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ndice

NDICE
ABREVIATURAS......................................................................................................... v
RESUMO.................................................................................................................... ix
ABSTRACT ................................................................................................................ ix
INTRODUO ............................................................................................................ 1
CARATERIZAO DO LABORATRIO DE ESTGIO .............................................. 2
ATIVIDADES DESENVOLVIDAS ................................................................................ 4
I. HEMATOLOGIA ....................................................................................................... 5
1.1 Equipamentos e Metodologias Utilizadas .......................................................... 5
1.2 Hemograma ....................................................................................................... 6
1.2.1 Anemia ...................................................................................................... 10
1.2.2 Execuo e Observao do Esfregao Sanguneo de Sangue Perifrico. 11
1.2.3 Contagem de Reticulcitos ....................................................................... 13
1.2.4 Velocidade de Sedimentao (VS)............................................................ 13
1.3 Hemostase e Provas de Coagulao .............................................................. 14
1.4 Grupos Sanguneos ......................................................................................... 17
1.4.1 Sistema AB0 ............................................................................................. 17
1.4.2 Sistema Rh ................................................................................................ 18
1.5 Ferritina............................................................................................................ 19
1.6 Controlo de Qualidade ..................................................................................... 19
2. BIOQUMICA ......................................................................................................... 21
2.1 Hidratos de Carbono ........................................................................................ 22
2.1.1 Glicose ...................................................................................................... 22
2.1.2 HbA1c (Hemoglobina Glicosilada)............................................................. 23
2.2 Lpidos ............................................................................................................. 24
2.2.1 Colesterol Total ......................................................................................... 24
2.2.2 Colesterol-HDL .......................................................................................... 25
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2.2.3 Colesterol-LDL .......................................................................................... 26
2.2.4 Triglicridos .............................................................................................. 26
2.3 Compostos Nitrogenados Proteicos ................................................................ 27
2.3.1 Protenas Totais........................................................................................ 27
2.3.2 Protena C Reativa (PCR) ........................................................................ 28
2.3.3 Albumina Srica........................................................................................ 29
2.3.4 Microalbuminria ...................................................................................... 29
2.4 Compostos Nitrogenados No Proteicos ........................................................ 30
2.4.1 cido rico ................................................................................................ 30
2.4.2 Ureia ......................................................................................................... 31
2.4.3 Creatinina e Clearance da Creatinina ....................................................... 32
2.5 Enzimas .......................................................................................................... 33
2.5.1 AST /GOT ................................................................................................. 33
2.5.2 ALT /GPT .................................................................................................. 34
2.5.3 Fosfatase Alcalina (ALP) .......................................................................... 35
2.5.4 Gama-glutamil transferase (-GT) .............................................................. 36
2.5.5 Creatina Cinase (CK) ................................................................................ 37
2.5.6 LDH (Lactato Desidrogenase) .................................................................. 38
2.5.7 Amilase ..................................................................................................... 39
2.6 Bilirrubinas ...................................................................................................... 40
2.6.1 Bilirrubina Total ......................................................................................... 40
2.6.2 Bilirrubina Direta ....................................................................................... 41
2.6.3 Bilirrubina Indireta ..................................................................................... 42
2.7 Ies ................................................................................................................. 42
2.7.1 Sdio ........................................................................................................ 44
2.7.2 Potssio .................................................................................................... 45
2.7.3 Cloretos .................................................................................................... 46
2.7.4 Magnsio .................................................................................................. 46
ii

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2.7.5 Clcio ........................................................................................................ 47
2.7.6 Fsforo ...................................................................................................... 49
2.7.7 Ferro Srico .............................................................................................. 50
2.8 Controlo de Qualidade no Laboratrio de Bioqumica ..................................... 50
2.8.1 Calibrao ................................................................................................. 50
2.8.2 Controlo de Qualidade Interno .................................................................. 51
2.8.3 Controlo de Qualidade Externo ................................................................. 51
CONCLUSES ......................................................................................................... 53
BIBLIOGRAFIA ......................................................................................................... 55
ANEXOS ................................................................................................................... 57

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iii

Abreviaturas

ABREVIATURAS
Ac

Anticorpo

ADE(RDW)

Amplitude da Distribuio Eritrocitria

AEQ

Avaliao Externa da Qualidade

ALP

Fosfatase Alcalina

ALT

Alanina Aminotransferase Srica

AMP

2-amino-2-metil-1-propanol

AR

Artrite Reumatide

AST

Aspartato Aminotransferase srica

4-AAP

4-Aminoantipirina

Ca 2+

Clcio

CHGM

Concentrao da Hemoglobina Globular Mdia

CK

Creatina Cinase

Cl-

Cloro

CE

Colesterol Esterase

CNPG3

2-cloro-4-nitrofenil-alfa-D-maltrotriosido

CO

Colesterol Oxidase

CPNP

2-cloro-4-nitrofenol

CQI

Controlo de Qualidade Interna

CTFF

Capacidade de Fixao da Transferrina

DHBS

3,5-dicloro-2-hidroxibenzenossulfnico

DCHBS

3,5-dicloro-2-hidroxibenzenossulfonato

EDTA

cido Etilenodiaminotetracetico

ELFA

Enzyme Linked Fluorescent Assay

ELISA

Enzyme Linked Immunosorbent Assay

FA

Fosfatase Alcalina

Fl

Fentolitros

FR

Fator Reumatide

FFUC

Faculdade Farmcia da Universidade de Coimbra

FvW

Fator de von Wilebrand

GI

Gastrointestinal

GK

Glicerol Cinase

GLDH

Glutamato Desidrogenase
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Abreviaturas
GPO

Glicerolfosfato Oxidase

G6PDH

Glicose-6-fosfato Desidrogenase

HBA

cido Hidroxibenzico

Hb

Concentrao da Hemoglobina

HbA1c

Hemoglobina Glicosilada

HDL

Lipoprotenas de Alta Densidade

Hgb

Hemoglobina

HGM

Hemoglobina Globular Mdia

HK

Hexocinase

HPO

Peroxidase de Rbano

Ht

Hematcrito

IDL

Lipoprotenas de Densidade Intermdia

INR

International Normalized Ratio

INSA

Instituto Nacional de Sade Dr. Ricardo Jorge

ISI

ndice de Sensibilidade Internacional (Tromboplastina)

K+

Potssio

LAC

Laboratrio de Anlises Clnicas

LCR

Liquido Cefalorraquideo

LDL

Lipoprotenas de Baixa Densidade

LDH

Lactato Desidrogenase

MDH

Malato Desidrogenase

Mg2+

Magnsio

MPV

Volume Mdio das Plaquetas

4-MUP

4-metil umbeliferil fosfato

NAC

N-Acetil-L-Cistena

NAD

Beta nicotinamida Adenina

NADH

Beta -Nicotinamida Adenina Dinucletido

Na+

Sdio

Nm

Nanmetros

PCR

Protena-C-Reativa

pg

Picogramas

PTGO

Prova Oral de Tolerncia Glicose

PTH

Hormona Paratiride

RNA

cido Ribonucleico

RF

Fator Reumatide

vi

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Abreviaturas
Rpm

Rotaes por minuto

SASUC

Servios de Ao Social da Universidade de Coimbra

SD

Desvio Padro

SGQ

Sistema de Gesto de Qualidade

SIADH

Sndrome de Secreo Inapropriada de Hormona Antidiurtica

ST

Saturao da Transferrina

TFG

Taxa de Filtrao Glomerular

TP

Tempo de Protrombina

TTP

Tempo Parcial de Tromboplastina

UKNEQAS

United Kingdom National External Quality Assessment Service

VGM

Volume Globular Mdio

VIDAS

Vitek Immuno Diagnostic Assay System

VLDL

Very Low Density Lipoproteins (Lipoprotenas de densidade muito


baixa)

VS

Velocidade de Sedimentao

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vii

Resumo

RESUMO
Este relatrio de estgio do Mestrado de Anlises Clnicas pretende descrever todas
as atividades nas quais estive envolvida durante o perodo de estgio no Laboratrio
de Anlises Clnicas da Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra.
Desta forma, vo ser descritos os mtodos usados na execuo de anlises nas
reas do laboratrio em que mais trabalhei hematologia e bioqumica e a respetiva
interpretao de resultados.

ABSTRACT
This report for the Clinical Biology Master pretends to describe all the activities on
which I was involved during my practice in the Clinical Analyses Laboratory of FFUC.
In this way, there will be described all the methods used in the lab tests on the
laboratory areas I worked the most like Hematology and Biochemistry and the results
evaluation involved in this testing.

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

ix

Introduo

INTRODUO
Este relatrio visa descrever todas as atividades laboratoriais que desempenhei
como estagiria do Mestrado de Anlises Clnicas, durante o perodo de 27 de
Setembro de 2010 a 15 de Julho de 2011, sob a orientao da Dra. Maria Luclia
Silveira e da Dra. Ana Donato, no Laboratrio de Anlises Clnicas da Faculdade de
Farmcia da Universidade de Coimbra. O estgio decorreu todos os dias da
semana, de acordo com o horrio do laboratrio e dependendo do nmero de
amostras dirias. Este estgio de carter profissional contemplou de forma geral as
valncias: Hematologia, Bioqumica, Imunologia e Microbiologia.
As reas selecionadas para complementar os meus conhecimentos a nvel clnico
foram a Hematologia e a Bioqumica.
Primeiramente, fui integrada na parte organizacional do laboratrio, de seguida pela
fase de colheitas de amostras e posteriormente no trabalho laboratorial em contato
com as amostras do cliente/utente, as tcnicas para cada tipo de anlise e aparelhos
correspondentes. Na primeira fase laboratorial acima referida, a pr-analtica,
muito importante que o cliente/utente, a amostra e a solicitao de exames estejam
devidamente identificados. Tem que se ter em conta a correta preparao do doente
antes da colheita da amostra em causa, como o fato de estar em jejum, o estado
nutricional do utente/cliente, interferncia dos medicamentos, exerccio fsico. J na
fase de colheita da amostra biolgica essencial ter conhecimento dos erros e
variaes que podem ocorrer antes, durante e aps a obteno da mesma (
identificao incorreta da amostra, troca de material, contaminao da amostra, erro
por hemlise, homogeneizao).
As diversas variveis analticas devem ser muito bem controladas na realizao de
um exame laboratorial para assegurar que os resultados sejam precisos e exatos.

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Introduo

CARATERIZAO DO LABORATRIO DE ESTGIO


O laboratrio onde estagiei est incorporado na Faculdade de Farmcia da
Universidade de Coimbra. Este Laboratrio de Anlises Clnicas tem como Diretora
Tcnica a Dra. Maria Luclia Silveira Farmacutica Especialista em Anlises Clnicas
e como Diretora Tcnica Adjunta a Dra. Ana Donato Farmacutica Especialista em
Anlises Clnicas. No LAC tambm trabalham uma tcnica de diagnstico e
teraputica, duas enfermeiras e duas funcionrias administrativas.
O laboratrio est dividido em vrias reas: administrativa, colheitas e laboratrio.
Tambm tem um armazm e casas de banho.
As valncias disponveis so: Hematologia, Bioqumica, Endocrinologia, Imunologia
e Microbiologia.
O LAC envia amostras especficas dos clientes/utentes para o Laboratrio D. Diniz e
tem um setor de colheitas no SASUC.
O nmero mdio de amostras dirias do LAC cerca de 15.
O servio participa no Programa de Avaliao Externa da Qualidade do INSA, que
abrange as reas de Hematologia, Bioqumica, Imunologia, Endocrinologia e
Microbiologia.
O LAC tem vrios equipamentos automticos para processar as diversas anlises:
1) Analisador Coulter MaxM para a realizao de anlises hematolgicas;
utilizando o princpio Coulter e Tecnologia VCS;
2) Syncron CX4: autoanalisador, totalmente automatizado e controlado por
computador para a determinao quantitativa de numerosos componentes dos
fluidos biolgicos, nomeadamente do soro, plasma e urina, usado na Bioqumica;
3) VIDAS: analisador da Biomrieux, equipamento automatizado para anlises
imunolgicas utilizando a tecnologia ELFA que combina o mtodo ELISA com
uma leitura final em fluorescncia;
4) Analisador de VS: autoanalisador para ESR com deteo por fotodiodo e
apresentao de resultados em mm Westergreen;
2

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Introduo
5) Option Plus4: coagulmetro automtico; funcionamento por deteo tica do
cogulo com agitao magntica constante do meio reacional;
6) Spotlyte Na+/K+/Cl-: analisador automtico baseado em eltrodos seletivos de
ies.
7) Sistema Helena para eletroforese;
8) Combi Scan 100 (analisador de tiras de urina) para determinar parmetros
bioqumicos na urina.
Dispe ainda de uma centrfuga e microscpio tico.

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Atividades Desenvolvidas

ATIVIDADES DESENVOLVIDAS
Como j foi referido, estagiei e desenvolvi atividades nos diversos setores:
1) Imunologia: pesquisa do ttulo de anti-estreptolisina O, ac. anti-citomegalovrus
IgG/IgM, ac. anti-HVA, ac. anti-HBc, ac. anti-HBc IgM, ac. anti-HBe, ac. anti-HBs,
ac. anti-hepatite C, ac. anti-HIV, ac. anti-HVA IgM, ac. anti-tirideus, ac. antitoxoplasma IgG/IgM, ac. anti-vrus da rubeola IgG/IgM, ag. HBe, ag. HBs, fator
reumatoide/RA teste, reao de Widal, reao de Waller Rose, reao de VDRL.
2) Microbiologia: na urina - exame citobacteriolgico (direto e cultural com
identificao e eventual contagem de colnias e antibiograma).
3) Endocrinologia:

doseamento

do

estradiol,

hormona

folculo-estimulante,

hormona lteo-estimulante, hormona tireo-estimulante, tiroxina total ou livre,


triiodotironina total e frao livre, prolactina, testosterona e progesterona,
marcadores tumorais: Ca 19-9, Ca 125, Ca 15-3, alfa-fetoprotena, ag. carcinoembrionrio, ag. especfico da prstata- total e frao livre.
4) Hematologia e Bioqumica: as duas vertentes que mais estudei e que vou focar
mais frente, detalhadamente.

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Hematologia

I. HEMATOLOGIA
1.1 Equipamentos e Metodologias Utilizadas
a) Analisador Coulter MaxM para a realizao dos hemogramas:

Fig. 1 - Analisador Coulter MaxM

Funcionamento base do Coulter MaxM:


A tecnologia VCS o mecanismo pelo qual os analisadores de hematologia Coulter
fazem a diferenciao dos leuccitos em cinco tipos: Neutrfilos, Linfcitos,
Moncitos, Eosinfilos e Basfilos.

