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Sumrio
AULA
Introduo
CONTEDO
Apresentao e Disposies Gerais do Curso Experimental
Experimento 1
Experimento 2
Experimento 3
Experimento 4
Desnaturao
Precipitao
de
Protenas:
Atividade
Experimento 5
Experimento 6
APRESENTAO
OBJETIVOS E COMPETNCIAS
AULAS PRTICAS
aps esse tempo os alunos retardatrios no podero realizar as atividades do dia. A aula ser
encerrada no horrio pr-estabelecido, no havendo prorrogao para os alunos que no
tenham concludo os experimentos dentro do prazo previsto por motivos alheios prtica.
IMPORTANTE: No haver reposio de experimentos no caso de falta, ficando o aluno
prejudicado com o aprendizado daquele contedo.
AVALIAO
Modelo de Fluxograma
Abstract
The purpose of this didactic experiment is to make students of Biochemical Transformations
have the knowledge of correct use of micropipettes, pipetting modes applied to normal, volatile,
foaming and viscous liquids, precision limits, and pipette calibration tests.
Resumo
Este experimento didtico tem como proposta fazer com que os estudantes de Transformaes
Bioqumicas tenham conhecimento e desenvolvam a habilidade do uso correto de micropipetas, modos
de pipetagem dos lquidos normais, volteis, espumantes e viscosos, limites de preciso e testes da
calibrao de pipetas.
Introduo
A transferncia de volume exato de lquidos fundamental para vasta maioria dos
experimentos nas reas de bioqumica, biologia molecular, qumica, etc. De uma maneira geral, o
conhecimento sobre o pipetamento de lquidos, a compreenso de seus limites de preciso, bem como
o estudo de sua importncia na execuo reprodutvel de experimentos justifica a relevncia e
abordagem deste tema nesta aula do curso de Transformaes Bioqumicas da UFABC.
Fundamentao Terica
Pipetas automticas
Micropipetas so aparelhos designados para a transferncia de pequenos volumes
(entre 0,2 a 5000 l) com mxima preciso. A construo das micropipetas consiste em um
corpo anatmico de polipropileno (autoclavvel) equipado com um boto dispensador e um
ejetor de ponteiras no topo, um indicador de volume na lateral e uma haste para encaixe de
ponteiras descartveis na parte inferior. Existem vrios tipos de micropipetas:
- a poro imersa no lquido: por causa da compressibilidade do ar, existe uma medida ideal
da imerso da ponta da ponteira que minimiza tais imprecises (Tabela 1).
Tabela 1: Imerso ideal da ponta da ponteira em relao do tipo de ponteira - volume pipetado
- tenso lateral do lquido: os lquidos podem molhar a parede da ponteira, o que pode
resultar em perdas de volume ejetado (parte dele fica nas paredes). A minimizao dessa
impreciso consiste em aspirao e ejeo de lquido sem efetuar a transferncia (no mesmo
recipiente). Assim, as paredes j estaro molhadas e o volume da 2a aspirao ser transferido
por completo.
- volatilidade do lquido: para diminuir gotejamento do lquido durante a transferncia e
quando a natureza do lquido permite (no corrosivo, no infectante ou no radioativo), o
lquido pode ser aspirado/ejetado no mesmo recipiente vrias vezes at o ar em cima do
lquido ser trocado completamente por vapor do lquido.
Figura 2: Esquema de procedimento usado por a tcnica de pipetagem direta. Linhas pontilhadas representam
as posies de boto de esgotamento: Repouso (linha superior), 1o estgio (linha no meio) e 2o estgio (linha
inferior).
Figura 3: Esquema de procedimento usado por a tcnica de pipetagem reversa. Linhas pontilhadas representam
as posies de boto de esgotamento: Repouso (linha superior), 1o estgio (linha no meio) e 2o estgio (linha
inferior)
Teste de calibrao
Cada micropipeta calibrada para o valor indicado (valor terico) corresponder ao
valor efetivamente medido (valor real) na faixa da preciso de micropipeta (erro 2% para
pipetas P10, P20, P100, P200, P1000 e 5% para pipetas P2 e P5000). Porm, com tempo e
uso prolongado, os componentes mecnicos so sujeitos ao desgaste ou disfuno resultante
de uso inadequado.
Objetivo Geral
Materiais
gua destilada
Ponteiras
1 bquer de 50 mL
Papel absorvente
Procedimento
Para as pipetagens utilize a micropipeta de volume varivel disponvel para o seu grup
(P100, P200 ou P1000).
1) Determine a massa do bquer seco e anote. Sem retirar o bquer da balana, execute o
item 2. Evite manusear o bquer durante a pesagem para os resduos das mos
(gorduras, ceras, cosmticos) no interferirem com a massa real.
2) Pipete gua com volume mximo (nominal) da micropipeta no modo positivo para o
bquer e pese o bquer com o lquido. Anote o peso na tabela. Repita este passo
10 vezes.
3) Repita o item 1 e pipete gua com 50% do volume mximo (nominal) da micropipeta
no modo positivo para o bquer e pese o bquer com o lquido. Anote o peso na
tabela. Repita este passo 10 vezes.
