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Universidade Federal de Sergipe

Centro de Cincias Biolgicas e da Sade


Departamento de Fisiologia

Manual das aulas prticas de Bioqumica


Professora: Roberta Pereira Miranda Fernandes

So Cristvo,
2014.2

1a Prtica
Medidas de segurana, vidraria do laboratrio e regras para
elaborao do relatrio
1. Objetivos:

Identificar medidas de segurana no laboratrio;


Identificar e nomear a vidraria de uso corrente no laboratrio,
correlacionando-as s suas respectivas funes.
Elaborar relatrios das aulas prticas.

2. Normas gerais e medidas de segurana no laboratrio


Trate educadamente todas as pessoas que freqentam o laboratrio,
comportamentos como este, tornam a convivncia mais fcil e agradvel;
No ser permitido fumar no laboratrio, por causa das substncias
inflamveis em uso ou em estoque, e tambm pelo respeito aos no fumantes;
O uso de jaleco obrigatrio, pois esta vestimenta protege a sua pele e a
sua roupa, do contato de substncias que podem respingar sobre voc, causando
queimaduras, como as substncias corrosivas, manchas na sua roupa, como os corantes,
etc;
indispensvel o seu roteiro para acompanhar as aulas prticas, bem
como a leitura da prtica com antecedncia, para obter um melhor aproveitamento das
aulas;
Procure conhecer os reagentes qumicos usados no laboratrio, isso
evitar acidentes. Assim, antes de trabalhar com algum reagente que voc no conhea,
procure ler seu rtulo ou tire dvidas com o professor, ou consulte livros especializados,
como o Index Merck, que uma enciclopdia dos reagentes qumicos;
Siga sempre as instrues do roteiro e do professor, poupa tempo e
material e mais seguro;
Procure conhecer o nome e a funo do material permanente (vidraria e
equipamentos) em uso no laboratrio;
Mantenha sua bancada sempre limpa e no final da prtica descarte o
material perecvel. No jogue resduos slidos nas pias. Os lquidos usados nos
experimentos devem ser despejados na pia com a torneira aberta, bem prximo ao ralo.
Isso facilita a diluio e escoamento, evitando assim o risco de corroso dos canos;
Prximo a chamas, nunca abra nem deixe frascos contendo substncias
inflamveis (ter, acetona, lcool clorofrmio, etc). substncias inflamveis devem ser
aquecidas em banho-maria ou chapa eltrica. Nunca as exponha a chama direta;
Nunca leve as mos boca ou aos olhos quando estiver manuseando
produtos qumicos;
Evite o contato de qualquer substncia com a pele, seja particularmente
cuidadoso quando manusear substncias corrosivas, como cidos e bases concentrados;
Evite encostar-se em pias e bancadas, pois resduos de lquidos
corrosivos podem causar danos pele e vestimenta;
No se deve usar lentes de contato no laboratrio, pois se alguma
substncia qumica respingar no seu olho, a possibilidade da leso causada ser

aumentada, j que se ter dificuldade em manter o olho aberto para que seja feita sua
limpeza;
Rotule imediatamente qualquer reagente ou soluo preparada, isso evita
dvidas ou desperdcios na hora de realizar os experimentos;
Nunca retorne aos frascos restos da soluo que deles foram retirados ,
pois voc pode contaminar o reagente original;
Antes de usar uma pipeta, certifique-se de que ela esteja limpa;
No use a mesma pipeta para pipetar solues diferentes, isso evita a
contaminao dos reagentes;
O uso de pipetas absolutamente individual. Aps o uso, elas devem ser
depositadas com o bocal virado para baixo nas provetas (contendo uma soluo
detergente), distribudas ao longo das bancadas;
Nunca cheire diretamente qualquer frasco, diversos reagentes do laboratrio
so txicos ou nocivos, muitos podendo mesmo causar srios danos as mucosas nasal,
ocular e oral. Muitos compostos em uso no laboratrio podem comprometer o sistema
respiratrio;
Antes de retirar uma soluo de um frasco, agite-o suavemente para
homogeneizar o contedo;
A tampa do frasco no deve ser colocada sobre a bancada, pois poder ser
contaminada com alguma substncia que tenha respingado sobre ela. Segure-a numa das
mos e recoloque-a no frasco imediatamente aps a retirada do material;
Tendo qualquer dvida, solicite ao professor os devidos esclarecimentos;
Acostume-se a ter apreo pelas coisas pblicas, pois elas so um
patrimnio da comunidade;
Finalmente lembre-se de que o laboratrio um lugar em que se desenvolvem
trabalhos srios e no um ambiente para brincadeiras ou bate-papos . Tenha conscincia
desse comportamento no s para o laboratrio de Bioqumica, mas em qualquer
laboratrio que voc venha a freqentar durante seu curso universitrio e carreira
profissional.
2.1 Socorros de emergncia
Em qualquer acidente no laboratrio, identifique a causa e procure
imediatamente assistncia mdica.
a) Substncias qumicas nos olhos:
Soluo alcalina (bsica): lavar imediatamente com bastante gua e depois com
soluo saturada de cido brico 2% ou de cido pcrico 1%.
Soluo cida: lavar abundantemente com gua e depois com uma soluo de
cido brico 2%. O cido brico usado em queimaduras por causa de suas aes
bactericida e fungicida.
b) Queimaduras:
Pelo calor: tratar a queimadura com lcool ou com soluo de cido pcrico 1%.
Por cidos: lavar rapidamente com uma soluo de bicarbonato de sdio 5% e
depois com gua.

Por bases: lavar rapidamente com uma soluo de cido actico 5% ou cido
brico 2% ( gua boricada) e depois com gua.
Estas regras de segurana no devem ser vistas como um manual de proibies,
mas como orientaes que devem ser observadas para um melhor desempenho do aluno
no laboratrio.
3. Vidraria de laboratrio
de fundamenta importncia para quem trabalha em laboratrio distinguir e
usar convenientemente cada vidraria. A vidraria de laboratrio pode ser usada para
armazenar material slido ou lquido, preparar solues, fazer reaes, medir lquidos,
etc.
Antes de passarmos ao conhecimento dos recipientes de vidro do laboratrio,
necessrio conhecer o significado de trs termos freqentemente aplicados a eles, quais
sejam, calibrado, volumtrico e graduado.

