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Rita - Citologia convencional

No diagnstico de certas doenas necessrio muitas vezes analisar as


clulas individualmente. Para tal utilizava-se a citologia esfoliativa.
Esta tcnica consiste na raspagem das clulas, com a ajuda de uma
escova/esptula. De seguida o prprio mdico que colheu a amostra faz o esfregao
numa lmina que posteriormente era enviada para o laboratrio. Muitas limitaes
a este mtodo foram identificadas, como por exemplo, a transferncia inadequada
das clulas para a lmina, uma distribuio no homognia das clulas, a presena
de clulas sanguneas que obscurecem a preparao ou reas de clulas epiteliais
sobrepostas.
Lidia - citologia de base lquida
Recentemente houve um avano na rea da citopatologia ao ser
desenvolvida a tcnica de citologia de base liquida (CBL) que permitiu eliminar
estas limitaes, sendo inicialmente desenvolvida para ser aplicada em citologia
ginecolgica.
Nesta tcnica a colheita do material processa-se da mesma forma que na
citologia convencional. Depois, a amostra transferida para um frasco de
transporte que contem algum tipo de preservante em vez de ser feito o esfregao.
As clulas so depois processadas e transferidas para a lmina. Este processamento
resulta numa monocamada de clulas que posteriormente pode ser analisada
manualmente, por um citotcnico ou patologista, ou automaticamente.
Vanessa - Este mtodo evita que a maior parte das clulas sejam
descartadas juntamente com o mecanismo de recolha, prevenindo diagnsticos
errados ou imprecises no diagnstico. Vai tambm reduzir a quantidade de
artefactos e permitir que vrias lminas sejam feitas. A partir da mesma amostra
podem ser realizados outros testes, entre os quais, testes imunocitoqumicos, de
biologia molecular ou de citometria de fluxo. No entanto, um mtodo mais caro
que a citologia convencional e cada tipo de citologia exige uma abordagem
especializada.
Esta tcnica tem sido aplicada a citologia esfoliativa do trato pulmonar,
urinrio e gastrointestinal com bons resultados.
Os dois mtodos mais comuns so o ThinPrep TM e o SurePapTM, no entanto
existem outros igualmente teis.
Rita - ThinPrep
O ThinPrep foi o primeiro mtodo de CBL a ser desenvolvido.
Este mtodo pode ser utilizado em amostras ginecolgicas (utilizao mais
frequente), mas tambm em amostras de puno com agulha fina de tumores
slidos, lquidos provenientes de cistos, lavados brnquicos, entre outros.
Uma amostra de ThinPrep recolhida com a ajuda de uma escova cervical
(cervexbrush), que depois lavado num frasco de ThinPrep contendo uma soluo

preservante base de metanol( PreservCyt) e CytoLyt que faz a lise das hemcias
e decompor o muco.
J no laboratrio a amostra ser colocada no processador automtico, o
ThinPrep 2000. A suspenso de clulas homogenizada, para promover a
disperso celular. Depois, por suco, a amostra passada por um filtro, onde as
clulas epiteliais e organismos ficam presos, enquanto que o muco, sangue e
inflamao passam atravs do filtro. Posteriormente o filtro pressionado contra a
lmina havendo assim a transferncia das clulas. O resultado final um circulo de
clulas depositadas com cerca de 20mm de dimetro. Aps o imprint na lmina fazse a fixao desta em lcool a 95% e posteriormente a colorao pretendida.
Ldia - O ThinPrep tem inmeras vantagens, tais como:

a visualizao ao microscpio mais fcil uma vez que as clulas


esto em monocamada e concentradas numa rea reduzida;
a eliminao de componentes indesejveis, tais como hemcias e
muco;
diminuio do nmero de diagnsticos errados.

Vrios estudos mostraram que o ThinPrep melhorou em mais de 50% o


diagnstico de cancro do colo do tero comparando com a citologia convencional,
bem como a qualidade da amostra. A FDA aprovou o uso deste teste para a
deteco do vrus do papiloma humano (HPV), da Clamydia trachomatis e Neisseria
gonorrhoeae
No entanto, tendo em conta a pessoa que esta a observar as clulas,
tambm foram apontadas algumas desvantagens, tais como a diminuio do
detalhe nuclear, a diminuio do tamanho da clula e agregao de linfcitos. Os
custos que esta tcnica acarreta so muito mais elevados do que os custos da
citologia convencional uma vez que, alm dos custos do material, tambm existem
gastos relacionados com a treino e recertificao dos profissionais, necessria para
que estes possam interpretar lminas de ThinPrep.

