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Universidade Federal Fluminense

Faculdade de Medicina Veterinria


Programa de Ps-Graduao em Clnica e Reproduo Animal

KATIA MOREIRA DA SILVA

AVALIAO CITOLGICA DO LAVADO TRAQUEAL DE


EQINOS DE PLO PS EXERCCIO

Niteri
2010

24

KATIA MOREIRA DA SILVA

AVALIAO CITOLGICA DO LAVADO TRAQUEAL DE EQINOS DE PLO


PS EXERCCIO.

Dissertao apresentada ao Programa de Psgraduao em Clnica e Reproduo Animal da


Universidade Federal Fluminense, para a obteno
do ttulo de Mestre. rea de concentrao:Clnica
e Reproduo Animal.

Orientador: Prof. Dr. DANIEL AUGUSTO BARROSO LESSA

Niteri
2010

25

KATIA MOREIRA DA SILVA

AVALIAO CITOLGICA DO LAVADO TRAQUEAL DE EQINOS DE PLO


APS O EXERCCIO PS EXERCCIO

Dissertao apresentada ao Programa de Psgraduao em Clnica e Reproduo Animal da


Universidade Federal Fluminense, para a obteno
do ttulo de Mestre. rea de Concentrao:Clnica
Mdica Animal.

Aprovada em Maro de 2010

Banca Examinadora

___________________________________
Prof. Dr. Daniel Augusto Barroso Lessa
UFF

__________________________
Prof. Dr. Wilson Roberto Fernandes
FMVZ/USP

_____________________________________
Prof. Dr. Paulo de Tarso Landgraf Botteon
IV /UFRRJ

26

S586

Silva, Katia Moreira da


Avaliao citolgica do lavado traqueal de
eqinos de plo ps exerccio)/Katia Moreira da
Silva; orientador Daniel Augusto Barroso Lessa. 2010.
57f.
Dissertao (Mestrado em Clnica e Reproduo
Animal) Universidade Federal Fluminense, 2010.
Orientador: Daniel Augusto Barroso Lessa

1. Citodiagnstico. 2. Cavalo de Polo. 3.


Citologia. 4. Endoscopia veterinria.
I. Ttulo.
CDD 636.089607582

27

DEDICATRIA

A minha me, Elisabeth, por ser meu apoio, meu alicerce, meu tudo.
Ao Bernardo pelo apoio, compreenso e pacincia,
principalmente nestes dois ltimos anos.
Aos meus novos amigos, os cavalos.

28

AGRADECIMENTOS
Ao meu orientador, Prof. Daniel Lessa pelo apoio constante, ensinamentos e
compreenso.
Aos comandantes do Regimento de Cavalaria de Guardas Andrade Neves (RCGd/EB)
pela autorizao para utilizao dos animais neste trabalho. A todos do regimento pela
colaborao e auxlio, em especial ao tenente Estevo Grossi e tenente Henri.
Aos proprietrios dos animais do Itanhang Golf Clube por disponibilizarem os
animais para este estudo. Ao mdico veterinrio Alexandre pela disponibilidade e ajuda
inestimvel sem a qual seria impossvel a realizao deste trabalho.
Ao grupo de pesquisa em medicina de eqdeos da Universidade Federal Fluminense
(HIPIATRAS) em especial aos amigos Joana, Aline, Juliana, Denis, Maria Luisa e Vanessa
pela amizade, companheirismo e apoio demonstrados nessa misso. Sem a ajuda de vocs,
certamente este trabalho no teria chegado a lugar nenhum.
A Mdica Veterinria Eliene Sad por sempre se dispor a ajudar e pelo emprstimo das
sondas utilizadas.
Ao Prof. Nayro Alencar por toda a ajuda e apoio no decorrer deste trabalho.
Aos amigos do Laboratrio de Patologia Clnica da Universidade Federal Fluminense,
Laborlife Anlises Clnicas e Laboratrio Plasma pelo auxlio e disponibilidade de suas
instalaes para confeco e leitura das lminas
A todos aqueles que fizeram deste trabalho, um verdadeiro trabalho em equipe, o meu
sincero agradecimento.

29

RESUMO
O plo um dos mais antigos esportes eqestres, tendo sido introduzido no Brasil na dcada
de 1920 e vem crescendo desde ento. O aparelho respiratrio fundamental para a sade e
bom desempenho atltico dos eqinos, sendo os processos mrbidos neste sistema
responsveis por prejuzos orgnicos e econmicos considerveis. Dentre as enfermidades de
maior importncia do trato respiratrio eqino, esto os processos inflamatrios no
infecciosos de vias areas posteriores e a Hemorragia Pulmonar Induzida pelo Exerccio
(HPIE). A citologia de lavado traqueal considerada mais especfica do que somente o exame
endoscpico no diagnstico dessas enfermidades. Considerando que os eqinos de plo ainda
so pouco explorados no que se refere a estudos clnicos, este trabalho teve por objetivo
avaliar a citologia do lavado traqueal de eqinos regularmente utilizados em atividades de
plo, com nfase no diagnstico da HPIE. Foram utilizados 37 equinos e para triagem e
formao dos grupos, foi realizado exame fsico incluindo-se a endoscopia, 30 a 90 minutos
aps a participao do animal na partida. O grupo 1 foi formado por animais sem alterao de
ausculta, com graus 0 e 1 de muco na endoscopia e/ou sangue na endoscopia, sendo os
animais do Grupo 2 queles com muco e sangue no exame. O lavado traqueal foi realizado
entre 16 e 24 horas aps o exerccio. A ocorrncia de processo inflamatrio pde ser
caracterizada em 22,2% dos animais do Grupo 1 e 27,0% do Grupo 2. Para o diagnstico da
HPIE foram considerados: a presena de hemcias, a eritrofagocitose e o escore total de
hemossiderfagos (ETH). Hemcias foram observadas em 44,4% dos animais do Grupo 1 e
66,6% do Grupo 2, enquanto a eritrofagocitose foi observada em 11,1% do Grupo 1 e 2,7%
do Grupo 2. Considerando o ETH, a HPIE no foi observada em nenhum animal do Grupo 1 e
encontrada em 22,2% no Grupo 2. Apesar de estarem aparentemente assintomticos, os
animais apresentaram quadros citolgicos compatveis com processo inflamatrio e HPIE em
propores relevantes, fato que deve levar essas enfermidades a serem consideradas como
uma das primeiras opes de diagnstico na investigao de queda de desempenho atltico de
equinos nessa atividade esportiva
Palavras-chaves: cavalo de plo, endoscopia, HPIE, lavado traqueal, citologia.

30

ABSTRACT
Polo is one of the oldest team games, since 1920 and being in continuous development in this
country (Brazil).The respiratory tract is essencial to health and performance for the sport
equine medicine. Among the more important diseases are the

non infectious airways

disorders and exercise-induced pulmonary hemorrhage (EIPH).The cytology of tracheal wash


is considered more specific that endoscopic exam to diagnose this diseases. The objective of
this study was evaluate the cytology of tracheal wash of horses Thirty seven horses were used
in this study divided in groups by physical exam and endoscopic results. The tracheal wash
were performed between 16 and 24 hours after the game. Inflammatory disease could be
recognized in 22% of the animals of group 1 e 27,0% of group 2 For the diagnoses of EIPH
were considered the presence of red blood cells, eritrofagocitose and total hemossiderin score
(THS).. Red blood cells were seen in 44,4% of the animals of group 1 and 66,6% of group 2
and eritrofagocitose was found in 11,1% of group 1 and 2,7% of Group 2. Considering the
THS, EIPH were not observed in any animal of the group 1 and were seen in 22,2% os group
2. The results demonstrate that the horses apparently were health but they had cytological
patterns that indicate inflammatory disease and EIPH. This fact shows that these diseases
must be considered one of the most important options of diagnostic and investigation of bad
performance in this sport activity. The THS were developed for bronchoalveolar lavage
studies, so new studies must be done for estabilished a new cutoff point for THS in tracheal
washes.

Key Words: polo horses, endoscopy, EIPH, tracheal wash, citology

31

SUMRIO:

Pgina

LISTA DE ILUSTRAES

09

LISTA DE ABREVIATURAS

10

LISTA DE APNDICES

11

RESUMO
12
ABSTRACT

13

1.INTRODUO.

14

2.REVISO DE LITERATURA..

16

3.MATERIAL E MTODO

23

3.1ANIMAIS

23

3.2. EXAME FSICO.

23

3.3. AVALIAO ENDOSCPICA

24

3.4. HEMOGRAMA E DOSAGEM DE FIBRINOGNIO PLASMTICO

25

3.5 - CRITRIOS DE ELEGIBILIDADE PARA A FORMAO DOS GRUPOS:

25

3.6-OBTENO DO LAVADO TRAQUEAL:

25

3.7-PROCESSAMENTO E ANLISE DO LAVADO TRAQUEAL

27

3.7.1-Centrifugao do material e confeco de lminas

27

3.7.2-Colorao do material

27

3.7.3-Avaliao citolgica

28

3.8-INTERPRETAO DOS RESULTADOS

29

32

4.RESULTADOS

30

5.DISCUSSO:

37

6.CONCLUSES.

