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CHIMIE ANALYTIQUE
Scolarit 2002-2003 PROMOTION 2001 - 2me Anne
Richard GATTIN
Septembre 2002
COLE SUPRIEURE D'INGNIEURS ET DE TECHNICIENS
POUR
L'AGRICULTURE
VAL DE REUIL / ROUEN BP 607 Rue Grande 27106 VAL DE REUIL Cedex - 02 32 59 14 59 Fax 02 32 59 66 21 Internet http://www.esitpa.org
RPUBLIQUE FRANAISE
Sige Social : ASSEMBLE PERMANENTE DES CHAMBRES D'AGRICULTURE - 9, avenue George V 75008 PARIS
SOMMAIRE
p. 3
- LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE
p. 6
p. 10
- REFRACTOMETRIE
p. 13
p. 17
p. 22
1.a) Objectifs
Mesurer pour chaque pression de 1 10psi par pas de 2:
-
CH3
H3C
H2
C
C
H2
H2
C
C
H2
H2
C
C
H2
CH3
Aprs avoir fix le dbit optimal, raliser une analyse une temprature gale la moyenne des
tempratures d'bullition (118,1C).
Rpter l'analyse avec une temprature infrieure et suprieure (90 et 150C). Mesurer tr. Calculer
Nth et R. Conclusions ?
3 - Analyse qualitative : Droite de Kovats
L'identification d'un solut inconnu peut-tre ralise le plus couramment :
-
par comparaison de son tr avec le tr d'un solut de rfrence analys exactement dans les
mmes conditions.
-
par le trac des droites en fonction du nombre de carbones pour des sries homologues de
CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE
Actone : 10%,
Tolune : 5%
1.b) Technique
* Extraction de la chlorophylle brute (ensemble de pigments chlorophylliens):
Trouver de lherbe bien verte. Aprs lavoir nettoye, la broyer dans un mortier avec une
pince de carbonate de calcium (CaCO3), afin de neutraliser le milieu, et un peu de sable, afin
dcraser les cellules. On obtient une pte homogne si le broyage est suffisant. Ajouter
progressivement 5 10 mL dalcool brler qui solubilise les pigments chlorophylliens. Filtrer
le contenu du mortier, on obtient une solution de chlorophylle brute.
bas de la bande), dposer deux petites (ou une grosse) goutte(s) de chlorophylle brute
avec une pipette pasteur.
.
On fixe la bande sur un support mtallique. Faire en sorte que la bande de papier ne
touche pas les bords de l'prouvette et qu'elle ne baigne dans le solvant que sur 1 cm
(voire schma 2).
.
Butanol
55.55%
Eau
22.22%
Acide actique
2.22%
Tracer trs lgrement au crayon graphite une ligne de dpt 2cm du bord infrieur de
Dposer, via un capillaire (un mme capillaire ne sert que pour dposer une seule
solution), 5 L de la solution de chaque acide amin et du mlange inconnu. Pour les solutions
avec deux phases non miscibles, bien agiter le flacon avant de prlever.
Chaque dpt ne doit pas excder 3mm de diamtre, il sera effectu en 3 4 fois en schant
entre chaque opration laide dun sche cheveux.
-
dans le solvant CCM. Laisser le solvant migrer sur 10 cm ou sinon marquer immdiatement le
front du solvant au crayon en sortant la plaque.
-
Mi = ki Ai
Ai = Aire du pic "i", Mi = masse de substance "i", ki = facteur de proportionnalit.
L'analyse quantitative se rduit la mesure de Ai et la dtermination de ki.
Il existe un facteur de proportionnalit par produit. Ce facteur varie avec beaucoup de
facteurs (solvants, phase stationnaire, temprature, dbit etc...)
Les talonnages sont difficiles faire car il faut maintenir tous ces paramtres constants
dans le temps. La mthode de l'talonnage interne permet de s'affranchir de ces problmes.
Les aires de chaque pic sont compares celles d'une substance rfrence introduite en
concentration connue dans le mlange. C'est une mthode relative qui permet d'obtenir des
rsultats la fois reproductibles et prcis avec une bonne exactitude.
Pratique de la mthode
Soit doser deux constituants dans une srie d'chantillons dont le chromatogramme
reprsentatif figure A permet l'introduction de l'talon E.