Vanessa - SurePath
O SurePath o segundo mtodo de CBL mais utilizado actualmente. Este foi
desenvolvido com o objectivo de substituir o mtodo de citologia ginecolgica
convencional para o uso na analise de clulas atpicas, de cancro cervical e seus
precursores.
Neste mtodo, as clulas so colhidas com uma espcie de escova ou com o
dispositivo que combina uma escova e uma esptula que podem ser desencaixados
e posteriormente colocados no frasco de transporte. Esse frasco contm uma
soluo preservante base de etanol (SurePath Preservative fluid). Com este
mtodo de colheita garante-se que toda a amostra transferida para o frasco de
transporte e por isso passvel de anlise
O processamento pode ser feito automaticamente, atravs do BD PrepStain TM
Slide Processor, ou manualmente

A amostra homogenizada num vortx, quebrando-se assim agregados


celulares e o muco. Depois a amostra ser sujeita a centrifugao por gradiente que
ir separar as clulas teis de clulas inflamatrias e outros resduos. Deste modo
diminui-se o nmero de clulas sanguneas e inflamao sem a perda de clulas
representativas. As clulas so depois transferidas para uma lmina adesivada
atravs de sedimentao pelo efeito da gravidade. O resultado final uma camada
de clulas de forma circular com cerca de 13mm de dimetro.
Rita - Alguns estudos mostraram que o SurePath aumentou a taxa de
deteco de leses do colo do tero de alto grau em mais de 100% e de baixo grau
em quase 50%, comparando com a citologia convencional. A FDA aprovou este
mtodo para a deteco de C. trachomatis e N. gonorrhoeae, no entanto este
mtodo no foi aceite para a avaliao do HPV

Liqui-PREP
O liqui-PREP tm como objectivo reduzir o tempo de leitura, optimizar a
flexibilidade do processo e aumentar o nmero de clulas visveis na lmina. Este
mtodo tem trs componentes essenciais: Specimen Collection Vial (frascos para
colheita que possuem uma soluo preservante); Cellular Base Solution e Cleaning
Solution.
Aps a colheita da amostra esta deve ser colocada num frasco de Liqui-PREP
com a soluo preservante que previne o crescimento bacteriano, permite a
preservao da amostra durante bastante tempo e permite que esta seja
transportada temperatura ambiente. O lquido preservante conserva a morfologia
celular da amostra, evitando deste modo falsos diagnsticos.
Ldia - Se as amostras possuirem grandes quantidades de muco ou de
sangue, pode-se usar a Cleaning Solution e a centrifugao. Durante a
centrifugao as clulas com importncia diagnstica a atravessem esta soluo,
depositando-se no fundo do tubo. Aps a centrifugao rejeita-se o sobrenadante e
processa-se o pellet (onde esto as clulas de interesse). A adio da Cellular Base
Solution faz-se j sobre a lmina, e permite uma aderncia mais eficaz do pellet
lmina de vidro, e deve ser adicionada em quantidade suficiente para garantir que
existem clulas suficientes para a realizao de um diagnstico.
Num artigo que compara o Liqui-PREP com a tcnica convencional (Hao
Deshou, Wang Changhua, Li Qinyan, Liu Wei, and Fu Wen) avaliou-se alguns
parmetros como: celularidade, limpeza de fundo, artefactos, sobreposio celular e
alteraes morfolgicas. Com o uso de Liqui-PREP o fundo apresenta-se
relativamente limpo, quando comparado com a tcnica convencional. A presena de
artefactos era menor e no se verificavam alteraes na morfologia da clula. Em
ambas as tcnicas verificou-se a existncia de sobreposio celular. Na tcnica
convencional a distribuio das clulas era mais uniforme do que quando se
utilizava a tcnica de Liqui-PREP.