Fig. 2 Esquema de funcionamento do Coulter

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Hematologia
Para a contagem de partculas:
1) o nmero de impulsos eltricos correspondente ao nmero de partculas que
passam na abertura, amplitude dos impulsos proporcional ao volume das
partculas;
2) abertura na cmara de contagem de eritrcitos e plaquetas de 50m, na cmara
de contagem de leuccitos 10 m;
3) contagem em triplicado para cada tipo de partculas: eritrcitos, plaquetas e
leuccitos;
4) na cmara de contagem de eritrcitos: eritrcitos-partculas com volume superior
ou igual a 36 fl; plaquetas- partculas entre 2 e 20 fl;
5) na cmara de leuccitos- partculas com volume superior ou igual a 36 fl.
b) Aparelho automtico de VS para medir a Velocidade de Sedimentao.
c) Option Plus4 para realizar os Testes de Coagulao Sangunea: funcionamento
por deteo tica do cogulo com agitao magntica constante do meio reacional.

1.2 Hemograma
Este exame fornece-nos um conjunto de informaes hematolgicas quer
quantitativas quer qualitativas. um dos exames laboratoriais mais requisitado pelos
clnicos para screening e diagnstico de diversas patologias. No Laboratrio de
Anlises Clnicas da Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra utiliza-se
o Coulter MaxM para a contagem celular. No Coulter MaxM feito o controlo de
qualidade interno antes do processamento das amostras dos utentes, com trs
nveis de controlo: alto, mdio e baixo. Quando aparecem valores muito desfasados
no autoanalisador, comparamos esses mesmos valores com o histrico de anlises
do cliente/utente para termos a certeza se se trata de uma patologia.
Feita a anlise dos resultados emitidos pelo Coulter, se nos depararmos com uma
alterao

significativa

dos

valores

podemos

suspeitar

de

uma

patologia,

nomeadamente de uma anemia. Aps o hemograma faz-se um esfregao sanguneo


de sangue perifrico e por fim a contagem de reticulcitos.
6

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Hematologia
O sangue colhido por puno venosa para tubos que contm EDTA na proporo
de 1:9 com o sangue.
O EDTA um anticoagulante capaz de remover o clcio necessrio coagulao e
o mais indicado uma vez que no altera a morfologia celular.
a) Contagem de eritrcitos: o nmero total de eritrcitos por unidade de volume
de sangue total, expressa em 1012/L.
b) Concentrao da Hemoglobina (Hb): medida de quantidade de hemoglobina por
unidade de volume de sangue, expressa em g/dl.
c) Hematcrito (Ht): determina o volume sanguneo ocupado pela massa dos
eritrcitos, em percentagem ou L/L. A partir dos valores do hematcrito, da
contagem de eritrcitos e da concentrao de hemoglobina podemos calcular as
constantes eritrocitrias: VGM, HCM, CHCM e o RDW.
d) Volume globular mdio (VGM) que o volume mdio dos eritrcitos expresso
em fentolitros (fl): VGM =

. Os valores normais so de 8010 fl, os

valores acima de 96 indicam macrocitose e os valores inferiores a 80 fl indicam


microcitose. um parmetro muito til na classificao de anemias. Quando
estamos perante determinadas doenas em que se denota uma variao do
tamanho eritrocitrio, embora o tamanho mdio esteja inalterado, o VGM pode no
apresentar alteraes e observamos no esfregao sanguneo uma anisocitose, que
so glbulos vermelhos de vrios tamanhos e, por vezes, tambm com diferentes
formas chamado de poiquilocitose.
e) Hemoglobina corpuscular mdia (HCM) representa o contedo hemoglobnico
de um eritrcito expresso em picogramas (pg): HCM=

, os valores

normais variam entre 276 picogramas, os valores acima de 33 pg indicam


hipercromia e abaixo de 27 hipocromia (Princpios de Hematologia Clnica, 2007).
f) Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia (CHCM) a razo entre a
quantidade de hemoglobina e o volume total de eritrcitos. Assim, CHCM=

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

/
/

Hematologia
g) Amplitude da Distribuio Eritrocitria (RDW): o coeficiente da variao da
distribuio dos volumes eritrocitrios individuais, expresso em percentagem.
Quanto maior a percentagem de RDW maior a anisocitose.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)
Fig. 3 - Diferentes formas de apresentao das clulas sanguneas vermelhas, desde a forma normal
a) at ao estado hipocrmico.: (a) Erotcitos normais; (b) Micrcitos; (c) Anisocitose; (d)
Poiquilocitose; (e) Hipocromia

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Hematologia
Hemograma
Eritrcitos

Valores de referncia
4,52 5,9 x 1012 /L
4,1 5,1 x 1012 /L
14,0 17,5 mg/dL
12,0 15,0 mg/dL
0,42 0,5 L/L
0,36 0,45 L/L
Adultos 80 96 fl
Adultos 27 33 pg
Adultos 30 35 mg/dL
Adultos 4,4 11,3 x 109 /L
Adultos 40 75 % (2,0 7,0 x 109 /L)
Adultos 20 45 % (1,0 3,0 x 109 /L)
Adultos 2 10 % (0,2 1,0 x 109 /L)
Adultos 1 6 % (0,02 0,5 x 109 /L)
Adultos < 1% (0,02 0,1 x 109 /L)

Hemoglobina
Hematcrito
VGM
HCM
CHCM
Leuccitos
Neutrfilos
Linfcitos
Moncitos
Eosinfilos
Basfilos

Tabela I Valores de referncia relativos ao hemograma.

h) Contagem de Leuccitos: esta contagem representa o nmero de leuccitos por


unidade de volume de sangue em 109/L. A frmula leucocitria que completa o
hemograma pode ser estabelecida quer pelo contador automtico quer pela
observao ao microscpio de um esfregao sanguneo. A partir daqui faz-se a
interpretao analtica atravs dos nmeros absolutos.

(a)

(b)

(d)

(c)

(e)

Fig. 4 - Morfologia dos diferentes tipos de leuccitos: (a) Linfcito; (b)Moncitos; (c)Basfilos;
Neutrfilos; (e) Eosinfilos

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Hematologia
i) Contagem de plaquetas: Este um tipo de contagem direcionado para o nmero
de plaquetas por unidade de volume de sangue, cujos valores variam entre 150 a
400x109/L de sangue. Um valor < 100x109/ L considerado Trombocitopenia e um
valor > 500 x 109/L Trombocitose. Relativamente a esta ltima, de todo necessrio
um estudo cuidadoso, uma vez que um parmetro patologicamente importante,
pois o perigo de hemorragias pode condicionar a sobrevivncia do indivduo. Para o
estudo das plaquetas so necessrios testes complementares tais como provas de
agregao plaquetar e quantificao do Fator de Von Willebrand.

1.2.1 Anemia
Trata-se de um complexo de sinais e sintomas associados diminuio da
concentrao de hemoglobina e do hematcrito abaixo de valores definidos como
normais para pessoas normais, saudveis da mesma idade, sexo e raa, em
condies ambientais semelhantes. Os dados laboratoriais que permitem defini-las
so as constantes eritrocitrias, hemoglobina, leuccitos, plaquetas e RDW. As
anemias distinguem-se em trs grupos: microcticas, hipocrmicas (deficincias em
ferro, talassmias) apresentam os valores de VGM <80fl e HCM < 27pg. As anemias
normocticas, normocrmicas tm um VGM entre 80-95 fl e HCM > 26 pg (muitas
anemias

hemolticas).As

anemias

macrocticas

(megaloblsticas

ou

no

megaloblsticas) apresentam um VGM > 95 fl. Estas so distines claras mas,


contudo, existem caractersticas morfolgicas da anemia que no so assim to
evidentes, as alteraes dependem do estdio de evoluo do processo anmico.
Por exemplo, a anemia por doena crnica pode ser normoctica e normocrmica ou
se a escala de tempo for mais prolongada microctica e hipocrmica. Estes
problemas de diagnstico so geralmente resolvidos atravs do aspeto morfolgico
das clulas vermelhas; alteraes leucocitrias e plaquetrias podem provocar
vrias dvidas acerca da natureza das anemias. Nas anemias microcticas
hipocrmicas mede-se o ferro plasmtico, a capacidade total de ligao do ferro e a
ferritina. Nas anemias macrocticas o reconhecimento de alteraes morfolgicas
nas clulas vermelhas por excesso de lcool ou doena do fgado vital tal como
a crescente policromasia da reticulose. (Practical Haematology, 1995).

10

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Hematologia

1.2.2 Execuo e Observao do Esfregao Sanguneo de Sangue


Perifrico
Depois da interpretao dos resultados fornecidos pelo hemograma se suspeitarmos
que estamos na presena de alguma patologia executamos um esfregao sanguneo
de sangue perifrico. O esfregao feito fazendo deslizar uma gotcula de sangue
entre a lmina e a lamela. Posteriormente para se observarem muito bem os
elementos figurados do sangue e alteraes morfolgicas que possam aparecer
realizamos uma colorao de Maygrnwald-Giemsa.

Fig. 5 - Execuo de um esfregao sanguneo de sangue perifrico


Margarida Souto Pinto Proena Lucas

11

Hematologia

(a)

(b)

(c)
Fig. 6 - Observao microscpica de um esfregao sanguneo de sangue perifrico: (a) Zona
espessa de um esfregao, (b) Zona correta para observao, (c) Zona terminal de um esfregao.

12

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Hematologia

1.2.3 Contagem de Reticulcitos


Os reticulcitos so eritrcitos jovens que possuem RNA no seu citoplasma. So
clulas vermelhas mais jovens e percursoras das hemcias normais, cuja
percentagem, corrigida pelo hematcrito do paciente, nos d uma ideia da taxa de
produo medular dos eritrcitos (Princpios de Hematologia Clnica, 2007).
Esta contagem feita para avaliar a capacidade de produo de hemcias da
medula ssea e distinguir anemias relacionadas com perda sangunea ou destruio
excessiva de hemcias e anemias por diminuio da produo de hemcias. Para
monitorizar a resposta da medula ssea e a reposio da sua funo normal aps
quimioterapia, transplante de medula ssea ou tratamento de anemias.
Procedemos a este tipo de contagem celular quando o paciente apresenta uma
diminuio ou um aumento da contagem de hemcias, da hemoglobina, do
hematcrito, e tambm quando o mdico quer avaliar a funo da medula ssea.

Fig. 7 - Reticulcitos

1.2.4 Velocidade de Sedimentao (VS)


Amostra: plasma citratado em tubo especfico.
A velocidade de sedimentao determinada ao encher um tubo calibrado de
dimetro padro com sangue total anticoagulado e ao determinar a velocidade de
sedimentao dos eritrcitos durante um perodo de tempo especfico, geralmente
1h. Quando os eritrcitos se depositam no fundo do tubo, surge uma zona bastante
Margarida Souto Pinto Proena Lucas

13

Hematologia
grande de plasma transparente, que a rea medida. A maioria das alteraes na
VS causada por alteraes das protenas plasmticas, principalmente fibrinognio,
com menor contribuio das alfa-2-globulinas. A VS est quase sempre aumentada
em utentes com insuficincia renal crnica submetidos ou no a dilise. A VS possui
trs aplicaes principais para ajudar a detetar e estabelecer o diagnstico de
distrbios inflamatrios ou para excluir a possibilidade dessa patologias; como meio
de acompanhar a evoluo clnica ou no tratamento de doenas com componente
inflamatrio, como artrite reumatide ou glomerulonefrite aguda; para confirmar a
presena ou ausncia de doena oculta, por exemplo quando o doente est
totalmente assintomtico. Os tubos devem estar numa posio absolutamente
vertical; mesmo graus minmos de inclinao

possuem grande efeito sobre a

velocidade de sedimentao.
O mtodo de Westergren, no qual se baseia o Option Plus 4, tem a reputao de ser
imune aos efeitos da anemia, todavia existem estudos que contrariam esta hiptese.
Alm da anemia e das alteraes observadas no fibrinognio e nas alfa-2-globulinas,
outros fatores tambm afetam a VS. As alteraes nas protenas sricas que
modificam a viscosidade do plasma influenciam a sedimentao dos eritrcitos.
Certas doenas como, como a anemia falciforme e a policitemia, diminuem
falsamente a VS. Os valores normais esto relacionados com a idade.

1.3 Hemostase e Provas de Coagulao


A hemostase o conjunto de processos que permitem manter o sangue no estado
fluido, resultante da interao entre os fatores de coagulao, plaquetas sanguneas
e a capacidade de contrao ou distenso dos vasos sanguneos em equilbrio com
o sistema fibrinoltico. Para o controlo da hemorragia, quando h rompimento de um
pequeno vaso sanguneo, temos a Hemostase Primria (vasoconstrio e formao
de um agregado de plaquetas); de seguida, temos a Coagulao Sangunea onde
h formao de uma rede de fibrina, por ativao da cacata de coagulao. Por
ltimo, a Fibrinlise, onde ocorre a dissoluo do cogulo e um restabelecimento do
fluxo sanguneo. Mas quando se trata de leses maiores, o sistema hemosttico no
suficiente para solucionar a hemorragia.
14

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Hematologia
Classicamente, a cascata de coagulao divide-se em trs vias: a intrnseca,
extrnseca e a via comum. Na primeira, os elementos necessrios encontram se no
sangue e o processo inicia se quando h leso endotelial e consequente exposio
do colagnio. A via extrnseca ou via do fator VII considerada a principal via de
iniciao do processo de coagulao que a coagulao parte de uma leso tecidular
com libertao do fator III ou tromboplastina. As duas vias convergem a nvel do
fator X (via comum), com posterior ativao do fibrinognio em fibrina. Apesar de ter
trs vias que a caraterizam, a coagulao um processo dinmico, no devendo
ser, por isso, compartimentado (Correia- Pinto et al., 1996).
No que diz respeito s Provas de coagulao:
a) Tempo de Protrombina (TP)
O TP e utilizado em trs situaes: para monitorizar a terapia anticoagulante; como
parte de uma triagem geral para distrbios da cascata de coagulao e como prova
de funo heptica. O TP indica principalmente a existncia de defeitos no sistema
extrnseco da coagulao (protrombina e factores V, VII e X). Se o defeito no
fibrinognio for grave ele tambm ir produzir resultados anormais do TP, uma vez
que o teste depende de um mecanismo intato da fibrina para produzir o cogulo.
timo no controlo da teraputica com anticoagulantes orais (cumarnicos,
antagonistas da vitamina K). As clulas hepticas produzem certos fatores de
coagulao que necessitam da presena da vitamina K para a sua sntese numa
forma passvel de ser ativada. Os anticoagulantes cumarnicos inibem a utilizao de
vitamina K pelas clulas hepticas. Os fatores vitamina K-dependentes, situados por
ordem decrescente de sensibilidade cumarina, so: fator VII, fator IX, fator X e
protrombina. A anticoagulao obtida por estes anticoagulante e mais bem
monitorizada pelo TP, embora esta prova no seja afetada pelo fator IX (Ravel,
1995).
Para determinar o TP, no sentido de reduzir as diferenas entre os vrios tipos de
testes utilizados, procedeu-se padronizao das tromboplastinas, atribuindo-se a
cada uma o seu ISI. Assim, os utentes/clientes devem monitorizar a dose diria de
anticoagulante atravs do INR dado pela frmula: =

um INR de 2,5 (Princpios de Hematologia Clnica, 2007).