44

7.REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

45

8. APENDICES

49

33

1.INTRODUO

A equideocultura uma atividade econmica altamente relevante, sendo o Brasil hoje,


responsvel pelo terceiro maior rebanho de equinos do mundo com 5,9 milhes de animais.
Dentre as atividades equestres realizadas, as esportivas vm cada dia mais se destacando e
exigindo constante atualizao dos profissionais envolvidos, principalmente no que tange a
clnica mdica veterinria, desde a preveno ao diagnstico e tratamento das enfermidades
que acometem esses animais.
Dentre os esportes equestres, o plo um dos jogos de times mais antigos do mundo.
No Brasil, a partir de 2000, os organizadores dos torneios comearam a atrair novos
jogadores, a ampliar a rea de influncia do esporte e a desenvolver a prtica do mesmo
(FANTINS, 2008; ARANHA, 2008). Desde ento o esporte vem se desenvolvendo e
crescendo. Um jogo de plo dura pouco menos de uma hora, e dividido por perodos.
Conforme o nvel dos participantes, podem variar de quatro a oito perodos por partida. Cada
perodo tem durao de sete minutos e feito um intervalo de trs minutos entre eles.
Apesar do nmero de praticantes no ser to grande, se comparado com outros
esportes equestres, importante ressaltar que pelas caractersticas do jogo, cada jogador
participa da competio com vrios cavalos. Este fato aumenta o nmero de animais
utilizados para esta atividade esportiva. Se considerarmos, como exemplo, uma partida de sete
perodos, utilizando-se quatro cavalos por time em cada perodo, sero necessrios
aproximadamente 56 animais por jogo.
O aparelho respiratrio fundamental para a sade e bom desempenho atltico dos
equinos, sendo os processos mrbidos neste sistema responsveis por prejuzos orgnicos e
econmicos considerveis nesta espcie. De acordo com Derksen e Robinson (2002) dentre as
enfermidades de maior importncia do trato respiratrio equino, esto os distrbios no
infecciosos de vias areas posteriores, tais como Obstruo Recorrente das Vias Areas

34

(ORVA), Doena Inflamatria das Vias Areas (DIVA) e Hemorragia Pulmonar Induzida
pelo Exerccio (HPIE), justamente por serem os que mais acometem equinos, principalmente
os mais jovens e atletas.
O estudo das secrees obtidas do trato respiratrio j vem sendo utilizado no Brasil e
tem sido considerado de grande valia, j que representa um meio semiolgico importante,
ajudando no diagnostico das

doenas

(GONALVES, 1997;

SANCHES, 1998,

MICHELOTTO et al. 2007 ).


A citologia de lavado traqueal (LT) considerada mais especfica do que somente o
exame endoscpico, sendo descrita como uma ferramenta no diagnstico da doena pulmonar
crnica, em particular no diagnstico da ORVA e infeces por parasitos (DIXON, 1995). Em
casos de suspeita de HPIE em que o diagnstico endoscpico negativo, a citologia torna-se
fundamental devido observao de clulas caractersticas dos processos hemorrgicos como
os hemossiderfagos (HODGSON e HODGSON, 2003). Alguns trabalhos indicam que quase
100% dos cavalos em treinamento demonstram hemossiderfagos em lavados (WHITWEEL
E GREET, 1984).
Apesar do lavado broncoalveolar (LBA) ser o mtodo mais recomendado e utilizado
para coleta de material para a avaliao do trato respiratrio posterior, Hoffman (2008) afirma
que realizao deste procedimento exige que o animal permanea em repouso nas 24 a 48
horas posteriores. No caso de animais atletas em atividade constante, como os utilizados no
plo, esse repouso torna-se invivel. Nessas situaes, o lavado traqueal pode ser utilizado,
uma vez que no h necessidade de repouso aps a realizao do procedimento.
Apesar do crescimento do nmero de animais utilizados para a atividade de plo e a
alta frequncia j relatada das enfermidades respiratrias em equinos (BURRELL, 1985;
ROSSDALE et al. 1985, SWEENEY, 1991; WOOD et al. 1999; CHAPMAN et al. 2000;
LESSA et al. 2005), equinos utilizados para a prtica do plo ainda so pouco explorados no
que se refere a estudos clnicos e epidemiolgicos destas doenas.
Nesse contexto, este trabalho teve por objetivo avaliar a citologia do lavado traqueal
(LT) de equinos utilizados para jogo de plo, com nfase no diagnstico semi-quantitativo da
hemorragia pulmonar induzida pelo exerccio

35

2.REVISO DE LITERATURA

O aspirado traqueal foi introduzido por Pecora (1959) primeiramente na medicina


humana como mtodo de colheita de amostras do trato respiratrio para analises
microbiolgicas e citolgicas.
Beech (1975) foi uma das primeiras a introduzir a tcnica do aspirado
traqueobrnquico em equinos. Para a coleta do material 10cm2 de rea no tero inferior do
pescoo foi higienizada, como num procedimento cirrgico, e infiltrada com anestsico local
subcutneo. Aps a inciso, uma agulha foi introduzida no espao entre os anis traqueais.
Aps a remoo da agulha, um tubo com 30 cm de comprimento foi introduzido sendo
infundidos 30mL de soluo salina, rapidamente aspirada.
A coleta de aspirado traqueal em equinos foi tambm descrita por Mansmann e Knight
(1972) e Mansmann e Strouss (1976), dentre outros. Posteriormente, Greet (1982) descreveu
o mtodo de coleta do aspirado via endoscpio. Hodgson e Hodgson (2003) afirmam que este
mtodo tem se tornado popular sendo considerado uma boa alternativa para coleta de material
de traquia. Por ser uma tcnica no invasiva, ela ainda permite que o catter seja guiado e
proporciona a inspeo do trato respiratrio na hora da coleta de material podendo ser
realizada a avaliao da traquia (grau de hiperemia) e contedo luminal ( quantidade e
qualidade do muco, secreo mucopurulenta e sangue), dados que podem auxiliar na
interpretao dos resultados citolgicos. Os autores ainda descrevem a tcnica de coleta para
lavados traqueais. Para isso, um catter de polietileno inserido atravs do canal de bipsia
do endoscpio e 10 a 15 ml de soluo salina so instilados. Na rea ventral na traquia,
anterior a carina, forma-se um acmulo de fluido que pode ento ser aspirado mais
facilmente. Esta tcnica se aplica principalmente para o exame citolgico. A tcnica
transtraqueal possui a vantagem de eliminar a passagem pela cavidade nasal e pores do

36

trato respiratrio anterior, diminuindo o risco de contaminao da amostra por


microorganismos. Porm, a tcnica de aspirao via endoscpio menos invasiva e permite a
visualizao do trato respiratrio e do material a ser coletado.
A descrio dos achados de lavados traqueais de animais considerados normais foi
realizada por Beech (1975). As amostras deste estudo eram compostas predominantemente
por clulas epiteliais colunares ciliadas, apresentando tambm raros neutrfilos, algumas
clulas mononucleadas e clulas fagocticas. Podem ser encontrados alguns esporos e hifas
ocasionais, assim como clulas mononucleares grandes. Em alguns aspirados, havia clulas
multinucleadas com citoplasma vacuolado. A presena de eosinfilos e clulas caliciformes
foram baixas ou mesmo ausente em alguns animais. A autora tambm descreveu achados em
casos de animais com broncopneumonia. Nestes animais, os neutrfilos representavam cerca
de 40% das clulas e frequentemente excediam os 90% em casos agudos. Muitos desses
neutrfilos tinham ncleo hipersegmentado e aparentemente estavam fragmentados ou
degenerados. O muco na maioria dos animais era abundante, embora em alguns fosse escasso
e o aspirado quase que formado totalmente de agregados de neutrfilos. Macrfagos contendo
bactrias em seu citoplasma tambm foram descritos e em alguns casos, bactrias foram
observadas junto ao muco. O aspirado de quatro animais com histrico de epistaxe tinha em
sua maioria clulas epiteliais normais e macrfagos. Havia alguns macrfagos grandes com
grnulos esverdeados intracitoplasmticos de hemossiderina.
Utilizando a coleta via endoscpio, Whitwell e Greet (1984) avaliaram 223 lavados
traqueais de 191 equinos. Por meio de uma anlise celular semi-quantitativa, os autores
afirmam que as clulas epiteliais ciliadas eram de proporo significativa em 75% dos
animais normais. Macrfagos alveolares foram tambm encontrados em nmero considervel
em todas as categorias. Neutrfilos foram observados em quase todos os lavados, sendo sua
ausncia encontrada em poucos animais normais. Embora os neutrfilos tenham formado uma
proporo significativa de clulas em um tero dos animais, os autores no consideram esta
uma avaliao importante, visto que parte dos animais possua contagens celulares totais
baixas.
Larson e Busch (1985) realizaram 166 lavados traqueobrnquicos em animais sadios e
com achados histopatolgicos de pneumonia intersticial, broncopneumonia, eosinofilia focal e
difusa e bronquite crnica e supurativa. Nos 92 animais com pulmes sadios, os autores
obtiveram uma mdia e desvio padro das porcentagens de neutrfilos de 3921% no lavado
traqueobrnquico, variando de 3 a 83%. Eosinfilos foram encontrados em 3,52,0 %
variando de 0 a 8%. Correlacionando os achados citolgicos e histopatolgicos dos animais

37

sadios e dos portadores de doena respiratria, os autores afirmam que existe pouca
correlao entre os achados histopatolgicos e os achados do lavado traqueobrnquico.
Mair (1987) avaliou a importncia do aspirado traqueal para equinos acometidos por
ORVA. Encontrou uma mdia de 61,525,8% de neutrfilos, confirmando as observaes de
Whitwell e Greet

(1984) que verificaram que em animais com ORVA h aumento

significativo do nmero de neutrfilos.