4) Repita o item 1 e pipete gua com 40%, 60%, 80% e 100% do volume mximo
(nominal) da micropipeta no modo positivo, ajustando o volume sempre no sentido
horrio, para o bquer e pese o bquer com o lquido. Anote o peso na tabela.
5) Repita o item 4, ajustando o volume aleatoriamente, isto , 2 volumes (a sua escolha)
no sentido horrio e 2 volumes restantes no sentido anti-horrio.
Fazer grficos dos valores de peso de pipetagem de gua com volumes 100% e 50%
do volume nominal da micropipeta.
Abstract
Resumo
Introduo
O termo medida fotomtrica foi definido originalmente como o ato de medir a
intensidade da luz, independente do comprimento de onda (energia). A maioria dos
instrumentos tem, contudo, mecanismos para isolar uma faixa estreita de comprimentos de
onda do espectro. Os instrumentos que usam filtros para esse propsito so referidos como
fotmetros de filtro ou colormetros e os que utilizam prismas ou grades de difreo so
chamados de espectrofotmetros.
Comprimento de onda refere-se a distncia entre dois picos da propagao da luz que
ocorre na forma de onda, e essa distncia normente dada em nanmetros (nm). A radiao
eletromagntica inclui desde a energia radiante dos comprimentos de onda curtos dos raios
aos comprimentos de onda longos das ondas de rdio. O termo luz usado para descrever a
energia dos comprimentos de onda visveis ao olho humano e queles limtrofes. O olho
humano capaz de detectar comprimentos de onda entre 380 e 750 nm, entretanto
espectrofotmetros so capazes de medir tambm comprimentos de onda mais curtos (ultravioleta, UV) ou mais longos (infra-vermelho, IV) (Fig. 1).
Fig. 1. Espectro eletromagntico evidenciando a faixa dos comprimentos de onda visveis. (fonte:
http://www.arq.ufsc.br/labcon/arq5656/Curso_Iluminacao/07_cores/luz_01.htm e
http://www.wordpress.com/2009/03/teoriadacor_01.jpg).
Fig.
2.
Esquema
ptico
simplificado
de
um
espectrofotmetro.
(fonte:
http://www.ufpa.br/ccen/quimica/espect2.jpg)
Fundamentao Terica
Considere um feixe de luz incidente com intensidade Io passando por uma cubeta
contendo uma soluo de uma determinada substncia que absorve luz de certo comprimento
de onda (Fig. 3). A intensidade do feixe de luz transmitido (I) ser sempre menor que Io,
sendo que a transmitncia (T) definida como uma relao entre a intensidade da luz
transmitida e a intensidade da luz incidente (Lei de Beer).
T = I/Io
A = a.b.c
Onde A = abosrbncia, a = constante de proporcionalidade (absortividade ou
coeficiente de extino), b = caminho ptico (em centmetros) e c = concentrao. Como os
valores de A so adimensionais, a unidade de a so as recprocas daquelas para b e c. Quando
b = 1 cm (geralmente ) e c expresso em mol/L, a constante a pode ser chamada de
absortividade ou coeficiente de extino molar (, epsilon) e constante para dado
comprimento de onda, temperatura, pH, solvente, etc.
Assim, a proporcionalidade direta entre absorbncia e concentrao pode ser usada
para a determinao da absortividade de uma determinada substncia em determinada
condio experimental por meio de realizao de uma curva-padro. Para a construo dessa
curva, solues de concentraes conhecidas da substncia devem ser preparadas e as
Objetivo Geral
Introduzir os conceitos de espectrofotometria ao aluno utilizando como exemplo a
dosagem de protenas em uma amostra pelo mtodo do Biureto.
Objetivos especficos
1. Determinar o espectro de absoro UV-visvel do complexo formado entre os ons Cu2+
presentes no reagente de Biureto e as protenas.
2. Utilizar o comprimento de onda de absorbncia mxima para a elaborao de uma curvapadro e determinao da absortividade.
3. Calcular a concentrao protena de uma soluo de albumina.
Materiais
Reagente de Biureto
H2O destilada
espectrofotmetros
cubetas
2 pipetas volumtricas de 2 mL
pera
Procedimento
2. Para a elaborao da curva padro, numerar os nove tubos de ensaio, sendo um branco, oito
padres e uma amostra desconhecida. Realizar a reao de Biureto e determinar a absorbncia
no comprimento de onda onde a absoro mxima, conforme dados obtidos no item 1
acima. Usar os padres para o clculo da absortividade e, aps isso, usar a absortividade para
calcular a concentrao da amostra desconhecida.
Referncias Bibliogrficas
1. PUNGOR, E. A practical guide to instrumental analysis. Boca Raton: CRC Press, c1995.
384 p.
2. VOET, D; VOET, J.G. Bioqumica, 3 ed., Porto Alegre: Artmed, 2006.
3. ZAIA, D.A.M.; ZAIA, C.T.B.V.; LICHTIG, J. Determinao de protenas totais via
espectrofotometria: vantagens e desvantagens dos mtodos existentes. Qum. Nova 21(6):787793, 1998.
