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Manual de
Tcnicas Bsicas
para un Laboratorio
de Salud
Publicacin Cientifica N o . 4 3 9
ISBN 92 75 31439 X
Todos los derechos reservados. Ninguna parte de esta publicacin puede ser reproducida, registrada o transmitida en
ninguna forma y por ningn medio electrnico, mecnico, de fotocopia, grabacin u otros, sin permiso previo por
escrito de la Organizacin Panamericana de la Salud.
Edicin original en ingls:
Manual of Basic Technigues for a Health Laboratory
World Health Organization. 1980
ISBN 92 4 154145 8
IV
CONTENIDO
2
3
4
5
I PARTE
PROCEDIMIENTOS GENERALES DE LABORATORIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
[[[
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......
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13
27
29
33
39
42
48
52
56
54
68
71
75
78
85
87
94
98
102
104
II PARTE
A. PARASITOLOGIA
Introduccin
1. Naturaleza de las observaciones. Recoleccin de heces fecales
2. Preparacin de los portaobjetos
3. Tcnica especial para huevos de oxiuros
4. Huevos y larvas de parsitos intestinales
5. Helmintos adultos que se encuentran en las heces fecales
6. Amebas, flagelados y ciliados: formas mviles
7. Amebas, flagelados y ciliados: quistes
8. Eleccin de mtodo de concentracin de parsitos
9. Mtodo de concentracin por el uso de solucin de cloruro sdico (Willis)
10. Mtodo de concentracin por el uso de formaldehido y ter o MIF
11. Mtodo para concentrar larvas de Strongyloides (Harada y Mori)
12. Cmo registrar los resultados de exmenes de heces fecales
13. Envo de heces fecales para la deteccin de parsitos
14. Ensayo qumico para encontrar sangre oculta en las heces fecales
15. Bsqueda de huevos de Schistosoma haematobium en la orina
16. Otros parsitos que se encuentran en la orina
17. Huevos del distoma pulmonar: otros parsitos
18. Trichomonas: examen directo del exudado genitourinario, etc
19. Preparacin de gota gruesa de sangre y aplicacin de la tincin de Field
20. Coloracin de gota gruesa y extensiones sanguneas con tincin de Giemsa
21. Identificacin de parsitos del paludismo
22. Microf (arias sanguneas: examen de preparaciones hmedas; concentracin
23. Microflarias sanguneas: tincin e identificacin
;.
24. Oncocercosis: observacin de microfilarias en la piel
25. Tripanosomas: deteccin en la sangre; concentracin
26. Tripanosomas: examen del lquido de los nodulos linfticos
111
113
116
[ 119
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', 165
" \ 168
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'..'.'.'. 178
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183
186
189
193
196
204
209
215
220
226
v
B. BACTERIOLOGIA
Pgina
Introduccin
27. Preparacin de frotis. Fijacin
28. Tincin de Gram
29. Microorganismos que se observan por examen directo de los frotis
30. Gonococos: examen directo del pus uretral. Sfilis
3 1 . Bacilos de la tuberculosis. Tincin de Ziehl y Neelsen: mtodo caliente
32. Bacilos de la tuberculosis. Tincin de Kinyoun: mtodo fro
33. Lepra: bsqueda de bacilos en nodulos y lesiones de la piel
34. Lepra: bsqueda de bacilos en frotis de exudado nasal
35. Peste: bsqueda de bacilos
36. Envo de muestras de heces fecales
37. Examen directo de muestras obtenidas en la garganta. Envo de las muestras
38. Examen bacteriolgico directo de la orina
39. Muestreo de aguas para exmenes bacteriolgicos
231
232
235
238
243
249
257
259
264
265
268
270
275
279
C. SEROLOGIA
40.
41.
285
288
D. MICOLOGIA
42.
43.
297
300
HIPARTE
A. EXAMEN DE ORINA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
305
307
311
313
316
319
320
323
325
336
339
342
344
345
347 /
C. HEMATOLOGIA
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
Pgina
351
353
360
366
371
375
377
379
386
387
391
397
407
411
414
418
421
423
425
D. QUMICA SANGUNEA
35. Clculo de la glucosa en la sangre y en el LCR: mtodo de la ortotoluidina
36. Clculo de la urea: mtodo de la diacetil monoxima/tiosemicarbacida
429
432
E. TRANSFUSIN DE SANGRE
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
435
437
443
448
453
456
458
463
465
479
vii
Prefacio
Este libro es una versin revisada de un manual de la OMS, Basic techniques for a medical laboratory (1974). por Etienne Lvy-Lambert; las modificaciones ms importantes han sido realizadas por la Srta. M. Cheesbrough y
el Dr. L. M. Prescott. La versin original se someti a pruebas de campo y en
la revisin se utilizaron las observaciones y sugerencias de especialistas de
diversos pases y del personal de la OMS.
El principal propsito de este manual es su uso por los asistentes de
laboratorio de los pases en desarrollo durante su capacitacin y ms adelante,
en su trabajo. Tambin se puede emplear en las tareas habituales de los
laboratorios clnicos o de salud pblica. Al seleccionar las tcnicas se han
tenido en cuenta especialmente el bajo costo, la conf labilidad y la simplicidad
de los mtodos, as como la disponibilidad de recursos de los laboratorios
pequeos.
Las ilustraciones han sido revisadas por Lynne Cullen Dennis y Pierre
Neumann.
La OMS expresa su agradecimiento a todas las personas que han aportado
su ayuda en la preparacin de este manual.
Laboratorios
El propsito principal de este manual es su uso en laboratorios mdicos de pases en desarrollo. Se ha elaborado
para utilizarlo especialmente en laboratorios perifricos establecidos en esos pases, por ejemplo, en los de
tamao reducido o mediano anexos a los hospitales regionales y los dispensarios o centros rurales de salud donde
a menudo el tcnico laboratorista ha de trabajar solo.
Se ha procurado utilizar el lenguaje ms sencillo posible. Sin embargo, cuando ha sido necesario, se han
empleado trminos tcnicos de uso comn.
WPiS,
Tcnicas
En este manual solo se describen procedimientos de
examen directo que se pueden poner en prctica por
medio de un microscopio o algn otro aparato sencillo.
Por ejemplo:
examen de heces fecales en busca de parsitos
examen de sangre en busca de parsitos de la malaria
examen de esputo en busca de bacilos de la tuberculosis
examen de pigmentos biliares en la orina
fraccin de nmero del tipo de leucocitos
envo de heces fecales a laboratorios especializados
para detectar vibriones del clera.
Ce-
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?3&
Se pretende as proporcionar una relacin de tcnicas bsicas que sean tiles a los laboratorios perifricos y se
puedan poner en ejecucin con una cantidad relativamente limitada de equipos de uso corriente.
Es posible que algunos laboratorios no se encuentren en condiciones de llevar a cabo todas las tcnicas
descritas. Es decir, quizs el laboratorio de un centro rural de salud no pueda efectuar anlises de qumica
sangunea o del V D R L .
2. Reactivos
Se ha dado un nmero a cada reactivo. Los reactivos necesarios y sus nmeros se indican en la descripcin de
cada tcnica. Al final del libro hay una lista en orden alfabtico de todos los reactivos utilizados, su composicin,
los mtodos de preparacin y los requisitos de almacenamiento. Por ejemplo, uno de los reactivos necesarios para
la tincin de Gram es el cristal de violeta (reactivo No. 56); su composicin y el mtodo para prepararlo se
indican en la lista alfabtica de reactivos que se halla al final de este manual.
3. Equipo
No se han incluido artculos que sean muy costosos o difciles de conseguir. La lista de los que se requieren
para cada tcnica aparece al principio de la seccin correspondiente. En las pginas 104-107 se hace una relacin
de los aparatos necesarios para equipar un laboratorio capaz de llevar a cabo todos los exmenes descritos..
Cuando no se pueda contar con ciertos artculos el tcnico deber hacer todo lo posible para encontrar sustitutos. Por lo tanto, una vez vacos, se habrn de conservar los frascos que contuvieron antibiticos inyectables
("frascos de penicilina"); las gradillas para tubos de ensayo y portaobjetos se fabricarn en el lugar; los botes y
latas de hojalata vacos se utilizarn para baos Mara, etc.
Unidades de medicin
Nombre de la
unidad SI de base
longitud
masa
tiempo
cantidad de sustancia
Smbolo de la
unidad SI de base
metro
kilogramo
segundo
mol
m
kg
s
mol
Seguramente usted conoce las tres primeras unidades, pero es probable que,
como nombre de magnitud, "masa" requiera una explicacin; adems, a no
dudar, habr que explicar el ltimo de los nombres de magnitud y la correspondiente unidad. Masa es la denominacin correcta de lo que comnmente
se llama "peso". (Existe un significado tcnico de "peso": es una medida de
la fuerza con que la gravedad de la tierra atrae una masa dada. Por otra parte,
la masa es independiente de la accin de la gravedad de la tierra. En el
lenguaje cotidiano se suelen confundir las dos palabras; acostumbramos,
adems, decir que una masa "se pesa" cuando se trata de medirla.) La
"cantidad de sustancia" y su unidad, el mol, son de gran importancia para la
medicina e interesarn en su trabajo de laboratorio ms que cualesquiera
otras magnitudes o unidades SI. Cuando reaccionan dos o ms sustancias
qumicas no lo hacen en relacin con su masa. Por ejemplo, en la reaccin
bicarbonato
sdico
cido
clorhdrico
cloruro
sdico
dixido
de carbono
agua
Nombre de la
unidad SI derivada
metro cuadrado
metro cbico
metro por segundo
Smbolo de la
unidad SI derivada
m
m
m/s
Nombre del
prefijo
Smbolo del
prefijo
M
k
c
m
M
n
Factor de
mult. por
mult. por
div. entre
div. entre
div. entre
div. entre
multiplicacin/divisin
1 milln (x 10')
1 millar (x 101)
1 ciento (x 0,01 10"')
1 millar (x 0,001 10' 1 )
1 milln (x 10"*)
1 000 millones (x 10"')
UNIDADES DE VOLUMEN
Submltiplos equWalantM d*l metro cbico y el litro
Nombre
Smbolo
decmetro cbico
(sin nombre especial)
(sin nombre especial)
dm3
100 cm 3
10 cm 3
centmetro cbico
cm 3
milmetro cbico
mm 3
Equivalentes
en trminos del
metro cbico
=
=
=
=
-
0.001 m 3
0.0001 m 3
0,000 01 m 3
0.000 001 m 3
0,000 000 001 m 3
=
=
=
=
=
Nombre
Smbolo
litro
1
di
decilitro*
centilitro*
mililitro
el
mi
micro! tro
Jil
=
=
=
=
=
Equivalentes
en trminos
del litro
Equivalentes
en trminos
del mililitro
0,1 litros
=
=
1000 mi
100 mi
0,01 litros
10 mi
0.001 litros
0,000 001 litros
0,001 mi
Nueva nomenclatura
de magnitudes
Unidades
SI
Nomenclatura tradicional
de magnitudes
Unidades
tradicionales
concentracin de
nmero de eritrocitos
(vase la pg. 366)
no. x l O ' V l
recuento de eritrocitos
millones/mm 3
volumen de sedimentacin
globular o hematocrito
fraccin de volumen
de eritrocitos
(vase la pg. 379)
no. x 1 0 ' / 1
recuento de leucocitos
(sangre)
no./mm 3
concentracin de
nmero de leucocitos
(lquido cefalorraqudeo)
(vase la pg. 342)
no. x 1 0 6 / 1
recuento de leucocitos
(lquido cefalorraqudeo)
no./mm 3
recuento diferencial
de leucocitos
(p. ej., linfocitos)
fraccin de nmero
del tipo de leucocitos
(p. ej., fraccin de
nmero de linfocitos)
(vanse las pgs. 397, 343)
concentracin de
nmero de reticulocitos
(vase la pg. 416)
no. x 10 9 /1
recuento de reticulocitos
no./mm 3
fraccin de nmero
de reticulocitos 3
(vase la pg. 416)
10':
recuento de reticulocitos
(/)5?/oo = 5 x 1 0 " 3
12 x 10" 3 = 12 7oo
concentracin de
nmero de trombocitos
(plaquetas)
no. x l O ' / l
recuento de trombocitos
no./mm 3
En estos ejemplos se indica primeramente la conversin de valores numricos reales, en unidades tradicionales, a valores en unidades SI, y
seguidamente la conversin de unidades SI a unidades tradicionales. Los factores de conversin se han subrayado.
En este caso la fraccin de nmero no se anota como fraccin de 1, sino de 1 000, a fin de evitar valores numricos demasiado pequeos e
inconvenientes.
Nueva nomenclatura
de magnitudes
Unidades
SI
Nomenclatura tradicional
de magnitudes
Unidades
tradicionales
glucosa, concentracin
de sustancia (sangre y
lquido cefalorraqudeo)
mmol/l
glucosa, concentracin
de masa* (sangre y
lquido cefalorraqudeo)
mg/100 mi
hemoglobina (Fe),
concentracin
de sustancia
mmol/l
hemoglobina,
concentracin
de masa*
g/100 mi
hemoglobina,
concentracin
de masac
g/l
hemoglobina,
concentracin
de masa*
g/100 mi
hemoglobina (Fe)
medir en eritrocitos,
concentracin
de sustancia c
mmol/l
concentracin globular
media de hemoglobina
(v.g., concentracin
de masa)
%'
hemoglobina media
en eritrocitos,
concentracin
de masac
g/l
concentracin globular
media de hemoglobina
(v.g., concentracin
de masa)
X^
protenas,
concentracin de masa
(lquido cefalorraqudeo)
g/l
protenas,
concentracin de masa*
mg/100 mi
9/1
sin cambio
mg/100 mi
urea, concentracin
de sustancia (sangre)
mmol/l
urea, concentracin
de masa*
mg/100 mi
" En estos ejemplos se indica primeramente la conversin de valores numricos reales, en unidades tradicionales, a valores en unidades SI, v
seguidamente la conversin de unidades SI a unidades tradicionales. Los factores de conversin se han subrayado.
Se acostumbraba medir efectivamente la concentracin de masa, aunque por lo general no se empleaba esta denominacin.
Vase la explicacin en el texto.
La concentracin globular media de hemoglobina se expresaba algunas veces como fraccin decimal en vez de porcentaje; por ejemplo, 0,35 en
lugar de 35%. En este caso cada uno de los factores de conversin anotados se debe multiplicar por 100 o dividir entre 100, como se indica en los
ejemplos siguientes:
0.35 x 62,1 =21,7 mmol/l
22 mmol/l x 0,01611 = 0,354
0,35 x 1 000 = 350 g/l
298 g'/i x 0,001 = 0,298
En el sistema tradicional unas veces se haca referencia a la urea como tal y otras como nitrgeno de urea (o sea el contenido de nitrgeno de la
urea). En el cuadro se incluye una conversin de ambos sistemas.
10
PRIMERA PARTE
PROCEDIMIENTOS GENERALES DE LABORATORIO
1. El microscopio:
ajuste y conservacin
Muchas enfermedades prevalecientes en los climas clidos son transmisibles y se propagan por grmenes que a
menudo se pueden observar por medio del microscopio en muestras obtenidas de pacientes. Por lo tanto, la /
microscopia directa es indispensable en los laboratorios de los pases tropicales.
Un laboratorio clnico sin microscopio, o con un microscopio que no se conserva de manera adecuada, no se
puede considerar equipado con propiedad.
A. El sistema de soporte
Consiste en:
1. el pie
2. el bastidor
3. portaobjetivo revlver (cambiador de objetivos)
4. la platina
5. la platina mecnica, que imprime un movimiento
lento y regulado al portaobjetos.
B. El sistema de aumento
Consiste en un conjunto de lentes.
Las lentes del microscopio se encuentran montadas en
dos grupos, uno en cada extremo de un tubo relativamente largo, o tubo del microscopio:
el primer grupo de lentes se halla en el extremo
inferior del tubo, inmediatamente arriba de la preparacin que se va a examinar (el objeto), y se
denomina objetivo
el segundo grupo se encuentra en el extremo
superior del tubo, por donde mira el microscopista,
y se llama ocular.
1. LOS OBJETIVOS
(a) Aumento
El poder de aumento de cada objetivo se indica por
un nmero grabado en la manga de la lente:
el objetivo x 10 aumenta 10 veces
el objetivo x 40 aumenta 40 veces
el objetivo x 100 aumenta 100 veces.
(El objetivo x 100 generalmente se encuentra marcado con un
anillo rojo para indicar que se debe usar con aceite de inmersin.)
(AN)
sBill
X 40/o.65
I S O /O."!?-
2.
EL OCULAR
Aumento
El poder de aumento se encuentra marcado en el
ocular:
Un ocular x 4 aumenta 4 veces la imagen
que produce el objetivo
Un ocular x aumenta la imagen 6 veces
Un ocular x 10 aumenta la imagen 10 veces.
Si la imagen del objeto se hace aumentar 40 veces
mediante el objetivo x 40 y en seguida 6 veces
mediante el ocular x 6, el aumento total ser de
6 x 40 - 240.
Para calcular el aumento total de la imagen del objeto
que se observa, multipliqese el poder de aumento
del objetivo por el del ocular.
El poder de aumento de los microscopios utilizados
en los laboratorios mdicos oscila entre 50 y 1000.
8*
C. El sistema de iluminacin
1. La fuente luminosa
De preferencia se emplear luz elctrica, pues es ms
fcil de ajustar. Puede proporcionarla un bombillo
contenido en el microscopio por debajo de la platina
o mediante un bombillo exterior colocado frente al
microscopio.
De lo contrario se podr utilizar la luz del da. El
microscopio nunca se debe utilizar ni debe permanecer bajo la luz directa del sol. Deber estar bien
iluminado, pero se usar una luz amortiguada. Si la
luz del sol es excesivamente brillante se colocar
frente al microscopio una botella o redoma de vidrio
claro, llena de agua, a fin de reducir la intensidad de
la luz.
2.
El espejo
El espejo refleja los rayos de la fuente luminosa
sobre el objeto. Por un lado su superficie es plana y
cncava por el otro. El lado cncavo constituye un
condensador de escaso poder y no se debe usar si ya
se cuenta con un condensador propiamente dicho.
3.
El condensador
El condensador lleva los rayos luminosos a un foco
comn sobre el objeto que se habr de examinar.
Se encuentra colocado entre el espejo y la platina.
Se puede elevar (iluminacin mxima) y bajar
(iluminacin mnima). Se debe centrar y ajustar
adecuadamente.
El diafragma
El diafragma, que se encuentra dentro del condensador, se utiliza para reducir o ampliar el ngulo, y,
por lo tanto, tambin la cantidad de luz que entra en
el condensador.
Cuanto ms se abre el diafragma ms se ampl a el
ngulo y en consecuencia aumenta la AN y se
pueden observar detalles ms pequeos. Sin embargo,
al mismo tiempo se reduce el contraste.
16
w
w
5.
Filtros
En algunos microscopios se ajustan filtros de colores
(principalmente azules) debajo del condensador. Se
pueden dejar en su sitio o quitarlos, segn el tipo de
preparacin que se vaya a observar.
D. El sistema de ajuste
Este sistema comprende:
1. La cremallera de avance rpido
Es el tornillo mayor. Se utiliza primero para lograr la
aproximacin del enfoque.
2. El tornillo micromtrico de avance lento
Hace que el objetivo se desplace ms lentamente.
Se emplea para conseguir un enfoque perfecto del
objeto.
3. El tornillo de ajuste del condensador
Se utiliza para elevar el condensador y aumentar la
iluminacin o descenderlo y reducir la iluminacin.
4. Los tornillos para centrar el condensador
Puede haber tres tornillos colocados alrededor del
condensador: uno al frente, uno a la izquierda y uno
a la derecha. Se usan para centrar el condensador
exactamente en relacin con el objetivo.
5. El elevador del diafragma iris
Este es un pequeo elevador que se encuentra fijo al
condensador. Se puede mover para cerrar o abrir el
diafragma, reduciendo o aumentando as el ngulo y
la intensidad de la luz.
2.
objetivo x 10
objetivo x 40
objetivo x 100 (para inmersin en aceite).
Las roscas para atornillar los objetivos son estndar.
C oloque en su sitio el ocular o los oculares.
Fije el condensador debajo de la platina.
Fije el espejo en el pie del microscopio.
3. Posicin de la lmpara
Si se va a usar iluminacin elctrica ponga la lmpara
a una distancia de 20 cm al frente del microscopio,
por delante del espejo, que se colocar en un ngulo
de 4 5 . C ubra el espejo con una pieza de papel.
Ajuste la posicin de la lmpara de manera que la
luz brille en el centro del espejo.
Si la lmpara est provista de una lente, los filamentos del
bombillo se proyectan sobre la pieza de papel con que se ha
cubierto el espejo. Esto permite centrar el haz luminoso con
mayor precisin. En algunos modelos se hace girar el bom
billo hasta que se obtiene una imagen clara del filamento.
WEiy*
^'ss^viv-
^^^ssw^Yssy^^sssy^s.
^ r o n ^ n 6 " ^ " ' ^ " 8 u 1 n .P, r e P a r " c j* n " s u correspondiente portaobjetos, sin cubreobjetos. Haga descender
el condensador. Abra el diafragma iris. Examine con el objetivo de menos poder (x 3 x 5 x 10) UObsrvela
preparacin a travs del ocular y enfquese
'" D S e r v e l a
(e) Por medio de los tornillos para centrar el condensador haga los ajustes necesarios hasta que el circul
luminoso se halle exactamente en el centro del
campo microscpico. Repita esta operacin con los
dems objetivos.
20
En algunas ocasiones no se puede lograr una imagen clara a pesar de que el objetivo se ha bajado todo lo posible. Esto obedece a
que el tornillo micromtrico de avance lento se ha girado completamente hacia la derecha. Gire este tornillo hacia la izquierda hasta
donde sea posible y a continuacin busque el enfoque subiendo el objetivo.