Vanessa - GlucyteTM

Este mtodo utiliza uma soluo aderente, a GlucyteTM , e uma preservante,


Synemed (preservante de base alcolica). Este mtodo simples, pode usar-se em
amostras ginecolgicas e no ginecolgicas, e pode ser reproduzido manualmente.
Aps a colheita da amostra esta colocada dentro do frasco de transporte com o
synemed. Posteriormente, j no laboratrio, a amostra submetida a uma
centrifugao, o sobrenadante rejeitado e o pellet misturado ao Glucyte TM. A
amostra colocada na lmina e deixa-se secar para posterior visualizao
miscroscpica.
O mtodo de GlucyteTM permite a produo de uma amostra representativa
de clulas bem preservadas. considerado um mtodo simples, eficiente e
rentvel. No entanto esta tcnica apresenta uma desvantagem: na presena de
sangue ou muco as clulas epiteliais podem ser ocultadas.
Rita - AutoCyte
Esta tcnica frequentemente usada na deteco de cancro cervical, leses
pr-cancerosas e deteco de clulas atpicas.
Este mtodo inclui a preservao celular, homogenizao, enriquecimento
do material de diagnstico, pipetagem automtica e sedimentao. Depois da
colheita da amostra, esta colocada no frasco de transporte que contm um liquido
preservante, o Autocyte. No laboratrio a amostra homogenizada no vortx e
posteriormente colocada num reagente que vai facilitar a separao por gradiente
de densidade. Este reagente posteriormente decantado e a amostra vai ser
colocada no processador. O processador, AutocytePrep System, utilizado neste
mtodo uma pipeta robtica que automaticamente agita, transfere, sedimenta e
faz a colorao da amostra.
Ldia - Esta tcnica permite uma boa preservao celular e permite eliminar
artefactos criados pela secagem ao ar, a sobreposio celular e a presena de
detritos. O nmero de clulas sanguneas significativamente reduzido permitindo
uma boa visualizao das clulas epiteliais.
DNA Citoliq

O sistema DNA Citoliq uma nova tcnica para a realizao de citologia de


base liquida. O kit de colheita, o UCM (Universal Collection Medium), constitudo
por doze tubos de plstico com uma soluo preservante; o lamigene, que um
suporte de lminas; o filtogene, que contm uma membrana de policarbonato e o
prepegene, que prepara as lminas. Este mtodo, recentemente desenvolvido, foi
considerado bastante verstil para a citologia e tambm pesquisa de cidos
nucleicos, tendo tambm mostrado a sua elevada sensibilidade no diagnstico de
leses epiteliais. Perante a suspeita de infees vulvovaginais tem um desempenho
similar ao preparado convencional.
Vanessa - Aps a colheita da amostra, a escova com que a colheita foi feita
colocada dentro do frasco de transporte que contm o liquido preservante. No
laboratrio a amostra homogeneizada com um vortx, sendo esta a etapa mais
importante, pois deve ser desprendido o maior nmero de clulas possvel da
escova de colheita e das paredes do tubo. Aps a agitao no vrtex, pipeta-se a
amostra sobre uma membrana de policarbonato que compe o filtrogene

espalhando uniformemente. As lminas so colocadas no prepegene onde se d a


transferncia do material para a lmina. Posteriormente o laminege retirado
sendo ai que esto as lminas j preparadas. As lminas so fixadas e por ltimo
realizada a colorao
Rita - MonoPrep Pap Test
O MonoPrep um mtodo parecido com o ThinPrep. Este difere do
ThinPrep a nvel de preo visto que o mtodo mais barato que existe no
mercado.
O mtodo de Monoprep Pap Test totalmente automatizado, utilizando um
aparelho que permite o processamento de at 300 amostras por 8horas.
Neste mtodo a amostra recolhida colocada num meio fixador base de
metanol o que preserva a morfologia celular e impede o crescimento microbiano. O
prprio frasco de transporte tem um mecanismo de agitao que permite desfazer
agregados celulares. Durante o processamento as clulas so filtradas, sendo
depois o filtro pressionado contra a lmina, gerando um crculo de clulas de cerca
de 20mm.
Ldia - Um estudo que comparou este mtodo com a citologia convencional indicou
que, no caso de leses cervicais de alto risco, o MonoPrep identificou mais 4% dos
casos que, apesar de ser uma melhoria, no representa significncia estatstica. Em
leses de baixo risco identificou mais 26% dos casos. O nmero de amostras
insatisfatrias foi reduzida em 58% e as caractersticas morfolgicas eram similares
a outros mtodos de citologia de base lquida. Estes resultados levaram a que este
mtodo fosse aprovada pela FDA como um mtodo substituto da citologia cervical
convencional.