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, geralmente
15

Hematologia
Mtodo:
O tempo consumido, em segundos, at coagulao do plasma o Tempo de
Protrombina.
1 Aplicar esferas na cpula da amostra em duplicado.
2 Colocar 100 l de plasma em duplicado + 200 l de reagente (tromboplastina
clcica).
3 Ler INR.
Valores de referncia: 0,9-1,1.
Interpretao: O reagente tromboplstico tissular utilizado no teste no contm os
fatores V, VII e X, que devem ser fornecidos pelo plasma do paciente, juntamente
com a protrombina e o fibrinognio. Assim, a deficincia ou ausncia de qualquer um
desses fatores, resulta num prolongamento do Tempo de Protrombina. Admitindose que o fibrinognio esteja em concentrao normal, o prolongamento do Tempo de
Protrombina deve-se deficincia de alguns dos fatores do complexo da
Protrombina.O Tempo de Protrombina pode encontrar-se alongado nos seguintes
casos: presena de anticoagulantes circulantes, na deficincia de vitamina K e nas
hepatopatias de um modo geral.
b) Tempo Parcial de Tromboplastina (TTP)
Este o mtodo mais apropriado para investigar coagulopatias por deficincia de
um ou mais fatores de coagulao como a hemofilia, para controlar doentes
heparinizados, uma vez que tem a capacidade de avaliar as vias intrnseca e final
comum da cascata de coagulao. Avalia todos os fatores de coagulao exceto o
VII e o III, com sensibilidade mxima para os fatores VIII e IX.
Mtodo:
1 Aplicar esferas na cpula reagente/amostra em duplicado
2 Colocar 100 L de reagente (Triniclot TTP) com as particulas de slica que
formam a superfcie de contato + fosfolpidos (libertados na hemostase) e 100 l da
amostra
3 Incubar em 3 min.
4 Aplicar 100 l de cloreto de clcio
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Hematologia
Notas: aplicado o reagente + amostra para desencadear a cascata de coagulao.
R=

, (R=0,8 a 1,2).

Valores de referncia: 25-35 segundos


Interpretao: O TTPA uma prova sensvel para avaliar alteraes no processo
da coagulao.O alongamento do TTPA, indicativo de alterao dos fatores V, VII,
IX, X, II e I, ou ainda, de quando existirem anticoagulantes circulantes.

1.4 Grupos Sanguneos


O sangue de cada indivduo classificado em grupos de acordo com a presena de
antignios especficos nos eritrcitos. O conhecimento do grupo sanguneo de um
doente e de uma determinada unidade de sangue essencial para a realizao de
transfuses sanguneas com um maior grau de segurana. No trabalho laboratorial
de rotina fiz as determinaes dos grupos AB0 e Rh.

1.4.1 Sistema AB0


O sistema de grupo sanguneo AB0 um exemplo clssico de aglutinognios e seus
isoanticorpos correspondentes. Existem trs desses antignios: A, B e 0, cujos
genes se localizam num locus em cada cromossoma de um par homlogo. Os
antignio A e B so antignios relativamente fortes e, do ponto de vista sorolgico
comportam-se como genes dominantes, enquanto o antignio 0 no detetado por
soros de tipagem comercial e, portanto, comporta-se sorologicamente como um
gene recessivo. O grupo sanguneo 0 diagnosticado pela ausncia de reao para
os antignio A ou B, de modo que o grupo sanguneo 0implica a presena de
antignio 0em ambos os cromossomas, em vez de apenas um. Esta situao resulta
na possibilidade de quatro fentipos principais A, B, AB e 0, visto que A e B so
dominantes em relao a 0. Alm disso quando os eritrcitos do indivduo possuem
antignio A ou B, os isoanticorpos correspondentes anti-A ou Aanti-B esto ausentes
no soro. Por outro lado, se o indivduo carece de de antignios A ou B, o soro
contm o isoanticorpo contra o isoantignio ausente. O antignio 0 to fraco, que
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17

Hematologia
para finalidades prticas ele considerado no antignio. Por conseguinte o
indivduo AA ou A0 ter isoanticorpos anti-B no soro; o indivduo 00 ter
isoanticorpos anti-A e anti-B, e assim por diante.(Ravel,1995)
Amostra: sangue total (EDTA K3)
Mtodo em lmina: Pesquisa dos antignios nos eritrcitos do utente/paciente
Para a tipificao AB0 usam-se soros comercializados que contm anticorpos
conhecidos dirigidos contra os respetivos antignios, que existem superfcie dos
eritrcitos: soro anti-A, soro anti-B e anti-AB. A leitura final feita pela tcnica de
aglutinao.

1.4.2 Sistema Rh
De acordo com Wiener, o grupo Rh determinado por genes isolados, contendo
cada cromossoma um par desses genes. Na maioria das situaes, cada gene deve
determinar supostamente um antignio contra o qual pode ser produzido um
anticorpo especfico. Na teoria do sistema Rh de Wiener, cada gene controla na
verdade um antignio. Todavia cada um desses antignios d origem a vrios
fatores sanguneos diferentes, sendo os anticorpos dirigidos contra esses fatores,
que so os componentes sorolgicos do sistema Rh (Ravel, 1995).
Amostra: sangue total (EDTA K3)
Mtodo: A tcnica usada igual ao Sistema AB0, ou seja, a aglutinao. O
procedimento o mesmo e realizado ao mesmo tempo do AB0, sendo que a
aglutinao corresponde a Rh positivo e a sua ausncia Rh negativo.

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Hematologia

1.5 Ferritina
A ferritina uma protena de elevado peso molecular que contm ferro e que
funciona como uma reserva de ferro no nosso organismo. encontrada
fundamentalmente nas clulas da medula ssea, bao e fgado, onde armazena o
ferro em excesso. A ferritina constitui uma medida mais sensvel, especfica e fivel
para a determinao precoce do estado de depleo de ferro.
Amostra: soro
Mtodo: Imunoensaio no VIDAS 30. Para detetar os anticorpos, fixa-se o antignio
nas paredes do cone. Se a amostra tiver o anticorpo pesquisado,4-metil umbeliferil
fosfato hidrolisado em Umbeliferona (ELISA indireta). Para detetar as
imunoglobulinas M, a IgM pesquisada capturada pelos anti-IgM fixados nas
paredes do cone. A presena de IgM revelada pelo Ag estabilizado meio lquido. A
deteo de antignios (baterianos, virais, proteicos) o anticorpo fixado nas paredes
do cone. Para estes trs princpios, a fluorescncia medida diretamente
proporcional quantidade de anticorpos ou de antignios presentes na amostra.
Para calibrar este aparelho automatizado temos que introduzir um carto com toda a
informao necessria para reconhecer o kit, recalibrar de 14 em 14 dias.
Valores de referncia:
Homens: 21,8 a 274 ng/ml
Mulheres: 4,6 a 204 ng/ml

1.6 Controlo de Qualidade


O sistema de controlo de qualidade minimiza os erros analticos no laboratrio, com
a finalidade de obter resultados fiveis e seguros. Temos assim um sistema de
controlo de qualidade interno e externo O controlo interno uma anlise diria de
amostras baseada nos valores dos analitos conhecidos para avaliar a preciso dos
ensaios. Assim, podemos avaliar o funcionamento eficiente das tcnicas
laboratoriais fornecendo resultados vlidos que posteriormente contribuiro para um
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19

Hematologia
bom

diagnstico

clnico.

Este

parmetro

tem

como

objetivos

garantir

reprodutibilidade (preciso),verificar a calibrao dos analitos e indicar o momento


certo para promover aes corretivas quando surgir uma no conformidade. Todos
os documentos referentes ao controlo da qualidade devem ser arquivados para
estarem sempre disponveis a todos os elementos integrantes do LAC, de acordo
com as premissas das Boas Prticas de Laboratrio
Clnico.
Temos tambm o controlo de qualidade efetuados pelo Programa Nacional de
Avaliao Externa da Qualidade em Hematologia do Instituto Nacional de Sade Dr.
Ricardo Jorge. Este tipo de controlo interlaboratorial visa comparar a exatido dos
exames do laboratrio com a de outros participantes, tendo em conta anlises de
alquotas do mesmo material, a partir de concentraes desconhecidas fornecidas
pelo controlo de qualidade externo. Com a participao do INSA no controlo externo
torna-se possvel assegurar resultados finais muito prximos do valor real (exatido)
dentro de uma variabilidade analtica permitida. No podemos descurar a
importncia do material de controlo, homogneo e estvel e os analitos presentes
devem ser estveis durante o prazo de validade tanto na forma liofilizada quanto
aps dissoluo.

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Bioqumica

2. BIOQUMICA
No setor de Bioqumica do LAC, os principais equipamentos automatizados no
sentido de assegurar um resultado vlido so:
a) O autoanalisador Syncron CX4
b) O Spotlyte Na +/K+/Clc) Combi Scan 100 (Analisador de tiras da urina)
d) Aparelho para eletroforese da Helena Biosciences

FIg. 8 Autonalisador Syncron CX4

O autoanalisador Syncron CX4 executa todos os passos que eram usados


manualmente nos tempos mais remotos.
Primeiramente, procede-se calibrao, depois feito o controlo e por ltimo
coloca-se a amostra a correr no carrossel, fazendo uso de cdigos de barra para
facilitar todo o processo. Para a leitura final so usados fotmetros com quatro filtros
de comprimentos de onda. Este um autoanalisador que funciona pela tcnica de
quimioluminescncia nas amostras de soro; urina (urina 24h), sangue total (HbA1c).
No Syncron CX4 existem vrios tipos de tcnicas consoante os requisitos dos
parmetros a analisar. Tcnicas estas como a colorimtrica direta para as protenas
totais, clcio, ferro, entre outros; mtodos enzimticos colorimtricos em que a
intensidade de cor proporcional s enzimas mas no direta porque h uma
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21

Bioqumica
interferncia de enzimas (ex.: na glicose, a glicose oxidase); cinticas de ordem
zero para todos os enzimas e o princpio de turbidimetria que doseia a PCR, o Fator
Reumatoide, a Microalbuminria e a HbA1c, exibem uma maior sensibilidade para
traar as curvas de calibrao.

2.1 Hidratos de Carbono


2.1.1 Glicose
Resumo do teste: a determinao deste monossacardeo no sangue o diagnstico
mais frequentemente utilizado para auxiliar no diagnstico da diabetes. O
doseamento de glucose feito num conjunto especfico de provas em jejum; em
jejum e ps-prandial; Prova de Tolerncia oral glucose e curva de glicmia.
As alteraes no metabolismo da glucose correspondem, na maioria das vezes, a
uma hiperglicemia (> 106 mg/dL) e com menor frequncia, a hipoglicmia ( <74
mg/dL). Pode ocorrer tambm uma tolerncia diminuda glucose; Diabetes Mellitus
1 e 2 e ainda Diabetes Gestacional. Em jejum, pode estar relacionada com diversas
patologias como disfuno heptica, deficincia hormonal; Insuficincia Renal
Crnica, septicmia e muitas outras. A prova ps-prandial, utilizada mas pouco
especfica pois depende de muitas variveis como idade, peso e dieta de um
indivduo. A PTGO consiste na determinao da glicmia em jejum e 2horas aps a
ingesto de 75 gramas de glicose sendo o teste mais usado atualmente como
auxiliar de diagnstico da diabetes.
Metodologia: A hexocinase catalisa a transferncia de um grupo fosfato do ATP
para a glicose, formando ADP e glucose-6-fosfato. A G-6-P oxidada a 6fosfogluconato com a reduo de NAD a NADH, pela ao da G-6-PDH. (Abbot
Diagnostics, 2009)
Amostra: Soro
Valores de referncia: 70-105 mg/dL
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Bioqumica

2.1.2 HbA1c (Hemoglobina Glicosilada)


A determinao da Hemoglobina aceite como um mtodo de controlo da glicose a
longo prazo em doentes com diabetes mellitus, pois fornece informao importante
para a monitorizao teraputica durante o tratamento desta patologia. O tratamento
da doena a longo prazo mostra a importncia do controlo dos nveis sanguneos de
glicose na preveno das complicaes agudas da cetose e da hiperglicmia. A
hemoglobina ao ser analisada cromatograficamente mostra ser fracionada em
HbA1a, HbA1b e HbA1c, sendo esta ltima a mais abundante. O processo de
converso de hemoglobina A em hemoglobina A1c depende da concentrao
sangunea da glicose. Dado que o tempo de vida mdia de um eritrcito de 120
dias, a determinao da hemoglobina A1c pode refletir a concentrao sangunea
mdia diria de glicose ao longo dos dois meses e fornece indicao muito mais
fivel do controlo da glicmia que as determinaes de glicose no sangue ou na
urina. Nveis elevados de HbA1c indicam a necessidade de um tratamento mais
agressivo da glicmia (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha de
informao qumica, 2010).
Amostra: Sangue total (colhida em tubos com EDTA)
Metodologia: 1ml de reagente hemolisante adicionado a 25 ul de sangue total. De
seguida, calcula-se a % de HbA1c no Syncron CX4. O reagente de HbA1c
utilizado para determinar a concentrao total de hemoglobina por colorimetria. O
sistema SYNCRON CX distribui automaticamente a amostra e os volumes de
reagente apropriados na cuvete. monitorizada a variao da absorvncia a 410
nanmetros. A variao de absorvncia diretamente proporcional concentrao
total de hemoglobina na amostra e utilizada pelo Sistema para calcular e exprimir a
concentrao de hemoglobina total.
O reagente A1c utilizado para medir a concentrao de HbA1c atravs de um
mtodo de imunoinibio turbidimtrica. Durante a reao os anticorpos da
hemoglobina A1c combinam-se com a hemoglobina A1c da amostra para formarem
complexos antignio-anticorpo solveis.
Valores de referncia: 4,6%- 6,2%
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Bioqumica