Abstract
The purpose of this experiment is to introduce structural aspects of the amino acids,
study their properties and structural differences, in order to learn some characteristics of
protein "building blocks" through the acid-base titrations. From the experimental point of
view, will just be used acid-base titration techniques, however, the aim is to illustrate several
characteristics of these compounds, in order to lead the students beyond to the discussion
presented in the practical class.
Resumo
Este experimento didtico tem como proposta fazer com que os estudantes de
Transformaes Bioqumicas tenham contato com os aspectos estruturais dos aminocidos,
estudem suas propriedades e diferenas estruturais e aprendam, por meio de titulao, as
propriedades cido-base das unidades monomricas que constituem as protenas. Do ponto de
vista experimental, sero utilizadas tcnicas simples de titulao cido-base, porm, permitir
que o estudante correlacione diversas caractersticas estruturais destes compostos com seu
comportamento qumico fixando conceitos tericos.
Introduo
Em qumica, um aminocido qualquer molcula que contm simultaneamente
grupos funcionais amina e cido carboxlico. Em bioqumica, este termo usado como termo
curto e geral para referir os -aminocidos, ou seja, cidos carboxlicos em que as funes
amino esto ligadas s posies (ou posio 2 em relao carboxila).
Na natureza existem cerca de 200-300 aminocidos, entretanto, somente 21 podem ser
metabolizados pelo organismo humano, sendo 20 aqueles que geralmente constituem as
protenas. Dentre estes, 8 so chamados aminocidos essenciais, isto , no podem ser
sintetizados pelo organismo humano, e precisam ser obtidos atravs de alimentos de origem
animal ou vegetal. Os outros 12 aminocidos que geralmente constituem as protenas so
produzidos por grande parte dos organismos superiores e so chamados no essenciais. H
um aminocido, a taurina, que est presente nos organismos superiores, mas no na
constituio das protenas.
Aminocidos essenciais (no sintetizados pelo organismo humano): isoleucina,
leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano e valina.
Aminocidos no-essenciais (sintetizados pelo organismo humano): arginina,
alanina, asparagina, cistena, glicina, glutamina, histidina, prolina, cido asprtico,
cido glutmico, serina e tirosina.
Contudo, esta classificao no pode ser tomada como algo geral para todos os
organismos superiores e em todas as etapas de seus ciclos de vida. Em crianas, por exemplo,
os aminocidos cistena, tirosina, histidina e arginina so considerados semi-essenciais uma
vez que as etapas metablicas para sintetizar estes aminocidos no esto completamente
desenvolvidas. Portanto, esta classificao de essencial e no-essencial no reflete a
importncia destes -aminocidos, uma vez que, todos os 20 -aminocidos so necessrios
na constituio de protenas e peptdeos, conseqentemente, de toda a matria viva.
O aminocido mais simples a glicina (Figura 1), e possui apenas um tomo de
hidrognio em sua cadeia lateral. A alanina vem a seguir, com um grupamento metila.
Cadeias laterais hidrocarbnicas maiores so encontradas na valina, leucina e isoleucina. A
prolina tambm tem uma cadeia lateral aliftica, mas difere dos outros membros do conjunto
dos vinte por sua cadeia lateral ser ligada tanto ao nitrognio quanto ao tomo de carbono .
Esta resultante estrutura cclica influencia fortemente a arquitetura das protenas. Trs
aminocidos com cadeias laterais aromticas fazem parte do conjunto dos vinte. A
fenilalanina contm um substituinte fenila ligado a um grupamento metileno. O anel
aromtico da tirosina contm uma hidroxila, o que torna a tirosina menos hidrofbica do que a
fenilalanina. O triptofano tem um anel indlico ligado a um grupamento metileno. Dois
aminocidos, serina e treonina , contm hidroxilas alifticas, o que as tornam muito mais
hidroflicas e reativas. Vamos agora aos aminocidos com cadeias laterais muito polares,
sendo altamente hidroflicos. A lisina e a arginina tm cargas positivas em pH neutro. A
histidina pode no ter carga ou t-la positiva, dependendo de seu ambiente local. As cadeias
laterais da arginina e da lisina so as mais longas no conjunto dos vinte.
O
OH
NH 2
L-treonina
L-valina
O
HO
OH
L-cistena
O
OH
H
N
O
OH
L-prolina
NH2
L-tirosina
O
OH
OH
NH 2
H 2N
NH 2
L-glutamina
NH
OH
OH
HO
H 2N
cido L-glutmico
NH2
L-aspargina
O
NH2
NH 2
L-serina
HO
OH
O
L-alanina
NH 2
cido L-asprtico
HO
O
OH
HS
NH2
NH 2
L-triptof ano
O
O
H 2N
OH
NH 2
HN
L-fenilalanina
O
OH
NH2
NH2
L-metionina
OH
OH
OH
OH
NH2
L-lisina
NH 2
L-leucina
O
OH
NH 2
L-isoleucina
H 2N
OH
NH2
OH
glicina
O
N
H
OH
NH 2
L-arginina
N
HN
OH
NH2
L-histidina
Existem dois aminocidos com cadeias laterais cidas, o cido asprtico e o cido
glutmico. Esses aminocidos so geralmente chamados de aspartato e glutamato para
salientar que suas cadeias laterais tm, quase sempre, cargas negativas no pH fisiolgico. A
glutamina e a asparagina so derivados no carregados de glutamato e aspartato que contm
uma amida terminal em vez de um carboxilato. Sete dos vinte aminocidos tm cadeias
laterais facilmente ionizveis. Um tomo de enxofre est presente nas cadeias laterais de dois
aminocidos. A cistena contm uma sulfidrila (-SH) e a metionina possui um tomo de
enxofre em uma ligao tioter (-S-CH3). Ambas as cadeias laterais que contm enxofre so
hidrofbicas. Deve-se destacar que a maioria destes aminocidos presentes em protenas
possui pelo menos um centro quiral definido com estereoqumica (S) com exceo da cistena
que (R) (notaes de Cahn-Ingold-Prelog) e da glicina que no possui centro quiral (Figura
1); ainda, todos os aminocidos comuns em protenas so freqentemente denominados Laminocidos, baseados na nomenclatura do gliceraldedo (configuraes de Fisher). Estas
caractersticas conferem a estes compostos uma grande diversidade qumica e estrutural,
permitindo que estes possam constituir uma gama enorme de diferentes protenas com
diferentes arranjos espaciais e as mais diversas funes (Figura 2).