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X10
X40
Equipo
1. Piezas de trapos viejos y un pauelo fino, de lino, que estn limpios
2. Papel de seda especial para lentes o, en su defecto, papel blanco absorbente (papel de tocador)
3. Si es posible, una pieza de piel de gamuza (de lo contrario, un trapo que no desprenda pelusal
4. Un frasco pequeo de xilol (o tolueno)
5. Una cubierta de material plstico
6. Una pequea pera de goma y, si es posible, un pincel fino (o una brocha especial para limpiar lentes)
7. En los climas clidos y hmedos,
en laboratorios que cuentan con electricidad:
-- un armario que est templado, se calienta mediante uno o dos bombillos incandescentes de 40 vatios
en los laboratorios que no cuentan con electricidad;
- si es posible, un secador de 15 - 20 cm de dimetro, con no menos de 250 g de gel de slice azul (que
indica la existencia de humedad al tomar un color rojizo).
2.
3.
4.
5.
I
Laboratorios que cuentan con electricidad
Guarde el microscopio por las noches en el armario
templado. Este es simplemente un armario con una
puerta que se puede cerrar hermticamente, que se
calienta ligeramente por medio de uno o dos bombillos incandescentes de 40 vatios (un bombillo basta
para un armario donde se guarden 1-4 microscopios).
Los bombillos debern permanecer encendidos sin
interrupcin aunque los microscopios no se encuentren en el armario.
Verifique que dentro del armario la temperatura sea
por lo menos 5 0 C ms alta que en el laboratorio.
Por ejemplo:
temperatura del laboratorio: 26 0 C
temperatura dentro del armario: 32 0 C
Importante: los microscopios se debern guardar en
el armario aunque el laboratorio cuente con un
sistema de calefaccin o enfriamiento del aire.
24
3E3E3C3!Ei3
2-1
Tapones de gasa o algodn
3E2-;
electricidad
En estos laboratorios se puede conservar el microscopio a/ aire y en la sombra, aunque siempre cerca de
un sitio soleado.
Nunca se debe guardar el microscopio en su estuche
de madera (ni siquiera por las noches); se debe utilizar invariablemente una cubierta. No obstante, el
microscopio se debe limpiar diariamente para quitarle el polvo.
Idealmente, el laboratorio lo debe visitar cada 3 meses un experto que desarme el microscopio para:
inspeccionar las superficies de las lentes y el prisma, en busca de los primeros indicios de la presencia de
hongos
lubricar las partes metlicas con un aceite lquido especial, que posee propiedades limpiadoras.
1.
Mientras no se use, conserve el microscopio invariablemente bajo una cubierta hermtica de material
plstico a prueba de aire. Guarde el instrumento
todas las noches en su estuche de madera.
2.
3.
4.
Nunca limpie las lentes de los objetivos o los oculares con etanol.
Nunca sumerja los objetivos en xilol o etanol (se aflojaran).
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
EL MICROSCOPIO DE McARTHUR
El microscopio de McArthur es un instrumento que, a pesar de que puede proporcionar los mayores aumentos y
servir para muchas formas de trabajo poco usuales, no es ms grande que una cmara fotogrfica de bolsillo, pesa
menos de medio kilogramo y se puede usar en la mano.
Este microscopio se emplea en medicina tropical para examinar: frotis de sangre y disecciones de mosquitos con
el fin-de detectar la malaria en las encuestas de reas rurales; frotis de sangre y lquido cefalorraqudeo de portadores probables de la enfermedad del sueo; orina y heces fecales para descubrir huevos de parsitos, y esputo en
las encuestas de deteccin de la tuberculosis, tambin se utiliza en disecciones de caracoles en los estudios de la
esquistosomiasis, as como para hacer el diagnstico rpido del clera (que se puede realizar en pocos segundos
sin ajuste alguno).
El microscopio de McArthur se enfoca automticamente, produce una imagen directa y no invertida, es de
construccin muy slida y se acompaa de una amplia variedad de accesorios, incluso equipo para inmersin,
iluminacin de campo oscuro y contraste de fase. Se puede utilizar para examinar sedimentos en volmenes considerables de lquidos y en los recuentos sanguneos, y para llevar a cabo una diversidad de operaciones durante
las encuestas de reas rurales, en circunstancias en que ningn otro tipo de microscopio se podra emplear.
26
2. Cristalera y
aparatos pequeos
Vaso de
precipitado
Matraz de
Erlenmeyer
Embudo para
filtro de papel
\J
Tubo de
ensayo
Placa
de Petri
KJ
Plato para
evaporaciones
Cristalizador
Plato cncavo
de cristal
Vw
Tubos de precipitinas
o de Kahn
Matraz de
fondo redondo
Tubo redondo
para centrfuga
Tubo cnico
para centrfuga
Secador
Cubeta para
tinciones
Utensilios de vidrio para medir volmenes (pipetas, cilindros medidores, matraces volumtricos, etc.): Vanse las secciones siguientes.
27
Mechero de Bunsen
(llama fuerte)
Mechero de Bunsen
Lmpara
de alcohol
Mechero de Meker
Pinza para
portaobjetos
Trpode con
tapa de amianto
Mortero de mano
"CZ
Cronmetro
28
Frascos goteros
Frasco de lavado
Termmetro
3. Limpieza de la cristalera
4.
Enjuague
Saque de la palangana los utensilios, uno a uno. Enjuague
cada uno detenidamente con el chorro de agua del grifo
y a continuacin coloque todos en una palangana con
agua durante 30 minutos. Enjuague de nuevo cada uno
bajo el chorro de agua limpia. (Se debe recordar que las
partculas de detergente que queden en los utensilios de
vidrio pueden causar resultados falsos en el laboratorio.)
5. Para escurrirlos
Coloque los recipientes (vasos, matraces, probetas) en las
clavijas de una gradilla de pared para secado. Ponga los
tubos con las bocas hacia abajo en una canastilla de alambre.
6. Secado
Ponga los utensilios en canastillas de alambre y squelos
en un horno de aire caliente a 60 o C. De lo contrario
coloque las canastillas con los utensilios en un sitio soleado
del laboratorio y cbralos con una pieza de tela delgada.
29
7.
Taponamiento
El material de vidrio limpio y seco se deber guardar
en una alacena para preservarlo del polvo. Se recomienda que los recipientes se taponen con algodn
no absorbente, guata, o se les cubra la boca con
pequeas tapas hechas de papel de peridico o, de
preferencia, con hojas delgadas de parafina o material
plstico adherente (por ejemplo, Parafilm o Sarn),
, si se encuentran disponibles.
I I . PIPETAS
1.
Enjuague inmediato
Tan pronto como se haya usado una pipeta se debe enjuagar con un chorro de agua fra para limpiarla de
sangre, orina, suero, reactivos, etc.
2.
Remojo en agua
Despus de enjuagarlas coloque las pipetas en una probeta grande, de material plstico (o una palangana)
llena de agua. Si las pipetas se han utilizado para medir material infeccioso djelas en una probeta llena de
solucin desinfectante (algn compuesto cuaternario de amonio, o fenol al 2%) durante 24 horas.
3.
4 . Pipetas obstruidas
(a) Ponga en un cilindro lleno con una solucin limpiadora de bicromato (reactivo No. 10), depositndolas
con suavidad. Djelas 24 horas en esta solucin.
(b) Al da siguiente traslade la solucin de bicromato a otro cilindro (se puede usar 4 veces).
(c) Coloque el cilindro que contiene las pipetas bajo el chorro de agua del grifo y enjuagelas minuciosamente.
(d) Saque las pipetas, una a una. Verifique que se han eliminado las obstrucciones. A continuacin enjuagense nuevamente.
(e) Remoje las pipetas en agua limpia durante 30 minutos, cambie el agua y vulvalas a remojar otros 30
minutos.
Advertencia: La solucin de bicromato es sumamente corrosiva y se debe emplear con cuidado extremo. Si se derrama accidentalmente sobre la piel, los ojos o la ropa, lvese inmediatamente con cantidades copiosas de agua.
5.
Secado
Seque las pipetas de vidrio Pyrex en el h o m o de aire caliente a 60 C y las de vidrio ordinario en la incubadora
a 3 7 0 C o a l aire.
6.
30
III.
PORTAOBJETOS
A. Portaobjetos nuevos
1.
2. Enjuague en agua
Enjuague cada portaobjetos con agua del grifo y a continuacin con agua limpia durante 15 minutos.
3.
Limpieza y secado
Limpie los portaobjetos, uno a uno, con un trapo suave, que no desprenda pelusa. Colquelos separados,
sobre una hoja de filtro de papel, uno a uno. Djelos secar. Posteriormente, examine cada portaobjetos.
Descarte los que se encuentren teidos o raspados y los que tengan un color amarillento o porciones opacas.
4.
Envoltura
Junte los portaobjetos en montoncitos de 10 20 y envulvalos con hojas pequeas de papel.
5.
Numeracin
En algunos laboratorios se acostumbra numerar los
portaobjetos por anticipado en grupos de cinco
paquetes, de 1 a 100, con un lpiz de diamante (de
esta manera los paquetes contienen portaobjetos del
1 al 20, del 21 al 40, del 41 al 60, del 61 al 80 y del
81 al 100).
B. Portaobjetos sucios
1. Portaobjetos con residuos de aceite de inmersin
Tome los portaobjetos uno a uno y frtelos con
papel de peridico para limpiarlos del aceite hasta
donde sea posible.
2. Portaobjetos con cubreobjetos
Separe los cubreobjetos de los portaobjetos con la
punta de una aguja o el extremo de una pinza y coloqense en un vaso para anlisis lleno de agua (para la
limpieza de los cubreobjetos vase la pgina 32).
3.
31
4.
C. Cubreobjetos
Despus de usarlos, los cubreobjetos se pueden recobrar, limpiar y usar nuevamente. Para limpiarlos:
1. Remjense en una solucin dbil de detergente a la que se haya agregado un desinfectante preparado en un
vaso grande de precipitado como se indica a continuacin:
200 mi de agua
3 mi de detergente
15 mi de leja o 5 mi de un desinfectante cuaternario derivado del amonio.
Djense en remojo durante 2 - 3 horas, movindolos suavemente de vez en cuando.
2. Enjuague cuatro veces el vaso donde estaban con agua del grifo, agitndolo suavemente.
3. Lvese por ltimo con agua desmineralizada.
4. Escurra los cubreobjetos colocndolos cuidadosamente de punta sobre una pieza de gasa doblada.
5. Si es posible, seqense en el homo de aire caliente a 60C.
6. Consrvense en una placa de Petri pequea. Para sacarlos utilice una pinza especial para portaobjetos si se
dispone de ella.
3. Agujas obstruidas
Utilice un hilo de nyln remojado en cido actico
al 50%. De lo contrario, emplee un estilete.
32
4. Esterilizacin
Esterilizar significa eliminar de un objeto o una sustancia todas las formas de vida, cualesquiera que stas sean.
En consecuencia, el equipo de laboratorio que se ha esterilizado queda libre de microorganismos vivos.
En el laboratorio mdico los materiales se esterilizan con tres propsitos principales:
1. Prepararlos para la recoleccin de muestras (debern estar estriles agujas, jeringas, tubos, etc.).
2. Desinfectar los materiales contaminados.
3. Preparar los utensilios que se emplean en los cultivos bacterianos (cajas de Petri, pipetas Pasteur, tubos, etc.).
En el laboratorio mdico la esterilizacin se logra por medio de calor hmedo (autoclave, ebullicin) o calor seco
(horno de aire caliente, flameado).
I.
EL AUTOCLAVE
Principio
En un recipiente cerrado se calienta agua. Esto produce
una saturacin de vapor a presin, con temperatura
superiora 100 o C.
Toda clase de grmenes mueren al calentar los utensilios
durante 20 minutos a 120C en este vapor a presin.
Componente del autoclave
1. Caldera
Consiste en un cilindro amplio y profundo en que se
colocan los utensilios para esterilizar.
2. Canasta
Es una canasta amplia de alambre donde se ponen
los materiales que se esterilizarn.
3. Soporte de la canasta
Se encuentra en el fondo del autoclave y sostiene la
canasta por encima del nivel del agua.
4. Drenaje
Espita colocada en la base de la caldera, por donde
sale el exceso de agua.
5. Tapa
La tapa cubre y cierra hermticamente la caldera; se
ajusta mediante una arandela de goma.
6. Sujetadores de la tapa
Estos sujetadores, junto con la arandela de goma,
cierran hermticamente la tapa e impiden que escape
el vapor.
7.
8.
Vlvula de seguridad
Se halla en la parte superior de la caldera o en la tapa,
y deja escapar el vapor cuando la presin se eleva
demasiado, evitando asi' que ocurra una explosin.
9. Instrumento indicador de la temperatura
o de la presin
Se encuentra en la parte superior de la caldera o en
la tapa e indica la presin, la temperatura, o ambas.
33
Agujas
Es preferible colocar las agujas por separado en tubos de
ensayo pequeos que se taponarn inmediatamente despus. Coloqese por anticipado una pieza de algodn no
absorbente o guata en el fondo de cada tubo para proteger las puntas de las agujas.
De lo contrario, dispnganse las agujas en bandejas
metlicas, hundiendo las puntas en una pieza de gasa
doblada.
Las bandejas metlicas se colocarn sin tapa en el autoclave.
Cristalera
Los tubos para muestras, las cajas de Petri, etc., se envolvern en papel de estraza y se atarn con cordeles.
Pipetas Pasteur
Se colocarn en tubos amplios y largos, que se taponarn
inmediatamente despus.
Tambin se pueden envolver con varias hojas de papel de
estraza.
34
laboratorio.
Nunca se deben maniobrar la espita de drenaje ni la vlvula de salida del aire mientras se est efectuando el
calentamiento a presin.
Nunca se debe maniobrar la vlvula de seguridad mientras se est efectuando el calentamiento a presin.
Nunca se debe hacer un calentamiento demasiado rpido para aumentar la presin una vez que la vlvula de
salida se ha cerrado.
Nunca se debe descuidar el autoclave mientras la presin est aumentando.
Nunca se debe permitir que el autoclave se enfre durante demasiado tiempo. Si el aparato se deja varias
horas sin abrir la vlvula de salida, se forma un vaco y los utensilios estriles se pueden romper.
2.
3.
Caliente la olla sobre una estufa. La vlvula comenzar a girar en poco tiempo, dejando escapar un
chorro de vapor.
4.
5.
6.
3.
4.
Apague el horno. Espere a que la temperatura descienda hasta 40 o C. Abra la puerta del horno. Cierre
las tapas de los estuches metlicos. Saque los materiales estriles. El papel empleado para envolverlos
deber haber tomado un color marrn oscuro. Si el
color del papel es amarillo plido indicar que el
horno no se ha calentado bastante; si el papel se ha
ennegrecido indicar que el horno se ha calentado
demasiado.
38
5. Desecho de muestras y
materiales infectados
Importante: Las muestras examinadas en el laboratorio (heces fecales, pus, esputo, orina, etc.) frecuentemente
son infectantes. Despus de examinarlas se deben destruir de manera que se evite todo riesgo de contaminacin.
Estas muestras se pueden desechar en:
cajas de cartn o recipientes de material plstico que se pueden destruir (heces fecales, esputo)
frascos (tarros) de vidrio y matraces que se puedan limpiar, esterilizar y usar nuevamente.
Todos los recipientes desechables se usan solo una vez.
Cmo incinerar
1.
4.
Incinrelo una vez por semana o ms frecuentemente si es necesario. Llene el fondo del barril con
papeles, palos, virutas, etc.
es ms difcil (por lo tanto, siempre que sea posible sense recipientes desechables).
Empleo de la solucin de
(reactivo No. 26) o fenol
formaldehido
6. Mediciones y volumen
Abreviatura
microlitro
mililitro o
centmetro cbico
litro
ml, cm 3
= 1/1000 litro
I
= 1000 mililitros (mi)
Pipetas
Matraces volumtricos
4.
5.
6.
Buretas
Pipetas cuentagotas graduadas
Vasos cnicos para anlisis, graduados
1.
42
2. PIPETAS
(a) Pipetas graduadas
En el extremo de estas pipetas se encuentran las
siguientes indicaciones:
el volumen total que se puede medir con ellas
el volumen que hay entre dos I neas de graduacin.
3.
MATRACES VOLUMTRICOS
2000 y 1000 mi
500 mi
250 y 200 mi
100 mi
50 y
25 mi
Los matraces volumtricos son ms precisos que las
probetas. Se deben utilizar en la preparacin de
reactivos.
Tapones
Los matraces volumtricos deben acompaarse de
tapqnes de material plstico (de preferencia) o de vidrio
esmerilado. Se debe tener cuidado de no extraviarlos, as
pues tense al cuello del matraz con un trozo de hilo.
Cosfo
Los matraces volumtricos suelen ser sumamente
costosos, por lo que se deben usar con mucho cuidado.
Wom I
4.
BURETAS
5.
EXACTOS
MENOS EXACTOS
INEXACTOS
Pipetas
Matraces volumtricos
Probetas
Pipetas goteras calibradas
Vasos cnicos
para anlisis
47
7. Balanzas
UNIDADES DE PESO
Abreviatura
Valor
correspondiente
miligramo
centigramo
decigramo
gramo
kilogramo
mg(10 3 g)
cg(1<r J g)
dg<10 l g>
kg(10 3 g)
10 mg
100 mg
1000 mg
lOOOg
1
1000 9
1
100
1
9
T 9
1000
k9
Sensibilidad de la balanza
La sensibilidad de la balanza corresponde a la masa ms pequea que desplace el fiel una divisin en la escala de
medicin. Por ejemplo, si la sensibilidad de la balanza es de 1 mg se necesitar por los menos una masa de 1 mg
para desplazar el fiel.
Para los fines habituales del laboratorio se puede considerar que la sensibilidad de una balanza es la masa ms
pequea que esa balanza puede pesar con precisin.
1.
,L
2. BALANZA ANALTICA
Esta balanza consta de dos platillos suspendidos de un
astil dentro de un estuche de vidrio.
La balanza analtica se emplea:
para pesar cantidades pequeas (hasta 20 200 g,
dependiendo del modelo)
cuando se requiere gran precisin; por ejemplo,
3,85 g, 0,220 g, 6,740 g.
Sensibilidad: 0,5 mg - 0,1 mg, dependiendo del modelo.
-/-
AC =
E
F
P
T
=
=
=
=
TA
49
3.
BALANZA DE DISPENSARIO
4.
;;Vi;iYiy;;|v;;;iViyi)ffi
' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' * " ' ' ' ' ' * ' ' ' ' ' ' ' * ' ' * * ' ' ' * * ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' * * ' ' ''''***'
"'"ia?
51
8. Centrfugas
Fuerza centrfuga
Hace que un cuerpo se ponga en movimiento circular a
gran velocidad (MC). De este modo se genera una fuerza
que aleja este cuerpo del centro del crculo; se llama'
fuerza centrfuga ig).
Al usar una centrfuga se deben respetar las instrucciones
del fabricante, aunque tambin es posible calcular las
revoluciones por minuto (r/min) que corresponden ag
en una centrfuga. Para esto mdase el radio (r) del brazo
del rotor y apliqese la frmula siguiente:
g = r x (r/min) 2 x 118 x 10" 7
Por ejemplo, si el radio es de 25 cm, 5 0 0 g correspondern aproximadamente a 1300 r/min.
^
r'
v.
":;;]}
-v
m:?m>
Importante:
1. Con la prensa de sujecin de la centrfuga de mano fije sta firmemente en un punto de apoyo estable (el
borde de una mesa).
2. Equilibre completamente los dos tubos que se hallan diametralmente opuestos, como se indica en las instruc
clones para el uso de esta clase de centrfuga, en la pgina 54.
3. Mantngase a cierta distancia mientras efecta la centrifugacin.
4. Para detener la centrfuga no reduzca lentamente la velocidad del manubrio. Separe el manubrio de la
mquina con un movimiento brusco.
5. Saque los tubos lenta y cuidadosamente (para no agitar los sedimentos).
6. Lubrique con regularidad el rbol de la centrfuga.
Advertencia: La centrifuga manual puede causar serias lesiones fsicas, por tanto, siga estas instrucciones minuciosamente.
B. Centrfugas elctricas
En algunos sitios se pueden usar centrfugas que funcionan con pilas elctricas.
Las centrfugas elctricas se construyen con dos tipos de
cabezal.
1.
Cabezal oscilante
Este cabezal est diseado para que durante la centrifugacin los tubos adopten una posicin horizontal.
Este es el tipo de cabezal que se necesita con ms
frecuencia.
53
2.
Cabezal oblicuo
Sostiene los tubos en un ngulo de 4 5 , aproximadamente, durante la centrifugacin. Es til en la aplicacin de ciertas tcnicas, como en los ensayos de
aglutinacin para determinar grupos sanguneos por
el mtodo del tubo de ensayo. Sin embargo, no es
esencial para las tcnicas que se describen en este
manual.
elctricas
4.
Limpieza y
lubricacin
Consrvese la olla de la centrfuga muy limpia. Enjuague las cubetas despus de usarlas. Limpie todos los
residuos de sangre, etc.
La lubricacin deber hacerla un experto de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Importante:
Si se acostumbra a centrifugar sin equilibrar primero los tubos, la centrfuga se romper muy pronto.
55
Para realizar el trabajo en el laboratorio mdico se necesita un suministro adecuado de agua. Se requiere:
1. Agua limpia
2. Agua destilada
3. Agua desmineralizada (si es posible)
4. Agua amortiguada (si es posible).
En algunas reas el agua es escasa y est sumamente contaminada. Cmo se puede obtener agua limpia?
AGUA LIMPIA
A.
1.
2.
3.
Inspeccin de la calidad
Llene una botella con agua.
Djela reposar durante 3 horas.
Examine el fondo de la botella. Si hay un sedimento
ser necesario filtrar el agua.
Filtrado
Filtro de porcelana no vidriada, o de vidrio calizo
(tipo Chamberland u otro semejante)
(a) Este filtro se puede ajustar al grifo.
(b) De lo contrario, se puede conservar sumergido
en el agua que se va a filtrar, en un recipiente
amplio.
Importante: Los filtros de este tipo se deben
desarmar una vez al mes y lavarlos en agua hirviendo
previamente filtrada.
2. Filtro de arena
Este filtro se puede fabricar en el laboratorio. Se
necesitan:
(a) Un depsito (que puede ser un recipiente amplio
como un barril metlico, una olla grande de
barro o una cubeta perforada)
(b) Arena
(c) Grava.