Calibrado um termo que indica a capacidade mxima de volume que


uma vidraria capaz de medir.

Volumtrico refere-se a capacidade da vidraria de fazer medidas de


volumes exatas. Pipetas volumtricas e balo volumtrico so exemplos de recipientes
volumtricos.

Graduado indica a marcao da frao de volume ao longo da vidraria.


Pipetas graduadas, provetas, buretas, beckers e erlenmeyers so exemplos de vidraria
graduada.
3.1 Os recipientes mais comumente usados no laboratrio so:
Becker - copo de vidro graduado ou no, de vrios tamanhos. O becker tem
funes diversas como preparar solues, pesar substncias slidas, etc. O becker no
uma vidraria de medida exata, por isso no deve ser usado para fazer medidas precisas
de volume.
Balo volumtrico - vidraria volumtrica, possui a forma de uma pra, um fundo
chato, um gargalo longo e provido de uma tampa de vidro esmerilhada ou de teflon. O
gargalo apresenta um trao fino gravado na sua parte superior, que indica at onde o
nvel do lquido deve ser elevado para completar o volume da soluo. usado tanto na
preparao de solues de concentrao conhecida como na diluio de solues j
preparadas.
Erlenmeyer - frasco de vidro de forma cnica, com gargalo, graduado ou no.
usado em titulaes, agitao e aquecimento de lquidos; a sua forma evita respingos.
Pipeta - tubo de vidro graduado de dimetro reduzido e tamanhos variados, com
bico e bocal. utilizada para medir e transferir pequenos volumes de lquidos, ou seja,
pipetar.
Proveta - cilindro de vidro graduado, com p. encontrada em tamanhos
diversos e serve para medidas exatas de lquidos.

Tubo de ensaio - tubo de vidro de tamanhos variados, fundo redondo ou chato.


Alguns possuem tampa rosqueada. utilizado para fazer reaes em pequena escala,
ensaios biolgicos e cultura de microrganismos.
Kitassato ou kitazato - frasco cnico de vidro, com paredes espessadas e gargalo
com sada lateral. usado em filtrao a vcuo.
Vidro de relgio - tipo de "pires" cncavo, de vidro, de diversos tamanhos.
usado para pesar substncias, receber pequenos organismos e rgos.
Frasco estoque - frasco de vidro ou de plstico, com tampa esmerilhada ou no.
Serve para guardar substncias qumicas e solues; pode ser claro ou escuro ( este
ltimo adequado para as substncias e solues fotorreativas).
Funil de vidro ou de plstico - Serve para filtraes simples e transferir lquidos
de um recipiente para outro.
Basto de vidro - haste de vidro usada para agitar solues e auxiliar na
transferncia de lquidos de um recipiente para outro.
Placa de Petri - tipo de prato, de vidro ou de plstico transparente que encaixa
com outro um pouco maior. usada para cultivar microrganismos e em preparaes
histolgicas.
Funil de separao - Utilizada para separar lquidos no miscveis.
Gral e pistilo - Recipiente e macerador de porcelana. Servem para pulverizar ou
macerar slidos e preparar pastas.
Bureta - Tubo de vidro graduado provido de uma torneira para escoamento
controlado do lquido. Serve para medir lquidos com preciso e usado em titulaes.

4. Classificao dos reagentes qumicos quanto ao risco que oferecem no


manuseio
Corrosivos - substncias que em contato com os materiais de tubulaes,
equipamentos e com o tecido vivo (pele, mucosas) exercem uma ao destrutiva.
Precauo: ao manipular reagentes corrosivos deve-se evitar o respingo deles em sua
vestimenta, pele e olhos. Os reagentes corrosivos so representados por um smbolo de
um cido ativo. Exemplos: Hidrxido de sdio, cido fosfrico, cido sulfrico, cido
clordrico.
Inflamveis - substncias que em temperatura ambiente, podem entrar e
combusto espontaneamente em contato com o ar. Em geral emitem gases e vapores.
Precauo: ao trabalhar com esse tipo de substncia deve-se evitar contato com materias
ignitivos (ar, gua). As substncias Inflamveis so representadas por uma chama ou
letra F. Exemplos: Hexano (solvente de extrao), etanol, acetona, etc.

Explosivos - substncias muito sensveis ao fogo, ao calor e frico (choques,


atritos). Ao trabalhar com esses reagentes deve-se evitar batida, empurro, frico,
fasca e calor Exemplos: nitroglicerina metano, propano, butano, etc.
Comburente so as substncias que podem acender ou facilitar a combusto,
impedindo o combate ao fogo. Ao manipular esses reagentes deve-se evitar o contato
deles com materiais combustveis. Exemplos: oxignio, nitrato de potssio, perxido de
hidrognio, etc.
Irritantes substncias no corrosivas que, por contato imediato, prolongado ou
repetido com a pele ou com as mucosas, podem provocar uma reao inflamatria.
Precauo: Os gases no devem ser inalados, quanto aos lquidos deve-se evitar
respingos dessas substncias com a pele e olhos. As substncias irritantes so
representadas por uma cruz de Santo Andr ou pelas letras X i, Exemplos: Cloreto de
clcio, carbonato de sdio, formol, etc.
Nocivo - substncias que por inalao, ingesto ou penetrao atravs da pele,
podem produzir doenas. Precauo: deve ser evitado o contato dessas substncias com
o corpo humano, assim como sua inalao. As substncias nocivas so representadas
por uma cruz de Santo Andr ou pelas letras Xn. Precauo: Deve-se evitar qualquer
contato dessas substncias com o corpo humano. Exemplos: Clorofrmio, etanal,
diclorometano, cloreto de potssio, etc.
Txico - so aquelas substncias qumicas que, em determinadas concentraes
podem causar danos graves sade, podendo inclusive levar uma pessoa morte.
Precauo: Deve-se evitar qualquer contato dessas substncias com o corpo humano. A
representao por pictograma de uma caveira sobre tbias cruzadas ou pela letra T.
Ex. Metanol, cloreto de brio, monxido de carbono, etc.
Perigosa para o ambiente so os reagentes que liberados no meio ambiente,
podem provocar danos a curto ou longo prazo. Precauo: devido ao seu risco em
potencial, no deve ser liberado em encanamentos, no solo ou no ambiente. Tratamentos
especiais devem ser tomados. A representao por pictograma uma cena mostrando
um ambiente degradado em que se v peixe e rvore mortos. A letra N representa esse
risco Exemplos de reagentes que oferecem riscos ao ambiente benzol, cianureto de
potssio, o inseticida lindan (hexaclorociclohexano), etc.

