Química Analítica Instrumental Umss

Qumica Analtica Instrumental
Tema 1.- Fundamentos de espectroscopa. La radiacin electromagntica. Propiedades

ondulatorias de la radiacin. Aspectos mecanocunticos de la radiacin. Espectroscopa
atmica y molecular.
Qumica Analtica Instrumental
Tema 2.- Diseo y componentes de los instrumentos espectroscpicos. Fuentes de
radiacin. Clulas. Selectores de longitud de onda. Detectores. Tratamiento de seales.
Tema 3.- Espectroscopa UV-visible. Sistemas que absorben en el UV-visible. Ley de Beer.
Instrumentacin. Mtodos y aplicaciones.
Tema 4.- Espectroscopa de luminiscencia molecular. Fluorescencia y fosforescencia.

Quimioluminiscencia. Instrumentacin. Aplicaciones.
Tema 5.- Principios de espectroscopa atmica. Espectros atmicos de emisin y
absorcin. Trminos espectrales. Anchuras de lnea. Atomizacin por llama y

electrotrmica. Eleccin de las condiciones ptimas. Atomizacin con fuentes de plasma.
Atomizacin con arco y chispa. Instrumentacin. Aplicaciones.
2013 Dr. Jos Mara Fernndez lvarez
Tema 6.- Clasificacin de las Tcnicas Electroanalticas. Leyes Generales. Fenmeno
Facultad de Ciencias
Electrdico. Lmite de Electroactividad. Montaje Potenciosttico. Electrodos selectivos de

iones.
Universidad de Navarra
Tema 7.- Etapas de la Reaccin Electroqumica: control difusional; capa de difusin;
hiptesis de Nernst; flujo difusional y convectivo; leyes de Fick. Curvas i-E. Potenciales de
equilibrio, mixto y lmite.
Tema 8.- Valoraciones amperomtricas y potenciomtricas. Sistemas autoindicadores.

Sistemas electroqumicos indicadores de reacciones en equilibrio.
Tema 1.
1. Fundamentos de la espectroscopa.
2. La radiacin electromagntica.
3. Propiedades ondulatorias de la radiacin.
4. Aspectos mecanocunticos de la radiacin.
5. Espectroscopa atmica y molecular.
Algunas modalidades espectromtricas
Introduccin
La Qumica Analtica es la ciencia que identifica los componentes de una

muestra (anlisis cualitiativo) y que determina las cantidades relativas de cada
uno de ellos (anlisis cuantitativo). Generalmente se precisa una separacin
previa del analito de inters.
Mtodos Clsicos: Qumica por va hmeda (volumetras, gravimetras y
anlisis cualitativo sistemtico)
Mtodos Instrumentales: explotan las propiedades fsicas del analito
para obtener informacin cualitativa y cuantitativa
Espectroscopa: estudia la interaccin del campo elctrico de la radiacin
electromagntica con la materia mediante fenmenos de absorcin,
emisin y dispersin de luz
Regiones del espectro electromagntico
Regiones del espectro electromagntico
Interaccin de la energa radiante con la materia
La luz: radiacin electromagntica
La luz: niveles discretos de energa
La luz tiene una naturaleza dual:

Corpuscular (fotones)
El principio de quantizacin de la energa implica que slo son

posibles ciertos valores discretos de energa.
Ondulatoria (ondas)
Ver Skoog, pag. 135-7
La luz y su interaccin con la materia: niveles discretos de energa
Onda electromagntica
Frecuencia: nmero de ciclos por unidad de tiempo. Depende de la fuente

emisora y permanece invariante, independientemente del medio que atraviese.
[ ]
ciclos
[ ] hertz [ ] s 1
s
Periodo: tiempo empleado en un ciclo completo. T = 1/ [=] s

Longitud de onda, i: distancia entre dos mximos o mnimos sucesivos.
Velocidad de propagacin: vi = i
Nmero de onda: nmero de ondas por cm.
v y son funcin del medio que atraviesan
1
1
[ ] cm 1 ; K
i
vi
En el vaco, la velocidad de la radiacin se hace independiente de la longitud de

onda y alcanza su valor mximo. c = = 3,00108 ms-1
Onda electromagntica
Figuras de interferencias
Potencia, P, es la energa expresada en watios que alcanza un rea

determinada por unidad de tiempo
La amplitud de la onda resultante depende del desfase entre las ondas

individuales
Intensidad, I, es la potencia de la radiacin por unidad de ngulo slido
E h
h c
h c
h, constante de Planck = 6,6310-34 J s
La P de un haz es directamente proporcional al nmero de fotones por segundo.
Interferencias constructivas y destructivas
Superposicin de ondas
A desfase cero, =0, se obtiene la

interferencia constructiva mxima
Para = 180, se obtiene la

mxima interferencia destructiva
Animations courtesy of Dr. Dan Russell, Kettering University
Transmisin de la luz a travs de un medio: frenado de onda
Curva de dispersin refractiva
Lentes, n cte.
vi = f (i)
ni = f (i)
Prismas
El frenado es funcin de la naturaleza y concentracin de la materia

atravesada.
ndice de
refraccin
ni
c
vi
Dispersin de la luz (scattering)
Dispersin de la luz (scattering)
Centro dispersante
La mayora de los fotones
(p.e.: molcula, partcula

insoluble o coloidal)
Haz
incidente
dispersados tienen la misma

frecuencia que la fuente (dispersin
Rayleigh); sin embargo, la
frecuencia de algunos fotones
Radiacin
dispersada en
todas las
direcciones
(aprox. 1 en 107) ha variado

(dispersin Raman).
Rayleigh
Polarizacin
Se dice que la radiacin electromagntica est despolarizada cuando los

vectores magntico y elctrico alcanzan la misma magnitud en todas las
direcciones.
Luz polarizada en el plano y luz polarizada circular
E = Eocost
E = Eoe-t = Eocost + Eo sin t
La luz se dice linealmente polarizada cuando oscila en un nico plano al

moverse por el espacio.
Luz polarizada en el plano
Luz polarizada circular
Refraccin de la luz: ley de Snell
Reflexin de la luz
Cambio abrupto de la direccin de una radiacin al pasar de un

medio a otro con distinta densidad, como consecuencia del cambio
de velocidad de la radiacin en los dos medios.
c
sen 1 n2 v 2 v1 1 1

sen 2 n1 c v 2 2 2
v1
Si el medio 1 es el vaco, n1 = 1
Principio de Fermat: la
luz sigue el camino ms
corto (menos tiempo).
La longitud L de A a B es:
Puesto que la velocidad es cte (mismo medio) la ruta de tiempo mnimo es la

de distancia mnima que se puede calcular igualando a cero la derivada.
nvaco = 1,00027 naire
n1 sen 1 n2 sen 2
Reflexin de la luz
Si la rugosidad de la superficie lmite es menor que la longitud

de onda, entonces se produce una reflexin propiamente dicha,
para la cual se cumple la ley de la reflexin (ngulo de incidencia =
ngulo de reflexin). Por lo general se refleja nicamente una parte
Reflexin de la luz
Para un rayo que incida

Ir
del rayo incidente, pues la otra penetra en el medio y es refractada.

Si la rugosidad de la superficie lmite es comparable a la
longitud de onda del rayo incidente se obtiene una difusin
(reflexin difusa)
perpendicularmente a la superficie, la
reflectancia viene dada por:
Ii
(n2 n1 )2
(n2 n1 )2
y, en general,
Ir
Ii
Si el rayo sobrepasa un ngulo lmite

determinado, se produce la denominada
reflexin total.
Pasar del aire (n=1) a vidrio (n=1,5) supone una reflectancia

de = 0,04 = 4%
Si hay muchas superficies en el camino ptico, se producen
muchas prdidas: stray light
Ver Skoog, pg 133
Ejemplo 6.2
Difraccin de radiacin monocromtica por rendijas
Difraccin: todo haz paralelo de radiacin electromagntica se curva al

pasar por un objeto puntiagudo o por una rendija estrecha.
Difraccin de radiacin monocromtica por rendijas
BCF DOE
CBF
CF BC sen
m BC sen
m : orden de interferencia
DE OD sen
La difraccin es consecuencia de la interferencia y fue demostrada en 1800

por Young
BC DE BC DE
OD
OE
Ver Skoog, pg 129-130

Ejemplo 6.1
Radiacin coherente
Diagrama simplificado de niveles energticos
Radiacin emitida por una fuente cuando todas las ondas elementales emitidas poseen
una diferencia de fase constante en el tiempo y en el espacio (IUPAC, 1997)
La luz producida por un lser es:
Monocromtica (longitud de onda nica)
Coherente (en fase)
Direccional (cono de divergencia
estrechsimo)
E
E = E electr + E vibr + E rot
La lmpara incandescente produce una luz:

Cromtica
Incoherente
No direccional
Fuente de luz monocromtica:
Coherente
No direccional
tomos absorbentes: espectro atmico
Absorcin y resolucin espectral
Los dos picos de absorcin surgen

de la promocin del electrn 3s a
los dos estados 3p
Espectros de absorcin
Desactivacin radiacional y no-radiacional
Emisin atmica y molecular
Emisin de un cuerpo negro: continuo de radiacin vs. lneas discretas de RX
mx
1
(Wien)
T
W(B ) T 4 (Stefan)
W V 4 (en el VIS)
Tema 2
Instrumentacin general para espectroscopa
1. Diseo y componentes de los instrumentos
Selector
de
Celda
Detector
espectroscpicos.
Fuente
2. Fuentes de radiacin.
Detector y
registrador de la
seal
3. Clulas.
M t
4. Selectores de longitud de onda.

5. Detectores.
6. Tratamiento de seales.
Instrumentacin general para espectroscopa
Diagrama de bloques para absorcin
Absorcin
Fluorescencia
Emisin
Diagrama de bloques para absorcin
Diagrama de bloques para fluorescencia y fosforescencia
Fuentes de radiacin en EAM
Fuentes de radiacin en EAM
Caractersticas relevantes:
1. Distribucin espectral: intensidad a distintas (fuentes de
continuo vs. fuentes de lneas)
Espectro continuo
2. Intensidad
3. Estabilidad
1. Ruido (fluctuaciones a corto plazo)
2. Deriva (fluctuaciones a largo plazo)
Espectro de lneas discretas
4. Coste
5. Tiempo de vida
6. Geometra
I: Fuentes de continuo
A) Radiacin trmica (incandescencia)
Los slidos calentados emiten radiacin prxima a la radiacin terica del

cuerpo negro.
Comportamiento del
Cuerpo Negro:
Como W~ T4, cuando se usa
una fuente incandescente se
precisa una temperatura
constante para que la
emisin sea estable.
mx
(Wien)
T
W(B ) T 4 (Stefan)
W V 4 (en el VIS)
VIS
1. Filamento de wolframio encapsulado en un bulbo de vidrio
Normalmente funciona a unos 3.000C
Se necesita atmsfera inerte para prevenir la oxidacin del filamento
Es til entre 350-2.200 nm (VIS- IR cercano)
Por debajo de 350 nm el vidrio absorbe la mayor parte de la radiacin
2. Lmparas halgenas en bulbo de cuarzo
El halgeno sirve para formar haluros voltiles de volframio
Al enfriar la lmpara, el W se re-deposita sobre el filamento
Mayor tiempo de vida.
Pueden funcionar a T ms altas (hasta unos 3.500C)
Proporcionan mayor intensidad lumnica
Elevadas T demandan cuarzo en las paredes de la lmpara.
El cuarzo transmite mejor en el UV.
B) Lmparas de descarga de gases
Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un tubo relleno de

gas.
Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin
Lmpara de Deuterio

gas.
Lmpara de H2: 3-5 veces menos intensa que la de Deuterio.
D2 ms pesado que H2 menores prdidas por colisiones
D 2 E elctrica D *2 D' D' ' h

Intervalo de : 180 370 nm
Intervalo de : 160 380 nm
Muy adecuadas para el UV
Muy adecuadas para el UV

gas.
Para una ms elevada intensidad:
Lmpara de Xenon a 10-20 atm

gas.
Lmpara de vapor de mercurio
Ms colisiones: continuo
Inconvenientes:
til para cuando se necesitan
Vida relativamente corta
unas pocas lneas muy intensas
Necesita cebado
(Fluorimetra)
Arco errante
Potencia dependiente del tiempo
Fuentes en EAM
Fuentes en EAM
Para EAM UV-VIS: H2 o D2 en el UV y W para el VIS

(cambio durante el barrido)
Para Espectrofluorimetra con barrido:
lmpara de arco de Xe
Con fluormetros de longitud de onda fija:
lmpara de Hg a baja Presin
Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation
Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation
Laser He-Ne
Ratio emisin estimulada/absorcin
R 21(estimulada)
R 12 (absorbida)
N2
N1
Conclusin:
para
lograr
emisin
estimulada se precisa una
inversin de la poblacin:
N2 > N1
Mecanismo Laser
Laser en accin
Lasing medium
at ground state
Pump energy
Population
inversion
Pump energy
Feedback mechanism
Output
coupler
Start of stimulated
emission
Pump energy
Stimulated emission
building up
Lasing medium
Pump energy
High
reflectance
mirror
Energy
input
Energy pumping
mechanism
Partially
transmitting
mirror
Laser in
full operation
10
Laser: tipos
1) Estado slido
Laser: caractersticas
La luz producida por un lser es:
a) Laser de Ruby [Al2O3+Cr(III)]. Opera a 694,3 nm bombeado por

lmpara de arco de Xe. Pulsante (puede ser CW tambin)
Monocromtica (longitud de onda nica)
b) Laser de Nd/YAG (granate de Y-Al con Nd): 1.064 nm
Direccional (cono de divergencia estrechsimo)
2) Gaseosos
a) tomo neutro: He-Ne: 632,8 nm
Coherente (en fase)

Intensa
La lmpara incandescente produce una luz:
b) Iones: Ar+ o Kr+: 514,5 nm
Cromtica
c) Moleculares: CO2 : 10.000 nm (1.000cm-1); N2: 337,1 nm
Incoherente
d) Excmeros: gas inerte + F: ArF+ (193 nm); KrF+ (248 nm);

XeF+ (351 nm)
No direccional
3) Colorante (dye laser). Amplia gama de colorantes que pueden

proporcionar una variedad de .
4) Diodo semiconductor. Amplia gama de . Continuo.
Sistema de aislamiento de
Fuente de luz monocromtica:

Coherente
No direccional
Sistema de aislamiento de
1. Filtros
Absorcin (vidrio, pelcula o disolucin coloreada: solucin ms barata)
Corte
Interferencia
2. Monocromadores
Prisma
Red
Tres enfoques o planteamientos:

1) Bloqueo de la radiacin no deseada: FILTRO
2) Dispersin de la radiacin y seleccin de la banda estrecha de de inters:
MONOCROMADOR
3) Modulacin de las a diferentes frecuencias: INTERFERMETRO
Filtros de absorcin (filtros de paso de banda)
Muestran muy baja transmitancia

Presentan un perfil de pico muy ancho
Pueden usarse 2 ms filtros en serie
Caracterizacin de los filtros
Dos trminos asociados con los filtros pticos son:
1. Anchura de banda
efectiva medida a la
mitad de altura de pico.
2. nominal (450 y 500
nm, en estos casos)
Pueden ser de cuarzo o vidrio

Relativamente baratos
11
Filtros de corte (Cut-off filters)
Combinacin de filtros de absorcin y de corte
La combinacin de 2 filtros de corte produce el

efecto de un filtro de paso de banda
%T
/ nm
Filtro de interferencia
Haz incidente
Lminas de
vidrio
Recorrido entre superficies:

Reforzamiento:
m'
t
cos
2t
cos
0 cos 1
m ' 2 t
Material dielctrico (CaF, MgF)
Capas metlicas
semi-reflectantes
Radiacin
transmitida
En el aire:
= n
Longitud de onda transmitida:
2tn

m
Filtro de interferencia vs. filtro de absorcin
Tpicamente, el %T
disminuye con
anchuras de banda
decrecientes.
12
Cua de interferencia (wedge)
Monocromador: Prisma
White Radiation
Moveable Slit
Glass
Metallic Layer
Dielectric Layer
Se pueden usar desde el UV hasta el IR
Monochromatic
Radiation
El material a emplear depende de la zona del espectro
Son tiles para seleccionar varias bandas de radiacin gracias al

movimiento de la radiacin incidente a lo largo del filtro.
Vidrio: en el VIS por encima de 350 nm

Cuarzo: en el UV
Sales cristalinas (NaCl, KBr): en el IR
Las anchuras de banda tpicas son 20 nm
Red de escalerilla: interferencia constructiva
Monocromador: Red
En la red de escalerilla (rejilla) se hacen una serie de hendiduras

paralelas (surcos) en una superficie lisa con espaciado diferente en
funcin de la zona del espectro.
m (CD AB)
UV_VIS: 500 a 5.000 lneas por mm

IR:
50 a
CD d sen i
200 lneas por mm
AB d sen r
m d (sen i sen r)
Red de escalerilla: interferencia constructiva
Monocromador de red
Una red que contiene 1.450 surcos/mm es irradiada con luz policromtica con
un ngulo incidente de 48. Qu longitudes de onda aparecern a un ngulo
de reflexin de +20 y de -10?
m d (sen i sen r)
d
mm 10 6 nm
689,7 nm
1.450 mm
Para r = 20:
= (689,7/m) (sen 48 + sen 20) = 748,4/m nm
(748,4; 374,2; 249,5 nm, etc.)
Para r = -10:
= (689,7/m) [sen 48 + sen (-10)] = 397,9/m nm
(397,9; 199,0; 132,6 nm, etc.)
13
Monocromador: Dispersin
Monocromador de red. Montajes Czerny-Turner y Ebert
Dispersin angular: cambio en el ngulo de reflexin a medida que

vara la
1
A = dr/d
Dispersin lineal: variacin de la en funcin de la distancia a lo largo
del plano focal.
D = dy/d = F dr/d = F A
F: distancia focal de la lente de enfoque
Dispersin recproca lineal: D-1 = d/dy = 1/F d/dr [=] nm/mm
m d (sen i sen r)
dr
m
d d cosr
Red:
103 - 104
Prisma:
101 - 102
1 2
;
2
1 2
D F
dr dr dn
d dn d
Variable (ver curvas de

dispersin)
entonces = 0,5 nm
Rred = mN
El poder colector de luz es una medida de la cantidad de luz que

alcanza el detector.
Ej.: Si R = 103 y = 500,

N de rayas
Rprisma = b dn/d
Si r es pequeo, D para
una red- es constante
Monocromador: Velocidad, f/nmero
Orden de
interferencia
d
mF
Para un prisma: D NO es constante.
A menor d le
corresponde una
mayor dispersin
angular
Monocromador: Poder de Resolucin, R
D 1
Para r < 20 cos r

1
d d cosr
D
dy
mF
1
F
d
F: distancia focal
f/nmero: 1 -10
d: dimetro de la lente
Cuanta ms energa radiante llegue al detector, mayor relacin

seal/ruido se obtendr en la medida resultante.
El poder colector de luz es ~ f -2
Ej.: Calcular la resolucin necesaria para

observar procesos de absorcin a 599,9
y 600,1 nm sin interferencia.
Cuanto menor es el nmero ms luz se recoge.
R = 600 / 0,2 = 3.000
Un monocromador con f/2 recoge 4 veces ms de luz que uno con f/4
Comparacin de prestaciones de los sistemas aisladores de
Red de escalera
r i
m 2 dsen
D 1
2 d cos
mF
14
Monocromador de red de escalera
Monocromador de red de escalera
Monocromador doblemente dispersante

Dispersin ms elevada
Mejor resolucin
que un monocromador convencional
Los dos elementos dispersantes son una red
de escalera y un prisma de baja dispersin.
Anchura de rendija y resolucin
Si la w se ajusta de
modo que ef =
se consigue resolucin
espectral completa.
y
Si y w ef
D 1
R
ef
nm
1,2
y
mm
ef
ef w D 1
w?
1
(589,6 589) 0,3 nm
2
ef 0,3 nm
0,25 mm
D 1 1,2 nm
mm
Rendijas estrechas
garantizan mejor
resolucin
Rendija estrecha
Mejor resolucin: aptas para anlisis cualitativo
Prdida de potencia del haz: no recomendables para anlisis cuantitativo
15
Material ptico
Celdas para la muestra
Lentes, prismas y celdillas han de ser transparentes a la

radiacin utilizada
En el VIS se puede emplear el vidrio de 350 nm en
adelante
En el UV, el cuarzo es el ms adecuado
En el IR: NaCl, KBr
Cuanto ms pesado sea el tomo ms transparente a radiaciones
alejadas en el IR (mayores ).
Su mayor problema es la posibilidad de absorber la humedad ambiente
que hace que se velen.
Transductores de radiacin (Detectores)
Caractersticas del detector ideal
Los primeros detectores fueron el ojo humano y las placas fotogrficas.