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Des solutions synthtiques sont ralises de faon encadrer les concentrations prsumes des
soluts, l'talon interne tant introduit teneur constante. Les relations de proportionnalit
s'crivent :
me = Ke Ae
m2 = K2 A2
m1 = K1 A1
Ai
Ae
En prenant la rponse de l'talon interne comme unit on peut dfinir les coefficients de rponse
relatif ki/e
mi
=
me
ki / e
Ai
Ae
Ki / e =
mi A e
me A i
A volume inject constant, la teneur en talon tant constante, on tudie la rponse pour chaque
solut par rapport E (fig. B) elle doit tre linaire.
ci = f Ai , C reprsentant la concentration
ce Ae
massique. On donne :
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Manipulation
On tracera 2 courbes d'talonnage, une par solut doser. Un talon interne (acide cafine
1g/L) est ajout au solvant (mthanol). Toutes les aires sont calcules par rapport celle du pic
de cafine.
Plan de manipulation :
1. Injecter les deux solutions mres dacide ascorbique 1g/L + cafine 1g/L (Solution A)
et dacide actylsalicylique 1g/L + cafine 1g/L (Solution B).
2. Identifier les pics obtenus grce au temps de rtention.
3. Faire votre gamme talon (Vous pouvez aprs avoir inject la solution inconnue
effectuer une comparaison ente les aires des diffrents pics et celles des 2 solutions mres,
raliser pour lacide ascorbique et lacide salicylique une gamme talon (5 points) de faon
ce que, pour chaque compos, les aires de solutions talons encadrent laire du signal du
compos dans la solution inconnue).
4. Injecter chacune des solutions prpares.
5. Calculer le coefficient de proportionnalit Ki/ de la vitamine C et de laspirine.
e
6. Tracer les deux droites de rfrence.
7. Calculer la concentration et les proportions de la vitamine C et de laspirine dans la
solution inconnue.
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REFRACTOMETRIE
c
v1
Exprimentalement, lindice de rfraction est dfini par le rapport entre les sinus de langle
dincidence, i et de langle de rfraction, r
rayon
incident
n=
sin i
sin r
r
Point
d'incidence
rayon
rfract
Lindice de rfraction dun liquide est habituellement compris entre 1,300 et 1,700.
Comme lindice de rfraction varie avec la temprature et la longueur donde de la lumire, on fait
gnralement suivre le symbole, n, dun indice suprieur reprsentant la temprature et dun indice
infrieur qui identifie la nature de la longueur donde de rfrence, le plus souvent la raie D du
sodium 589 nm; Dans les dictionnaires de constantes et les publications, lindice de rfraction est
habituellement rapport 20C et scrit ainsi: n20
Lindice de rfraction varie avec la temprature. Autour de 20C la loi est la suivante :
n20 = nt + 0,00045 (t-20)
Travaux Pratiques de Chimie Analytique
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dpolie;
-
Les rayons disperss traversent ensuite une mince couche du liquide, frappent la
face polie du prisme, P2, et se rfractent; aprs rflexion, ils traversent une srie de prismes
compensateurs, C, dont le rglage permet dobtenir une ligne nette entre une zone claire et
une zone sombre ;
-
et de lajuster au centre dun rticule, R, au moyen dun bouton, B, situ sur le ct droit de
lappareil.
-
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mL
Propanol
mL
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1 - Dfcation
Avant de procder au dosage des sucres, il faut les extraire de leur matrice naturelle (le lactose
pour le lait et le sucrose pour le jus de betterave). On procde une dfcation.
Dans une fiole jauge de 200 cm3, introduire exactement 20 cm3 de lait ou de jus de
betterave mesur la pipette puis 2 cm3 de ferrocyanure de potassium 15% avec
une pipette gradue, agiter.
Ajouter 2 cm3 d'actate de zinc 30%, agiter.
Ajouter environ 100 cm3 d'eau, puis 1 cm3 d'actate neutre de plomb 10%. Agiter.
Complter au trait de jauge avec de l'eau distille.
Ajouter 2 cm3 d'eau la pipette pour tenir compte du volume prcipit, boucher.
Agiter plusieurs fois par retournement. Laisser reposer 15 minutes. Filtrer sur filtre pliss.
2 - Dosage du lactose dans le lait (Dosage par la mthode de Bertrand)
2.a) Principe
Mthode de dosage rductimtrique base sur la rduction de la liqueur de Fehling par des
glucides rducteurs en milieu alcalin chaud. Cette technique ancienne est encore utilise pour les
dosages de glucides dans les aliments. Il s'agit de la mthode officielle d'analyse qui est plus prcise
que la mthode de Fehling.
Elle utilise le caractre rducteur des sucres. La liqueur cuprotartrique est rduite dans des
conditions prcises. L'oxyde Cu2O form est recueilli, on le fait agir sur du sulfate ferrique en excs
qui est partiellement rduit en sulfate ferreux que l'on dose par le permanganate de potassium.
Les ractions ne sont pas totalement stchiomtriques. Des tables dues G. Bertrand permettent
de passer du volume de permanganate N/10 vers au titre en sucre de la solution.
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2.b) Protocole
* Rduction de la liqueur de Fehling
Principe
La raction n'est pas stchiomtrique et dpend des conditions opratoires.