4.1 Smbolos de segurana utilizados em reagentes de laboratrio


A identificao do grau de risco de um reagente deve ser feita tanto por seus
nomes como pelos smbolos, como descrito acima, e ambos descritos em etiquetas ou
rtulos dos reagentes. Os smbolos de risco so pictogramas representadas em forma
quadrada, impressos em preto e fundo laranja-amarelo, utilizados em rtulos ou
informaes de produtos qumicos. Eles servem para lembrar o risco do manuseio do
produto, representando nos pictogramas os primeiros sintomas com o contato com a
substncia.

Tabela 1 representao com pictogramas e letras dos riscos de reagentes de


laboratrio
Risco

Pictograma

Letra

Corrosivo

Inflamvel

Txico

Irritante

Xi

Nocivo

Xn

Explosivos

Comburentes

Perigosa
para o ambiente

(1)

(3)

(2)

(4)

(6)
(5)
(7)

(9)

(8)

(10)

(13)

(12)
(11)

(14)
(15)

Figura 1 Vidraria comum no laboratrio de Bioqumica. 1- Grau e pistilo; 2Pregador ou pina de madeira; 3- Balo de fundo chato; 4- Balo volumtrico; 5Becker; 6- Bureta; 7- Erlenmeyer; 8- Suporte para tubos, bancada ou grade; 9- Proveta;
10- Tubo de ensaio; 11- Funil de Buchner;12- Funil de vidro; 13- Pisseta; 14- Vidro de
relgio; 15- Suporte.

2a Prtica
Uso da pipeta e medidas de volume usadas em bioqumica
1. Objetivos:

Familiarizar o aluno com os diversos tipos de pipetas usadas no


laboratrio;
Diferenciar pipetas graduadas ao dcimo de pipetas graduadas ao
centsimo;
Utilizar a tcnica correta no uso de pipetas;
Conhecer as medidas de volume utilizadas no laboratrio em
Bioqumica.

2. Fundamentao terica:
Uma das tcnicas mais comumente utilizadas nos laboratrios, a de pipetar
lquidos, ou seja, fazer transferncias quantitativas de lquidos de um recipiente para
outro, utilizando a pipeta. Sendo indispensvel o domnio dessa tcnica no laboratrio,
importante conhecer seus princpios, para um melhor desempenho das atividades
laboratoriais.
As pipetas so tubos de vidro com as extremidades afiladas, em que se recolhe,
por suco, um lquido, para medir-lhe com exatido o volume. Se a transferncia de
um volume especfico e acurado necessria, algum tipo de pipeta calibrada deve ser
usada. As pipetas calibradas so de dois tipos a saber, volumtrica e graduada.
3. Pipetas volumtricas. So tubos de vidro expandido cilindricamente na parte
central. Elas no so graduadas e trazem a marca de calibrao gravada na sua parte
superior, acima do bulbo (s vezes essa marca vem gravada no bulbo). So utilizadas
para transferncia de volumes especficos, em ensaios em que se necessitam de medidas
precisas de volumes. Essas pipetas podem transferir volumes em mililitros de: 1, 2 , 3,
4, 5, 10, 15, 20, 25, 50 e 100 mL. Para usar essa pipeta, deve-se introduzi-la no
recipiente que contm o lquido a ser transferido. Faz-se a suco com a boca ou com
um dispositivo de segurana ( pra ou bulbo de suco), a depender da substncia
que se vai pipetar, preenchendo-a com o lquido at 2 ou 3 cm acima da marca
0(zero), gravada na extremidade superior da pipeta. Deixe o lquido em excesso
escorrer at o menisco chegar a essa marca. Prenda a extremidade superior da pipeta
com seu dedo indicador para o lquido no escoar. Seque a ponta da pipeta com um
pedao de papel limpo (leno de papel), leve-a para o recipiente em que se deseja
transferir o lquido. Para deixar o lquido escorrer basta afrouxar o dedo indicador que
obstrui a extremidade superior da pipeta. Toque a ponta da pipeta no interior do
recipiente, para que a ltima gota escorra. Algum lquido pode ficar ainda na ponta da
pipeta, mas no necessrio sopr-la, pois a maioria das pipetas volumtricas vem
calibrada como TD (to deliver), que significa que o volume transferido j vem corrigido
para essa quantidade que resta na pipeta. O tempo de escoamento do lquido de 5 a 10
segundos.
4. Pipetas graduadas. So tubos cilndricos com uma escala numerada por todo o
tubo, de cima a baixo, at a sua capacidade mxima.. Podem ser tambm usadas para