2.2 Lpidos
2.2.1 Colesterol Total
O colesterol sintetizado de modo permanente em todo o organismo e um
componente essencial das membranas celulares e lipoprotenas. Endogenamente
sintetizado pelo fgado e outros tecidos, sendo uma pequena parte derivado da
dieta. igualmente, um percursor da sntese de hormonas esterides, dos cidos
biliares e da vitamina D.
Clinicamente: As determinaes de colesterol so utilizadas no diagnstico e
tratamento de doenas aterosclerticas das artrias coronrias. As determinaes
de colesterol so tambm utilizadas no diagnstico de doenas metablicas que
envolvem lpidos e lipoprotenas. As concentraes totais de colesterol srico
dependem de muitos fatores como a idade, sexo, dieta, atividade fsica, doenas
hepticas e outras doenas metablicas (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON
CX- ficha de informao qumica, 2010).
Amostra: Soro humano, em jejum.
Metodologia: O reagente CHOL usado para medir a concentrao de colesterol
atravs de um mtodo de ponto final de tempo fixo. Na reao, a colesterol esterase
(CE) hidrolisa steres de colesterol a colesterol livre e cidos gordos. O colesterol
livre oxidado a colestenona-3 e perxido de hidrognio pela colesterol oxidase
(CO). A peroxidase catalisa a reao do perxido de hidrognio com a 4aminoantipirina (4-AAP) e fenol, para produzir um produto corado de quinona-imina.
Ter em ateno as interferncias tais como: A hemlise e a hiperbilirrubinmia.
Valores de referncia: (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha de
informao qumica, 2010).
a) Baixo risco: <200 mg/dL
b) Risco limite : 201 a 239 mg/dL
c) Risco elevado : igual ou > 240 mg/dL
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Bioqumica

2.2.2 Colesterol-HDL
O HDL o responsvel pelo transporte do colesterol dos tecidos perifricos para o
fgado, considerado um protetor cardiovascular. Assim, dentro do intervalo de
referncia, os valores elevados so considerados benficos para o organismo.
A determinao dos nveis sricos de colesterol HDL constitui um valioso parmetro
para a identificao de doentes de alto risco de doena cardaca coronria. Tudo isto
dependente das diversas classes destas lipoprotenas: quilomicrons, VLDL, LDL e
HDL.
Clinicamente: O colesterol HDL est inversamente relacionado com o risco de
aparecimento de doenas das artrias coronrias. Uma baixa relao colesterol
HDL/LDL est diretamente relacionada com o risco de aparecimento de doenas das
artrias coronrias. Um nvel elevado de colesterol HDL est associado ao sndrome
da longevidade (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha de informao
qumica, 2010).
Metodologia: um ensaio homogneo que no requer quaisquer passos off-line de
pr-tratamento ou centrifugao. O mtodo depende de um nico detergente que
solubiliza apenas as partculas de lipoprotenas-HDL e liberta colesterol-HDL, o qual
reage com a colesterol esterase e a colesterol oxidase na presena de substncias
cromognicas, produzindo um produto corado. O mesmo detergente inibe tambm a
reao das enzimas de colesterol com as lipoprotenas- LDL, VLDL e quilomicrons.
Um polianio contido no reagente aumenta a seletividade para o ensaio de
colesterol-HDL complexando as lipoprotenas-LDL, VLDL e quilomicrons.
Amostra e valores de referncia: Soro/plasma
Baixo risco cardiovascular > ou igual a 60 mg/dl
Elevado risco cardiovascular < 40 mg/dl

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Bioqumica

2.2.3 Colesterol-LDL
As lipoprotenas de baixa densidade so os principais transportadores de steres de
colesterol do fgado aos tecidos perifricos. As LDL so conhecidas como o mau
colesterol, pois esto implicadas na formao das placas de aterosclerose e
consequente doena cardiovascular. Esta determinao feita atravs da frmula
de Friedwald: = (

+ ),

utilizada sempre que o valor de triglicridos no ultrapassar os 400 mg/dl, para se


obter um resultado vlido. O colesterol VLDL corresponde a um quinto da
concentrao de triglicridos (Tietz, 2009).

2.2.4 Triglicridos
Na alimentao humana, os triglicridos so os steres de glicerol com uma maior
prevalncia, constituindo 95% de reservas tecidulares lipdicas. Aps a absoro no
intestino, os triglicridos so ressintetizados nas clulas epiteliais intestinais e
combinados com colesterol e apolipoproteina B formam quilomicrons.
O ensaio de cor enzimtico para a determinao quantitativa de triglicridos feito
no soro e plasma humanos.
Clinicamente: A avaliao dos triglicerdeos deve ser feita em conjunto com o
colesterol e as outras lipoprotenas, pois a integrao de todos estes parmetros
que se torna importante no diagnstico, tratamento e preveno de doenas
cardiovasculares.
Existem ainda doenas genticas, como a hipertrigliceridmia familiar, em que os
triglicerdeos chegam a atingir 10x o seu valor normal, e que, por isso, devem ser
monitorizados frequentemente.
A determinao de triglicridos so utilizadas no diagnstico e tratamento de
doentes com diabetes mellitus, nefrose, obstruo heptica e de outras doenas

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Bioqumica
relacionadas com o metabolismo dos lpidos, bem como de diversas patologias
endcrinas.
Metodologia: O reagente para triglicridos GPO utilizado para determinar a
concentrao de triglicridos atravs de um mtodo de ponto final de tempo fixo. Os
triglicridos presentes na amostra so hidrolisados a glicerol e cidos gordos livres
por ao da lipase. Uma sequncia de trs passos enzimticos acoplados que
utilizam glicerol cinase (GK), glicerolfosfato oxidase (GPO) e peroxidase de rbano
(HPO)

causa

acoplamento

oxidativo

do

cido

3,5-dicloro-2-

hidroxibenzenossulfnico (DHBS) com a 4-aminoantipirina para formar um produto


corado de quinonaimina.
Valores de referncia (Risco cardiovascular):
a) Normal <150 mg/dl
b) Valor limitrofe elevado 150 a 199 mg/dl
c) Elevado 200 a 500 mg/dl
d) Muito elevado > 500 mg/dl

2.3 Compostos Nitrogenados Proteicos


2.3.1 Protenas Totais
Clinicamente: O doseamento das protenas totais utilizado no diagnstico e no
tratamento de diversas doenas que envolvem o fgado, os rins ou a medula ssea,
bem como perturbaes sseas e nutricionais.
As protenas totais so tambm doseadas e aparecem aumentadas, diminudas ou
normais consoante a patologia em causa. Podemos ter sndromas nefrticos,
infees agudas, cirroses hepticas, gamopatias, anemia por deficincia de ferro,
entre outras. As protenas totais no soro aparecem diminudas em relao urina
onde surgem sempre mais aumentadas.
Amostra: Soro
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Bioqumica
Metodologia: Qumico baseado na reao do biureto. O reagente TP utilizado
para medir a concentrao de protena total atravs de um mtodo de biureto de
ponto final temporizado. Durante a reao, as ligaes peptdicas na amostra de
protena ligam-se aos ies cpricos num meio alcalino para formar complexos de
pptidos/cobre coloridos.
Valores de referncia:
Adultos: 6,4 a 8,3 g/dL

2.3.2 Protena C Reativa (PCR)


A PCR uma glicoprotena produzida durante a inflamao aguda ou a destruio
dos tecidos. uma das protenas de fase aguda, produzida pelo fgado, que
aumenta significativamente em resposta a estmulos inflamatrios. utilizada como
auxiliar de diagnstico, controlo teraputico e acompanhamento de diversas
patologias, uma vez que dos mais sensveis e precoces indicadores de processos
inflamatrios resultantes de infees, carcinomas e necrose de tecidos.
A deteo de nveis de PCR muito mais baixos pode indicar um risco acrescido de
doena coronria em doentes assintomticos.
Clinicamente: As determinaes da protena-C-reativa tm utilidade na avaliao
clnica dos estados de stress, traumatismo, infees, inflamaes e intervenes
cirrgicas.
Amostra: Soro
Metodologia: S reagente de CRP utilizado para determinar a concentrao de
protena-c-reativa por turbidimetria. Durante a reao a protena-c-reativa combinase com um anticorpo especfico para formar complexos insolveis de antignioanticorpo.
Valores de referncia: < 1,0 mg/dL

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Bioqumica

2.3.3 Albumina Srica


Esta a protena principal do soro em pessoas normais. Nveis muito elevados da
albumina resultam da desidratao, enquanto que nveis mais baixos desta protena
ocorrem em diversas patologias como doena renal, heptica, m absoro,
desnutrio, queimaduras graves, infees e cancro.
Clinicamente: As determinaes de albumina so utilizadas no tratamento de
muitas doenas que afetam sobretudo os rins e/ou o fgado.
Metodologia: O reagente ALB utilizado para medir a concentrao de albumina
atravs de um mtodo de ponto final temporizado. Durante a reao, a albumina
combina-se com o bromocresol prpura (BCP) para formar o produto final.
Amostra : Soro
Intervalos de referncia: 3,5- 5,0 g/dL

2.3.4 Microalbuminria
O rim o primeiro rgo em falncia, ento esta prova de grande importncia visto
que vai dosear pequenas quantidades de albumina no rim, que passa a mais do que
devia. uma anlise feita na urina, extremamente sensvel, dando por isso um bom
diagnstico. A microalbuminria, assim, definida como um aumento da excreo
urinria de albumina acima do valor de referncia para indivduos no diabticos,
mas no detetvel noutros testes para a determinao de protena urinria. A
microalbuminria agora considerada um importante fator indicador do declnio da
funo renal em utentes/clientes diabticos. Ento, clinicamente um excelente
auxiliar no diagnstico de disfunes renais.
Amostra: Colheita de urina das 24h
Metodologia: O reagente de MA utilizado para determinar a concentrao de
albumina por turbidimetria. Durante a reao a albumina combina-se com

um

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Bioqumica
anticorpo especfico para formar complexos insolveis de antignio-anticorpo.
(Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha de informao qumica, 2010).
Valores de referncia: Os nveis normais de albumina, microalbuminria e
macroalbuminria so, respetivamente de: <30 mg/24h; 30-300 mg/24h; >
300mg/24h.

2.4 Compostos Nitrogenados No Proteicos


2.4.1 cido rico
O cido rico o produto principal do catabolismo de purinas no ser humano, e
formado a partir da xantina sob a ao da xantina-oxidase. A maior parte da
formao do cido rico ocorre no fgado e eliminado atravs dos rins. A reserva
de cido rico no organismo determinada pela diferena entre a sntese e a
eliminao.
A Gota uma patologia com origem na hiperuricemia, podendo esta ltima estar
relacionada para alm da gota com casos de leucemia, disfuno renal, diabetes,
hipotiroidismo e algumas doenas genticas. Nveis baixos de cido rico so
observados na Doena de Wilson.
Amostras: Soro e urina; na urina usar a urina de 24h.
Metodologia: O reagente de URIC utilizado para determinar a concentrao de
cido rico atravs de um mtodo de ponto final de tempo fixo. O cido rico
oxidado pela uricase, produzindo a alantona e perxido de hidrognio. O perxido
de hidrognio reage com a 4-aminoantipirina (4-AAP) e o 3,5-dicloro-2hidroxibenzenossulfonato (DCHBS), numa reao catalisada pela peroxidase,
produzindo um produto corado. (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha
de informao qumica, 2010).
Valores de referncia:
Soro/ Plasma- 2,6 a 7,2 mg/dL
30

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Bioqumica
Urina- 250-750 mg/24h

2.4.2 Ureia
A ureia o produto metablico nitrogenado existente em maior quantidade no
organismo, proveniente do catabolismo proteico. A biossntese da ureia a partir da
amnia derivada de aminocidos feita exclusivamente a nvel heptico no ciclo da
ureia. A ureia quando apresenta pequenos aumentos no tem grande significado a
nvel renal, mas se se apresentar valores aumentados pode tratar-se de trs tipos de
causa: pr renais, renais e ps renais. Quanto s primeiras, relacionadas com uma
deficincia na perfuso renal, uma vez que ocorre a diminuio do fluxo de urina
com um aumento da reabsoro tubular. Tambm se observa um aumento dos
nveis plasmticos de ureia quando h ingesto de dietas ricas em protenas ou,
como resultado do aumento do catabolismo proteico devido, por exemplo, a
traumatismos. As causas renais onde h insuficincia renal aguda ou crnica com
diminuio da filtrao glomerular. H um aumento dos nveis plasmticos de ureia
at estes igualarem a quantidade excretada na urina, ou continuam a aumentar
quando h uma insuficincia renal completa. Referindo-me agora s causas ps
renais ocorrem quando h uma obstruo do fluxo de urina que pode acontecer a
diferentes nveis (urter, bexiga ou uretra) e devido a vrias causas (ex.: pedras no
rim, prostatites, cancro geniturinrio). Contrariamente, os nveis de ureia podem
estar diminudos na hepatopatia grave e, por vezes, no final da gravidez.
Clinicamente: As determinaes de azoto ureico/cido rico so utilizadas no
diagnstico e tratamento de certas doenas renais e metablicas.
Amostra: Soro ou urina; urina preferencialmente das 24h (Tietz NW, 1995)
Metodologia: O reagente de UREA utilizado para medir a concentrao de azoto
ureico atravs de um mtodo de cintica enzimtica. Durante a reao, a ureia
hidrolisada pela urease a amonaco e dixido de carbono. A glutamato
desidrogenase (GLDH) catalisa a condensao de amonaco e de alfa-cetoglutarato
a glutamato, com a concominante oxidao da forma reduzida do dinucletido de
beta-nicotinamida adenina (NADP) a dinucletido de beta- nicotinamida adenina
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Bioqumica
(NAD). (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha de informao qumica,
2010).
Valores de referncia:
Soro: 15-38 mg/dL
Urina: 26-43 g/24h

2.4.3 Creatinina e Clearance da Creatinina


A creatinina est presente em quase todos os fluidos corporais e filtrada livremente
pelo glomrulo. Posteriormente, no sofre reabsoro pelos tbulos renais e sofre
uma pequena, mas significativa, secreo tubular. Este fato faz com que a creatinina
seja um analito de eleio para a avaliao da taxa de filtrao glomerular (TFG) e
da funo renal.
Amostras: Soro e urina
Metodologia: Cintico colorimtrico- Jaffe modificado. Num pH alcalino, a creatinina
reage com o picrato e forma o complexo creatinina-picrato. A taxa de aumento da
absorvncia a 500 nanmetros em consequncia da formao deste complexo
corado. diretamente proporcional concentrao de creatinina presente na
amostra.
Valores de referncia:
Soro: Homens: 0,7 - 1,3 mg/dL
Mulheres: 0,5 1,0 mg/dL
Urina: Homens: 21 26 mg/Kg peso/24h
Mulheres: 16 22mg/Kg peso/24h
A creatinina no soro varia em funo da idade, peso corporal e sexo do individuo.
Por vezes baixa em indivduos com massa muscular relativamente reduzida,
doentes caquticos, amputados e em pessoas de idade avanada. Um nvel de
creatinina no soro que seria considerado normal no exclui a presena de um
quadro de insuficincia renal.
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Bioqumica
A Clearance da Creatinina o marcador mais preciso da TFG e o mtodo mais
sensvel para a deteo de disfuno renal do que o doseamento da creatinina
plasmtica. Esta prova, tem os mesmos interferentes do doseamento plasmtico,
mas so mais reduzidos ou anulados, uma vez que a recolha da urina feita em 24
horas. A depurao ou clearance da creatinina tem sido considerada uma das
provas mais sensveis disponveis para indicar a presena de insuficincia renal,
devido rpida queda dos seus valores. Uma diminuio do seu valor abaixo dos
valores de referncia ser indicativo de uma diminuio da TFG e consequentes
leses renais.
Valores abaixo de 10 ml/min indicam a necessidade de dilise.

