UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS

LABORATORIOA DE QUMICA ORGNICA II
PROFESORA: Dra. Nahir Dugarte

FECHA:

15/01/2015

AYUDANTE:

SEMESTRE:

Modulo II

Alex Pastua

Prctica. N 6

TEMA:
CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
FUNDAMENTO TERICO:
La cromatografa de capa fina es una tcnica de adsorcin slido-lquido. El
fenmeno responsable de la separacin es la adsorcin, la cual implica la
distribucin de un soluto entre dos fases inmiscibles de acuerdo a la mayor
o menor adsorcin del soluto en la superficie de una fase slida. La fase
estacionaria es slida y la fase mvil es lquida (disolvente). La adsorcin es
un fenmeno de superficie, que se manifiesta sor un aumento de
concentracin en la interfase que rodea el medio estacionario. No se debe
confundir la adsorcin con la absorcin, que consiste en la penetracin de
una sustancia en el seno de otra. Por 6,'emplo, al escribir, el papel adsorbe
tinta, mientras que una esponja absorbe agua.
La teora de la cromatografa de capa fina an no ra podido aclararse en
todos sus detalles y es complicada por varias razones.
1. La velocidad de flujo del solvente no es constante, sino que vara a
medida que el frente del solvente avanza a lo largo de la capa de
adsorbente. La velocidad depende de las caractersticas fsicas .e solvente
empleado. El solvente se mueve constantemente hacia reas de adsorbente
seco, lo cual tiende a involucrar calores de y consecuentemente distorsiona
el equilibrio.
1. Las manchas que se separan pueden sufrir una difusin lateral y
probablemente no estarn uniformemente depositadas sobre el adsorbente.
Probablemente, la conclusin ms importante, de toda la teora desarrollada
para la cromatografa de capa fina, es que el mayor grado de resolucin en
una capa fina ocurre en el rea alrededor de los valores de Rf entre 0,3 y
0,4.
PROCESO DE PARTICIN LQUIDO-LQUIDO.
En su forma bsica, un sistema de particin y las fuerzas que gobiernan su
operacin son mucho ms simples que las de un sistema de adsorcin. Est
constituido por dos lquidos que son parcialmente miscibles uno en el otro.
Debido al requisito de inmiscibilidad, uno de los lquidos tender a ser
mucho ms polar que el otro. Cualquiera de los dos lquidos puede ser un
solvente puro o una mezcla de complejidad considerable. Los factores que
dictan si un soluto permanece en la fase estacionaria o si se mueve
juntamente con la fase mvil, estarn supeditados a las diferencias de
solubilidad del soluto en las dos fases. La extensin a la cual un soluto se
distribuye entre dos lquidos puede medirse en un embudo de separacin.
Tales mediciones, producen constantes conocidas como coeficientes de

particin o reparto. Si un soluto A se disuelve en dos disolventes B y C, se

distribuye entre ellos de acuerdo con la siguiente ley:

Concentracion de A en B
Concentracion de A enC = una constante a temperatura constante =
coeficiente de reparto

Por ende, entonces, podemos decir en forma general que los materiales que
tienen diferentes coeficientes pueden ser separados. Aquellos solutos que
son ms solubles en la fase mvil se movern ms rpido que aquellos que
son menos solubles y los solutos que son ms solubles en la fase
estacionaria tendern a moverse ms lentamente que aquellos que son
menos solubles.
Consideraremos como ejemplo tpico la separacin de una mezcla de
sustancias sobre una tira de papel de filtro. Se sabe que el papel de filtro
est formado por numerosas fibras de celulosa que portan un cierto
porcentaje de humedad. Podemos considerar que las partes individuales de
cada fibra, junto con su humedad asociada, constituyen hipotticas
"clulas" elementales. La separacin se lleva a cabo al repartirse las
sustancias entre la humedad de las clulas y el flujo de disolvente entre
ellas. El agua de las clulas permanece estacionaria, mientras que el
disolvente circula sobre ellas. Debido a esto, a las clulas se llama fase
estacionara, mientras que al disolvente se le denomina fase mvil.
Podemos ilustrar mejor estos principios haciendo referencia a un ejemplo.
Consideremos que una mezcla de dos compuestos, A y B (cuyo coeficiente
de reparto entre las fases estacionaria y mvil son 2:1 y 1:2,
respectivamente, es decir, A es relativamente ms soluble en agua), que se
aplican en el origen de una cromatografa de papel. La figura 1 representa
un diagrama del corte longitudinal del papel, que contiene la mezcla
disuelta en el agua de una clula en el origen. Por conveniencia se puede
considerar que el reparto tiene lugar entre volmenes iguales de la fase en
movimiento y estacionaria. En la figura, las molculas del comportamiento A
estn representadas por crculos negros, y las de B, por cruces

Cuando el disolvente penetra en la clula (esto ocurre cuando comienza la

separacin), las dos sustancias se repartirn de acuerdo con la ley da
reparto, especificada anteriormente. El solvente conteniendo una cierta
cantidad de mezcla correr a lo largo del papel y encontrara otra clula que
contiene agua, mientras que el disolvente puro se pone en contacto con la
primera clula (figura 1,c) y tendr lugar en ella un nuevo reparto (fig 1,d).
Este proceso se conoce como distribucin en contracorriente continua, en
tanto que el disolvente avance a lo largo del papel: La figura 1e representa
la distribucin de A y B en el papel despus de haber tenido lugar la
separacin. Es obvio que los dos componentes ya han comenzado a
separarse. En la prctica este proceso se repite mltiples veces, dando,
eventualmente, una separacin eficaz. Haciendo una similitud con el
proceso de extraccin lquido-lquido, podemos afirmar que en la multitud
de pequeas celdas formadas por las micelas del papel, la separacin tiene
lugar igualmente como s se dispusiera de extracciones sucesivas. La

cromatografa que resultar de la anterior separacin se representa en la

figura 2.

A se encontrar a un tercio de la distancia entre el origen y el frente del

disolvente, mientras que B estar a dos tercios de esta distancia.
Uno de los aspectos ms importantes de la cromatografa es que, en un
sistema cromatografa) dado, el movimiento relativo de un compuesto con
respecto al frente del disolvente es una propiedad caracterstica y
reproducible. En el caso de las cromatografas de papel y capa fina se
expresa el movimiento de un compuesto como un valor de Rf. Este valor, es
una constante caracterstica y constante de cualquier sustancia para un
sistema cromatogrfico dado. En la cromatografa sobre papel y capa fina
los valores de Rf se expresan mediante la ecuacin:

Rf =

distanciarecorrida por la sustancia

distancia recorrida por el disolvente

Para el caso estudiado tendremos:

Rf ( A ) =a/ x , R f ( B)=b /x
a.- distancia recorrida por la sustancia A, la cual se mide desde el punto de
aplicacin al centro de la mancha.
b.- distancia recorrida por la sustancia B, la cual se mide desde el punto de
aplicacin al centro de la mancha.
x.- distancia recorrida por el frente del solvente.