56
D. Suministro de agua
Si en el laboratorio no se dispone de agua corriente
prepare un distribuidor de la manera siguiente:
1. Coloque el depsito de agua en un anaquel alto.
2. Ponga un tubo de goma al depsito, de manera que
el agua descienda por l.
3. Mantenga cerrado el tubo de goma con una grapa de
Mohr o una pequea pinza de tornillo.
AGUA DESTILADA
A. Preparacin
El agua destilada se prepara por medio de una retorta en
que:
se caliente agua normal hasta el punto de ebullicin
el vapor que se produce se enfra al pasar por un
serpentn y se condensa formando agua destilada.
Para este fin existen los aparatos siguientes:
1. Retortas de cobre (alambiques)
2. Retortas de vidrio.
Se calientan con gas, queroseno o electricidad, dependiendo del tipo de retorta.
2.
Retortas de vidrio
Estas retortas son ms frgiles, pero casi siempre
producen agua ms pura. El procedimiento de destilacin es el mismo. Cercirese de que el agua corriente
circule con libertad alrededor del condensador (C).
El agua se puede calentar en la retorta por medio de
un aditamento elctrico (E).
Importante:
(a) Almacnese el agua destilada en un recipiente de
vidrio o material plstico que se encuentre protegido
de la atmsfera.
(b) No destile el ltimo % del agua que se ha calentado.
Preparar reactivos
Enjuagar algunos utensilios de vidrio antes de secarlos.
Importante:
1. No use agua destilada comercial (del tipo empleado para llenar las pilas acumuladoras de los automviles) en
la preparacin de reactivos para el laboratorio.
2. Es preferible el agua destilada que se ha preparado recientement; si no es posible disponer de esta, gurdese el
agua destilada en recipientes de vidrio o material plstico que se lavarn peridicamente.
3. Utilice siempre agua destilada preparada en la misma semana.
58
AGUA DESMINERALIZADA
Principio
El agua desmineralizada se prepara haciendo pasar el agua
ordinaria por una columna de resinas de intercambio
inico.
El aparato que se utiliza consiste en un tubo largo
(cartucho) lleno de granulos de resinas de intercambio
inico.
El agua se filtra a travs de la columna de granulos, que
retienen todos los iones minerales (sales minerales disueltas). Este agua, desprovista de iones, se llama agua desmineralizada.
A. Preparacin
1. Compruebe que el tubo est completamente lleno
de granulos de la resina de intercambio inico.
Algunos aparatos desmineralizadores tienen dos
tubos (cartuchos) por los que pasa el agua sucesivamente.
2. Conecte el tubo del entrada del aparato al suministro
de agua (el grifo o un pequeo tanque colocado en
un plano alto).
En algunos modelos el agua entra por la parte
superior de la columna y en otros lo hace por el
fondo.
3. Deje que el agua entre despacio.
4. Recoja el agua desmineralizada en un recipiente
cerrado.
59
AGUA AMORTIGUADA
Por lo general el agua destilada es cida y el agua desmineralizada se acidifica cuando se expone al aire. Para
algunos procedimientos de laboratorio (preparacin de colorantes, etc.) el pH del agua debe ser de 7,0,
aproximadamente (agua neutra) y conservarse en estas condiciones. Esto se logra, cuando es posible,
disolviendo sales amortiguadoras en el agua (agua amortiguada).
A. Materiales
(a) Probetas de 10 mi y 1000 mi
(b) Un matraz volumtrico de 1000 mi
(c) Un comparador del tipo de Lovibond (UNICEF
ref. No. 931200), si se cuenta con l. Oe lo
contrario, papeles indicadores del pH, de poca
amplitud de deteccin
(d) Agua destilada (o desmineralizada)
(e) Indicador de azul de bromotimol
(f) Hidrofosfato disdico (Na 2 HPO* 2 H 2 O)
(g) Fosfato de potasio y dihidrgeno
(KH2P04).
B. Mtodo
1. Pese con precisin 3,76 g del fosfato disdico.
2. Pselo a un matraz volumtrico de 1000 m con un
embudo.
3.
J&\
^
/1>\
>
^^
61
ggs^r
10. Coloque este tubo (que contiene el agua
amortiguada y el indicador) en el comparador
(tubo 1).
Pngase junto a este otro tubo que solamente
contenga agua (tubo 2).
63
El vidrio se produce por la fusin, a temperaturas muy elevadas, de una mezcla de arena y potasio (o sodio). De
este modo se forma un silicato {vidrio ordinario, de cal y soda). Cuando se agrega cido brico a stos ingredientes
se produce vidrio de borosilicato (Pyrex, etc.), que es menos quebradizo y ms resistente al calor. En el
laboratorio se pueden manufacturar ciertas piezas del equipo que se suele usar, calentando vidrio ordinario.
A.
MATERIALES
1.
3.
4.
5.
Varillas de vidrio:
dimetro: 4 - 8 mm
Cortador de vidrio: lpiz de diamante o sierra.
Una pieza de tela
Un mechero de Bunsen (o, an mejor, una lmpara
de soplete pequea, de gas o petrleo).
2.
4.
6.
7.
8.
C. M A N U F A C T U R A DE UN AGITADOR
Procrese una varilla de vidrio slido, de unos 5 mm
de dimetro.
Con una sierra crtese la varilla en trozos de 15, 20
25 cm, segn sean las necesidades. El procedimiento
para cortar es el mismo que se usa para los tubos de
vidrio.
3.
4.
fy*ipir
J
Las nuevas varillas se pueden utilizar tambin para
decantar lquidos o verterlos con lentitud.
66
C"
D. DOBLADO DE UN TUBO DE V I D R I O
1.
2.
X
Doblados defectuosos
(A) El vidrio se calent demasiado.
(B) El vidrio no se calent suficientemente.
En el laboratorio se emplean distintos recipientes para recolectar muestras de heces fecales, sangre, orina y esputo.
I.
El
68
Los residuos de
(c) Guarde los frascos que contengan anticoagulantes en un lugar seco. La solucin de sal dipotsica de
EDTA y el fluoruro sdico son estables a la temperatura ambiente, pero el citrato trisdico y la heparina
se deben conservar en el frigorfico.
(d) Utilice las proporciones correctas. Use recipientes y tubos graduados o coloque etiquetas en ellos de
modo que el borde superior de estas quede al nivel de la cantidad de sangre que se requiera (2 mi,
5 mi, etc.)
3.
Los laboratorios perifricos suelen enviar muestras a los laboratorios de referencia o a otros ms especializados
con el fin de que efecten exmenes que ellos no estn en condiciones de realizar. Por ejemplo:
anlisis serolgicos de treponematosis o tifoidea; cultivos de heces fecales para detectar el vibrin del clera;
exmenes histolgicos de materiales obtenidos en bipsias.
El cuadro siguiente indica, para cada tipo de muestra y cada examen:
el recipiente y el preservativo (cuando sea necesario) que se deben usar
la cantidad de muestra que se debe enviar
el tiempo que se pueden conservar las muestras.
Tipo de
muestra
Tipo de examen
de laboratorio
Recipiente y
preservativo
ESPUTO
Cultivo de bacilos de
la tuberculosis
Frasco de 45 mi con 25 mi
de solucin de bromuro
de cetilpiridinio al 0,6%
(vase la pgina 255)
10 das
Otros microorganismos
Sin preservativo
2 horas
Cultivo de bacilos de
la difteria
24 horas
Hisopo de algodn
4 horas
4 das
o medio de Stuart
24-48 horas
EXUDADO
FARNGEO
LIQUIDO
CEFALORRAQUDEO
(LCR)
PUS
URETRAL
PUS DE
OTROS SITIOS
Cultivo de
meningococos
Cantidad
de muestra
Duracin
2 mi
12 horas
Otros microorganismos
Frasco estril
2 mi
2 horas
Frasco estril
2-4 mi
2 horas
Cultivo de
gonococos
1 hisopo
con pus
4 das
o medio de Stuart
1 hisopo
con pus
24 horas
1 tubo estril
Iml
2 horas
Cultivo de bacterias
71
Tipo de
muestra
Tipo de examen
de laboratorio
Recipiente y
preservativo
Cantidad
de muestra
Duracin
SANGRE
Recuentos de clulas
Solucin de sal
dipotsica EDTA
(reactivo No. 17)
5 mi
12 horas
Grupos sanguneos
Solucin de sal
dipotsica EDTA
o tubo sin anticoagulante
5 mi
12 horas
Aglutinacin cruzada
5 mi
12 horas
Tiempo de protrombina
(Prueba de Quick)
0,5 ml de citrato
trisdico (indquese
en la etiqueta el anticoagulante usado)
4,5 mi
2 horas
Tromboensayo
Tubos comerciales de
material plstico con
0,5 ml de citrato trisdico
al 3,8% (reactivo No. 53)
4,5 mi
24 horas
Bsqueda de treponemas,
salmonelas, etc. en el suero
lOml
3 das
Anlisis de glucosa
5 mg de fluoruro sdico
5 mi
2 horas
Envese suero
10 mi
48 horas
Determinaciones de
enzimas: amilasa
fosfatasas
transaminasas
5 mi
2 horas
Cultivo de sangre
5 mi
24 horas
Medio de transporte de
Cary-Blair (reactivo
No. 13)
4 semanas
2 semanas
HECES
FECALES
72
Tipo de
muestra
Tipo de examen
de laboratorio
Recipiente y
preservativo
Cantidad
de muestra
HECES
FECALES
(continuacin)
Huevos, larvas y
quistes de parsitos
Frasco de 30 mi con 15 mi
de solucin de formaldehido
al 10% (reactivo No. 25)
Aproximadamente
5 mi
Amebas: formas
vegetativas
Anlisis bioqumicos:
glucosa, protenas,
acetona, etc.
20-50mi (segn
el nmero de
anlisis)
2 horas
Sedimentos
30 mi
2 horas
30 mi
2 das
ORINA
Duracin
Casi por
tiempo
indefinido
Casi por
tiempo
indefinido
Huevos de
esquistosomas
Para concentracin: 2 mi
de leja comercial y 1 mi
de cido clorhdrico
100 mi
Casi por
tiempo
indefinido
Cultivo de bacterias
Frasco estril
20 mi
1 hora
Prueba de embarazo
Frasco estril
20 mi (la primera
miccin del da)
12-24 horas
(o 4 das en
frigorfico)
Determinacin de
hormonas
Clculos urinarios
TEJIDOS DE
RGANOS
OBTENIDOS
PARA BIPSIAS
Exmenes histolgicos
PELOS, UAS,
TEJIDO CUTNEO
Bsqueda de hongos
(micosis)
Casi por
tiempo
indefinido
Por lo
menos una
semana (a
veces, ms)
73
EMPAQUETADO
Respete siempre los reglamentos en vigor en el pas.
Coloque las muestras en empaques dobles.
Las muestras se metern en frascos o tubos cerrados
hermticamente (fijando el tapn con cinta adhesiva).
Compruebe que el recipiente tenga una etiqueta con el
nombre del paciente.
74
Biopsia
Para diagnosticar algunas enfermedades de los rganos el mdico extrae un fragmento de tejido con una pinza
o un bistur especiales. Esta pieza de tejido se llama muestra de biopsia. Se examina al microscopio despus de
cortar una porcin delgada y tratarla con una tincin especial.
Histologa - Patologa
Las clulas de los tejidos y las muestras de bipsias de los rganos se pueden estudiar con el microscopio. El
examen microscpico de las clulas se llama histopatologa.
La patologa es el estudio de las modificaciones y deformidades de las clulas causadas por diversas enfermedades.
Los exmenes de este tipo pueden ser sumamente importantes, especialmente para el diagnstico del cncer.
El tcnico de laboratorio deber ser capaz de fijar la muestra de biopsia, y asegurar que se enve de la manera
apropiada y llegue al laboratorio de patologa en condiciones de conservacin satisfactorias.
A. FIJACIN DE MUESTRAS DE BIPSIAS
El fragmento de tejido se sumerje en un lquido fijador. Este procedimiento deber permitir que se conserve
hasta donde sea posible en condiciones semejantes a las del tejido vivo, protegindolo de la accin de las
bacterias, la autolisis, el encogimiento, etc.
El recipiente ms adecuado para esta clase de muestras es un frasco de material plstico, de boca ancha, con tapa
(frasco para tabletas). Se puede obtener en tamaos de 60 mi, 45 mi, 30 mi y 15 mi.
Fijadores
Los fijadores que se preparan ms fcilmente son:
Solucin salina de formaldehido (reactivo No. 25)
Fijador de Zenker (reactivo No. 61). Inmediatamente antes de usar este fijador aada 5 mi de cido actico
glacial por cada 100 mi de la solucin de Zenker.
2.
3.
Preparacin
Es esencial actuar rpidamente al recibir una
muestra de biopsia. Nunca se deje para despus.
Primero vierta el fijador en un recipiente.
A continuacin coja la muestra de biopsia con un
pedazo de papel duro (cartulina) (no use pinzas,
pueden daar el tejido).
Deposite la muestra en el recipiente.
Etiquetado
Corte un rectngulo pequeo (aproximadamente
de 3 x 1 cm) de papel duro. Con un lpiz de plomo
escriba en el papel el nombre del paciente, la fecha
en que se ha obtenido la muestra, etc. Pegue la
pieza de papel en el recipiente que contiene el
fijador.
^-^ t
W0
Tiempo de fijacin
El tiempo vara segn el fijador que se utilice. Con
los dos fijadores que se han mencionado pueden
transcurrir de 24 a 48 horas antes de que la muestra
se corte y tina, aunque se puede dejar en el lquido
por lo menos durante una semana. El material ya
fijado se debe enviar al laboratorio de patologa sin
tardanza, aunque un transporte prolongado no
daar a las muestras.
5.
Envo
Asegure la tapa o el tapn del recipiente con cinta
adhesiva.
Coloque el recipiente en un tubo o una caja de
metal, junto con el informe correspondiente
(nombre, fecha, enfermedad sospechada, tipo de
tejido que se enva, investigacin que se solicita).
A continuacin ponga el tubo o la caja con el
informe en un estuche pequeo de madera o cartn,
rellene el espacio vaco con algodn no absorbente
y envelo inmediatamente.
iiimiMin:
'Uiiiiiiniii
3.
Corte
El bloque en que se ha incluido el tejido se corta
en secciones suficientemente delgadas para poderlas
examinar con el microscopio.
El instrumento que se utiliza para hacer estos
cortes se llama " m i c r o t o m o " y con l se pueden
obtener las secciones sumamente delgadas que se
necesitan.
El espesor promedio de los cortes es de 3-5/m
(micrometros).
4.
Tincin
Los cortes se colocan en portaobjetos y se secan,
la parafina se desprende aplicando un solvente
(por ejemplo, xilol). A continuacin los cortes
se deshidratan y tien. Existen varios tipos de
tincin; el patlogo elige, segn la naturaleza de
la muestra y la enfermedad que se sospecha.
78
DE LEUCOCITOS
DE ERITROCITOS
DE CLULAS EPITELIALES
Y TIPO DE MICROORGANISMOS
REGISTRO DE HEMATOLOGIA*
Fecha
No.
Paciente
Enviado
por
Hb'
(9/1)
Eritrocitos
Fracc. Veloc. de
de vol. sedim.
(mm/h)
Cone. de
No.
(x 1012/l)
Morfologa
23
Aniso ++
Poiq +
Poli++
124
Aniso ++
Poiq++
Hipo++
Poli +
Ene. 1
MJ...R
DrR.
Ene. 1
KA...S
Consulta 58
externa
0,21
52
Ene. 1
Kl...A
Salal
117
125
Fracc. de
No.de
retic.6
Cone. med
de Hb en
eritr. (g/l) c
Leucocitos
Fraccin de nmero de los tipos
Paludismo Ot ras
prueoas
Resultados
enviados
en (fecha)
Cone. de
No.
(x107l)
Neut. Linf.
Mono.
Eos.
4,2
0,48
0,35
0,13
0,04
Numerosos
trofs. de
P.falciparum
Ene. 1
71
276
5,7
0,32
0,56
0,04
0,08
N a moderado
de trofs. de
P.falciparum
Ene. 1
Otros
Ene. 1
* Para obtener una explicacin de los encabezados de los cuadros y columnas vanse las secciones correspondientes del texto. En estos encabezados el uso de abreviaturas se ha impuesto por la falta
de espacio y no se debe tomar como recomendacin de que se haga lo mismo en la prctica.
La hemoglobina tambin se puede expresar como concentracin de sustancia; as, el encabezado de la columna sera "Hb(Fe) (mmol/l)". En este caso los valores que se indican en los ejemplos
(Nos. 1 y 2) seran 7,3 y 3,6, respectivamente.
En este ejemplo los reticulocitos se expresan como fraccin de nmero. Tambin se pueden expresar como concentracin de nmero, o sea su nmero por litro. As, el encabezado de la columna
sera "concentracin de nmero de reticulocitos (x lO'/O" y las cifras dependeran de las concentraciones de nmero de los eritrocitos (que no se indican en los ejemplos puestos en este cuadro).
c
La concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos tambin se puede expresar como concentracin de sustancia; de este modo el encabezado de la columna sera "Conc. med. Hb(Fe) eri.
(mmol/l)". En este caso, el ejemplo que se cita (No. 2) tendra un valor de 17,1.
(O
Fecha
No.
Paciente
Enviado por
Urea (mmol/l)
Glucosa
(mmol/l)
Ene. 1
KI...A
Salal
12,8
Ene. 1
Ene. 1
MJ...A
DrG.
5,3
Ene. 1
Otras pruebas
Resultados
enviados en
(fecha)
Nmero
Nombre
del
paciente
Enviado por
Grupo
ABO
Rhesus
AntiB
AntiAB
AntiD
Clulas
A
Clulas
B
Clulas
0
1 Enero
CH...P
Sala 6
A Pos.
1 Enero
MJ...A
SalaS
BPos.
1 Enero
KI...T
Sala 2
OPos.
1 Enero
SI...P
Sala 6
AB Pos.
Nmero
Nombre
del
paciente
Enviado
por
Densidad
relativa
PH
Examen directo
1 Enero
MO...C
DrR.
1.008
7,0
1 Enero
LA...B
Sala md. 2
1,012
6,8
EXAMEN DE LIQUIDO CEFALORRAQUDEO (en el registro del anlisis de orina o por separado)
Fecha
Nmero
Nombre
del
paciente
Enviado
por
Aspecto
microscpico
Examen microscpico
directo
2 Enero
FE...W
DrG.
Turbio
17 Enero
LE...E
DrC.
Claro
80
Grupo del
donador
No. del
frasco del
Cantidad
cotejada
Pruebas cruzadas
Prueba de hemollsina
para donadores
GPO
Salina
Albmina
Auto
salina
Auto
albmina
Firma
A Pos.
540 mi
BPos.
250 mi
OPos.
540 mi
OPos.
540 mi
Azcar
(glucosa)
Protena
Pigmentos
biliares
Urobilingeno
Cetonas
Prueba
qumica de
la sangre
Otros (prueba
de embarazo,
etc.)
Resultados
enviados en:
(fecha)
Neg.
Neg.
1 Enero
+++
Neg.
Positiva
1 Enero
Leucocitos
(x lO'/l)
Glucosa
(azcar)
mmol/l
Total de
protenas g/l
Prueba de
Pandy de las
globulinas
Otros
Resultados
enviados en:
(fecha)
30
1.5
0,45
Neutrfilos 0,94,
Linfocitos 0,06
2 Enero
3,3
0,25
Neg
17 Enero
81
Grupo sanguneo
Hemoglobina
(g/D
Nmero del
donador
1 Enero
DO...M
A Pos.
141
2 Enero
LO...F
A Pos.
132
2 Enero
FE...W
BPos.
129
4 Enero
CH...A
OPos.
133
REGISTRO DE BACTERIOLOGIA
Fecha
Nmero
Nombre del
paciente
Enviado por
Muestra
Examen
solicitado
Resultados
Resultados
enviados en:
(fecha)
1 Enero
AL...J
Dr R.
Esputo
Frotis para
BT
No hay bacilos
acidorresistentes
1 Enero
1 Enero
RE...A
Sala Md. 2
Pus de
herida
Tincin de
Gram
Abundantes leucocitos;
escasos erit.; escasas clulas
epiteliales; cantidad moderada
de bacilos gramnegativos
1 Enero
1 Enero
TO...L
Consulta
Externa
Pus
uretral
Tincin de
Gram
1 Enero
2 Enero
Pozo de
la Calle 3 a
IB Sanitario
Agua
Bacteriol.
Enviados al Laboratorio
Regional de Salud Pblica
2 Enero
2 Enero
AM...C
DrB
Esputo
Frotis para
BT
No se observan bacilos
acidorresistentes
2 Enero
3 Enero
LA...R
Sala Md. 1
LCR
Tincin de
Gram
3 Enero
82
REGISTRO DE PARASITOLOGIA
Fecha
Nmero
Nombre del
paciente
Enviado por
Muestra
Examen
solicitado
Resultados
Resultados
enviados en:
(fecha)
1 Enero
CR...M
DrA
Heces
Parsitos
1 Enero
2 Enero
RA...B
DrC
Heces
Parsitos
Directo: No se observan
huevos ni parsitos. Conc:
No se observan huevos
ni parsitos
1 Enero
2 Enero
NE...L
Sala Md. 1
Piel
Onco.
No se observan parsitos
2 Enero
2 Enero
MO...T
DrR
Heces
Parsitos
2 Enero
REGISTRO DE SEROLOGIA
Fecha
Nmero
Nombre del
paciente
Enviado por
Muestra
Examen
solicitado
Resultados
Resultados
enviados en:
(fecha)
1 Enero
LA...P
Clnica prenatal
Sangre
VDRL
Sin reaccin
1 Enero
1 Enero
RO...M
Clnica prenatal
Sangre
VDRL
Sin reaccin
1 Enero
1 Enero
ME...R
Clnica prenatal
Sangre
VDRL
Sin reaccin
1 Enero
1 Enero
LE...T
Clnica prenatal
Sangre
VDRL
Reaccin al 1:8
1 Enero
1 Enero
BI...N
DrM
Sangre
VDRL
Sin reaccin
1 Enero
1 Enero
ST...C
DrL
Sangre
i VDRL
Sin reaccin
1 Enero
1 Enero
HA...J
Consulta
Externa Dr A
Sangre
j VDRL
Sin reaccin
1 Enero
4 Enero
MA...S
Clnica prenatal
Sangre
] VDRL
Sin reaccin
4 Enero
83
C.