La quantit de Cu2O n'est pas proportionnelle la quantit de glucide oxyd. Puisqu'il n'y a
pas de relation de proportionnalit entre le glucide oxyd et le prcipit de Cu2O form, il faut
utiliser une table, construite exprimentalement pour diverses concentrations en glucide. Les tables
de G. Bertrand donnent une relation entre la masse de cuivre dans Cu2O et la masse de sucre dans la
prise d'essai. Il faut donc isoler le prcipit de Cu2O.
Ecrire la raction de rduction de la liqueur de Fehling par les glucides
Mode opratoire
introduire dans un erlenmeyer de 200 mL:
20 mL (prouvette) de solution cuivrique A (10 100 mg de glucose)
20 mL (prouvette) de solution tartroalcaline B
10 mL (pipette jauge) du dfqut filtr
10 mL d'eau
Porter le liquide bullition qui est maintenue exactement pendant 3 minutes en vitant
les projections. Laisser dposer le prcipit d'oxydule pendant quelques instants.
* Isolement de Cu2O
Principe
On isole le prcipit aprs lavage par filtration sur verre fritt de porosit N 4 (tube
d'Allihn). Mais Cu2O peut se r oxyder l'air en CuO. Il faut donc le soustraire imprativement
l'action de l'O2 de l'air en le recouvrant de liquide et utiliser de l'eau distille prive d'O2.
Ncessit d'un lavage parfait pour liminer les ractifs en particulier le tartrate de la solution de
Fehling B qui compromettrait la suite de la manipulation (en particulier le virage du dosage
manganimtrique).
Il n'est donc pas possible de scher Cu2O pour le peser.
Mode opratoire
Adapter une rondelle de filtre sur le dispositif de filtration sous vide. Verser la solution
surnageante (bleue) dans le filtre en s'aidant d'un lger vide et en veillant entraner tout le
prcipit. Rincer 3 fois le prcipit avec 20 mL d'eau distille. Rcuprer la rondelle de filtre
contenant l'oxydule et la dposer dans un bcher contenant 20 mL de solution ferrique et 20 mL
d'eau. Dissoudre le prcipit par agitation jusqu' disparition totale de l'oxydule.
* Dosage du Cu2O isol par manganimtrie
Principe
Oxydation de Cu2O par une solution ferrique acide. On r oxyde totalement Cu2O isol
par une solution ferrique (FeIII). En prsence dun excs de ferIII tout le prcipit de Cu2O est
oxyd.
Ecrire la raction doxydation
Travaux Pratiques de Chimie Analytique
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Ensuite dosage des ions ferreux forms. Le dosage s'effectue avec une solution de KMnO4
de concentration connue. Fin de raction : une goutte de KMnO4 en excs donne une couleur rose.
On peut aussi utiliser un indicateur d'oxydorduction (o. phnanthroline ferreuse qui passe du rouge
au bleu).
Ecrire la raction de dosage
Mode opratoire
A l'aide d'une burette lectrique, verser la solution dci normale de permanganate
directement dans la fiole jusqu' virage au violet et lger.
2.c) Calculs
On utilise des tables empiriques, construites exprimentalement qui permettent de relier la
quantit de glucide oxyd au KMnO4 mis en oeuvre.
Il suffit alors de se reporter dans la table de Bertrand et de procder le cas chant une
interpolation linaire.
Dterminer la quantit de sucre exprime en mg se trouvant dans la prise d'essai en se
rapportant aux tables suivantes.
3 - Dosage du sucrose dans le jus de betterave
3.a) tude du pouvoir rotatoire du saccharose
Le saccharose est une substance optiquement active qui peut tre dose par polarimtrie.
Les substances optiquement actives sont capables de dvier le plan de polarisation de la lumire
d'un angle. La valeur de cet angle dpend :
Travaux Pratiques de Chimie Analytique
20
rotatoire
-
de la nature de la substance qui est caractrise par une constante appele pouvoir
spcifique.
de la longueur de l'chantillon que traverse le rayon lumineux.
de la concentration de la solution.
100
1 c
= angle mesur
0 = pouvoir rotatoire spcifique
l = longueur de l'chantillon (dm)
c = concentration de la solution (g/100mL)
Pour dterminer la concentration d'une substance, il faut dterminer son pouvoir rotatoire
spcifique partir d'une solution talon.
3.b) Dtermination du pouvoir rotatoire spcifique du saccharose
Peser avec le maximum de prcision 2 morceaux de sucres dans un petit bcher propre.
Ajouter quelque cm3 d'eau et entraner la totalit du sucre dans une fiole jauge de 100 cm3
surmont d'un entonnoir.