COMPARACIN CON LA CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL

La cromatografa sobre papel es una tcnica muy valiosa. Haciendo uso de
ella se pueden separar forma fcil y rpida, sustancias qumicas

relacionadas estrechamente en estructura, bien sean iones orgnicos, as

como tambin, compuestos orgnicos polifuncionales o muy polares, tales
como: amino-cidos, azucares o pigmentos de plantas. Entonces
porqu usar otros mtodos, los cuales aparentemente, a primera vista,
hacen exactamente la misma cosa ?.
La respuesta a esta interrogante es bastante sencilla. Existen un gran
nmero de
familias de impuestos, principalmente en el campo de los
lpidos, donde la cromatografa de papel no ha producido los resultados
deseados. Por lo tanto, se necesita una tcnica alternativa que sea capaz de
separar, por ejemplo, los cidos grasos de estructura muy parecida, de una
manera tan simple y fcil como la cromatografa de papel separa los aminocidos estrechamente relacionados en su estructura qumica.
La cromatografa de capa fina (TLC: Thin Layer Cromatography), es la
tcnica que cubre estas expectativas. Podemos comparar la cromatografa
sobre papel con la cromatografa de capa fina (TLC) aspecto a las similitudes
de los principios tericos y las tcnicas experimentales empleadas. En
cuanto al fundamento terico, la cromatografa sobre papel es una tcnica
de particin lquido-lquido, mientras que la de capa fina es una tcnica de
adsorcin slido-lquido. Las ventajas de la TLC son: mayor velocidad, mejor
resolucin, (en general las manchas separadas se presentan ms
compactas), mayor sensibilidad, (se pueden separar y recuperar con mayor
facilidad cantidades extremadamente pequeas de compuestos, en el orden
de los microgramos) y ms amplia posibilidad en la seleccin de reactivos
de deteccin, (se puede esparcir sobre las placas de slica y almina,
reactivos reveladores altamente corrosivos como el cido sulfrico, sin
afectar la capa de adsorbente). La cromatografa de capa fina tiene otras
ventajas comparada con la de papel. Mientras que la cromatografa sobre
papel se desarrolla sobre una pelcula de pequeo espesor de celulosa
soportada sobre el papel mismo, la de capa fina puede desarrollarse sobre
capas finas de una gran variedad de materiales inorgnicos pulverizados,
tales como; slica gel (xido de silicio: SiO2.H2O), celita, almina (xido de
aluminio: Al2O2), tierra de diatnicas (kieselguhr) y sobre sustancias
orgnicas como: alcohol polivinlico, celulosa y celulosas modificadas
qumicamente. Es posible entonces, escoger el material particular ms
adecuado, para resolver la separacin del grupo de compuestos en
estudio. El tiempo requerido para lograr una separacin satisfactoria es
considerablemente ms corto en TLC; y por ltimo, la capa de adsorbente
puede ser fcilmente retirada con una esptula fina para recuperar por
elucin el contenido de una mancha o banda presente en un espacio
determinado de la placa. Adicionalmente, la TLC puede usarse para separar
sustancias hidrofbicas tales como: lpidos e hidrocarburos que son difciles
de manejar sobre el papel cromatogrfico. Las desventajas de la TLC
comparadas con la cromatografa sobre papel son; mayor dificultad para
preservar resultados en TLC, los vales de Rf no son fcilmente reproducibles
en TLC y, los platos para la TLC son ms costosos que las hojas de papel.
PRINCIPIOS GENERALES DE LA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
La cromatografa de capa fina se lleva a cabo sobre una capa delgada
uniforme de un adsorbente adecuado extendida sobre una lmina de vidrio
o de algn otro material y activada por calentamiento en un horno (100 a
250C). Las muestras de mezclas a separar se disuelven en un solvente
adecuado (aproximadamente al 1%) y se aplican, mediante el uso

micropipetas, a lo largo de un borde de la placa, alrededor de 1 cm del final.

Despus de evaporado el solvente, las placas se colocan verticalmente en
un recipiente de vidrio cerrado, denominadas cmaras de desarrollo, que
contiene una capa de solvente adecuado en el fondo. Antes, se ha debido
procurar que la atmsfera de la cmara de desarrollo est saturada con
vapor del eluyente. El eluyente, avanza sobrepasando la mancha de origen.
Al cabo de unos pocos minutos los componentes de la mezcla son
separados por el solvente que ir ascendiendo a travs de la capa fina del
adsorbente, transportando las manchas a localizaciones diferentes sobre el
adsorbente, por una combinacin de adsorcin y distribuciones variables del
sistema del solvente.
Un ejemplo de separacin empleando la cromatografa de capa fina se
indica en la serie de figuras que se muestra a continuacin.

Las placas se extraen, precedindose a marcar rpidamente el frente del

solvente antes que el disolvente se evapore, se secan y se revela con
diversos agentes que permiten visualizar los componentes de la mezcla. La
presencia de las sustancias separadas, se comprueban entonces por algn
mtodo de visualizacin. Las sustancias coloreadas se pueden observar
inmediatamente, algunas fluorescen o absorben luz U.V., y otras se hacen
visibles rocindolas con reactivos especficos.
Como medida de la velocidad de desplazamiento de cualquier sustancia en
un eluyente determinada, se usa, como en la cromatografa de papel, el
valor del Rf es decir, la relacin de la distancia que una sustancia se ha
movido con la distancia que ha viajado el frente del solvente de desarrollo.
Los valores de Rf, pueden ayudar en la identificacin de sustancias, cuando
las mediciones se realizan bajo las mismas condiciones, esto significa que
se deben desarrollar cromatogramas comparativos al mismo tiempo.
La cromatografa de capa fina se usa para determinar el nmero de
componentes en una mezcla, para detectar un compuesto particular en una
mezcla de reaccin, y como un ensayo preliminar, para determinar las
condiciones ptimas para realizar una cromatografa de columna. El uso de
la cromatografa de capa fina est limitado a la aplicacin de sustancias
relativamente poco voltiles, ya que las pequeas cantidades de las mismas
se encuentran expuestas en una superficie abierta.
PROCESOS DE ADSORCIN:
Dos factores estn involucrados en la cromatografa de adsorcin: las
fuerzas de atraccin entre los solutos y adsorbentes y las fuerzas que

tienden a apartar los solutos de los adsorbentes, de tal manera que puedan
desplazarse con la fase mvil y puedan ser separados. A estos dos factores
se les denomina respectivamente adsorcin y desorcin.
De esta manera, la separacin de componentes de una mezcla por
cromatografa de adsorcin depende del equilibrio adsorcin - desorcin
entre los compuestos adsorbidos en la superficie de la fase slida
estacionaria y la fase lquida mvil.
La fuerza con la que se adsorbe un componente aislado depende de la
polaridad de la molcula, de la actividad del adsorbente, y de la polaridad
de la fase lquida mvil. Por lo tanto, la separacin de los componentes de
una mezcla depende de los valores relativos del equilibrio de adsorcin desorcin para cada uno de ellos. Por lo general, cuanto ms polar es un
compuesto, ms fuertemente ser adsorbido en la superficie de la fase
slida.
El proceso de adsorcin es un fenmeno de superficie. En el sentido
cromatogrfico el termino adsorcin se limita a las interacciones que
implican enlaces por puente de hidrgeno, fuerzas de Van der Walls o
fuerzas de atraccin electrostticas (cuando las interacciones son inicas el
proceso se denomina intercambio inico), entre el o los solutos a separar y
los centros activos del adsorbente.
Los centros activos del adsorbente provienen principalmente de los defectos
(grietas, filos, etc.) de la red cristalina del adsorbente donde las fuerzas
electrostticas estn proyectadas parcialmente hacia el exterior. La
adsorcin es debida justamente a la interaccin de estas fuerzas con las
interiores del soluto, provocando de esta manera que las molculas del
soluto se distribuyan en capas sucesivas diferenciadas.
Las primeras capas de molculas se adsorben 3 a 5 veces ms fuertes que
las capas siguientes. El calor de adsorcin para la primera capa adsorbida
sobre un slido est en el rango de 25-35 KcaI/mol, disminuye rpidamente
al rango de 5-10 Kcal/mol para capas sucesivas. Cuanto mayor sea la
separacin de cargas del soluto (mayor momento dipolar), mayor ser la
adsorcin. Desde el punto de vista prctico la cromatografa de adsorcin se
aplica en la separacin de sustancias de media o baja polaridad.
En resumen, podemos decir que las fuerzas que causan la adsorcin de los
solutos neutros son:
1. Atracciones del tipo dipolo-dipolo entre adsorbentes polares y solutos
polares.
2. Enlaces por puentes de hidrgeno entre los grupos hidroxilo dentro de la
estructura qumica del adsorbente que se usa, especialmente de la slica, y
los tomos de oxgeno y nitrgeno en la estructura qumica de los solutos.
3. Las fuerzas de polarizabilidad entre adsorbentes polares y solutos tales
como materiales aromticos que pueden ser polarizados.