transferir fraes de seu volume total. As pipetas graduadas so de dois tipos: Pipeta de
Mohr e pipeta sorolgica.
4.1 As pipetas de Mohr so encontradas de duas formas a saber, as de ponta
longa e as de ponta curtas. As de pontas longas so teis em transferncia de volumes
de um frasco de abertura estreita para outro de igual forma. Todas as pipetas de Mohr
so TD e tm capacidade para transferir lquidos de: (0,1-10,0mL). Elas podem ser
graduadas ao dcimo ( as subdivises so 0,1) ou ao centsimo ( as subdivises so
0,01). A escolha do tamanho da pipeta fundamental. Por exemplo, no tente pipetar
0,2 mL com uma pipeta de 5 ou 10 mL graduada ao dcimo.
Para pipetar volumes entre 0 e 1mL, deve-se usar pipetas de 1mL graduada ao
centsimo.
Para pipetar volumes entre 1e 2 mL, deve-se usar pipetas de 2 mL graduada ao
centsimo.
Para pipetar volumes entre 2 e 5 mL, deve-se usar pipetas de 5 mL graduada ao
dcimo.
Para pipetar volumes entre 5 e 10 mL, deve-se usar pipetas de 10 mL graduada
ao dcimo.
O lquido no interior da pipeta forma menisco. A leitura deve ser feita na parte
inferior do menisco e na altura dos olhos.(ver figura )
O uso da pipeta de Mohr idntico ao da pipeta volumtrica. Para preench-la
com lquido, deve-se introduzi-la no recipiente que contm o lquido a ser transferido.
Faz-se a suco com a boca ou com um dispositivo de segurana ( pra), a depender da
substncia que se vai pipetar, preenchendo-a com o lquido at 2 ou 3 cm acima da
marca 0 (zero) gravada na extremidade superior da pipeta. Deixe o lquido em
excesso escorrer at o menisco chegar a essa marca. Prenda a extremidade superior da
pipeta com seu dedo indicador para o lquido no escoar. Seque a ponta da pipeta com
um pedao de papel limpo (leno de papel), leve-a para o recipiente em que se deseja
transferir o lquido. Para deixar o lquido escorrer basta afrouxar o dedo indicador que
obstrui a extremidade superior da pipeta. No preencha a pipeta de forma que a soluo
medida ultrapasse a ltima marca graduada na parte inferior da pipeta. Para que a ltima
gota escorra, no necessrio soprar. Toque a ponta da pipeta no interior do recipiente.
4.2 Pipetas sorolgicas. so graduadas at a ponta da pipeta. So encontradas na
forma TD, que no precisam ser sopradas no final da titulao e na forma TC, calibrada
para ser soprada no final da pipetagem. Para preench-la com o lquido deve-se usar o
mesmo procedimento usado na pipeta de Mohr. Se a pipeta no for TD, deve-se deixar
escoar o lquido que restou na pipeta e soprar aps 15 a 20 segundos do lquido ter
escorrido.
5 Pipetas Pasteur. Utilizadas para transferncia no quantitativa de uma pequena
quantidade de volume de lquido( 1 a 10mL) de um recipiente para outro. As pipetas
Pasteur so disponveis em dois tamanhos ( 15 e 23cm). Elas transferem cerca de 2
mL, sendo conveniente para transferncia de quantidades no medidas de um tubo de
ensaio para outro. Como as pipetas Pasteur tm uma ponta de vidro muito longa e fina,
conveniente usar uma proteo de borracha nela para evitar que ela se quebre. Deve-se
usar tambm uma pra no bocal para fazer a suco e o escoamento do lquido.
6. Pipetas automticas. Utilizadas em transferncias quantitativas de lquidos,
principalmente transferncias idnticas de pequenos volumes. Essa pipeta permite
transferncias acuradas, precisas e rpidas de volumes de 1 a 10.000l. As pipetas
automticas podem ser de dois tipos:
6.1 Volume fixo. Calibradas para medir um volume determinado. Por exemplo
um pipeta de 10l s ir medir 10l.

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6.2 Volume ajustvel Calibradas para medir volumes variveis, dentro de uma
faixa pr-determinada. Por exemplo uma pipeta de 200l usada para se medir volumes
de 20l a 200l.
7. Uso da pipeta automtica
Para pipetar lquidos com uma pipeta automtica necessrio acoplar uma
ponteira de plstico (tip) na parte inferior da pipeta e pressionar o mbolo localizado na
parte superior da pipeta quando ela estiver imersa no recipiente contendo o lquido que
se vai pipetar. O mbolo deve ser apertado de uma s vez para a suco do lquido.
Durante a suco solta-se lentamente o boto. Para transferir o lquido pipetado da
ponteira para um tubo de ensaio, por exemplo, deve-se pressionar o mbolo mais uma
vez, at sentir que ele chega a um obstculo. Dessa forma o lquido vai escoar da
ponteira para o tubo de ensaio.
8. Medidas de segurana no uso de pipetas
O uso do bulbo de suco (ou pra) no necessrio para pipetar substncias
inofensivas sade, como por exemplo, uma soluo de NaCl 0,15M. Nesses casos, o
lquido pode ser aspirado com a boca. Entretanto, como precauo e por uma questo de
hbito, deve-se incentivar o uso do bulbo de suco nas prticas de laboratrio.
H situaes em que o uso de um dispositivo de segurana indispensvel
quando for usar a pipeta, por isso deve se usar uma pra ou uma pipeta automtica
quando estiver trabalhando com as seguintes substncias:
1. Lquidos biolgicos que oferecem riscos de contaminao como por exemplo,
o sangue de animais e urina, quando ingeridos.
2. cidos e bases fortes, pois so corrosivos, e quando aspirados pela boca pode
causar leses no trato digestivo, se ingeridos.
Exemplo: H2SO4 98% , HCl 38%, NaOH, KOH, etc.
3. Metais pesados, como o chumbo, mercrio, entre outros, podem causar
intoxicao, quando ingeridos. Exemplo : acetato de chumbo.
4. Radioistopos. Eles podem causar radiaes ionizantes em clulas humanas.
Exemplo: Fsforo 32 (32P).
Tabela 1: Unidades de volume
Unidades de
volume
Litro
Decilitro
Mililitro
Microlitro

Abreviatura
L
dL
mL
L

Fator de multiplicao
( relativo ao litro)
1
10-1
10-3
10-6

Para converter mililitro em microlitro, multiplica-se o valor do mililitro por


1000.
Exemplo: 2 mL correspondem a 2000l ( 2 x 1000 = 2000).
Para converter microlitro em mililitro, dividi-se o valor do microlitro por 1000.
Exemplo: 2000l correspondem a 2 mL ( 2000 /1000 = 2).