Los instrumentos modernos contienen dispositivos que convierten la radiacin
en una seal elctrica.
Elevada sensibilidad
Dos tipos habituales:
Alta relacin seal/ruido (S/N ratio)
Detectores de fotones
Los detectores fotoelctricos o cunticos poseen una superficie activa capaz
de absorber radiacin EM
En algunos, la radiacin absorbida produce la emisin de electrones
dando lugar a una fotocorriente
En otros, la absorcin de radiacin promueve electrones a la banda de
valencia de un semiconductor posibilitando la conduccin
(fotoconduccin)
Uso comn en instrumentos UV, VIS, IR cercano
Detectores trmicos
Respuesta independiente de la (o al menos dar una

respuesta constante a lo largo de un intervalo amplio de )
Tiempo de respuesta corto
Ausencia de corriente oscura
Seal directamente proporcional a la potencia

radiante incidente
Miden el calor inducido por la radiacin incidente

Uso frecuente en espectroscopa IR
Clula fotovoltaica
Fototubo de vaco
h: rotura de enlaces covalentes; creacin de electrones y huecos conductores
Muy sencillo
S = kP
Poco sensible
Fatiga
16
Tubo fotomultiplicador (PMT)
Tubo fotomultiplicador (PMT)
Muy sensibles a radiacin Vis-UV

Factor limitante: corriente oscura refrigeracin
Se usan para medir radiacin de baja potencia
Detector de diodo de silicio
Detector de diodo de silicio (unin p-n)
I0
I1
Sensibilidad intermedia entre el fototubo

de vaco y el tubo fotomultiplicador
Detector de diodo de silicio
Depletion layer
R (a. u.)
h
Se origina una corriente
proporcional a la potencia radiante
190
1100 nm
Serie de fotodiodos (Photodiode array)
17
Serie de fotodiodos (Photodiode array)
Dispositivo de carga acoplada (Charge Coupled Device, CCD)
Diode Array
Multi-channel
Amplifier
Los detectores de fotodiodos han revolucionado el

CCD Charge-Coupled Device, "dispositivo de cargas (elctricas) interconectadas
diseo de instrumentos VIS-UV al hacer posible la

miniaturizacin de los espectrmetros
Los primeros dispositivos CCD fueron inventados por Willard Boyle y George
Smith en 1969 en los Laboratorios Bell.
Determining the brilliance distribution of an astronomical object (star, planet,

galaxie,...) with the help of a CCD is pretty much similar to the measurments of
the quantity of infalling rain on a farm. As soon as the rain stops, collecting
buckets are displaced horizontally on conveyor belts. Then the water content of
the buckets is collected in other buckets on a vertical conveyor belt. The overall
content is sent onto a weighting system.
Pixel
(a)
Electrodes
Electrons
Output
register
(a)
(b)
To Output amplification
The way a CCD works is illustrated by means of a simplified CCD made of 9 pixels, an
output register and an amplifier. Each pixel is divided in 3 regions (electrodes who serve to
create a potential well). (a) when an exposure is made, the central electrode of each pixel is
maintained at a higher potential (yellow) than the others ( green) and the charges collecting
process takes place. (b) At the end of the exposure, the electrodes potentials are changed
and charges transferred from one electrode to the other.
(b)
Impurity (doping)
(a) By changing in a synchronized way the potential of the electrodes, electrons are
transfered from pixel to pixel. Charges on the right are guided to the output register
(b) The horizontal transfer of charges is then stopped and charge packages at the output
register are transfered vertically, one by one, to an output amplifier and then read one
by one. The cycle starts again until all the charges have been read (reading time of about
1 minute for a large CCD).
18
Mosac of 4 CCDs, containing

each 2040 x 2048 pixels. This
composite detector is about 6 cm
large and contains a total of 16
millions pixels (Kitt Peak
National Observatory, Arizona).
Quantum efficiency curves of different types of CCDs as a function of the wavelenght

compared to the one of other detectors. We can see on this plot the large domain of
wavelenghts for the spectral response of CCDs.
La medida instrumental cuantitativa
Cociente Seal/Ruido (Signal to Noise ratio; S/N): Su estimacin
Todas las medidas instrumentales involucran una seal
Da una idea de la calidad de las medidas instrumentales
Desafortunadamente, todas las seales incorporan ruido
S
media de la seal
x
1

N desviacin estndar s DER
En ocasiones el ruido es grande
DER :Desviacin Estndar Relativa
A veces el ruido es tan pequeo que no se percibe.
x = 0.9
Nt = 1.0 x 10-15 A
x = 0.9 x 10-15
s = Nt/5 = 1.0 x 10-15/5 = 0.2 x 10-15
A menudo el ruido es constante e independiente de la seal
S/N = x/s = 0.9 x 10-15/0.2 x 10-15 = 45
Fuentes de ruido
Cociente Seal/Ruido (Signal to Noise ratio; S/N)
Un cociente
S/N bajo
proporciona muy
poca fiabilidad
para la medida
de seales
analticas.
El Lmite de
Deteccin suele
tomarse para S/N
~23
Ruido Qumico: temperatura, presin, humedad, etc.

Las variaciones provocan fluctuaciones incontrolables
Ruido Instrumental: debido a los componentes de los

aparatos
- Trmico (Johnson noise): movimiento trmico de los

electrones en los resistores
- Disparo (Shot noise): movimiento de los electrones

a travs de una unin.
- Parpadeo (Flicker noise): cualquier ruido que es
inversamente proporcional a la seal: 1/f
- Ambiental (Environmental noise): mezcla de
mltiples fuentes de ruido.
19
Ruido trmico (ruido blanco)
Ruido de disparo (shot noise)
Vrms: raz cuadrtica media o valor eficaz del ruido de la

tensin que est dentro de una
f: anchura de banda de la frecuencia del ruido en Hz
irms: raz cuadrtica media o valor eficaz de las

fluctuaciones de corriente relacionadas con
k: constante de Boltzmann (1,3810-23 JK-1)
i: La corriente continua promedio

T: temperatura absoluta en K
e: carga del electrn (1,6010-19 C)
R: resistencia en
1
f
3 tr
Tiempo de ascenso, tr, es el tiempo de respuesta expresado en s

de un instrumento a un cambio brusco de la seal de entrada.
Se toma como el t necesario para que la seal de salida pase del
10% al 90% de su valor final
f: ancho de banda de las frecuencias consideradas

Tambin tiene carcter de ruido blanco
Ej.: tr = 0,01 s ancho de banda = 33 Hz
Ruido ambiental
Mejora del cociente S/N
Hardware & software

Hardware:
1. Toma de tierra y proteccin (caja de Faraday)
2. Filtracin analgica y RC
3. Modulacin: conversin de la seal DC a AC de alta
frecuencia y posterior demodulacin
4. Chopping de la seal: disco rotatorio, ayuda a discriminar
seales continuas de las transientes
5. Amplificadores operacionales
Filtro de paso alto
Filtro de paso bajo
Deja pasar las seales de frecuencia baja, eliminando el ruido asociado a

frecuencias altas (ruido trmico y de disparo)
Raw Data
Elimina el ruido de frecuencia baja (parpadeo y deriva) permitiendo el

paso de las frecuencias altas.
Raw Data
Filtered Data
Low Pass
Filter
High Pass
Filter
Time
til para instrumentos que miden seales analticas de baja frecuencia
Filtered Data
Time
til para instrumentos que miden seales analticas de alta frecuencia
20
Filtro de paso de banda
Modulacin - desmodulacin
Combinacin adecuada de filtros de paso bajo y alto para dejar pasar

solamente la(s) frecuencia(s) de inters.
La seal se modula hacindola pasar por un chopper (disco rotatorio) de

modo que pasa de poseer baja frecuencia a ser una seal de alta frecuencia (el
ruido 1/f es menos problemtico a frecuencias elevadas)
A continuacin la seal se amplifica y se pasa a travs
de un filtro de paso alto para eliminar el ruido 1/f
1.0
Low Pass
0.6
Band Pass
Filter
0.4
0.2
0.01
0.1
Band Pass
High Pass
0.8
Relative Signal
Relative Signal
1.0
1.0
10
100
0.8
La seal se demodula y se pasa por un filtro de paso
0.6
bajo para dar lugar a una seal de corriente continua (dc)
0.4
amplificada
0.2
0.01
1000 10,000
1.0
0.1
10
100
1000
10,000
Frequency, Hz
Frequency, Hz
Mejora del cociente S/N
Promediado conjunto (ensemble averaging)
Hardware & software

Software:
1. Promediado conjunto
Registro de sucesivos espectros,

suma punto a punto y promediado
En este algoritmo, sucesivas series de

datos (matrices) se recogen y suman
punto por punto como en una matriz
de la memoria de un ordenador
(COADICIN).
Despus
de
la
coadicin, los datos se promedian
dividiendo la suma para cada punto
por el nmero de barridos realizados.
1. Promediado conjunto
2. Promediado por grupos
3. Filtrado digital
Si
i 1
N ( rms noise )
Sx = seal promedio (punto)

Si = medida individual de la seal
n = nmero de medidas
Si la seal en x tiene un valor de Sx,
Entonces:
La seal del ruido, Nx, contenido en Sx, tambin se sumar pero como las seales
de ruido son aleatorias se acumulan como la n
Sx
n Nx
Sx
n
S x Si
i 1
S
S n Sx
n x
N
Nx
n Nx
Sx
n
S x Si
i 1
Promediado conjunto (ensemble averaging)
Promediado por grupos (boxcar averaging)
A Single Spectrum
1.5
Signal
i 1
Donde:
Al sumar n series de datos, la suma valdr: n Sx.
Por tanto la suma del ruido de x despus de sumar n series de datos es:
Sx
S
0.91
1.0
N
0.289
S/N
3.14
Sx
S
n 1
N
N1
0.5
Suaviza las irregularidades de alta

frecuencia en una onda de ms baja
frecuencia
0.0
0
200
300
Time (s)
400
500
600
Se hace en tiempo real a medida

que el ordenador registra la seal
Average of Sixteen Spectra
1.5
Signal
100
S
0.90
1.0
N
0.070
S/N
12.81
Se emplea para seales complejas

que varan rpidamente con el tiempo
0.5
0.0
0
100
200
300
Time (s)
400
500
600
Sx
S
n 1 16 3.14 12.56
N
N1
21
Sensibilidad
Lmite de deteccin (LOD) y de cuantificacin (LOQ)
S = mc + Sbl
b) Analtica
sS
S = seal o respuesta del instrumento

Sbl = seal del blanco
LOD: mnima concentracin o masa de analito que puede ser detectada por un
mtodo instrumental a un nivel dado de confianza (95%)
c = concentracin de la muestra
LOQ: mnima concentracin que puede ser fiablemente cuantificada
m = sensibilidad del calibrado (pendiente
de la curva de calibrado; no tiene en cuenta la

precisin de las medidas individuales)
: sensibilidad analtica
sS: desviacin estndar de la
medida de la seal
+ Independiente de las unidades de

medida de S
Sm = Savg, bl + ksbl
100
m2
Sm1
Sbl
Sm: Seal mnima detectable

Savg, bl: Seal promedio del blanco
80
k: nmero entero (3)
60
Sm2
+ No depende de los factores de

amplificacin
LOD
Seal analtica mnima detectable:
Signal (S )
a) Calibrado
m1
40
sbl: desviacin estndar del blanco
Concentracin mnima detectable:
20
cm
0
0
0 .2
0 .4
0 .6
0 .8
C once ntration (c )
Sm S avg,bl
cm
k sbl
m
- Depende de la concentracin [ss = f(C)]
Lmite de deteccin (LOD) y de cuantificacin (LOQ)
Intervalo dinmico de linealidad y lmite de linealidad (LOL)
El intervalo dinmico se extiende desde el LOQ hasta el LOL
Instrume nt Re sponse
LOL
LOQ
cm
Dynamic Range
Conce ntration
LOQ
Seal mnima cuantificable:
Concentracin mnima cuantificable:
Sq = Savg, bl + 10sbl
Tema 3
cq
10 sbl
m
Espectroscopa VIS - UV
1. Espectroscopa UV-visible.
2. Sistemas que absorben en el UV-visible.
3. Ley de Beer.
4. Instrumentacin.
5. Mtodos y aplicaciones.
160
780
22
Ley de Beer: presupuestos bsicos
Ley de Beer: deduccin
1. La radiacin es monocromtica
2. Las partculas absorben de modo independiente
3. Seccin recta y uniforme de absorcin
4. Los procesos de absorcin y desorcin de energa han de ser
P0
rpidos
5. La degeneracin de la energa absorbida ha de hacerse por va no
radiacional
db
6. El ndice de refraccin del medio absorbente debe ser independiente
de la concentracin
b = 10 mm
Ley de Beer: deduccin
dP N
Ley de Beer: terminologa comn
(n de partculas absorbentes)
(n de fotones)
dV = S db; dV [=] cm2 cm [=] cm3

mol
23 tomos
NC
dV (L) 10 3 6,023 10 20 S db C
6,02310
mol
L
K'
dP cte N P cte K' db C P K db C P
dP K db C P ;
P
P0
dP
K C b
P
P0
P
dP
K C db ; ln K C b
P0
P
0
log
P
K
bC
P0 2,303
log
P
log T Abs
P0
b [=] cm
Abs = a b
C
Ley de Beer
db
a = , absortividad molar; [=] L mol-1 cm-1
c [=] mol/L
Ley de Beer: Prdidas de potencia radiante
Ley de Beer: Absorbancia, Transmitancia y Absorcin
T = P/Po
%T = (P/Po) x 100
A = -log T= abc
%Absorcin = 100 - %T
23
Ley de Beer
Ley de Beer: Correccin de prdidas
P1
Muestra
P1
Blanco
P0
P1
En un medio absorbente, la potencia decae exponencialmente con la

longitud de paso ptico
P
Potencia
P P0 10
P1
b1
b c
celda
P'
Treal 1 ;
P'
P
Abs logT log 0
P1
P P'
Tmedida 1 1 ;
P0 P'
P1
Experimentalmente se miden slo potencias salientes
b1
Ley de Beer
Ley de Beer

longitud de paso ptico
Potencia
P P0 10

concentracin.
P1
b1
b c
P1
C1
Potencia
P P0 10 b c
P
celda
P1
C2
P2
P1
P2
b2
P2
P2
b1
b2
C1
Ley de Beer: Ejemplos
C2
Ley de Beer: ejemplos