Clearance da creatinina=
(min)

(/)/
(/)

x Volume urina de 24h (ml)/1440

Valores de referncia:
Homens: 97 137 mL/minuto/1,73m2
Mulheres: 88 128 mL/minuto/1,73m2

2.5 Enzimas
2.5.1 AST /GOT
A Aspartato Aminotransferase srica uma enzima encontrada em vrios rgos e
tecidos, incluindo o fgado, o corao, o msculo-esqueltico e os eritrcitos.
Clinicamente: No diagnstico e tratamento de certos tipos de doenas hepticas e
cardacos.
Amostra: Soro
Metodologia: O reagente AST utilizado para medir a atividade do aspartato
aminotransferase atravs de um mtodo de classificao enzimtico. Durante a
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Bioqumica
reao, o aspartato aminotransferase catalisa a transaminao reversvel do Laspartato e alfa-cetoglutarato em oxaloacetato e L-glutamato. O oxaloacetato
ento reduzido a malato na presena de malato desidrogenase (MDH) com a
oxidao simultnea de beta-nicotinamida adenina dinucleotdeo (NADH) reduzido
em beta-nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD). (Beckman Coulter, Sistemas
SYNCRON CX- ficha de informao qumica, 2010).
Valores de referncia: 10-42 Ul/L

2.5.2 ALT /GPT


A Alanina Aminotransferase srica uma enzima encontrada predominantemente no
fgado, porm com quantidades moderadas no rim e pequenas quantidades no
corao e no msculo-esqueltico. Em, geral, a maior parte do aumento da ALT
deve-se presena de uma doena heptica, embora a ocorrncia de graus
significativos de leso tecidular nos outros rgos mencionados tambm possa
afetar os nveis sricos. Na maioria das vezes a ALT tem maior atividade que a AST,
mas h excees a referir: como a hepatite alcolica; a cirrose heptica; o cancro
heptico. Nas hepatites virais e outras formas de necrose heptica, os valores
destas enzimas elevam se antes dos sinais clnicos e do aparecimento de sintomas.
A atividade das enzimas pode ser bastante elevada, chegando a alcanar valores de
100 vezes maiores ou mais que o referido valor de referncia. Quando a persistncia
da ALT se prolonga por mais de 6 meses aps um episdio de hepatite aguda
usada para diagnosticar uma hepatite crnica. Na colestase extra-heptica, a
concentrao de transaminases elevada, sendo maior do que a obstruo crnica
(Tietz analytes, 2009). Na cirrose, a concentrao varia consoante o estado do
processo e, pode atingir um mximo de 45 vezes o limite mximo de referncia, com
um ratio AST/ALT superior a 1. Este ratio pode refletir o grau de fibrose nestes
pacientes.
No cancro heptico, aumentam as duas enzimas sendo a AST mais elevada do que
a ALT. Podem ser encontradas ligeiras alteraes nos valores das enzimas
concomitantes com a administrao de medicamentos.
A ALT uma enzima mais especfica do fgado, pelo que os seus valores elevados
so geralmente observados em doenas hepticas parenquimatosas. No caso de
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Bioqumica
uma elevao isolada da AST, podemos estar perante um enfarte do miocrdio, pois
esta enzima tem uma concentrao elevada no msculo cardaco. No entanto,
tambm pode aparecer em distrofias musculares e dermatomiosite. Nas patologias
do msculo-esqueltico estriado, a CK tambm est aumentada.
Amostra: Soro (os eritrcitos tm aproximadamente 3 a 5 vezes mais ALT do que o
soro. Portanto a hemlise no soro pode aumentar os resultados do teste).
Metologia: O reagente de ALT utilizado para determinar a atividade do analito
atravs de um mtodo cintico. Durante a reao, a alanina aminotransferase
catalisa a transaminao reversvel da L-alanina e do alfa cetoglutarato a piruvato e
L-glutamato. Em seguida, o piruvato reduzido a latato na presena de laCtato
desidrogenase (LDH), com a correspondente oxidao do dinucletido de betanicotinamida adenina reduzido (NADH) a dinucletido de beta-nicotinamida adenina
(NAD).
Valores de referncia: 10-40 Ul/L

2.5.3 Fosfatase Alcalina (ALP)


A fosfatase alcalina constituda por um grupo de enzimas estritamente
relacionadas e com atividade mxima em pH 10. A atividade da ALP est presente
na maioria dos rgos e est associada a membranas e superfcies celulares
localizadas na mucosa do intestino delgado e tbulos contornados proximais do rim,
ossos (osteoblastos), fgado e placenta.
Clinicamente: As determinaes de fosfatase alcalina so utilizadas no diagnstico
e tratamento de doenas hepticas, sseas, da paratiride e intestinais.
O doseamento da ALP tem um interesse particular na investigao de duas
patologias: a doena hepatobiliar e a doena ssea associada a aumento de
atividade de osteoblastos. Quanto doena hepatobiliar, esta enzima mostra-se
especialmente sensvel obstruo do trato biliar, de carter intra- ou extraheptica. O seu aumento reflete o grau de obstruo e o nvel de tecido biliar
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Bioqumica
afetado. O aumento do resultado tende a ser maior no caso de obstruo extraheptica (pedras na vescula ou cancro da cabea do pncreas) do que na intraheptica. Uma elevao de valores semelhante ao anterior pode surgir no cancro
heptico avanado ou em metstases hepticas. Leses parenquimatosas, como na
hepatite infeciosa, refletem apenas um ligeiro aumento de resultados ou, resultados
normais. No segundo caso, a doena ssea, podemos estar perante um tumor
metastizante com reao osteoblstica ou a Doena de Paget. Esta enzima tambm
apresenta aumentos de atividade nalgumas situaes fisiolgicas como o
crescimento e a gravidez (Tietz, 2009).
Amostra: Soro
Metodologia: O reagente de ALP utilizado para determinar a atividade da
fosfatase alcalina por um mtodo cintico utilizando um tampo de 2-amino-2-metil1-propanol (AMP). Durante a reao, a fosfatase alcalina catalisa a hidrlise do
substrato incolor de ster orgnico fosfatado,p-nitrofenilfosfato, para dar o produto
corado amarelo, p-nitrofenol e fosfato. (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CXficha de informao qumica, 2010).
Valores de referncia: 5-1000 Ul/L

2.5.4 Gama-glutamil transferase (-GT)


A Gama GT pertence a um grupo de peptidases que catalisam a transferncia de
aminocidos de um pptido para outro atuando, assim, como transferases de aa. A
GT existe em todas as clulas do organismo, exceto nos msculos. A enzima
existente no soro parece ter essencialmente origem no sistema hepatobiliar. O
aumento da atividade de GGT parece ser um marcador sensvel de doena
hepatobiliar. Tal como a ALP, a GGT apresenta valores bastante elevados quando
est na presena de uma obstruo intra ou ps-heptica. O seu aumento aparece
em doentes com hepatite infeciosa, fgado gordo e com a toma de frmacos
anticonvulsivos. Em doentes com cirrose alcolica e na maioria dos doentes que
consomem grandes quantidades de lcool, a GGT encontra se elevada,
desempenhando um papel importante na deteo do alcoolismo e monitorizao de
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Bioqumica
patologias. Ao contrrio da ALP, a GGT no est aumentada em situaes
patolgicas de carter sseo. No enfarte do miocrdio, esta enzima apresenta-se
normal. No entanto, um aumento pode ocorrer ao fim do 4 dia e implica
normalmente leso heptica secundria (Abbot Diagnostics, 2009).
Clinicamente: As determinaes de y- glutamil transferase so utilizadas no
diagnstico e tratamento de doenas hepticas como a cirrose alcolica e tumores
primrios e secundrios do fgado.
Amostra: Soro.
Metodologia: O reagente de GGT utilizado para determinar a atividade da GGT
atravs de um mtodo de cintica enzimtica. Na reao, a y-glutamil transferase
catalisa a transferncia de um grupo gama-glutamilo do substrato incolor, a gglutamil-p-nitroanilina, para o aceitador, a glicilglicina, com produo de um produto
corado, a p-nitroanilina.
Valores de referncia: 5-750 Ul/L

2.5.5 Creatina Cinase (CK)


A CK um dmero composto por subunidades M-msculo e/ou B-crebro que se
associam para formar as isoenzimas CK-MM, CKMB e CK-BB. Estes catalisam a
fosforilao reversvel da creatina por ATP. A atividade da CK maior no msculo
estriado e no corao, apresentando uma atividade menor nos outros tecidos, como
o crebro, trato GI e bexiga. O valor srico da CK est muito aumentado em todos
os tipos de distrofia muscular (ex.: Poliomiosite). A atividade da CK aumenta aps
danos no miocrdio, com aumento significativo das fraes MM e MB. No
diagnstico de enfarte agudo do miocrdio, faz se a anlise desta enzima com a
Troponina I, Troponina T, CK-MB, GOT,LDH e mioglobina. Na rotina a CK muito
pedida, uma vez, que os doentes diabticos tomam muita civastatina que altera o
msculo. A CK juntamente com as transaminases determina a toma deste
medicamento.
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Bioqumica
Clinicamente: As determinaes de CK e das respetivas isoenzimas so utilizadas
no diagnstico e tratamento do enfarte do miocrdio e de doenas musculares como
a distrofia muscular progressiva do tipo de distrofia de Duchenne.
Amostra: Soro; as amostras que apresentam um nvel moderado a elevado de
hemlise podem afetar o ensaio da CK.
Metodologia: O reagente de CK utilizado para determinar a atividade de CK
atravs deum mtodo de cintica enzimtica. Na reao, a creatina cinase catalisa a
transferncia de um grupo fosfato do substrato creatina fosfato para o difosfato de
adenosina (ADP). A formao subsequente de trifosfato de adenosina (ATP)
medida atravs da utilizao de duas reaes acopladas, catalisadas por
hexocinase (HK) e pela glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH), com a
consequente produo de dinucletido de beta- nicotinamida adenina reduzido
(NADH) a partir de dinucletido de beta- nicotinamida adenina (NAD). O ensaio de
CK contm o ativador monotioglicerol. (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CXficha de informao qumica, 2010).
Valores de referncia:
a) Indivduo do sexo masculino 38-174 Ul/L
b) Indivduo do sexo feminino

26-140 Ul/L

2.5.6 LDH (Lactato Desidrogenase)


A LDH do soro consiste na atividade de 5 isoenzimas, LDH-1 a LDH-5, e encontra se
distribuda por todo o corpo da ser relevante no diagnstico do enfarte do miocrdio,
da anemia hemoltica, etc. O papel principal do LDH total consiste na deteo de
leses reduzidas no tecido. A LDH aparece elevada em hepatites, nefrites
glomerulares, embolismo pulmonar, doenas musculares e em muitas leucemias e
linfomas.
Como a LDH um marcador no especfico usado em combinao com outros
marcadores em diagnsticos e na gesto dos doentes.
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Bioqumica
Clinicamente: As determinaes de lactato desidrogenase so utilizadas no
diagnstico e tratamento de doenas hepticas, tais como a hepatite viral aguda, a
cirrose e o carcinoma heptico metastizado, de doenas cardacas como o enfarte
do miocrdio e de tumores dos pulmes ou dos rins.
Amostra: Soro
Metodologia: O reagente de LDH utilizado para determinar a atividade dalactato
desidrogenase atravs de um mtodo enzimtico cintico. Durante a reao o LDH
catalisa a reduo reversvel de piruvato a L-lactato, com a correspondente oxidao
do dinucletido de beta- nicotinamida adenina reduzido (NADH) a dinucletido de
beta-nicotinamida adenina (NAD). (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha
de informao qumica, 2010).
Intervalo de referncia: 266-500 Ul/L

2.5.7 Amilase
A amilase uma enzima da classe das hidrolases que catalisa a hidrlise de ligao
1,4-glucosdicas em polissacridos. Esta enzima encontra-se num grande nmero
de tecidos e rgos. A maior concentrao nas glndulas salivares (tipo-S), e no
pncreas (tipo-P) produzida pelas clulas acinares. (Tietz, 2009)
A amilase srica normalmente baixa, aumentando drasticamente: na pancreatite
aguda primria ou pancreatite crnica recidivantes, colecistite, litase, tumor, lcera
gastroduodenal, peritonite, entre outros.
A amilase urinria pode ser til na confirmao de valores sricos, ou quando os
valores esto normais. Em geral, a amilasria aumenta 24 horas aps a amilase
srica e, permanece alterada durante 7- 10 dias, aps a normalizao dos valores
sricos. A amilase srica rapidamente eliminada pelos rins, pelo que as doenas
que afetam o pncreas fazem aumentar os nveis urinrios da enzima. A amilasria
sensvel para a doena heptica, mas no especfica. Para maior informao

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Bioqumica
deve-se comparar a razo amilasria/clearance da creatinina. Uma razo superior a
5% indica uma pancreatite e uma inferior aponta para outras causas.(Tietz, 2009).
Amostras: Soro e urina; na urina conservar amostras aleatrias ou de 24h sem
adio de conservantes.
Metodologia: Substrato de CNPG3.
A alfa-amilase hidrolisa o 2-cloro-4-nitrofenil-alfa-D-maltotriosido (CNPG3) para
libertar o 2-cloro-4-nitrofenol (CPNP) e formar 2-cloro-4-nitrofenil-alfa-D-maltosido
(CNPG2), maltotriose e glicose. A taxa de formao de 2-cloro-4-nitrofenol pode ser
detetada por espectrofotometria a 404 nm para fornecer uma quantificao direta da
atividade da alfa-amilase na amostra. (Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CXficha de informao qumica, 2010).
Valores de referncia:
Soro/Plasma: 28 100 U/L
Urina Amostras de 24h: 1 a 17 U/hora
Nota: cada laboratrio deve estabelecer o seu prprio intervalo de referncia com
base nas caractersticas locais e populacionais.