Alguns autores relatam que para formar uma protena necessria uma cadeia com mais
de 70 aminocidos. J os peptdeos (fragmentos de protenas) podem ser formados por dois
ou mais aminocidos.
FUNDAMENTAO TERICA
O
R
O
NH3
O
R
O
OH (aq)
+ OH (aq)
NH 2
(aq)
+ H2O(l)
NH 2
Base
cido
Base
cido
O
R
O
OH (aq)
+ H3O (aq)
NH 2
Base
OH (aq)
+ H2O(l)
NH 3
cido
cido
Base
Titulao da ALANINA
Equivalentes de OH-
HA(aq) +
H2O(l)
H3O(aq)
A(aq)
pH = pKa + log
[A ]
[HA]
O
H3C
OH (aq)
+ H2O(l)
K a1
NH 3
O
H3C
(aq)
+ H3O(aq)
NH 3
O
H3C
O
O
NH 3
(aq)
H2O(l)
K a2
H3C
(aq)
+ H3O(aq)
NH 2
Objetivo
Determinar os valores de pKa de aminocidos por titulaes cido-base. Construir os
grficos e comparar os perfis das curvas, correlacionando os valores de pKa. Estudar as
estruturas dos aminocidos por meio de exerccios com as estruturas moleculares em 3
dimenses.
Materiais
pHmetro
1 pipetas volumtricas de 20 mL
1 pipetas de Pasteur
1 Bureta
1 bquer de 100 mL
Procedimento
EXERCCIO
carbonos e um dos oxignios da L-alanina, significando que h uma dupla ligao pois o
oxignio bivalente veja a posio circulada).
L-alanina
/ 3,9
/ 4,3
Referncias Bibliogrficas
4. VOET, D.; VOET, J.G. Bioqumica, 3 ed., Porto Alegre: Artmed, 2006.
Abstract
The first aim of this experiment is to demonstrate the enzyme activity present in
pineapple, these activities promote the degradation of collagen, additionally, the experiment
shows that the proteolytic activity can be destroyed boiling the pineapple juice, probably due
the protein denaturation process caused by the heating. The second aim of this experiment is
to demonstrate the protein precipitation by the addition of alcohol (coagulation) or ammonium
sulfate (salting out) in the collagen solution, showing the modification of protein solubility.
Resumo
O primeiro objetivo desse experimento demonstrar a atividade enzimtica presente
no abacaxi, essas atividades promovem a degradao do colgeno, adicionalmente o
experimento mostra que a atividade proteoltica pode ser destruda pela fervura do suco de
abacaxi, provavelmente devido ao processo de desnaturao protica causado pelo
aquecimento. O segundo objetivo do experimento mostrar a precipitao protica pela
adio de lcool (coagulao) ou sulfato de amnio (salting out) na soluo de colgeno,
mostrando a alterao da solubilidade protica.
Introduo
como
nas
biossintticas,
na
liberao
de
hormnios
peptdeos
Objetivo
Demonstrar a atividade proteoltica presente no suco de abacaxi, o efeito da
desnaturao protica por temperatura e o efeito da alterao de solubilidade protica, e
conseqente precipitao, provocados pela adio de lcool ou sal de amnio em soluo de
gelatina (colgeno).
Materiais
8 tubos de ensaio de 20 mL
1 tubo de ensaio de 30 mL
Estante para tubos de ensaio
Bquer de vidro de 100 mL (para aquecer gua)
Bquer de 25 ou 50 mL (para gua destilada)
Funil de vidro pequeno e papel de filtro, tesoura para cortar o papel de filtro
Recipiente com gelo
Almofariz e pistilo
Pipetadores automticos de 1,0 mL e ponteiras, ou pipetas de vidro de 5,0 mL
Faca ou estilete
Luvas de ltex
Basto de vidro (para dissolver a gelatina)
Placa aquecida ou banho-maria 100C
Banho-maria 60C
Banho-maria 30C
Balana
Reagentes
Soluo de sulfato de amnio 3 mol/L
Etanol absoluto ou comercial 99,3 INPM
Abacaxi maduro (1 fatia mdia)
Gelatina incolor e sem sabor
gua destilada
Procedimento
Preparo da gelatina
Pesar 2 g de gelatina incolor e sem sabor de qualquer marca comercialmente
disponvel e dissolver em 20 mL de gua destilada, em tudo de ensaio de 30 mL, aps
solubilizao a soluo de gelatina deve ser aquecida a 60C e mantida nessa temperatura at
o uso.