Freeman e Roszel (1987) avaliaram o padro citolgico normal para aspirados
traqueais em eqinos, por meio da obteno de amostras de animais sem sinais clnicos de
doena respiratria e/ou anormalidades do sistema pulmonar em necropsia. Aspirados
traqueais dessas amostras celularidade discreta a moderada, ausncia de sangue, baixa
quantidade de protena, fibrina e debris celulares, podendo ser encontrado pequena quantidade
de muco.Os autores afirmam que pode haver grande quantidade de clulas epiteliais colunares
e cliliadas que podem apresentar ncleo picntico. A presena dos macrfagos alveolares
indica que a rea terminal das pores do trato respiratrio foi alcanada e est sendo
representada. Essas clulas podem apresentar um citolplasma pouco denso ou espumoso,
como sinal de ativao. Foram encontrados nos animais sadios, nmero baixo de neutrfilos,
alguns degenerados e uma pequena quantidade de linfcitos.Eosinfilos podem ou no
estarem preesntes.
Sweeney et al. (1992) realizaram um estudo em animais de corrida aparentemente
saudveis utilizando para a coleta do aspirado traqueal a tcnica via trans-traqueal. Dos 66
animais avaliados, 73% apresentaram contagens percentuais de neutrfilos abaixo de 20%.
Em 12%, os valores para neutrfilos encontravam-se entre 21 e 40%. Contagens de
neutrfilos superiores a 40% foram obtidas em 15% dos animais. A presena de eosinfilos
foi observada em 29 animais (44%) sendo que somente em dois, a percentagem excedeu o
valor de 5%. As clulas epiteliais foram observadas em 19 (29%) dos animais.
Hemossiderfagos foram observados em 58 animais (86%), sendo que, metade destes era
sabidamente portador de HPIE diagnosticada por endoscopias prvias.
Bain (1997) tambm descreve a presena de clulas colunares ciliadas e no ciliadas
em animais considerados sadios. Poucos neutrfilos, macrfagos e quantidade escassa de
muco tambm podem ser encontrados. A percentagem relativa dos tipos celulares em animais
normais pode variar com a idade e o exerccio. Os autores afirmam que potros tendem a ter
uma maior porcentagem de neutrfilos. Estas clulas podem estar presentes em animais
normais e suas caractersticas celulares so geralmente bem preservadas. Geralmente, os
neutrfilos compreendem menos de 20% da populao de clulas nucleadas em animais

38

normais. Ocasionalmente, outros leuccitos podem estar presentes, como eosinofilos (<3%)
em animais normais.
Mair et al. (1987) avaliaram a celularidade de 42 secrees obtidas dos diferentes
nveis do trato respiratrio (cavidade nasal, traquia, brnquios e broncoalveolar) de equinos
de idades variadas. Os autores compararam tambm as diferenas nas contagens celulares de
secrees de traquia obtidas via endoscopia e via trans-traqueal. A contagem diferencial do
lavado traqueal demonstrou diferena significativa entre as duas formas de coleta quanto
percentagem de clulas epiteliais, macrfagos e neutrfilos. Em lavados obtidos via
endoscpio foi observada uma mdia de 49,1 11,5% de clulas epiteliais enquanto que em
lavados trans-traqueais, os valores obtidos foram 19,86,1%.
Derksen et al (1989) no encontraram correlao estatisticamente significativa entre as
citologias de AT e LBA e afirmam que a populao celular da traquia no representativa da
populao celular nas vias areas posteriores. Em seu estudo, os autores avaliaram 50 equinos
com doena pulmonar crnica e dez animais controle, sem histrico de doena respiratria.
Utilizando para obteno do aspirado a infuso de 20 mL de soluo salina estril via
endoscpio, os autores relatam uma contagem de neutrfilos nos animais controles de 328,9.
A presena de hemossiderfagos foi observada no LBA de nove animais, destes, somente em
quatro, estas clulas tambm foram observadas no LT.
Fernandes et al. (2000) realizaram um estudo com a finalidade de avaliar os tipos
celulares obtidos pelas tcnicas de LBA e Lavado Traqueobrnquico (LTB) de cavalos
clinicamente sadios, em lminas citolgicas coradas pelo mtodo de Rosenfeld. Neste estudo
utilizaram cinco equinos, que foram submetidos ao procedimento do LBA cinco vezes
seguidas com um intervalo de sete dias entre as coletas, totalizando 25 amostras. A anlise das
citologias do LBA revelou uma porcentagem mdia de 81,5% de macrfagos, 2,91% de
linfcitos, 8,92% de neutrfilos, 0,15% de mastcitos e 0,76% de eosinfilos. O macrfago
foi o tipo celular predominante em ambos os lavados, comprovando a capacidade de que
ambas as tcnicas possuem plena capacidade de obter amostras representativas das pores
bronco alveolares. Entretanto, a contagem de macrfagos mostrou uma diferena significativa
entre as amostras, onde o LTB apresentou uma maior proporo deste tipo celular. A
contagem diferencial dos demais tipos celulares foi semelhante. Segundo os autores, os
resultados os permitiram concluir que o LTB disponibiliza uma maior variedade celular, o que
significa que capaz de coletar amostras de diferentes pores pulmonares que no s
broncoalveolar.

39

As contagens diferenciais entre amostras de LT e LBA tambm foram comparadas por


Malikides et al (2003). Neste estudo, foram realizados LT e LBA de 48 animais de corrida
com queda de performance, avaliando-se a concordncia no diagnstico de doena
inflamatria. Para tal, foram considerados sadios animais com contagens de neutrfilos abaixo
de 20% nos LT e abaixo de 5% no LBA. A coleta foi realizada de uma a duas horas aps o
exerccio em esteira. Em 19 das amostras pareadas, houve diferena na interpretao entre os
LT e LBA, sendo que a inflamao das vias areas foi indicada pelas amostras de traquia em
13 e em broncoalveolar em seis.
A avaliao citolgica de secrees do trato respiratrio posterior relatada como o
mtodo mais especfico para o diagnstico da DIVA (DERKSEN e ROBINSON,2002).
Porm, a interpretao dos valores, principalmente quanto aos valores limtrofes de
neutrfilos apresenta controvrsia entre os autores.
Martin et al. (1999) avaliaram 42 LT de equinos com histrico de queda de
performance. Os lavados foram obtidos antes e 30 minutos aps o exerccio, por meio de
instilao de 30 mL de soluo salina estril via endoscpio. Foram considerados
clinicamente normais 10 animais (24%), levando-se em conta as amostras obtidas antes e aps
o exerccio. Em oito animais (19%) foi diagnosticada HPIE. Em sete equinos (17%) foram
encontradas nas duas amostras evidncias de HPIE e DIVA Dos animais coletados, seis
amostras (14%) no puderam ser comparadas, pois o lavado obtido antes do exerccio foi
considerado inadequado. A interpretao entre as amostras foi diferente em cinco dos 36
animais (14%). Os autores recomendam que seja colhida a amostra aps o exerccio, pois esta
contm mais secrees das vias areas e menos evidencias citolgicas de contaminao
orofarngea.
Christley et al (2001) em estudo de casos-controles, avaliaram 100 cavalos com tosse e
148 animais sem sinais clnicos. Nos animais com tosse foi observado um aumento
significativo no escore de muco de trato anterior e traquia e tambm maior frequncia de
hiperplasia folicular linfide. Os AT destes animais tinham aumento de neutrfilos e
apresentaram com mais frequncia a presena de bactrias intracelulares que os animais
controles.
Para determinar se h aumento nos valores de neutrfilos aps o exerccio, Malikides
et al (2007) realizaram AT de 40 animais. A coleta, realizada via endoscpio, por meio da
infuso de 10mL de soluo salina estril foi realizada 24 horas antes e uma a duas horas aps
o exerccio em esteira. A mdia da percentagem de neutrfilos foi significativamente maior
nas amostras coletadas aps o exerccio. Em 15 animais classificados como menos que 20 %

40

de neutrfilos antes do exerccio, a percentagem nos AT aps aumentou significativamente


excedendo os 20%. Em seis dos 15 animais, os valores aumentaram para mais de 50%. Estes
autores recomendam que para um diagnstico mais preciso, a coleta do AT seja realizada aps
o exerccio, mas com intervalo de pelo menos uma a duas horas.