EL INFORME MENSUAL
Al final del mes el laboratorio presentar un informe al director de los servicios centrales de laboratorio o, si esta
posicin no existe, elevar el informe al Departamento de Salud Pblica a nivel provincial y central.
Valor del informe mensual:
(a) Ayuda a llevar cuenta de las actividades de los laboratorios y es provechoso para conseguir el personal
adecuado, solicitar suministros a los expendios centrales y elaborar el presupuesto de los servicios de
laboratorio en el plano nacional. Los informes que se basan en el nmero de pruebas realizadas son los ms
convenientes para la administracin de los laboratorios.
(b) Es de gran ayuda para la supervisin de la salud pblica en el rea que abarca el laboratorio, ya que notifica
el nmero de resultados positivos concernientes a diversas enfermedades transmisibles.
A continuacin se proporciona un ejemplo de informe mensual.
LABORATORIO
MES TERMINADO EL
LABORATORIO
1.
1235
27
34
38
287
43
17
3
3
162
802
2 (tripanosomas
en ganglios
linfticos)
Bacteriologa:
tinciones de Gram
tinciones A-F
tinciones de Wayson
micologa
Serologa:
V D R L : cualitativo
cuantitativo
2.
63
41
11
3
114
16
8
32
0
2
0
Exmenes bacteriolgicos
Gonorrea
Lepra
Peste infecciosa
Tuberculosis
2.
11
0
0
7
Exmenes parasitolgicos
Amebiasis
Ascaridiasis
Filariasis
Ancilostomiasis
Paludismo
Oncocercosis
Esquistosomiasis
14
. 22
1
80
253
0
2
"La lista de enfermedades de notificacin obligatoria vara de un pas a otro. Las autoridades centrales de salud pblica la formulan
teniendo en cuenta:
(a) Los reglamentos internacionales para la notificacin de enfermedades transmisibles
(b) Las enfermedades prevalecientes en el rea.
84
A. ALMACENAMIENTO
1.
Utensilios de vidrio
Gurdense los utensilios de vidrio en los anaqueles
de un armario, protegidos del polvo. Los matraces
de Erlenmeyer y los de fondo redondo se deban
taponar con algodn no absorbente o cubrir con
papel de estraza (o, de preferencia, con hojas
delgadas de parafina encerada o material plstico
adherente, como Parafilm o Sarn, si se cuenta con
ellos) y ordenarlos por tipos y tamaos. Las pipetas
graduadas se guardarn en gavetas (cajones) divididas
en secciones.
Instrumentos pesados
Algunos instrumentos, como los espectrofotmetros, se conservarn en una habitacin provista de un sistema
de enfriamiento de aire si el clima es clido y hmedo. Para guardar los microscopios consltense las pginas
24 y 25.
FICHA DE EXISTENCIAS
Articulo: Tincin de Giemsa (frasco con 250 mi)
PEDIDO A
Articulo No. 24
RECIBIDO
PEDIDO
Fecha
Cantidad
Fecha
Cantidad
DESPACHADO
Fecha
EN
EXISTENCIA
Cantidad
2 frascos
1 mayo
15 junio
2 frascos
2 frascos
20 mayo
lOsept.
3 frascos
1 frasco
2 frascos
10 julio
1 frasco
2 frascos
3 sept.
1 frasco
1 frasco
3 frascos
85
2.
Inventaro
Cada 6 meses se har un inventario de todos los suministros del laboratorio. Deber contarse la cantidad o los
nmeros de los artculos que se tengan en existencia y se comprobar que la cifra corresponde a la que figura
en la columna "Existencia" de la ficha.
C. PEDIDO DE SUMINISTROS
Un laboratorio adecuadamente organizado har un pedido de suministros a los expendios centrales cada 3
meses. Para elaborar cada pedido examnense las fichas de existencias, una por una.
Es ms fcil calcular las cantidades que se necesitan si en la parte inferior de cada ficha de existencias se
aade un cuadro como el siguiente:
CANTIDAD USADA
POR MES
Enero
Febrero
Marzo
Abril
Mayo
Junio
Julio
Agosto
Sept.
Octubre
Nov.
Dic.
19...
19...
19...
En el caso de las sustancias qumicas, las tinciones y los reactivos, pdanse las cantidades que se suelen usar en
3 meses, tomando en cuenta cualesquiera aumentos o disminuciones recientes en tales cantidades. Por ejemplo:
En un ao se han usado 8 frascos de tincin'de Giemsa
Esto equivale a una medida de 2 frascos cada 3 meses
Pdanse 2 frascos cada 3 meses ( 4 frascos cada 6 meses si los pedidos se elaboran dos veces al ao).
Fechas de vencimiento
Algunos reactivos (antisueros para grupos sanguneos, V D R L y otros antgenos, etc.) se deben emplear antes de
que se cumplan sus fechas de vencimiento. Antense las fechas de vencimiento en las fichas de existencias.
86
No es esencial que exista un suministro exterior de energa elctrica en el laboratorio perifrico; casi todas las
tcnicas que se describen en este manual se pueden llevar a cabo prescindiendo de tal suministro y utilizando
equipo que se haga funcionar por medio de pilas elctricas o gas. Sin embargo, si el laboratorio cuenta con un
suministro exterior de corriente se podr emplear el equipo siguiente, que es sumamente provechoso:
Una lmpara elctrica para el microscopio (la iluminacin estable facilita los ajustes).
Una centrfuga elctrica (que es mucho ms rpida que la de tipo manual).
Una centrfuga para microhematocrito (deteccin rpida de la anemia).
Un espectrofotmetro o colormetro (para efectuar determinaciones de hemoglobina mucho ms exactas).
Un esterilizador elctrico, un baomara, etc.
Es posible que en el laboratorio sea necesario llevar a cabo conexiones o reparaciones sencillas. Las explicaciones
que se exponen a continuacin tienen por objeto ayudar al tcnico laboratorista a realizar estas tareas y se
limitan a los pasos que se deben dar en cada caso. Se recomienda que las personas inexpertas acten en un inicio
acompaadas por un instructor.
NOTA: En numerosos pases el equipo elctrico es diferente del que aqu se describe, que solo se ha escogido
como ejemplo para ilustrar los principios bsicos.
El botn y el interruptor que indican " A P A G A D O " tambin pueden abrir el circuito automticamente, cortando
la corriente cuando ste se encuentra sobrecargado. Cuando as ocurra, oprima el botn verde o conecte de
nuevo el interruptor para restablecer la corriente despus de haber averiguado y corregido la causa de la falla que
produjo la interrupcin.
Voltaje
Confirme que el voltaje que se indica en el
instrumento es el mismo que hay en el suministro
externo de electricidad. En algn sitio del nuevo
instrumento habr un letrero que indique el voltaje
que se debe usar. El voltaje del suministro externo
se indica en el c ontador.
2 2 0 - 24,0.
f^ )
(L-)
n /?,
eg
88
4.
Si el instrumento se ha construido para emplearlo con un voltaje diferente al del circuito del laboratorio, se
deber usar con un transformador. Por ejemplo:
la centrfuga adquirida solo funciona con 110 V
el voltaje del suministro de electricidad es de 220 V
obtngase un transformador de 110 V 220 V, indicando los vatios de la centrfuga.
los fusibles
el enchufe que se encuentra en el extremo del cable
el cable
el contacto de pared
el voltaje del instrumento y el del circuito.
Herramientas tiles
un destornillador
pinzas para cortar alambre
alicates de picos chatos o piramidales
alambre para fusible
diversos accesorios (enchufes, interruptores, etc.)
1. Cambio de fusible
Levntese la tapa de la caja del fusible.
Si el fusible es de tornillos, el alambre se encontrar
extendido entre dos de ellos. Si el alambre se ha roto
o fundido la corriente elctrica no podr pasar; el fusible
se ha quemado. Afljense los dos tornillos. Qutese el
alambre averiado.
Sustituya el alambre averiado con alambre nuevo para fusible, del mismo calibre (grosor), o ms delgado si no
se consigue alambre del mismo grosor. Monte el alambre dndole forma de " S " , con una vuelta en cada extremo.
Si el fusible es de tornillos (vase la ilustracin anterior), el alambre deber pasar debajo de las pequeas arandelas
protectoras.
m y^-^
^ iiiOiss;
m
m
%
2.
El enchufe
>
*
>
(a)
(b)
Interruptores
Existen muchos tipos diferentes de interruptores.
Si se desea confirmar que funcionen adecuadamente
se deben desatornillar y abrir. Cercirese de que los
dos alambres del cable de entrada y los dos de salida
se encuentren firmemente montados en sus
respectivas terminales por medio de los tornillos
1,2, 3 y 4.
Extensin
Una extensin es un cable provisto de un enchufe
macho (M) en un extremo y una entrada hembra (H)
en el otro. La entrada hembra se conecta al cable
principal por medio de dos terminales que posee
en su interior, exactamente igual que el enchufe
macho normal.
4. Contactos de pared
Para revisar un contacto de pared enchfese una lmpara que se encuentre en buenas condiciones de funcionamiento. Algunos contactos estn provistos de un pequeo fusible que se puede sustituir. En caso contrario
conviene conseguir un electricista para reparar el contacto de pared.
92
c.
ppppE
2.
Nunca toque los equipos elctricos con las manos hmedas (el agua es un conductor excelente de la
electricidad.
3.
Nunca enchufe una pieza nueva de equipo elctrico en los contactos de pared sin haber ledo antes la
laminilla correspondiente para tener la seguridad de que el voltaje que se indica en ella es igual al del circuito
del laboratorio (110 V, 220 V, etc.).
4. Nunca desconecte un enchufe tirando del cable.
5.
Nunca sustituya el alambre para fusible que est fundido con alambre de mayor grosor.
93
Los defectos en la fontanera del laboratorio (un grifo que gotea, un vertedero obstruido, etc.) pueden afectar
el trabajo considerablemente. A continuacin se describen algunos procedimientos simples para resolver estos
problemas cuando no se pueda conseguir fcilmente un fontanero.
A.
MATERIALES
B. EL GRIFO DE AGUA
Componentes del grifo
El grifo consta de dos partes:
el cuerpo (C) por el que fluye el agua
la llave (L) que regula el flujo de agua por medio de
una arandela de goma (A).
Entre el cuerpo y la llave existe una juntura (J) de goma
o fibra.
1.
31
KSiSipSivSil
liilii
iiilil
:;
^ | itf:
"T 1
mmm ms&&
11
95
96
97
ACCIDENTES EN EL LABORATORIO
En el laboratorio mdico los accidentes pueden ser causados por:
1.
2.
cidos
o
Alcalis
que salpican la piel
que salpican los ojos
que se ingieren involuntariamente.
3. Sustancias txicas
4.
Calor
llamas descubiertas
lquidos calientes
lquidos inflamables
explosiones.
5. Vidrios rotos
Adems de estos accidentes pueden ocurrir heridas debidas a materiales infectados, lesiones en el organismo por
choques elctricos, etc.
3.
Ingestin de cidos
Al usar una pipeta se pueden ingerir cidos accidentalmente:
(a) Llmese un mdico.
(b) Haga que el paciente beba inmediatamente cierta cantidad de la solucin jabonosa al 5% (o bien haga que
ingiera dos claras de huevo mezcladas con 500 m! de agua o leche). Si no se cuenta con estos recursos el
paciente deber beber agua corriente.
(c) Iridquese al paciente que haga grgaras con la solucin jabonosa.
(d) Adminstrense al paciente 3 4 vasos de agua corriente.
(e) Si el cido ha quemado los labios y la lengua:
enjuagense profusamente con agua
humedzcanse con solucin acuosa de bicarbonato sdico al 2%.
Las quemaduras por lcalis son tan peligrosas o ms que las producidas por cidos.
Ingestin de lcalis
Al usar una pipeta se pueden deglutir lcalis accidentalmente:
(a) Bsquese un mdico.
(b) Hgase que el paciente beba inmediatamente:
solucin de cido actico al 5% (o bien, zumo de limn o vinagre diluido, a razn de una parte de
vinagre por cada tres partes de agua).
(c) Indquese al paciente que haga grgaras con la misma solucin de cido actico.
(d) Adminstrense al paciente tres o cuatro vasos de agua corriente.
(e) Si el lcali ha quemado los labios y la lengua:
enjuagense profusamente con agua
humedzcanse con cido actico al 5%.
99
Intoxicaciones
Las intoxicaciones pueden ocurrir por:
inhalar vapores o gases txicos (por ejemplo, cloroformo)
deglutir accidentalmente una solucin txica que se est aspirando con una pipeta.
En todos los casos:
(a) Solictense los servicios de un mdico o una enfermera experta, especificando la sustancia txica de que se
trate.
(b) Coloqese la vctima al aire libre mientras se espera al mdico.
Quemaduras graves
(a) Si la vctima est envuelta en llamas (por ejemplo, cuando se ha salpicado con ter u otro solvente
inflamable que se encuentre en combustin), cbrase rpidamente con una frazada (manta, cobertor) o
un sobretodo para aminorar el fuego.
(b) Infrmese inmediatamente al mdico que se encuentre de guardia en el departamento de urgencias,
explicando con claridad que hay un paciente con quemaduras graves que debe ser atendido.
(c) Acustese la vctima en el suelo. No se quiten sus ropas. Cbrase la vctima si siente fro.
(d) No se aplique tratamiento alguno a las quemaduras; esto deber quedar a cargo del mdico.
2.
Quemaduras menores
(a) Sumrjase la parte afectada en agua fra o helada para mitigar el dolor.
(b) Apliqese mercurocromo (o tintura de yodo) a la quemadura.
(c) Coloqese un vendaje de gasa seca, sin apretarlo.
(d) Si la quemadura se infecta o no cura, envise el paciente a un mdico. Nunca se rompan las ampollas
que se forman en las quemaduras.
100
3. Lquidos
inflamables
En el laboratorio solo se deben conservar cantidades reducidas de lquidos inflamables, como ter, etanol,
acetona, benceno, tolueno y bisulfuro carbnico.
ADVERTENCIA:
El ter puede incendiarse aunque se encuentre a varios metros de distancia de una llama.
Nunca coloque un frasco con ter sobre una mesa de trabajo en que haya una llama descubierta (mechero
Bunsen, lmpara de alcohol, etc.). El bisulfuro carbnico es an ms peligroso.
4. Gas butano
Para encender un mechero de gas prndase primeramente un fsforo y apliqese al mechero, abriendo a
continuacin la llave del gas. Cada noche se cerrarn las vlvulas principales de todos los depsitos de gas
butano. Se cambiarn las conexiones de goma una vez al ao.
El ptano que figura en esta pgina indica la distribucin de espacio de un laboratorio mdico perifrico anexo
a un centro de salud. Corresponde a una instalacin en que se puedan llevar a cabo algunas o todas las tcnicas
que s describen en este manual. Se limita a una habitacin, ya que, con frecuencia, ste es todo el espacio de
que se dispone para el laboratorio. La habitacin deber medir, por lo menos, 5 x 6 m.
Asientos para
pacientes
Si se cuenta con dos habitaciones se recomienda que el servicio de transfusin sangunea se organice en la
segunda. Si no existe este servicio, la segunda habitacin se podr utilizar para lavabos y esterilizaciones. ILos
materiales sucios y contaminados se debern eliminar del lugar de trabajo del laboratorio con toda la rapidez
posible afin de proteger la salud de los operadores y evitar confusiones o contaminaciones cruzadas.
102
En esta figura se indica otra distribucin para la instalacin de un laboratorio perifrico. Es evidente que se
modificar segn las circunstancias.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
Balanza
Cubeta para tinciones
rea de esputo
Mechero Bunsen
Fregaderos
Clavijas para secado
Vertedero de desechos
Cama para donadores de sangre
Registros
rea de preparacin de heces fecales
rea de preparacin de orina
Recibo de muestras
Cilindro de gas
103
I.
INSTRUMENTOS DE LABORATORIO
A. Artculos esenciales
1. Microscopios
Un microscopio con tubo binocular inclinado, platina mecnica, 3 objetivos (x 10, x 40, x 100), oculares
(x 5, x 10), condensador y espejo planocncavo. Si existe suministro de electricidad, una lmpara
elctrica de microscopio, que se usar en los ensayos de hematologa.
Un microscopio con tubo monocular inclinado y los accesorios que se han indicado anteriormente, que
se emplear en las dems secciones del laboratorio (parasitologa, anlisis de orina, bacteriologa, etc.).
Si el laboratorio se encuentra en un centro de salud, un microscopio monocular ser suficiente.
2.
Centrfugas
Una centrfuga elctrica con aditamento especial para microhematocrito en el cabezal y cuadrante
indicador.
Una centrfuga manual con cuatro cubetas.
3. Balanza
Si los reactivos se han de elaborar en el laboratorio, se necesitar una balanza analtica. Accesorios: un juego
de pesas.
4.
Frigorficos
Siempre que se establezca un servicio de transfusin sangunea se deber contar con un frigorfico exclusivo
para tal servicio. Otros reactivos ( V D R L , pruebas de embarazo, etc.) y materiales (algunos medios de
transporte, muestras, etc.) se podrn conservar en un compartimiento del frigorfico del hospital o centro
de salud.
5.
6.
7. Contador diferencial
Si bien se puede utilizar una tarja manual para recuentos, con un contador diferencial se ahorra tiempo y se
logra mayor eficiencia.
8.
Fotmetro o colormetro
Son necesarios para realizar ensayos de qumica sangunea y determinaciones precisas de hemoglobina.
La UNICEF proporciona un modelo alimentado por pilas elctricas (ref. 09-309 98, 09-310-00).
B. Artculos adicionales
1. Autoclave
Si el laboratorio se encuentra instalado en un hospital, se podr utilizar el servicio de esterilizacin de ste.
Si se halla en un centro de salud, se necesitar uno de los esterilizadores siguientes:
una olla de presin
un autoclave pequeo (elctrico o calentado en estufa de aceite o gas butano).
2.
104
3. Balanzas
Si es necesario que el laboratorio elabore cierta variedad de reactivos, se deber adquirir una balanza de dos
platillos con el correspondiente juego de pesas.
4. Desionizador o retorta para preparar agua destilada
El desionizador es un aparato para desmineralizar agua por medio de cartuchos de resinas de intercambio
inico (vase la pgina 59).
En lugar de un desmineralizador se puede utilizar una retorta. La UNICEF suministra un modelo (ref.
01-680-02) construido con acero inoxidable y, por lo tanto, sumamente duradero.
Si todos los reactivos que se obtienen estn listos para usarse o se cuenta con agua destilada, este tipo de
artculo se puede excluir de esta relacin.
II. EQUIPO PARA LA OBTENCIN DE MUESTRAS
Jeringas graduadas, de 20 mi
Jeringas graduadas, de 10 mi
Jeringas graduadas, de 5 mi
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 18G (1,2 mm) x 40 mm
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 19G (1,0-1,1 mm) x 40 mm
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 20G (0,9 mm) x 40 mm
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 22G (0,7 mm) x 40 mm
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 23G (0,6 mm) x 32 mm
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 25G (0,5 mm) x 16 mm
Tubo de goma para aplicar torniquetes, calibre 2-5 mm
Lancetas para extraer sangre capilar
Algodn blanco, absorbente
Algodn blanco, no absorbente
Frascos de inyecciones ( 5 , 1 0 , 20 mi) que hayan contenido antibiticos, reactivos, etc
Equipo adicional conveniente
Agujas estriles, desechables, para extraer sangre
Agujas con retn, 18G
Lancetas estriles, disponibles, para extraer sangre capilar
Bistur' de hojas desechables (para lepra)
Pinzas curvas, sin dientes (para lepra)
Cajas desechables, de material o cartn, para recoger muestras
Aplicadores de madera (12cm x 1 mm) (se pueden fabricar en el laboratorio)
Frascos de 2,5 mi y 5 mi, preferiblemente de material plstico
Frascos de vidrio blanco, de boca amplia, de 50 m i , con tapa de rosca
y arandela de goma, para recoger esputo
Frascos de vidrio blanco, de 25 mi, con tapa de rosca y arandela de
goma, para recoger diversas muestras
Frascos de boca amplia, de todas variedades, para recoger orina
Pinzas de sacabocado para bipsias de piel (para oncocercosis)
Abatelenguas de madera
2
10
20
6x12
6x12
2x12
6x12
2x12
3x12
2 piezas
10x12
2 x 500 g
2 x 500 g
cuantos sea
posible
las necesarias
12
las necesarias
1
1
500
500
50
25
25
20-40
1
50
I I I . UTENSILIOS DE V I D R I O
Varillas de vidrio slido, de 6 mm de dimetro
Vasos para anlisis, de fondo plano:
de material plstico, de 50 mi
de material plstico, de 100 mi
de material plstico, de 250 mi
Cubetas para tincin, rectangulares, para 20 portaobjetos
Embudo de vidrio, de 60 mm de dimetro
Embudos de vidrio, de 90 mm de dimetro
Embudo de material plstico, de 200 mm de dimetro
Probetas graduadas, de vidrio, con tapn:
- de 25 mi
de lOOml
de 250 mi
de 500 mi
de lOOOml
Matraces de Erlenmeyer, de boca amplia, vidrio Pyrex, 250 mi
Matraces de Erlenmeyer, de boca amplia, vidrio Pyrex, 500 mi
Frascos goteros de material plstico o vidrio, de 100 mi
Frascos goteros de vidrio color mbar, 100 mi
Frascos para reactivos, de material plstico o vidrio:
- de lOOml
- de500ml
- de lOOOml
3
4
4
4
4
1
2
1
3
3
2
1
1
3
2
12
3
20
10
10
105
4
2
2
1
2 x 1000
20 x 100
2
2
2
12
10
10
6
2 x 144
50
100
20
40
6
1 kg
Otros artculos
Placas de Petri, de vidrio:
de 112 mm de dimetro
de 156 mm de dimetro
Platos para evaporacin, de 75 mm (75 mi)
Para ensayos del V D R L :
frascos de vidrio claro, de 30 mi, con tapn de vidrio esmerilado,
de 35 mm de dimetro, con fondo plano
pipetas graduadas hasta el extremo inferior: de 1 mi (divididas en 0,1 mi)
de 0.2 mi (divididas en 0,05 mi)
4
4
2
3
5
30
30
20
3
1
12
1
30
2
1000
1 juego
(10 bandejas)
300
30
3
106
1 metro
4
1
1 juego
4
4
2
2
1
los necesarios
1
1
3
6
1
12
12
1
12
3
2
3 rollos
3 rollos
1000
las necesarias
V I I I . DIVERSOS
Cronmetro de 0-60 minutos, con campanilla
Lmpara de alcohol
Martillo
Alicates
Alicates de electricista
Destornilladores (pequeo, mediano, grande)
Sierra metlica obtusa, de 5 mm
Sierras pequeas, para ampolletas
Cacerola de 30 cm, de fondo plano, con tapa
Calorfero porttil de gas
Mortero y mano (lOcm)
Palanganas de material plstico, de 50 x 30 cm
Cubeta de material plstico, de 12 litros
Pera de goma (para limpiar las pipetas)
Tijeras (mediana, grande)
Bomba de vaco, metlica
Termmetro de 0-100 o C
Tapones de goma
Tapones de corcho
Sacacorchos
Cepillos para limpiar tubos de ensayo y frascos (varios tamaos)
Filtro de papel de 15 cm. No. 1
Papel para pH, de graduacin estrecha (6, 8-7, 2)
Papel para pH, de graduacin amplia (0-12)
Papel de tornasol
Papel para lentes
Papel higinico
Toallas y trapos limpios
Aceite de inmersin
1
1
1
1 par
1 par
3
1
12
1
1
1
3
1.
