dos biorreatores, o que permite
o manuseio e controle de recursos microbiolgico permitiu o aperfeioamento de tcnicas
usadas a milhes de anos atrs. Na agricultura, nos processos fermentativos para fabricao de
diversos alimentos e mais, de medicamentos.
As vantagens que a biotecnologia trouxe so muitas, temos alimentos mais nutritivos e
seguros, tecnologias que ajudam na conservao e preservao do meio ambiente, como
despoluente de rios, novos medicamentos, processos industriais menos poluentes. Tudo isso
fazem parte do nosso dia a dia.
J no so estudos nem perspectivas, a biotecnologia proporcionou isso. Faz parte da
nossa realidade, mas como ela avana rapidamente, sempre poderemos esperar mais.

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