2.6 Bilirrubinas
2.6.1 Bilirrubina Total
A bilirrubina um pigmento amarelo-alaranjado derivado da destruio eritrocitria,
conjugado no fgado e excretado na blis e na urina. Esta molcula provm da
degradao do heme, da mioglobina e de citocromos. Esta protena insolvel no
plasma transportada ligada albumina at aos hepatcitos. A conjugada com o
cido glucornico tornando-a hidrossolvel. A sua libertao posterior no intestino
serve para saponificar as gorduras. A bilirrubina total a soma das fraces
conjugadas e no conjugadas.
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Bioqumica
Clinicamente: As determinaes de bilirrubina so utilizadas no diagnstico e
tratamento de doenas hepticas hemolticas, hematolgicas e metablicas,
incluindo hepatite e bloqueio da vescula biliar.
O seu doseamento tem interesse no estudo de doentes ictricos em que est
associada uma hiperbilirrubinmia. Este aumento de bilirrubina pode ocorrer por
causas pr-hepticas que existem quando h uma produo exagerada de
bilirrubina que se traduz por um aumento da sua forma no conjugada. uma
alterao que est presente em todas as formas de anemias hemolticas. A
Hiperbilirrubinmia hepatocelular surge em vrias situaes, nomeadamente, com
um uptake heptico anormal de bilirrubina (ex.: Sndroma de Gilbert, hepatite ou
cirrose), com uma conjugao de bilirrubina ineficiente (ex.: Recm-nascidos
prematuros, Sndroma de Gilbert e de Crigler-Najjar), uma secreo anormal de
bilirrubina na blis (ex.: Sndromas de Rotor e Dubin-Johnson, leso hepatocelular
generalizada). Todas estas situaes traduzem um aumento das duas formas
(conjugada e no conjugada) de bilirrubina. Quanto Hiperbilirrubinmia colesttica:
a obstruo do fluxo da blis tanto pode ser intra como extra-heptica e, ambas,
traduzem-se num aumento da forma conjugada de bilirrubina.
Amostra: Soro; amostras protegidas da luz uma vez que a bilirrubina fotolbil
Metodologia: O reagente de TBIL utilizado para determinar a concentrao de
bilirrubina total atravs de um mtodo de diazo de ponto final de tempo fixo. Na
reao, a bilirrubina reage com o reagente diazo na presena de cafena, benzoato e
acetato como aceleradores para formar azobilirrubina. (Beckman Coulter, Sistemas
SYNCRON CX- ficha de informao qumica, 2010).
Valores de referncia: 0,2 a 1,0 mg/dL

2.6.2 Bilirrubina Direta


Clinicamente: As determinaes de bilirrubina direta so utilizadas no diagnstico e
tratamento de doenas hepticas, hemolticas, hematolgicas e metablicas,
incluindo hepatite e bloqueio da vescula biliar.
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Bioqumica
Amostra: Soro sem hemlise ou lipmia visveis, as amostras sempre protegidas
Metodologia: O reagente de DBIL utilizado para determinar a concentrao de
bilirrubina direta atravs de um mtodo diazo de ponto final de tempo fixo. Na reao
a DBIL combina-se com a espcie diazo para formar azobilirrubina.
Valores de referncia: 0,0 a 0,2 mg/dL

2.6.3 Bilirrubina Indireta


Esta frao de bilirrubina denominada de bilirrubina indireta ou no conjugada. No
fgado conjuga-se com o cido glucurnico para formar a bilirrubina conjugada. Esta
excretada do sistema biliar para o intestino, onde metabolizada pelas batrias a
um grupo de produtos conhecidos que so os pigmentos. Uma parte reabsorvida
pela circulao enteroheptica, entra na circulao sangunea e eliminada na urina
sob a forma de urobilinognio, que d a cor caraterstica da urina.
Esta aumenta quando estamos perante situaes de hemorragia graves, na doena
de Gilbert ou em hemlise acentuada.
Amostra: Soro
Metodologia: Diferena entre a bilirrubina total e a bilirrubina direta

2.7 Ies
O Spotlyte Na +/K+/Cl- faz o doseamento do sdio, do potssio e dos cloretos.

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Bioqumica

FIg. 9 Spotlyte Na +/K+/Cl-

Amostra: soro e a urina. No soro, no ensaio de potssio no podem ser utilizadas


amostras hemolisadas. Na urina das 24h ou a primeira da manh, colher amostras
de 24h sem adicionar conservantes. (Burtis CA, 1999)
Muitos medicamentos e estados patolgicos causam desequilbrios eletrolticos
temporrios no organismo, uma vez que, no h quase processos metablicos que
no dependam ou no sejam afetados por eletrlitos. Torna-se, portanto, necessrio
integrar na teraputica do doente um controlo frequente desses eletrlitos.
Metodologia: O aparelho tem trs eltrodos com afinidade para os referidos ies. O
potencial de cada eltrodo medido em relao a uma voltagem fixa de um eltrodo
de referncia (eltrodo de prata). Cada eltrodo desenvolve uma voltagem que varia
com a concentrao do io correspondente. A relao entre as voltagens
desenvolvidas e as concentraes dos ies determinada por uma frmula j
existente em memria, no aparelho. desenvolvido um potencial eltrico de acordo
com a Equao de Nernst para um io especfico. Quando comparado com uma
referncia interna, este potencial eltrico convertido em voltagem e seguidamente
na concentrao de ies da amostra. Em alternativa a este mtodo temos a
Fotometria de Chama.

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Bioqumica

2.7.1 Sdio
a) Sdio Srico
o principal catio extracelular, pois dele depende o fluido extracelular. A
diminuio de sdio pode ser devida utilizao de diurticos, mas est
frequentemente associado a situaes de desidratao extrema. Fora dos valores
normais podemos ter uma hiponatrmia ou hipernatrmia. Na hiponatrmia pode
haver uma depleo de sdio e gua, por dfice, uma perda metablica. Temos
tambm o caso da hiponatrmia dilucional em que ocorre um excesso de gua, uma
hipoalbuminmia, cirrose, sndrome nefrtico, insuficincia renal aguda com oligria.
Existe tambm a possibilidade de ocorrncia de SIADH Sndrome de secreo
inapropriada de hormona antidiurtica; perda Intracelular, uma falsa hiponatrmia,
triglicridos altos, proteinmia alta e uma glicmia alta grave tambm so
hipteses.
No que concerne hipernatrmia, a principal causa a a desidratao, que pode ter
como causa: a ingesto insuficiente de gua, um dbito renal excessivo de gua
(ex.: Diabetes Inspida), um dbito excessivo de gua pela pele, um dbito excessivo
do trato GI, uma sobredosagem de sdio ou uma alimentao com alto teor de
sdio.
b) Sdio Urinrio
A sua determinao na urina feita para explorar as causas de hiponatrmia.
Normalmente o rim tenta conservar o sdio, de modo que a sua excreo baixa
(<20 mmol/l, geralmente <10 mmol/l na primeira urina da manh). Caso o doente
tenha hiponatrmia e a concentrao de sdio esteja elevado na urina, ento
estamos perante uma perda inadequada pelo rim: Insuficincia Renal Crnica ou
Aguda, devido a diurticos, Doena de Addison ou Sndrome de SIADH (Tietz,
2009). Por isso, quando temos um sdio urinrio baixo, a hiponatrmia deve-se a
causas extra-renais.

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Bioqumica

2.7.2 Potssio
a) Potssio srico
Este o catio mais abundante logo a seguir ao sdio e o mais importante
intracelularmente na regulao da excitabilidade neuromuscular, contrao cardaca,
no volume de fluido intracelular e na concentrao de H+. A sua determinao
muito importante nalguns tipos de patolologias. A alterao da homeostase do
potssio trs srias consequncias a vrios nveis: cardaco e cerebral. Os
medicamentos diurticos (hipotensores) diminuem os nveis de potssio e o potssio
no convm estar abaixo de 3mEq (hipocalimia), porque provoca problemas a nvel
cerebral. Por outro lado, nvel acima de 6mEq (hipercalimia) faz com que uma
pessoa entre em falncia cardaca podendo inclusivamente levar morte. Os
grandes edemas aumentam o potssio no plasma eliminando, consequentemente, o
lquido presente nos edemas. (Tietz, 2009).
b) Potssio urinrio
Se o K+ urinrio for menor que 25 mmol/dia estamos perante uma perda extra-renal
como: diarreia, fstula, sudorese excessiva, aporte insuficiente de potssio na dieta.
Se o K+ urinrio exceder os 25 mmol/dia h uma acidose metablica (acidose tubular
tipo I e II), uma necrose tubular aguda, uma toxicidade medicamentosa por
Anfotericina B, entre outros.
Com o aumento da concentrao de potssio tais como suplementos de K+,
transfuso sangunea, hemlise, necrose tecidular e doses elevadas de penicilina
surge a oligria.
Um fator a ter em conta que o doseamento de potssio que as amostras
levemente hemolisadas conduzem geralmente a grandes alteraes nos valores
sricos de potssio, j que este altamente afetado pela hemlise.

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Bioqumica

2.7.3 Cloretos
O cloro o principal anio extracelular e intervm, entre outras funes na
manuteno da presso osmtica. Geralmente, os valores do cloro acompanham os
do io sdio. A determinao do cloro importante como diagnstico diferencial de
desequilbrios eletrolticos. Quanto maiores as concentraes de Na+ e Cl- no soro
maior a influncia na tenso arterial. Quando estamos perante uma hipoclormia
quando temos uma acidose metablica (falha renal e cetoacidose diabtica), vmitos
e secreo gstrica persistente (alcalose metablica), diurticos e SIADH. O cloro
aparece diminudo no soro em vrias doenas renais, como por exemplo nas nefrites
e pielonefrites crnicas, em que h perda de sais.
Em situaes de hiperclormia temos um quadro de desidratao, acidose tubular
renal, insuficincia renal aguda, acidose metablica (diarreia prolongada e perda de
bicarbonato), hiperfuno adrenocortical, hipomagnesmia, alcalose metablica.
Valores de referncia:
Soro: a) Sdio 136-145 mmol/l
b) Potssio 3.5-5.1 mmol/l
c) Cloretos 98-107 mmol/l
Urina: a) Sdio 40-220 mmol/dia
b) Potssio 25-125 mmol/dia
c) Cloretos 110-250 mmol/dia

No Syncron Cx4 medem-se os restantes ies:

2.7.4 Magnsio
O magnsio, catio intracelular, tem um papel extremamente importante no
metabolismo celular, participando ativamente em mecanismos como a fosforilao
oxidativa, a gliclise e a replicao celular. Tambm um cofator de muitas enzimas
funcionando como substrato ativador ou desencadeador de vrias reaes.

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Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Bioqumica
Clinicamente: A determinao de magnsio til na avaliao de diversas doenas
e afees. Nveis elevados de magnsio esto associados a urmia, a desidratao,
a acidose diabtica, Doena de Addison e administrao medicinal de magnsio
como por exemplo, no tratamento da pr-eclmpsia (hipertenso induzida pela
gravidez). Nveis baixos de magnsio esto associados ao sndroma de
malabsoro,

pancreatite

aguda,

hipoparatiroidismo,

alcoolismo

crnico,

glomerulonefrite crnica, aldosteronismo.


Amostra: Soro e urina. Soro: amostras no hemolisadas; urina: amostras de urina
de 24h
Metodologia: O reagente de MG utilizado para determinar a concentrao de MG
atravs de um mtodo de ponto final de tempo fixo. Na reao o magnsio combinase com a calmagite para foramr um cromognio estvel. O produto forma-se
rapidamente, fornecendo resultados reprodutveis com um mnimo de interferncias.
(Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha de informao qumica, 2010).