En todo caso, en cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables

independientes estas son el adsorbente, el disolvente y las sustancias a
cromatografiar.
Las separaciones sobre adsorbentes dependen de la existencia del equilibrio
entre las molculas adsorbidas en la fase estacionaria y las que estn libres
en el disolvente (equilibrio adsorcin - desorcin). Si las molculas de un
componente particular tienen una elevada afinidad por el adsorbente
pasarn muy lentamente, mientras que otro componente con menos
afinidad lo har ms rpido.
INFLUENCIA DEL DISOLVENTE.
El tipo de disolvente a usar es determinante para lograr una buena
separacin. La regla general es elegir la polaridad del disolvente anloga a
la de la muestra a emplear y en la mayora de los casos adsorbentes
poderosos (activos) para sustancias no polares y adsorbentes con menos
actividad para sustancias ms polares.
La razn de la primera regla es obvia. Si, por ejemplo, elegimos un
disolvente polar para una mezcla de compuestos no polares, las molculas
del disolvente sern adsorbidas preferentemente, por lo que la mezcla
pasar rpidamente a travs del sistema sin conseguir la separacin.
Contrariamente, si empleamos un disolvente apolar para una mezcla polar,
sta permanecera en el origen sin lograrse tampoco la separacin.
Existen dos fuerzas las cuales causan que los solutos se muevan con el
solvente en un cromatograma.
La primera, es la tendencia para disolverse y moverse con el solvente, un
fenmeno denominado frecuentemente elucin. En este caso, los solventes
ideales, debern disolver los solutos y debern ser lo suficientemente
buenos como solventes, como para competir con el poder de adsorcin del
adsorbente. Este tipo de situacin probablemente prevalece cuando se usan
solventes aprticos para desarrollar los cromatogramas como por ejemplo:
hidrocarburos, teres y compuestos con funcin carbonlica.
La segunda fuerza que tiende a mover los solutos en un sistema
cromatogrfico es un fenmeno de desplazamiento.
Las molculas del solvente tienden a competir con el soluto por los sitios de
adsorcin en el adsorbente y por tanto tienden a mover las molculas del
soluto a lo largo del sistema. Este fenmeno se denomina desplazamiento.
En cierto sentido, la elucin es una fuerza de traccin y el desplazamiento
es una fuerza de empuje. El fenmeno de elucin prevalece con solventes
aprticos y el de desplazamiento con solventes prticos como los alcoholes.
Para facilitar la eleccin del disolvente, se les ha clasificado en una serie
llamada elutrpica, es decir en orden de poder eluyente creciente. l poder
eluyente aumenta con la polaridad del disolvente. La serie elutrpica de
Trappe modificada es:
DISOLVENTE
ter de petrleo

CONSTANTE DIELCTRICA (
2,0

Ciclohexano

2,1

Tetracloruro de carbono

2,2

Benceno

2,3
2,4

Tolueno
Tricloroetileno

3,4

ter dietlico

4,3

Cloroformo

5,0

Acetato de etilo

6,4

Cloruro de etileno

10,0

Piridina

12,0

Acetona

21,0

n - propanol

22,0

Etanol

26,0

Metanol

34,0

Acetonitrilo

37,0

Agua

81,0

Es importante correlacionar el poder eluyente de un disolvente con su

constante dielctrica ya que la cromatografa de adsorcin est basada en
atracciones electrostticas, las cuales estn gobernadas por la ley de
Coulomb.

F=

q1 x q2
xr2

Esta ecuacin establece que la fuerza F, entre dos cargas depende de la

magnitud de las cargas y es inversamente proporcional a la constante
dielctrica del medio y al cuadrado de la distancia entre las cargas. Si
asumimos que los otros factores permanecen constantes, la fuerza de
atraccin vara inversamente con la constante dielctrica del medio. Es fcil
demostrar (cmo ?) que ( el Rf es inversamente proporcional a las fuerzas
de atraccin entre el adsorbente y el material adsorbido, esto es:

F=

1
Rf

mientras menor es la interaccin soluto - adsorbente, mayor es su Rf; si

es grande, F es pequea, y el Rf, es grande.

Cuando no es posible obtener una buena separacin con disolventes puros

se usan mezclas de disolventes, hasta conseguir aquella combinacin que
permita obtener la separacin deseada. Para que los resultados de la
cromatografa en capa fina sean reproducibles se usan disolventes de alto
grado de pureza, ya que las constantes dielctricas dependen grandemente
de la pureza.
INFLUENCIA DE LA ESTRUCTURA QUMICA DE LAS SUSTANCIAS A
SEPARAR.

La polaridad de las molculas es un factor muy importante en las

separaciones cromatogrficas por adsorcin. En general, cuanto ms polar
es una sustancia, ms fuertemente es adsorbida. Las sustancias adsorbidas
fuertemente necesitan disolventes ms polares para ser eluidos.
Si la sustancias a separar poseen en la adsorcin con un disolvente no
acuoso poca afinidad por los adsorbentes hidrfilos usuales, entonces se
trabajar con un absorbente activo y eluyentes poco polares. Por el
contrario, se emplearn adsorbentes poco activos y eluyentes polares
cuando la afinidad de adsorcin de las combinaciones es grande. Por esto es
muy importante conocer qu caractersticas de la estructura qumica de las
sustancias influyen en la fuerza de unin por adsorcin.
Los principios en los que esto se rige se indican a continuacin:
1.- Los hidrocarburos saturados son poco o nada adsorbidos, la introduccin
de enlaces dobles aumenta la afinidad de adsorcin, tanto ms, cuanto
mayor es su nmero y ms todava si estn conjugados. Con la introduccin
de enlaces dobles, especialmente enlaces dobles conjugados, aumenta la
facultad de polarizacin de las molculas y con esto la fuerza de la unin
adsortiva a la superficie de los adsorbentes hidrfilos.
2.- Si se introducen grupos funcionales en un hidrocarburo, aumenta
generalmente la afinidad de adsorcin, pudindose observar la siguiente
serie de adsorcin descendente: -COOH, -CONH2, -OH, -NHCOCH3, -NH2,
-OCOCH3, -COCH3, -N(CH3)2, -NO2 -OCH3, -H, -Cl. Las combinaciones
carbonlicas se adsorben ms dbilmente que las hidroxlicas y amnicas.
Los grupos C - metilo estn sin una influencia especial.
3.- Si en una molcula estn presentes varios grupos funcionales de distinta
naturaleza, sus influencias separadas en la adsorcin son aproximadamente
aditivas. Los efectos estricos son importantes y pueden variar
grandemente el grado de adsorcin.
Los factores que hay que tener en cuenta en la seleccin de adsorbentes y
eluyentes apropiados, se pueden resumir sinpticamente en el esquema
que se presenta a continuacin.