Bien dissoudre le sucre compltement avant de remplir d'eau jusqu'au trait de jauge.
Homogniser trs soigneusement.
Emplir d'eau le tube polarimtrique pour dterminer le zro de l'appareil.
Vider l'eau et scher le tube.
Remplir avec la solution de saccharose
Mesurer l'angle de dviation
Dterminer le pouvoir rotatoire spcifique du saccharose.
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lactose
solution KMnO4
lactose
solution kMnO4
lactose
solution KMnO4
lactose
solution KMnO4
en mg
en ml
en mg
en ml
en mg
en ml
en mg
en ml
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
2.26
2.48
2.70
2.92
3.13
3.36
3.49
3.80
4.02
4.23
4.47
4.70
4.90
5.12
5.35
5.55
5.77
5.97
6.21
6.40
6.62
6.85
7.07
7.28
7.47
7.66
7.89
8.11
8.32
8.55
8.73
8.94
9.14
9.35
9.54
9.74
9.98
10.10
10.30
10.50
10.80
11.00
11.10
11.30
11.60
11.80
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
11.90
12.10
12.30
12.60
12.80
13.00
13.20
13.30
13.60
13.80
14.00
14.20
14.40
14.60
14.80
15.00
15.20
15.40
15.60
15.80
16.10
16.30
16.40
16.60
16.80
17.00
17.20
17.40
17.60
17.70
18.00
18.20
18.40
18.60
18.80
18.90
19.20
19.40
19.60
19.80
19.90
20.10
20.30
20.60
20.70
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
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35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
3.24
3.55
3.87
4.17
4.49
4.80
5.12
5.43
5.73
6.05
6.36
6.67
6.96
7.27
7.57
7.84
8.14
8.45
8.74
9.03
9.33
9.63
9.94
10.10
10.40
10.70
11.00
11.30
11.60
11.90
12.20
12.50
12.70
13.00
13.30
13.60
13.90
14.10
14.40
14.70
15.00
15.20
15.50
15.80
16.10
16.40
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
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73
74
75
76
77
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87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
16.60
16.90
17.20
17.40
17.70
18.00
18.20
18.50
18.80
19.00
19.30
19.50
19.80
20.10
20.30
20.50
20.80
21.10
21.30
21.60
21.80
22.10
22.40
22.60
22.90
23.20
23.40
23.70
23.90
24.10
24.30
24.60
24.80
25.10
25.30
25.60
25.90
26.10
26.30
26.60
26.80
27.00
27.30
27.50
27.80
22
1 - GENERALITES
Comme les autres mthodes danalyse chimiques et physiques, la spectrophotomtrie dabsorption
atomique ncessite la minralisation et la mise en solution des composs et lments minraux libres
ou combins dans le milieu. Deux types de mthodes sont possibles : lune par voie sche, lautre par
voie humide.
La minralisation par voie sche ncessite une calcination totale de lchantillon et prsente
linconvnient dun long temps dexcution.
La minralisation par voie humide consiste en la destruction de la matire organique par un oxydant
en prsence dun ou plusieurs acides minraux forts. Assurant la solubilisation des lments librs.
2 - PRINCIPE DE LA SPECTROPHOTOMETRIE DABSORPTION ATOMIQUE
Un faisceau de lumire monochromatique de frquence, tel quil soit absorbable par llment doser
est envoy dans une vapeur atomique de cet lment. La mesure de lintensit lumineuse avant et
aprs le passage dans la vapeur atomique permet de dterminer le pourcentage dabsorption dans des
conditions bien dtermines, celui ci est proportionnel non seulement la concentration en atomes de
la vapeur atomique, mais surtout la concentration de la solution que lon tudie.
3-PARTIE EXPERIMENTALE
On veut doser le Magnsium et le Potassium dans des chantillons deau minrale, de faon vrifier
le dosage fourni sur ltiquette.
Ces dosages ne ncessitent pas de phase de minralisation puisque les lments minraux sont dj en
solution.
Prparer une gamme dtalonnage par dilution successive dune solution mre 1 g/L de llment
doser, selon les valeurs prescrites. Diluer ventuellement lchantillon de faon ce quil puisse tre
dos en utilisant cette gamme talon.
Travaux Pratiques de Chimie Analytique
23
Aprs avoir mesur labsorbance de la gamme et des chantillons, tracer la courbe A=f (C), o A est
labsorbance et C la concentration massique de llment recherch.
En dduire la concentration massique de cet lment dans les chantillons.
Magnsium:
Mthode, Absorption Atomique 285,2 nm
Gamme utilise
10,0
7,5
5,0
2,5
1,0
mg/L
Potassium:
Mthode, Emission de Flamme 756 nm
Gamme utilise 5,0
4,0
3,0
2,0
1,0
mg/L
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