Ensaio
Primeiramente, deve-se preparar as amostras de abacaxi. Para isso, utilizando tubos de
ensaio de 20 mL, deve-se pipetar 2,0 mL de gua no tubo 1 e 2,0 mL do extrato de abacaxi
nos tubos 2, 3 e 4. O tubo 2 deve ser mantido temperatura ambiente, o tubo 3 aquecido
60C e o tubo 4 fervido por 5 minutos. Aps este tempo de tratamento de cada uma das
amostras, resfriar no gelo imediatamente por 1 minuto. Aps o resfriamento das amostras
fervidas adicionar em todos os tubos a soluo de gelatina. Homogneizar. Incubar as amostras
por 10 minutos a 37oC e em seguida resfriar todas as amostras no gelo por 7 minutos,
observar e anotar o resultado.
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
2,0 mL
Amostra Abacaxi
2,0 mL
2,0 mL
2,0 mL
2,0 mL
2,0 mL
2,0 mL
2,0 mL
gua
Gelatina
Tubo 2
Tubo 3
gua
2,0 mL
Sulfato de amnio
2,0 mL
Etanol Absoluto
2,0 mL
Gelatina
2,0 mL
2,0 mL
2,0 mL
Para discusso:
Referncias Bibliogrficas
URL: http://www.protease.ufrj.br/ProteaseApres.htm
Rawling, N.D., Barret, A. 1994. Families of serine peptidases. Meth. Enzymol. 244:18-61.
Rawling, N.D., Barret, A. 1994. Families of cysteine peptidases. Meth. Enzymol. 244:461486.
Rawling, N.D., Barret, A. 1994. Families of aspartic peptidases, and those of unknown
mechanism. Meth. Enzymol. 248:105-120.
Rawling, N.D., Barret, A. 1994. Families of metallopeptidases. Meth. Enzymol. 248:183-228.
Francisco Jr, W.E. et Francisco W. Protenas: hidrlise, precipitao e um tema para o ensino
de qumica. Qumica Nova na Escola, 24, 2006.
Abstract
The aim of this experiment is to introduce the students of the Federal University of
ABC to the procedures related to the extraction and characterization of lipids employing
soybean as a source of triacylglycerol, one type of biologic lipids. Furthermore the students
will learn the saponification concept through the alcaline hydrolysis of soybean
triacylglycerol and the physical and chemical properties of the soap obtained will be
exploited.
Resumo
O presente experimento visa introduo dos alunos de Bacharelado em Cincias e
Tecnologia, da Universidade Federal do ABC, s tcnicas de extrao e caracterizao de
lipdios utilizando soja como fonte de triacilgliceris, um dos tipos de lipdios biolgicos.
Adicionalmente, ser abordado o conceito de saponificao, demonstrado atravs da hidrlise
alcalina dos triacilgliceris obtidos da soja, e sero exploradas as propriedades fsicoqumicas dos sabes.
Introduo
Os lipdios so representados por um grupo de biomolculas baixa massa molecular
que apresentam estruturas qumicas bastante variadas e so praticamente insolveis em
gua. A diversidade de estruturas apresentadas pelos lipdios faz com que esses compostos
tenham a capacidade de exercer diversas funes biolgicas atuando desde componentes de
membranas celulares, isolantes trmicos, sinalizadores celulares, pigmentos e reservas de
energia (leos e gorduras). Adicionalmente, os prprios lipdios ou seus derivados, podem
tambm exercer funes de vitaminas e hormnios. As principais classes de compostos
pertencentes ao grupo dos lipdios so os triacilgliceris, glicerofosfolipdeos, esfingolipdios,
glicolipdios e esterides (Figura 1).
(A)
(B)
Grupo
carboxila
Insaturao
Cadeia
carbnica
(A)
(B)
Figura 2. Estrutura de cidos graxos. Os cidos graxos so compostos anfipticos formados por uma
longa cadeia carbnica apolar e um grupo carboxila polar. As cadeias carbnicas dos cidos graxos
no possuem ramificaes e podem ser saturadas, como no caso do cido esterico, (A) ou
insaturadas, como no caso do cido oleico (B).
Glicerol
Triacilglicerol
cidos graxos insaturados Cadeia carbnica possui uma ou mais ligaes duplas
entre tomos de carbono contendo o nmero mximo possvel de hidrognios.
Os lipdios anfipticos, tais como os cidos graxos, quando so adicionados a um meio
aquoso,
tendem
agregar-se,
organizando-se
espontaneamente
em
estruturas
menor energia livre para esses lipdios em gua e resultam da presena de duas regies com
solubilidades diferentes na mesma molcula.
O tipo de estrutura formada determinado pela geometria da molcula do lipdio
anfiptico (Figura 4). Lipdios com uma nica cadeia carbnica, como sabes de detergentes,
devido a forma cnica e afilada de suas molculas, formam, preferencialmente, micelas.