De aqu resulta que para la separacin de sustancias poco polares (vrtice

del tringulo punteado sealando hacia abajo a la izquierda en la direccin
de mezcla a separar no polar), hay que emplear un adsorbente con
actividad alta (vrtice del tringulo punteado sealando hacia arriba a la
izquierda en la direccin de la fase estacionaria con actividad I) y un
eluyente con poco poder de elucin (vrtice del tringulo punteado
sealando hacia la derecha).
NATURALEZA DEL ADSORBENTE.
La adsorcin de sustancias en la superficie del slido que acta como
adsorbente es mayor cuanto mayor es la polaridad del absorbente. La
presencia de agua disminuye la actividad del adsorbente. La actividad del
adsorbente (poder de adsorcin), depende del tipo de material y del modo
cmo se prepar. Muchos de los slidos empleados como adsorbentes en
cromatografa de capa fina son xidos metlicos, xidos hidratados y
sales. Las sustancias adsorbidas, llamadas tambin adsorbatos, son
combinaciones polares o polarizables.
En general, estn ligadas a la superficie del adsorbente por medio de
fuerzas electrostticas las cuales tambin son responsables de la cohesin
de la red cristalina. Aqu, las tensiones reticulares actan en parte hacia
afuera. Los centros activos de adsorcin en el adsorbente son, por lo tanto,
aristas, secciones de rotura, ngulos y lugares defectuosos de la superficie,
en tos que los
iones estn ms o menos al descubierto. Con esto se
hace comprensible el paralelismo entre la actividad de adsorcin y la escala
de dureza, que representa una medida de la magnitud de las fuerzas
reticulares.
Por las tensiones elctricas superficiales se inducen momentos
dipolares
en
las combinaciones no polares, o se intensifican los
momentos dipolares ya existentes en combinaciones
polares. As pues,
la unin del adsorbato a la superficie del medio de adsorcin est producida
por
fuerzas ion, dipolo q dipolo-dipolo respectivamente. En caso extremo
la polarizacin puede conducir a la ionizacin de las molculas adsorbidas.
Los puentes de hidrgeno participan, a menudo de la unin entre el
adsorbente y la sustancia adsorbida. Las molculas, que forman puentes de
hidrgeno internos, se adsorben ms dbilmente en silicagel, xido de
aluminio hidratado, que los compuestos ismeros que no poseen estas
propiedades. Adems, los puentes de hidrgeno influyen en la movilidad
entre la sustancia y el eluyente. La serie de poder adsortivo de los
adsorbentes ms usados que se presenta en la tabla fue establecida por H.
H. Strian.
Para facilitar la eleccin del sistema, se ha preparado una lista de
adsorbentes y disolventes ordenados de menor a mayor polaridad (actividad
y poder eluyente respectivamente). Esta se ha elaborado a base de
conocimientos prcticos y se representa a continuacin.
Adsorbentes por orden de
menor a mayor poder adsortivo

Disolventes por orden de menor

mayor poder eluyente

Azcar, almidn
Inulina
Nitrato magntico
Talco
Sosa
Carbonato potasio
Carbonato clcico
Fosfato clcico
Carbonato magntico
Magnesia
cido silicio activado
Silicato de magnesio activados
xido de aluminio
Carbn animal activado y magnesia
activada

Hexano, teres de petrleo

Heptano
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono
Benceno
Tolueno
Cloroformo
ter dietlico
Acetato de etilo
Piridina
Acetona
Propanol
Etanol
Metanol
Agua
Mezcla de cidos, bases con agua,
alcoholes o piridina

Aunque esta relacin es muy til, hay que tener cuidado, especialmente con
los disolventes, ya que con frecuencia se encuentra inversin de los
resultados, entro dos disolventes determinados, en las mismas condiciones.
Virtualmente puede emplearse cualquier lquido como disolvente en la
cromatografa de adsorcin, pudiendo combinarse mezclas de dos, tres e
incluso cuatro lquidos de polaridad diferente. De esta manera, el nmero de
disolventes disponibles es mucho mayor que el de adsorbentes. Los
adsorbentes ms usados en TLC, en orden de importancia son la silicagel, y
la almina. En determinados casos tambin se emplean otros adsorbentes
especiales como kieselguhr, celulosa, carbn activado y el polvo de
poliamida (niln).
En la prctica slo se emplean con frecuencia solamente dos adsorbentes,
la slica gel y la almina, desarrollando la separacin empleando el
disolvente apropiado o cambiando la polaridad del adsorbente por adicin
de agua. Para conseguir la forma ms activa del adsorbente, se calienta
fuertemente, eliminando todo el agua y cualquier impureza orgnica.
Los grados de menos actividad se consiguen por adicin de cantidades
conocidas de agua. A este proceso se le denomina desactivado.
Algunos adsorbentes contienen un aglomerante el cual aumenta la adhesin
del adsorbente a la placa de vidrio. Los aglomerantes ms comunes son el
sulfato de calcio (yeso) y el almidn. Sin embargo, los productos modernos
tienen mejores propiedades adhesivas, siendo, en muchos casos, superfluo
e incluso indeseable el empleo de aglomerantes.
SILICAGEL: (CIDO SILCICO).
Es el adsorbente ms extensamente usado en TLC y probablemente el
mejor material para realizar las pruebas iniciales de separacin, ya que
posee una capacidad de adsorcin muy elevada.

Si los compuestos a separar son neutros y contienen uno o dos grupos

funcionales, pueden ser resueltos sobre capas de silicagel activada usando
para el desarrollo de la cromatografa solventes orgnicos puros o mezclas
de solventes. Si los/compuestos a ser separados son bases orgnicas, el
solvente de desarrollo deber contener una pequea cantidad de hidrxido
de amonio de dietilamina.
Del mismo modo, se deber aadir una pequea cantidad de cido actico a
los solventes usados para el desarrollo del cromatograma cuando se desea
separar mezclas de compuestos
cidos. La silicagel puede usarse con
todos los solventes, an cuando exhibe capacidad de enlazamiento por
puentes de hidrgeno con algunos solutos y solventes cuando est presente
el agua.
Esta capacidad de enlazamiento conjuntamente con el factor de
hinchamiento y por tanto la disminucin de la velocidad de flujo, en
presencia de agua, metanol y etanol, causa algunas limitaciones a su uso
general. Los compuestos muy polares, tales como: alcoholes, aminas o
cidos carboxlicos, se adsorben fuertemente a la superficie de la slica,
formando puentes de hidrgeno con los residuos de cido silcico de la
forma Si--O--H.
Por lo tanto, se requiere de un solvente muy polar para hacer que este tipo
de compuestos se mueva a lo largo de la superficie de la silicagel. Los
compuestos apelares no sern muy atrados por la silicagel y se movern
rpidamente an en la presencia de solventes apolares. La silicagel puede
adquirirse en formas muy diversas.
Las ms comunes son la silicagel G y la silicagel H. La forma G, (la G
significa Gypsum o yeso de Pars, es decir sulfato de calcio. Cuando este
aglomerante se expone al contacto con el agua o la humedad, se convierte
en una masa rgida de CaSO42H2O, el cual se enlaza al adsorbente y a la
placa de vidrio), contiene un 13% de aglomerante: El tamao medio de sus
granos es de 5 a 25 mieras, la silicagel H no contiene aglomerantes.
Igual que la forma G, posee un tamao medio de granulacin de 5 a 25
mieras. Las capas de silicagel H poseen una buena estabilidad. Los tiempos
de recorrido, en comparacin con los de la silicagel G son algo superiores.
Tambin pueden obtenerse silicagel H y silicagel G, con indicadores de
fluorescencia (silicagel GF254 y silicagel HF254). La materia fluorescente
inorgnica (un silicato de zinc activado con manganeso), hace innecesario
en muchos casos, tener que colorear tas sustancias. Se observa el
cromatograma en la luz de una lmpara UV de onda corta. Las sustancias
que absorben la luz UV aparecen como manchas de absorcin oscuras sobre
un fondo fluorescente.
ALUMINA:
Hasta ahora el xido de aluminio (almina), se ha utilizado con menor
frecuencia en la cromatografa de capa fina que la slica gel. Las mltiples
posibilidades de aplicacin de la almina incluyen por ejemplo la separacin
de terpenos, alcaloides, esteroides, combinaciones alicclicas, alifticas y
aromticas.

