PLAN DE CLASES

Fisiologa II
Medicina 2do ao
primer semestre
FOE: Prctica de laboratorio
Tema 1: Sangre
Ttulo: Coagulacin de la sangre y grupos sanguneos.
Sumario:
1. Mtodos de laboratorio para el estudio de la coagulacin sangunea:
-coagulacin bajo diversas condiciones
- recalcificacin del plasma oxalatado
-tromboplastina clcica
-retraccin del cogulo.
2. Determinacin de grupos sanguneos.
Pregunta inicial: 10 minutos.
Objetivos:
1. Interpretar a partir de los resultados de los experimentos, la naturaleza del
proceso de coagulacin y el papel de los diferentes factores que participan
promoviendo o evitando su desarrollo.
2. Predecir posibles modificaciones de los resultados de los experimentos relativos
a la coagulacin sangunea, cuando se alteran diferentes factores involucrados en
este proceso, teniendo en cuenta el papel de esos factores y los mecanismos
implicados, en las condiciones del experimento y en otras posibles condiciones de
importancia clnica.
3. Interpretar los resultados de las pruebas de hemoclasificacin, teniendo en
cuenta las reacciones antgeno-anticuerpo que se producen, aplicndolos a la
seleccin de posibles donantes y receptores para transfusiones sanguneas,
segn los criterios de transfusin establecidos.
Introduccin:
En el organismo existen factores que favorecen la coagulacin (procoagulantes) y
factores que la previenen (anticoagulantes). En condiciones fisiolgicas hay un
predominio de los factores anticoagulantes por lo que la sangre se mantiene fluida
en el interior de los vasos sanguneos. Sin embargo, cuando se lesiona algn
tejido, o cuando se modifican o alteran algunos de los componentes de la sangre,
este equilibrio se rompe, dando lugar a un conjunto de reacciones enzimticas que
determinan finalmente la formacin de un cogulo de sangre.
En la prctica de laboratorio anterior se analizaron algunas propiedades de la
sangre.
Hoy vamos a realizar experimentos relacionados con el proceso de coagulacin de
la sangre y con la determinacin de grupos sanguneos.
Mediante las experiencias que llevaremos a cabo, demostraremos adems, la
existencia de dos mecanismos de coagulacin: el intrnseco y el extrnseco.
Tambin realizaremos determinaciones de los grupos sanguneos del sistema ABO
y Rh mediante sueros hemoclasificadores. Este proceder tiene gran importancia,
ya que en la prctica mdica se presentan innumerables situaciones en las que es
necesario transfundir sangre o alguno de sus componentes de un individuo a otro;

de ah que deba clasificarse correctamente la sangre para evitar reacciones

postransfusionales.
Primeramente, vamos a identificar los materiales situados en la mesa de trabajo:
1. Gradilla con tubos de ensayo pequeos (tubos de Kahn)
2. Beakers
3. Tubo de ensayo de 20 ml con oxalato seco.
4. Jeringuilla unida a un catter de polietileno
5. Pipetas y tubos de ensayo, limpios y secos.
6. Solucin de cloruro de calcio al 1%
7. Suero fisiolgico (cloruro de sodio al 0.9%)
8. Sueros clasificadores (anti A, anti B, anti D)
9. Porta-objetos
10. Gotero
11. Varillas de cristal
Para obtener la sangre que analizaremos, se realiza una puncin venosa a un
voluntario, en este caso, supuestamente sano.
Desarrollo:
Experimento 1: Coagulacin bajo diversas condiciones
Se deposita aproximadamente 1 ml de sangre en 3 tubos de Kahn, limpios y
secos e inmediatamente se colocan en los beakers: uno contiene hielo, otro agua
a 38 grados celsios, y el otro no contiene nada, es decir, se encuentra a
temperatura ambiente. Se coloca adems, la misma cantidad de sangre en el
cuarto tubo, que contiene heparina.
El resto de la sangre se pasa al tubo con oxalato. Esta sustancia ya ustedes
conocen que es un anticoagulante. De esta sangre oxalatada separamos
aproximadamente 2 ml para determinar posteriormente grupos sanguneos, y el
resto se centrifuga.
Determinaremos el tiempo que demora en coagular la sangre en cada tubo de la
siguiente manera:
Pasados uno o dos minutos de depositada la sangre comenzamos a ladear cada
tubo de Kahn de forma repetida cada 30 segundos aproximadamente, hasta
comprobar que la superficie del lquido no se desplaza, es decir, la sangre se ha
coagulado.
Como podremos observar la sangre coagula primero en el tubo que est a 38
grados Celsius, despus en el que se encuentra a temperatura ambiente y por
ltimo, en el tubo a cero grado Celsius. En el tubo con heparina la sangre no
coagula. El tiempo que demora el tubo a temperatura ambiente es de 6 -7 minutos
aproximadamente, que es el tiempo que demora normalmente la coagulacin.
Preguntas tipo:
1. Por qu coagul primero la sangre en el tubo a 38 grados Celsius?
Esta temperatura es cercana a la temperatura ptima de las enzimas, y en la
formacin del cogulo estn implicadas reacciones enzimticas (los factores de la
coagulacin son enzimas). A bajas temperaturas este proceso se enlentece, como
sucedi en el tubo a cero grado, porque se inhiben las enzimas.