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3a Prtica
Preparo de solues e diluies
1. Objetivos:

Expressar corretamente a concentrao das solues;


Efetuar clculos de normalidade, molaridade e porcentagem e diluies;
Utilizar a tcnica e a vidraria corretas no preparo de solues e de
diluies.

2. Solues
As solues so, provavelmente, o mais comum dos sistemas qumicos
encontrados em laboratrios. As solues so definidas como misturas homogneas de
duas ou mais substncias puras, em geral, o componente de uma soluo presente em
maior quantidade chamado de solvente e o que est em menor quantidade, de soluto.
Entretanto, esses termos podem ser trocados quando for necessrio. Este o caso das
solues de slidos em lquidos, em que o lquido tomado, comumente, como solvente
e o slido como soluto, independente das propores relativas de cada um. Assim,
podemos ter solues de sacarose em gua a 10% e 60%, e em ambos os casos, a gua
considerada como solvente e a sacarose como soluto.
3 Maneiras de expressar a concentrao das solues
A concentrao de uma soluo pode ser expressa em funo da quantidade de
soluto num volume definido de soluo, ou como a quantidade de soluto numa massa
definida de soluo ou solvente. As convenes mais comuns so definidas abaixo:
3.1 Molaridade (M) o nmero de moles de soluto por litro de soluo, ou seja,
o nmero de moles igual ao peso (em grama) do soluto/ PM. O Peso Molecular(PM)
a soma de todos os pesos atmicos dos tomos da molcula.
Concentraes molares so normalmente expressas entre colchetes, por
exemplo, a concentrao molar do on hidrognio representada dessa forma, [H +].
Solues diludas so representadas em termos de milimolaridade,
micromolaridade, nanomolaridade, picomolaridade, etc.
1 mmol = 10-3 moles
1 mol = 10-6 moles
1 nmol = 10-9 moles
1 pmol = 10-12 moles
Portanto:
1 mM = 10-3 moles = 1mmol/litro = 1mol/mL
1 M = 10-6 moles = 1Mol/litro = 1nmol/mL
1 nM = 10-9 moles = 1nmol/litro = 1pmol/mL
3.2 Normalidade(N) o nmero de equivalentes do soluto por litro de soluo.
Para calcular a normalidade precisamos conhecer o peso do soluto dissolvido e seu

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equivalente-grama, ou seja, seu nmero de equivalente. O nmero de equivalentes


igual ao peso do soluto(em grama)/ Eq.g.
Equivalente-grama (Eq.g ) de um cido o peso molecular do mesmo que
contm um tomo-grama de hidrognio substituvel. Por exemplo, o Eq.g do HCl
igual ao mol (mol PM expresso em gramas) e do H2SO4 igual ao mol/2.
Eq.g = PM
n
em que n o nmero de H+ ou OH- substituveis por molcula, isso para cidos
ou bases, respectivamente, Eq.g, o equivalente grama e PM, o peso molecular
A molaridade e a normalidade so relacionadas por; N = n x M. Em que n o
nmero de H+ ou OH- substituveis por molcula, isso para cidos ou bases,
respectivamente, N, a normalidade e M, a molaridade.
Por exemplo, uma soluo 0,01M de H2SO4 corresponde a uma soluo 0,02N.
3.3 Porcentagem peso/volume (% p/v) o peso em grama de um soluto por 100
mL de soluo. Exemplo:
Uma soluo de NaCl 0,9% contem 0,9 g de NaCl em 100 da soluo
3.4 Porcentagem peso/peso (% p/p) o peso em grama de um soluto por 100g de
soluo. Exemplo: Os cidos comerciais como HCl e H2SO4 esto disponveis com
concentrao em peso/peso.
Uma soluo de HCl 37% contem 37g de HCl em 100g da soluo.
3.5 Porcentagem volume/volume (% v/v) o volume em mililitro (mL) do soluto
em 100 mL de soluo. Exemplo:
Uma soluo hidroalcolica 70% contm 70 mL de lcool etlico absoluto
(100%) em 30 mL de gua destilada.
Tabela 2: Unidades de massa
Unidades de massa

Abreviatura

Quilograma
Grama

Kg
g

Fator de multiplicao
( relativo ao grama)
103
1

Miligrama
Micrograma
Nanograma
Picograma

mg
g
ng
pg

10-3
10-6
10-9
10-12

Para converter miligrama em micrograma, multiplica-se o valor do miligrama


por 1000.
Exemplo: 2 mg correspondem a 2000g ( 2 x 1000 = 2000).
Para converter micrograma em miligrama dividi-se o valor de micrograma por
1000.
Exemplo: 2000g correspondem a 2mg( 2000 /1000 = 2).

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4. Diluio
Diluio uma tcnica utilizada para preparar solues, em que se adiciona um
diluente a uma soluo estoque, para diminuir a sua concentrao. Soluo estoque
uma soluo com concentrao conhecida e a partir dela pode-se preparar outras.
4.1 Diluio de solues com concentrao expressa em molaridade
Para diluir solues cujas concentraes so expressas em molaridade, deve-se
usar umas das seguintes frmulas abaixo:
M1 x V1 = M2 x V2
Sendo:
M1 a molaridade da soluo estoque
V1 o volume que deve ser retirado da soluo estoque
M2 a molaridade da soluo que se quer preparar
V2 o volume da soluo que se quer preparar
4.2 Diluio de solues com concentrao expressa em normalidade
N1 x V1 = N2 x V2
Sendo:
N1 a normalidade da soluo estoque
V1 o volume que deve ser retirado da soluo estoque
N2 a normalidade da soluo que se quer preparar
V2 o volume da soluo que se quer preparar
4.3Diluio direta
Podemos obter diretamente diluies altas de uma soluo com concentrao
conhecida sem que seja necessrio fazer diluies seriadas ou sucessivas, como por
exemplo diluir uma soluo 100 vezes. Para isto basta pipetar 10l da soluo desejada
em 990l de gua.