1
2
1
1
1 juego
1 juego
1
6
4 cajas
6 cuadernos
6 cuadernos
6 frascos
2 paquetes
2 rollos
los necesarios
6 frascos
(de 10 mi cada
uno)
SEGUNDA PARTE
A. PARASITOLOGIA
Introduccin
,;H
w ::\>\
112
1.
EXAMEN PARASITOLGICO
2.
EXAMEN BACTERIOLGICO
3.
EXAMEN QUMICO
1.
suficiente
(c)
(d)
114
Nunca deje las muestras de heces expuestas al aire en recipientes sin tapa.
2.
3.
4.
Nunca coloque el recipiente que contiene la muestra de heces sobre la plantilla de solicitud de examen.
Para la recoleccin de muestras de heces con preservativos para exmenes bacteriolgicos (cultivo del vibrin del
clera o de otras bacterias causantes de disentera) vase la pgina 268.
MATERIALES
Portaobjetos para microscopio
Cubreobjetos de 20 mm x 20 mm
Aplicadores de madera o asas de alambre (alambre
de aleacin de nquel y cromo, de 0,46 mm)
Lpices de cera o grasa
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
Solucin yodada de lugol (reactivo No. 35), diluida
5 veces.
MTODO
1.
;
En un portaobjetos coloqese:
1 gota de solucin de cloruro sdico, en la mitad
del lado izquierdo
1 gota de solucin yodada en la mitad del lado
derecho.
2.
3.
6.
fc
8.
118
Principio
Los huevos de oxiuros (Enterobius vermiculars) se
suelen recoger (en especial en nios) en los pliegues de la
piel que rodea el ano. Raras veces se hallan en las
materias fecales.
MATERIALES
Cinta adhesiva de celofn
Una cucharilla de 10 cm de longitud o, mejor an,
un abatelenguas de madera
Un portaobjetos
Microscopio
MTODO
1.
2.
4.
5.
Coloque de nuevo la cinta de celofn sobre el portaobjetos, con el lado adhesivo hacia abajo.
7.
120
8.
2.
150/im
oval
envoltura externa delgada y turgente;
envoltura interna delgada, membranosa
y menos notable
1 embrin ciliado
amarillo plido
1 espoln lateral
^QQQ de 1 mm
NOMBRE COMN
(espaol)
Ancilostoma
Lombriz
Oxiuro
Uncinaria
Esquistosoma
Esquistosoma
Esquistosoma
Esquistosoma
vesical
rectal
oriental
intestinal
Tenia, solitaria
Tenia, solitaria
Tricocfalo
123
Envoltura (con.
pared simple)
Embrin ciliado
Embrin
Espoln
lateral
Oprculo
Cilios
Envoltura interna
Envoltura externa
Espcula
(botn o giba)
Membrana
(envoltura interna)
Garfios
(estructuras que
refractan la luz y
brillan con ella)
Envoltura externa
1 fim (micrmetro)
124
1000
de 1 milmetro
Huevo simtrico
Huevo asimtrico
Gua para la identificacin de los huevos de helmintos ms frecuentes en las regiones tropicales
pequeos,
<35iim,
con larvas
desarrolladas
huevos con
3 pares de
garfios
sin larvas
ciliadas, ni
espoln
ni botn
envoltura doble;
envoltura externa
de color pardo
oscuro
huevos
sin garfios
envoltura delgada,
clara, transparente
elipsoidales, con
2 tapones polares;
envoltura lisa
125
Pases
clidos
Ancilostoma
1.
Ancylostoma duodenale
Tamao:
Forma:
Envoltura:
Color:
Contenido:
50-60 jum
oval, con polos redondos y ligeramente
aplanados (con frecuencia, un polo es
ms plano que el otro)
sumamente delgada; se observa como
una lnea oscura
las clulas que hay en su interior son de
color gris plido (la solucin de yodo
las tie de pardo oscuro)
vara segn el grado de maduracin.
B
Tipo B (en heces fecales de algunas horas):
Masa uniforme compuesta por numerosas clulas
granulosas de color gris.
126
2. Ascaris lumbricoides
Existen cuatro tipos de huevos de scaris:
A. Huevos fecundados, con envoltura doble
B. Huevos no fecundados, con envoltura doble
C. Huevos semidecorticados, fecundados (menos
frecuentes)
D. Huevos semidecorticados, no fecundados
(sumamente raros).
Lombriz
(Ascaris)
Todo el
mundo
A. Huevos
Tamao:
Forma:
Envoltura:
127
3.
Clonorchis sinensis
Tamao:
Forma:
Envoltura:
Oprculo:
Giba:
Contenido:
Color:
Asia
25-30 ixm
Todo el
mundo
4.
Tamao:
Forma:
Envoltura:
Oprculo:
45-50 /um
oval, ms bien asimtrica
gruesa y lisa, de color amarillo, anaranjado
o ligeramente pardo
fcilmente visible (0).
Especialmentei
pases fros
5.
Diphyllobothrium I atum
Tamao:
Forma:
Envoltura:
Oprculo:
Giba:
Contenido:
Color:
128
70 /m
oval, uniforme
lisa y delgada
difcilmente visible cuando no se encuentra
levantado
sumamente pequea, situada en el extremo
opuesto al del oprculo
una masa de clulas pequeas ordenadas
alrededor de una clula central voluminosa
amarillo plido.
6.
Todo el
mundo
Dipylidium caninum
N**
Oxiuro
7.
Enterobius vermicularis
Tamao:
Forma:
Envoltura:
Contenido:
Color:
5060 /im
oval, aunque claramente asimtrica (plana
en un lado y redonda en el otro)
lisa y delgada, pero se puede observar una
lnea doble
puede ser una masa granulosa pequea (A)
de forma oval irregular, o el embrin del
helminto (B), que es una pequea larva
enroscada
incoloro, transparente.
8.
Tamao:
Forma:
Envoltura:
Contenido:
Color:
Otros
caracteres:
F. heptica: ISOjum
F. gigantica: 150 fim
oval, con polos redondeados
lisa y suave, con una lnea doble
una masa de clulas voluminosas, difciles
de distinguir, cuyos ncleos son claros y
granulosos (ajstese el tornillo del microscopio para cambiar el enfoque)
vara entre el amarillo y el pardo oscuro
Todo el ,
mundo
Asia
9.
Fasciolopsis buski
Tamao:
Forma:
Oprculo:
140 /xm
oval
ligeramente menor (0) que el de Fasciola
heptica.
El huevo es muy semejante al de Fasciola heptica,
aunque tiene las diferencias siguientes:
(a) Envoltura:
ms delgada, de una sola I nea, con
notable engrosamiento (E) en el polo
contrario al que ocupa el oprculo
ligeramente menor
(b) Oprculo:
(c) Contenido: puede estar formado por clulas que
refractan la luz, con una clula clara
en el centro del huevo
con frecuencia hay abundantes huevos
(d) Cantidad:
en las heces fecales.
130
Principalmente
Asia
" *1
Todo el
mundo
Todo el
mundo
45-50 nm
oval, casi redonda
doble; membrana externa delgada y
membrana interna frecuentemente ms
gruesa en los polos, con filamentos que se
extienden a partir de stos (redzcase la
iluminacin para poderlos observar), mezclados con granulos que ocupan el espacio
que hay entre las dos membranas
Color:
gris muy plido
Contenido:
una masa redonda (el embrin) con 6
garfios que refractan la luz, dispuestos en
forma de abanico y, con frecuencia,
algunos granulos claramente definidos en
el centro.
Importante: Antese en el registro si los huevos encontrados son abundantes o escasos.
Pa ses
clidos
13 Necator americanus
El huevo es casi idntico al de Ancy/ostoma duodena/e
Tamao:
un poco mayor (70 /im)
Forma:
los polos son ms aplanados
Contenido: siempre contiene por lo menos 8 clulas
(jams 4 , como A. duodenale en heces
fecales frescas).
14. Metagonimus yokogawai
Huevo semejante a los de Clonorchis sinensis y
Heterophyes heterophyes
Tamao:
25-30 im
Forma:
oval, son salientes notables
Envoltura:
sumamente gruesa (la ms gruesa de los
3 huevos)
Oprculo:
ms redondo que el de fi. heterophyes; se
traslapa menos que el de C. sinensis
Giba:
sumamente pequea o invisible; situada en
el polo contrario al del oprculo
Contenido:
un embrin ciliado.
132
Lejano
Oriente
Principalmente,
Asia
Es sumamente difcil distinguir los huevos de los cuatro parsitos lanceolados orientales:
Clonorchis sinensis:
redondeado, con oprculo que se traslapa claramente
Heterophyes heterophyes: redondeado, de color ms oscuro
Metagonimus yokogawai: envoltura ms gruesa
Opisthorchis felineus:
delgado, frecuentemente asimtrico, sin giba visible.
Lejano Oriente
(Africa Central)
Africa
Sur del
31
m\
I Sahara l
^ J
escala
reducida
a la mitad
133
Esquistosoma vesical
(3)
Africa
Mediterrneo Oriental
Esquistosoma rectal
Africa
134
Esquistosoma oriental
Lejano
Oriente
(3
Contenido:
70-80/im
oval, casi redonda
transparente o amarillo plido
difcil de descubrir, lateral y sumamente
pequeo; puede estar oculto por granulos
(P) que frecuentemente se encuentran en
la superficie del huevo
un embrin ciliado muy amplio.
Esquistosoma intestinal
2 1 . Schistosoma mansoni
Tamao:
Forma:
Espoln:
Envoltura:
Color:
Contenido:
Africa, al sur
del Sahara
Amrica
@
tropical
Pases
clidos
Tenia
30-40 Atm
redonda
sumamente gruesa y lisa, con lneas transversales (redzcase la iluminacin)
de la envoltura: amarillo oscuro o pardo
del contenido: amarillo plido o gris
una masa granulosa redonda con tres pares
de ganchos que refractan la luz (ajstese
el enfoque)
algunas veces el huevo se encuentra
encerrado en un saco transparente, en cuyo
interior flota.
Tricocfalo
Todo el
mundo
50 nm
elipsoidal
ms bien gruesa y lisa, con dos capas
envoltura anaranjada; contenido amarillo
1.
Tamao:
Forma:
50-100 //m
redonda u oval y alargada; el contorno
siempre es accidentado, con melladuras
bruscas
Color:
blanquecino o amarillo grisceo; la solucin
de yodo lo vuelve violceo
Contenido:
masas apretadas de almidn.
Estos granulos son residuos de alimentos que contienen
almidn, como las patatas, las judas, el ame y la yuca.
3. Jabones
Tamao:
20-1000 im
redonda, ovalada o irregular (semejante al
Forma:
corte de un tronco de rbol)
Color:
pardo amarillento o incoloro
Contenido: I neas que irradian desde el centro, visibles
cerca de los bordes; centro vaco.
5. Pelos vegetales
Tamao: sumamente variable (50-300/im)
Forma:
generalmente rgida y a menudo curva;
ancha y trunca en un extremo, delgada
en el otro
Color:
amarillo plido
Contenido: un conducto central, estrecho y vaco,
entre dos capas transparentes que
refractan la luz.
6. Granos de polen y esporas de hongos
Varan mucho segn el lugar del mundo y la
alimentacin. Sus formas diferentes y caractersticas y otras particularidades (salientes
dentadas o redondas, etc.) ayudan a diferenciarlas
de los huevos de parsitos.
i!|L
139
HUEVOS MAS FRECUENTES y algunas estructuras microscpicas que pueden producir confusiones
1
13
Ascars lumbricoides
(huevo fecundado)
Ancylostoma duodenale
Granulo de almidn
Ascars lumbricoides
(huevo semidecorticado,
fecundado)
Jabn
26
zm
Trchuris trichiura
(tricocfalo)
140
Taenia saginata
Taenia solium
H. nana
18
S. haematobium
Ascars lumbricoides
(huevo semidecorticado,
no fecundado)
23
24
12
Ascars lumbricoides
(huevo no fecundado)
21
S. mansoni
Enterobius vermicularis
(oxiuro)
22
Strongyloides stercoralis
(larva)
Pelo vegetal
20
Dicrocoelium
(de paciente parasitado)
Dicrocoelium
(huevo en trnsito)
S. japonicum
(muy frecuente)
11
Diphyllobothrium
latum
//. diminuta
C. sinensis
(muy frecuente)
10
O. felineus
H. heterophyes
22
15
25
14
i
Strongyloides stercoralis
(huevo)
19
S. intercalatum
Fragmento de carne
(fibra muscular)
Trichostrongylus
16
Paragonimus westermani
(distoma pulmonar)
M. yokogawai
Fasciola heptica
o gigantica
Fasciolopsis buski
141
Es muy conveniente que el tcnico de laboratorio comprenda como se producen las infecciones por parsitos
intestinales a fin de que pueda proporcionar informacin sobre higiene a quienes le rodean y adems, sepa l
mismo como evitar estas infecciones, especialmente en el propio laboratorio.
Parasitosis por:
Ancylostoma
Ascaris
Strongyloides
Esquistosomas
Diphyllobothrum
Distomas:
F. heptica o
gigantica
Paragonimus
Dicrocoelium
Clonorchis
Oxiuros
Se produce por:
caminar descalzo en terrenos contaminados con heces fecales; jugar en el suelo (nios)
comer vegetales y ensaladas crudos sin haberlos lavado adecuadamente; jugar en
terrenos infectados (nios)
caminar descalzo en terrenos contaminados con materias fecales; autoinfeccin;*
tocar con las manos, en el laboratorio, heces fecales
baarse en arroyos o estanques contaminados con heces fecales u orina
comer peces de lagos o ros sin suficiente coccin
comer ensaladas sin haberlas lavado
comer cangrejos de ro sin suficiente coccin
deglutir accidentalmente hormigas infectadas (en ensaladas sin lavar o jugando los
nios en el csped)
comer peces de ro sin suficiente coccin
tener contactos con personas infectadas cuyas manos se encuentren sucias (nios que
juegan juntos); autoinfeccin
Tenias de la res
y el cerdo
Cisticercos de la
tenia del cerdo
Dipylidium caninum
Hymenolepis nana
Hymenolepis
diminuta
Tricocfalos
Trichostrongylus
Protozorios**
Entamoeba histolytica y Giardia lamblia
por beber agua contaminada, comer ensaladas sin lavar, tener contactos con personas infectadas cuyas manos se
encuentren sucias y no respetar los reglamentos de limpieza del laboratorio.
Balantidium coli
por comer vegetales sin lavar; por tener contactos con cerdos (en granjas).
Autoinfeccin: el paciente se reinfecta, perpetuando su enfermedad.
Para la identificacin de protozorios ntestinales vanse las pginas 147 y 155.
142
su longitud
su forma
si son planos y segmentados
si son cilindricos (redondos) o no.
Importante
Si hay tardanza en realizar el examen las piezas
separadas se pueden secar y enrollar, tomando el
aspecto de helmintos redondos. Humedzcanse
para devolverles su forma.
Examen
1. Examine una cadena de segmentos para observar
el orden de los poros laterales.
2. Examine un solo segmento aplanado suavemente
entre dos portaobjetos.
Menos frecuentes
TENIA DE LA RES
{Taenia saginata)
TENIA ENANA
[Hymenolepis nana)
Segmentos rectangulares
separados que suelen hallarse
entre la ropa personal o de
cama; salen por el ano independientemente de las heces
fecales
TENIA CANINA
{DipyUdium caninum)
Helminto de 5-30 cm de
longitud
^Pi^
fJt1TlJmuiiiiiinii1|ll||trn[
CX3dXX<XXX)
1 mm de anchura
10 ramificaciones uterinas
aproximadamente
Ramificaciones uterinas
difcilmente visibles
2 coronas de ganchos
4 ventosas (de 1 mm de
dimetro)
1 corona invaginada de
ganchos; 4 ventosas
Aproximadamente 20
ramificaciones uterinas
4 ventosas (de 2 mm
de dimetro)
Dos ramificaciones
uterinas
4 coronas externas de
ganchos; 4 ventosas (de
0,5 mm de dimetro)
145
D. OTROS HELMINTOS
Raras veces se observan en las heces fecales. Ocasionalmente se hallan en los rganos del paciente durante una
operacin quirrgica. En el hgado y los intestinos puede haber distomas.
Tamao real
Ancytesftema
Pequeo helminto redondo (semejante a un trozo de
hilo).
Longitud:
1-1,5cm
Color:
blanco o rojo si contiene sangre.
Se asemeja al oxiuro.
Examnese la cabeza con el microscopio (con objetivo
x 10).
Trtoecfae
Pequeo helminto delgado
Longitud:
3-5 cm
Color:
blanco.
Semeja un pequeo ltigo; le tercera parte de su cuerpo
es relativamente gruesa y el resto es filiforme.
Este helminto habita en la pared del ciego o bien,
ocasionalmente, en el recto.
Distema
Helminto plano provisto de dos ventosas; semeja una
hoja.
Distoma grande
de 2-3 cm de longitud, relativamente
ancho, de color rojo pardo o blanco
opaco (DG)
Distoma pequeo
de 0,5-1 cm de longitud, menos
ancho, transparente, de color rojo
sucio (dp).
Esquisto soma
Pequeo helminto delgado
Longitud:
0,5-1,5 cm
Color:
blanco.
El macho, que es plano, se enrolla en la hembra filiforme, que es ligeramente ms larga. Cada helminto
posee dos ventosas cerca de la cabeza.
146
Con lupa
(o microscopio)
Definiciones
Los protozorios son microorganismos compuestos por
una sola clula. En las heces fecales se pueden encontrar
en su forma mvil (trofozoitos) o como quistes.
El movimiento de los trofozoitos obedece:
a desplazamientos lentos de la clula (amebas) o
a que estn dotados de flagelos (largos hilos que
semejan ltigos) o cilios (pelos numerosos y cortos)
que se mueven rpidamente.
En su forma mvil los protozorios se encuentran
principalemente en:
heces fecales lquidas
heces con moco
heces blandas, no formadas.
Clasificacin
Sin flagelos ni cilios
Con flagelos
Con cilios
AMEBAS
FLAGELADOS
CILIADOS
147
A. AMEBAS
1. Entamoeba histolytica
B. FLAGELADOS
1. Giardia lamblia
2. Trichomonas hominis
3. Chilomastix mesnili
Patgeno
No patgeno
No patgeno.
C. CILIADOS
1. Balantidium coli
Patgeno.
148
Citoplasma
Ncleo
Seudopio
Ectoplasma
Endoplasma
Vacuola
Cuerpos de inclusin
(a) glbulos rojos
Cuerpos de inclusin:
(b) bacterias, levaduras,
residuos
Cariosoma
nuclear
Flagelo
Membrana ondulante
149
A. AMEBAS
1. Entameefaa histolytica (ameba de la disentera)
Tamao:
vara entre 12 y 35pm (generalmente tiene
igual longitud que 3 6 4 glbulos rojos)
Forma:
cuando est en movimiento se alarga y
cambia de forma; de lo contrario es
redonda
Movilidad: se mueve en una sola direccin; emite un
seudopodio que la hace avanzar y el endo
plasma entra rpidamente en l, y lo llena
Citoplasma: el ectoplasma es transparente y se puede
distinguir claramente del endoplasma,
que tiene una composicin granulosa
fina (gris, con matices verdes amarillentos),
en la que puede haber vacuolas
Ncleo:
no es visible en la forma mvil, pero al teir
el parsito con solucin de yodo se observa
claramente que posee una membrana
uniforme y un cariosoma cehtral, pequeo
y denso (punto negro).
En las heces fecales lquidas o diarreicas se pueden
encontrar dos formas mviles de E. histolytica:
(a) la forma magna, que mide 2035 tim, con vacuolas
que contienen eritrocitos ms o menos digeridos
(de 1 a 20, de diferentes tamaos) que ponen de
manifiesto su actividad hematfaga (es decir, que se
alimenta con sangre) y, por lo tanto, su capacidad
patgena ;
(b) la forma minuta, no patgena, que prolifera en la
cavidad intestinal, donde se alimenta de bacterias
u otras materias locales que se pueden observar en
el interior de las vacuolas; mide 1220(m.