2. Qu sucedera si se aumenta mucho la temperatura?

No se producira la coagulacin porque se desnaturalizaran las protenas.
Distinguir este proceso enzimtico de la coagulacin sangunea, del proceso de
coagulacin que se produce por desnaturalizacin de las protenas, por ejemplo al
hervir albmina del huevo.
Mediante esta experiencia se demuestra la naturaleza enzimtica del proceso de
coagulacin.
3. Por medio de qu mecanismo ocurri la coagulacin en los tubos de ensayos?
Por medio del mecanismo intrnseco para iniciar la coagulacin. Comienza con la
activacin por contacto con las paredes del tubo, de las plaquetas y del factor XII.
4. Cmo podramos impedir o retardar esa activacin?
Utilizando tubos siliconados o de material plstico completamente liso, que impide
que se active el factor XII. Un papel semejante desempea la lisura del endotelio
vascular. Este recurso se utiliza en los bancos de sangre.
5. Qu ocurrira si aadiramos vitamina K al tubo que se encuentra a
temperatura ambiente? Se acelerara o no la coagulacin?
No se acelerara, puesto que la vit. K no es un factor que participa en la
coagulacin, slo acta en el hgado, en el proceso de sntesis de protrombina y
de factores VII, IX y X.
6. Por qu no coagula la sangre en el tubo con heparina?
La heparina es un anticoagulante que al combinarse con la antitrombina III y
formar el complejo antitrombina-heparina, aumenta mucho la eficacia de la
antitrombina III, trayendo como consecuencia inactivacin de la trombina y de los
factores activados IX, X, XI, XII.
Experimento 2: Recalcificacin del plasma oxalatado.
Del tubo con sangre oxalatada y centrifugada, tomamos con la jeringuilla unida al
catter de polietileno todo el plasma y lo vertimos en un tubo de ensayo.
De este plasma oxalatado tomamos con una pipeta 0.5 ml y lo depositamos en un
tubo de ensayo grande. Se le aade 12.5 ml de suero fisiolgico y 0.5 ml de
cloruro de calcio al 1%.
Dejamos reposar el tubo unos 30 minutos y observamos.
Como podrn ver, se produce la coagulacin del plasma. Se forma una malla de
hilos de fibrina.
Preguntas tipo:
1. Cmo explicar que el plasma oxalatado al inicio de esta experiencia no
coagulaba y al aadirle cloruro de calcio se produjo la coagulacin?
Las sales de oxalato precipitan el calcio del plasma, por lo que se reducen tanto
sus concentraciones que se bloquean las reacciones de la coagulacin. Al

aadirle calcio inico, el plasma recupera la capacidad de coagularse. Este

experimento demuestra la importancia del calcio inico, que el plasma contiene
todos los factores de la coagulacin, y nos permite adems observar la formacin
de la malla de fibrina.
Es importante destacar que esa malla que observamos se ha producido con un
plasma que
fue diluido en suero fisiolgico; en el plasma normal las
concentraciones de fibringeno son mucho mayores y por tanto la malla de fibrina
es muchsimo ms compacta, y capaz de atrapar los elementos formes de la
sangre.
2 Ser posible observar trastornos de la coagulacin por dficit de calcio en los
pacientes?
No, porque el Ca+2 acta como cofactor, por tanto se necesita en pequesimas
cantidades y adems no se consume, por tanto la hipocalcemia provocara la
muerte del paciente por tetania y convulsiones antes de que pueda afectarse la
coagulacin.
Experimento 3: Tromboplastina clcica
En un tubo de ensayo de Kahn depositamos 2 gotas de plasma oxalatado.
Agregamos 2 gotas de tromboplastina clcica e inmediatamente medimos el
tiempo de coagulacin.
Preguntas tipo:
1. Por qu es necesario que la tromboplastina sea clcica en este experimento?
Porque el plasma est oxalatado y no tiene calcio inico.
2. Si comparamos con los tiempos de coagulacin obtenidos en el primer
experimento, vemos que hay una gran diferencia: con la tromboplastina la
coagulacin ocurre en segundos mientras que en el primer experimento ocurri en
minutos.
A qu podemos atribuir esta diferencia?
En este experimento se pone de manifiesto el mecanismo extrnseco de inicio de
la coagulacin, que es de naturaleza explosiva y en el organismo se inicia por la
liberacin de tromboplastina tisular por el tejido daado. Es una va que implica
pocos factores y que no tiene tantos pasos, por eso ocurre tan rpidamente.
Recordar que la diferencia fundamental entre las vas extrnsecas e intrnsecas
est en cmo ocurre la activacin del factor X. A partir de ese paso ambas vas
son comunes.
Experimento 4: Retraccin del cogulo
Al cabo de una hora observamos lo ocurrido en los tubos de ensayo del primer
experimento donde la sangre haba coagulado.
Como podrn observar, hay presencia de un lquido transparente.
El cogulo se ha retrado, y el lquido que se separa del cogulo retrado recibe el
nombre de suero. Todo el fibringeno y gran parte de los factores de la
coagulacin han participado en el proceso de formacin del cogulo, por lo que
estn ausentes en el suero. Es en este sentido que el suero difiere del plasma
sanguneo, por tanto, el suero no puede coagular por carecer de tales factores.