Hemorragia Pulmonar Induzida pelo exerccio

A Hemorragia Pulmonar Induzida pelo Exerccio (HPIE) definida como sendo a


presena de sangue livre, de origem pulmonar, na rvore traqueobrnquica ou sinais de
sangue, aps exerccio intenso, geralmente identificado por endoscopia aps 30 a 60 minutos
depois do exerccio (COSTA et al., 2004; NEWTON et al., 2005) e com os hemossiderfagos
no Lavado Broncoalveolar (DOUCET e VIEL, 2002). considerada por muitos, um dos
maiores problemas mdicos em cavalos de esporte por acarretar pela diminuio de
desempenho e, em casos raros, levar o animal a morte.
Numerosas causas e mecanismos fisiopatolgicos tm sido propostos para a
HPIE incluindo doenas das vias areas, obstruo de trato superior, hiperviscosidade
sangunea induzida pelo exerccio, estresse mecnico da respirao e locomoo,
redistribuio do fluxo sanguneo no pulmo, diferenas nas presses alveolares e hipertenso
Pascoe et al (1981), em um estudo com 235 cavalos puro-sangue ingls, determinaram
uma freqncia de 43,8% de hemorragia em vias areas, em diversos graus, sendo que
somente 0,8 % apresentaram epistaxe. Raphael & Soma (1982) realizaram um estudo
endoscpico em 191 animais de corrida em at duas horas aps o exerccio, verificando que
147 (75,4%) apresentavam evidncias de HPIE e apenas 13 (9%) apresentavam epistaxe.
Estes resultados permitem inferir que, embora a hemorragia pulmonar seja encontrada em um
grande nmero de animais, a epistaxe um achado relativamente infrequente deste fenmeno
(SWEENEY, 1991).
A ocorrncia da HPIE j foi relatada em todos os cavalos PSI de corrida em
treinamento (WEST et al., 1993; HINCHCLIFF, 2007), mas tambm constitui um problema
em outras raas de cavalos que realizam exerccio intenso, como os trotadores e os quarto de
milha, e em cavalos realizando exerccio de menor intensidade, como os cavalos de salto e
trao (LAPOINTE et al., 1994; ERICKSON e POOLE, 2007; VICINO, 2007).
Mc Kane et al (1993) em estudo com LBA de 62 animais de 1 a 7 anos em atividade
esportiva. Os autores encontraram hemcias livres em 73% dos animais e hemossiderfagos
em 90 % das amostras o que indica a ocorrncia de hemorragia imediata ou passada. Os

41

autores tambm relatam maior quantidade de hemossiderina nos animais mais idosos. No
foram observadas diferenas na citologia do LBA no que se refere a sexo e performance
esportiva.
O escore semi quantitativo de hemossiderina nos macrfagos alveolares corados tem
sido descrito e utilizado para avaliar a gravidade dos episdios de hemoptise em humanos
(GOLDE et al, 1975). A utilizao desse escore em LBA de equinos tem se mostrado um
mtodo de diagnstico mais sensvel do que somente as endoscopias repetidas para a deteco
da HPIE (DOUCET e VIEL, 2002).
Hegedus et al. (2007) realizaram um estudo com equinos sadios e portadores de HPIE.
O lavado traqueal foi coletado duas horas aps o exerccio de acordo com metodologia de
Mansmann e Knight (1972). Os animais foram separados em trs grupos - Grupo 1 Animais
com HPIE no tratados com furosemida, grupo 2, animais com HPIE tratados com
furosemida e grupo controle (animais sem sangramento). Observou-se aumento no numero de
neutrfilos nos grupos 1 e 2, portadores de HPIE (16,9% e 21,1%, respectivamente) quando
comparados aos valores do grupo controle (9,7%). Associado ao aumento dos neutrfilos,
houve um aumento de eosinfilos nos aspirados dos grupos 1 e 2 (4,5 e 15,8%) valores
maiores do que os apresentados pelo grupo controle (2,7%). Observou-se tambm, uma
reduo no nmero de hemossiderfagos nos cavalos tratados com furosemida. O grupo 1
teve uma porcentagem de 7,8%, o grupo 2 teve mdia de 4,2 % e o grupo controle apenas
0,3% para a contagem deste tipo celular.
aceito que a HPIE um problema de cavalos atletas e no de uma raa especfica ou
ligada a algum tipo de atividade. Biava et al (2006) descreveram a enfermidade em quartos de
milha, sendo que 40% dos cavalos participantes de provas de seis balizas e 75% dos
participantes de prova de trs tambores apresentaram o problema. Lessa et al (2005) revisando
vrios autores, relataram que a incidncia da HPIE em cavalos de plo era de 11%. Burrell et
al (1996) examinaram 60 equinos utilizados em corridas, uma hora aps a competio e em
trs corridas diferentes, tendo obtido um percentual de 87% dos animais com evidncia
endoscpica de hemorragia pulmonar. Pascoe et al (1981), num estudo com 235 cavalos Puro
Sangue Ingls examinados com endoscpio de fibra ptica num perodo de 2 horas aps o
exerccio determinaram uma freqncia de 43,8 % (103) de eqinos com vrios graus de
hemorragia no lmen traqueal. Apenas dois desses cavalos tinham epistaxe e no
demonstraram relao do grau de hemorragia com idade, sexo ou posio na corrida.
No Brasil, a ocorrncia da HPIE foi avaliada Biava et al. (2006) em cavalos Quartode-Milha, sem evidncias de sangue na endoscopia. Os autores encontraram evidncias

42

citolgicas de HPIE em lavados de 58 % dos cavalos. Lessa et al (2005) em estudo realizado


com 23 animais, encontraram evidncias de HPIE em lavados broncoalveolares de 11 animais
(47,8%). Em um estudo no Jockey Clube Brasileiro, Da Nova et al. (2000) encontraram num
total de 200 animais, um percentual de 58% (117) positivos para HPIE. Em outro estudo
realizado por Ganem et al (2007) no mesmo local, foi encontrado um percentual de 52,46%
animais com evidncias de sangue em endoscopia ps corrida.
Moran et al. (2003) submeteram ao exame endoscpico 39 cavalos de plo em
treinamento no Chile. A realizao do exame ocorreu duas a quatro horas aps o exerccio.
Demonstrou-se que 48% dos animais apresentavam algum grau de HPIE.
A ocorrncia da HPIE em animais de plo tambm foi avaliada por Voynick e
Sweeney (1986). Utilizando a endoscopia ps jogo como ferramenta de diagnstico, os
autores encontraram uma frequncia de 11,1% da enfermidade.
As limitaes de diagnstico do exame endoscpico, principalmente no que tange ao
intervalo entre o episdio hemorrgico e o momento do exame, ainda dificultam o diagnstico
em muitos cavalos (MEYER et al, 1998).
Michelloto et al (2007) realizaram estudo com AT via endoscpio em equinos quartode-milha, participantes de prova de trs tambores. Nenhum animal apresentou anormalidades
ao exame clnico, incluindo epistaxe. Porm, em trs animais observou-se hemossiderfagos,
sugerindo que estes animais sofrem de HPIE subclnica. Foi observado tambm um aumento
no nmero de neutrfilos, obtendo mdia de 23,1 35,93 de neutrfilos. Segundo os autores, o
processo inflamatrio muitas vezes passa despercebido por treinadores e proprietrios, sendo
necessrio o exame clinico detalhado, incluindo a endoscopia e a citologia, para a real
avaliao do trato respiratrio.
A presena de hemossiderfagos em secrees traqueobrnquicas tem sido
estudada j h algum tempo. Porm, poucas tentativas tm sido realizadas a fim de quantificar
a observao (DOUCET e VIEL, 2002).
Doucet e Viel (2002) realizaram estudo com 74 animais, divididos em grupo controle
e HPIE positivos, baseados em resultados de histrico e endoscopia. Os autores afirmam que
todos os animais tiveram algum grau de hemossiderina, independente de seu grupo. Foi
observada diferena significativa entre os escores dos grupos controle e portadores de HPIE.
Por meio de testes estatsticos, os autores concluram que quando utilizaram o escore de 75
como ponto de corte, o ETH demonstrou uma sensibilidade de 94% e especificidade de 88%
para deteco da HPIE.

43

Biava et al. (2008) utilizaram o escore de hemossiderfagos de Doucet e Viel (2002)


para avaliar a HPIE em 20 cavalos da raa quarto-de-milha. Os autores no observaram
presena de sangue na endoscopia em nenhum animal, porm, citologicamente, 15% dos
animais apresentaram ETH superior aos valores de referncia, sendo considerados HPIE
positivos.
DeHeer e Mc Manus (2005) tomaram como base a metodologia de Doucet e Viel
(2002) para quantificao de hemossiderfagos e a aplicaram em lavados traqueais de felinos
com doenas respiratrias.

44

3.MATERIAL E MTODO

3.1. ANIMAIS

Foram utilizados 37 eqinos adultos, mestios de crioulo com PSI, de idade entre trs
a 22 anos, regularmente utilizados em jogos de plo (Apndice 1 e 2). Destes animais, 20 (14
fmeas e seis machos) pertencentes ao Itanhang Golf Clube, localizado no Rio de Janeiro, no
bairro da Barra da Tijuca, e 17 (sete fmeas e 10 machos) pertencentes ao Regimento de
Cavalaria de Guardas Andrade Neves (RCGd/EB), localizado no bairro de Deodoro, Rio de
Janeiro. Os animais pertencentes ao Itanhang Golf Clube eram alimentados com rao
comercial, aveia e volumoso (feno de alfafa). J os animais do RCGd eram alimentados com
rao comercial, feno de Coast Cross, e suplementados com sal mineral. Todos os animais
foram mantidos em cocheiras e periodicamente vermifugados e vacinados contra ttano,
influenza, encefalomielite leste, oeste e raiva.
3.2-EXAME FSICO

Foram registrados os dados de identificao dos animais, a idade e o peso. Tambm


foram anotadas a freqncia cardaca (FC), freqncia respiratria (FR) e temperatura (T)
segundo Mc Gorum et al. (2002) bem como informaes colhidas inspeo, palpao,
percusso e ausculta do aparelho respiratrio (Apndice 3 ).