2. Entamoeba coli
Tamao:
Ameba de la disentera
Entamoeba histolytca
Desplazamiento
En direccin definida
Al azar
Movilidad
Medianamente mvil
Ectoplasma
Transparente, muy
diferente del endoplasma
Cuerpos de inclusin
Eritrocitos si es hematfaga
Ncleo
(preparaciones frescas)
Invisible
Ncleo
(teido con solucin de yodo)
Membrana uniforme
Cariosoma central, denso y pequeo
Membrana irregular
Cariosoma voluminoso y excntrico
Entamoeba histolytca
Entamoeba coli
151
3. Otras amebas
Entamoeba hartmanni
Tamao:
Endolimax nana
Tamao:
Movilidad:
Citoplasma:
pequea; 6-10/nm
numerosos seudopodios pequeos y romos
que se mueven lentamente en todas
direcciones
sumamente granuloso, con vacuolas
pequeas
Cuerpos de
diversos (principalmente bacterias)
inclusin:
(con solucin de yodo) cariosoma que
Ncleo:
semeja una mancha de tinta.
lodamoeba buetschlii
Tamao:
Forma:
Movilidad:
Cuerpos de
inclusin:
bacterias, vacuolas grandes
Ncleo:
(con solucin de yodo) cariosoma oval y
voluminoso junto a un grupo de granulos.
/. buetschlii raras veces se encuentra en las heces fecales.
Dientamoeba fragilis
pequea, redonda, de 6-15 /im
inmvil (casi siempre) o sumamente mvil
(en heces fecales lquidas muy frescas),
con seudopodios que semejan las hojas
de un ventilador elctrico; se inmoviliza
rpidamente bajo el cubreobjetos
Citoplasma. ectoplasma claro
Cuerpos de
bacterias
inclusin:
(con solucin de yodo) 1 2 ncleos;
Ncleo:
cariosomas divididos en 4-6 granulos
(membrana difcilmente visible).
Tamao:
Movilidad:
152
B. FLAGELADOS
Todos estos parsitos, exceptuando Trichomonas
hominis, se pueden encontrar en su forma vegetativa,
flagelada y activa, o como quistes inactivos. Los quistes
se describen en la pgina 158.
Contenido:
Importante:
el movimiento caracterstico de este flagelado solo
se observa en heces fecales lquidas y frescas
en las heces I quidas los depsitos de moco frecuen
temente contienen grupos numerosos de G. lamblia
en las heces fecales blandas es frecuente encontrar
juntas las formas vegetativa y qustica del parsito.
2. Trichomonas hominis
Tamao:
&
cy
;(
'") A
??=
K
153
3.
Chilomastix mesnili
Tamao:
Forma:
Movilidad:
Citoplasma:
Ncleo:
10-15 iim
triangular y adelgazada en un extremo,
pareciendo que tuviera una torsin
se desplaza en una direccin definida, en
espiral
verde grisceo con:
una lnea clara, en espiral, alrededor de
la cual gira este flagelado (forma de
" 8 " ) , cerca del extremo adelgazado
una hendidura semejante a una boca
(el citostoma, que es dbilmente
visible), cerca del extremo redondeado
un ncleo, que se observa con facilidad en
las preparaciones no teidas.
C. CILIADOS
1.
Tamao:
Los quistes son pequeas formas inmviles y resistentes de ciertos protozorios intestinales (en cuanto a las
formas mviles vase la pgina 147). Pueden tener uno o varios ncleos.
Examen en portaobjetos
1. Preparacin en solucin de cloruro sdico (reactivo
No. 48)
Los quistes se pueden observar como glbulos
transparentes que refractan la luz y se distinguen
claramente contra el fondo de color gris. Poseen
envolturas bien definidas.
2. Preparacin en solucin de yodo (reactivo No. 35
diluido 5 veces)
Al teirse los ncleos, examnense con el objetivo
x40.
3. Recuento de los ncleos
Grese el tornillo de ajuste lento del microscopio.
4.
Identificacin
Nunca es suficiente reconocer un solo quiste; la
identificacin depende de que se observen varios
quistes sucesivamente.
5.
Concentracin
Si es necesario, sese el mtodo de concentracin
de formaldehido y ter (vase la pgina 165) para
observar un nmero mayor de quistes y lograr una
identificacin ms firme.
En la misma muestra de heces fecales se pueden
encontrar quistes de especies diferentes.
155
Citoplasma
Ncleos
Membrana nuclear
(cromatina)
Cromatina
uniforme
y delgada
Cromatina
irregular
y gruesa
Cariosoma
pequeo
y central
Cariosoma
voluminoso
y excntrico
Cariosoma
Cuerpo cromatoide
(refracta la luz)
Cuerpo
cromatoide
redondeado
Vacuola de glucgeno
(teida de pardo rojizo
por la solucin de yodo)
Fibrillas
(vestigios de flagelos)
156
Cuerpo
cromatoide
agudo y serrado
QUISTES DE AMEBAS
Entamoeba histolytica
Esta ameba causa disentera
Tamao:
Forma:
Ncleos:
1.
Entamoeba coli
2.
Entamoeba hartmanni
Tamao:
Ncleos:
157
3.
Endolimax nana
Tamao:
Forma:
Ncleos:
Citoplasma:
4.
lodamoeba buetschlii
Tamao:
Forma:
Ncleo:
Vacuola:
5.
Dientamoeba fragilis
Giardia lamblia
Tamao:
Forma:
Ncleos:
Citoplasma:
Fibrilla:
8-12 pm
oval, con un polo ms redondeado que o t r o ;
con frecuencia se observa una gruesa
envoltura de pared doble; en realidad, la
pared es la membrana citoplsmica
2-4 ncleos ovales:
membrana: sumamente delgada
cariosoma: pequeo, central, de color
tnue
claro, refracta la luz cuando no se ha
teido; verde amarillento o azulado al
aplicar la solucin de yodo
refracta la luz; semeja un cabello; es
plegada o toma forma de " S " ; recorre el
quiste a lo largo, por el centro (ajstese
el microscopio).
2. Chilomastix mesnili
Tamao:
Forma:
Ncleo:
Fibrilla:
158
3. Balantidium coli
Tamao:
Conclusin
Es en extremo importante que se logre identificar:
-
1. Blastoquistes
Tamao:
vara entre 5 y 20im (promedio: 10/im)
Forma:
redonda u oval; algunas veces poseen
bordes angulosos e irregulares
Contenido: una vacuola voluminosa que ocupa casi
toda la clula; el citoplasma, comprimido,
forma un anillo granuloso alrededor de ella
Color:
refractan intensamente la luz cuando no se
encuentran teidos; la solucin de yodo no
tie la vacuola, pero la periferia adquiere
un color amarillo plido
Algunos mdicos solicitan que se comunique la presencia de los Blastoquistes, particularmente en heces fecales
de nios.
2. Levaduras
Tamao:
pequeas (5-8/im)
Forma:
oval, frecuentemente con brotes
Contenido: con frecuencia un grupo de 3-6 granulos en
posicin excntrica
Color:
(con solucin de yodo) rojo pardo.
Algunas otras formas de levaduras son rectangulares,
con un citoplasma oval sumamente claro; se denominan
artrosporas.
3. Leucocitos
Tamao:
10-20 /um
Forma:
redonda o ligeramente alargada, de
contorno irregular
Contenido:
citoplasma que refracta la luz, claro y
granuloso, con vacuolas pequeas
Ncleo:
escasamente notable; algunas veces
contiene un "falso cariosoma" con forma
de estrella.
"Objetos: otras cosas, vivas o artificiales, que se encuentran en las
heces que no son parsitos y pueden confundir al laboratorista.
160
4.
Pus
5. Coccidios
Los coccidios son protozorios que pueden parasitar al
ser humano (sin causar efectos patgenos importantes)
o encontrarse de paso en las heces fecales consecutivamente a la ingestin de alimentos contaminados (peces,
conejos, etc.). Aparecen en las heces con formas semejantes a quistes (se denominan ooquistes o esporoquistes).
Tamao:
Forma:
Color:
Envoltura:
Contenido:
Importante:
Antes de preparar una concentracin de parsitos se debe realizar invariablemente un examen microscpico
directo de las heces fecales. (En las preparaciones concentradas no se encuentran formas mviles de protozorios.)
TCNICAS
En
1.
2.
3.
162
Se recomienda para:
No es adecuado para:
Principio
Las heces fecales se mezclan con una solucin saturada
de cloruro sdico (aumentando la gravedad especifica).
El peso de los huevos es menor y flotan en la superficie,
de donde se pueden recoger.
H
/
^
MATERIALES
MTODO
Preparacin de cubreobjetos desgrasados
(a) Mzclese en una probeta:
- 10 ml de etanol al 95% y 10 mi de ter
(b) Vierta esta mezcla en una placa de Petri y coloque
en ella 30 cubreobjetos, uno por uno; agite la placa
y a continuacin djela reposar durante 10 minutos
(c) Saque los cubreobjetos, uno por uno, y squelos
con gasa
(d) Guarde los cubreobjetos en una placa de Petri seca.
1.
\
2.
3.
4.
5.
164
A<
K un
rs
w
No es adecuado para:
Formas mviles de amebas y flagelados.
MATERIALES
Una centrfuga elctrica
Tubos para centrifugacin, cnicos, de 15 mi,
con tapones
Frascos de penicilina
Un embudo
Gasa
Un cilindro medidor
Hisopos de algodn.
REACTIVOS
Solucin de formaldehido (reactivo No. 25)
ter qumicamente puro (de lo contrario, gasolina)
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
Solucin yodada de Lugoi (reactivo No. 35)
MIF (reactivo No. 38), si es posible.
2.
3.
165
rik
=>
V
4.
>
vi
1
5.
8.
166
9.
Afloje la capa de residuos (2a capa) dando un movimiento rotatorio al extremo de un aplicador de
madera entre esta capa y la pared interior del tubo.
Vuelva el tubo hacia abajo y vierta todo el I quido
flotante. Use un hisopo de algodn para limpiar los
fragmentos de la capa de residuos que puedan haber
quedado adheridos a la pared interior del tubo.
ft
10. Mezcle muy bien el lquido restante con el sedimento golpeando suavemente el tubo.
11. Deposite dos gotas del sedimento en un portaobjetos. Aada una pequea gota de solucin
yodada nicamente a la segunda gota del
sedimento.
Principio
Las larvas de Strongyloides que se encuentran en las heces fecales se desplazan contra la corriente de agua que,
por movimiento capilar, asciende por una tira de papel que se ha sumergido parcialmente en un tubo de ensayo,
y se acumulan en el fondo del tubo.
MATERIALES
Tubos de ensayo (20 x 200 mm)
Tiras de f i l t r o de papel (30 x 150 mm)
Una esptula.
TCNICA
(a) Extienda con la esptula una pequea cantidad de la muestra de heces a lo largo de una tira de filtro de papel
(que previamente se habr doblado a lo largo para mantenerla recta), dejando limpios los ltimos 4 5 c m
para sumergirlos en agua.
(b) Introduzca la tira de filtro de papel, por el extremo limpio, en un tubo de ensayo que contenga 2,5-3cm de
agua filtrada o hervida; el extremo de la tira no deber tocar el fondo del tubo.
(c) Marque en el tubo el nmero o el nombre del paciente en forma indeleble.
(d) Conserve el tubo durante 7-8 das a la temperatura ambiente, protegido con un tapn de algodn o, an
mejor, sellado con cinta de celofn.
(e) Busque las larvas que pueda haber en el fondo del tubo y examnelas despus de tratarlas con solucin
yodada para poder distinguir las de Strongyloides y las de Ancylostoma (vase la pgina siguiente).
Nota: Las larvas de Strongyloides pueden llegar a la etapa infectante en estas condiciones, produciendo larvas filariformes, o
convertirse en helmintos adultos.
168
#
LARVAS
STRONGYLOIDES
ANCYLOSTOMA
longitud
anchura
200300 n
200300*1
15p
esfago (E)
dos
ensanchamientos*
dos
ensanchamientos*
boca (B)
corta: 4/J
(Vi eritrocito)
amplia: 15/i
(2 eritrocitos)
extremo
posterior
ligeramente
agudo
muy
agudo
rudimento
genital (RG)
grande y
notable (22i)
pequeno
(7p)
a 50 i del
extremo
posterior
a 80 i del
extremo
posterior
15
mi
iff
11?LRG
1It
M
E
ra
i:
RG
Wm
Y
STRONGYLOIDES
HI)
PA
ANCYLOSTOMA
169
Ejemplo:
Sr. Amala Examen de heces 8.5.79.
especie
etapa de desarrollo
cantidad
1.
Depsito de moco
Presencia de:
Giardia lamblia
Formas vegetativas
Abundantes
duras y secas
firmes y formadas
blandas y formadas
blandas y no formadas
semilquidas
lquidas y acuosas.
2.
ANOMALIAS
3.
PARSITOS
Especie
Nombre
cientfico
Etapa de
desarrollo
huevos, larvas, formas vegetativas, segmentos del helminto, etc. Al referirse a E. histolytica
especif quese invariablemente si contiene glbulos rojos en su interior.
Cantidad
sumamente escasa (1-2 huevos por cada portaobjetos); escasa (3-5); moderada (6-12); abundante
(ms de 12).
Cuando no se encuentren parsitos antese: "No se observan huevos ni parsitos" y expliqese si este resultado
se obtuvo por examen directo o por mtodo de concentracin (indiquese asimismo el mtodo de concentracin
empleado). Nunca se escriba categricamente: " N o hay parsitos".
170
Sr. E
Sr. F
Sra. G
Sr. H
Fecha de recibo
Duras y secas
Firmes y bien formadas
Blandas
Semilquidas
Lquidas
pus
moco sanguinolento
sangre fresca
sangre oculta
EXAMEN MICROSCPICO
No. de huevos o parsitos que se encontraron
por concentracin
mtodo (s):
Fecha
Firma
En algunos pases las planillas para informe comprenden una lista de los tipos principales de parsitos que se
encuentran en la regin. Por ejemplo:
Parsitos que se encontraron:
Huevos de A. duodenale
Huevos de Ascars
Huevos de H. nana
Huevos de S. mansoni
Huevos de Trtchuris
172
El tcnico debe colocar una marca en la palabra o las palabras que correspondan
a los resultados, como se indica a continuacin:
+ (algunos huevos)
++ (huevos ms o menos abundantes)
+++ (huevos muy abundantes)
F. histolytica (forma veg.) (con/sin eritrocitos en su interior)
E. histolytica (quiste)
1.
2.
USO DE MIF
1
J
11
173
3.
USODELAPV
(a) En un frasco
1.
Vierta en un frasco 30 mi de fijador APV, aproximadamente, de modo que est lleno las tres cuartas
partes de su capacidad.
2.
3.
(b) En un
portaobjetos
1.
2.
14. Ensayo qumico para encontrar sangre oculta en las heces fecales
Principio
Cuando la hemoglobina de la sangre se pone en contacto
con perxido de hidrgeno se libera oxgeno. Este
oxgeno liberado reacciona con aminofenazona
(aminopirina) y se forma una coloracin azul.
MATERIALES Y REACTIVOS
Una centrfuga
Tubos cnicos para centrifugacin
Aplicadores
Una probeta de 20 mi
Tubos de ensayo
Acido actico al 10% (reactivo No. 2)
Perxido de hidrgeno (solucin fresca, de 10 vol.)
Etanol al 95%
Aminofenazona cristalina.
MTODO
1.
vJ
fl
2.
3.
175
^
6
4
A continuacin agregue:
10 gotas de la solucin de perxido de
hidrgeno de lOvol.
No se mezcle.
Djela reposar un minuto.
Reaccin positiva
Entre las dos capas de I quido aparece una coloracin
azul:
azul plido = reaccin positiva+
azul oscuro = reaccin positiva ntensaH
azul negruzco = reaccin positiva sumamente
intensa+++.
Reaccin negativa
No ocurre cambio alguno en el color.
176
E2
rrrr*>
w
%^lf
Kt.CK '
\^_^/
PRECAUCIONES EN EL LABORATORIO
Los utensilios de vidrio deben estar limpios (sin residuos de sangre).
Se debe observar el resultado antes de que transcurran 5 minutos.
Se pueden realizar ensayos testigos:
negativos: con agua destilada
positivos: con agua que contenga 1% de sangre.
177
MATERIALES
Una centrfuga, tubos cnicos y cilindros medidores
de 100, 200 y 1000 mi
Agente clarificador: hidrxido sdico al 10%
(reactivo No. 45)
Preservativos: cido clorhdrico y leja comercial.
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Renase la orina que se produzca entre 11h. y 17h.
En este lapso de tiempo se encontrar una concentracin mayor de huevos especialmente en las ltimas gotas
de orina.
Ejercicios preliminares
Justo antes de recolectar la muestra pida al paciente que
ejecute rpidamente 20 "sentadillas", corra alrededor
de 100 metros o suba y baje las escaleras corriendo
varias veces (de este modo se excretar mayor cantidad
de huevos).
Conservacin de la orina
Si se retrasa el examen de orina, agregue a cada 1 0 0 m i :
1 mi de cido clorhdrico (20 gotas)
2 mi de lej a comercial (40 gotas).
De esta manera la orina se podr mantener a la
temperatura ambiente por tiempo indefinido.
178
dHC
i
A. EXAMEN DIRECTO
Centrifugue la orina en tubos cnicos (10-15ml)
durante 5 minutos a baja velocidad o con la centrfuga
manual.
Jwl
3^
179
B. O R I N A T E I D A CON SANGRE
Si la cantidad de sangre que hay en la orina es
abundante el examen es ms difcil pues las acumulaciones de glbulos rojos pueden ocultar los huevos.
Ponga 5 gotas de hidrxido sdico al 10% (reactivo
No. 45) en el tubo donde la orina se va a centrifugar.
De este modo se disolvern (por lisis) los eritrocitos y
el sedimento ser claro. Tambin afectar a los huevos,
pero aun as las envolturas se pueden reconocer.
Recoja todo el contenido de la vejiga urinaria y tome 10 mi de una muestra que previamente se agitar muy
bien.
Centrifugue durante 3 minutos a velocidad media en un tubo graduado.
Deseche el I quido flotante hasta la marca de 0,2 mi.
Mezcle muy bien el sedimento y, con una pipeta graduada, ponga 0,1 mi de ste en un portaobjetos.
Cuente los huevos que se observen con el microscopio utilizando un objetivo de bajo poder y un ocular
x5-6.
Multiplique el resultado por 2 para determinar la concentracin de huevos que hay en 10 mi de orina.
180
Puede
Aparte de los huevos de Schistosoma (vase pgina 178) que se suelen detectar en Africa y Medio Oriente es raro
hallar helmintos adultos en la orina.
En los sedimentos de orina, despus de la centrifugacin, se pueden encontrar:
1.
2.
3.
Protozorios flagelados
Microfilarias
Espiroquetas
Trichomonas vaginalis
Wucherera bancrofti y otras
Leptospira cterohaemorrhagiae
1.
Trichomonas vaginalis
Estos protozorios se suelen detectar en las secreciones
genitourinarias (vase la pgina 186).
No obstante, tambin se pueden hallar, dotados an de
movilidad y reconocibles, en sedimentos de orina
fresca.
Tamao:
15/im
Forma:
redonda, globulosa
Movilidad:
giran y se vuelven; vibran
Membrana
ondulante:
lateral, sumamente mvil; semeja la aleta
de un pez
Flagelos:
4
2.
MICROFILARIAS
Wucherera
bancrofti
Onchocerca volvulus
En raras ocasiones (alrededor de 5-10% de los casos)
las microfilarias de la oncocercosis pasan a la orina.
Cuando se las encuentra an tienen movilidad.
Tamao: 200-300(im de longitud y Sfim de grosor.
Curvas rgidas. Sin envoltura. La cabeza es ms ancha;
vase la descripcin, en la pgina 218.
La identificacin se puede confirmar examinando un
frotis cutneo en una preparacin hmeda.
181
3.
ESPIROQUETAS
Leptospira
icterohaemorrhagiae
La leptospirosis es transmitida por las ratas. Esta enfermedad es muy frecuente en Asia. Si se sospecha que
existe leptospirosis se puede examinar directamente el
sedimento de la orina en una preparacin hmeda con
iluminacin para campo oscuro o en una preparacin
con tincin de Giemsa.
Longitud:
vara considerablemente; promedio:
Forma:
Extremos:
Movilidad:
Tincin:
10-20Mm
espiral: 20-40 vueltas; semeja un resorte
aplanado
agudos; frecuentemente con forma de
gancho
efecta movimientos rotatorios y
ondulatorios
dbilmente grampositiva; se colorea ms
intensamente con la tincin de Giemsa.
Distribucin
pulmonar
Materiales
Una centrfuga
Tubos cnicos para centrifugacin
Un agitador de vidrio
Una asa de alambre para siembra
Un portaobjetos
Cubreobjetos
Solucin de hidrxido sdico al 3%
(reactivo No. 44).
Mtodo
1. Aada al receptculo donde se ha recogido el esputo
una cantidad igual de hidrxido sdico al 3%.
M 0>
\
JXJH
2.
, .VMK
3 min
fh
\
183
3. Vierta toda la mezcla en un tubo para centrifugacin. Centrifugue durante 5 minutos a alta
velocidad.
5 min
aproximadamente ISOjim
redonda, irregular u oval, con un polo
ligeramente aplanado
incoloro y transparente, con finas granulaciones y un anillo de ganchos (10-30
ganchos), claramente visible.
185
Principio
Trichomonas vaginalis es un protozorio que puede causar secreciones (exudado) genitourinarias, principalmente en la mujer y ocasionalmente en el hombre. Se puede detectar con el microscopio en preparaciones
hmedas.
El exudado es claro y blanquecino, o puede ser gris verduzco y espumoso.
MATERIALES
Portaobjetos
Cubreobjetos
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48) tibia (a 37C, si es posible)
Un asa de alambre para siembra.
OBTENCIN DE LA MUESTRA
En la mujer: La secrecin se debe entregar al laboratorio inmediatamente despus de haberse recogido (en un
tubo de ensayo o un portaobjetos). Es preferible utilizar un hisopo de algodn que se coloca en el interior de un
tubo de ensayo con solucin de cloruro sdico; de este modo Trichomonas conserva su movilidad durante algn
tiempo (generalmente varias horas).
En el hombre: Obtngase la muestra en el laboratorio empleando el mtodo descrito para los gonococos (vase
la pgina 243). Examnese inmediatamente.
MTODO
1.
4.
Hongos
Se suelen encontrar en los exudados densos y blancos
(algunas veces amarillos o incoloros). Empleando el
objetivo x 4 0 , busque por:
(a) Levaduras
cuerpos redondos u ovales
inmviles
de tamao variable (2-6 jicm)
algunos tienen protuberancias o brotes.