Nesta estrutura esfrica, as cadeias carbnicas organizam-se no interior, isolando-se da gua,
e os grupos polares posicionam-se na superfcie externa, interagindo com o solvente. A
formao de micelas uma etapa importante na digesto dos lipdios da dieta. A maioria dos
fosfolipdios e glicolipdios associam-se em uma camada dupla de molculas, chamada
bicamada lipdica. Esta estrutura permite uma agregao mais estvel das molculas desses
lipdios, que tm forma cilndrica pela presena de duas cadeias apolares.
As molculas de lipdios alinham-se lado a lado, compondo duas monocamadas e as
cadeias carbnicas das monocamadas agrupam-se frente a frente de modo a criar um domnio
hidrofbico no meio da bicamada; os grupos hidroflicos dispem-se na superfcie das duas
faces da bicamada, interagindo com a gua. Bicamadas lipdicas tendem a se converter em
estruturas fechadas, chamadas lipossomos, que so mais estveis porque no apresentam
caudas hidrofbicas expostas ao solvente, como acontece na periferia das bicamadas planas.
Lipossomos so, portanto, vesculas sintticas esfricas formadas por uma bicamada lipdica
contnua, que delimita uma cavidade interna preenchida por solvente.
Cavidade Aquosa
(A) Micela
(C) Lipossomo
Figura 4. Estruturas formadas por lipdios anfipticos em meio aquoso. (A) Micelas so formadas por
molculas de lipdios com uma nica cadeia carbnica, cadeias estas que se localizam no interior
dessas estruturas. (B) Bicamada lipdica uma estrutura bidimensional na qual as cadeias carbnicas
formam um domnio central hidrofbico, isolando-se da gua, exceto nas extremidades da bicamada;
a estrutura comumente formada por lipdios anfipticos com duas cadeias de hidrocarbonetos. (C)
Liposssomo uma vescula oca, resultante do fechamento de uma bicamada lipdica, dotada de uma
cavidade central preenchida por solvente.
1. Fundamentao Terica
Os lipdios representam um grupo de compostos com estrutura bastante variada.
Vrias classes de lipdios apresentam cidos graxos como componentes estruturais entre eles,
os fosfolipdeos, glicolipdeos e os triacilgliceris. Os lipdios podem ser caracterizados por
suas propriedades fsico-qumicas. Em geral, so praticamente insolveis em gua enquanto
apresentam alta solubilidade em solventes orgnicos como clorofrmio, ter, benzeno, mistura
de Folch (clorofrmio:metanol), entre outros.
Os triacilgliceris, que constituem o principal grupo de lipdios, podem ser
hidrolisados liberando cidos graxos e glicerol. Se esta hidrlise feita mediante aquecimento
em meio alcalino (hidrlise alcalina), formam-se sais de cidos graxos (sabes) e o processo
chamado saponificao (Figura 5). Este o princpio da fabricao dos sabes a partir de
gordura animal fervida em presena de NaOH ou KOH.
Triestearina
Glicerol
Estearato de Sdio
Pelcula lipdica
Grupo carboxilato
Cadeia carbnica
Micela
Sabo
Figura 6. Formao de micelas a partir das interaes entre sabes dispersos em soluo aquosa.
OLEATO DE POTSSIO
CIDO ACTICO
CIDO OLICO
(precipita)
ACETATO DE
POTSSIO
Figura 7. Precipitao de cidos graxos a partir da hidrlise cida de sabes. Em presena de cido
actico (cido fraco), cido olico (cido graxo) precipitado a partir da hidrlise cida do oleato de
potssio (sabo).
OLEATO DE POTSSIO
CLORETO DE
CLCIO
OLEATO DE CLCIO
(precipita)
CLORETO DE
POTSSIO
(A)
TEMPO
AGITAO
MISTURA
EMULSO
MISTURA
SABO
(B)
AGITAO
MICELA
MISTURA
EMULSO
Figura 9. Propriedade emulsificante dos sabes. Uma mistura de dois lquidos imiscveis
pode formar uma emulso atravs de agitao (fornecimento de energia). Contudo, as
emulses so instveis e tendem a tornar-se misturas com o passar do tempo (A). Os sabes
agem como surfactantes estabilizando a emulso formada atravs da formao de micelas
com leos ou solventes orgnicos. As cadeias hidrocarbnicas no-polares dos sabes
dissolvem-se no leo ou solvente orgnico enquanto os grupos inicos polares na fase
aquosa. As gotculas carregadas negativamente repelem-se mutuamente (B).
2. Objetivos da aula
A aula apresenta como objetivo a extrao de leo de soja, a saponificao do leo
extrado e a caracterizao das propriedades fsico-qumicas dos sabes. Para isso devero ser
realizados os seguintes procedimentos:
I- Extrao do leo de soja
Obteno de leo (triacilgliceris) a partir de sementes de soja.