45

3.3-AVALIAO ENDOSCPICA

Os animais foram submetidos avaliao endoscpica do trato respiratrio, entre 30 e


90 minutos aps o trmino do tempo no qual jogou, segundo a metodologia preconizada por
Pascoe et al. (1981) ( Apndice 3).
O exame foi realizado utilizando-se um Colonofibroscpio Olympus modelo CF 10L,
acoplado a uma Microcmera Karl Storz modelo Endovision XL 20280130 NTSC e uma
Filmadora Digital Sony modelo DCR HC-65. Todas as endoscopias foram digitalizadas,
armazenadas e analisadas posteriormente.
Aps conteno fsica (cachimbo e tronco de conteno), o endoscpio foi introduzido
pelo meato ventral da narina direita ou esquerda, aleatoriamente. Foram analisadas as
estruturas anatmicas desde os meatos nasais at bifurcao brnquica (carina). Foram
realizadas avaliaes semi-quantitativas para a presena de sangue segundo Costa et al.
(2004) e para a presena de muco, segundo Gerber et al. (2004), conforme descrito a seguir:

Avaliao semi quantitativa para hemorragia segundo Costa et al. (2004).

Grau 1 Traos de sangue na traquia;

Grau 2 Presena de filete de sangue na traquia;

Grau 3 Presena de sangue na traquia em quantidade superior ao grau anterior;

Grau 4 Presena abundante com acmulo de sangue na traquia;

Grau 5 Hemorragia nasal ou presena de sangue abundante e acumulado na traquia

at a orofaringe;

Avaliao semi quantitativa para presena de muco, segundo Gerber et al.(2004).

Grau 0 - Nenhum muco aparente;

Grau 1 - Pequenos e poucos pontos de secreo;

Grau 2 - Um nmero maior de pontos maiores de muco podendo a vir a formar

confluncia;

Grau 3 - Presena de confluncia de secreo na face ventral do lmen traqueal,

podendo haver poas de secreo ao redor;

Grau 4 - Presena de secreo traqueal ocupando menos que 25% do lumen traqueal

Grau 5 - Presena de secreo traqueal profusa ocupando mais que 25% da extenso

da traquia.

46

3.4 HEMOGRAMA E DOSAGEM DE FIBRINOGNIO PLASMTICO:

As amostras de sangue foram obtidas por venopuno jugular e coletadas em tubo


contendo anticoagulante EDTA 10% sendo utilizadas para realizao do hemograma,
conforme descreve Jain (1993). As contagens de hemcias, leuccitos e plaquetas foram
realizadas em aparelho semi automatizado Coulter T-890, sendo conferidas posteriormente
pela observao do esfregao sanguneo. Esfregaos foram confeccionados e corados por
Pantico Instantneo para a realizao da leucometria especfica. A dosagem de fibrinognio
plasmtico foi realizada pelo mtodo de precipitao pelo calor (JAIN, 1993).

3.5 - CRITRIOS DE ELEGIBILIDADE PARA A FORMAO DOS GRUPOS:

Todos os animais apresentaram frequncia cardaca, respiratria, temperatura e


resultados de hemograma e fibrinognio plasmtico dentro dos valores de referncia segundo
Cowell e Tyler (1992). Esses animais foram ento divididos em dois grupos (1 e 2) segundo
os resultados de ausculta e endoscopia conforme descrito a seguir:

Grupo 1 Constitudo por animais que apresentavam:


- Ausculta pulmonar normal segundo McGorum et al. (2002),
- Ausncia de sangue na traquia
- Escore at 1 para a presena de muco na traquia.
Grupo 2: Constitudo por animais que apresentavam um ou mais dos trs itens abaixo:
- Ausculta pulmonar com rudos respiratrios anormais (creptaes finas, grossas, sibilos,
roncos isoladamente ou qualquer combinao desses) segundo McGorum et al. (2002)
- Achados endoscpicos de hemorragia (escore de 1 a 5)
- Escore de 2 a 5 para a presena de muco traqueal

3.6-OBTENO DO LAVADO TRAQUEAL:

Para obteno do lavado traqueal os animais foram colocados em brete e contidos com
cachimbo. O endoscpio, contendo a sonda 1(Figura 1) em seu canal de trabalho, foi
introduzido pelo meato nasal ventral em direo a traquia. A sonda foi posicionada na

47

traquia em poro distal, anterior a carina, de acordo com tcnica utilizada por Whitwell e
Greet (1984). Para tal, 20 a 40mL de soluo salina estril foram instilados, por meio de
seringas plsticas estreis (Injex) e imediatamente aspirados. As amostras foram
consideradas adequadas quando era possvel observar partculas suspensas ou filamentos de
muco (Figura 2). O lavado obtido foi acondicionado em frascos cnicos graduados de 50mL,
mantido sob refrigerao at o momento do processamento, tempo esse que no excedeu a 6
horas ps coleta.

Figura 1 Sonda para coleta transendoscpica (MILA Delivery


Catheter), utilizada para a obteno do lavado traqueal dos animais
de plo. Rio de Janeiro, 2009.

MILA Delivery Catheter - 2.5mm x 190cm

48

Figura 2 - Lavado traqueal. Observa-se alterao de


colorao e presena de grande quantidade de muco.Rio
de Janeiro, 2009.

3.7-PROCESSAMENTO E ANLISE DO LAVADO TRAQUEAL

3.7.1-Centrifugao do material e confeco de lminas

Alquotas de 5mL de lavado foram submetidas a centrifugao a 110g por 5 minutos


em centrfuga RDE modelo MC-16. O sobrenadante foi dispensado e o sedimento de clulas
utilizado para confeco das lminas. Utilizou-se a tcnica de esfregao linear, segundo
Cowell e Tyler (1992). Nesta tcnica, coloca-se uma gota da soluo numa das extremidades
da lmina. Com o auxlio de uma lmina extensora, desliza-se a gota sobre a lmina,
interrompendo o movimento no centro, buscando concentrar as clulas de forma linear. Foram
confeccionadas pelo menos duas lminas de cada animal e posteriormente fixadas em lcool
metlico por 5 minutos.

3.7.2-Colorao do material

Pelo menos uma lmina de cada animal foi corada pelo Giemsa e utilizada para a
contagem diferencial dos tipos celulares. A segunda lmina foi corada pela tcnica do Azul da
Prssia, de acordo com metodologia descrita a seguir:

49

Aps fixao em metanol por 10 minutos, as lminas foram hidratadas em gua


corrente por 5 minutos. Aps secagem, foram colocadas numa soluo de partes iguais de
ferrocianeto de potssio a 0,5% e cido clordrico a 10% por 1 hora.

Decorrido este tempo, foram lavadas com gua destilada, secadas novamente e
contracoradas com vermelho rpido nuclear a 0,1% por 10 minutos.

Essa colorao utilizada para evidenciao de ferro citoplasmtico sendo utilizada


para a avaliao semiquantitativa de HPIE por meio do escore de hemossiderfagos (ETH),
seguindo-se metodologia de Doucet e Viel (2002).

3.7.3-Avaliao citolgica

A contagem diferencial dos tipos celulares de cada animal foi realizada por meio da
anlise de 300 clulas em objetiva de 100 vezes e posteriormente calculada a mdia dos
valores encontrados.
Para a obteno do escore de hemossiderfagos, foram observados 100 macrfagos em
objetiva de imerso de 100 vezes. Cada macrfago foi classificado segundo a quantidade de
hemossiderina contida, de acordo com metodologia de Doucet e Viel (2002) descrita abaixo.
Aps a contagem, a quantidade de macrfagos obtida em cada grau foi multiplicada pelo
valor numrico (de 0 a 4) atribudo ao grau e posteriormente somada, obtendo-se ento o ETH
(escore total de hemossiderina).

Sistema de graduao de hemossiderina em macrfagos segundo Doucet e Viel (2002)

Grau 0 Ausncia de colorao azulada no citoplasma


Grau 1 Colorao discreta, azul clara no citoplasma
Grau 2 Colorao azul escura em pequena parte da clula ou colorao de mdia intensidade
em toda o citoplasma
Grau 3 Colorao azul escura na maior parte do citoplasma
Grau 4 Clula totalmente preenchida por hemossiderina, demonstrando colorao azul
escura por todo o citoplasma.

50

3.8-INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Foram analisados os resultados individuais e calculados a mdia e desvio padro da


contagem diferencial para os diferentes tipos celulares presentes no lavado traqueal dos
eqinos dos dois grupos. Devido diferena no nmero de animais entre os dois grupos, no
foi possvel realizar uma anlise estatstica comparativa entre eles.
Os critrios utilizados como referncia para a citologia traqueal foram os propostos
por Robinson (2003) sendo considerados sadios os animais com percentual de contagem para
neutrfilos, abaixo de 20% do total de clulas nucleadas e para eosinfilos, abaixo de 1%.
Para a avaliao da HPIE, foi realizada uma avaliao qualitativa para presena de
hemcias e eritrofagocitose.
Para o escore de hemossiderina, foi considerado como ponto de corte para
caracterizao de HPIE, o escore acima de 75 preconizado por Doucet e Viel (2002) para
lavados broncoalveolares.

51

4.RESULTADOS

Os resultados da contagem diferencial para os tipos celulares presentes no lavado


traqueal dos eqinos dos Grupos 1 e 2 encontram-se respectivamente nas Tabelas 1 e 2.