La almina tiene reaccin alcalina, por lo tanto se usa frecuentemente para

la separacin de compuestos con caractersticas bsicas en preferencia o la
slica gel. Debido a su naturaleza bsica, no.se requiere aadir cantidad
alguna de base al solvente de desarrollo.
La cromatografa de capa fina sobre almina tambin se usa como una
herramienta complementaria para la cromatografa de columna, tcnica en
la cual la almina se emplea ms extensamente que la slica gel. La almina
presenta sitios de adsorcin de estructura qumica variada del tipo: Al 5+, Al OH, Al O-, Al OH+ y dependiendo de su preparacin iones sodio o
hidronio.
La almina puede obtenerse en tres formas: acida, bsica y neutra. La
almina acida es una almina lavada con cido, la cual produce una
suspensin en el agua con un pH de aproximadamente 4.
Esta almina es adecuada para la separacin de compuestos con
propiedades acidas tales como aminocidos y cidos carboxlicos. La
almina neutra (pH aproximadamente 7) se puede usar para la separacin
de cetoesteroides, glicsidos, cetales, lactonas, algunos esteres y para la
deshidratacin de solventes.
La almina bsica (pH aproximadamente 10) es adecuada para la
separacin de compuestos con caractersticas bsicas como las aminas.
Este tipo de almina, posee el ms amplio espectro de aplicacin. Los
.compuestos altamente polares se, adsorben fuertemente sobre, este
material, mientras que los compuestos no-polares (excepcin hecha con los
hidrocarburos insaturados) se enlazan dbilmente. La acetona, no debe
usarse como solvente de elucin con almina bsica de alto grado de
actividad, ya que puede condensar por una reaccin de condensacin
aldlica.
Existen varios tipos de almina dependiendo de su grado de actividad, la
cual se mide en la escala de Brockman, de acuerdo al contenido de agua.
Los grados de actividad son los siguientes:
Grado de Actividad

II

III

IV

Peso de agua (% en
peso)

10

15

Para la almina, el grado de mayor actividad se define como actividad I de

Brockman. El contenido de agua posee un significado decisivo, ya que las
molculas de agua fcilmente adsorbibles bloquean los puntos activos de la
superficie.
La cromatografa de los cidos y bases se desarrolla en forma diferente. De
los adsorbentes que ms se emplean en cromatografa de capa fina, la slica
gel es relativamente acida y la almina es relativamente bsica. S se
intentara cromatografiar solutos con propiedades acidas sobre., almina,
estos se unirn fuertemente al adsorbente mediante fuerzas inicas.

Debido a este hecho, se movern con mucha dificultad a lo largo de la capa

de adsorbente, por lo tanto, su separacin ser muy difcil.
Igual situacin ocurrir con solutos bsicos sobre slica gel. Es as como, las
bases debern ser cromatografiadas sobre almina, donde podrn ser
adsorbidas en casi la misma extensin que los alcoholes. Los cidos y
fenoles, debern ser separados sobre slica gel, donde podrn ser
adsorbidos en una extensin un poco mayor que los alcoholes.
KIESELGUHR Y CELULOSA:
El kieselgur adsorbe ms dbilmente que la slica gel y la almina. Por eso
es especialmente apropiado para separaciones de combinaciones polares
(en particular para cromatografa de reparto). Estos dos adsorbentes se
usan como soportes para pelculas lquidas en la cromatografa de particin.
Este tipo de cromatografa se usa siempre para la separacin de molculas
muy polares como los amino-cidos, los carbohidratos y algunos otros
compuestos hidroflicos naturales y frecuentemente para la separacin de
ismeros estrechamente relacionados. Se debe tener cuidado de asegurar
que las capas contengan un lquido corno fase estacionaria, generalmente
agua. Esto es .especialmente el caso, cuando las capas se preparan por el
mtodo de inmersin. El sistema de solventes usado con estos adsorbentes
contiene generalmente varios constituyentes, uno de los cuales es la fase
estacionaria liquida, por ejemplo, agua.
CONCENTRACIN DE LA MUESTRA A APLICAR.
La cantidad de muestra en la cromatografa de adsorcin es muy
importante, puesto que el poder adsorbente de la superficie disminuye
marcadamente con el incremento de la .cantidad de muestras, ya que se
ocupan primero los centros ms activos. El resultado es la aparicin de
"colas" en direccin al origen.
Los mejores resultados se consignen al aumentar tanto como se pueda la
relacin adsorbente/muestra. Lo normal es que sea de 1000 a 1, para
obtener resultados satisfactorios. En todo cuso, tas cantidades que se
pueden cromatografiar sin formacin de cola, son distintas. Dependen del
nivel de adsorcin total, es decir de la clase de adsorbente y de su
capacidad, que en general va paralela con la actividad de adsorcin.
Para un espes de

capa de 250

, las cantidades de sustancias

que se pueden cromatografiar en cada capa de silicagel ascienden a unos

miligramos, sobre las capas de xido de aluminio menos activadas, la
dcima parte, mientras que sobre capas de Kieselgur inactivas, se pueden
cromatografiar solamente 25 hasta 50

g de mezclas de sustancias.

ETAPAS PARA REALIZAR-UNA CROMATOGRAFA DECAPA FINA

PREPARACIN DE LA PAPILLA DE ADSORBENTE
Sobre las placas se esparce en forma homognea una papilla de adsorbente
dispersado en un solvente adecuado. Si el adsorbente no contiene

aglomerante, las papillas de adsorbente pueden conservarse en frascos

cerrados, casi indefinidamente.
Normalmente, las papillas se hacen con agua que, si es necesario, puede
contener cidos, bases, lampones o reactivos acomplejantes. El mayor
problema en esta tcnica es conseguir una consistencia correcta. Si la
papilla es demasiado diluida correr rpidamente, dando lugar a capas,
excesivamente finas. Por el contrario, si es muy espesa se extiende muy
difcilmente, siendo fcil obtener lneas o grumos a lo largo de las placas. La
papilla con agua debe usarse inmediatamente despus de su preparacin,
de lo contrario comenzar a formar grumos. Esta no debe emplearse si
la misma ha estado sin uso despus de un periodo de tiempo. Las
placas preparadas con una papilla acuosa deben secarse en una estufa
antes de su uso.
An cuando, se pueden usar un gran nmero de solventes, para preparar la
papilla, el cloruro de metileno y el cloroformo son probablemente los ms
convenientes. Poseen dos ventajas, ambos tienen bajos puntos de ebullicin
y la habilidad para evitar que el adsorbente forme grumos. Los bajos puntos
de ebullicin significa que no es necesario secar las placas revestidas de
adsorbente en una estufa. Adems, fas placas preparadas con estos
solventes son estables por varios das. Tienen la desventaja, que la capa de
adsorbente formada sobre el vidrio es frgil y por tanto se debe tratar
cuidadosamente.
Por esta razn, algunas personas prefieren aadir una pequea cantidad de
metanol para hacer posible que el aglomerante se fije ms firmemente. El
metanol solvata el sulfato de calcio tanto como el agua.
La papilla se prepara convenientemente en un recipiente de tamao
mediano con tapa hermtica. Se requieren de 3 ml de diclorometano por
cada gramo de slica gel.
Para obtener una papilla sin grumos, se deber aadir la slica gel al
solvente, mientras la mezcla est siendo agitada. Aadir solvente al
adsorbente usualmente causa la formacin de grumos en la mezcla. Cuando
la adicin del solvente es completa, se coloca la tapa del recipiente y se
cierra hermticamente, se agita vigorosa y para asegurar un mezclado
completo.
PREPARACIN DE LAS PLACAS.
Las placas para la cromatografa de capa fina se pueden adquirir
comercialmente revestidas de capas muy uniformes de slica gel o almina
sobre lminas de plstico. Estas placas pueden obtenerse con o sin un
colorante fluorescente impregnando la superficie del adsorbente. Sin
embargo, generalmente se usan placas de vidrio, de tamao variable segn
las necesidades de la aplicacin particular. Las dimensiones ms comunes
son:
7,5 x 2,5 cm (portaobjeto)
20 x 5 cm
20x10cm
20x20 cm (para cromatografa bidimensional)
100 x 20 cm (para cromatografa preparativa)

Las placas deben lavarse con jabn y agua, lavadas nuevamente con agua y
luego con metanol acuoso al 50%. Seguidamente, se permite que las placas
se sequen completamente sobre toallas de papel. La manipulacin de las
placas debe hacerse por los extremos, debido a que las huellas digitales
sobre la superficie de las placas hacen dificultoso que el absorbente pueda
adherirse al vidrio.
Para la preparacin de placas de capa fina sobre lminas de vidrio en el
laboratorio se usan frecuentemente dos mtodos:
(i)
por revestimiento
(ii)
por inmersin.
REVESTIMIENTO.
En este mtodo, placas de vidrio del mismo espesor se disponen en hilera
sobr un soporte especial, extendiendo la papilla de adsorbente con un
extendedor de capa fina. Si las placas de vidrio poseen distinto espesor se
usa un aparato con un dispositivo que permite colocar las placas de tal
manera que todas ellas tengan la superficie superior en un mismo plano,
para asegurar que cada placa recibe el mismo espesor de adsorbente., al
deslizar el extendedor con el adsorbente tal como se indica en la figura:

El nivelador automtico de placas tiene una manivela frontal, la cual, con un

giro, hace que suban fas placas y queden niveladas por la parte superior,
ofreciendo una superficie total en un mismo plano, aunque el grosor de las
placas sea diferente.
Las placas se aplican por medio del extendedor, el cual cuenta con una
serie de calibraciones para conseguir capas de 0,25 ; 0,50 ; 0,75 ; y 1 mm
de espesor.
Habiendo preparado las placas, el paso siguiente es el pecado, lo que se
consigue alentndolas en una estufa a una temperatura de.100 - 125 C
durante un par de horas. De esta forma se activan, lo que las hace
adecuadas para la cromatografa de adsorcin.
INMERSION.