5. Exerccios de preparo de solues


1) Que massa de NaCl deve ser pesada para preparar 500 mL de uma soluo de
NaCl 1,5M? PM NaCl = 58,45
2) Que volume da soluo estoque de HCl 37% (p/p) deve ser retirado para
preparar 500 mL de uma soluo de HCl 2,5N ?
Dados PM HCl =36,6, densidade (d) = 1,19g/mL
3) Quantos mililitros de HNO3 5M so necessrios para preparar 200 mL de uma
souo de HNO3 1,5M? Expresse os seus resultados tambm em normalidade.

14

4) O cido Sulfrico (H2SO4) encerra 98% de H2SO4 em peso e tem uma


densidade de 1,84g/mL.
a) Calcular a molaridade do cido concentrado.
b) Descrever a preparao de 400 mL de H2SO4 3 M
c) Descrever a preparao de 300 mL de H2SO4 1,5N
5) Que massa de glicina deve ser pesada para preparar 30 mL de uma soluo de
glicina 0,13 mM? PM da glicina: 75,07.
6) Que massa de KOH deve ser pesada para preparar 600 mL de uma soluo de
KOH 2,5N? PM KOH = 56,105.
7) Que massa de NaOH deve ser pesada para ser adicionada a 12 mL soluo
estoque de NaOH. 100mM?
8) Que volume da soluo de MgOH2 10N deve ser retirado para preparar 900
mL de uma soluo de MgOH2 0,3N?
9) Que volume da soluo de HCl 5N deve ser retirado para preparar 500 mL de
uma soluo de HCl 0,7N?
10) Que massa de NaCl deve ser pesada para preparar 1L de uma soluo de
NaCl 0,9%. (p/v)?
11) Que volume de metanol absoluto (100%) deve ser retirado, para preparar
70mL de uma soluo hidroalcolica a 70% (v/v)?
12) Que volume de etanol absoluto (100%) deve ser retirado, para preparar 250
mL de uma soluo hidroalcolica a 40% (v/v)?
13) Que massa de cido fosfrico deve ser pesada para preparar 100 mL de uma
soluo de cido fosfrico 2% (p/v)?
14) Descreva a diluio de 45 vezes de uma soluo do corante cristal de violeta
em 300 mL de gua destilada.
15) Qual o volume da soluo de cido actico 1% deve ser usado para se
preparar uma soluo 10 vezes mais diluda num volume final de 100 mL.
16) Converter em Normalidade as seguintes solues:
a) NaOH 0,5M

b) HCl 2 M

15

c)H2SO4 5M

4a Prtica
A Qumica de pH e tampes
1. O produto inico da gua e pH
O qumico dinamarqus S. L. P. Sorenson props uma forma de representar a
concentrao de H+ de solues. Ele definiu o logaritmo negativo da concentrao de
hidrognio como pH.
(pH = - log[H+])

(1)

Uma soluo de HCl 0,01M, apresenta um valor de pH:


pH = -log [10-2]
(2)
pH = 2
(3)
A equao 1 no pode ser aplicada na determinao do pH de uma soluo
0,001M de NaOH, base forte que apresenta a seguinte rao de dissociao:
NaOH Na+ + OH

(4)

No entanto, a concentrao do on hidroxila (OH -) pode ser relacionada com a de


H , atravs da equao de dissociao da gua:
+

H2O H+ + OH-

(5)

A constante de equilbrio para essa reao :


+

Keq = [H ] [OH ]
[H2O]
+

[H ] [OH ]
7
55,5M
Nas equaes (6 e 7) o colchete significa concentrao molar. Como a
concentrao molar da gua 55,5M, ela pode ser substituda nessa equao:
Multiplicando os termos da equao 7 teremos:
55,5M x Keq = [H+] [OH-]
(8)
A constante de equilbrio da gua conhecida, sendo determinada a partir de
medidas da sua condutividade eltrica, dada pelos ons H+ e OH-. Portanto, a Keq = 1
x 10-18. Substituindo esse valor na equao 8 teremos:
Keq =

55,5M x 1 x 10-18 = [H+] [OH-]


Multiplicando os termos obteremos:
99,9 x 10-16 = [H+] [OH-]

(9)

(10)

Aproximando o resultado obteremos::


0,999 x 10-14 = [H+] [OH-] ou 1,0 x 10-14 = [H+] [OH-]

16

(11)

Esse o valor que corresponde ao produto inico da gua, o Kw. Como o


produto de [H+] [OH-] 1,0 x 10-14 , a concentrao de cada um deles encontrada
elevando-se a concentrao de [H+] ou [OH-] ao quadrado , conforme descreve a
equao 13 abaixo:
[H+] [OH-] = Kw = 1 x 10-14
(12)
+ 2
-14
[H ] =1,0 x 10
Portanto:
(13)
[H+] = 1,0 x 10-14 = 1,0 x 10-7
(14)
[OH-] = 1,0 x 10-14 = 1,0 x 10-7
(15)
Como esses nmeros so de difcil manuseio, Sorenseon estabeleceu a escala do
pH, que uma forma mais conveniente de se lidar com a concentrao de H + em
lquidos, ento:
pH = log 1,0 x 10-7
(16)
pH = 7,0
(17)
A partir do valor do Kw podemos calcular agora o valor do pH da soluo
NaOH 0,01M, uma vez que [H+] [OH-] = Kw
[H+] [OH-] = 1 x 10-14
+
Kw
[H ] =
substituindo os termos conhecidos teremos:
19
[OH-]
+

[H ] =

(18)
(21)

1 x 10-14
1 x 10-2

20

pH = 12

2. A Escala do pH
Solues que apresentam pH = 7,0 so neutras, as que apresentam pH abaixo de
7,0 so cidas e as que tm pH acima de 7,0 so alcalinas ou bsicas. A figura abaixo
descreve a escala de pH, destacando o valor de pH de algumas solues.