Tabela 1 - Resultados individuais, mdia e desvio padro da contagem diferencial (expressos


em porcentagem) para os diferentes tipos celulares presentes no LT de eqinos do grupo 1
(n=9). Rio de Janeiro, RJ. 2009.
Neutrfilo

Linfcito

2,8

3,2

28,5

0,0

65,6

0,0

7,3

21,3

36,6

0,0

34,8

0,0

16,6

5,7

41,7

0,0

36,0

0,0

9*

30,0

4,0

57,7

0,0

8,3

0,0

21

2,0

7,3

32,4

0,0

58,3

0,0

25

1,0

1,2

6,0

0,0

92,0

0,0

31

5,6

7,0

13,6

0,0

71,6

0,0

34*

78,6

2,3

13,4

0,3

5,4

0,0

36

0,5

2,3

10,6

0,0

86,6

0,0

16,025,3

6,06,1

26,717,2

0,00,1

51,031,7

0,0

Mdia DP

Macrfago

Eosinfilo

Clula

Animal

Epitelial

* valores de neutrfilos acima dos limites de normalidade (Robinson, 2003).

Mastcito

52

Figura 3 : Fotomicrografia digitalizada de citologia de LT do grupo 1 (


Animal 31). Presena de muco, predomnio de clulas epiteliais cilndricas e
macrfagos. Colorao Giemsa. Microscopia ptica, aumento 400X.

Figura 4 : Fotomicrografia digitalizada de citologia de LT do grupo 1


(Animal 2). Presena de clulas epiteliais cilndricas ciliadas e um
eosinfilo. Colorao Giemsa. Microscopia ptica, aumento 1000X.

53

Tabela 2 - Resultados individuais, mdia e desvio padro da contagem diferencial (expressos


em porcentagem) para os diferentes tipos celulares presentes no LT de eqinos do grupo 2
(n=28). Rio de Janeiro, RJ. 2009.
Clula

Animal

Neutrfilo

Linfcito

Macrfago

Eosinfilo

9,7

4,3

83,3

0,0

2,7

0,0

17,6

5,2

60,2

0,0

17,0

0,0

15,2

25,3

21,6

1,3

36,6

0,0

8,0

28,3

36,6

3,0

24,0

0,0

8*

87,3

7,0

5,6

0,0

0,0

0,0

10

5,0

2,6

27,8

0,0

64,6

0,0

11

17,6

10,0

67,6

0,0

4,6

0,0

12

2,0

12,0

14,5

0,0

71,5

0,0

13

18,3

6,4

54,6

0,4

20,3

0,0

14

16,3

3,3

72,0

0,0

8,4

0,0

15

5,6

5,6

67,5

0,0

21,3

0,0

16*

83,0

4,3

7,0

0,0

5,6

0,0

17*

31,6

7,3

21,0

0,6

39,3

0,0

18*

82,0

1,6

16,0

0,0

0,4

0,0

19

3,0

2,0

13,0

0,0

83,0

0,0

20

1,8

1,3

12,6

0,6

83,6

0,0

22

3,4

5,0

27,6

0,6

63,3

0,0

23

15,6

13,0

66,8

0,0

4,6

0,0

24*

78,3

3,0

17,0

0,0

1,7

0,0

26

1,0

3,3

15,7

0,0

79,0

0,0

27

4,0

2,0

13,4

0,0

80,6

0,0

28

10,0

10,3

37,0

0,6

42,1

0,0

29*

21,0

4,3

25,7

0,0

49,0

0,0

30*

28,0

5,4

59,0

0,0

7,6

0,0

32

13,0

16,6

51,8

0,0

18,6

0,0

33

1,6

3,4

26,0

0,6

68,4

0,0

35

0,3

0,4

21,3

2,6

73,6

0,0

37

2,0

10,0

65,3

0,4

22,3

0,0

Mdia DP

20,827,0

7,36,8

36,023,6

0,40,8

35,530,2

0,0

Epitelial

* Valores de neutrfilos acima dos limites de normalidade (Robinson, 2003).


** Valores de eosinfilos acima dos limites de normalidade (Robinson, 2003)

Mastcito

54

Considerando os valores propostos por Robinson (2003), a ocorrncia de processo


inflamatrio pde ser caracterizada pelo infiltrado de neutrfilos em 22,2% dos animais do
Grupo 1 (Tabela 1). No grupo 2 a ocorrncia do processo inflamatrio foi observada em dez
animais (27,0%), sendo que destes, sete apresentaram infiltrado de neutrfilos e trs de
eosinfilos (Tabela 2, Figuras 4 e 5).

Figura 4: : Fotomicrografia digitalizada de citologia de LT do grupo 2


(Animal 16). Grande quantidade de muco, presena de macrfago e de
infiltrado neutroflico Colorao Giemsa. Microscopia ptica, aumento
1000X.

Figura 5: Fotomicrografia digitalizada de citologia de


LT do grupo 2 (Animal 7) Eosinfilos contendo
grnulos caractersticos bem definidos. Colorao
Giemsa. Microscopia ptica, aumento 1000X.

55

A seguir, esto apresentados os resultados referentes avaliao citolgica para


hemorragia pulmonar induzida pelo exerccio.

Tabela 3 Avaliao qualitativa para presena de


hemcias e semi quantitativa para o contedo de
hemossiderina em macrfagos (escore total de
hemossiderina, ETH) encontrados no LT de
eqinos do Grupo 1 (n=9). Rio de Janeiro, RJ.
2009
Animal

Hemcias

ETH

Ausente

Presente

16

Presente

31,1

Ausente

21

21

Ausente

25

Presente

42

31

Ausente

27

34

Ausente

31

36

Presente

56

Tabela 4 Avaliao qualitativa para presena


hemcias e semi quantitativa para o contedo
hemossiderina em macrfagos (escore total
hemossiderina, ETH) encontrados no LT de eqinos
Grupo 2 (n=28). Rio de Janeiro, RJ. 2009
Animal

Hemcias

Ausente

26,6

3*

Presente

203,5

Presente

21,0

7*

Presente

204,0

Ausente

32,0

10

Presente

42,5

11

Ausente

23,0

12

Ausente

40,0

13*

Ausente

79,0

14

34,0

15*

Ausente
Presente

84,0

16

Presente

59,0

17

Presente

64,0

18

Ausente

16,0

19*

Ausente

151,0

20

Ausente

65,7

22

Presente

16,0

23

Presente

27,0

24

Presente

17,0

26

Presente

42,0

27

Presente

31,0

28

Presente

7,0

29

Presente

28,0

30

17,0

32

Presente
Ausente

33

Presente

11,0

35*

Presente

104,0

37

Presente

40,0

de
de
de
do

ETH

9,0

* Valores de escore compatveis com HPIE segundo


Doucet e Viel (2002).

57

A presena de hemcias foi observada em quatro animais do Grupo 1 (44,4%) e 18


animais do Grupo 2 (66,6%).
Quanto a ocorrncia de eritrofagocitose esta foi observada em somente no animal 6 do
Grupo 1, representando 11,1% e no animal 29 do Grupo 2, correspondendo a 2,7%.
Considerando o valor de escore para o contedo de hemossiderina em macrfagos
(escore total de hemossiderina, ETH) proposto por Doucet e Viel (2002), a ocorrncia de
HPIE no foi observada em nenhum animal do Grupo 1 e pde ser caracterizada em 22,2%
dos animais do Grupo 2 (Tabela 4,Figura 6 ).

Figura 6 - Fotomicrografia digitalizada de citologia de LT do grupo 2


(Animal 7). Presena de numerosos macrfagos em diferentes graus de
contedo de hemossiderina. Colorao Azul da Prssia. Microscopia ptica,
aumento 1000X.

58

5.DISCUSSO:

Os valores mdios encontrados na contagem diferencial dos tipos celulares presentes


no LT de eqinos do Grupo 1, esto dentro dos valores estabelecidos por Robinson, (2003)
para animais considerados sadios.
Com relao contagem de neutrfilos do grupo 1, estes valores foram semelhantes
aos encontrados por Michelloto et al. (2007) que obtiveram 23,1 35,93% em animais sadios
e inferiores aos observados por Larson e Busch (1985) que obtiveram 39,021% e Derksen et
al. (1989) que obtiveram 32,08,9%. Mair (1987) obteve uma percentagem mdia (4,64,9)
abaixo da observada nesse estudo, assim como Fernandes et al. (2000) que encontraram
valores mdios para neutrfilos de 8,927,41%, porm utilizaram a coleta por via
transtraqueal.
Essa grande variao dentre os nmeros de neutrfilos, mesmo em animais
considerados sadios, sabidamente uma das desvantagens da metodologia de lavado traqueal.
Corroborando estas informaes, Dixon (1995) afirma que os valores de contagem diferencial
na secreo traqueal dos eqinos ainda no esto bem definidos, particularmente quanto aos
limites superiores do nmero de neutrfilos. Taxas de mais de 40% so relatados em
secrees

respiratrias

de

animais

aparentemente

sadios

mantidos

estabulados.