Este es el mtodo ms ampliamente usado para preparar placas

revestidas de adsorbente, tipo portaobjetos, con fines didcticos en el
laboratorio.
Consiste en sumergir un par de portaobjetos de vidrio de similares
dimensiones adheridos uno contra el otro y sujetados por un extremo con
los dedos ndice y pulgar, dentro del recipiente que contiene la papilla a una
velocidad constante hasta que aproximadamente 0,25 cm desde el borde
superior de las placas permanezca sin revestimiento de adsorbente. A
continuacin, se extraen las placas, lentamente a una velocidad constante:
La operacin puede visualizarse en la figura:

La operacin total del procedimiento oscila entre 3 y 5 segundos. Se

requiere de cierta prctica para ajustar el tiempo correcto. Despus de
extradas, se permite escurrir la suspensin sobrante en el otro extremo de
la placa, apoyando el borde inferior de las placas en la parte superior del
envase que contiene la papilla. Las placas se separan, limpiando con un
dedo el exceso de absorbente que haya quedado en los bordes y en la
superficie no cubierta de las placas, para finalmente colocarlas sobre una
toalla de papel para completar el proceso de secado.
APLICACIN DE LAS MUESTRAS SOBRE LAS PLACAS.
Los mtodos son prcticamente los mismos que para la cromatografa de
papel, teniendo en cuenta que la mayor delicadeza de lar> capas finas
exige mayor cuidado al aplicar la muestra. Las muestras se aplican con un
capilar sobre la lnea base, dejando evaporar el disolvente (Ver figura).
Los capilares que se usan son una extensin muy fina del tipo empleado en
la determinacin de puntos de fusin. (ver figura). La evaporacin del
disolvente en la capa fina es tan rpida que no es necesario el empleo de un
secador de pelo u otro aparato similar. El dimetro de las manchas en el
origen debe ser lo ms pequeo posible.
Las solucin es no muy concentradas se pueden aplicar varias veces
dejando evaporar el disolvente entre cae a aplicacin. El volumen de la
muestra suele ser de 1 microlitro. No se debe olvidar marcar la placa de
forma adecuada, antes -de-comenzar la cromatografa. Lo ms sencillo es

enumerar
los puntos de origen de izquierda a derecha, anotando las
sustancias que se aplican en cuaderno de laboratorio.

ELECCIN DEL DISOLVENTE

Para obtener resultados reproducibles, en la cromatografa se deben
usar solamente disolventes muy puros. En general, se procura emplear
disolventes (eluyentes) sencillos, de uno o dos componentes. En caso de
disolventes de varios componentes, hay que evitar que los ms voltiles se
evaporen si se emplean recipientes que no cierran hermticamente. Cuando
se trata de mezclas de sustancias desconocidas, lo mejor es emplear en
primer lugar como disolvente benceno o cloroformo (con contenido de
alcohol). Si las sustancias se quedan durante la cromatografa cerca
del
origen, entonces o bien se elige un medio disolvente de mayor polaridad o
se agrega al disolvente empleado otro miscible con l de mayor polaridad.
Si las sustancias se desplazan demasiado aprisa (cerca del frente), se
emplea entonces un disolvente, con menor polaridad. En todo caso, la
eleccin del disolvente depender de la naturaleza, de los compuestos que
se van a separar y del material adsorbente sobre el cual se desarrollar la
separacin. Una regla general para la eleccin del disolvente es establecer
la comparacin de polaridad del mismo con respecto a las polaridades de
las sustancias a separar.
As, para sustancias solubles en agua se elegirn capas de celulosa o
silicagel, emplendose un disolvente polar. Para sustancias menos polares
se elegirn capas de almina o silicagel activadas, emplendose un
disolvente no acuoso apropiado.
Una tcnica sencilla para la eleccin del disolvente a emplear en una
determinada separacin consiste en colocar una serie de manchas de la
muestra a -intervalos en una placa. Los disolventes se prueban aplicndolos

en los centros de las manchas mediante un capilar muy fino, lo que permite
desarrollar las manchas radialmente (ver figura).

En el caso representado el disolvente 2 resulta ser el ms apropiado,

debido a que resulta en la separacin del mayor nmero de componentes
de la mezcla en estudio.
DESARROLLO DE LAS PLACAS.
El desarrollo se lleva a cabo por el mtodo ascendente en cubetas
especiales para cromatografa o en recipientes adecuados tales como
frascos pequeos con tapa de rosca, vasos de precipitados cubiertos con
vidrio de reloj, etc, del tipo que se muestran en las figuras anexas.

En el interior de la cmara de desarrollo debe colocarse un papel de filtro,

empapado de disolvente, que cubra las paredes interiores de la misma, para
conseguir que la atmsfera est saturada de vapor del disolvente.
El fondo de la cubeta se cubre de disolvente hasta una altura de 0,5 a 1 cm
y, despus de un periodo de tiempo apropiado, en el que se consigue el
equilibrio, se introduce la placa. Durante el desarrollo no puede moverse la
cubeta. Por lo general, cuando se desarrolla una placa se deja que ascienda
el disolvente unos 10 cm por encima del origen y se saca la placa. El frente
del disolvente se marca cuidadosamente con un lpiz puntiagudo y se deja

evaporar el mismo, operacin que dura unos pocos minutos. Si es necesario

se calienta la placa, estando lista para el revelado.
REVELADO DE LAS PLACAS.
Los procedimientos empleados para revelar las placas son anlogos a los
que se usan en la cromatografa sobre papel. Sin embargo, existen algunas
diferencias interesantes. En principio, el mtodo de baado no es
recomendable, ya que las placas se estropean fcilmente con este mtodo.
Una de las ventajas de la cromatografa en capa fina sobre la de papel es la
posibilidad de revelado con agentes corrosivos tal como los cidos
concentrados .y compuestos fuertemente oxidantes,, a alta temperatura,
debido a la naturaleza inorgnica de la capa. Otro reactivo muy empleado
son los vapores de yodo.
En un recipiente con tapa hermtica que contiene en el fondo unos pocos
cristalitos de yodo, se introduce el cromatograma y se deja unos minutos.
El yodo tiende a concentrarse en los sitios donde estn los compuestos, por
lo que aparece una mancha marrn oscuro, sobre un fondo amarillo plido.
En tanto que el yodo no reaccione con los compuestos revelados, el mtodo
es extraordinariamente bueno como revelador no destructivo.
Otros mtodos que no afectan a los productos en el revelado son la
fluorescencia y la radiactividad: Muchas placas llevan impregnadas
sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuestos,
localizndose los mismos por la aparicin de manchas no fluorescentes.
Adems, muchas veces los compuestos a separar absorben en el
ultravioleta, siendo este el mtodo ms sencillo para localizarlos.
Cuando se emplea una lmpara UV, cualquier material orgnico, que
contenga un cromforo, aparecer sobre la placa como una mancha oscura
sobre un fondo luminoso. Teniendo en cuenta que el material orgnico se
deposita sobre la superficie del adsorbente, si se tiene un cromforo,
actuar como una sombra o cortina que evitar que la radiacin UV alcance
la superficie del adsorbente. La posicin de la mancha debe delinearse
como se mencion antes.
Si se desea emplear el revelado UV, se coloca la placa seca bajo una
lmpara UV, preferiblemente en un recinto oscurecido. Existen diversas
lmparas de luz UV, pero las dos ms comunes son una que puede
manipularse con la mano y colocarse directamente sobre la placa y otra con
un recinto cerrado por todos los lados, provista de un trapo oscuro en la
parte frontal y una mirilla en la parte superior. Si se emplea una lmpara de
mano, se mantiene sobre la placa a una altura de 10 cm aproximadamente,
tal como se muestra en la figura. Mrese slo la placa, evite siempre mirar
directamente a la lmpara.

