Ross, 1994

Cuando hablamos de un
conjunto organizado de
clulas que funcionan en
forma colectiva, estamos
aludiendo, por definicin a un
Tambin llamada
anatoma
tejido.
microscpica

Ms adelante menciona las uniones

intercelulares especializadas (nexo),
que facilitan la colaboracin entre
clulas.

Gartner y Hiatt,
1997
Las clulas
similares o
relacionadas que
funcionan de una
manera particular
o tienen una
finalidad en
comn, se
agrupan para
formar tejidos

Finn Geneser, 2005

Los tejidos se
forman por la
agrupacin de
clulas para
desarrollar
colectivamente una
funcin especial
Ms adelante menciona
la matriz extracelular
como importante para el
tejido conectivo.

Definicin Actual
Por definicin un tejido es
una agrupacin de clulas
diferenciadas en forma y
funcin, que interaccionan
entre s para cumplir una
funcin o ms. Todas las
clulas de un tejido en
particular se definen
tambin por la composicin
qumica de la matriz
extracelular.

Hablar de tejidos es til a los

fines descriptivos, facilita el
estudio de la estructura
corporal.
Pero debemos estar atentos a
sus limitaciones
No todos los tejidos forman
rganos.
Un tejido no es un simple
conjunto de clulas.
La clasificacin de tejido es
conflictiva ya que no se
encuentran en forma pura ni
aislada: se yuxtaponen, se
entremezclan y se combinan
para formar rganos. Son
interdependientes.

METODOLOGA DE ESTUDIO EN LA
HISTOLOGA

TECNICAS HISTOLOGICAS:
Es el conjunto de operaciones que se somete un
material organizado para hacer posible su estudio por
medio del microscopio, posibilitando la observacin de
las estructuras no visibles al ojo humano.

TECNICAS HISTOLOGICAS:

1-Examen inmediato o in vivo:

a) En fresco: animales unicelulares y clulas
libres.
b) Coloracin vital: usando soluciones de
colorantes no txicos (colorantes vitales),
coloracin intravital o in vivo, y la coloracin
supravital, donde pueden colorearse clulas
libres o porciones de rganos.

2- Examen mediato o post-mortem:

Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie
de pasos, la Tcnica histolgica.

1-Examen inmediato o in vivo:

Estado Fresco:
Plasma Sanguneo
Albmina
Humor Acuoso o Lquido Amnitico
Soluciones Fisiolgicos o Ringer
Coloraciones Vitales:
Colorantes muy diludos que no daan el tejido
Carmn, Azul de Metileno o Rojo Neutro
Intravital
Supravital

2- Examen mediato o post-mortem:

Toma de muestra:

Debe ser rpida.

Hay que tener en cuenta las caractersticas del

rgano (muy hidratado, contrctil, colapsa, etc)

Biopsia.
Autopsia (p/ humanos, post mortem)

Obtencin del material de estudio:

Puede provenir de:

biopsias quirrgicas,

material obtenido de necropsias,

utilizando animales de laboratorio,

estudios experimentales en animales,

material de cultivos de tejidos,

frotis o extendidos.

2- Examen mediato o post-mortem:

1 Fijacin

2 Lavado y deshidratacin
Impregnacin
Orientacin

4 Inclusin

3 Aclarado

Solidificacin

5 Tallado

6 Corte

8 Desparafinizacin

9 Hidratacin
12 Montaje final
13 Observacin

7 Montaje

10 Coloracin
11 Deshidratacin

1 Fijacin:
Es el proceso Fsico (Histoqumico) que logra una
situacin estable de los constituyentes tisulares,
interrumpiendo las reacciones enzimticas de
autlisis.
Cualidades de un buen fijador:
1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolticos.
2) Buen poder de penetracin.
3) Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido.
4) No interferir y facilitar los procesos posteriores.
5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.
6) Insolubilizar los componentes de los tejidos.
7) No producir estructuras artificiales.

Clasificacin de los fijadores:

1- Fijadores qumicos: Desnaturalizan y estabilizan protenas Son los
ms empleados y pueden ser:
a) Simples: constituido por una sola sustancia.
Formol al 10%: Es muy usado.
Aldehdo glutrico o glutaraldehdo al 2.5 % (M electrnica)
Acetona en fro.
b) Compuestos o mezclas fijadoras: constituidas por varias
sustancias.
Liquido de Flemming: (mezcla cido pcrico-osmo-cido actico cromo-osmioactica) para estudios citolgicos.
Liquido de Bouin: (mezcla cido pcrico-formol-cido actico). El mejor fijador
para los trabajos corrientes. Muy penetrante.
2- Fijadores fsicos:
Desecacin (microorganismos)
Calor (Coagulan protenas)
Fro
Congelacin y desecacin

2 Lavado y deshidratacin:
3 Aclaramiento:

serie creciente de OH.