-4
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
220
Abs b C
Absorbancia
Absorbance
Parsol 340 (10 M in MEOH)
270
320
370
420
Concentracin
Wavelength/nm
y = 0.9224e-30498x
R2 = 0.9995
Beer-Lambert plot for Parsol 340 in ethanol
0
0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04
[P340]/M
[P340]/M
absorbance
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.5
SO 3H
1.6
y = 13245x + 0.0351
1.4
R2 = 0.9995
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04
0.6
HO3S
0.4
max~45.000
O
UVA
HO 3S
Absorbance
T vs [P340]
Se pueden encontrar valores elevados de

hasta 105 L mol-1 cm-1 para la constante de
proporcionalidad.
UVA
0.2
0.1
O
O
0.3
SO 3H
0
200
Mexoryl SX
250
300
350
400
W avelength/nm
24
Ley de Beer: desviaciones
Ley de Beer: aditividad
Propias a la Ley
ATotal A1 A2 A3 ...... An
ATotal 1b1c1 2b2c2 3b3c3 ...... nbn cn
Elucidacin de muestras binarias o

ternarias de componentes absorbentes
Procesos no absorbentes
Qumicas
Equilibrios en disolucin
'
A' M
b [M] N' b [N]
''
''
A' ' M b [M] N b [N]
' :
' ' :
Dependencia de respecto de n
Interacciones moleculares
Las absorbancias
son siempre
aditivas
Disolvente
Impureza de reactivos
Presencia de interferencias absorbentes
Instrumentales
Radiacin policrmatica
Radiacin parsita o dispersa
Ruido instrumental
745
3
745
745
4
Abs745 745
[Cu2 ] Bi
] 745
[CuY 2 ] BiY
]
3 [Bi
[BiY ] 4 [Y
Cu2
CuY 2
Y
Propias a la Ley
Anchura de rendija
A no tiene limitacin con respecto a b
Propias a la Ley
A no tiene limitacin con respecto a b
Se pueden emplear celdillas pequeas para analitos

concentrados y celdilla ms largas para muestras ms
diluidas.
Se pueden emplear celdillas pequeas para analitos

concentrados y celdilla ms largas para muestras ms
diluidas.
Si A = 0,410 en una celdilla de 1,0 cm, entonces:
Si A = 0,410 en una celdilla de 1,0 cm, entonces:
Si b = 2,0 cm,
A = 0,820
Si b = 2,0 cm,
A = 0,820
Si b = 0,1 cm,
A = 0,041
Si b = 0,1 cm,
A = 0,041
Concentraciones > 0,01 M alteracin del proceso de absorcin individual
Concentraciones > 0,01 M alteracin del proceso de absorcin individual
Ley de Beer es una ley lmite
Ley de Beer es una ley lmite
Un aumento de la concentracin del buffer o del disolvente tiene un efecto

similar
Un aumento de la concentracin del buffer o del disolvente tiene un efecto

similar
Si la modificacin de C implica cambio de n, entonces vara
Si la modificacin de C implica cambio de n, entonces vara
(n) = [n/(n2 + 2)2]
(n) = [n/(n2 + 2)2]
Reacciones del compuesto absorbente

provocan el incumplimiento de la ley de Beer.
HIn
Qumicas
color 1
H In
Ejemplo: si Ka = 10-4
HIn
color 1
CHIn
[HIn]
[In-]
10-5
8.5x10-7
9.2x10-6
10-4
3.8x10-5
6.2x10-5
10-3
7.3x10-4
2.7x10-4
H In
color 2
color 2
Expected
Actual
Estudiar el ej. 13.1 de las pginas 326-7 del Skoog
HIn
25
Ley de Beer: desviaciones.
Ley de Beer: desviaciones. Punto isosbstico
Se observa un punto isosbstico cuando dos especies absorbentes en
Efecto de la radiacin policromtica
equilibrio, X e Y, tienen la misma absortividad molar a una longitud de onda. Si
En la prctica, el monocromador deja pasar una banda de radiacin.
X e Y estn en equilibrio, para la longitud de onda del punto isosbstico, la

absorbancia total es independiente de las concentraciones relativas de X e Y.
A = b ([HIn] + [In-])
0.9
0.8
Rojo fenol
0.7
Absorbance
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
400
450
500
550
600
650
-0.1
Wavelangth (nm)
El punto isosbstico puede

llegar a ser una longitud de
onda analticamente til
ya que, a esta longitud de
onda, se obtiene una curva
de calibracin lineal sin
controlar las condiciones de
la disolucin (disolucin no
tamponada).
La absorbancia medida Am es:
Instrumentales
Slo cuando las absortividades molares
son iguales a las dos longitudes de
onda, y , la expresin anterior se
simplifica a:
Efecto de la radiacin policromtica
Efecto de la radiacin parsita (scattered light)
Dos factores relevantes:
Luz que no habiendo atravesado la muestra alcanza

el detector, incrementando la seal y produciendo
desviaciones negativas en la absorbancia.
Posicin de la banda
del haz incidente con
respecto al mximo de
absorcin del analito.
Anchura de banda del
haz.
Instrumentales
La luz parsita es
ms relevante
cuanto ms
concentrada sea la
muestra y cuanto
ms larga sea la
celda, pues ambas
situaciones
implican una
menor P
Instrumentales
La ley de Beer se cumple cuando la anchura de paso de banda del

monocromador es <1/10 de la anchura de semipico de absorcin.
Error fotomtrico
A b C;
Error fotomtrico
- log T b C
0,434 ln T b C;
Dividiendo (2) : (1)
(1)
La indeterminacin en la medida de T afecta a C
0,434 dT
b C (2)
T
Diferenciando:
0,434
dC
dT
;
T log T
C
Contribucin de los distintos tipos de ruido

Corriente oscura (%T)
Escrito en incrementos finitos:
C 0,434
T
C T logT
Category
El error relativo en la determinacin de C, C/C, es funcin de T
Precisin en la lectura (analgica)

Ruido de disparo
Parpadeo
Incertidumbre en la posicin de la celda
Characterized by
Typical Sources
Limited Readout resolution
Case I
ST = k1
El error ser mnimo cuando T logT sea mximo:
1
d
(T lnT) T ln T 0 - ln T 1
T
dT
1
0,434
2,303
C
100 2%
C
2,303 log T 1 2,303 A
Abs de 0,2 a 0,8

%T de 65% al 15%
Case II
ST k 2 T 2 T
Case III
0,01%T
0,5%T (1-3% error en la evaluacin de C)
(especialmente por encima del 95%T)
(a altas transmitancias)
(no es factor relevante)
Likely to be Important in
Inexpensive photometers and spectrophotometers having small
meter scales
Heat detector Johnson noise
IR and near-IR spectrophotometers and photometers
Dark current and amplifier noise
Regions where source intensity and detector are low
Photon detector shot noise
High-quality UV-visible spectrophotometers
Cell positioning uncertainties
High-quality UV-visible and IR spectrophotometers
Source flicker
Inexpensive photometers and spectrophotometers
ST = k3T
%T = 36,8%
26
Error fotomtrico
Especies absorbentes
* y n*
Tomadas en conjunto estas

fuentes de ruido se concluye que
alta energa, bajas
- *
< 185 nm (UV de vaco)
- n*
= 150 250 nm
- Difciles de medir
la mejor zona para trabajar es

la que corresponde a
n * y *
transmitancias intermedias.
200 700 nm
- Son las transiciones ms

importantes y tiles en
espectroscopa Vis-UV
- Absortividades molares ():

n * 101 102 L cm-1 mol-1
* 103 104 L cm-1 mol-1
Example
Excitation
max, nm
Solvent
C=C
Ethene
171
15,000
hexane
CC
1-Hexyne
180
10,000
hexane
C=O
Ethanal
n *
*
290
180
15
10,000
hexane
hexane
N=O
Nitromethane
n *
*
275
200
17
5,000
ethanol
ethanol
C-X X=Br
X=I
Methyl
bromide
Methyl Iodide
n *
n *
205
255
200
360
hexane
hexane
Chromophore
Formaldehdo
Cromforos comunes
Cromforos comunes
En la Tabla anterior se puede observar:

1.
Las bandas de absorcin intensas ( 104) representan transiciones de

mayor probabilidad (bandas *), mientras que las de baja intensidad
corresponden a transiciones n * (menos probables).
2.
Cada grupo funcional posee bandas de absorcin caractersticas, como lo

son tambin las intensidades de las bandas (medida por el valor de ). La
absorcin de radiacin Vis-UV es debida a los Cromforos ms que a la
molcula en su conjunto (IDENTIFICACIN DE GRUPOS
FUNCIONALES en base a su y ).
3.
La conjugacin de cromforos aumenta la intensidad y origina cambios

drsticos en la max de absorcin del cromforo.
27
Cromforos comunes
Cromforos comunes
La mayora de los espectros de compuestos

orgnicos son complejos
Transiciones electrnicas, vibracionales y/o

rotacionales superpuestas
Bandas de absorcin generalmente anchas
El anlisis detallado e inequvoco no es
posible, si bien se puede hacer una estimacin
del tipo de enlaces involucrados
Los efectos del disolvente y de los
substituyentes complican la situacin (y
tambin pueden aportar informacin)
Cromforos y auxocromos
Nomenclatura
Cromforos: Grupos funcionales que absorben radiacin visible o del UV prximo ( >
200 nm) cuando se hallan enlazados a una cadena orgnica saturada no absorbente.
Auxocromos: Grupos funcionales que poseen electrones de valencia no-enlazantes, n,
que no absorben a > 220nm, pero muestran absorcin intensa de radiacin en el UV
Ej. -OH; -NH2; -Cl, etc.
lejano (180-200 nm), debido a transiciones n *.
Si un grupo auxocromo se asocia a la cadena de un cromforo se exalta el color del
mismo, lo que en trminos espectroscpicos significa que la banda de absorcin del

cromforo se desplaza a mas largas (Efecto Batocrmico o Desviacin hacia el
Rojo) a la vez que aumenta su intensidad (Efecto Hipercrmico).
Efecto Hipocrmico: Cuando disminuye la intensidad de una banda.

Si se desplaza la del mximo de absorcin de un cromforo a ms cortas (ej. al
cambiar a un disolvente ms polar) se ha producido un Efecto Hipsocrmico o
Desviacin hacia el Azul.
La conjugacin de varios cromforos en una molcula produce un desplazamiento

Batocrmico o Desviacin hacia el rojo de la del mximo de absorcin. Ej.
Conjugacin de cromforos
La multiplicidad de
grupos cromforos tiene
escasa influencia en ,
pero incrementa
notablemente
La relevancia de la conjugacin de cromforos
La conjugacin produce
deslocalizacin de electrones ,
estabilizando *, por lo que la
seal se desplaza a mayores
(menor energa)
Naturaleza del
desplazamiento
Trmino
descriptivo
A mayores
Batocrmico
A menores
Hipsocrmico
A mayor absorbancia
Hipercrmico
A menor absorbancia
Hipocrmico
28
Substituyentes en los compuestos aromticos
Algunos grupos cromforos y auxocromos
Los compuestos aromticos poseen tres

conjuntos de bandas debido a transiciones
*.
Efecto del disolvente
Benceno:
184 nm ( ~ 60.000)
Banda E2 a 204 nm ( = 7.900)
Banda B a 256 nm ( = 200)
Disolventes ms frecuentes. Influencia de la polaridad
Cada banda tiene una estructura fina

asociada a transiciones vibracionales
que se reduce e incluso desapareceen disolventes polares.
CH3CHO
Un incremento de la polaridad del

disolvente:
n*: desplazamiento hipsocrmico
n*: desplazamiento hipsocrmico
*: desplazamiento batocrmico
1,2,4,5-tetracina
Disolventes no polares respetan mejor

la estructura fina del espectro
Pigmentos orgnicos naturales
Lantnidos y actnidos
LYCOPENO
Los metales de las series 4f y 5f absorben

merced a transiciones que involucran a los
electrones f
Apenas se nota efecto alguno por parte del

disolvente y de posibles ligandos, puesto que
se trata de electrones de capas internas que
estn protegidas.
-CAROTENO
Los espectros de absorcin muestran seales

agudas y bien definidas.
29
Color de los iones sencillos
Color de los metales de transicin
La mayora de los cationes de los metales de transicin presentan color en disolucin.

La absorcin de radiacin en el visible se debe a transiciones que involucran electrones d
en orbitales d incompletos.
Las capas d son ms externas y estn ms expuestas que las f. Sus espectros son ms
anchos y la mx se ve influenciada por el disolvente y/o los ligandos.
Efecto del campo ligando
Absorcin por transferencia de carga
Involucra la presencia de un aceptor (in

metlico) y de un donor (ligando) de e-.
La absorcin de la radiacin hace que se

transfiera un e- desde el orbital del donor al
orbital del aceptor.
Se origina un estado excitado en el que ha

tenido lugar una reaccin redox.
Absortividades molares elevadas ( > 10.000)
Ej.: Fe(SCN)2+ + h Fe2+ + SCN0
Instrumentacin
Instrumentacin
Doble haz resuelto en el espacio

Cuatro tipos bsicos de diseos instrumentales
Haz simple
Doble haz resuelto en el espacio
Doble haz resuelto en el tiempo
Multicanal
Haz simple
Puede ser de unicanal o de barrido
Las seales de la celdilla de muestra y de la celdilla de referencia se miden
simultneamente y se sustraen.
Se precisan 2 detectores coste elevado
30
Instrumentacin
Instrumentacin
Doble haz resuelto en el tiempo
Multicanal
Es el diseo comercial ms frecuente
Puede hacer un registro (barrido) completo del espectro en 0,1 s

Promedia la seal durante 1 s ms, para mejorar la S/N
Ventajas del doble haz frente al monohaz:

Corrige las variaciones en la intensidad de la fuente
Pocos componentes pticos: mnima prdida de potencia del haz
Compensa la deriva del detector y del amplificador (resuelto en el tiempo)
Lmpara de D2 y resolucin (ancho de banda) de 2 nm
Compensa la variacin de potencia del haz con la longitud de onda
Instrumentacin: fuentes ms utilizadas en el VIS-UV
Instrumentacin: fuentes ms utilizadas en el VIS-UV
Lmpara de Deuterio y su espectro

Un filamento calentado
recubierto de xido proporciona
electrones
Lmpara de
filamento de
Wolframio y su
espectro
Instrumentacin: celdillas ms comunes en el VIS-UV
b = 10 mm
Instrumentacin: detectores
Volumen (L): 160, 100 or 50
31
Instrumentacin: instrumentos tpicos
Instrumentacin: Fotmetro (VIS)
Fotmetros
Instrumentos sencillos que usan filtros para seleccionar la
Solo pueden hacer medidas secuenciales a cada
Escasa disminucin de la potencia del haz (ptica escasa) buena S/N
Baratos
Espectrofotmetros
Emplean un monocromador o un elemento dispersivo para seleccionar la
Pueden hacer barridos de registro de espectros
ptica ms compleja peor S/N
Caros
Instrumentacin: Fotmetro (UV)
Instrumentacin: Espectrofotmetro (VIS)
Detector muy comn en HPLC

Emplea una lmpara de Hg y con un filtro se aisla la lnea a 254 nm
Prctico para cuantificar sustancias
orgnicas que absorben a 254 nm.
Econmico:
450 2500
Intervalo:
380 800 nm
Resolucin:
8 20 nm
Fotmetro de sonda
Utiliza fibra ptica y un espejo para
proyectar el haz a travs de la muestra.
Es habitual en instrumentos de campo.
Elimina la necesidad de celda.
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de haz simple y doble
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble haz
Normalmente emplean lmparas intercambiables de W y D2

Intervalo: 200 900 nm
Coste:
3000 8000 (monohaz); 4000 15000 (doble haz)
Resolucin: 0,5 8 nm (monohaz); 0,1 3 nm (haz doble)
32
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble haz
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble dispersin
La luz pasa dos veces por el sistema dispersante mejorando mucho la resolucin.
Caro:
> 10.000
Ancho de banda:
0,07 nm
Luz dispersada o errtica: 0,0008%
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble dispersin
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV con fotodiodos
Pueden llegar a ser muy compactos en tamao

Registro de espectro muy rpido: 0,1 s
Intervalo:
200 820 nm
Ancho de banda: 2 nm
Coste:
Instrumentacin: Espectroscopa diferencial con escala expandida
3.000 - 20.000
Mezclas de substancias absorbentes
' :
' ' :
'
A' M
b [M] N' b [N]
''
A' ' M
b [M] N'' b [N]
Las absorbancias son siempre aditivas
33
Determinacin de estequiometras: Ordenada de Job
Disoluciones del catin y del ligando con idnticas concentraciones formales

se mezclan en distintas proporciones de volumen, de tal modo que el
AJ = MLn [MLn] +
M[M]
L[L]
AJ = MLn [MLn] +
M[M]
L[L]
sin corregir.
Introduciendo la correccin:
volumen total de cada mezcla sea igual.
CM = [M] + [MLn]
CM + CL = cte
M
L
0 1
10 9
2
8
3
7
4
6
5
5
6
4
7
3
8
2
9
1
10
0
mL
mL
mol
xmL C
10 x mL C mol
L
L C mol
10mL
10mL
L
XM
XL
0........0,1........0,5........0,9........1
1........0,9.......0,5........0,1.........0
MLn [MLn]
M[M]
AJ = (MLn XM + XL = 1
En el mximo:
Se mide la absorbancia de cada disolucin a una apropiada y se corrige por
L[L]
- (MCM +
M[M]
LCL) =
M [MLn]
L[L]
- nL) [MLn] = K[MLn]
L n [MLn]
AJ
AJ
MLn
0
0
;
x
x
cualquier absorbancia de la mezcla si no se hubiese producido reaccin.
Kd
[M] [L]n
; K d [ML n ] [M] [L]n
[ML n ]
CL = [L] + n [MLn]
XL
XM
Determinacin de constantes de complejacin: mtodo de Job
En el mximo de Aj:
JOB
K d [ML n ] [M][L]n
0
x
x
x : fraccin molar de L
[L]libre xC n[ML n ]
1-x: fraccin molar de M
[M]libre (1 x)C [ML n ]
M + nL
MLn
C(1-)
Kf
nC
MLn
M Ln
C 1
1
C (nC ) n nC n
AJ
(1 x)C [MLn ]xC n[MLn ]n (1 c) [MLn ] xC n[MLn ]n (1 x)C [MLn ]nxC n [MLn ]n1C n [MLn ] 0
x
x
x
C xC n [ML n ] n xC n [ML n ]
n 1
xC n [MLn ] n (1 x) C [MLn ]
AM
C (1 x) C [MLn ]
xC n [MLn ] n (1 x) C n [MLn ]
x n (1 x).Luego en el mximo :
x max
1 x max
xmax
Esteq.
0,5
ML
0,66
ML2
0,75
ML3
Determinacin de estequiometras: mtodo de las relaciones molares
AS
X L
XM
AM AS
AM
Lo que se ha disociado
Lo que debera haberse formado
Determinacin de constantes de complejacin: mtodo de las relaciones molares
Consiste en la medida de la absorbancia de disoluciones con una concentracin

constante de metal y una concentracin creciente de ligando, y su
representacin frente al cociente CL/CM.
M + nL
C
nC
MLn
Kf
C(1-)
AM = MLnCMLn = MLn CM;
CM
AS = MLn[MLn]
Dividiendo:
A S ML n
ML n
AM
CM
[M] = CM - [MLn]
AM
AS
MLn
M L n
[L] = CL - n [MLn]
Substituyendo,
se obtiene Kf
CL/CM
Partiendo de disoluciones isomolares, basta con mezclar un volumen constante de la

disolucin de metal y volmenes crecientes de la del ligando, midiendo a la a
que absorbe el complejo.
CL/CM
AM AS
AM
Lo que se ha disociado
Lo que debera haberse formado
34
Determinacin de constantes de equilibrio
Determinacin del grado de disociacin
Kd
In H HIn
Kd
Kf
[H ] [In ]
;
[HIn]
pK d pH log
[HIn]
[In ]
Se miden las absorbancias de una disolucin de concentracin analtica (CT)

conocida a tres pH diferentes.
HIn
c(1 )
Kd
In
1. pH cido (HIn)
Kd
c 2 2
c 2
c(1 ) 1
A3 = HIn[c(1-)] + In- (c) = HInc HInc + In-c
A1 = HIn CT HIn
A3 = A1 + (In- c HIn c) = A1 + (A2 A1)
2. pH bsico (In-)
A2 = In- CT In3. pH intermedio (HIn + In-)
CT = [HIn] + [In-]
[HIn]
A3 = HIn [HIn] + In- [In-]
[In-]
A 3 A1
A 2 A1
Midiendo el pH de la disolucin y
sustituyendo se obtiene Kd
Aplicaciones: anlisis cualitativo
Aplicaciones: anlisis cuantitativo mediante valoraciones fotomtricas
Anlisis de grupos funcionales (complemento de IR y RMN)