CONSERVACION DEL CROMATOGRAMA

La conservacin de los cromatogramas en capa fina es difcil y
generalmente indeseable, puesto que tas placas se utilizan muchas veces.
Interesa, por tanto, encontrar un medio para conservar los cromatogramas
obtenidos. El espesor del vidrio y la naturaleza tan delicada de la capa son
obstculo para guardar los cromatogramas. La posicin de las manchas
despus del revelado puede fotografiarse o dibujarse. Un mtodo que puede
usarse convenientemente, consiste en adherir con sumo cuidado sobre la
superficie del adsorbente, una cinta plstica transparente de una anchura
un poco mayor que el de la placa y, tratar que el cromatograma se pegue
en la cinta de manera que conservarlo por largo tiempo.
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA EN QUMICA
ORGNICA.
La tcnica de cromatografa en capa fina tiene muchos usos importantes en
qumica orgnica. Puede usarse en las siguientes aplicaciones.
1.- Establecer si dos compuestos determinados son idnticos.
2.- Determinar el nmero de componentes en una mezcla.
3.- Determinar el solvente apropiado para una separacin en columna
cromatogrfica.
4.- Monitorear la separacin de una columna cromatogrfica.
5.- Comprobar la efectividad de separaciones realizadas en columna, o
mediante tcnicas de extraccin o cristalizacin.
6.- Registrar el progreso de una reaccin.
En todas estas aplicaciones, la cromatografa de capa fina tiene la ventaja
sobre otras tcnicas, que en esta, se usan pequeas cantidades de material
para realizar los anlisis. Con muchos de los mtodos de visualizacin, se
pueden detectar cantidades tan pequeas como 10 -7 gramos. Por otra
parte, pueden utilizarse cantidades relativamente grandes como 1
miligramo.
El uso de la cromatografa de capa fina, puede servir para establecer la
identidad qumica de dos compuestos que se sospechan son idnticos.
Simplemente se aplican ambos compuestos en una misma placa y se
desarrolla en un solvente adecuado. S ambos compuestos recorren la
misma distancia, es decir tienen el mismo valor de Rf estos sern

probablemente idnticos. Si en cambio, la posicin de ambas manchas no

es la misma, se puede asegurar en forma definitiva y concluyente que los
dos compuestos no son idnticos.
Es importante, aplicar ambos compuestos en la misma placa. Esta
precaucion.es especialmente importante cuando se usan placas preparadas
por inmersin, puesto que estos varan de uno a otro. Dos placas
preparadas de esta forma no tendrn exactamente el mismo espesor de
adsorbente.
La cromatografa en capa fina, tambin encuentra aplicacin para
establecer si un compuesto es una sustancia pura o en su defecto se trata
de una mezcla. Una sustancia pura produce una sola mancha sin importar el
solvente que se use para desarrollar la placa. Por otra parte, el nmero de
componentes de una mezcla puede establecerse probando varios solventes
para desarrollar la mezcla.
Sin embargo, los resultados deben tomarse con cuidado, ya que a menudo
resulta difcil, conseguir un solvente adecuado que pueda separar una
mezcla de compuestos con propiedades muy similares tales como los
ismeros. La falta de separacin no es prueba absoluta de que un aplicacin
particular de una muestra sea una sustancia pura.
Podernos emplear la cromatografa de capa fina para determinar el mejor
solvente que podr ser usado en la resolucin de una mezcla que ha de ser
separada utilizando la tcnica de cromatografa en columna. El proceso
consiste en preparar varias placas, impregnadas con el mismo adsorbente
que ser usado en la separacin por cromatografa en columna, aplicar la
solucin de la mezcla en cada una de las placas y analizar los resultados
que se obtienen al desarrollar la cromatografa de capa fina en solventes de
diferente polaridad. El solvente que proporciona una mejor resolucin en
capa fina, muy probablemente funcionar mejor en columna. Estos
experimentos en pequea escala tienen la virtud de ser rpidos, usa
pequeas cantidades de material y ahorrar tiempo.
En forma similar, la tcnica de TLC, puede usarse para monitorear el
progreso de una separacin por cromatografa de columna. Una situacin
hipottica se analiza en los diagramas de la figura que se muestra a
continuacin.

El anlisis preliminar por cromatografa de capa fina revela que un solvente

determinado, separa la mezcla en cuatro componentes (A-D). Por lo tanto,
se usa este solvente para eluir la columna. Este proceso conduce a la
obtencin de 11 fracciones de 15 ml cada una.
El estudio detallado de las distintas fracciones por TLC muestra que las
fracciones 1, 2, y 3,
contienen el componente A, las fracciones 4, 5, 6,
y 7, el componente B, las fracciones 8 y 9, el componente C y las fracciones
10 y 11, el componente D. Se observa que las fracciones 3, 4, 7 y 9 se
obtienen con una pequea contaminacin de otro componente. La fraccin
3 est contaminada O con algo de B. la 4 con A, la 7 con C y la 9 con D.
Otro ejemplo de la aplicacin de la tcnica de TLC, se encuentra en el
anlisis de una mezcla producto de una reaccin. El anlisis del producto de
reaccin por TLC, produjo dos manchas, A y B. Despus de la cristalizacin
del producto, se procedi a analizar los cristales obtenidos por TLC,
encontrndose que los cristales eran puros e idnticos al componente A,
mientras que las aguas madre contenan una mezcla de A y B. Estos
resultados conducen a pensar que el proceso de purificacin resulta
satisfactorio para e! componente A.
Finalmente, es posible usar la tcnica de TLC para monitorear el progreso
de una reaccin. A intervalos de tiempo especficos, durante el transcurso
de la reaccin, se toman muestras de la mezcla de reaccin y se someten a
anlisis por TLC. Un ejemplo se detalla en las figuras esquematizadas a
continuacin:

En este caso, se desea convertir el reactante A en el producto B. Al

comienzo de la reaccin (0 hr), se prepar una placa en la cual se aplicaron
los compuestos puros A y B, adems de la mezcla de reaccin. Anlisis
similares se condujeron a 0,5; 1; 2; y 3 horas despus del inicio de la
reaccin. Las placas muestran que la reaccin se completa en 2 horas:
Cuando el tiempo de reaccin se prolonga por ms de 2 horas, comienza a

aparecer un producto colateral nuevo C. Por lo tanto, e! tiempo ptimo to

reaccin es de 2 horas.

PARTE
EXPERIMENTAL
CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
1. INTRODUCCIN
La palabra cromatografa proviene del griego chromo (color) y graphos (escrito). La
cromatografa es un sistema analtico que permite separar los diferentes
componentes de una muestra problema por distribucin entre dos fases, una
estacionaria y otra mvil, con el fin de identificarlos y/o cuantificarlos.