Valores de referncia:
Soro: 1,7-2,8 mg/Dl
Urina(24h): 72,9-121,5 mg/24h

2.7.5 Clcio
o elemento mineral mais abundante do organismo e participa em diversos
processos fisiolgicos como a coagulao, a conduo neuromuscular e a
consequente excitabilidade dos msculos esqueltico e cardaco, na preveno e
integridade da membrana celular e na mineralizao do tecido sseo. Apresenta-se
em trs estados fisiolgicos no plasma: ionizado, ligado a protenas plasmticas e
complexado com pequenos ies. O clcio livre a frao biologicamente ativa,
sendo a sua concentrao regulada pela PTH e a 1,25-dihidroxivitamina D. Entre as
causas da hipocalcmia podemos ter: uma hipoalbuminmia que traduz a causa
mais frequente, esta condio pode ser devida a insuficincia heptica crnica,
sndrome nefrtico, falha cardaca congestiva e m nutrio. Inclui tambm a
Margarida Souto Pinto Proena Lucas

47

Bioqumica
insuficincia

renal

crnica

tambm

comum

devido

hipoproteinmia,

hiperfosfatmia. Deparamo-nos com uma hipomagnesimia, hipoparatiridismo,


pseudohipoparatiridismo, osteomalcia e raquitismo devido a deficincia ou
resistncia vitamina D e pancreatite aguda.
A hipercalcmia muitas vezes encontrada, resultando do aumento do fluxo de
clcio para o fluido extracelular do esqueleto, intestino ou rins. Assim, quando a
capacidade renal excedida, desenvolve-se uma hipercalcmia. As duas causas
principais so: hiperparatiridismo primrio devido a adenoma (80-85% dos
casos), carcinoma das paratiroides, neoplasia da pituitria, pncreas, tiride e
feocromatocitoma. Neoplasias com ou sem envolvimento esqueltico, neoplasia
hematolgica coexistente com hiperparatiridismo (Tietz, 2009).
Clinicamente: as medies de clcio so utilizadas no diagnstico e tratamento de
doenas da paratiride, vrias doenas sseas, insuficincia renal crnica e tetania
(contraes ou espasmos intermitentes dos msculos). A medio do clcio urinrio
utilizada em diagnsticos diferenciais de hipercalcinria de fuga renal, como
observado na acidose tubular renal.
Amostra: Soro e urina
Mtodo: O reagente de Clcio utilizado para medir a concentrao de clcio
atravs de um mtodo de ponto final temporizado. Durante a reao, o clcio
combina-se com o Arsenazo III para formar um produto de cor prpura-azulado.
(Beckman Coulter, Sistemas SYNCRON CX- ficha de informao qumica, 2010).
Valores de referncia:
Soro/ Plasma: 8,4-10,2 mg/dL
Urina: 100-300 mg/24h

48

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Bioqumica

2.7.6 Fsforo
O plasma contm fsforo inorgnico e orgnico, mas apenas o inorgnico medido.
O fsforo inorgnico o componente principal da hidroxiapatite no osso e, por isso,
desempenha um importante papel no suporte estrutural do corpo.
A maior parte do fsforo corporal intracelular, constituindo o anio intracelular mais
abundante. O metabolismo do fsforo est intimamente ligado ao clcio.
Fisiologicamente, quando o clcio sobe no soro, o fsforo desce, sendo este
controlo feito a nvel renal.
A hipofosfatmia (<2.5 mg/dL) pode ter as seguintes causas: mudana do fsforo do
fluido extracelular para o fluido intracelular (a causa mais comum de hipofosfatmia).
A glucose oral ou endovenosa e as injees de insulina tambm fazem diminuir a
concentrao plasmtica de fsforo. A alcalose respiratria, conduz a um aumento
de pH intracelular e a um aumento da gliclise, levando entrada de fsforo para a
clula.
Por sua vez, a hiperfosfatmia pode ser causada por: insuficincia renal, causa mais
comum e pode ter origem na diminuio da taxa de filtrao glomerular e aumento
da reabsoro tubular. Temos tambm um aumento do aporte de fosfato na dieta,
uma mudana de fsforo do fluido intracelular para o extracelular (Tietz, 2009).
Amostra: Soro e urina
Metodologia: O fosfato inorgnico reage com o molibdato de amnio para formar
um complexo htero-poli-cido. A utilizao de um surfactante elimina a
necessidade de preparao de um filtrado livre de protenas. A absorvncia a 340
nm diretamente proporcional ao nvel de fsforo inorgnico presente na amostra.
Os brancos de amostra tm de ser analisados para corrigir uma eventual
absorvncia inespecfica da amostra.
Valores de referncia:
Soro- 2,3 a 4,7 mg/dl
Urina- 0,4 a 1,3 g/dia
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49

Bioqumica

2.7.7 Ferro Srico


O ferro do organismo circula ligado transferrina, formando a ferritina. Est presente
nos fludos biolgicos como componente da hemoglobina e mioglobina, ligado
transferrina que atua como protena de transporte. A hemocromatose e a doena
heptica registam-se quando os valores da concentrao de ferro esto elevados.
Quando os valores aparecem baixos podem ser resultado de uma anemia, devido a
uma m absoro ou elevado sangramento menstrual.
Amostra: Soro no hemolisado, como anticoagulante utilizar sais de heparina.
Metodologia: Determinao colorimtrica direta de ferro
Valores de referncia:
Homens: 60 - 160 g/dL
Mulheres: 40 - 145 g/dL

2.8 Controlo de Qualidade no Laboratrio de Bioqumica


2.8.1 Calibrao
Todos os reagentes introduzidos de novo e durante a sua utilizao tm que ser
calibrados, utilizando padres de concentrao conhecida, cujos valores so
previamente introduzidos no programa do autoanalisador. O tempo entre calibraes
varia conforme os reagentes j que a sua estabilidade no igual para todos. O
programa deste aparelho permite saber diariamente quais as calibraes a efetuar.
com os fatores obtidos com a scalibraes que as leituras das amostras so
convertidas nos resultados finais.

50

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Bioqumica

2.8.2 Controlo de Qualidade Interno


Diariamente devem ser analisados pelo menos, dois nveis de material de controlo.
Adicionalmente, estes controlos devem ser analisados com cada nova calibrao,
com cada novo cartucho de reagente e aps manuteno especfica ou
procedimentos de resoluo rpida dos problemas, conforme detalhado no manual
do sistema adequado. A utilizao mais frequente de controlos ou a utilizao de
controlos adicionais deixada ao critrio do utilizador, baseado nas Boas Prticas
de Laboratrio ou requisitos de acreditao do laboratrio e legislao aplicvel. Os
valores de controlo tm que estar entre 2SD para a esquerda e para a direita, do
valor mdio que seria o valor ideal a obter. O controlo de qualidade interno
obrigatrio, so guardadas as cartas de controlo que correspondem aos controlos
internos dos diversos parmetros durante cinco anos para posterior inspeo.

2.8.3 Controlo de Qualidade Externo


A avaliao externa feita no INSA no sentido de otimizar as condies do trabalho
laboratorial.

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Concluses

CONCLUSES
Durante o estgio no Laboratrio de Anlises Clnicas da Faculdade de Farmcia da
Universidade de Coimbra e atravs da aplicao prtica dos conhecimentos que
adquiri ao longo do Mestrado de Anlises Clnicas consegui aprender a lidar com
vrios aspetos da vida real, ou seja, atingi a meta para uma validao final dos
resultados analisados.
Durante este percurso foi fundamental o histrico de anlises clnicas dos
clientes/utentes, o modo de funcionamento de diversos aparelhos, o conhecimento
prvio das tcnicas e o manuseamento correto de todo o material, desde a fase de
colheita de sangue, onde me iniciei, at validao de resultados (fase psanaltica).
Ao mesmo tempo foram tidos em conta fatores de carter econmico, como por
exemplo como racionar o uso dos kits comerciais de acordo com o nmero de
amostras que chegavam ao laboratrio.
As anlises clnicas so completamente imprescindveis para diagnsticos de sade,
auxiliando os mdicos na monitorizao teraputica das diferentes patologias.

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

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Bibliografia

BIBLIOGRAFIA
1. Abbot Diagnostics. Manual de operao do Architect System. Folheto de
Instrues para uso (reagentes). IL, USA, 2009.
2. Abbot Diagnostics. Manual de operao do equipamento ARCHITECT SYSTEM
Equipamento-folheto de instrues de utilizao de reagentes e kits. IL, USA.
Clinical Chemistry, 2009.
3. Ault, A. Kenneth; Hillman, S. Robert, Hematology in Clinical Practice- A Guide to
Diagnosis and Management, International Edition, 1995.
4. Carl A. Burtis; Edward R. Ashwood. Tietz- Fundamentals of Clinical Chemistry. 5
Edio, 2009.
5. Dacie, V. Sir John; Lewis, S. M. Practical Haematology. 8 Edition, 1995.
6. Failace, Renato. Hemograma: manual de interpretao. 3 Edio, Porto Alegre:
Artes Mdicas, 1995.
7. Kalins, Rafael; Giglio, Auro; Princpios de Hematologia Clnic. 5 Edio, 2007.
8. Ravel R. Laboratrio Clnico: Aplicaes Clnicas dos Dados Laboratoriais. 6
Edio. Guanabara Koogan, 1995.
9. Theml, H. Color Atlas of Haemathology. 2 Edio, 2004.

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

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Anexos

ANEXOS
1. Hematologia
1.1 Colorao de MayGrunwald-Giemsa
Os esfregaos de sangue perifrico podem ser preparados, no momento da colheita,
a partir de sangue total sem anticoagulante ou a partir de sangue com
anticoagulante (EDTAK3).
A colorao May-Grnwald-Giemsa uma colorao o tipo Romanowsky. Os dois
componentes

principais

so

Azur

(Trimetiltionina)

Eosina

(Tetrabromofluorescena).
O Azur B liga-se a molculas aninicas, enquanto a Eosina Y liga-se aos stios
catinicos proteicos. Assim, os cidos nucleicos e protenas tm afinidade para o
corante bsico Azur B-, enquanto que o grupo de molculas da hemoglobina tem
afinidade para os corante cidos sendo corados pela Eosina. Relativamente s
granulaes leucocitrias temos: as neutroflicas levemente coradas pelo Azur, as
basoflicas coradas fortemente pelo Azur, e as eosinoflicas coradas pela Eosina.
1 Fixao com metanol-3 minutos
2 Colorao com Maygrunwald-5 minutos
3 Colorao com Giemsa
4 Lavagem com gua desionizada
5 Secar
6 Observar ao microscpio

1.2 Determinao de Grupos sanguneos


I) Preparao das clulas de referncia e clulas dos doentes

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57

Anexos
As clulas de referncia tm um fentipo conhecido. As clulas A1, A2, B e 0 so
usadas na prova srica, de determinao dos antignios do sistema AB0. As clulas
0I e 0II e as 0I e 0II papainizadas so utilizadas na pesquisa de aloanticorpos e nos
controlos do sistema Rh e Kell.
Antes da sua utilizao as clulas devem ser lavadas 3 vezes em soluo salina que
desperdiada aps a lavagem, na ltima lavagem deve ter-se especial ateno
decantao de modo a retirar a maior quantidade possvel de soluo salina para
assim evitar a diluio de reagentes a adicionar posteriormente (AGH).
A centrifugao em cada lavagem dever ser suficiente para fornecer um
aglomerado celular firme e minimizar a perda de clulas na decantao (3 minutos a
3000 rpm).
As clulas A1, A2, B e 0 so diludas e lavadas trs vezes, para uma concentrao
de aproximadamente 1%, com uma soluo de meio salino. Este procedimento
serve para remover os eritrcitos lisados e os conservantes (antibiticos e
nutrientes), adicionados s clulas para a sua conservao. Ficam assim prontas a
serem usadas, nas 24 horas seguintes, sendo guardadas aps o uso a 2-8C.
As clulas 0I e 0II so submetidas ao mesmo procedimento das anteriores.
As clulas 0I e 0II papainizadas tm de ser preparadas todos os dias, a partir das
clulas 0I e 0II. Estas clulas so incubadas com papana diluda, na proporo de
uma parte para nove partes de tampo fosfato (pH 7,0) durante 12 minutos (tempo
necessrio para a papana reagir) a 37C. Aps esse perodo as clulas so lavadas
e diludas, tal como as anteriores. A aco desta enzima (papana) promove a
reduo dos resduos de cido silico, que existem na superfcie das hemcias e
que so responsveis pela carga negativa nestas clulas. A diminuio das cargas
negativas na superfcie da membrana do eritrcito leva diminuio das repulses
entre as clulas e consequente diminuio do potencial zeta, o que favorece a
aglutinao.
Aps de depositar o soro dos pacientes nos vrios poos das microplacas, para a
pesquisa dos auto-anticorpos, so retirados eritrcitos amostra do paciente,
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Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Anexos
procedendo-se sua lavagem com meio salino por trs vezes. Esta lavagem tem o
intuito de retirar as protenas do soro e outras biomolculas, que poderiam interferir
com as reaces antignio-anticorpo.
II) Sistema AB0
Os reagentes usados para o sistema AB0 so anticorpos monoclonais IgM: Anti-A,
Anti-B e Anti-AB.
O mtodo usado a aglutinao direta com um reagente que indica a presena do
antignio correspondente.
Para a determinao do grupo sanguneo utiliza se a microplaca. Neste caso,
colocam se 2 gotas de sangue na placa, s quais se junta 1 gota de anti-A a uma
delas e outra uma gota de Anti-B. Mistura-se e observa-se a presena ou ausncia
de aglutinao. O resultado positivo quando h aglutinao e negativo na sua
ausncia.
Quando o Anti-A e o Anti-B no geram aglutinao, usa-se o Anti-AB, o qual contem
clones diferentes dos usados. Assim sendo, se a aglutinao continua ausente
podemos classificar este soro como pertencente ao Grupo 0.
Em caso de dvida, como por exemplo uma aglutinao duvidosa ou discrepncia
de resultados entre os anti-soros, prossegue-se o estudo atravs da tcnica em
tubo.
III) Sistema Rh
Mtodo:
O reagente Anti-D tem os seguintes anticorpos:
- anticorpo IgM
- anticorpo IgG

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

59

Anexos
A tcnica usada igual ao Sistema AB0, ou seja, aglutinao. O procedimento o
mesmo e realizado ao mesmo tempo do Sistema AB0, sendo que a aglutinao
corresponde a Rh positivo e a sua ausncia Rh negativo.
A confirmao dos casos Rh negativo faz-se por Tcnica em tubo, usando o
reagente Anti-D anterior e um outro reagente com clones diferentes:
- anticorpo IgM
- anticorpo IgG

1.3 Provas de Coagulao


As provas de coagulao realizadas no setor de Hematologia incluem: tempo de
tromboplastina parcial (TTP), tempo de protrombina (TP), tempo de trombina (TT) e
deteco de produtos de degradao de fibrina (PDF), sendo esta provas realizadas
no autoanalisador.
Os tubos de colheita de sangue para estudos de coagulao contm citrato trisdico
que fica na proporo de 1:9 com o sangue. O citrato trisdico complexa o clcio
necessrio cascata de coagulao. Estes tubos so centrifugados a 3000rpm
durante 10 minutos e o plasma (sobrenadante), que contm os fatores de
coagulao essenciais aos estudos de coagulao, utilizado pelo aparelho para
determinao dos tempos de coagulao. Este plasma contm os fatores de
coagulao e no contm clcio e pobre em plaquetas.

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Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Anexos

2. Bioqumica
2.1. Glucose
Reaes:

a) Glucose + ATPGlucose-6-fosfato + ADP

b) Glucose-6-fosfato + NAD + 6-fosfogluconato + NADH + H+


O aumento na absorvncia a 340 nm proporcional concentrao de glucose na
amostra.
O doseamento de glucose feito num conjunto especfico de provas
1) Doseamento de glucose em jejum;
2) Glucose em jejum e ps-prandial:
i.

Doseamento da glucose ao tempo 0;

ii.