Es el paso donde se pasa el tejido a una

solucin miscible (se la llama lquido intermediario) : xilol,

toluol, alcohol butlico o benceno.

4 Inclusin
Es impregnar la pieza con una sustancia que le confiere dureza y permite
obtener cortes uniformes y delgados.
En la tcnica corriente, se utiliza la parafina; que es insoluble en agua
(deshidratacin previa, paso 2).
Puede ser un medio acuoso (gelatina o agar-agar) o anhidro (parafina,
celoidina, paraplast o resinas sintticas). Este medio disuelve el lquido
intermediario y penetra en el tejido (por ejemplo la parafina a 60C). El
objetivo de esto es brindar posteriormente un soporte slido que permita
el corte del tejido en delgadas capas.

5 Tallado
Para eliminar exceso de parafina . Se elimina la parafina con un cuchillo, en forma
de pirmide truncada, con el objeto de que no ofrezca resistencia al ser cortado en
el micrtomo.

6 Corte
Para obtener cortes finos (lminas de 3-8 micrones)se utilizan aparatos
denominados micrtomos. Existen diferentes tipos de micrtomos
(deslizamiento y rotacin), segn el medio de inclusin y microscopia.

7 Montaje
Se coloca el corte en un bao de agua caliente, para que se estire.
Se extienden sobre el portaobjetos una pelcula de albmina o gelatina.
Se levantan los cortes con un pincel y se colocan sobre el portaobjetos.
El portaobjetos se lleva a la estufa para terminar de estirar.
Bao histolgico para extendido del corte.

c: Secado

8, 9 Desparafinizacin e hidratacin

Dado que la parafina ha cumplido su funcin de soporte en el

corte, es necesario sacarla, ya que dada su naturaleza
anhidra, no permitira la accin de los colorantes
(generalmente acuosos o polares) en los tejidos.
Para ello debe desparafinarse previo a la coloracion por
medio de un tratamiento con xilol.

Luego se rehidrata el corte mediante pasajes por

concentraciones decrecientes de alcohol.

10 Coloracin
Los colorantes se pueden clasificar como:
a) cidos: Tienen cargas negativas. Se unen a grupos catinicos como los grupos
aminos de las protnas. Actan a pH bajo. Eosina, azul de anilina, fucsina cida
orange G. Son colorantes citoplasmticos.

b) Bsicos: Presentan cargas positivas. Se unen a los grupos fosfato de los cidos
nuclecos , grupos sulfato de los glucosaminoglicanos (Gags) y grupos carboxilo de
protenas. Acta a pH alto ya que los grupos se ionizan y se unen al colorante.
Hematoxilina, azul de metileno, azul de toluidina. Son colorantes nucleares.

c) Neutros: Colorean citoplasma y ncleo de diferente color. Eosinato de azul de

metileno.
Sustancias basfilas se colorean con colorantes bsicos
Sustancias acidfilas se colorean con colorantes cidos
Sustancias neutrfilas se colorean con colorantes neutros

Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloracin

La Eosina es un colorante cido (predomina densidad de carga negativa),
se asocia y colorea a estructuras catinicas del citoplasma y matriz
extracelular, tales como: filamentos citoplasmticos (como los de clulas
musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus
aminocidos bsicos ionizados).
La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante bsico,
por lo cual se asocia y colorea estructuras aninicas (que posean fosfatos, sulfatos
y/o carboxilos ionizados):
Heterocromatina y nuclolos
RNA ribosomal
Matriz extracelular
(por los sulfato de los GAG)

Hematoxilina-eosina
Ncleo: violeta.
Citoplasma: rojizo.

Diferentes
coloraciones

11 Deshidratacin: mediante la accin de alcoholes de gradacin

creciente: 70, 80, 90 y 100, sucesivamente hasta eliminar el agua.

12 Montaje final:
El montaje consiste en
Homogenizacin o aclaracin: se emplea el benzol o xilol a los que se le
puede agregar cido carbnico o fnico para aumentar su eficacia, estos
son muy vidos de agua.
Colocacin del cubreobjeto: con la finalidad de proteger el preparado, se
lo recubre con un cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al portaobjeto
se emplean resinas, por ejemplo: el Blsamo de Canad.

PROBLEMAS DE INTERPRETACION
al visualizar los cortes con el Microscopio
Artefactos de tcnica: Cambios estructurales inducidos

por la tcnica histolgica aplicada. Algunos de los ms comunes

son:
Melladuras: defectos en la cuchilla de corte del tejido al
tomar la muestra o al cortar en el micrtomo.
Encogimientos, Retraccin
Pliegues (mal extendido)
Precipitados (mala coloracin)
Manejo poco cuidadoso
Degeneracin post mortem (mal fijado)

Conceptuales

Debidos a una interpretacin inadecuada, a que las clulas pueden

presentar tamaos diferentes, a que se ven imgenes en 2D en
lugar de 3D, etc.