Vanessa - Concluso
A citologia de base lquida foi desenvolvida com o objectivo de substituir a
citologia convencional uma vez que, nesta ltima tcnica, se verificava que na
maioria das vezes as clulas eram inadequadamente transferidas para a lmina,
existia a sobreposio de clulas e o obscurecimento da preparao por clulas no
representativas.
Na tcnica de CBL a amostra vai ser transferida para um meio lquido
preservante o que permite que a maior parte das clulas no seja descartada
juntamente com o mecanismo de recolha. Alm disto, o facto de posteriormente
apenas se precisar de utilizar parte da amostra, permite que seja possvel realizar
testes complementares de diagnstico.
Rita- Esta uma tcnica que tem sido utilizada principalmente para a
citologia cervico-vaginal, no entanto tambm pode ser aplicada citologia
esfoliativa do trato pulmonar, urinrio e gastrointestinal com bons resultados.
Existem vrios mtodos de CBL, no entanto apenas trs esto oficialmente
aprovados pela FDA: o ThinPrep, o SurePath e o MonoPrep. O ThinPrep foi aprovado

para a deteco do vrus do papiloma humano (HPV), da Clamydia trachomatis e


Neisseria gonorrhoeae e pode ser utilizado em amostras puno com agulha fina de
tumores slidos, lquidos provenientes de cistos, lavados brnquicos, entre outros. O
SurePath foi aprovado para a deteco de C. trachomatis e N. gonorrhoeae, no
entanto este mtodo no foi aceite para a avaliao do HPV. O MonoPrep foi
aprovado como um mtodos substituto da citologia cervical convencional.
Ldia - O ThinPrep e o SurePath utilizam tcnicas diferentes para obter o
mesmo resultado: eliminar as clulas no representativas, como o muco e o
sangue, e obter uma lmina com clulas em monocamada concentradas num
ponto. O ThinPrep utiliza um processo de filtragem enquanto que o SurePath utiliza
um mecanismo de sedimentao por gravidade. O MonoPrep um mtodo
semelhante ao ThinPrep, que difere apenas no facto de ser mais barato e de ter j
acoplado ao frasco de transporte o mecanismo de agitao e filtrao.
Os mtodos no aprovados so semelhantes aos aprovados, no entanto tm
pequenas variaes que, por exemplo, tentam diminuir o tempo do processamento,
tornar os mtodos mais baratos ou aumentar a aderncias das clulas lmina. O
mtodo de Liqui-PREP, o de Glucyte e o AutoCyte utilizam um processo de
centrifugao para aumentar a concentrao celular.
Vanessa - A Liqui-PREP um mtodo que utiliza uma soluo que vai ajudar
na centrifugao, eliminando assim o sangue e o muco, e uma soluo que
promove a adeso das clulas lmina.
O Autocyte tambm utiliza uma soluo que vai ajudar na centrifugao, no
entanto no utiliza a soluo adesiva. Esta tcnica frequentemente usada na
deteco de cancro cervical, leses pr-cancerosas e deteco de clulas atpicas.
O Glucyte utiliza a soluo adesiva mas no a soluo que ajuda a separar
as clulas durante a centrifugao, o que leva a que possa ocorrer o
obscurecimento das clulas epiteliais. Este mtodo simples, pode usar-se em
amostras ginecolgicas e no ginecolgicas, e pode ser reproduzido manualmente.
O DNA Citoliq um mtodo de filtrao que difere do ThinPrep uma vez que
constitudo por um kit de colheita que j inclui o mecanismo de processamento.
Este mtodo til na citologia e tambm na pesquisa de cidos nucleicos, tendo
tambm mostrado a sua elevada sensibilidade no diagnstico de leses epiteliais.