17

3. Conceito de cidos e Bases


Muitas das reaes qumicas que ocorrem nas clulas so influenciadas pelos
ons H+ e OH-, oriundos da hidrlise da molcula de gua. Variaes nas concentraes
celulares desses ons podem alterar diversos processos biolgicos, como a desnaturao
de protenas e cidos nuclicos. Os organismos multicelulares desenvolveram
estratgias qumicas sofisticadas para evitar essas alteraes, atravs da ao dos
tampes, que so sistemas qumicos que mantm o valor do pH constante. Antes de
entendermos a ao dessas substncias, necessrio compreender o conceito de cidos e
bases definidos por Bronsted e Lowry. Um cido um doador de H+ enquanto a base
um aceptor de H+. Portanto:
1) AH A- + H+
2) A- + H+ AH
Na reao 1 AH o cido, pois se dissocia liberando + H + e na reao 2 A- a
base, pois capta H+ , formando AH. As reaes 1 e 2 podem ser combinadas, dando uma
terceira reao:
3) AH A- + H+, AH e A- formam o par cido base conjugado.
Utilizando agora a dissociao de uma substncia qumica, o cido clordrico
(HCl), temos: HCl H+ + Cl- , em que o H+ o cido e o on cloreto (Cl-) a base. De
acordo com o grau de dissociao em seus ons, os cidos e bases so classificados em
fortes e fracos. Os cidos e bases fracas so os que parcialmente dissociam em seus
ons, enquanto os fortes esto completamente dissociados em seus ons, quando em
soluo. O HCl se dissocia completamente em H+ + Cl- , portanto, um cido forte. O
hidrxido de sdio (NaOH) uma base forte porque dissociado totalmente em seus
ons: Na+ e OH. A tabela 1 abaixo apresenta alguns exemplos dos cidos e bases fracos.
Tabela 1: cidos e bases fracos
cidos
CH3COOH (cido actico)
H2CO- 3 (cido carbnico)
NH4+ (on amnio)

Bases conjugadas
CH3COO -(on acetato)
HCO- 3 (on bicarbonato)
NH3 (amnia)

4. Tampes e ao tamponante
Os fluidos celulares apresentam um pH constante e especfico, geralmente
prximo de 7,4. Nos organismos multicelulares, o pH dos lquidos extracelulares
(sangue, por exemplo) tambm estreitamente regulado atravs da ao dos tampes
biolgicos.
Tampes so misturas de cidos fracos e suas bases conjugadas, que evitam
variaes bruscas de pH de em solues, quando so adicionadas quantidades
relativamente pequenas de cido (H+) ou base (OH-). Por exemplo, quando se adiciona 1
mL de uma soluo de HCl 0,1N a 99mL de gua destilada o pH cai abruptamente Se
fizermos um outro experimento, adicionando 1mL de NaOH 0,1N a 99mL de gua
destilada, observaremos que o pH se elevar consideravelmente.
Se experimentarmos agora adicionar 1mL da soluo de HCl 0,1N a 99mL da
soluo tampo de acetato de sdio, que consiste de uma mistura de cido actico e

18

acetato, verificaremos que o pH dessa soluo no se alterar, devido a forma bsica


desse tampo (CH3COO-) captar o on H+, como demonstra o esquema abaixo. Quando
se adicionar 1mL da soluo de NaOH 0,1N a 99mL da soluo tampo de acetato de
sdio, o pH dessa soluo no se alterar, devido a forma cida do tampo (CH 3COOH)
liberar o on H+, que reagir com a hidroxila (OH-), produzindo H2O. Portanto o papel
de um sistema tampo neutralizar as aes de H+ e OH-, conforme o a equao 22 :
-

OH

CH3COOH
cido actico
(cido)

H2O
-

CH3COO
on acetato
(base conjugada)

22

5. Tampes Fisiolgicos O tampo bicarbonato


O sangue apresenta valores de pH em torno de 7,4 rigidamente controlados,
graas a ao de trs sistemas de tampo: o bicarbonato (HCO-3/CO2 -), o fosfato
(H2PO-4/HPO2-4) e o tampo protico hemoglobina. O tampo bicarbonato atua no
lquido extracelular e um dos mais importantes tampes sangneos, j o tampes
fosfato e hemoglobina so intracelulares.
Se o pH sangneo cair para valores em torno de 7, 2, como pode acontecer logo
aps o trmino de uma corrida de 100 metros ou em pessoas que apresenta uma diabetes
no tratada, verifica-se um aumento na concentrao do on H+. Nesse caso o on
bicarbonato (a forma bsica) capta o H+, corrigindo assim a sua variao de
concentrao. O cido carbnico formado dissociado, liberando H 2O. e CO2, que por
sua vez exalado na respirao. Se o pH sangneo atingir valores em torno de 7, 6,
ocorrer um aumento na concentrao do on hidroxila (OH -). Nesse caso o cido
carbnico libera um H+, que reagindo com a hidroxila formar gua, corrigindo assim
a sua variao de concentrao, conforme demonstra a equao 23:
H2O
OH
H2CO3
HCO3
CO2 + H2O
23
cido carbnico
on bicarbonato
(cido)
(base conjugada)
+
H

O tampo bicarbonato nico, por que a forma cida dele eliminada pelos
pulmes na forma do gs carbnico CO2, como tambm a concentrao de CO2 e do on
bicarbonato podem ser reguladas na clula. Esses fatores explicam o fato desse ser o
mais importante tampo sangneo.
6. Determinao potenciomtrica do pH
As medidas mais exatas na determinao do pH so feitas atravs de tcnicas
potenciomtricas, em que se utiliza o pH metro, instrumento que consiste de: um
eletrodo de referncia, um eletrodo de vidro, cujo pH depende da soluo em que ele
est imerso e um sistema para medida de voltagem, que capaz de medir diferenas
potenciais mnimas num circuito de resistncia extremamente elevada.