(b) Filamentos de micelios (rara vez)
filamentos de extremos romos
de longitud variable (20-100/1^1)
de 2-4 jum de anchura.
188
Propsito
Deteccin de parsitos en la sangre
1.
2.
En un portaobjetos se deposita una gota de sangre obtenida de un dedo, se extiende y se deja secar.
Se tie y se examina con el microscopio en busca de:
Al teir la gota de sangre seca la hemoglobina de los eritrocitos se disuelve y es arrastrada por el agua de la
solucin que contiene el reactivo.
2.
Mtodo
Puncin del dedo
1.
Bsquese un sitio:
en los dedos cordial o anular de la mano
izquierda
en el lado externo del dedo, donde la sensibilidad es menor que en la punta, como se indica
en la ilustracin.
189
2.
4.
5.
190
7.
numerosas partes del mundo se utilizan las tinciones A y B de Field en las gotas gruesas de sangre porque:
la tincin se hace rpidamente
no se necesita diluir los materiales de tincin
estos materiales se pueden usar durante varios das (fltrense cada dos das; cambense cuando los resultados
dejen de ser satisfactorios)
no se necesita agua amortiguada; se puede emplear agua corriente, limpia, para lavar los frotis.
La tincin de Giemsa diluida que se emplea en las extensiones sangu neas se puede usar tambin en las gotas
gruesas (vase la pgina 393).
Materiales
Mtodo
1. Sumerja la gota gruesa, seca, en el colorante A de
Field:
cuente hasta 10.
Escrrase.
Enjuagese en uno de los recipientes con agua
limpia.
2.
3.
RESULTADOS
La extensin sangunea deber tomar un color malva. As ser ms fcil reconocer los trofozoitos de parsitos
del paludismo:
los anillos citoplsmicos se tien de azul
la cromatina se tie de rojo oscuro.
Para el diagnstico de laboratorio por especies vanse las pginas 200 y 2 0 1 .
En las gotas de sangre gruesas tambin se pueden reconocer:
leucocitos, incluso su tipo y la cantidad aproximada de ellos
ncleos de normoblastos, que se tien de rojo oscuro
reticulocitos, que se observan como reas circulares de puntos azules.
192
Importante:
Para reconocer fracciones de nmero de diversos tipos de leucocitos ("recuento diferencial de leucocitos")
las extensiones de sangre se colorean mejor con las tinciones de May y Grnwald, y de Giemsa (vase la pgina
393).
MATERIALES
1.
2.
3.
6.
2.
194
4.
5.
\ * V \ \
7.
tas
m
illllilliilillil w
195
2. Para pacientes
Prepare:
individuales
3. Para encuestas
Prepare:
solo 1 portaobjetos por cada individuo con una
gota gruesa y una extensin sangunea en el
mismo portaobjetos.
4.
TINCIN
Fijacin
Antes de teirlas fjense las extensiones solo con
metanol. Evtese que este alcohol toque las gotas
gruesas.
(Vanse las tcnicas de tincin en las pginas 191 y
393).
196
citoplasma azul
granulos ocasionales de pigmento
negro o pardo
eritrocito infectado (color de rosa)
ETAPAS DE DESARROLLO
ncleo
1. Trofozoito
anillo delgado
de citoplasma
citoplasma
ms compacto
2. Esquizonte
3. Gametocito
Pigmento
citoplasma
ameboide
ncleos frecuentemente
ordenados en circulo,
formando una roseta
sin pigmento
197
glbulo rojo
teido ms
intensamente
glbulo rojo
ovalado
glbulo rojo
crecido
glbulo rojo
con bordes
mellados
parasito
manchas de
Schffner
En gota gruesa
Los glbulos rojos casi han desaparecido.
Las manchas rosceas de Schffner an se
pueden observar alrededor del parsito.
leucocito
gruesa.
Es importante notificar la densidad de los parsitos en el informe correspondiente (vase la pgina 203).
densidad elevada:
20 (o ms)
parsitos por campo
198
densidad mediana:
219 parsitos
por campo
densidad reducida:
1 parsito (o menos)
por campo
Plasmodium falciparum
Plasmodium malarae
Plasmodium ovale
Plasmodium vivax
ESPECIES DE PARSITOS
Existen 4 especies diferentes de parsitos que causan
paludismo en el hombre.
Por ejemplo:
El paludismo causado por/ 5 , falciparum
es mucho ms grave que el causado por
P. malarae y algunas veces causa la muerte.
Sin embargo, si no se trata adecuadamente, una infeccin por P. malarae
puede durar mucho ms que una infeccin
por/ 5 , falciparum.
Por ejemplo:
Plasmodium falciparum
Plasmodium malarae
Plasmodium falciparum
Plasmodium vivax
y
y
DISTRIBUCIN GEOGRFICA
P. falciparum
P. malarae
P. ovale
Abundante
Abundante
Predominante
Africa Occidental
Predominante
Infrecuente
Abundante
Muy raro
Africa Central
Predominante
Abundante
Raro
Muy raro
Africa Oriental
Predominante
Abundante
Raro
Raro
Madagascar, 0 . Indico
Predominante
Abundante
Raro
Infrecuente
Mesoamrica
Abundante
Raro
Abundante
Sudamrica
Abundante
Raro
Predominante
Asia Sudoccidental
Abundante
Infrecuente
Predominante
Predominante
Infrecuente
Abundante
Indonesia
Predominante
Infrecuente
Raro
Abundante
Abundante
Infrecuente
Raro
Abundante
P. vivax
199
PLASMO Dl UM
FALCIPARUM
MALARIAE
O
1u.O
o->
oc
fco
OQ
Lil
1-
0.
N
LU
<
rojizo
granulos escasos de color
negro azulado en el centro
del citoplasma 0 diseminados en l
De tamao normal
Muchos pueden ser dentados y contener trofozoitos maduros; a menudo
presentan algunas manchas rojas
de tamao y forma irregulares
Q-
(PK
Merozoitos: 8-10
Cada uno con una gran mancha roja
rodeada de citoplasma plido; las
8 manchas pueden estar distribuidas
de forma irregular (formas jvenes)
0 formar una roseta
<P
UJ ce
(Sumamente raro)
Muy difcil de encontrar en extensiones sangu neas (excepto en casos
muy graves)
Merozoitos: 18-32
Pigmento: oscuro, negro pardusco
UI
O
1O
O
1-
Pigmento:
Densidad reducida
4k
* En cualquier regin la densidad de los parsitos depende principalmente de que el paludismo ocurra en algunas estaciones del
ao o sea endmico. Los individuos adultos en especial suelen desarrollar inmunidad en las regiones endmicas y, en consecuencia, se reduce la densidad de los parsitos.
200
VI VAX
O
H
u-O
o-ce
Od
1-
Cromatina:
to
Ooc
LU
H
Z
O
N
O
co
LU
O
H
O
O
1-
LU
<
C3
1 mancha roja
PLASMODIUM
2
Itt
La identidad del
P. ovale se debe
confirmar mediante
examen de una
extensin sangunea
\.v/=i'o'-
Forma:
Jiiipii
voluminosa, oval 0
redonda, azul intenso
Ncleo:
1 mancha redonda y
roja
Pigmento:
algunas partculas de
color castao en el
citoplasma
Se distingue de:
P. vivax por su pigmento castao
P. malariae por la presencia de
manchas de Schffner
Densidad mediana
OVALE
Densidad mediana
0^
B r
201
P. falciparum
P. malariae
P. vivax
P. ovale
TAMAO
del trofozoito
joven en comparacin con el dimetro de un glbulo rojo (en la
misma etapa de
desarrollo)
ASPECTO
del glbulo rojo
infectado
Sin cambios o
empequeecido y
algunas veces
teido con mayor
intensidad
Ninguna
Manchas de
Schffner, pequeas y rosceas
Siempre existen
grandes manchas
de James
Trofozoitos o
gametocitos o
ambos juntos; en
una sola clula se
pueden encontrar
numerosos trofozoitos
Se observan todas
las formas en el
mismo frotis
Se observan todas
las formas en el
mismo frotis
Se observan todas
las formas en el
mismo frotis
Sin cambios
MANCHAS
que se encuentran en el glbulo rojo infectado
ETAPAS
que se suelen
observar
NOTA:
Aspecto de los monocitos
con frecuencia el citoplasma contiene cuerpos de color castao o negro verduzco (siderfilos)
Aspecto de los parsitos del paludismo despus de inyectar un medicamento
antipaldico:
202
* Si los parsitos son muy abundantes (es decir, si la densidad de parsitos es muy elevada) el enfermo se debe tratar urgentemente.
Por lo tanto, si se encuentra una densidad de parsitos elevada, indique claramente este resultado en el informe y envese sin tardanza al mdico.
203
Principio
Sangre capilar
Mzclese un frotis fresco de sangre capilar obtenida de un dedo con solucin de cloruro sdico; coloqese entre
un portaobjetos y un cubreobjetos y examnese con el microscopio buscando microfilarias mviles.
Sangre venosa
Las microfilarias tambin se pueden concentrar empleando sangre venosa.
Especie
W.bancrofti
W. bancrofti
(var. pacfica)
Cualquier hora
Ocano Pacfico
B. malayi
Asia
Loa loa
Filarlas
dudosamente patgenas:
D. perstans
M. ozzardl
Cualquier hora
Cualquier hora
Africa tropical
Amrica tropical
Materiales
Una lanceta para extraer sangre
Hisopos de algodn
Un portaobjetos
Un cubreobjetos
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
204
Mtodo
1.
2.
3.
5.
Patgena
Grosor:
6.
206
Patogenidad dudosa
Grosor:
generalmente 4 jum
(la mitad del dimetro de un eritrocito)
Longitud:
casi siempre 150 //m
(1/4 del campo, como se indica en la
figura)
D. perstans, M. ozzardi
Mtodo
1.
2.
3.
2.
3.
Principio
Para poder identificar las microfilarias con seguridad primero se deben teir.
MATERIALES - REACTIVO
A. GOTA GRUESA
Extraiga una gota de sangre capilar en la hora ms
conveniente (vase el cuadro de la pgina 204).
Prepare una gota gruesa como se indica en la pgina
189).
B. SEPARACIN DE LA HEMOGLOBINA
(a) Coloque los portaobjetos verticalmente en la cubeta
para tinciones, que previamente se habr llenado con
agua limpia (si no se cuenta con esta cubeta sese
un vaso para anlisis).
(b) Djelos reposar 10 minutos (la hemoglobina se
hundir gradualmente hasta el fondo del recipiente).
(c) Saque los portaobjetos y escrranse.
D. EXAMEN MICROSCPICO
(a) Cubra el frotis teido con una capa delgada de
aceite de inmersin.
(b) Busque las microfilarias empleando el objetivo x 10;
se debern observar claramente.
(c) Examine las microfilarias encontradas con el objetivo x 100, de inmersin en aceite.
Wuchereria
bancrofti
Loa loa
Africa tropical
Asia
Amrica tropical
Ocano Indico
Ocano Pacfico
Africa Central
Africa Occidental
(desde Nigeria hasta Gabn)
Hora
Durante la noche*
Durante el da
Longitud
200-300 irn
250-300 lim
Grosor
8m
(aproximadamente el de
1 leucocito**)
8jim
(aproximadamente el de
1 leucocito**)
Color de rosa
Casi incolora
Regiones
Envoltura
C ^
Uniformes, amplias
Curvas
del cuerpo
Irregulares, pequeas
15^
Sin ncleos en la punta***
Cola
Ncleos
del cuerpo
Curva y delgada
Voluminosos, redondos,
aglomerados y sobrepuestos
212
Dipetalonema
perstans
Brugia malayi
Mansonella ozzardi
Africa Tropical
Sudamrica
Asia
A cualquier hora
Principalmente
durante la noche
A cualquier hora
150-200 nm
220-250/im
150-200/im
4 fim
(% leucocito)
6/nm
(casi
4/im
(V& leucocito)
Amrica Central
Sudamrica
leucocito)
1^
Sin envoltura
caEB^jfF0^
-tiaM*
K/
Sin envoltura
Pequeas, irregulares
y numerosas
Escasas y pequeas
- .r
XSsg^
Recta con punta roma
Recta y delgada
Pequeos y angulosos,
apiados y no muy claros
Pequeos y redondos;
sumamente juntos en
dos o tres hileras
213
La cola
Si la cola de W. baero fti se encuentra rota o enrollada
parecer que los ncleos llegan hasta la punta, como los
de Loa loa.
2.
La envoltura
A veces la envoltura se ha roto o es casi incolora. Por
ejemplo, en LTfla loa solo se observa como un espacio
incoloro entre la cola y los eritrocitos.
3.
El tamao
Algunos especmenes de D. perstans son sumamente
largos (200/im) y algunos de W. bancrofti y Loa loa
son pequeos (250nm).
4.
Las curvas
Si se daan durante la preparacin del frotis de sangre
W. bancrofti puede aparecer retorcida y Loa loa sufrir
una disminucin en el nmero de curvas.
5.
La distribucin geogrfica
Tenga en cuenta invariablemente del lugar de donde
proviene el paciente. Si es de:
la cuenca del ro Zaire, Nigeria Oriental o Camern,
es probable que el parsito sea Loa loa
Senegal, Gana, las Antillas Menores o la India, es
probable que sea W. bancrofti
Tailandia, el parsito puede ser B. malayi
Guyana, puede ser M. ozzardi.
6. Extensiones sanguneas
No se recomienda intentar la identificacin de las microfilaras en extensiones sanguneas teidas; los parsitos
se suelen encoger y deformar, de modo que es difcil
reconocerlos.
214
Examen en el laboratorio
Se utiliza una muestra sumamente pequea de la piel
del paciente. Para observar las microfilaras, que se
encuentran dotadas de gran movilidad, se examinan
en una preparacin hmeda, entre un portaobjetos y
un cubreobjetos, por medio del microscopio.
MATERIALES
Una aguja (para inyeccin intramuscular, de calibre
22 (0,7 mm) x 40 mm, o para inyeccin subcutnea,
de calibre 22 x 25 mm)
Un bistur o una hoja de afeitar
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
Portaobjetos y cubreobjetos
Etanol.
OBTENCIN DE LA MUESTRA
(a) Preparativos
1. Flamee en etanol el bistur (o la hoja de afeitar) y
la aguja.
2. C oloque una gota de solucin de cloruro sdico en
un portaobjetos.
3. Desinfecte la piel del rea escogida con un cojincillo
de gasa humedecido con etanol.
^mifc.
RSSiiSSiiiSS mm S S ^
mmmm Wm ll
,
mm
(b) Mtodo
1. C on la mano izquierda perfore la piel introduciendo
la punta de la aguja hasta una profundidad de
2 3 mm.
Jlll
fe:j^:^:;^:;^^;;;|;ig^j;ig
11 ywI
ii:
"
ililll
/^
M^^^^^^M
{ ^^^^^m
r^Z^^^^^
/^
^ ^ S S B ^ A^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^
^jljP
4.
JIIF
mmmmmmmmmi
wmmmrnmmmmii
EXAMEN MICROSCPICO
Utilice el objetivo x 10 con escasa abertura del conden
sador. Examine las orillas de la muestra de piel. Se
observarn las microfilarias tratando de salir al lquido.
Poseen gran movilidad.
Longitud:
2 0 0 3 0 0 pm
Anchura:
8 / i m (la misma de un eritrocito)
Curvatura
del cuerpo: casi angular
Extremo
anterior:
ligeramente ms ancho
Cola:
curva y delgada.
Cuando <a muestra contenga muy escasas microfilarias
esprese 10 minutos.
Si no aparecen las microfilarias vase dentro del frag
mento de piel; observando a travs de este se podr
ver una microfilaria en movimiento.
EN C ASO DE D U D A
1.
2.
218
Examine entre un portaobjetos y un cubreobjetos una muestra de sangre fresca extrada de un dedo, en
busca de microfilarias sanguneas (vase la pgina 205).
Si el resultado de este examen es positivo preprense un frotis de piel y otro de sangre en gota gruesa (vase
la pgina 193), ambos teidos, para identificar la especie.
3.
5.
MTODO
1.
2.
Importante:
En la tripanosomiasis africana los parsitos aparecen en
la sangre a intervalos, durante algunos das, principalmente durante los primeros tres meses de la enfermedad
y, en especial, durante los ataques de fiebre.
4.
15 - 25 pm (1 - 2 leucocitos)
azul plido
gran ncleo central que se tie de
morado rojizo
un cuerpo compacto de color rojo,
situado en el extremo posterior: es el
cinetoplasto (C)
Membrana
undulante (M): de color de rosa o rojo; comienza en
en el cinetoplasto
de color de rosa; se extiende 5tm ms
Flagelo (F):
atrs que la membrana undulante.
* 7". gambiense (Africa Occidental y Central) y T. rhodesiense (Africa Oriental) son idnticos en su aspecto.
222
1.
Extraiga:
9 mi de sangre venosa
y depostelos en el tubo con el citrato (hasta la
marca de 10 mi).
Ey
"T
A=
r 0
223
5.
6.
224
Exmenes de preparaciones hmedas (que raras veces resultan positivos durante la etapa crnica de la
enfermedad).
2. Exmenes sucesivos de frotis de gota gruesa de sangre.
3. Centrifugacin triple y, si es posible, empleo de la tcnica de centrifugacin para microhematocrito.
4. Deteccin de anticuerpos (prueba de fijacin del complemento).
Aspecto de Trypanosoma
cruzi
MATERIALES
Una aguja (para inyeccin subcutnea) de calibre
25 (0,5 mm) x 16 mm
Una jeringa de 5 10 mi (jeringa y aguja deben estar
completamente secas)
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tintura de yodo
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48).
Los ganglios afectados se inflaman y originan protuberancias de 2 - 4 cm. Son elsticos y se deslizan bajo la
piel, ofreciendo escasa resistencia a la presin. No suelen
endurecerse (excepto en los casos crnicos).
226
n~r p
1111 iL i i.i
vU_
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Preparativos
Prepare la jeringa tirando el mbolo hacia atrs, hasta
donde sea posible.
Prepare asimismo 3 portaobjetos, colocando una gota de
la solucin de cloruro sdico en cada uno.
Lvese las manos con agua y jabn.
Haga que el enfermo se siente.
1.
TT^TA-,
3.
Con la mano
izquierda:
4.
Extraiga la aguja con un movimiento rpido, tapando la entrada con el pulgar. A continuacin aplique
un algodn humedecido con tintura de yodo en el
sitio perforado.
(Nunca se aplique el algodn con tintura de yodo antes de
extraer la aguja, ya que cierta cantidad de este antisptico
puede llegar a la punta de la aguja, entrar en el lquido que
se ha obtenido del ganglio e inmovilizar los tripanosomas.)
Preparacin de los
1.
portaobjetos
Repita este procedimiento en el segundo portaobjetos, empujando el mbolo hasta el fondo del
cilindro para expulsar el resto del I quido.
3.
Coloque cubreobjetos sobre cada una de las tres preparaciones. Examnense inmediatamente con el microscopio (con objetivo x 40).
Espere hasta que se detenga el movimiento del lquido
provocado por el calor.
/iS^S^Sfi^^^i-:-:-:/
Empiece examinando la periferia de la primera preparacin, cerca de los bordes del cubreobjetos, hacia
donde tienden a dirigirse los tripanosomas.
A continuacin observe minuciosamente el resto de la
preparacin. Repita este procedimiento con las otras
dos preparaciones.
228
El tripanosoma
Tamao:
Forma:
Aspecto:
15 - 25 /m ( 2 - 3 veces la longitud de un
eritrocito)
semeja un pez ondulante
(en preparaciones hmedas) claro; refracta
la luz muy intensamente.
Djela secar. Fjese con metanol. Al volver al laboratorio tase con colorante de giemsa (vase la pgina
193). En la pgina 222 se hace una descripcin de tripanosomas en preparaciones teidas.
230
B. BACTERIOLOGIA
Introduccin
El examen directo de frotis bacterianos generalmente no basta para identificar una especie de bacterias; la identificacin precisa solo se puede lograr por medio de cultivos. Esto pone de relieve la importancia de enviar a los
laboratorios de referencia las muestras obtenidas. Sin embargo, el examen microscpico directo de frotis teidos
constituye una manera eficiente de estudiar la presencia de bacterias en medios biolgicos que normalmente son
estriles, como los lquidos cefalorraqudeo (LCR) y pleural, y en muestras de otros orgenes. Este procedimiento puede aportar informacin sumamente til para el diagnstico, el tratamiento inmediato y el dominio
de una enfermedad. Por ejemplo:
en muestras de casos de uretritis masculina en etapa inicial se puede diagnosticar con un grado razonable
de seguridad una infeccin por gonococos (en la mujer esto es considerablemente ms difcil)
se considera que la microscopa directa es la tcnica ms prctica y efectiva para detectar casos infecciosos de tuberculosis y, por lo tanto, es de gran importancia para la epidemiologa
el examen microscpico del lquido cefalorraqudeo, de frotis de ste debidamente teidos y de. la morfologa de cualesquiera bacterias que se encuentren en ellos puede ayudar a que se reconozca una meningitis (meningoccica, neumoccica o por M. tuberculosis).
El diagnstico de algunas enfermedades tambin es posible por medio de la serologa; un ejemplo es la sfilis.
Las tcnicas serologicas tambin son importantes para la vigilancia de las reacciones del suero sanguneo con fines
epidemiolgicos.
231
Principio
La muestra que se va a examinar (pus, esputo, orina centrifugada, lquido cefalorraqudeo, etc.) se trata de la
manera siguiente:
se extiende, en una capa fina, sobre un portaobjetos de cristal
se deja secar completamente
se fija en el portaobjetos, calentndola antes de
teirla.
MATERIALES
Asa para siembra: consiste en un alambre (generalmente
fabricado con una aleacin de nquel y cromo) que por
un extremo se fija a un mango que lo sostiene y por el
otro se dobla formando un pequeo crculo.
Hgase este asa utilizando una pinza y cuidando que
quede centrada.
El tamao real del asa deber ser ste: O
2 mm
Tome una porcin de la muestra que se va a examinar por si hay pus, colocando el asa en posicin
plana en la superficie del lquido.