Control de calidad: Ciertos productos tienen que ser transparentes al VIS-UV
A (analito) + T (valorante) P (producto)
Ej.: El alcohol etlico de 96 puede contener benceno y debe purificarse

hasta no absorber.
Elucidacin de ismeros. Ej.: bifenilos cis-trans
Ej.: Tautomera ceto-enlica del acetilacetato de etilo
O
H3C C C C OC2H5
H2
OH
H3C C C C OC2H5
H
745
3
745
745
4
Abs745 745
[Cu2 ] Bi
] 745
[CuY 2 ] BiY
]
3 [Bi
[BiY ] 4 [Y
Cu2
CuY 2
Y
275 nm
= 20 Lmol-1cm-1
245 nm
Esta forma posee dobles enlaces conjugados
= 18000 Lmol-1cm-1
Aplicaciones: anlisis cuantitativo
Aplicaciones: determinacin de macrociclos
A. DIRECTO: Componente absorbente en el VIS-UV: Compuestos orgnicos
B. INDIRECTO: Mucho ms comn en Inorgnica
A class of biological molecules containing a ring of seven, fifteen, or any arbitrarily

large number of atoms
Important class is porphyrins which include the heme group and Chlorophyll a
heme has a -* transiton in the blue region at 400 nm. Chlorophyll a -*

transiton in the 650 nm region to give it its green color
B.1) M + R P coloreado (complejacin y redox principalmente)

M + n L MLn.
Eleccin de L condicionada por: Selectividad, Sensibilidad y Solubilidad

B.2) M + Sistema coloreado Decoloracin ~ C
35
Aplicaciones: determinacin de aminocidos y nucletidos
Aplicaciones: estudios conformacionales
Muy til para caracterizar la conformacin de cidos nucleicos y protenas

Substance
pH
max
(nm)
DNA melting:
(L/cmmol)
Phenylalanine
257
200
Tyrosine
275
1.300
Tryptophan
280
5.000
Adenosine-5-phosphate
259
15.000
Cytidine-5-phosphate
271
9.000
Uridine-5-phosphate
262
10.000
Guanosine-5-phosphate
252
14.000
Hypochromism:
Decrease in upon formation of double helix (H-bond)
Binding of a lanthanide
complex to an
oligonucleotide
Changes from
form I to form II
Recta de calibrado con patrones o estndares
Recta de calibrado por adiciones estndar
Se emplea en los casos en que los analitos se encuentran en matrices complejas en las
que es fcil que surjan interferencias.
1. Preparar varias alcuotas idnticas, de un volumen Vx, de la muestra desconocida
2. Aadir a cada muestra alcuota un volumen creciente, Vs, de una disolucin
estndar de concentracin conocida, Cs, del analito a medir.
3. Enrasar todas las disoluciones a un volumen idntico, Vt.
4. Hacer la medida instrumental de cada disolucin.
5. Trazar la recta de calibrado
http://www.unav.es/quimicayedafologia/quimanal/monografias/estadistica/
La expresin que nos da la seal analtica para cada adicin estndar es:
kV C
kV C
S s s x x
Vt
Vt
Instrum ent Response ( S )
6. Calcular la concentracin del analito, Cx, en la muestra.

m = y/ x
S mVs b
b = y-intercept
(V s ) 0
Vs
Combinado las dos expresiones:
S mVs b
kVsC s kVx C x
Vt
Vt
Donde:
S
seal analtica
constante de proporcionalidad
Vs
volumen de estndar aadido
Cs
concentracin del estndar
Vx
volumen de la muestra alcuota
Cx
concentracin del analito en la muestra
Vt
volumen total de las disoluciones diludas
Cx
bCs
mVx
36
Recta de calibrado por adiciones estndar: Ejemplo
Recta de calibrado por adiciones estndar: Ejemplo
Ej.: el As presente en una muestra biolgica se determina por el mtodo de adiciones

estndar. Para ello se pipetearon 10,00 mL de muestra en otros tantos matraces de
100,00 mL. A continuacin, se aadieron volmenes crecientes de un estndar de 22,1
ppm de As a 4 de los 5 matraces, y finalmente- se llevaron todos hasta el enrase con
agua desionizada. A partir de las medidas de absorbancia, calcular la concentracin de
As en la muestra problema.
Muestra (mL)
Estndar (mL)
(mL)
Estndar
Ej.: el As presente en una muestra biolgica se determina por el mtodo de adiciones

estndar. Para ello se pipetearon 10,00 mL de muestra en otros tantos matraces de
100,00 mL. A continuacin, se aadieron volmenes crecientes de un estndar de 22,1
ppm de As a 4 de los 5 matraces, y finalmente- se llevaron todos hasta el enrase con
agua desionizada. A partir de las medidas de absorbancia, calcular la concentracin de
As en la muestra problema.
Arsenic Standard Addition
Absorbancia
Muestra (mL)
Estndar (mL)
(mL)
Estndar
Absorbancia
10,00
0,00
0,156
0,35
10,00
5,00
0,195
0,25
10,00
10,00
0,239
10,00
15,00
0,276
10,00
20,00
0,320
Adiciones estndar con concentraciones
0.45
0,00
0,156
10,00
5,00
0,195
10,00
10,00
0,239
10,00
15,00
0,276
10,00
20,00
0,320
m = 0.00818
b = 0.1554
sm = 0.000119
sb = 0.001463
Absorbance
0.35
0.30
0,3
0.25
0.20
0.15
Abs
10,00
0.40
0,2
0,15
0,1
0,05
0.10
0.05
0
0
0.00
0
10
15
C (ppm)
20
Volume Standard (Vs )
5,00 mL 22,1g
1,105 g mL-1
100 mL mL
A 0,1554 0,0370C
b Cs (0,1554)ua(22,1)g/mL
Cx
41,98 g/mL
m Vx (0,00818)ua/mL(10)mL
C 4,2 ppm
Para A = 0:
Teniendo en cuenta la dilucin 10:100, la

concentracin en la muestra es: 42 ppm
Standard Addition Method (spiking the sample)

- used for analytes in a complex matrix where interferences in the UV/Vis for the
analyte will occur: i.e. blood, sediment, human serum, etc..
(3) Dilute each solution to an equal volume, Vt.
- Method:
(1) Prepare several identical aliquots, Vx, of the unknown sample.
(4) Make instrumental measurements of each sample to get an

instrument response, IR.
(2) Add a variable volume, Vs, of a standard solution of known
concentration, cs, to each unknown aliquot.
Note: This method assumes a linear relationship between instrument response and sample
concentration.
Estimacin de las concentraciones por adiciones estndar
Estimacin de las concentraciones por adiciones estndar; Ejemplo
1. Preparar dos disoluciones con alcuotas idnticas del problema.

2. Hacer una adicin del estndar a una de ellas
Una alcuota de 25,00 mL de una disolucin acuosa que contiene quinina fue diluida a
50,00 mL y su absorbancia a 348 nm fue de 0,416 con una celdilla de 1,00 cm. A una
segunda alcuota de 25,00 mL de disolucin problema se le aadieron 10,00 mL de una
3. Llevar a volumen las dos disoluciones y medir
disolucin de 23,4 ppm de quinina. Despus de diluir a 50,00 mL la absorbancia result de

0,610. Calcular la concentracin de quinina en la celda.
0,65
La adicin realizada supone, tras

la dilucin, una concentracin de
Quinina de:
S S1 m Vs
S2
0,60
0,55
0,50
0,45
Abs
348
0,40
10 mL 23,4 g
4,68 g mL-1
50 mL mL
S1
0,35
0,30
0,25
0,20
0,15
Vs
S1C s Vs
Cx
S 2 S1 Vx
0,10
Cx
S1Cs Vs
(0,416) (23,4)(10)
20,07 ppm
S2 S1 Vx (0,610 0,416)(25)
0,05
0,00
-13 -12 -11 -10 -9
-8
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
[Quinina] / g mL
5
-1
37
Mtodo del estndar interno
Mtodo del estndar interno: Ejemplo
El Ca puede cuantificarse por espectroscopa de emisin. Al preparar la recta de
Esta metodologa intenta corregir fluctuaciones operacionales e

instrumentales
calibrado, se aadi Sr a todos los patrones de Ca y a la disolucin problema, de modo

que todas las disoluciones contienen 2,50 g Sr mL-1. Se midieron las intensidades de
Se aade una concentracin fija de un estndar (interno) de una sustancia distinta de

la analizada, tanto a los patrones del analito como a la muestra problema.
emisin del Ca a 422,7 nm y las del Sr a 460,7 nm. En funcin de los datos, calcular la
concentracin de Ca en la muestra problema.
El comportamiento del estndar interno debe ser similar al del analito.

Su seal no debe interferir en la seal del analito.
Se representa el cociente de seales analito/estndar interno, como en un calibrado

normal.
Sanalito/Sest int
I (422,7 nm) / I (460,7 nm)
La respuesta instrumental debida al estndar interno debera ser constante y las

posibles desviaciones se asumen que son las mismas que sufre el analito.
4,0
I (422,7 nm)
I (460,7 nm)
I(422,7)/ I(460,7)
2,00
16,6
21,5
0,772
4,00
37,8
24,7
1,53
3,5
6,00
43,2
18,6
2,32
3,0
8,00
68,7
22,3
3,08
2,5
10,00
95,2
24,6
3,87
2,0
Muestra problema
36,3
19,4
1,87
1,5
100
1,0
80
0,5
60
0,0
2
4,85
10
40
-1
Ca (g L )
Sin estndar interno

20
Concentracin del analito
Tema 4
Ca (g mL -1)
10
Espectroscopa VIS - UV
1. Espectroscopa de luminiscencia molecular

2. Fluorescencia y fosforescencia
3. Quimioluminiscencia
4. Instrumentacin
5. Aplicaciones
160
Emisin de radiacin
Incandescencia
780
Fluorescencia y Fosforescencia
emisin de luz por parte de un cuerpo a elevada T
Luminiscencia
Fotoluminiscencia previa absorcin de luz IR, UV-Vis
Quimioluminiscencia
NO + O3 NO2* + O2
NO2* NO2 + h (= 600 - 2800 nm)
Bioluminiscencia
Electroluminiscencia descarga elctrica en un gas ionizado
38
Transiciones involucradas en la fluorescencia
Reglas de seleccin
Mecanismos de excitacin y relajacin
Procesos y escala de tiempos
Singlet excited states

Internal
conversion
S2
Vibrational
relaxation
Triplet excited states

Intersystem
crossing
S1
Energy
T1
Absorption
Fluorescence
Internal
and
external
conversion
Phosphorescence
S0
Ground
state
Bandas de absorcin y emisin
Transiciones y energa
39
Procesos y escala de tiempos
Diagrama de energa de Franck-Condon
Excitacin vibracional: Principio clsico de Franck-Condon
La transicin
tiene lugar con el
ncleo
estacionario.
Las transiciones
ms probables
tienen lugar
cuando la lnea
vertical toca la
curva superior.
Franck-Condon principle
Bandas de absorcin y emisin electrnicas
De acuerdo con este principio, la absorcin de un fotn es un proceso

instantneo. James Frank se dio cuenta de lo obvio: los ncleos son
enormemente pesados en comparacin con los electrones. Durante la absorcin
de la radiacin, los que se pueden mover son los electrones, pero no los
ncleos. El ncleo atmico, mucho ms pesado, no tiene tiempo de reajustarse
durante la absorcin misma, pero s lo puede hacer despus, y esto es lo que
produce las vibraciones.
Desplazamiento de Stokes
Espectros de absorcin y de emisin de la Quinina
Es la diferencia de energa entre el pico de absorcin de menor energa
Fluorescnece Intensity
y el de emisin fluorescente ms energtico.
Fluorescein
molecule
Stokes Shift is 25 nm
495 nm
520 nm
Wavelength
40
Reglas generales del espectro de fluorescencia
Transiciones fluorescentes
Para una substancia pura presente en disolucin en una nica forma,
* rara vez conduce a

fluorescencia pues Eexc es
tan elevada que favorece Kd y
Kpd
su espectro es invariable e independiente de la fuente de excitacin

El espectro de fluorescencia se encuentra a longitudes de onda
*: ms probable y til
para fluorescencia. El cruce
intersistema S*1 T*1 no es
muy probable debido a una
diferencia
notable
de
energa.
superiores al de absorcin
El espectro de fluorescencia viene a ser la imagen especular de la
banda de absorcin de menor energa
n* tambin pueden
originar procesos
fluorescentes.
(especialmente si la molcula es rgida y no sufre equilibrios de disociacin en el estado excitado)
Rendimiento cuntico
Rendimiento cuntico
fotones emitidos
=
fotones absorbidos
kr
kr + knr
kf
k f k isc k ec k ic k pd k d
Tiempo de vida de la fluorescencia ()
Tiempo que transcurre entre la absorcin y la emisin
1
kr + knr
Factores que afectan a la fotoluminiscencia
Proceso de absorcin eficiente (elevada absortividad)

Fluorescencia
Fluorescencia y aromaticidad
Las molculas con

alto grado de
aromaticidad tienden
a presentar
fluorescencia
Diferencias elevadas de energa entre el singlete y triplete excitados

Diferencias energticas relativamente altas entre el singlete
fundamental y el excitado como para prevenir desactivaciones por va
no radiacional
Fosforescencia
Pequeas diferencias energticas entre singlete y triplete excitados
Baja probabilidad de transicin no radiacional entre el triplete
excitado y el singlete fundamental
La rigidez estructural
previene la prdida
de energa por
desactivaciones
rotacionales y
vibracionales
41
Estructuras fluorescentes
Efecto de la rigidez estructural
No fluorescen
La rigidez molecular tiende a inhibir la conversin interna y por tanto

favorece la fluorescencia
Cruce intersistema muy favorecido
Fluoreno
Bifenilo
Fluorescen
Fluorescena
Fluorescena
Efecto de la rigidez estructural
Reacciones que incrementan (o disminuyen apagan-) la fluorescencia

pueden tener utilidad analtica como, por ejemplo, las reacciones de
complejacin de metales con ligandos orgnicos.
O
Zn
N
2
Efecto del tomo pesado
Fenolftalena
Fluorescencia: heterotomos y substituyentes
Compuesto
Benceno
Tolueno
Propilbenceno
Fluorobenceno
Clorobenceno
Bromobenceno
Yodobenceno
Fenol
Fenolato
Anisol
Anilina
Anilinio
cido benzoico
Benzonitrilo
Nitrobenceno
Frmula
C6H5
C6H5CH3
C6H5C3H7
C6H5F
C6H5Cl
C6H5Br
C6H5I
C6H5OH
C6H5OC6H5OCH3
C6H5NH2
C6H5NH3+
C6H5COOH
C6H5CN
C6H5NO2
F (nm)
270-310
270-320
270-320
270-320
275-345
290-380
--285-365
310-400
285-345
310-405
--310-390
280-360
---
IF relativa
10
17
17
10
7
5
0
18
10
20
20
0
3
20
0
Probabilidad de pre-disociacin
Substituyentes deslocalizadores de e- : incrementan F

Substituyentes de primer orden (dirigen a o-p-) donan e- al anillo: F crece (-OH, -OCH3, -CH3)
Substituyentes de segundo orden (dirigen a m-) retiran e- del anillo: F disminuye (-NO2, -COOH)
Amortiguacin (quenching) de la fluorescencia
Disminucin de la Fluorescencia por favorecimiento del

cruce intersistema o conversiones externas
Efecto del tomo pesado
Los tomos pesados favorecen un fuerte acoplamiento spin/orbital y
por tanto un cambio de spin.
Especies paramagnticas
El O2 disuelto es un fuerte inhibidor de la
fluorescencia por favorecer el cruce intersistema (al
igual que cualquier substancia paramagntica)
42
Amortiguacin (quenching) de la fluorescencia
Ecuacin de Stern-Volmer
M*
M + h
M* + Q M + Q + Calor
Fluorescencia
Quenching
La concentracin del quencher est relacionada con la intensidad

fluorescente por medio de la ecuacin de Stern-Volmer
F0
1
F
F0
1
F
[NaI]
Amortiguacin de la Fluorescencia del triptfano 0,1 mM en
presencia de concentraciones crecientes de NaI
Efecto de la T y del disolvente
Efecto del disolvente
Estado excitado
Franck-Condon
Un incremento de la T provoca una disminucin de IF
Un disolvente menos viscoso disminuye la IF
Geometra de equilibrio del estado

excitado
En ambos casos se acenta la posibilidad de una conversin externa
F
Estado fundamental FranckCondon
CBr4 , C2H5I : disolventes que desactivan la fluorescencia y

favorecen la fosforescencia
Geometra de equilibrio del

estado fundamental
Es = f (polaridad de los estados fundamental y excitado)
n*: estado fundamental ms polar. polaridaddisolvente:
*: estado excitado ms polar: polaridaddisolvente: F
Efecto del pH
Efecto de la adsorcin (inmovilizacin)
El pH afecta tanto a la max como al F
pK = 10
OH
H+
Colorante ANS (8-anilin-naftalen sulfonato)

SO3-
max: 285-365 nm
F : 0,18
H + H
N
H H H
N+
en disolucin acuosa
F = 0,98 cuando est enlazado a regiones hidrofbicas

de proteinas y membranas
NH
F = 16 ns, max = 454 nm
Anilina: tres formas resonantes

* ms bajo, menor E, mayor : se
ve fluorescencia en el VIS
Bromuro de etidio
H2 N
H
N
F ~ 0
350-400 nm
0,09
NH2
+
In anilinio: una sola forma resonante

No se observa fluorescencia en el VIS
F ~ 0 En disolucin acuosa
Unido a cidos nucleicos
N
CH2CH3
F ~ 1, F = 26,5 ns
Br-
Necesidad de tamponar disoluciones patrn y muestra
43
Efecto de la concentracin
Autoabsorcin
F K' (P0 P)
Beer :
P
10 bc
P0
F K' P0 (1 10 bc )
2,303 b c < 0,05
Colisiones entre las molculas excitadas.

