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Escola Secundria Dr.

Joaquim Gomes Ferreira Alves


Biologia 12. ano
Atividade Experimental Opero lac

Ala Conceptual
Conceitos:

Ala metodolgica

Concluso: Os resultados foram obtidos como o esperado,

Lactose

exceo do resultado obtido na soluo do matraz A. Este

Opero lac

deveria apresentar uma soluo visivelmente amarelada, o que

-galactosidase

IPTG (isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside)

ONPG (ortho-Nitrophenyl--galactoside)

Tolueno

no

Em que situaes so
produzidas as enzimas
para que ocorra a
degradao da lactose?

Teoria: Metabolismo celular

pode

dever-se

vrios

fatores,

nomeadamente m lavagem do material utilizado e/ou uma m


calibrao das pipetas automticas.
As clulas utilizam glicose para produzir ATP. Neste caso, a
glicose obtida atravs da degradao da lactose. Respondendo
questo central, as enzimas que permitem a degradao da
IPTG, que, como referido anteriormente, funciona como lactose,

A lactose um dissacardeo composto por glicose e galactose.

O opero lac constitudo por genes estruturais, um gene operador,

e em menor quantidade na presena quer de IPTG quer de


glicose. Quando no existe IPTG, estas enzimas no so

um gene promotor. Fora do opero existe ainda um gene regulador.

Isto

lactose so produzidas em maior quantidade na presena de

Princpios:

aconteceu.

produzidas.

A -galactosidase uma enzima que hidrolisa a lactose em glicose e

Se a glicose existe no meio externo, no necessrio sintetiz-

galactose.

la, pelo que no vantajoso produzir as enzimas necessrias

O IPTG um composto sinttico anlogo lactose, que inativa o

degradao da lactose em tanta quantidade.

repressor lac e induz a sntese de -galactosidase.

A ONPG substncia utilizada para a deteo da presena de -

Resultados:

Galactosidase numa soluo. Geralmente, este composto incolor,


mas caso esta ltima esteja presente na soluo designada, ela
hidrolisa a molcula de ONPG em galactose e orto-nitro-fenol.

O tolueno um solvente orgnico. Para garantir que a hidrlise de

Tubo A: Soluo incolor

Tubo B: Soluo ligeiramente amarela

Tubo C: Soluo incolor

ONPG independente da quantidade de -galactosidase, adicionamse algumas gotas de tolueno para tornar as paredes das clulas
presentes nas solues permeveis ONPG.

Material/Procedimento Experimental:
Em anexo.
Biologia

Turma B

Sara Vieira Gonalves (n.28)

Anexo: Material utilizado e procedimento experimental

Procedimento:

Material:

Biologia

Passo 1
1) Transferir 2,5 mL de IPTG para o matraz A.
2) Transferir 2,5 mL de IPTG e 0,25 mL de glicose para
o matraz B.
3) Transferir 2,5 mL de gua para o matraz C.
4) Incubar os trs matrazes durante 20 minutos, a 30C.
Passo 2
Transferir 1 ml de cada matraz para o tubo
correspondente.
Passo 3
Adicionar 3 gotas de tolueno a cada tubo.
Passo 4
1) Adicionar 0,2 mL de soluo de ONPG a cada
tubo.
2) Incubar os trs tubos durante 20 minutos, a 30C.

Trs matrazes, todos eles identificados (A, B e C)


Trs tubos de Eppendorfs, todos eles identificados
(A, B e C)
Conta-gotas
Pipeta graduada
Pompete
Pipeta automtica
Incubadora
Temporizador
1,25 mL de glicose
2,5 mL de gua
2,5 mL + 2,5 mL de IPTG
0,6 mL de ONPG
9 gotas de tolueno

Turma B

Sara Vieira Gonalves (n.28)