19

A funo bsica do eletrodo de referncia manter um potencial eltrico


constante contra o qual variaes podem ser medidas. Os dois eletrodos de referncia
mais largamente utilizados so o de calomelano (cloreto mercuroso em contato com
soluo saturada de KCl) e o de prata metlica-cloreto de prata. Esse ltimo o mais
freqentemente utilizado em instrumento. Ele consiste de uma pea de prata metlica
envolvida por cloreto de prata, imersa numa soluo saturada de cloreto de potssio. O
potencial desse sistema derivado da reao :
-

e
24
Ag
Cl
A equao 24 demonstra que o potencial de referncia dependente da
concentrao do on cloreto (Cl-). Para manter sua concentrao constante, em
condies instveis de umidade, uma soluo saturada de cloreto de potssio (KCl)
utilizada. Se a umidade diminuir, pode ocorrer evaporao do eletrodo do vidro ,
acarretando em precipitao do excesso de cloreto; por outro lado, se a umidade se
elevar, ocorrer pequeno aumento no volume da soluo e o cloreto de potssio se
dissolver.
A funo do eletrodo de vidro estabelecer um potencial eltrico que responda a
variaes na atividade do on hidrognio da soluo a ser testada. Ele consiste de um
tubo de vidro de alta resistncia, apresentando na extremidade um bulbo, cujo vidro
delgado e de baixa resistncia. Somente a poro do bulbo detecta variaes de pH. O
tubo preenchido por uma soluo de HCl 0,1N que entra em contato com o eletrodo de
referncia. Quando esse eletrodo imerso em uma soluo de concentrao hidrogenada
(H+) desconhecida, cria-se um potencial entre as solues interna e externa. Como a
voltagem do eletrodo de referncia constante, a diferena de potencial entre os dois
eletrodos diretamente relacionada com a concentrao de ons hidrognio da soluo
desconhecida.

Ag

7. Instrues que devem ser observadas no uso do pH Metro


1. Antes de utilizar o pH metro, lave o eletrodo com gua deionizada e seque-o,
cuidadosamente, com um leno de papel.
2. Ajuste o boto da temperatura para o mesmo valor de temperatura das
solues padres de pH, utilizadas para calibrar o aparelho e da soluo em que se vai
medir o pH.
3. Calibre o aparelho mergulhando o eletrodo na soluo padro de pH 7,0.
Mude a chave do pH metro para a funo pH. Se o valor registrado no for igual ao pH
da soluo padro, gire a chave de ajuste at que seja atingido o pH 7,0. Repita o
mesmo procedimento para calibrar o aparelho com uma soluo de pH 4,0. O eletrodo
deve ser lavado e secado, quando for mergulhado em solues diferentes.
4. Antes de tirar o eletrodo da soluo, o potencimetro deve ser desligado.
5. Lave e seque o eletrodo e em seguida mergulhe-o na soluo em que se vai
medir o pH, girando a chave para a funo de pH. Registre o valor, mude a chave da
funo pH, para o modo Standby". Lave e seque o eletrodo.
6. Aps o uso do aparelho, lave o eletrodo e deixe-o mergulhado num
recipiente contendo gua destilada limpa. A chave do pH deve estar no modo
Standby e em seguida desligue o aparelho.

20

8. Exerccios
1. Dada uma soluo de HNO3 0,002 M, responda as questes a baixo:
a) Qual a concentrao de H+?
b) Qual o pH da soluo-?
4. Calcule o valor de pH de uma soluo de HCl 0,1 M.
5. Qual o pH de uma soluo 0,5 N de HNO3?
7. Usando a equao de Henderson-Hasselbalch (pH = pKa + log [ aceptor H+]/ [doador H+])
calcule o pKa do cido lctico numa soluo pH 4,8 em que a concentrao de cido lctico
0,010M e a de lactato 0,087M.
8. Um tampo contm 0,010 mol de cido lctico (pKa = 3,86) e 0,050 mol de sodium lactato
por L. Calcule o pH deste tampo. Use a equao de Henderson-Hasselbalch
9. Calcular o pH de uma mistura de cido actico e acetato, sabendo que seu pKa = 4,7 , nas
seguintes condies:
a) [acetato] = 0,5 M e [ acido actico]= 5M
b) [acetato] = 0,5 M e [ acido actico]= 1M
10. Por que o pH desejado de uma soluo tampo deve ser o mais prximo possvel do pKa do
acido componente neste tampo? Qual a relao de concentrao da base e do cido de um
tampo quando o pH = pKa?

21

5a Prtica
Cintica Enzimtica
1 - Experimentos cinticos foram realizados com a enzima X que catalisa a transformao de
um nico substrato em produto (SP). A tabela abaixo demonstra a porcentagem de atividade
da enzima em diferentes temperaturas. Calcule graficamente o a temperatura tima e explique o
significado e importncia dessa informao.
Temperatura (oC)
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100

Porcentagem de
atividade (%)
0
10
40
75
98
90
30
20
10
0

2 Utilizando a mesma enzima, que catalisa a converso de um nico substrato (S) em um


nico produto (P), os seguintes resultados foram obtidos em experimentos cinticos, utilizando
diferentes concentraes de substrato e medindo a inibio de uma enzima (E) por um inibidor
(I) em duas diferentes concentraes.
(I)
mM
0
0
0
0

[S]
mM
5
6,67
10
20

v0
(moles prod.min-1.ml-1)
333
400
500
667

5
5
5
5

5
6,67
10
20

250
286
333
400

10
10
10
10

5
6,67
10
20

200
222
250
286

2.1 Usando papel milimetrado, faa o plot (grfico) de Michaelis-Mentem e Lineweaver-Burk


e determine o tipo de inibio observada.
2. 2 Usando os dados disponveis, calcule os valores das seguintes constantes cinticas do
estado estacionrio: Km e Vmax para o substrato na presena e ausncia do inibidor. Calcular as
constantes nos grficos linear e no linear. Comparar o resultado obtido e discutir.

22