Doseamento 1 ou 2 horas aps a toma de um pequeno-almoo aucarado:


(1) 1 Hora para testar a elevao da glucose no indivduo
(2) 2 Horas para verificar se o valor de glucose se encontra estabilizado

3) Prova de Tolerncia Oral Glucose. Nesta prova o doente toma 75g de glucose
aps uma recolha de sangue ao tempo 0. Posteriormente feita uma colheita s 2
horas.
4) Curva de Glicmia. Nesta prova o doente toma habitualmente 100g de glucose
aps uma recolha de sangue ao tempo 0. Posteriormente so feitas 4 colheitas: 30,
60, 120 e 180.

2.2 Colesterol total


Esquema da reao:

a) ster de colesterol colesterol + cido gordo

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Anexos

b) Colesterol + O2 Colestenona-3 + H2O2

c) 2H2O2 + 4-AAP Quinoneimina + H2O

2.3 Colesterol-HDL
Esquema da reao
,

a) LDL, VLDL,Quilomicrons Complexos estveis


,

b) Colesterol-HDL 4 Colestenona + H2O2

c) H2O2+DSBmT + 4-AAP Produto corado DSBmT: N,N-bis (4sulfobutil)-m-toluina- dissdio e 4-AAP: 4-aminoantipirina.

2.4 Triglicridos
Esquema da reao

a) Triglicridos Glicerol + cidos gordos


,

b) Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato + ADP

c) Glicerol-3-fosfato + O2 Dihidroxiacetona + H2O2

d) 2H2O2 + 4-AAP + DHBS Corante quinonemina+ HCl+ 2H2O

2.5 Ies
2.5.1 Sdio, Potssio e Cloro
O mdulo ISE para Na+, K+ e Cl- integra eltrodos especficos para cada io de
interesse na amostra:
a) de membrana ter-coroa para sdio e potssio;
b) uma membrana de PVC orientada a nvel molecular para o cloro.

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Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Anexos
desenvolvido um potencial elctrico de acordo com a Equao de Nernst para um
io especfico. Quando comparado com uma referncia interna, este potencial
elctrico convertido em voltagem e seguidamente na concentrao de ies da
amostra.

2.5.2 Ferro
Esquema de reao
.

a) Transferrina- (Fe3+)2 Transferrina + 2Fe3+

b) Fe3+ + hidroxilamina+tioglicolatos Fe 2+
c) Fe2+ + 3FerroZinesFe2+(FerroZine)3

2.6 Enzimas:
2.6.1 AST

a) L-Aspartato + g-cetoglutarato Oxalacetato + L-glutamato

b) Oxalacetato + NADH + H+ Malato + NAD+

2.6.2 ALT

a) L-alanina +g-cetoglutarato + Piruvato + L-glutamato

b) Piruvato + NADH + H+ Lactato+ NAD+

2.6.3 Creatina Cinase (CK)


Esquema de reao

a) Creatina fosfato + ADP Creatina + ATP

b) ATP + Glucose Glucose-6-fosfato + ADP

c) Glucose-6-fosfato + NADP+ 6-Fosfogluconato + NADPH+ + H+

Nota: As frmulas qumicas que no se encontram em anexo so as frmulas


qumicas diretas, descritas ao longo do trabalho escrito.
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63

Anexos

2.7 Fator reumatide


Esquema de reao
Quando uma amostra misturada com tampo Glicina e suspenso de ltex de IgG,
o RF reage especificamente com a IgG em partculas de ltex para produzir
agregados insolveis. A absoro destes agregados proporcional concentrao
de RF na amostra.

2.8 Eletroforese de protenas:


Consiste na separao eletrofortica das protenas sricas. Conforme o meio de
suporte utilizado, assim se obtm menor ou maior nmero de bandas.Na rotina
clnica, comum utilizar-se acetato de celulose ou gele de agarose. Nestes meios
de suporte separam-se cinco bandas: albumina, alfa1globulina, alfa2 globulina,beta
globulina e gama globulina.Com exceo da albumina, em todas as outras bandas
migram vrias protenas. Por exemplo, na banda da alfa 1 migra a alfa1 antitripsina e
a alfa1 glicoproteina cida; na alfa2 globulina migram a haptoglobina e a alfa2
macroglobulina; na beta globulina migram a transferrina e a beta2 microglobulina,
nagama globulina migram a IgG , IgA e a IgM.
O proteinograma um auxiliar no diagnstico de algumas patologias, sendo a sua
interpretao baseada no aumento ou diminuio das cinco bandas obtidas, que
correspondem s alteraes quantitativas de algumas protenas sricas. As
protenas totais so tambm doseadas, e podem aparecer normais, aumentadas ou
diminudas conforme a patologia em causa.Exemplos:
a) Sindroma nefrtico: diminuio da albumina e gama globulina, aumento da
alfa 2 globulina (devido alfa 2 macroglobulina). Protenas totais diminudas.
b) Infeco aguda: aumento da alfa 1 e alfa 2 globulinas (devido alfa 1
antitripsina e haptoglobina). Protenas totais normais
c) Deficincia imunitria: baixa da gama globulina (devido s imunoglobulinas).
Protenas totais normais ou diminudas.
d) Anemia por baixa de ferro:aumento da beta globulina (devido transferrina).
Protenas totais normais.
64

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Anexos
e) Cirrose heptica:aumento da gama globulina com fuso com a beta globulina.
Protenas totais normais ou aumentadas.
f) Gamopatia monoclonal: aumento da gama globulina, em pico. Se for uma
situao maligna pode tratar-se de Mieloma multiple. Protenas totais normais
ou aumentadas.
g) Gamopatia oligoclonal: aumento da gama globulina. frequente nas
hepatites.

FIg. 10 Proteinograma

2.8.2 Lipidograma
Metodologia:
As lipoprotenas so separadas nas tiras de gel de agarose de acordo com a sua
carga eltrica. A mobilidade eletrofortica das fraes das lipoprotenas
determinada pelas cargas terminais e laterais das apoprotenas e tambm pela
carga eltrica dos fosfolpidos. As bandas de lipoprotenas so reveladas atravs da
colorao com a soluo alcalina que contm negro de Sudo. Na eletroforese das
lipoproteinas, feita em gele de agarose aparecem normalmente as seguintes
bandas:
a) Banda beta que corresponde s lipoproteinas de baixa densidade (LDL),
caraterizadas pela sua riqueza em colesterol.
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65

Anexos
b) Banda pr beta: lipoproteinas de muito baixa densidade (VLDL),muito ricas
em triglicridos.
c) Banda alfa correspondente s lipoproteinas de alta densidade (HDL),
relativamente ricas em fosfolipidos.
Nota: Em determinadas dislipidmias pode ainda aparecer no ponto de aplicao,
uma banda correspondente aos quilomicra, caracterizada por ter um teor muito
elevado em trigliceridos exgenos (84%).

FIg. 9 Lipidograma

2.9 ANLISE SUMRIA DA URINA OU URINA TIPO II


Da anlise sumria da urina faz parte a pesquisa da glicose, bilirrubina,
urobilinognio, corpos cetnicos, sangue, protenas, nitritos, leuccitos, pH e
densidade. Apesar de no ser uma anlise especfica de uma determinada patologia
pode, contudo, ajudar no diagnstico de diversas doenas, sendo, importante a
avaliao dos seus resultados.
Glicose: A sua presena na urina, ocorre normalmente quando os nveis
sanguneos so superiores a 180mg/dl. Esta situao aparece, por exemplo, em
indivduos diabticos no controlados.
Bilirrubina: A sua presena na urina normal, mas em quantidades no detetadas
pelos testes usuais. Quando h obstruco do fluxo biliar, a quantidade de bilirrubina
na urina aumenta, dando neste caso, a sua pesquisa, positiva.
66

Margarida Souto Pinto Proena Lucas

Anexos
Urobilinognio: Ao nvel do clon, a bilirrubina reduzida a urobilinognio
estercobilinognio. Uma pequena parte do urobilinognio reabsorvida atravs
dacirculao portal, sendo uma pequena poro excretada na urina. A sua presena
em concentraces elevadas, poder ser indicador de processos hemolticos.
Corpos cetnicos: So o produto do metabolismo das gorduras, e a sua presena
pode ser indicador de acidose. Esta situao ocorre frequentemente em diabticos
no controlados. Tambm pode ocorrer em situaes de vmitos e de febre alta.
Sangue: Um resultado positivo poder significar a presena de eritrcitos intactos
(hematria) ou hemolisados (hemoglobinria). A hematria ocorre em situaes
patolgicas de doena ou traumatismo a nvel dos rins ou tracto urinrio e em
indivduos saudveis sujeitos a intenso exerccio fsico. A hemoglobinria poder
indicar uma significativa hemlise intravascular.
Protenas: Pode haver uma excreo aumentada em indivduos saudveis aps
exerccio fsico intenso, e em variadas situaes patolgicas, essencialmente
associadas a doenas do trato urinrio. Situaes de febre alta tambm podem
ocasionar o aparecimento de proteinria acima dos valores normais.
Nitritos: Um resultado positivo, indica que existem, em nmero significativo,
bactrias de Gram negativo que reduzem os nitratos urinrios a nitritos.
Leuccitos: Aparecem em nmero significativo nas infeces urinrias ou leses
inflamatrias, infeciosas ou traumticas a qualquer nvel do trato urinrio.
pH: Reflete a capacidade do rim para manter a concentrao normal do io
hidrognio no plasma e fluido extracelular. Valores elevados podem ser encontrados
na alcalose respiratria ,presena de clculos renais e infeces urinrias por
microrganismos como o Proteus e Pseudomonas sp. Valores diminudos podem ser
encontrados na acidose respiratria, perda de potssio, diarreias e infees urinrias
por E. Coli.
Densidade: Avalia a funo da filtrao e concentrao renal. Aparece diminuda
por exemplo na administrao excessiva de lquidos por via intravenosa e
Margarida Souto Pinto Proena Lucas

67

Anexos
insuficincia renal crnica. Densidades elevadas podem ser encontradas por
exemplo na desidratao, vmitos, febre, diabetes mellitus e uropatias obstrutivas. A
amostra utilizada para esta anlise deve ser a primeira urina da manh. As
determinaes acima referidas, so efetuadas utilizando uma tira reativa, quedepois
de introduzida na urina lida em aparelho apropriado. A urina em seguida
centrifugada a 2500 rotaes /minuto durante 10 minutos, retira-se o sobrenadante
deixando ficar aproximadamente 1 ml no tubo, agita-se e observa-se ao microscpio
entre lmina e lamela ou lmina apropriada, para anlise do sedimento urinrio. Os
elementos mais frequentemente observados so:
Clulas epiteliais: So clulas de descamao do revestimento epitelial do trato
urinrio. Apresentam-se grandes, planas, com ncleo distinto e grande citoplasma.
No tm significado clnico.

FIg. 11 Clula epitelial

Clulas redondas: So geralmente clulas da zona entre a bexiga e o rim. Podem


ser indicadoras de doena renal.

FIg. 12 Clulas redondas

Eritrcitos: a sua presena em nmero superior ao normal (3 a 5 por campo), pode


significar leso inflamatria, infeciosa ou traumtica dos rins ou vias urinrias.
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Anexos

FIg. 13 Eritrcitos

Leuccitos: quantidades aumentadas (+ de 5 por campo), indicam a presena de


leses inflamatrias, infeciosas ou traumticas em qualquer nvel do trato urinrio.

FIg. 14 Leuccitos

Cilindros: so formados quando as protenas se acumulam e precipitam nos tbulos


renais, aparecendo na urina com o seu formato. Os mais frequentes so os cilindros
hialinos granulosos de hemcias e de leuccitos .

FIg. 15 Cilindros

Cristais: uma grande variedade pode ser encontrada na urina. A sua formao
influenciada pelo pH, densidade e temperatura da urina. Nas urinas de pH cido
frequente encontrarem-se cristais de cido rico e de oxalato de clcio.
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Anexos

(a)

(b)

FIg. 16 (a) Cristais de cido rico; (b) Cristal de oxalato de clcio

Nas urinas de pH alcalino podem aparecer cristais de fosfato triplo de amnio


e magnsio. Normalmente no tm significado clnico. Contudo existem
alguns cristais como por exemplo os de cistina e leucina, que esto
associados a desordens metablicas.
Tricomonas: a sua presena deve ser referenciada ao mdico, para posterior
tratamento.

FIg. 17 Tricomonas

Leveduras: regra geral trata-se de Candida albicans. Tal como no caso


anterior a sua observao deve ser referenciada.

FIg. 18 Leveduras

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Anexos

2.10 Testes de aglutinao


1- Teste VDRL (Veneral Disease Research Laboratory )
um teste de floculao em lmina, para o diagnstico da sfilis, atravs da
pesquisa de anticorpos no soro ou plasma humanos. O antignio (reagente utilizado)
est ligado a partculas de carvo. Quando existem anticorpos no soro, ligam-se ao
antignio, provocando um floculado negro.
2- Reao de Waaler Rose
Teste de hemaglutinao em lmina para deteo do Fator Reumatide no soro
humano. Pensa-se que este fator constitudo por anticorpos IgM dirigidos contra as
prpias imunoglobulinas G dos pacientes. O reagente, uma suspenso de glbulos
vermelhos de carneiro estabilizados, cobertos de IgG de coelho, anti carneiro. Se a
amostra tiver o Fator Reumatide, produz-se uma aglutinao.

2.11 HCV

As Instrues resumidas abaixo so para usurios experientes do kit ImmunoComb


II HCV.
1. Trazer todos os reagentes e amostras temperatura ambiente e realizar o teste
na temperatura de 22 - 26C.
2. Dispensar 50 l de cada amostra e controlo nas cavidades da fileira A da Placa
Reveladora e misturar.
3. Inserir o Pente na fileira A e continuar como descrito na Tabela 1.
4. Durante as incubaes nas cavidades A e C, retirar e inserir o Pente
periodicamente.

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Anexos
Etapa

Fileira

Proceder como a seguir

Reao antignioanticorpo

Misturar; incubar por 10 minutos;


abosrver.

Lavagem

Agitar; incubar por 2 minutos; abosrver.

Ligao do conjugado

Misturar; incubar por 10 minutos;


abosrver.

Lavagem

Agitar; incubar por 2 minutos; abosrver.

Lavagem

Agitar; incubar por 2 minutos; abosrver.

Reao de cor

Misturar; incubar por 10 minutos.

Reao de parada

Incubar por 1 minuto; secar ao ar livre.

Tabela 2. Resumo do Procedimento de Teste.

Fig. 19 - Resumo dos principais precedimentos do teste

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