Fase Mvil (eluyente): Efecto de desplazamiento ejercido sobre los

componentes de la mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un
gas, sobre una fase estacionaria. Cuando se utiliza un lquido como fase
mvil mediante una serie eluotrpica se escoge la mejor combinacin de
solventes miscibles para una buena separacin cromatogrfica de una
muestra en sus componentes, para lo cual se pueden emplear ter de
petrleo, hexano, benceno, tolueno, cloroformo, etc.
Fase estacionaria (adsorbente): Efecto de retencin producido sobre los
componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser slida o
lquida, anclada a un soporte slido. Si es un lquido, puede estar distribuido
en un slido, el cual puede o no contribuir al proceso de separacin. El
lquido puede tambin estar qumicamente unido al slido (Fase Ligada) o
inmovilizado sobre l (Fase Inmovilizada). Los adsorbentes ms utilizados
son: slica gel (SiO2) y almina (Al2O3).

El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase

estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. El orden de
elucin de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase mvil o
eluyente.

CROMATOGRAFA DE PAPEL
La cromatografa en papel es la tcnica de separacin e identificacin de sustancias
qumicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de papel de
filtro. Es la ms sencilla de las tcnicas, pero slo dar resultados cualitativos. El
mtodo se basa en un mecanismo de reparto, y consiste en depositar una pequea
cantidad de muestra en el extremo de una tira de papel de filtro, que se deja
evaporar. Luego se introduce la tira en una cubeta que contenga el disolvente, de
manera que ste fluya por la tira por capilaridad (fig. 1).
Figura 1. Cromatografa de papel

Fuente: OpenCoursiveWare, Cromatografa, 2011.

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Es la tcnica utilizada para separar los componentes puros de una mezcla, de
acuerdo con su polaridad. Consiste, en que la fase estacionaria se encuentre sobre
un plano formando una capa de partculas slidas extendida sobre un soporte, tal
como una placa de vidrio o aluminio ((Thin Layer Chromatography, TLC), la muestra
es aplicada en puntos o en banda, para posteriormente ser eluda dentro de un
tanque cromatogrfico como se ilustra en la figura 2.
Figura 2. Diagrama de una cromatografa de capa fina

Fuente: biomodel.uah.es, Cromatografa, 2008.

La cromatografa en capa fina como mtodo cualitativo y cuantitativo, siempre

requiere contar con un estndar de referencia para comparar su valor de factor de
retardo (Rf) y el color de la mancha del estndar al ser revelada con agentes
qumicos, con los datos experimentales obtenidos.
Para el caso de cromatografa de papel y de capa fina se analiza el factor de retardo
de la siguiente manera:

Factor de retardo (Rf): Es un valor relativo para cada sustancia y depende

de las condiciones cromatogrficas con que se haya trabajado (fase mvil,
fase estacionaria, eluyente y el tiempo de saturacin). El valor de Rf es el
coeficiente de la distancia recorrida por el compuesto (DM) para la distancia
recorrida por el disolvente (DF), se lo puede visualizar el la figura 3.
Figura 3. Representacin del factor de retardo

Fuente: Martnez, et al., Manual de prcticas de laboratorio de farmacognosia y

fotoqumica, 2008.

Revelado de la placa: Se denomina revelado de placa a los mtodos

empleados para la visualizacin de los componentes no coloreados de la
muestra. El revelado de las placas se puede realizar mediante dos mtodos:

mtodo qumico (por inmersin o rociado de reactivos colorantes como

yodo); y mtodo fsico (mediante la radiacin con luz UV).

2. OBJETIVO

Aplicar cromatografa de capa fina (CCF) para muestras de analgsicos y

colorantes.

3. MATERIALES Y REACTIVOS
Muestras
Cafena
Analgsicos con contenido de cafena
Rojo congo (0.1% m/v)
Rojo de fenol (0.1% m/v)
Azul de metileno (0.1% m/v)
Reactivos
Butanol
Agua
cido actico
Hexano
Materiales
Papel filtro
Tubos de ensayo
Vasos de precipitacin
Matraces erlenmeyers
Mortero y pistilo
Vidrios reloj
Pipetas
Probetas
Esptulas
Varillas de agitacin
Embudos
Tijera
Regla
4. PROCEDIMIENTO
PREPARACION DE LAS MUESTRAS
Preparar una solucin de los colorantes a una concentracin de 0.1% (5 ml).
Para los analgsicos se trituran por separado hasta obtener un polvo fino. Intentar
disolver 0.2gr en 5 ml de etanol al 95%. Filtre y conserve el filtrado para aplicar en
las placas de capa fina. El patrn de cafena se prepara disolviendo 0.1 gr de
cafena en 10 ml de etanol al 95%. En caso de no disolverse, someter a bao
mara.

PREPARACIN DE LA PLACA PARA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Cortar un trozo de la lmina de slica gel para CCF segn lo requerido.
Trazar una lnea con lpiz a 0,5 cm del borde inferior y a 0,5 cm del borde superior
del papel.
En el borde inferior, marcar un punto con el lpiz a 0.5 cm del borde izquierdo
donde se colocara la primera siembra, la segunda siembra se la realizara a 0.5 cm
de la primera aplicacin (continuar con el mismo proceso para las dems
aplicaciones), la ltima siembra se la realiza a 0.5 cm de distancia del borde
derecho de la placa.
Aplicar las diferentes muestras sobre la placa cromatogrfica en los puntos de
sealados.
Colocar en un vaso de precipitacin el solvente a emplear (figura 4).
Dejar eluir y evitar que el solvente llegue a la lnea superior marcada con lpiz y con
las muestras aplicadas, retirar y dejar secar los cromatogramas.

Figura 4. Cromatografa de capa fina y preparacin de muestra

PREPARACIN DEL SOLVENTE

Preparar la solucin que se indica en la tabla 1 para un volumen de 5 ml para cubrir
la base del recipiente a emplear (que no sea mayor a 0.5 cm de altura):

Tabla 1. Relacin para mezcla del solvente

Mezcl
a
M1

Solventes
1-Butanol:cido Actico: Agua: Hexano
Fuente: Laboratorio de Qumica Orgnica, 2015

Relaci
n
4:3:5:1

5. DATOS OBTENIDOS
Reportar los datos de distancias recorridas por los colorantes y los analgsicos
sobre las placas de capa fina.
6. RESULTADOS
Calcular el Rf para cada color y para los analgsicos con cada mancha observada.

Tabla 2. Datos obtenidos

Solvent
e

Marc
a

Colo
r

Colores
separados

Distancia recorrida (cm)

Rx
Rx
(colores/analgsic
(solvente)
os)

Fuente:
Elaborado por:

Reportar los grficos (fotografas) .

6. DISCUSIN
7. CONCLUSIONES
8. CUESTIONARIO

Indique la clasificacin de la cromatografa de acuerdo al estado fsico del

eluyente y del mecanismo de separacin.
En qu consisten las fuerzas propulsoras y las fuerzas retardantes en
cromatografa?
Qu es el RF?
El valor del Rf Depende del eluyente?
Qu es el TR?
Explique las razones por las cuales unos solventes son ms polares que
otros. Considerar los solventes utilizados en la prctica.
Por qu se dice que la cromatografa en capa fina es un criterio parcial y no
total de identificacin?
Cul es la importancia y las aplicaciones de cromatografa de capa fina?
Qu significa que una sustancia tenga: Rf menor a 0.5, mayor a 0.5 e igual
a 0.5?

Rf

Segn lo realizado en la prctica cul ser el resultado de los siguientes

errores en cromatografa en capa fina?
-Aplicacin de solucin muy concentrada
-Utilizar eluyente de alta polaridad
-Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa

9. BIBLIOGRAFIA

1. Introduccin a la Cromatografa, David Abbott y R.S. Andrews, Tercera

Edicin., Alhambra S.A. Madrid., 1973.
2. Paper, Thin Layer Chromatography and Electrophoresis, A Teaching Level
Manual, Smith Ivor and Feinberg, J. G. Shandon, London, 1965.
3. Experimental Methods in Organic Chemistry, Moore, J. A.., and
Dalrymple, D. L., Second Edition., W. B. Saunders Co., Philadelphia,, 1976.
4. Introduction to Organic Laboratory Techniques. A Contemporary
Approach, Second Edition., Pavia, Lampman y Kriz