Desactivacin no-radiacional aumentada
(2,303 b c)2 (2,303 b c)3

F K' P0 (1 10 bc ) Maclaurin K' P0 2,303 b c
2!
3!
Si
Auto-amortiguacin (self-quenching)
Si
b c > 1,5
Auto-absorcin
(inner cell effect, inner filter effect)
Solapamiento de las bandas de absorcin y

de emisin: radiacin fluorescente que no
abandona la celda.
Trabajar con muestras diluidas (absorcin mx: 0,1)
10 bc 1 F K' P0 K P0
F K' P0 2,303 b c
Si P0= cte:
Existe un valor lmite

superior para la F
FK c
Extincin de la luminiscencia
Fluorescencia retardada
Luciferin + O2
Luciferase
O
R2
Spontaneous
R2
CO2 +
Fluorescencia
Light
C*
R1
Rpida (10-8s)
Fosforescencia
Lenta (mss). Los procesos
colisionales competitivos
pueden eliminarla
completamente a no ser
que se eviten totalmente
(p.e. en un vidrio)
Extincin de la fluorescencia
Time-resolved fluorimetry
La F sigue una cintica de primer orden (en ausencia de otros procesos)
Las medidas fluorimtricas estn limitadas por los blancos

Disolventes e impurezas presentan corrientes de fondo 2 ns
Se puede definir el tiempo de vida de la

fluorescencia, f , como el tiempo que ha de
trancurrir, desde que se apaga la fuente de
excitacin, para que la F se reduzca a 1/e
(0,368) de la F original
La seal del analito es discernible midiendo a tiempos ms largos.
F F0 e k f t
F0
F0 e k f f ; e e k f f
e
1
ln e k f f f
kf
f : F0 /e;
44
Propiedades de los compuestos lantnidos de coordinacin
Propiedades de los compuestos lantnidos de coordinacin
Tiempo de vida elevado >500 s

Gran desplazamiento Stokes
Perfiles de picos de emisin finos
La F est basada en procesos de transferencia de energa del ligando al catin central.
Marcadores fluorescentes
Seguimiento de una reaccin enzimtica
Green Fluorescent Protein (GFP)

procedente de las medusas es la ms
utilizada para seguir la expresin de genes.
naftilamina
Fluorforos tpicos
Compuestos naturales fluorescentes
Compuesto
(nm)
Hidrocarburos aromticos
O
Naftaleno
TDI
Pireno
+
O
NH2
HN
= 630 nm
TMR
= 514 nm
HN
= 280 nm
370-460
Colesterol
600
370-400
Cortisona
570
1,2-benzopireno
400-450
Testosterona
580
N
NH
eGFP
= 488 nm
Vitaminas
Quinolina
385-400
Riboflavina (B2)
Sulfato de quinina
410-500
Cianocobalamina (B12)
305
7-hidroxicumarina
450
Tocoferol (E)
340
380-460
Tintes
H2N C
tryptophane
400-450
Antraceno
3-hidroxi-indol
Aldosterona
Compuestos Heterocclicos
Cy5
SO3-
= 630 nm
N
(nm)
Esteroides
-O S
3
Compuesto
300-365
DAPI
= 355 nm
C NH2
565
Frmacos
Aspirina
335
Fluorescena
510-590
Codena
350
Rodamina B
550-700
Estrgenos
546
Azul de metileno
650-700
LSD
365
Fenobarbital
440
Coenzimas, cidos nuclicos, pirimidinas

Adenina
380
Adenosina trifosfato (ATP)
390
Dinucletido de la nicotinamida adenina (NADH)
460
45
Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)
FRET es una interaccin dependiente de la distancia entre los estados

excitados de dos molculas. La transferencia resonante de energa tiene lugar
cuando las molculas donora y aceptora estn a menos de 100 una de la
otra.
FRET vara con la potencia 1/6 de la separacin intermolecular, por lo que
funciona muy bien a distancias similares a las dimensiones de macromolculas
biolgicas.
FRET puede utilizarse para desplazar espectralmente la emisin fluorescente
de una combinacin molecualr.
El espectro de absorcin del aceptor debe solaparse con el espectro de
emisin del donor.
Molculas cercanas pueden transferirse energa entre ellas.
La transferencia de energa es por va no radiacional, es decir, el donor no
Esto sucede cuando el espectro de emisin de una solapa con el de

absorcin de la otra.
emite un fotn que es captado por el aceptor.
La transferencia de energa de resonancia puede tener lugar cuando los

compuestos donor y aceptor estn prximos (< 100 )
D* + A D + A*
Donor Aceptor
Molecule 1
Molecule 2
Fluorescence
Fluorescence
ACCEPTOR
DONOR
Absorbance
Absorbance
Wavelength
La FRET puede ser til para lograr un espectro de fluorescencia
desplazado a superiores.
La velocidad de transferencia est predicha por la teora de Frster
R = 1 - 10 nm
FRET
~ 1/R6
kT
1 R0
D r
2Q J ( ) 6
R0 9.78 10 3 D 4
Punto crtico: encontrar la pareja donor-aceptor adecuada
46
triptfano - max F = 350 nm
dansilo - max Abs = 340 nm

max F = 510 nm
Ensayo de ruptura peptdica
proteasa
El grupo dansilo es muy apropiado para FRET con protenas que contienen triptfano.
La ruptura del pptido supone la prdida

de FRET, desapareciendo la F del aceptor
Puede unirse covalentemente a la proteina.
Bioluminiscence Resonance Energy Transfer (BRET)
Luminiscencia en medios micelares
Sodio dodecil sulfato, SDS
47
Concentracin micelar crtica (CMC)
Concentracin micelar crtica (CMC)
Solubilizacin micelar
Solubilizacin micelar
48
Fosforescencia
Fosforescencia y cruce intersistema
Espectros de absorcin y emisin
Fosforescencia a temperatura ambiente (RTP)
Quimioluminiscencia
Qumica forense
A + B C* C + h
Deteccin de sangre con luminol
NH2
NH2
COONH
O2/OH-
+ h + N2 + H2O
NH
C
COO-
Barras luminosas con ester fenil oxalato
49
Quimioluminiscencia
Quimioluminiscencia
Determinacin de agentes oxidantes
Cl2, HOCl, OCl-, H2O2, NO2
Aplicaciones emergentes
Determinacin de reactivos gaseosos en reactores

Anlisis de contaminantes en el aire
Estudios atmosfricos
Indicacin del punto final en valoraciones en fase gas
Determinacin de metales traza
Determinacin de reactivos orgnicos y bioqumicos
Quimioluminiscencia
Quimioluminiscencia
Bioluminiscencia
Luciferin + O2
Bioluminiscencia
O
Luciferase
O
O
C
R2
Spontaneous
R2
CO2 +
Light
C*
R1
R1
N
S
510-670 nm
HO
S
N
O
HO
Plantas emisoras
Gen luciferasa clonado en plantas
50
Instrumentacin: fluormetro de filtros simple
Instrumentacin: espectrofluormetro
Instrumentacin: fuentes
Buena estabilidad
Buena estabilidad
Haz espacialmente difuso
Continuo desde 300 1.300 nm
Baja intensidad
Alta intensidad
Instrumentacin: espectrofluormetro
Emission
Instrumentacin: celdillas
Instrumentacin: medida de la fosforescencia
51
Money (helps?) world go round!
Tema 5
1. Principios de espectroscopa atmica

2. Espectros atmicos de emisin y absorcin
3. Trminos espectrales
4. Anchuras de lnea
5. Atomizacin por llama y electrotrmica
6. Eleccin de las condiciones ptimas
7. Atomizacin con fuentes de plasma
8. Atomizacin con arco y chispa
9. Instrumentacin
10. Aplicaciones
Espectrometra Atmica
Diagramas de energa atmico y molecular
Emisin Atmica (EA, AE)

Kirchoff y Bunsen pioneros, s XIX
E2
E2
1957: Ramrez Muoz y Burriel Mart, Flame Photometry. A Manual of

Methods and Applications primer libro sobre fotometra de llama
Absorcin Atmica (AA)
E1
UV-VIS
E1
UV-VIS
60: Walsh (Australia) publica los primeros trabajos en absorcin atmica

apoyado por Alkemade y Milatz en Holanda
v2
v1
IR
Fluorescencia Atmica (FA, AF)
r2
r1
r0
1964: West y Winefordner comienzan a trabajar en FA con Zn, Hg y Cd
Tipos de espectroscopias atmicas
E0
v0
E0
Niveles de energa de Na atmico y del in Mg(II)
Modelos similares entre tomos,

pero diferente espaciado
Atomic Emission
Spectroscopy (AES)
El espectro inico es diferente al

atmico
Atomic Absorption
Spectroscopy (AAS)
Las separaciones se miden en

eV
Atomic Fluorescence
Spectroscopy (AFS)
1eV =1.602x10-19 J
= 96. 484 kJ mol-1
Na
Mg+
A medida que crece el nmero

de electrones, el nmero de
niveles se incrementa y los
espectros de emisin se hacen
ms complejos
Li 30 lneas, Cs 645 lneas, Cr 2277
lneas
52
Niveles de energa de Mg atmico
Espectro de emisin del Na atmico
Espectros atmicos
Espectros atmicos o de lneas
Espectros de lneas: transiciones electrnicas puras

Anchura de pico:
Anchura expresada en unidades de frecuencia cuando la magnitud de la seal
es la mitad de la mxima
Las posiciones de las lneas estn bien definidas y son caractersticas para cada elemento
En espectroscopa atmica es factible hacer anlisis cualitativo
Valores tpicos: centsimas de
Ejemplos:
carbono
oxgeno
nitrgeno
Espectro de emisin de salmuera
Ensanchamiento de las lneas atmicas
1. Incertidumbre (ensanchamiento natural de lnea)
1
;
t 1; t h h;
t E
Relativamente pequeo
t E h; E
h
h
; t h
2
2
(~10-4
1
2 t
h
t
2. Efecto Doppler (agitacin trmica de los tomos que varan su posicin respecto del
observador)
c
; 0
n
u
V
u 2
1
V
0 : frecuencia de la radiacin observada

cuando la fuente se mueve respecto al
1/ 2
detector
V=c/n : velocidad de la radiacin en un medio

dado
u : velocidad del movimiento de la fuente

lumnica (tomo) hacia el detector
53
Efecto Doppler
Ensanchamiento de las lneas atmicas
u
D 0
c
Si los tomos se
mueven hacia el
detector, las ondas
estn ms compactas,
mayor frecuencia,
ms corta.
u Temperatura, masa-1
T
;
m
D 0
D T1/2 ;
D 100 N
Buena aproximacin para explicar la zona central de la lnea
3. Ensanchamiento Lorentz (efecto de la presin; colisiones entre los tomos

emisores y otras partculas presentes)
Si los tomos se alejan

del detector, las ondas
se descomprimen,
frecuencia ms baja,
ms larga.
L P
P:
presin total del gas en cuyo seno se hallan los tomos del analito
Buena explicacin de lo que sucede en las alas de la lnea
4. Efecto de los campos magnticos (Zeeman) y elctricos (Stark)
Espectros de bandas de especies moleculares
Espectroscopa de absorcin atmica

Fuente
P0
Selector
de
Detector
Procesador de la seal
Chopper
Muestra
Espectroscopa de emisin atmica
P
Fuente
Tipo
Mtodo de Atomizacin
Fuente de radiacin
atmica (llama)
aspiracin de la muestra
a la llama
Lmpara de ctodo
hueco (LCH, HCL)
atmica (sin llama)
disolucin de muestra
evaporada y calcinada
HCL
absorcin R-X
no es necesario
tubo de RX0
Espectroscopa de fluorescencia atmica
Monocromador
Procesador de la seal
Detector
P0
Selector
de
Detector
Procesador
de la seal
90o
Fuente
Muestra
Muestra
Tipo
Mtodo de atomizacin
Fuente de
Radiacin
arco
arco elctrico
muestra
chispa
arco de alto voltaje
plasma de Ar
muestra calentada en un plasma de Ar

muestra
llama
disolucin de la muestra aspirada a la llama

muestra
emisin de RX
no es necesario; muestra bombardeada con e-
Tipo
Mtodo de Atomizacin
Fuente de
radiacin
muestra
atmica (llama)
muestra disuelta
muestra
aspirada a la llama
atmica (sin llama)
muestra disuelta
evaporada y calcinada
muestra
fluorescencia RX
no es necesario
muestra
muestra
54
Mecanismos de fluorescencia atmica
Radiaciones fluorescentes resonante y normal del Tl
Lnea directa
normal
Resonancia
Por etapas
normal
Lnea directa
activada
trmicamente
Resonancia
activada
trmicamente
Anti-Stokes activada
trmicamente
Desactivacin no-radiacional
Absorcin atmica de una lnea de resonancia
Componentes instrumentales bsicos
Fuente de
excitacin
Sistema
atomizador
Absorcin atmica de una lnea de resonancia
Sistema de
seleccin
espectral
Sistema de
deteccin
electrnica
Para que se cumpla la ley de Beer, la

anchura de la lnea de la fuente ha de
ser menor que la anchura de la lnea
de absorcin por parte del vapor
atmico
Atomizadores utilizados en espectroscopa atmica
55
Introduccin de la muestra
Nebulizadores neumticos: convierten la muestra en una niebla de finas gotculas

(spray) que son portadas por el gas hacia el atomizador.
a) Tubo concntrico: gas a
elevada presin que arrastra la
muestra que sale del capilar
b) Flujo cruzado: el aerosol se
produce por un flujo transversal
al final del capilar
c) Frita cermica: bombeo del
lquido sobre un disco de frita
cermica a travs del cual fluye
el gas; produce una niebla ms
fina.
d) Babington: el lquido incide
sobre la superficie esfrica
hueca que contiene un orificio
por el que fluye el gas.
Nebulizadores ultrasnicos: la disolucin es nebulizada sobre una superficie

piezoelctrica produciendo una niebla densa y homognea.
Vaporizadores electrotrmicos:
depsito de la muestra slida o lquida sobre la superficie de un resistor
el paso de corriente a travs del resistor produce la evaporacin de la muestra
un gas (Ar) fluye a travs del resistor y porta la muestra gaseosa hacia el
atomizador
la seal obtenida es transiente en lugar de contnua
Add
NaBH4
SbH3 + Q Sb + 3/2 H2
Sample
SbH3,
AsH3
Generacin de hidruros:
til para As, Sb, Sn, Se, Bi, Pb
Reaccin modelo:
3 BH4- + 3 H+ + 4 H3AsO3 3 H3BO3 + 4 AsH3 + 3 H2O
56
Introduccin de muestras slidas
Descarga luminiscente como fuente de plasma inico
Directa
Vaporizacin electrotrmica
Ablacin por Arco o Chispa
Ablacin por Lser
Descarga luminiscente
100g min-1
Instrumentacin bsica tpica en AA de llama (Flame Atomic Absorption)
Chopper
Sistema atomizador: llama
Sistema atomizador: llama
Nebulizador: transforma la muestra aspirada en una

neblina de gotas finsimas (spray)
Mechero: genera la llama en cuyo seno se vaporiza,
atomiza y excita la muestra.
Dos tipos fundamentales de llamas:
Es el componente ms importante y crtico
TURBULENTAS
LAMINARES O PREMEZCLA (Premix)
El spray de muestra que llega a la llama sufre :

vaporizacin, atomizacin y excitacin de los tomos
El atomizador de llama consta de 2 componentes:
NEBULIZADOR Y MECHERO
57
Mecheros
Mecheros de premezcla
Consumo total
Velocidad de
aspiracin:
~5 mL/min
Premezcla
Eficienica de
nebulizacin:
~5%
Llama turbulenta, ruidosa
Llama laminar, silenciosa
Gran sensibilidad
Gran selectividad
Pobre selectividad
Poca sensibilidad (3% aspirada)
Aspiracin de la muestra
Procesos durante la atomizacin en llama
Procesos durante la atomizacin en llama
Composicin de las llamas
58
Estructura y temperatura de una llama
Distribucin de metales en llama rica y pobre (lean) en combustible
Max
temperature
location about
1 cm above
the primary
combustion
zone. Optical
focus to this
region
Zona primaria: 2 C2H2 + 2 O2 4 CO + 2 H2

Zona secundaria: 4 CO + 2 H2 + O2 4 CO2 + 2 H2O
Efecto de la altura de observacin en la llama
Efecto de la altura y de la velocidad de flujo
Ag (no fcilmente oxidable)
Crecimiento contnuo con la altura de la

llama
Cr (forma xidos estables)
Seal contnuamente decreciente
Predomina la formacin del xido
Mg
Compromiso entre atomizacin y formacin

de compuestos moleculares
Eleccin juiciosa de la altura de llama
Perfil de la llama para la lnea del Ca en una llama

ciangeno-oxgeno para diferentes caudales de muestra.
adecuada en cada caso
Lmpara de ctodo hueco (HCL)
Seccin transversal de una HCL
nodo: W, Ni, Zr
V 300 V;
I = 5 20 mA
A mayor V, se obtiene intensidades ms elevadas

Inconveniente: autoabsorcin
Lmparas mixtas:
Cr, Co, Cu, Fe, Mn, Ni

Ca, Mg, Al
Fe, Cu, Mn
Cu, Zn, Pb, Sn
59
Compartimento para las lmparas
Lmpara de descarga sin electrodos (EDL)
0,1 5 torr
til en Fluorescencia Atmica
2450 MHz
Disponible para:
Tiempo de vida > 50 h
As, Bi, Cd, Cs, Ge,

Hg, K, Pb, Rb, Sb,
Se, Sn, Ti, Tl, Zn
10 veces ms intensa que HCL

Inconveniente: inestabilidad
requiere enfriamiento
Interferencias en espectroscopas atmicas
Lmpara de gradiente de temperatura (TGL)
Interferencias comunes a las tres
Intensidad:
TGL EDL > HCL
1/ 2 TGL 0,001nm 1/ 2EDL
Espectrales
Fsicas
Qumicas
Variaciones en la T
Ionizacin
Interferencias en AA y FA:
Corriente relativamente elevada: 0,5 A

V 30 V
TGL y EDL :
Ar: 1-5 torr
< 200 nm
Dispersin de luz incidente (scattering)
se usan para As y Se
Filamento recubierto de xido de Ba, Ca, Sr
Interferencias
Interferencia tpica de FA:

Amortiguacin de la fluorescencia (quenching)
Interferencias espectrales
Espectrales: solapamiento de lneas.