Determinao da solubilidade do leo de soja em diferentes solventes;
Materiais
1. Reagentes
leo de soja
Soja moda e seca
gua destilada
Etanol
ter etlico
Acetona
Hidrxido de potssio
Hidrxido de sdio
Fenolftalena
cido clordrico
Cloreto de Sdio
2. Materiais e vidrarias
Liquidificador
Balana analtica
Banho de aquecimento fervente (
50C e 100C)
Estante para tubos de ensaio
Pina de madeira
Pipeta graduada de 10 mL
Pipetador automtico e ponteiras de
1000 L
Conta gotas ou pipeta de Pasteur
Esptula para pesagem
Proveta de 25 mL
Tubos de ensaio
Bquer de 100 mL
Bquer de 10 mL
Erlenmeyer de 125 mL
Papel de filtro
3. Procedimento experimental
TUBO
SOLVENTE
gua
etanol
ter etlico
acetona
SOLUBILIDADE
(+, ++, +++ ou ++++)
3.5. Ressaponificao.
1. Transferir 4 gotas da soluo obtida no item 3.4 para um tubo de ensaio contendo 5 mL de
gua destilada quente.
2. Adicionar, gota a gota, soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 1 mol.L-1 ate que seja
solubilizada a parte oleosa.
3. Agitar o tubo e verificar se h formao de espuma.
4. Explicar a reao qumica ocorrida, seu mecanismo de ao e indicar o produto formado.
1) Tabela apresentada no item 3.1 com os respectivos valores de solubilidade do leo de sojas
nos diferentes solventes utilizados.
2) Resultado do rendimento da reao de extrao de leo da soja. Esquematizar frmula
utilizada para o clculo.
3) Esquema da reao de saponificao do leo de soja em presena de KOH.
4) Esquematizar uma molcula de sabo e discutir suas propriedades fsico-qumicas:
- Mostrar a reao de formao de cidos graxos a partir de sabes em meio cidos.
- Mostrar a reao de precipitao de sabes em solues rica em sal.
- Esquematizar uma molcula de sabo e discutir suas propriedades fsico-qumicas.
- Esquematizar e caracterizar uma reao de ressaponificao.
Exerccios
1. Como podem ser explicadas as diferenas de solubilidade do leo de soja nos diferentes
solventes usados no experimento?
2. Qual a importncia da determinao da solubilidade do leo de soja em diferentes solventes
para a parte de extrao de leo vegetal a partir da soja?
3. Por que se utiliza etanol na reao de saponificao?
4. Se o sabo feito de leos e gorduras, como capaz de limpar superfcies engorduradas?
Como o sabo remove a sujeira?
Referncias Bibliogrficas
1. MARZZOCO, A.; TORRES, B. B. Bioqumica Bsica, 3 ed., Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2007.
2. ALBERTS, B.; JOHNSON, A.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K.; WALTER, P.
Molecular Biology of the Cell, 5 ed., Garland Science, New York, 2008.
3. LEHNINGER, ALBERT L.; NELSON, DAVID L.; COX, MICHAEL M. Princpios de
bioqumica, 4 ed., So Paulo: Sarvier, 2006.
4. NEPOMUCENO, M. F.; RUGGIERO, A. C. Manual de Bioqumica: Roteiros de Anlises
Bioqumicas Qualitativas e Quantitativas, 1 ed., Ribeiro Preto: Tecmedd, 2004.
5. PETKOWICZ, I.; DE OLIVEIRA, C. L. Bioqumica: Aulas Prticas, 7 Ed., Editora UFPR,
Paran, 2007.
Abstract
In this experiment the extraction and purification of the polysaccharide starch from
potatoes will be performed. After the microscopic characterization of the starch granules
morphology, biochemical reactions using iodide will be performed at several experimental
conditions. Besides, a qualitative analysis of reducing power of starch will be done in
comparison with glucose. The observed results will be discussed in terms of chemical
structure of the polymer. This practical application of the theoretical concepts learned inside
the classes about the spatial structure of starch is helpful for the improvement of biochemistry
understanding of UFABC students.
Resumo
Introduo
O amido um polissacardeo que tem como funo reserva energtica na forma de
carboidratos em plantas, que so consumidas por organismos heterotrficos como principal
fonte de glicose para gerao de ATP (LEHNINGER, NELSON, & COX, 2006). O amido
constitui de 50% a 65% do peso das sementes de cereais secos, e at 80% da substncia seca
dos tubrculos. Nos pases europeus e nos Estados Unidos, mais de 50% da produo de
amido destinada produo de hidrolisados, tais como glicose, maltose, dextrinas e
maltodextrinas. Esses hidrolisados, por suas propriedades especficas e seus diferentes usos
no setor alimentcio, constituem uma excelente valorizao da fcula (SUMERLY et al.,
2002).
Embora a distribuio do amido seja ampla no reino vegetal, poucas plantas o
produzem em grandes quantidades. Milho e outros cereais, como o arroz, o sorgo e o trigo,
contribuem significativamente para o suprimento mundial de amido. Nos Estados Unidos
mais de 95% do amido comercializado proveniente do milho. Em muitos pases, como por
exemplo, no Brasil, o amido tambm extrado da batata, dos rizomas da araruta e das razes
da mandioca.
Comercialmente, o amido usado na alimentao, fabricao de xaropes, preparo de
colas e gomas, com excipiente farmacutico, na fabricao de etanol, entre outros.