Para la retraccin del cogulo es necesario que estn presentes las plaquetas. En
consecuencia, la falta de retraccin indica que el nmero de plaquetas en sangre
circulante es bajo o su funcin deficiente.
Preguntas tipo:
1. Qu es el suero?
Plasma sin los factores de coagulacin que se consumieron al formar el cogulo.
2. Por qu son importantes las plaquetas para que haya retraccin del cogulo?
Porque unen fibras de fibrina, liberan sustancias procoagulantes (factor
estabilizador de fibrina), causan ms enlaces cruzados entre las fibras de fibrina,
contribuyen a la contraccin del cogulo al activar las molculas de trombostenina,
actina y miosina.
Experimento 5: Determinacin del grupo sanguneo.
De la sangre hecha incoagulable, depositamos una gota en cada porta-objeto.
Aadimos a cada gota de sangre, una gota de suero anti A, anti B y anti D
respectivamente. Recordar que los sueros son concentrados de anticuerpos
contra los antgenos respectivos.
Mezclamos cada gota de sangre con el suero aadido.
Esperamos unos minutos y observamos.
Preguntas tipo:
1. A qu grupo sanguneo pertenece esta sangre?
Ocurri aglutinacin con los sueros--------- lo que indica presencia de
aglutingenos----------, por lo que esta sangre es --------.
Ejemplo: Ocurri aglutinacin con los sueros anti A y anti D, lo que indica
presencia de aglutingenos A y D, por lo que esta sangre es A positiva.
3. De quin pudiera recibir sangre este sujeto?
Recordar los criterios de transfusin. Primero: Aglutininas del receptor: si el sujeto
es A+ tiene en su plasma aglutininas anti B, por lo que no puede recibir ninguna
sangre que contenga antgeno B, es decir ni B ni AB. Por lo tanto slo puede
recibir sangre A y sangre O, que no tiene antgenos. En cuanto al Rh, si el sujeto
es +, quiere decir que posee antgeno Rh, y por tanto puede recibir sangre que lo
posea, o que carezca de ese antgeno, es decir A + puede recibir sangre de A+ y Ay tambin de O+ y O-. A un sujeto Rh negativo nunca se le debe transfundir sangre
Rh positiva. Recordar el segundo criterio de transfusin: Cuando se utiliza sangre
que no es la del paciente, slo deben administrarse pequeas cantidades (hasta
500ml) porque con volmenes mayores las aglutininas del donante pueden
aglutinar los glbulos rojos del donante. La sangre del grupo O posee en su
plasma anti A y tambin anti B.
Ejemplo: Un paciente A positivo puede recibir sangre de su mismo grupo (A
positivo) y de A negativo (Un positivo puede recibir cualquier cantidad de sangre
negativa, excepto en el caso de estar sensibilizado el donante, lo que no debe ser
lo ms frecuente) , y en pequeos volmenes de: O positivo y O negativo.
4. A quin pudiera donarle sangre este paciente?
Ejemplo: Un paciente A positivo puede donarle sangre a individuos de su mismo
grupo (A positivo), y en pequeos volmenes a sujetos con grupo AB positivo.

Conclusiones:
1. El tiempo de coagulacin puede ser modificado por la temperatura, lo que
demuestra la naturaleza enzimtica de este proceso.
2. El calcio inico es indispensable para que se produzca la coagulacin
sangunea.
3. Existen dos mecanismos de coagulacin: intrnseco y extrnseco.
4. El mecanismo extrnseco de la coagulacin es explosivo.
5. El suero no contiene la mayor parte de los factores de la coagulacin, lo que lo
diferencia del plasma.
6. La correcta clasificacin de la sangre es posible con los sueros clasificadores y
las reacciones de aglutinacin que se observan.