Ms crtico en EA. Casi inexistente en AA y poco comn en FA
Fsicas: variacin de viscosidad y tensin superficial que afectan a la nebulizacin.
Interferencia espectral : proximidad de lneas < 0,1
Anlisis de Al: 3 082,15 ,
3 092,7
Afectan por igual a las tres tcnicas
Variacin de T en el atomizador: supone una modificacin del nmero de
El V tiene una lnea a 3 082,11 interfiere la cuantificacin del Al?
tomos excitados.
Afecta especialmente a la EA
Ciertamente, NO
Ionizacin: disminucin de la seal analtica por produccin de iones en lugar de
tomos
M0 M+ + e- (especialmente en alcalinos y alcalinotrreos y en llamas

calientes)
Alternativa: supresores de ionizacin
60
Interferencias espectrales: correccin con dos lneas
Interferencias espectrales: correccin con fuente continua
Se usa como referencia una segunda lnea procedente de la fuente

que est muy prxima a la lnea de absorcin del analito. El analito
no debe absorber a la longitud de onda de la lnea de referencia.
Cualquier absorbancia observada para la lnea de referencia se asume que
se debe a la dispersin/absorcin de especies moleculares (fondo). Restando
este valor del obtenido en la lnea del analito, obtenemos la absorbancia
corregida debida nicamente a la especie atmica de inters.
La lnea de referencia puede ser:
Impureza de la lmpara
Lnea del gas de relleno de la lmpara
Lnea no resonante del propio elemento constitutivo de la lmpara
Esta modalidad de correccin no se usa con mucha frecuencia debido a la
dificultad de encontrar una lnea de referencia adecuada.
Efecto de la T en la espectrometra atmica
Efecto de la T en la espectrometra atmica
La temperatura modifica el nmero de tomos en los estados fundamental y excitado
Boltzmann Equation:
Interferencia de ionizacin
Number of
levels at each
energy
(degeneracy)
La emisin atmica tiene lugar al

pasar de un estado excitado al
fundamental
(E* - E0)
-E
N* = g* e kT
g0
N0
Number of
atoms at each
energy
La absorcin atmica se produce en

la
transicin
desde
el
estado
fundamental a un estado excitado
La emisin estar ms afectada por variaciones de la temperatura, pues el

porcentaje de tomos en el estado excitado depende fuertemente de la T
Temperature
in K
1.38x10-23 J/K
Boltzmann
constant
Ej.: Calcular el cociente N*/No para un tomo que tiene 2 niveles de energa (ambos
monodegenerados) que se diferencian en 3,9710-19 J/tomo que est expuesto a una
llama a 2.500 , 2.510 y 6.000 K.
2.500 K:
N*/N0 = 1.01x10-5
2.510 K:
N*/N0 = 1.05x10-5
6.000 K:
N*/N0 = 8.27x10-3
(4% ms en el estado excitado para un incremento de 10 K en la T)
Interferencia de ionizacin
Este problema se puede minimizar por la adicin de supresores de ionizacin,

que son sustancias ms fcilmente ionizables y que producen una elevada
concentracin de electrones en la llama que retrotraen o impiden la ionizacin
del analito.
Ej.: el K es un buen supresor para la determinacin de Sr.
61
Interferencias qumicas
Interferencias qumicas
1. Formacin de compuestos poco voltiles Ca (PO43-, SO42-); Mg(Al)

Ciertos componentes de la muestra perjudican la eficiencia de la atomizacin del analito
Alternativas: T y uso de agentes liberadores y protectores

Ej.: PO43- y SO42- dificultan la atomizacin del Ca2+
2. Equilibrios de disociacin
MO M O
Alcalinos: xidos poco estables predominio de lneas atmicas

Alcalinotrreos: xidos relativamente estables predominio de bandas
NaCl Na Cl
Solucin: aadir un agente liberador o protector
VOx V Ox
AEDT: se une preferentemente al Ca2+, pero no impide la
atomizacin (protector)
AlOx Al Ox
Llamas ricas en combustible
La3+: reacciona preferentemente con el PO43-, liberando el Ca2+

(liberador)
Scattering (AA y FA)
TiOx Ti Ox
Efecto de la concentracin (EA)
Una nebulizacin deficiente puede permitir que lleguen gotas gruesas a la

llama, que producen dispersin de radiacin, que resulta en:
Disminucin de la potencia del haz radiante
Seales falsas (espreas): absorciones inespecficas
wat
2
m st
Alternativa: purga con Ar fondos muy bajos.
h
b
4
N 2 g 2 kT
e
N0 g0
N2 at*/m3
Quenching (AA y FA)
Desactivacin por va colisional con las molculas de los gases que se queman
en la llama. Ar, N2 y gases nobles no amortiguan o apagan la fluorescencia.
B N 2 A 20
B A 20
N 0 3 1021
B d I (wat/m 2 ) C
h g 2 kT
wat
b
e N0 2
4 g0
m st
F
C
TQ
Winefordner
F: Flujo de muestra lquida aspirada (mL/s)
: eficiencia en la vaporizacin
: eficiencia en la atomizacin
Q: flujo de desaparicin del vapor en la llama
T: temperatura absoluta
C: concentracin analtica de la disolucin
Efecto de la concentracin (AA)
Instrumentacin: monohaz
En AA tanto la luz procedente de la LCH como de la llama alcanzan el detector
0 , I0
Lmpara
- medida de una seal pequea en el seno de un fondo grande
Abs = K b N0 = K b C
- necesidad de restar el fondo (continuo) de la llama para recoger slo la

seal analtica procedente de la lmpara (P/P0)
Modulacin de la fuente
Doble haz
Efecto de la concentracin (FA)
I0
IF
d
I F I 0 f F b N 0 C
4
Llama + fuente
Llama sola
f: fuerza del oscilador de la transicin implicada
tiempo
: depende de la geometra del atomizador (llama, filamento..)

F: rendimiento cuntico de la fluorescencia. Marcada
dependencia de los gases de la llama (pueden quenchar)
La corriente oscura se anula con un obturador

El 100%T se ajusta con un blanco aspirado a la llama
62
Instrumentacin: doble haz
Ventajas de la llama como sistema atomizador
Sistema dinmico de altas T

Tremendamente estable, reproducible, fiable
Pocos efectos memoria
Combinando adecuadamente combustible y comburente se logran intervalos de T
muy amplios y se logran elevados grados de atomizacin
Atomizador barato y duradero
El haz de referencia corrige las posibles variaciones en la intensidad de la lmpara
Elevadas prestaciones en cuanto a sensibilidad y selectividad para ms de 70

El haz de referencia no atraviesa la llama. Posibles prdidas de potencia causadas por
absorcin o dispersin de la llama quedan sin compensar.
Desventajas de la llama: 1.- Prcticas
Volumen mnimo de muestra lquida relativamente elevado (1,5 2 mL)
elementos medidos entre 200 - 800 nm
Desventajas de la llama: 1.- Intrnsecas
Disolucin y expansin de la muestra en el caudal grande (hasta 10 L/min) de

gases que pasan por la llama: dilucin y prdida de sensibilidad
Hay que mantener la cmara de premezcla llena para garantizar un rgimen

estacionario
Escaso rendimiento de atomizacin para los elementos que muestran avidez

por el O2 para formar xidos refractarios, que se suma al escaso tiempo de
En disolucin acuosa la menor tensin superficial hace que el rendimiento de
residencia del analito en la llama
la nebulizacin sea bajo (se prefieren disolventes orgnicos; adems se

mejora la combustin y se aporta calor a la llama con la consiguiente mejora
Existe un margen de maniobra para modificar la proporcin de oxidante, pero
en sensibilidad)
siempre habr necesidad de comburente
Gotas gruesas que llegan a la llama: absorciones inespecficas

No se pueden introducir slidos
Necesidad de trabajar con gases embotellados (riesgo relativo)
Ventajas de los atomizadores sin llama
1. Incremento de la sensibilidad. (>103)
Primeras y rudimentarias Alternativas a la llama
Navecilla de Tntalo Tantalum boat (1968) : abandonado por falta de

reproducibilidad
Los tomos no se expanden

Ausencia de O2 (purga con Ar)
Copa de Delves (Ni) Delves cup: primer intento de confinamiento del vapor
atmico en el paso ptico. Determinacin de Pb en sangre
2. Posibilidad de usar micromuestras (5, 10, 20 L)

3. Anlisis de muestras slidas, sin ataque previo
4. Disminucin de absorciones inespecficas, facilitado por la purga con gas
Atom trap: cilindro de cuarzo refrigerado (recoge

tomos) - calentado (desorbe tomos)
LCH
noble, aunque no siempre es as

5. Seales transientes
63
Alternativas a la llama: generacin de hidruros
Alternativas a la llama: vapor fro de Hg
Apropiado para grupos IV, V, VI B:

Ge, Sn, Pb, As, Sb, Bi, formadores de hidruros
gaseosos y muy voltiles a T ambiente
3 BH4- + 3 H+ + 4 H3AsO3 3 H3BO3 + 4 AsH3 + 3 H2O
Add
NaBH4
Gran sensibilidad: no se
pierde nada de analito.
Mtodo absoluto
SbH3 + Q Sb + 3/2 H2
SbH3, AsH3
Sample
Ruta alternativa
Estos elementos en la
llama tienden a formar
compuestos, no tomos
Sus lneas de
resonancia (190 nm)
caen en la fuerte
absorcin del fondo de
la llama (<200 nm)
Hg: nico metal conocido que a T ambiente tiene una tensin de

vapor tan elevada que forma vapor monoatmico como los
gases nobles (ni siquiera N2 u O2 lo hacen)
No hace falta llama: el Hg0 se arrastra en estado atmico
Mejora de la sensibilidad: Fluorescencia
Hg0
ascarita
Gran importancia
bioinorgnica
Atomizadores electrotrmicos
Atomizadores electrotrmicos
Fundamentados en trabajos
iniciales de Lvov
Massmann: primer modelo con

posibilidades de comercializacin
(solido, lquido, gas, lodo -slurry-)
Temp
Seal de
absorcin
tiempo
Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito
Mediante purga con Ar se evita la oxidacin del C.

Necesidad de refrigeracin.
64
Operaciones en el horno de grafito
Etapas de calentamiento
Introduccin muestra
Secado (~ 100 oC)
Pirlisis (hasta cenizas)
(500 - 700 C)
Paso de Ar
Atomize
Temperature (CO)
Atomizacin
(2000 - 2800 C)
0-20 mL muestra (disolucin o lodos); mg de slido (anlisis directo de slidos)

Es comn utilizar un modificador de matriz que estabiliza el analito o induce la volatilidad de la matriz
Las muestras estn habitualmente acidificadas (para minimizar la adsorcin sobre los recipientes;
Para muestras lquidas:
30-45 s secado suave
30-60s pretratamiento trmico(charring)
5 s (rampa vertical de temperatura)
10 s ciclo de limpieza (eliminacin de cualquier resto de la matriz)
Thermal
pretreatment, ash
or Char
50 A, 20 s
10
1,000-2000 K/s
Remove matrix or promote reactions in ETA
500-700C
110C
Atomize analyte
2500-2700C
Dry
Desolvate
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Time (s) typical
Automatizacin
3600 w; 10-12 V; 400-500 A

Rampas de calentamiento: hasta 1000 C/s
Vida limitada: 200-300 firings
Posibles efectos memoria
Automatizacin sencilla:
automuestreadores
Reproducibilidad exige usar
tandas de tubos
Sensibilidad: LOD >103 AA
Equipo de AA en Quimedaf
Composicin tpica del horno: Grafito

GFAAS: Graphite Furnace Atomic Absorption Spectroscopy
Longitud: 18 - 28 mm
Volumen de muestra: 5 - 100 L
Vida del horno: 200 - 1000 ciclos
Temperatura mxima: 3000C para evitar descomposicin del grafito
El C puede actuar como reductor de iones metlicos
Flujo de Ar: evita oxidacin del C graftico
Otros materiales: Ta, W, Pt
Se requiere alto punto de fusin
No debern emitir radiancia a alta temperatura (desventaja del W y Ta)
65
Atomizadores electrotrmicos vs. llama
+ Sensibilidad: mejores lmites de deteccin (elevados tiempos de residencia

del vapor atmico en el atomizador)
Filamentos
Filamento de West
Mini-Massmann.
Nube atmica no confinada
(Geometra cerrada)
+ Menor volumen de muestra

+ Amplia gama de estados de muestra
+ Menor dependencia de la seal de las caractersticas fsicas de la muestra
(viscosidad, tensin superficial y densidad)
LCH
LCH
+ La purga con Ar disminuye la probabilidad de formacin de xidos y

facilita una mayor poblacin de vapor atmico
- Serios efectos de matriz, de formacin de compuestos interelementales y
de memoria
Donega & Burgess

Navecilla de Ta
Paso ptico
(Geometra abierta)
- Reproducibilidad inferior ( 5- 10%)
vaco
- Tiempo de anlisis ms largo

- Elevado coste; necesita ms mantenimiento
Son, por su geometra, ms adecuados para Fluorescencia que para Absorcin.
Atomizadores electrotrmicos vs. llama
Filamentos
Filamento con cpsula para lograr confinamiento del vapor atmico
Horno de grafito: interferencias
Efectos de matriz detectadaos por adiciones estndar
Qumicas
Causadas por la muestra
Volatilizacin de analito como sales voltiles
Disminucin de la eficiencia de atomizacin
Causadas por el aparato o por el mtodo
Formacin de carburos
Condensacin
Formacin de nitruros
Efectos memoria
Espectrales (Fsicas)
Emisin de luz por parte del grafito incandescente
Absorciones no especfica:
Dispersin de la radiacin
Formacin de especies moleculares
Formacin de haluros estables
66
Eliminacin de los efectos de matriz
Horno de grafito con plataforma de Lvov (1982)
1. Adicin de modificadores de matriz

Sustancias que ayudan a que el proceso de atomizacin tenga lugar del
modo ms homogneo posible y en el momento adecuado.
Aditivos que modifican las propiedades fsico-qumicas de la muestra para
favorecer la vaporizacin y atomizacin
Recetas especficas para elementos y matrices particulares
Ej.: NH4NO3, voltil, facilita la eliminacin de la matriz durante la calcinacin
y ayuda a homogeneizar la nube atmica
NH4H2PO4, retenedor de sustancias que pueden irse en la etapa de
charring
Calentamiento de la
muestra por radiacin y
no por contacto.
O2 se adsorbe en las paredes del tubo y favorece una buena atomizacin

(adems de ayudar a quemar la materia orgnica restante)
2. Superficie del horno

Uso de grafito piroltico, menos poroso, que facilita atomizaciones
ms reproducibles
Corte transversal del horno y plataforma
La muestra se coloca en la plataforma

La plataforma se calienta ms lentamente que la
pared del tubo de grafito
La vaporizacin de MX
colocado en la plataforma
se retrasa hasta que la
pared y el gas estn
suficientemente
calientes para atomizar MX
Tatomizacin
Approx
gas temp
seen by
analyte
Tpirlisis
tiempo
Appearance
temperature
La muestra situada en la plataforma solo se atomiza cuando

la pared se calienta suficientemente para producir tomos
67
Correccin de fondo con lmpara de Deuterio
Correccin de fondo mediante el efecto Zeeman
La dispersin o absorcin por parte de la matriz (fondo) ser el principal

causante de la disminucin de la potencia radiante cuando se ilumina con la
fuente de continuo.
Lneas difieren ~0,01 nm
Niveles
energticos
Zeeman normal: el
campo magntico
produce
desdoblamientos
idnticos en los
estados
fundamental y
excitado
Transicione
s
Espectros
Sin Campo magntico
Con Campo magntico
A
Ingle and Crouch,
Spectrochemical Analysis
Correccin de fondo mediante el efecto Zeeman
Zeeman vs. Deuterio
+ Corrige muy bien el fondo por realizar la correccin prcticamente a la misma del analito
+ Corrige absorciones de fondo de hasta 2 unidades de absorbancia
+ Corrige interferencias espectrales cuyas lneas estn separadas al menos 0,02 nm
+ No requiere alineamiento ni ajuste entre las dos fuentes de radiacin
+ Es particularmente til en el anlisis de muestras slidas
- Puede presentar lecturas dobles
(para concentraciones altas puede dar la misma absorbancia que para concentraciones
bajas)
1. Luz no polarizada procedente de la LCH (A) pasa a travs del polarizador rotatorio (B)
2.
El haz se desdobla en componentes perpendiculares y paralelos (C)
- Prdida de energa del sistema ptico debida a los polarizadores (prdida de

sensibilidad)
3.
La luz entra en el horno sometido a un campo magntico, dando 3 picos de absorcin (D)
- Coste elevado y manejo complicado
4.
El analito solamente absorbe radiacin polarizada paralela al campo magntico, mientras que el
fondo molecular absorbe siempre (E)
- El sistema de introduccin de muestras en la cmara debe estar automatizado
5.
El resultado es un modelo cclico de absorcin (F)
6.
La diferencia entre la absorbancia durante el semiciclo paralelo y el perpendicular proporciona

el valor corregido con respecto al fondo.
- Hay elementos que presentan efecto Zeeman normal (Cd, Zn), pero la mayora
presentan Zeeman anmalo, con muchos componentes, reducindose la sensibilidad en
la determinacin del elemento en un 10 - 50%
Correccin de fondo Smith-Hieftje
Smith-Hieftje vs. Deuterio
Auto-inversin con
auto-absorcin
+ Puede trabajar en la zona del VIS-UV sin necesitar otro tipo de

lmpara
+ Corrige hasta tres unidades de absorbancia
+ El equipo es ecnomico y de sencillo manejo
- Peor sensibilidad (30 - 40% menos)
Smith-Hieftje vs. Zeeman
+ No proporciona lneas dobles de los calibrados

+ No pierde energa por el empleo del polarizador
+ Es mucho ms econmico
+ Puede utilizarse en llama y en cmara de grafito
Cualquier absorbancia observada durante el pulso de corriente elevada se
asume que es debido al fondo y se resta de la seal analtica
+ Presenta muy buenos lmites de deteccin
68
Anlisis de muestras slidas
Directa
+ Se elimina -o minimiza- el tratamiento de las muestras
+ No tiene lugar la retencin de analitos en los residuos insolubles

Ablacin por Lser
+ Se minimiza la posibilidad de contaminacin de la muestra
+ Se evita el uso reactivos qumicos