Conseqentemente, a interpretao da citologia que contm de 15 a 40% de neutrfilos


permanece problemtica, embora a presena de mais de 40% de neutrfilos seja compatvel
com inflamao pulmonar. Por outro lado, Sweeney et al. (1992), em estudo com uma
populao jovem, homognea (cavalos de corrida) e clinicamente normal, observaram que
cerca de 80% dos animais apresentaram valores de neutrfilos abaixo de 20%. Concordamos
com Hodgson e Hodgson (2003) quando constatam a dificuldade em associar o aumento no
percentual de clulas a uma patologia pulmonar.
Apesar da mdia do Grupo 1 estar dentro dos valores estabelecidos para animais
sadios, em dois (nove e 34) foi encontrado uma alta porcentagem de neutrfilos. O animal

59

nove apresentou uma contagem considerada por Dixon (1995) dentro de um intervalo crtico
para diagnstico de quadros inflamatrios. J o animal 34, apresentou praticamente o dobro
do valor mnimo para ser considerado compatvel com inflamao.
Um aspecto a ser considerado que esses animais no demonstraram alteraes
clnicas, hematolgicas ou de concentrao de fibrinognio plasmtico. Alm disso, esses
lavados no apresentaram caractersticas morfolgicas de processo infeccioso (FREEMAN E
ROSZEL,1997 ) e nem de obstruo recorrente de vias areas (MAIR, 1987; WHITWELL E
GREET, 1984)

Por tudo isto, acreditamos que esses animais apresentam um quadro

inflamatrio de vias areas posteriores de baixa intensidade e assintomtico, mas seria


recomendvel para o animal 9, a repetio dos exames para confirmao dos achados.
Os achados endoscpicos esto associados ao estado do animal no momento do
exame. Logo, esto sujeitos a interferncias como, por exemplo, eliminao do muco pelos
mecanismos fisiolgicos de depurao (movimento mucociliar, tosse e deglutio), o que
pode ter levado a uma interpretao sujeita a variaes pela observao da traquia sem
secreo no momento do exame endoscpico desses animais.
Ainda que os valores mdios encontrados na contagem diferencial dos tipos celulares
presentes no LT de eqinos do Grupo 2, estejam no limite mximo dos valores preconizados
por Robinson, (2003) para animais sadios, em sete destes animais foram encontrados valores
de neutrfilos acima de 20% , sendo que destes, quatro animais (8,16,18,24) apresentaram
mais de 40% de neutrfilos. Para estes animais, o resultado citolgico permite confirmar os
achados de ausculta e/ou endoscpicos caracterizando um quadro inflamatrio de vias areas
posteriores. Nos animais 29 e 30, foi visualizada secreo grau dois (vide apndice 3) durante
o exame endoscpico, o que considerado grau mnimo para presena de inflamao, a qual
foi confirmada pelo discreto infiltrado de neutrfilos, cujo percentual encontrado foi entre 20
e 40%. Logo, quando analisamos os dados em conjunto, possvel afirmar que estes animais
tambm sofrem de um processo inflamatrio, possivelmente de baixa intensidade.
Para os eosinfilos, em nosso estudo, os percentuais mdios obtidos estiveram dentro
dos valores de normalidade observados por Robinson (2003) de menos de 1%, tanto no Grupo
1 como no Grupo 2. A baixa presena de eosinfilos, j foi relatada por outros autores em
animais clinicamente normais (HODGSON e HODGSON, 2003) e em alguns estudos
(MARTIN, 1999), essas clulas so classificadas semiquantitativamente e no em
porcentagem. Porm, em trs animais (5,7 e 35) do grupo 2, os valores encontrados foram
entre 1 a 3%. Os eosinfilos so reconhecidos atualmente por muitos como uma clula pr
inflamatria potente com considervel potencial de injria tecidual e como um mediador

60

primrio do dano epitelial e hiperatividade bronquial (HARE E VIEL, 1998). Embora


infiltrados de eosinfilos tambm possam estar relacionados a migraes parasitarias, no
foram observadas nessas citologias, caractersticas como presena de debris necrticos
(FREEMAN e ROSZEL, 1997). Alem disso, como estes animais eram regularmente
utilizados para competies de plo e periodicamente vermifugados, a possibilidade do
aumento de eosinfilos ter sido causado por parasitos remota. Em conjunto com o infiltrado
eosinoflico, esses animais apresentaram presena de secreo na endoscopia e achados
anormais de ausculta respiratria, o que nos leva a crer que esses animais apresentam quadros
brandos de alergia respiratria.
A porcentagem de macrfagos obtida em nosso estudo foram inferiores as observadas
por Sweeney et al. (1992) e Fernandes et al. (2000), porm estes autores utilizaram para coleta
a via transtraqueal. Mair et al. (1987), utilizando a coleta via endoscpio encontraram valores
menores e mais prximos ao encontrado em nosso estudo. Portanto, concordamos com
Fernandes et al. (2000) quando afirma que diferenas nas tcnicas de coleta do LT podem
levar a esta discordncia entre os resultados.
Mastcitos no foram observados em nosso estudo. Hughes et al, (2003) sugerem que
a porcentagem de mastcitos no lavado traqueal mais baixa que em lavados
broncoalveolares, pois no LT h aumento na proporo de outros tipos celulares, como
neutrfilos.
A grande quantidade de clulas epiteliais encontradas nos animais do Grupo 1 deve-se
ao mtodo de coleta e compatvel com achados de Mair et al. (1987) e Michelotto et al.
(2007) que encontrou 44,0935,68 para animais sadios. Mair et al. (1987) obtiveram
contagens diferenciais significativamente diferentes entre a coleta transtraqueal e via
endoscpio, o que foi tambm relatado por Bain (1997) que afirmou que amostras obtidas via
endoscpio apresentam maior quantidade de clulas epiteliais devido ao atrito e descamao
da mucosa provocada pelo equipamento durante a sua passagem.
A ocorrncia de processo inflamatrio pde ser caracterizada pelo infiltrado de
neutrfilos em 22,2% dos animais do Grupo 1 (Tabela 1). No grupo 2 a ocorrncia do
processo inflamatrio foi observada em dez animais (27,0%), sendo que destes, sete
apresentaram infiltrado de neutrfilos e trs de eosinfilos. Sweeney et al. (1992) tambm
observaram evidncias citolgicas de doena inflamatria em aspirados traqueobrnquicos de
cavalos de corrida aparentemente sadios..
Em nosso estudo, foram observadas hemcias em 66,6% dos animais, achados
compatveis com os de McKane et al. (1993) que observaram estas clulas em 73% dos

61

eqinos em atividade. Freeman e Roszel (1997) declaram que em animais sadios, hemcias
podem estar ausentes ou serem encontradas em baixo nmero. Em animais com HPIE, os
mesmos autores afirmam que essa presena varia se existe hemorragia recente que ainda no
foi convertida a hemossiderina. A quantificao de eritrcitos recuperados no LBA foi
prosposta como mtodo de avaliao semi quantitativa da severidade da HPIE.(MEYER et
al,1998). Porm, os estudos so conflitantes no que se refere reprodutibilidade das tcnicas e
h questionamentos sobre a real aplicao desta quantificao para indicao da severidade
da hemorragia pulmonar. Estudos sugerem que a quantificao dos eritrcitos no fluido
recuperado pode ser varivel demais para permitir o uso desta tcnica (BIRKS et al. 2003).
A presena de hemossiderfagos foi observada em todos os animais de nosso estudo,
concordando com observaes de Sweeney et al. (1992) que identificaram hemossiderfagos
em lavados traqueais de 86% dos animais de corrida e aos de Mc Kane et al. (1993) que
detectaram hemosiderfagos no lavado broncoalveolar de 90% de animais. Whiwell e Greet
1984) relataram este achado em 18 de 19 animais em treinamento, e em somente 2 animais
que no estavam submetidos a treinamento, afirmando que todo equino submetido a exerccio
extenuante sofre de algum grau de hemorragia pulmonar. Porm, Roszel (1988) afirma que
hemossiderfagos indicam algum grau de hemorragia, mas sua presena pode estar
relacionada a outras causas como insuficincia cardaca congestiva com congesto pulmonar,
broncopneumonia por aspirao ou pleuropneumonias. Em nosso estudo, descartamos estas
outras causas de formao de hemossiderfagos por meio dos exames realizados para seleo
dos animais.
Apesar dos animais 7, 13 e 19 (Grupo 2) no apresentarem HPIE ao exame
endoscpico ps jogo, eles apresentaram quadros citolgicos de hemorragia pregressa
importante, caracterizados por escores de hemossiderina maiores que 75. possvel que a
intensidade do exerccio realizado neste dia pelos animais, no sido a tenha a ponto de levar a
sangramento perceptvel. No animal 7, alm dos hemossiderfagos, que so indicativos de
hemorragias passadas, tambm foram observadas hemcias. A presena de hemcias pode ser
devida a trauma ocasionado pela coleta e/ou hemorragia de baixa intensidade no
diagnosticada pela endoscopia. No caso deste animal, acreditamos que devido ao escore
elevado de hemossiderfagos, a presena de hemcias deve-se a um episodio de hemorragia
de baixa intensidade ocorrido no dia do jogo no observado na endoscopia.
No animal 3, o conjunto dos achados da endoscopia e citologia (ETH alto e presena
de hemcias) nos permite afirmar que trata-se de um animal que sofre episdios peridicos de
hemorragia clinicamente relevante.