O amido ocorre em grnulos (ou gros) que tm estrias tpicas. Estas, aliadas ao
tamanho e forma dos grnulos, so especficas de cada espcie de planta e esta caracterstica
morfolgica pode servir de meio de identificao microscpica da origem botnica do amido
(Fig. 1).
AMILOSE
CH2OH
CH2OH
O
H
H
OH
OH
OH
OH
ligao
14
CH2OH
O
H
AMILOPECTINA
H
H
OH
OH
ligao
16
CH2
CH2OH
O
H
H
OH
OH
OH
OH
ligao
14
O amido tem estrutura qumica muito parecida com o glicognio, porm possui menos
ramificaes. Sua sntese em plantas tambm bastante semelhante sntese do glicognio
em animais, com a substituio da forma ativada da glicose de UDP-glicose por ADP-glicose,
com catlise pela enzima amido sintase. No processo de digesto, a hidrlise do amido
catalisada enzimaticamente pelas -amilases salivar e pancretica, que clivam as ligaes
glicosdicas 14 da amilose originando uma mistura de maltose, amilopectina e glicose, e
tambm as ligaes 14 da amilopectina, originando uma mistura de polissacardeos
denominados dextrinas.
Os monossacardeos so definidos como poli-hidroxialdedos ou poli-hidroxicetonas
ou compostos que os liberem por hidrlise. Apresentam a frmula geral [C(H2O)]n e
apresentam uma propriedade qumica muito importante em meio aquoso devido reatividade
ca carbonila: ciclizao em meio aquoso. Este processo de ciclizao leva a formao de um
carbono anomrico, sendo que a hidroxila formada ligada a esse carbono apresenta
propriedades redutoras.
Diversos reagentes so utilizados para a anlise de poder redutor em acares. Alguns
desses mtodos utilizam agentes oxidantes suaves, tais como ons frrico (Fe3+) e cprico
(Cu2+) em meio alcalino, fazendo deteco qualitativa. Mtodos quantitativos utilizam
tcnicas espectrofotomtricas, titulomtricas ou gravimtricas (SILVA et al., 2003).
Dissacardeos ligados pelas suas hidroxilas redutores como o caso da sacarose no
apresentam poder redutor, porm quando hidrolisados passam a exibir esta caracterstica.
Objetivo
MATERIAIS E MTODOS
1. Reagentes
- batatas in natura;
- gua destilada;
- lugol;
- reagente de Benedict;
- soluo de glicose 1,0 % (m/v);
- soluo de sacarose 1,0 % (m/v);
- suspenso de amido 1,0 % (m/v);
2. Materiais e Vidrarias
- liquidificador;
- bquer 200 mL;
- gaze;
- estufa de secagem;
- papel de filtro;
- bomba de vcuo;
- funil de Bchner;
- balana analtica;
3. Procedimento Experimental
3.3. Exame microscpico dos grnulos de amido. Adicionar 2 mL desta soluo em 2 tubos
de ensaio numerados 1 e 2. Ferver um deles at que a soluo fique opalescente, agitando
sempre. Pingar uma gota das solues dos tubos 1 e 2 um uma lmina, cobrir com uma
lamnula e observar em microscpio ptico. Pingar uma gota de lugol e observar novamente
em microscpio ptico.
3.4. Reao de caracterizao com iodo. Tomar 4 tubos de ensaio, sendo um deles com
tampa, e adicionar em dois deles (sendo um com tampa) 1 mL de amido 1 % (m/v) e nos
demais 1 mL de gua destilada e 1 mL de glicose 1 % (m/v). Em seguida, adicionar 1 gota da
soluo de lugol em cada um dos tubos de ensaio e observar o resultado. Aquecer
cuidadosamente o tubo tampado contendo amido (direto na chama) e observar o resultado.
Deixar o tubo resfriar e observar o resultado. Repetir o procedimento para o tubo sem tampa
contendo amido e anotar o resultado. ***CUIDADOS ESPECIAIS: 1. O tubo com tampa
deve estar com a mesma pouco (frouxa) e no muito apertada. 2. O aquecimento direto na
chama deve ser feito com auxlio da pina, com quantos ciclos forem necessrios (CADA
CICLO: no mximo 2 segundos na chama agitao fora da chama).
3.5. Pesquisa de poder redutor. Tomar 4 tubos de ensaio e seguir procedimento abaixo:
Tubos
Amostras (mL)
H2O (mL)
Benedict (mL)
1,5
1,0
1*
1,0
0,5
1,0
2*
1,0
0,5
1,0
3*
1,0
0,5
1,0
BIBLIOGRAFIA
1
SUMERLY, R.; ALVAREZ, H.; CEREDA, M.P.; VILPOUX, O.F. Tecnologia, usos e
potencialidades de tuberosas amilceas latino-americanas. Em: Culturas de tuberosas
amilceas latino-americanas. v. 3, p. 377-448, 2002.
3
SILVA, R.N.; MONTEIRO, V.N.; ALCANFOR, J.D.X.; ASSIS, E.M.; ASQUIERI, E.R.
Comparao de Mtodos para a Determinao de Acares Redutores e Totais em Mel. Cin.
Tecnol. Aliment., v. 23, n. 3, p. 337-341, 2003.