- Posibles prdidas de muestra y/o contaminacin durante la
transferencia al atomizador
- Hay que pesar cada rplica independientemente
- Calibracin ms complicada
- La accin de los modificadores no es tan eficaz debido a la menor
interaccin entre modificador y analito ocluido en el slido
- Es prcticamente imposible diluir la muestra slida
Directa
Directa
Ablacin por Lser
Ablacin por Lser
Atomic Fluorescence Spectroscopy
Atomic Fluorescence Spectroscopy
A. Instrumentation
Source Needs to be high intensity;
usually EDL or laser.
Wavelength
Selector
Detector
Chopper modulation used the

remove source beam
scatter.
Atomizer most commonly flame;
also ETA, glow
discharge, or ICP.
The fluorescence signal can be saturated so that it no longer depends

upon the source intensity.
This is the desired situation because source fluctuations will not affect the
fluorescence signal.
Atomizer
Chopper
Source
Wavelength Selector grating monochromator (Dispersive) but not always

necessary (Nondispersive).
B. Interferences same as AAS

C. Applications
Commonly used for metals in complex matrices such as oils, seawater,

biological systems, etc..
Detection limit normally 1 50 ppm.
Detector Photomultiplier tube or a diode array
69
Espectroscopa de Emisin Atmica
Espectroscopa de Emisin Atmica
La relajacin casi instantnea de las especies excitadas viene
Comienzos S XIX: llama de alcohol (Brewster, Herschel, Talbot, Foucalt)
acompaada de la emisin de radiacin UV-Vis a longitudes de onda
Mediados S XIX: Descubrimiento de Cs, Tl, In, Ga por espectroscopa
La fuente de excitacin para promover las especies qumicas

a sus correspondientes estados excitados puede ser:
discretas (lneas) tiles para el anlisis cualitativo y cuantitativo.
atmica (Bunsen, Kirchoff)
Plasma
Llama
1877: Gouy disea el nebulizador neumtico
Descarga elctrica (arco y chispa)

Descarga luminiscente (glow discharge)
1920s: Uso de arcos y chispas para AES
Ablacin por lser
1930s: Primer espectrmetro comercial (Siemens-Zeiss)
En Emisin Atmica (EA, AES), medimos la emisin de luz procedente

de la desactivacin radiacional de los tomos excitados, cuya
intensidad es proporcional a la concentracin de los tomos en el
1960s: Fuentes de plasma (comercializados en los 70)
estado excitado alcanzado, que a su vez- es proporcional a la

concentracin de tomos en el estado fundamental.
Espectros de Emisin Atmica
Emisin atmica en llama (Flame Atomic Emission Spectroscopy, FAES)
Numerosas interferencias espectrales
Lneas:
Bandas:
Reacciones de recombinacin:
Arcos y Chispas
LOD en llama (FAES, FES)
Funda negativa (e-)

alrededor del nodo
Barato
Limitado en prestaciones
Muy til para alcalinos y
Plasma neutro entre

los electrodos
Rarc
alcalinotrreos
Funda positiva alrededor
del ctodo
Temperaturas bajas para

lograr la atomizacin de
Muestra
otros muchos elementos

Claramente desplazada por
la absorcin atmica
Arco: Descarga elctrica entre dos

electrodos conductores (1-30 A)
Chispa: Descarga intermitente de
alto voltage (pocos s)
70
Arcos y Chispas: espectros de emisin
Potenciales de ionizacin
A) Contnuo: procedente de la radiacin trmica
B) Bandas: grupos de lneas muy prximas entre s, que se acumulan en una

zona de mxima intensidad (cabeza de banda), causadas por emisin
radiacional de molculas excitadas elctricamente (ej.: OH, ciangeno CN,
SiO, CaF2)
C) Lneas: Emisin por parte de tomos elctricamente excitados.
Potencial de resonancia de arco: potencial que es necesario aplicar para

alcanzar el primer estado excitado:
E1 E 2 /h
Potencial de excitacin (en eV) es el potencial que hay que comunicar a

un electrn para que por choque con el tomo lo lleve al primer estado
excitado.
Lneas ms intensas: lneas persistentes o rayas ltimas
lneas de arco: todas las comprendidas entre el potencial de

resonancia y el potencial de la primera ionizacin. Son las que
corresponden al espectro atmico (tomo neutro)
Conclusiones prcticas
Los espectros obtenidos dependern de:
A) Naturaleza de la especie excitada
lneas de chispa: todas las comprendidas entre el potencial de

la primera ionizacin y el de la segunda ionizacin. Son las que
corresponden al espectro inico monovalente (M+)
Atomizador
Tipo de espectro
Llama
Atmico
Arco
Chispa
Plasma
Atmico
Inico
Inico
B) Naturaleza de la fuente de excitacin elctrica
Pionizacin, Presonancia arco, riqueza de lneas

Bunsen: Li, Na: 2 lneas; K: 3 lneas; Rb: 4 lneas; Cs: 6 lneas
(alcalinos y
alcalinotrreos)
Emisin con Arco
Arco y chispa (10 eV): capacidad de excitar tomos con potencial de

excitacin inferior a 10 eV (70 elementos)
Emisin con Chispa
Muestra en polvo situada en la copa de grafito
Elevado voltaje (~kV)

Baja Intensidad (~mA)
Bajo potencial (~ 40 V)
Seal intermitente (s - ms)
Alta intensidad (~ 10 A)
Temperatura hasta 40.000 C
Arco continuado hasta consumicin de la muestra
El potencial elevado origina un espectro

fundamentalmente inico
La baja energa de excitacin origina espectros atmicos
Precisin baja debida al movimiento errtico

La volatilizacin de diferentes metales tiene lugar de modo
diverso, luego la cuantificacin mltiple es difcil
El movimiento de la chispa sobre la superficie de

la muestra proporciona un muestreo
representativo con buena precisin (0,1-1%
RSD), pero pobre sensibilidad (LD ~0,01%)
Mucho ruido elctrico
La seal ha de integrarse a lo largo del tiempo
71
Emisin con Arco y Chispa: instrumentacin
Emisin con Arco y Chispa: instrumentacin
Comparativa de caractersticas analticas
Aplicabilidad
Sensibilidad
300 nm
AA, FA
seal AA
103
seal FA
400 nm
EA, AA, FA
ruido AA
103
ruido FA
Fuentes principales de ruido:

sputtering de la lmpara
oscilaciones de la llama
Selectividad
shot noise del detector
AA FA > EA
FA: Hg, Zn, Cd, Pb, Pt, Ta, txicos
y los ms voltiles
EA: Alcalinos y alcalinotrreos
AA: el resto
EA
En FA no se percibe el ruido de la lmpara.

El ruido limitante es el shot noise. Se
puede incrementar la potencia de la
lmpara lo que se desee: mejor
sensibilidad.
AA:
Precisin < 1% a nivel de trazas (ppm)
EA:
Precisin 2 - 5 %
FA:
Precisin 2 -3 %
Inductively Coupled Plasma (ICP)
Emisin atmica en un plasma
Plasma: mezcla gaseosa neutra a elevada temperatura con gran densidad de

partculas cargadas positivamente (cationes) y negativamente (electrones)
cuyas propiedades estn fuertemente afectadas por su ionizacin.
Iones forzados a
moverse en un
espacio cerrado;
la resistencia al
moviemiento
produce el
calentamiento
Una chispa de una bobina Tesla ioniza el gas Ar y

produce electrones libres
Los electrones son acelerados por el campo de
radio-frecuencia
Los electrones acelerados colisionan con los
tomos transfiriendo su energa a toda la mezcla
gaseosa
El plasma se mantiene a unos 6 000 10 000 K
gracias a la absorcin por parte de los iones y
electrones de la energa de la bobina de induccin
Generacin de plasmas:
Los iones y electrones interaccionan con el campo
Acoplamiento inductivo (ICP)
magntico fluctuante y describen recorridos anulares
Corriente continua (DCP)
cerrados
Microondas (MIP)
El flujo tangencial de Ar enfra las paredes

interiores de cuarzo y centra radialmente el plasma
72
Inductively Coupled Plasma (ICP): Ventajas
Inductively Coupled Plasma (ICP): Consumo de Argon
Tiempo de residencia ~largo (2-3 ms) desolvatacin y volatilizacin eficientes

Zona analtica (azul)
Elevadas temperaturas atomizacin ms completa y excitacin ms efectiva
Zona de radiacin inicial (roja)
Atmsfera inerte de Ar previene formacin de xidos, alargando el tvida del analito

Pequea zona de emisin intensidad ms elevada y ausencia de autoabsorcin
Ionizacin relativamente grande susceptible de acoplamiento con MS
Fuente de RF: 1-2 kW a 27 MHz
Zona de induccin
Bobina
refrigerada
por agua
Antorcha
de cuarzo
Ar que forma y sostiene el plasma (10-20 L min-1)

Flujo de gas auxiliar (0,5 L min-1)
Flujo axial del aerosol que arrastra la muestra (1 L min-1)
Prestaciones del ICP
Introduccin de la muestra en el Plasma (ICP)
Puede identificar y cuantificar todos los elementos (excepto Ar)

Capaz de un verdadero anlisis multielemental simultneo en poco tiempo (30 s)
en unas condiciones de atomizacin-excitacin uniformes para todos los elementos
Permite la determinacin de elementos que tienden a formar xidos refractarios
(altamente resistentes a la descomposicin trmica) como B, P, W, U, Zr y Nb
Se pueden determinar elementos no-metlicos como Cl, Br, I y S (aunque <180
nm)
1 mL min-1
Amplios intervalos lineales de calibracin (hasta 6 rdenes de magnitud) gracias a

una T relativamente uniforme en la seccin del plasma que evita el fenmeno de
autoabsorcin
Interferencias qumicas mnimas gracias a las altas T
Interferencias espectrales evitables con uso de lneas alternativas
Diferentes posibilidades para la introduccin de la muestra
Ms sensible que la FAA y comparable a GFAAS
Diversos grados de automatizacin posibles
Cubre intervalos espectrales mayores (190 900 nm)
ICP: modus operandi
ICP: interferencias fsicas
Preparacin de la muestra: similar a AAS
Asociadas a los fenmenos de nebulizacin y transporte de la muestra
Determinacin de elementos: se pueden determinar casi todos los elementos

Sin embargo, hace falta un espectrmetro de vaco para medir B, N, P, S y
C, pues sus lneas de emisin caen por debajo de 180 nm donde absorben
los componentes del aire.
Las condiciones ptimas para la mayora de los metales no sirven para los
alcalinos: las lneas ms prominentes de Li, K, Rb y Cs estn en el IR
cercano
Cambios de viscosidad y tensin superficial pueden originar resultados muy

imprecisos, especialmente en
muestras con slidos disueltos
muestras con elevada concentracin de cidos
Formacin de sales en la punta del nebulizador, que afecta a la nebulizacin y

al flujo del aerosol
Remedios
Dilucin de la muestra
Uso de una bomba peristltica
Seleccin de lnea: no siempre la lnea ms intensa es la ms apropiada
Recurrir a un patrn interno

Usar un nebulizador mejor (ultrasonidos)
Precisin: 0.3 3%
LOD: ppt
73
ICP: instrumentacin secuencial
ICP: desventajas
2400 surcos/mm: 160-380 nm
Espectros complejsimos (cientos a miles de lneas)
1200 surcos/mm: 380-850 nm
Elevado nmero de variables experimentales a

optimizar (mtodo simplex)
Componentes pticos de alta resolucin y calidad
Instrumentacin cara y personal muy especializado
ICP: instrumentacin secuencial
ICP: instrumentacin con deteccin simultnea
ICP: instrumentacin con deteccin simultnea
ICP: instrumentacin multicanal con PMT
La curvatura corresponde a la
curva focal de la rejilla cncava
Crculo de Rowland
Y
PMT
Las diferentes frecuencias son

dispersadas por la rejilla y
enfocadas hacia las rendijas y los
PMT posicionados a lo largo del
crculo de Rowland
Las rendijas se configuran de
modo que transmitan lneas de un
elemento especfico
74
Monocromacin con red de escalera
ICP: instrumentacin multicanal con CCD
Monocromador doblemente dispersante

Dispersin ms elevada
Mejor resolucin
que un monocromador convencional
Los dos elementos dispersantes son una red

de escalera y un prisma de baja dispersin.
Sensibilidad comparada en espectroscopa atmica
Comparacin de caractersticas analticas en espectroscopa atmica
Comparacin de caractersticas analticas en espectroscopa atmica: LODs
Comparacin de caractersticas analticas en espectroscopa atmica: LODs
Nmero de elementos detectados a concentraciones de:

< 1 ppb
110 ppb
11100 ppb
101500 ppb
Emisin ICP
32
14
Emisin atmica de llama
12
19
19
Fluorescencia atmica de llama
14
16
Absorcin atmica de llama
14
25
14
Mtodo
> 500 ppb
Las tcnicas de absorcin atmica y de emisin por ICP son

mas bien complementarias que competitivas.
75
GF-AAS vs. ICP-AES
Plasma DCP (Direct Current Plasma)
GF-AAS
Se alcanzan temperaturas de 10 000 K
ICP-AES
Bajo coste
Coste moderado-alto
Monoelemental
Multielemental
Interferencias de
atomizacin
Interferencias espectrales
Bajo procesamiento de
muestras
Elevado procesado de
muestras
El plasma se forma tambin con Ar
Consume menos Ar y la fuente DC

es ms simple y menos cara
Hay que cambiar los electrodos de

grafito cada pocas horas;
comparativamente, el ICP requiere
menos mantenimiento
Entre las dos tcnicas se pueden determinar unos

70 elementos por debajo de las ppb
Acoplamiento ICP-MS
Acoplamiento ICP-MS
Acoplamiento ICP-MS: control de calidad y sensibilidad
Tema 6.
1. Clasificacin de las Tcnicas Electroanalticas.

2. Leyes Generales.
3. Fenmeno Electrdico.
4. Lmite de Electroactividad.
5. Montaje Potenciosttico.
6. Electrodos selectivos de iones.
76
Clasificacin
Campos de aplicacin emergentes

Potenciometra con electrodos metlicos
Tcnicas
Estticas
Potenciometra con electrodos de membrana
Voltametra
Difusin pura
Hidrodinmica
Polarografa
Tcnicas de redisolucin
Potenciostticas
Culombimetra potenciosttica
Cronoamperometra
MTODOS
ELECTROQUMICOS
DE ANLISIS
Tcnicas
Dinmicas
Potenciometra electroltica
Galvanostticas
Cronopotenciometra
Culombimetra galvanosttica
Tcnicas conductimtricas
Tcnicas
no electrdicas
Tcnicas electroforticas
Analizador automtico
Electrodos para voltametra. Electrodos de carbono
Electrodo de gotas de mercurio
Leyes generales de la electrolisis
Primera ley de Faraday

Ox + n e Red
NOx (moles)
Q
QM
; mOx (gramos)
nF
nF
Segunda ley de Faraday

La masa de sustancia electrolizada es proporcional a su peso
equivalente (M/n).
Cuando i cte.:
Q idt
0
Cintica:
dN
dNOx
dQ
nF Ox nFA
nFA nFA
dt
dt
Adt
[ ] mol cm 2 s 1[ ]
77
Reaccin electrdica
Mecanismos y regmenes de transporte en celdas electroqumicas
Ox ne Red
Transferencia de masa
Transferencia electrdica en la superficie del electrodo
Reacciones qumicas precedentes y subsiguientes
Transporte de la sustancia hacia el electrodo
Electrodos ideales
dC
d
D uC Cv
dx x 0
dx x 0
Nernst-Planck
DgradC uCgrad Cv
Flujo difusional,
por gradiente de
concentracin.
Migracin inica
Transporte
convectivo
u= zFD/RT: movilidad de la especie inica

grad =: intensidad del campo elctrico
v: velocidad hidrodinmica del fluido
Electrodos ideales
Interfaz del electrodo
78
Potenciales en la interfaz
I.P.E.: Capacidad de la doble capa
Ventanas de electroactividad
Montaje clsico
Montaje potenciosttico de tres electrodos
Potenciostato de tres electrodos
79
Electrodos selectivos de iones
Membrana
No cristalinos
Vidrio
Lquido
Lquido inmovilizado
Cristalinos
Monocristal
Policristal o mezcla de cristales
Electrodos selectivos de iones
Propiedades de las membranas

La sensibilidad y selectividad inherentes a las
membranas son debidas a:
Baja solubilidad
Cierta conductividad elctrica:

migracin de iones sencillos cargados
en su interior.
Reactividad selectiva con el analito:
Membrana
No cristalinos
Vidrio
Lquido
Lquido inmovilizado
Cristalinos
Monocristal
Policristal o mezcla de cristales
Propiedades de las membranas

La sensibilidad y selectividad inherentes a las
membranas son debidas a:
Baja solubilidad
Cierta conductividad elctrica:

migracin de iones sencillos cargados
en su interior.
Reactividad selectiva con el analito:
intercambio inico
intercambio inico
cristalizacin
cristalizacin
complejacin
complejacin
Electrodos de membrana lquida
Electrodo selectivo de calcio
Transporte a travs de la membrana
Electrodo de membrana lquida vs. vidrio
80
Respuesta nerstiana
Lmites de respuesta ideal
Ion Selective Electrodes (I.S.E.)
Ion Selective Electrodes (I.S.E.)
Membrana de gases
Respuesta de una sonda de gases
CO 2 (ac) CO2 (g) CO 2 (ac)
dis. externa
membrana
dis. interna
Cte.
CO 2 (ac) H2O HCO 3- H
Global : CO 2 (ac) H2O H

HCO
3
int
dis. externa
dis. interna
[H ]int [HCO3 ]int

[CO 2 ]ext
[H ]int
K
K 1 [H ]int K1[CO2 ]ext

[CO 2 ]ext [HCO3 ]
E vidrio L 0,059 log K 1 [CO 2 (ac) ]ext

L'0,059 log [CO 2 (ac) ]ext
81
Sensores de gases
Sensores de gases: cintica de los equilibrios
Desventaja de los
electrodos de gases:
tiempo de respuesta
relativamente largo:
1-7 min de equilibracin
Sensores de gases: ejemplos
Biosensores
"Un biosensor es una herramienta

o sistema analtico compuesto por un material
biolgico inmovilizado (tal como una enzima,
anticuerpo, clula entera, orgnulo o
combinaciones de los mismos), en ntimo
contacto con un sistema transductor adecuado
que convierta la seal bioqumica en una seal
elctrica cuantificable"
Potentiometric biosensor
Electrodos enzimticos: sensor de urea
(NH2 )2 CO 2H2O H 2 NH4 HCO 3

NH4 NH3 H
82
Electrodos enzimticos: sensor de urea
Transduccin potenciomtrica vs. amperomtrica
Biological specificity of enzyme catalyzed reactions
Electrodo de membrana cristalina
Electrodo de membrana cristalina
Crystalline membrane electrode
Fluoride Electrode
- LaF3 crystal doped with EuF2
- mechanism similar to pH electrode with potential developing at two

interfaces of the membrane from the reaction:
LaF3 LaF2+ + FSolid

(membrane surface)
Solution
The side of the membrane with the lower aFbecomes positive relative to the other
surface:
Usually ionic compound
Single crystal
Crushed powder, melted and formed
Operation similar to glass membrane
F electrode
Ionic strength adjustment
Total Ionic Strength

Adjustment Buffer (TISAB)
5<pH<8
Eind = L+ 0.0592 pF
83
Electrodo de membrana policristalina
AgCl; AgBr: ion Ag+ mvil. Fotosensibles.