62

Nos animais 8, 22 e 27 foram observadas hemcias, sendo nestes animais um achado


citolgico compatvel com sangramento recente, haja vista que foi observado sangramento
relevante na endoscopia ps jogo. Os ETHs destes animais estavam abaixo do estipulado para
hemorragia, indicando que estes animais no sofreram episdios de hemorragia pregressa e
relevante. Um estudo em crianas demonstrou que macrfagos dos aspirados de traquia
somente tornam-se positivos para a colorao de azul da prssia, 50 horas apos um episodio
de hemorragia aguda e 72 horas apos contato com hemcias nas culturas de clulas
pulmonares (SHERMAN et al.,1984). A presena deste sangramento isolado pode ter sido em
funo da intensidade de exerccio realizado no dia da endoscopia.
O tempo de permanncia dos hemossiderfagos nas secrees aps o episdio de
sangramento ainda no foi completamente estabelecido em cavalos. Mc Kane e Slocombe
(1999) declaram que estes podem estar presentes no LBA e no aspirado at trs semanas aps
o episdio de hemorragia. Gosselin et al. (1989) estudando bipsias pulmonares concluram
que a hemossiderina pode persistir de 2 semanas a 1 ms depois de um episdio isolado de
hemorragia em humanos. Estas informaes podem tambm justificar o baixo ETH nestes
animais, pois mesmo que tenham sofrido hemorragia clinicamente importante, como no
possvel quantificar a quanto tempo ocorreram, o espao de tempo entre o sangramento e a
realizao do lavado traqueal pode ter sido superior ao prazo de deteco dos
hemossiderfagos. Segundo Hinchcliff et al. (2004), os hemossiderfagos somente esto
presentes no LBA de 7 a 21 dias aps o episdio de sangramento.
Os animais 28 e 33 tiveram ETH baixos, ausncia de sangue na endoscopia e presena
de hemcias no lavado traqueal. Acreditamos que nestes animais, por no terem sido
encontradas evidencias de sangramento prvio ou recente, a presena de hemcias pode ter
sido ocasionada por pequenos traumas causados pela sonda na hora da coleta. Para
comprovao dessa afirmao, seria necessrio o estudo em um maior nmero de animais
para comparao entre a presena de hemcias em animais que sangram e a presena das
mesmas causadas simplesmente por trauma. Alm disso, tambm no h por parte dos autores
consultados, uma padronizao de anlise semi quantitativa de hemcias relevantes para
HPIE.
A eritrofagocitose em nosso estudo foi observada em somente em 02 animais, sendo a
comparao entre estudos difcil, pela falta de relatos sobre a observao de eritrofagocitose
em lavados traqueais. Mc Kane e Slocombe (1999) em estudo com inoculao de sangue no
trato respiratrio, afirmam que at o terceiro dia aps a hemorragia, a presena de macrfagos
fagocitando hemcias pouco observada, sendo o aumento da eritrofagocitose mais freqente

63

aps o terceiro dia e at o dcimo dia ps inoculao. Outro fator que pode contribuir para a
ausncia de eritrofagocitose deve se ao mtodo adotado de coleta de material, o lavado
traqueal. Como frequentemente o local da hemorragia o lobo caudal do pulmo, espera-se
que ocorra maior quantidade de eritrofagocitose nas vias mais distais e no no lmen traqueal,
sendo este achado mais freqente nos lavados broncoalveolares.
Considerando-se a combinao dos critrios: Presena de sangue na endoscopia e
escore de hemossiderfagos maior que 75; foi encontramos em nosso estudo 37,8 % de
ocorrncia de HPIE, valores superiores aos relatados por Voynick e Sweeney (1986) e
inferiores aos encontrados por Moran et al. (2003). Porm, ambos realizaram somente a
endoscopia ps jogo, ao contrrio do nosso estudo, onde se utilizou a citologia traqueal. A
ocorrncia de HPIE em nosso estudo, quando consideramos somente o valor de escore para o
contedo de hemossiderina em macrfagos foi semelhante a encontrada por Biava (2008).
Segundo Mc Kane et al (1993), a ocorrncia e severidade da HPIE pode variar dependendo do
nvel de exigncia do exerccio.
Doucet e Viel (2002) definiram como ponto de corte o valor para ETH acima de 75 a
ser empregado em lavados broncoalveolares. Porm, os mesmos autores sugerem que para
propsitos de pesquisa, outros pontos de corte mais especficos podem ser definidos,
dependendo dos objetivos de triagem para seleo dos indivduos do estudo. Dos animais que
apresentarem evidncias endoscpicas de HPIE (total=10), 03 (30%) tiveram ETH acima de
75, e 05 (50%) tiveram abaixo de 75 e acima de 25, indicando que possvel que quando o
mtodo a ser utilizado for o lavado traqueal, o ponto de corte a ser considerado pode ser mais
baixo. Os mesmos autores afirmam ainda, que um escore acima de 150 parece ter uma
especificidade de 100% na identificao da HPIE, mesmo em animais sem presena de
sangue na endoscopia ps exerccio. Da mesma forma, um ETH de 25 ou menos demonstrou
sensibilidade de 100% em detectar os animais negativos. Em humanos, escores acima de 100
so considerados indicativos de hemoptise, embora os hemossiderfagos tenham sido
identificados em indivduos com escores acima de 25 e sem histrico de hemorragia
pulmonar.
Derksen et al. (1989) sugerem que a populao celular da traquia no representativa
da populao celular nas vias areas posteriores. Em seu estudo, a presena de
hemossiderrfagos foi observada no LBA de nove animais, destes, somente em quatro estas
clulas tambm foram observadas no LT. A populao celular nas vias areas pode diferir
significativamente por causa da migrao celular local para e do lmen areo. As vias areas
de maior calibre podem transportar material originado de ambas as vias areas condutoras e

64

tambm da rea de superfcie alveolar; com isso, diferentes reas contribuem com secrees
de uma maneira no homognea. . Considerando tambm que o local onde comumente
ocorrem episdios de hemorragia o lobo caudal do pulmo, provvel que o lavado traqueal
seja um material mais diludo que o LBA quando consideramos a presena de
hemossiderfagos. Diferenas nas populaes traqueais, das vias areas perifricas e na
superfcie alveolar tambm podem ser explicadas por diferenas nas taxas de renovao
celular (DERKSEN et al. 1989). Por isso, sugerimos que novos estudos com um nmero
maior de animais, sadios e portadores de HPIE sejam realizados para elaborao de um novo
ponto de corte para ETH em lavados traqueais.

6.CONCLUSO

Apesar de estarem aparentemente sadios, os animais apresentaram quadros


citolgicos compatveis com processo inflamatrio e HPIE em propores relevantes,
fato que deve levar essas enfermidades a serem consideradas como uma das primeiras
opes de diagnstico na investigao de queda de desempenho atltico de origem
respiratria em equinos nessa atividade esportiva.

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72

Apndice 1: Dados gerais de identificao dos eqinos do Grupo 1 (n=9).. Rio de


Janeiro, R.J. 2009

Animal
2
4
6
9
21
25
31
34
36

Idade
(anos)
6
8
8
15
5
10
5
6
9

Peso (kg)

sexo

400
440
436
480
420
415
395
370
400

F
F
F
M
F
F
F
F
M

73

Apndice 2 : Dados gerais de identificao dos eqinos do Grupo 2. Rio de Janeiro,


R.J. 2009

Animal
1
3
5
7
8
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
22
23
24
26
27
28
29
30
32
33
35
37

Idade
(anos)
6
9
6
6
6
8
6
8
9
9
5
4
3
8
9
3
8
9
22
9
13
8
17
7
5
9
8
9

Peso (kg)

sexo

440
410
440
436
420
415
461
410
440
440
450
400
410
440
436
420
420
415
470
450
480
390
435
430
415
413
395
395

F
F
F
F
F
F
F
M
F
F
M
F
M
M
F
F
M
M
M
M
M
M
M
F
F
F
M
M

74

Apndice 3 Avaliao fsica dos eqinos do Grupo 2 (n=28) Resultados de ausculta


pulmonar Rio de Janeiro, RJ. 2009
Animal

Ausculta

Sadn

Sadn

Creptao grossa Crnio/Ventral

Leves Estertores bilaterais

Creptao grossa mdio/dorsal

10

Creptao grossa Crnio/Ventral

11

Sibilo Caudo/Dorsal

12

Creptao grossa Crnio/Ventral

13

Creptao grossa Caudo/Ventral

14

Creptao grossa Caudo/Medial

15

Sadn

16

Creptao grossa Caudo/Dorsal

17

Creptao grossa Crnio/Ventral

18

Creptao grossa Caudo/Medial

19

Creptao grossa Caudo/Dorsal

20

Sadn

22

Creptao grossa Caudo/Dorsal

23

Sibilo crnio/Ventral

24

Creptao grossa Crnio/Ventral

26

Creptao grossa Caudo/Medial

27

Creptao grossa mdio/dorsal

28

Sibilo Crnio/Ventral

29

Creptao grossa Crnio/Ventral

30

Sadn

32

Creptao grossa Caudo/Medial

33

Creptao grossa Caudo/Dorsal

35

Hiperfonese

37

Hipofonese de pulmo esquerdo

sadn-sem alteraes dignas de nota.

75

Apndice 4 Avaliao endoscpica dos eqinos do Grupo 1 (n=9).Rio de Janeiro. RJ

Animal

Secreo

Sangue

21

25

31

34

36

76

Apndice 5 Avaliao endoscpica dos eqinos do Grupo 2 (n=28).Rio de Janeiro. RJ.

Animal

Catarral

Sangue

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

22

23

24

26

27

28

29

30

32

33

35

37