Alternativa: Ag2S
Ag2S + AgX (Cl-, Br-, I-)
Ag2S
+ AgX
Ps AgX > Ps Ag2S ( 10-52)

AgX Ag+ + X- dis
Ag2S + MS (Cu2+, Pb2+, Cd2+)
Ag2S
+
MS
MS S2- + M2+ dis
Mtodos Coulombimtricos
Two main electroanalytical methods based on electrolytic oxidation or reduction of an

analyte for sufficient period to assure quantitative conversion to new oxidation state:
1. Constant-Current Coulometry
2. Electrogravimetry
In the first, quantity of electricity needed to complete the electrolysis serves as

measure of amount of analyte present. Total charge, Q, in coulombs passed during
electrolysis is related, according to Faradays law, to the absolute amount of
analyte:
Q=nFN
n = # mol of electrons transferred per mol of analyte
F = Faradays constant = 96485 C mol-1
N = number of mol of analyte
Coulomb = C = Ampere second = As
For electrogravimetry, product of electrolysis is weighed as a deposit on one of the

electrodes.
Coulombimetra a corriente constante
The current is kept constant until an indicator signals completion of the analytical
reaction.
The quantity of electricity required to attain the end point is calculated from the
magnitude of the current and the time of its passage.
Controlled-current coulometry, also known as amperostatic coulometry or coulometric
titrimetry
When called coulometric titration, electrons serve as the titrant.
Controlled-current coulometry, has two advantages over controlled-potential coulometry:
First, using a constant current leads to more rapid analysis since the current does not
decrease over time. Thus, a typical analysis time for controlled current coulometry is
less than 10 min, as opposed to approximately 30-60 min for controlled-potential
coulometry.
Second, with a constant current the total charge is simply the product of current and
time. A method for integrating the current-time curve, therefore, is not necessary.
Other necessary instrumental components for controlled-current coulometry is an
accurate clock (a digital clock provides accurate measurement of time, with errors of 1
ms) for measuring the electrolysis time, te, and a switch for starting and stopping the
electrolysis.
Coulometric Methods:
Three electroanalytical methods based on electrolytic oxidation or
reduction of an analyte for sufficient period to assure quantitative
conversion to new oxidation state:
1. Constant-Potential Coulometry
2. Constant-Current Coulometry
3. Electrogravimetry
In first two, quantity of electricity needed to complete the
electrolysis serves as measure of amount of analyte present.
For electrogravimetry, product of electrolysis is weighed as a
deposit on one of the electrodes.
84
I. Coulombimetra a E = cte.
I. Coulombimetra a i = cte.
I. Reactivo Karl Fischer
I. Coulometry
Based on the same reaction as volumetric
Mezcla disuelta en CH3OH de:
I2
1
N I2
C 5 H5 N
:
N SO2 +
10
N
:
H2O
Karl Fischer Titration:
SO2
H2O + I2 + SO2 + RN + ROH
3
2
+ NH I
Se hace en medio metlico:

+
N SO3
CH3OH
+
NHCH3OSO3
N SO3
H2O
NHSO4H
Para evitar:
+
N SO3
(RNH)SO4R + 2(RNH)I
- Iodine reacts with water 1:1

- The solvent methanol is involved in the reaction.
- A suitable base keeps the pH 5 - 7
But iodine will be produced just in time from iodide:
2 I-
Anodic Oxidation
I2 + 2 e-
85
I. Iodine Production
Anode
Iodine production by oxidation
2 I-
I2 + 2 e -
Cathode
Hydrogen production by reduction
H+
I-
2 H + 2 e-
H2
Side reaction:
Reduction of sulfur components.
After 1 - 2 weeks, smells like mercaptans.
Resolution: 0.1 g water

Detection limit: 5 g water
for 5 g sample 1 ppm
Measuring range:
10 g - 100 mg water/sample
1 ppm - 5 % water
Change catholyte every week!
86
I. Electrogravimetra
Coulometric Titrations:
Uses titrant that is electrolytically generated by constant current.
Advantage: eliminate problems with preparation, standardization,
and storage of standard solutions
Potential sources of error:
1) Variation in current during electrolysis
2) Departure from 100% efficiency
3) Error in measuring current
4) Error in measuring time
5) Difference between equivalence point and end point
I. Electrogravimetra
Tema 7.
1. Etapas de la Reaccin Electroqumica: control difusional

2. Capa de difusin
3. Hiptesis de Nernst
4. Flujo difusional y convectivo
5. Leyes de Fick.
6. Curvas i-E.
7. Potenciales de equilibrio, mixto y lmite.
Procesos Faradaicos y No Faradaicos
Transporte de la sustancia hacia el electrodo
dC
d
D uC Cv
dx
x 0
dx x 0
Nernst-Planck
DgradC uCgrad Cv
NOx (moles)
Q
QM
; mOx (gramos)
nF
nF
Flujo difusional,
por gradiente de
concentracin.
Migracin inica
Transporte
convectivo
u= zFD/RT: movilidad de la especie inica

grad =: intensidad del campo elctrico
v: velocidad hidrodinmica del fluido
87
Control difusional
Capa de difusin de Nernst
Hiptesis de Nernst
Difusin pura en funcin del tiempo
Corriente lmite de difusin
Control difusional
La velocidad de la reaccin electroqumica es funcin del flujo de sustancia que llega al

electrodo por unidad de tiempo y de superficie:
dC
C
D
; difusin plana : D dx
x 0
x x 0
Primera Ley de Fick
La Segunda Ley de Fick expresa la variacin de la concentracin con respecto del tiempo,
2
para cada distancia al electrodo.
C
C
D 2
t
t
x
El perfil del gradiente de concentracin en la interfaz, se obtiene integrando esta

expresin, y resulta:
C*
C
Sustituyendo en la expresin de i:
x x 0
i nFAD
Dt
D1/2
C*
nFAC * 1/2 1/2 kt 1/2
t
Dt
Cottrell
Disolucin en reposo; E constante; geometra plana
88
Es aquella que se obtiene para un flujo mximo de sustancia.
C(x 0)
C * C(x0) ; cuando C 0 :
C
D
(x 0)
x
mx D
C*
id nFAmx nFA
*
CRed(x 0) CRed nd (i 0)
i
Red
C*
nd
i
*
COx(x0) COx
(i 0)
ndOx
Las corrientes mximas de oxidacin y reduccin se escribirn:
D
C*
*
*
iRed ndRedCRed
; iOx ndOx COx
Sustituyendo CRed(x=0) y COx(x=0) y operando:
Para valores intermedios de i:
D
i nFA C * -C(x 0) ndC * -C(x 0)
FAD
d
;
D
: K D [ ] cm s-1
E E0
RT DRed RT (i iOx )
ln
ln
nF DOx nF (iRed i)
Curva i-E cato-andica
E E0
RT DRed RT
i
ln
ln
nF DOx nF (iRed i)
Curva i-E andica
E E0
RT DRed RT (iOx i)
ln
ln
nF DOx nF
i
Curva i-E catdica
Constante de velocidad de
transferencia de masa.
Curva i-E andica
Curva i-E andica
Cuando
E>>E0,
Cuando E<<E0, i iOx
i iRed
50
50
nF
iRedexp
(E E 0 )
RT
i
nF
1 exp
(E E0 )
RT
-50
-100
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
i /u.a.
100
i / u.a.
100
iOx
nF
1 exp
(E E0 )
RT
-50
-100
0.0
1.6
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
E/V
E/V
Curva i-E cato-andica
Curvas i-E: representacin conjunta
nF
iRedexp
(E E0 ) iOx
RT
i
nF
1 exp
(E E0 )
RT
100
100
E = 0,8 V
50
i / u.a.
i / u.a.
50
-50
-50
-100
-100
0.0
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
E/V
E/V
89
Curvas i-E reversibles en rgimen convectivo
E eq
Flujo difusional vs. convectivo
*
RT COx
ln * ; i 0
E
nF CRed
0
E el E0
RT COx(x0)
ln
; i0
nF CRed(x 0)
Potencial de semionda
Oxidacin andica de un metal
Aquel potencial para el que la intensidad es la semisuma

de las intensidades lmites de oxidacin y reduccin.
E E0
RT DRed RT (i iOx )
ln
ln
nF DOx nF (iRed i)
iRed iOx
2
iRed iOx
iOx
RT DRed RT
2
ln
ln
nF DOx nF i iRed iOx
Red
2
iRed iOx
RT DRed RT
2
E0
ln
ln
nF DOx nF iRed iOx
2
RT DRed
E0
E0
ln
nF DOx
Mn n e - M ; EM0 n /M
CMn (x 0) CM* n
E EM0 n /M
E1/2 E0
i
i
ndMn ndMn
RT
RT
i
lnCMn (x 0) EM0 n /M
ln
nF
nF ndMn
nF
(E EM0 n /M )
i ndMn exp
RT
Tema 8.
Potenciales de equilibrio, mixto y lmite

100
i / u.a.
50
Potencial de equilibrio
Potencial mixto
1. Valoraciones amperomtricas y potenciomtricas.

-50
2. Sistemas electroqumicos indicadores de reacciones en

-100
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
equilibrio.
E/V
Potencial lmite
3. Coulombimetras
90
Montaje para volumetras con indicacin electroqumica
Curvas i-E en el transcurso de una volumetra
100
2H2O 4 e O2 4 H
i / u.a.
50
-50
2H 2e H2
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
0.8
1.0
1.2
0.8
1.0
1.2
E/V
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe
- 1e Fe
-
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
E 0,3V
0
100
100
Ce4+
Ce4+
50
Fe2+
i / u.a.
i / u.a.
50
Fe2+
Fe3+,Ce3+
-50
Inicio
-50
Pre-equivalencia
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
E/V
Fe
- 1e Fe
-
Fe 2 - 1e - Fe 3
E 0,3V
100
E 0 0,3V
100
Ce4+
50
50
Fe3+
i / u.a.
i / u.a.
0.6
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Ce4+
Fe2+
0.4
E/V
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe3+,Ce3+
E 0 0,3V
Ce3+
-50
Pre-equivalencia
Equivalencia
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
E/V
0.8
1.0
1.2
-50
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
E/V
91
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
E 0 0,3V
Deteccin Amperomtrica y Potenciomtrica
Amperometra (E = 0,6 V)
100
100
50
i / u.a.
50
Punto equivalente
-50
i / u.a.
Fe3+
Ce3+,Ce
-100
4+
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
mL Ce4+
E/V
Potenciometra (i = 0)
Potenciometra (i 0)
-50
Post-equivalencia
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
0,5
1,2
0,3
Error por defecto
mL Ce4+
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe
- 1e Fe
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
E 0,3V
0
100
Ce4+
50
Fe2+
i / u.a.
i / u.a.
50
Fe3+,Ce3+
-50
Inicio
-50
Pre-equivalencia
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
E/V
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
E 0 0,3V
0.8
1.0
1.2
0.8
1.0
1.2
E 0 0,3V
100
Ce4+
50
Fe2+
Fe3+,Ce3+
-50
Pre-equivalencia
i / u.a.
50
i / u.a.
0.6
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
100
Fe2+
0.4
E/V
Ce4+
Fe3+,Ce3+
E 0 0,3V
100
Ce4+
Fe2+
mL Ce4+
-50
Pre-equivalencia
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
E/V
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
E/V
92
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
E 0 0,3V
100
100
50
50
E 0 0,3V
Fe3+
Ce3+,Ce
-50
Equivalencia
i / u.a.
Fe3+
Ce3+
i / u.a.
Ce4+
4+
-50
Post-equivalencia
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
E/V
i
Punto equivalente
-50
-100
-100
0.8
1.0
1.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
0,7
0,3
0,3
-0,2
Fe
- 1e Fe
E 0,3V;
0
Ce
1e Ce
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
E 0,8 V
0
Fe
- 1e Fe
100
E0 0,3V;
Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
Ce4+
50
Fe2+
Fe3+,Ce3+
-50
Inicio
i / u.a.
50
i / u.a.
100
Ce4+
Fe2+
mL Ce4+
mL Ce4+
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
3
1.2
No hay indicacin
mL Ce4+
1.0
Potenciometra (i 0; ctodo)
Punto equivalente
Error por defecto
0,3
E/V
mL Ce4+
E
-0.2
mL Ce4+
E/V
Potenciometra (i 0; nodo)
-50
0.6
1.2
1,2
0.4
1.0
50
i / u.a.
50
i / u.a.
100
0.2
0.8
Deteccin Potenciomtrica a i0
100
0.0
0.6
E/V
-0.2
0.4
-50
Pre-equivalencia
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
E/V
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
93
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe
- 1e Fe
E 0,3V;
0
Ce
1e Ce
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
E 0,8 V
0
Fe
- 1e Fe
100
E0 0,3V;
Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
100
Ce4+
Ce4+
50
i / u.a.
i / u.a.
50
Fe2+
Fe2+
Fe3+,Ce3+
Fe3+,Ce3+
-50
Pre-equivalencia
-50
Pre-equivalencia
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
E/V
E0 0,3V;
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe3
0.4
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
Fe 2 - 1e - Fe3
100
100
50
50
E0 0,3V;
Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
Fe3+
Fe3+
Ce3+
Ce3+,Ce
-50
Equivalencia
i / u.a.
i / u.a.
Ce4+
4+
-50
Post-equivalencia
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
E/V
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
100
100
0,8
50
50
i / u.a.
i / u.a.
0.4
Punto equivalente
-50
Error por defecto
-50
0,3
-100
-100
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
-0.2
1.2
E/V
mL Ce4+
Punto equivalente
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
mL Ce4+
0,5
0,3
0,3
-0,2
mL Ce4+
0.2
E/V
mL Ce4+
0.0
No hay indicacin
mL Ce4+
94
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe3
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E 0 0,8 V
Fe 2 - 1e - Fe3
100
100
Ce4+
50
50
Fe3+
Ce3+,Ce
-50
i / u.a.
i / u.a.
Ce4+
Fe3+
Ce3+
E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E 0 0,8 V
-50
4+
-100
-100
Equivalencia
Post-equivalencia
-150
-150
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
0.4
E/V
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
2
Fe - 1e Fe
E 0,3V; Ce
0
1e Ce
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
2
E 0,8 V
0
Fe - 1e Fe
100
100
50
50
E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E 0 0,8 V
i / u.a.
Fe3+
Ce3+,Ce4+
i / u.a.
Ce4+
Fe3+
Ce3+,Ce4+
-50
-100
-50
-100
Post-equivalencia
Post-equivalencia
-150
-150
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
-0.2
0.0
0.2
0.4
E/V
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
Deteccin Amperomtrica
100
100
50
50
Punto equivalente
-100
0,8
i / u.a.
i / u.a.
-50
mL Ce4+
-50
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
0,3
1.2
E/V
-150
-0.2
Ce4+
No hay indicacin
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
mL
Error por defecto
-100
-150
mL Ce4+
0,8
Error por exceso
0,3
mL Ce4+
95
Potenciometra a intensidad constante con dos electrodos indicadores de la misma naturaleza

150
Ag0 - e Ag+
100
Ag0 - e + Y4- AgY3-
i (u.a)
50
-50
AgY3- + e Ag0+ Y4-100
Ag+ + e Ag0
2H+ + 2e H2
-150
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
E/V
96
3AsO 33 BrO3 3 AsO 34 Br
Cuando todo el AsO33- ha reaccionado, el exceso de BrO3- reacciona con el Br- :
BrO3 5 Br 6 H 3 Br2 3 H2O
Reactivo Karl-Fischer
Dispositivos automatizados comerciales para la Coulombimetra Karl-Fischer
Mezcla, disuelta en CH3OH, de:

I2
C5H5N
1
N I2
N SO2 +
SO2
10
H2O
3
+ NH I
+
N SO3
Se hace en medio metlico:

+
N SO3
CH3OH
+
NHCH3OSO3
N SO3
H2O
NHSO4H
Para evitar:
Coulombimetra Karl-Fischer
Coulombimetra Karl-Fischer: generacin de Yodo
Based on the same reaction as volumetric

Karl Fischer Titration:
H2O + I2 + SO2 + RN + ROH
Iodine production by oxidation
(RNH)SO4R + 2(RNH)I
2 I-
- Iodine reacts with water 1:1

- The solvent methanol is involved in the reaction.
- A suitable base keeps the pH 5 - 7
2 I
Anodic Oxidation
I2 + 2 e-
I2 + 2 e -
Cathode
Hydrogen production by reduction
But iodine will be produced just in time from iodide:

-
Anode
H+
I
2 H+ + 2 e-
H2
Side reaction:
Reduction of sulfur components.
After 1 - 2 weeks, smells like mercaptans.
Change catholyte every week!
97
Coulombimetra Karl-Fischer: Adicin de la muestra de H2O
Coulombimetra Karl-Fischer: Celda con diafragma
Resolution: 0.1 g water

Detection limit: 5 g water
for 5 g sample 1 ppm
Measuring range:
10 g - 100 mg water/sample
1 ppm - 5 % water
Coulombimetra Karl-Fischer: Celda sin diafragma
Coulombimetra Karl-Fischer: deteccin Bipotenciomtrica
i
2 CH3OH 2 e 2 CH3O H2
ia
ic
2 CH3OH 2 e 2 CH3 O H2
Determinacin del exceso de I2

en una volumetra indirecta de
un agente reductor
98
Valoracin amperomtrica con dos electrodos indicadores a diferencia de potencial constante
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe 3
E0 0,3V;
Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
100
50
i / u.a.
-50
Curvas i-E tericas en el

transcurso de la valoracin
de Fe2+ con Ce4+
-100
x <1
-150
-0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
E/V
99
Ojo: criterio de signos invertidos. No

importa, pues se miden valores
absolutos de corrientes
100

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