232
4.
Sosteniendo todava el asa aplanada sobre el portaobjetos muvala trazando una espiral del centro a
la periferia.
Deje cierto espacio entre la muestra y cada uno de
los 4 lados del portaobjetos.
Deje secar la muestra completamente al aire.
A veces se reciben en el laboratorio muestras de procedencia externa sin las marcas correspondientes en los
portaobjetos.
Para saber en cul lado de un portaobjetos sin marcas
se encuentra la muestra:
coloque el portaobjetos de manera que refleje la
luz que entra por la ventana
el lado donde no se halla la muestra brillar
el lado donde est la muestra no reflejar la luz.
FIJACIN
Confirme que el frotis se ha secado completamente
al aire libre.
Pase el portaobjetos tres veces a travs de la llama del
mechero Bunsen, con la muestra hacia arriba.
Djelo enfriar antes de aplicar la tincin.
233
^
,___/
iii***^
Algunas veces es til dibujar un circulo alrededor del
frotis con un lpiz graso, a fin de que se pueda ver ms
fcilmente.
234
/
V'
J~~-~25^
^r^
_--' ,
Ventajas
Gracias a la tincin de Gram las bacterias se pueden
clasificar en dos grupos:
grampositivas, que se tien de morado oscuro
gramnegativas, que se tien de color de rosa.
Esto hace ms fcil su identificacin.
TCNICA
Fije el frotis y djelo enfriar.
1.
3.
Solucin de salranina:
10 segundos
Bacterias
grampositivas
3.
El etanol al 95%:
Decolora ciertas bacterias cuando la solucin
de yodo no ha fijado firmemente la tincin
violeta
No decolora otras bacterias si la solucin de'
yodo ha fijado firmemente la tincin violeta.
A
^Q
La solucin de safranina (color de rosa):
Tie nuevamente de color de rosa las bacterias
que han sido decoloradas por el etanol
No tiene efecto sobre las dems bacterias, que
quedan color violeta oscuro.
236
(?
Or
\l'
AV
CAUSAS DE ERROR
Puede ocurrir una reaccin grampositiva falsa porque:
el frotis se ha fijado antes de que estuviera seco
el frotis ha sido demasiado grueso
quedaron sedimentos en el frasco de cristal de
violeta (fltrese antes de usarlo)
la solucin de yodo de Gram no se escurri completamente
no se dej que el etanol actuara suficiente tiempo
la solucin de safranina fue demasiado fuerte o se
dej demasiado tiempo en el portaobjetos.
Puede ocurrir una reaccin gramnegativa falsa porque:
no se dej actuar suficiente tiempo la solucin de
yodo de Gram
el etanol se dej demasiado tiempo en el portaobjetos y no se lav adecuadamente.
Los grmenes son microorganismos sumamente pequeos (0,5 - 5/im y, cuando mucho, 10/Ltm). Casi todos los
que se intentan detectar por microscopa o en cultivos son bacterias y de ah que las observaciones de esta clase
se llamen "exmenes bacteriolgicos". La deteccin de otros tipos de grmenes (rickettsias, virus, etc.) se lleva
a cabo en laboratorios especializados.
Los cultivos son esenciales para determinar la identidad exacta de las bacterias y, ms especialmente, para
reconocer si los microorganismos que se han encontrado en una muestra son patgenos o inocuos. Con objeto de
identificar los microorganismos que se han cultivado se emplean ensayos bioqumicos, serolgicos (aglutinacin)
y otros.
Cuando sea necesario efectuar cultivos, nunca se debe omitir el envo de muestras a los laboratorios especializados
(para lo relacionado con la remisin de muestras vanse las pginas 268 y 273).
'Nota: Bacterias patgenas obligatorias y facultativas. Bacterias patgenas obligatorias son las que invariablemente causan enfermedades (por ejemplo, el bacilo de la tuberculosis). Las bacterias patgenas facultativas son inocuas en ciertas regiones del organismo
(por ejemplo, los bacilos coliformes, que normalmente son saprofitas del intestino), pero pueden causar enfermedades cuando
invaden otras regiones (los bacilos coliformes pueden producir infecciones en el aparato urinario).
238
en
en
en
en
racimos (estafilococos)
cadenas (estreptococos)
pares
grupos de 4, etc.
'*
(b) Bacilos grampositivos sin esporas
Por lo general son pequeos y de forma variable, y
los extremos pueden estar ensanchados; se agrupan
en hileras o parecen formar letras. Se observan en
muestras de exudado farngeo, sangre, piel, etc.
(diftrico, difteroide, listeria).
Bacilos gramnegativos
Son de tamao variable, con extremos redondeados
o agudos. Pueden ser largos y rectos (bacilos coliformes), con forma de coma (vibriones) o cortos y
gruesos (Proteus). En este grupo figuran numerosas
especies.
5.
Cocobacilos gramnegativos
Su forma es sumamente variable; no son tan redondos como los cocos, ni tan alargados como los bacilos normales (peste, Haemophilus). Se pueden encontrar en muy diversas muestras.
6.
Levaduras y actinomicetos
(a) Levaduras
Son de tamao variable, aunque mayores que las
bacterias. Al observarlas se pueden hallar en el
proceso gemacin. Generalmente se detectan como
contaminantes, aunque algunas veces son patgenas
(exudado genital, esputo, etc.)
(b)
240
Actinomicetos
Granulos voluminosos que a veces se pueden observar a simple vista (su color vara entre blanco y
amarillo).
El centro es gramnegativo y la periferia grampositiva. Se encuentran en muestras de pus cutneo,
esputo, etc.
/
/'
M
\l
>
ti
7.
Espiroquetas
Treponema y Borrelia
Tienen forma de una espiral irregular y suelta; se
tien dbilmente como gramnegativas.
el liquido cefalorraqudeo
el tejido subcutneo
el tubo gastrointestinal
En casos de enfermedad todas estas reas pueden estar infectadas por microorganismos patgenos
241
Ejemplos de informes
1.
2.
3.
abundantes leucocitos
escasos eritrocitos
escasas clulas epiteliales
cantidad moderada de cocos grampositivos en racimos.
escasos leucocitos
muy escasos eritrocitos
escasas clulas epiteliales
escasos bacilos gramnegativos
4.
escasos leucocitos
escasos eritrocitos
escasas clulas epiteliales
abundantes cocos grampositivos en cadenas
escasos bastoncillos grampositivos sin esporas (difteroides)
escasos displococos gramnegativos
muy escasos bacilos gramnegativos.
Importante:
Raras veces es posible diagnosticar una enfermedad en el laboratorio basndose en la identificacin de los microorganismos encontrados por examen bacteriolgico directo de una muestra. Sin embargo, los resultados de tal
examen pueden ayudar al mdico a establecer un diagnstico al estudiarlos junto con las manifestaciones clnicas
del paciente.
242
GONORREA
El gonococo, Neissera gonorrhoeae, es el causante de
la gonorrea, una enfermedad de transmisin sexual
sumamente frecuente. Su trmino de incubacin es de
4-8das.
Exudado
genitourinario
Principio
Los frotis de pus uretral toman la tincin de Gram. Los
gonococos se pueden reconocer por tres caractersticas:
1. Son diplococos (se agrupan en pares)
2. Son gramnegativos
3. Son intracelulares (se hallan dentro de los leucocitos).
Obtencin de muestras del hombre
1.
2.
3. Tmese el pus con asa estril para siembra o directamente en un portaobjetos limpio.
4.
5.
Gonococos
Gonococos
intracelulares
Gonococos
extracelulares
Abundantes leucocitos.
Escasos eritrocitos.
Escasas clulas epiteliales.
No se observan diplococos
intracelulares gramnegativos.
Escasos diplococos extracelulares
gramnegativos.
Abundantes leucocitos.
Escasos eritrocitos.
Escasas clulas epiteliales.
^ O se observan diplococos
intracelulares gramnegativos.
No se observan diplococos
extracelulares gramnegativos.
CONCLUSIN
Gonococos: positivo.
Gonococos: sospechoso.
Gonococos: negativo.
; ' '
245
2.
3.
4.
SFILIS
La sfilis es otra enfermedad de transmisin sexual; la
causa una espiroqueta, el treponema plido (Treponema
pallidum).
El periodo de incubacin es, aproximadamente, un mes.
Al cumplirse el periodo de incubacin suele aparecer el
primer signo de la enfermedad, generalmente en los
rganos genitales: un chancro redondo u ovalado, de
1 - 2 cm de dimetro, rojo, con bordes endurecidos.
246
248
MATERIALES
Portaobjetos de vidrio (si es posible, nuevos, que no
estn rayados)
Asa para siembra
Taco de algodn colocado en un alambre para
flamear
Cronmetro con campanilla
(S
REACTIVOS
Fucsina fenicada para tincin de Ziehl y Neelsen
(reactivo No. 21)
Mezcla de cido y etanol (reactivo No. 4)
Azul de metileno acuoso (reactivo No. 37)
Alcohol metlico (para quemar)
Frasco de lavado con agua destilada.
249
2.
Importante:
Cuando haya terminado de preparar los frotis sumerja
las asas para siembra en un antisptico lquido y sacdalas dentro para quitar los residuos de esputo. A
continuacin coloque las asas junto a la llama, espere
a que se sequen y, acto seguido, las pasa a travs de sta.
As se evitar que el esputo infectado se disemine en
el aire al exponerlo a la llama.
Fijacin
Deje secar los frotis al aire y enseguida los fija
pasando los portaobjetos tres veces a travs de la
llama.
5.
250
SLu
7.
^M
'Y*
Ir
JP P__
rs
2.
Importante:
Otro bacilo patgeno resistente a los cidos es el
causante de la lepra (vase la pgina 262). En la natura
leza, incluso el agua corriente, se suelen encontrar
diversos bacilos que son ms o menos resistentes a los
cidos. Algunas veces provocan resultados incorrectos
en el laboratorio.
y......,.,..
^:i
* r " ''''''''VXovv'>jvvyyjvyv^xiL'>'''
Portaobjetos
negativo
O bien
1 2/300 campos
Nmero observado
1 9/100 campos
Nmero/100 campos
1+
1 9/10 campos
Nmero/10 campos
2+
1 9/campo
Nmero/campo
3+
9/campo
9/campo
4+
'Mtodo de los Centros para el Control de Enfermedades y la OMS, en: Smithwick, R.W. Laboratory manual for acid-fast
microscopy, 2a. ed., Atlanta, Secretara t"? Salud y Servicios Humanos de los EUA, Centros para el Control de Enfermedades, 1976.
252
Microorganismos
que no son resistentes
a los cidos
fe
tie de rojo todos los microorganismos que se
encuentran en el esputo.
9
i
Fucsina fenicada:
Bacilos de la
tuberculosis
Jn i
v
V/ o
A\
<%>
Azul de metileno:
tie de azul todos los microorganismos y elementos
decolorados por la mezcla de cido y etanol, pero
los bacilos acidorresistentes se conservan teidos de
rojo.
C
X
Q
253
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Recjase el primer esputo de la maana.
La enfermera o el tcnico de laboratorio debern estar
presentes y se emplear el procedimiento siguiente:
1.
3.
Importante:
La saliva espumosa y las secreciones nasales y farngeas
no son expectoraciones aceptables. Debe obtenerse otra
muestra del esputo del paciente.
Medio de transporte
lquido
v^
^^y
Obtencin de la muestra
El paciente deber expectorar directamente en el
lquido contenido en el frasco. Atornille la tapa y
efecte la remisin de la muestra.
Esta preparacin se conserva por lo menos durante 10
das.
255
256
Principio
Con el mtodo en fro se requieren los mismos reactivos,
pero se emplea una solucin ms concentrada de fucsina
fenicada que hace innecesario el calentamiento.
Los bacilos de la tuberculosis (y de la lepra) se tien
de rojo y se destacan sobre un fondo azul.
Ventajas
Esta tcnica es ms simple y rpida que el mtodo en
caliente (vase la pgina 249). Facilita adems el examen
de gran nmero de muestras (por ejemplo, en las
encuestas epidemiolgicas).
Sin embargo, se utiliza una cantidad considerable de
fucsina fenicada. Para el trabajo habitual, en un laboratorio general, es ms adecuado el mtodo en caliente.
MATERIALES
Un cronmetro
Fucsina fenicada de Kinyoun (reactivo No. 32)
Mezcla de cido y etanol (reactivo No. 4)
Azul de metileno (reactivo No. 37).
TINCIN
Coloque los portaobjetos a travs de las varillas de
vidrio sobre el fregadero.
No trate ms de 6 portaobjetos a la vez.
Agite bien el frasco de fucsina antes de usarla.
Mtodo
Fucsina fenicada de Kinyoun: 5 minutos
(no se caliente)
Vierta la fucsina sobre los portaobjetos. Cada
portaobjetos deber quedar completamente cubierto
por este colorante.
2.
3.
4.
5.
Principio
En los casos de lepra lepromatosa se observan:
pequeos nodulos en los lbulos y bordes de las orejas
nodulos y placas de mayor tamao en la cara y el cuerpo.
El bacilo de la lepra suele encontrarse en gran nmero en las lesiones lepromatosas, pero generalmente es muy
escaso o no se observa en las lesiones tuberculoides. Se llama Mycobacterium leprae o bacilo de Hansen.
Se incide superficialmente una lesin, sin causar hemorragia. El material seroso de la incisin se extiende sobre
un portaobjetos, se deja secar al aire, se fija durante 3 minutos en vapores de formaldehido y se examina con el
microscopio despus de teirlo mediante una modificacin del mtodo de Ziehl y Neelsen. Mycobacterium
leprae es resistente a los cidos.
MATERIALES
Un bistur
Si es posible, una pinza de puntas romas, sin dientes,
o una pinza curva sin dientes, o una pinza para
tejidos
Una caja de Petri grande
Portaobjetos
Gasa
Etanol
Formaldehido comercial (al 37%)
Reactivos necesarios para la tincin de Ziehl y
Neelsen modificada, que se indican a continuacin.
REACTIVOS
Fucsina fenicada (reactivo No. 21) con solucin A
modificada de modo que contenga lOg (en lugar de
3g) de fucsina bsica.
Mezcla de cido y etanol (reactivo No. 4) modificado a fin de que contenga 1 mi de cido clorhdrico
concentrado, 66 ml de etanol al 95% y 33 mi de agua
destilada
Solucin de azul de metileno (reactivo No. 37)
modificada de manera que contenga 30 ml de etanol
al 95% y 70 mi de agua destilada.
259
2.
4.
5.
7.
1.
4.
Arreglo
262
1 - 8 fim
bastoncillo alargado, recto o ligeramente curvo, con extremos romos
frecuentemente granuloso; los granulos,
voluminosos y de color rojo fuerte,
se hallan separados por espacios
incoloros
(a) Se puede encontrar en grupos de
2 - 5 bacilos dispuestos paralelamente, o
(b) En grupos, o racimos mayores, o
(c) En gran nmero, formando
conglomerados circulares llamados
"globi".
0
1+
2+
3+
4+
5+
ndices bacteriolgico
morfolgico
6+
2+
Ib) ndice morfolgico. Exam nense 100 bacilos de las preparaciones hechas en los portaobjetos. Cuntese el
nmero de bacilos que se ha teido uniformemente de rojo en toda su longitud ("bacilos viables"). Si el
nmero de bacilos viables es, por ejemplo, 8, el ndice morfolgico ser 8%. Este ndice se emplea para
elaborar el diagnstico, la historia clnica y la observacin ulterior de pacientes con bacilos abundantes.
Cultivo
No se dispone de mtodo alguno para cultivar in vitro Mycobacterium leprae. Sin embargo, este microorganismo
se puede multiplicar en la almohadilla plantar del ratn y en el armadillo.
MATERIALES
Una hoja delgada de material plstico o celofn
Un hisopo de algodn (se deber emplear la cantidad
ms pequea de algodn que sea posible)
Portaobjetos numerados con lpiz de diamante
Un tubo de ensayo con solucin de cloruro sdico
(reactivo No. 48)
Reactivos necesarios para efectuar la tincin por el
mtodo de Ziehl y Neelsen modificado: vase la
pgina 259.
*J^
X
iJ
"
)
^
lepromatoso
bimorfo
tuberculoide
indeterminado
Importante:
La bsqueda del bacilo de la lepra se debe llevar a cabo
principalmente en el material obtenido de la raspadura
de las lesiones cutneas (orejas, cara, cuerpo). La tcnica
correspondiente se describe en la pgina 259. En todos
los casos se deber examinar tambin el exudado nasal.
Sin embargo, tmese nota de que algunas veces los
exudados nasales contienen bacilos no patgenos,
resistentes a los cidos, que no son M. leprae.
264
"~^7
**-4-j
1.
Materiales
Una jeringa de 10 mi 20 mi con aguja de calibre
18 (1,2 mm) o calibre 1 9 ( 1 , 0 - 1 , 1 mm)
Tintura de yodo
Etanol al 70%
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
Portaobjetos de vidrio.
Mtodo
1.
2.
3.
4.
5.
Sumerja la jeringa y la aguja en fenol al 5%, extrayendo suavemente el mbolo (vase la pgina 39
en cuanto al desecho de los materiales infectados).
2.
Materiales
Metanol (qumicamente puro)
Portaobjetos de vidrio
Tincin de Wayson (reactivo No. 57)
Agua corriente.
Mtodo
1.
Fijacin
(a) Coloque durante 5 minutos los frotis, que se habrn
dejado secar previamente al aire, en una cubeta para
tincin llena con metanol qumicamente puro.
2.
Tincin
XjX
Resultados
Con el colorante de Wayson los cuerpos polares de
V. pestis se tien de azul y el resto del frotis toma un
color rojizo.
267
Con frecuencia es necesario enviar muestras de heces fecales a otros laboratorios con objeto de que se realicen
cultivos:
para detectar vibriones del clera
para identificar otras bacterias que causan disentera (Salmonella, Shigella, etc.)
Se puede utilizar para ambos propsitos la misma forma de transporte, en el medio de Cary y Blair
(reactivo No. 13).
Importante:
1. Nunca guarde la preparacin en la incubadora.
2. Nunca guarde la preparacin en el frigorfico.
269
MATERIALES
Hisopos de algodn estril en tubos de ensayo, para
recolectar las muestras (para la preparacin de estos
hisopos vase la pgina 274)
Un abatelenguas o una cuchara
Reactivos para elaborar la tincin de Gram (vase
la pgina 235).
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Idealmente la obtencin de la muestra la debera
efectuar un mdico o una enfermera capacitada, aunque
es posible que se solicite al tcnico del laboratorista
que lo haga.
1. El paciente debe permanecer sentado frente a la
luz (se puede usar tambin una linterna elctrica).
2.
7.
270
PREPARACIN DE FROTIS
Frote el hisopo sobre 2 3 portaobjetos hacindolo
girar al mismo tiempo para formar frotis amplios y
suficientemente gruesos.
Si el material obtenido se va a sembrar en un medio de
cultivo o se va a enviar sembrado en un medio de
transporte, tome dos muestras:
la primera, para los medios de cultivo o transporte
la segunda, para preparar frotis que se examinarn
directamente.
Candida
Este hongo es causante de la moniliasis (principalmente
en nios). Se puede encontrar en las formas siguientes:
(a) Levaduras: esporas ovales o redondas, de 2 - 4/Lim de
dimetro y paredes delgadas; se observan botones o
brotes. Son acusadamente grampositivas.
(b) Filamentos miceloides: de longitud variable y 4fim
de anchura, con extremos redondeados.
Para observar ms claramente estas formas hgase
una preparacin hmeda impregnando el hisopo que
contiene la muestra con una gota de solucin de
cloruro sdico y examnese entre un portaobjetos
y un cubreobjetos.
272
2.
3.
274
OBTENCIN DE LA ORINA
Los rganos genitales se debern limpiar anticipadamente (vanse las instrucciones en la pgina 306).
Recjase la muestra a la mitad de la miccin en el
matraz estril. Examnese tan pronto como sea posible.
(De otro modo, se puede recoger la orina en un tubo
cnico para centrifugacin que solamente se haya
enjuagado con agua hirviendo, y examinarla inmediatamente.)
MTODO
1.
10 mi de orina fresca
a velocidad media durante 10 minutos.
275
2.
3.
4.
5.
Para teirlos:
el portaobjetos 1, con la tcnica de Gram (vase
la pgina 235)
el portaobjetos 2, con la tcnica de Ziehl y Neelsen
(vase la pgina 249).
276
BACILOS DE LA TUBERCULOSIS
El portaobjetos teido con la tcnica de Ziehl y Neelsen
se examina en busca de bacilos de la tuberculosis.
Si este examen se ha solicitado especficamente:
centrifugue 10 mi de orina a alta velocidad
durante 20 minutos.
Los bacilos de la tuberculosis se tien de rojo oscuro.
Se agrupan formando hileras.
277
CULTIVOS DE O R I N A
Los sedimentos urinarios se siembran en medios
especiales de cultivo. Recientemente se ha descrito otra
tcnica simple en que se aplica el examen microscpico
directo despus de teir con la tcnica de Gram orina
que no se ha centrifugado. Se debe registrar el nmero
de clulas de pus observadas, as como el aspecto y
los efectos de la tincin de Gram en las bacterias
encontradas. En el cuadro siguiente se indica la manera
en que se pueden interpretar los resultados.
Clulas de pus*
Bacterias
Interpretacin posible
>3
<3
<3
>3
Ninguna
278
MTODO
Muestreo de agua del grifo
A. Preparativos
1.
2.
B. Obtencin de la muestra
1.
2.
<
5.
280
HF2
L -
^g^^m^
iJJIZ^^^H
mm^vK^sm^ms
2.
B. Obtencin de la muestra
1.
4.
5.
6.
B. Obtencin de la muestra
1. Tmese el frasco cerca del fondo y sumrjase unos
20 cm en el agua, con el cuello hacia abajo.
282
Voltee el frasco hasta que el cuello apunte ligeramente hacia arriba, colocando la boca contra la
corriente, si sta existe.
jBtbK
dMK^
1\)0-4P
r*
>
Envo
Haga el envo en el mismo da. Conserve las muestras de agua en el frigorfico mientras tanto.
2.
ABAJO
URGENTE
MODELO DE PLANILLA
Esta planilla se deber llenar y enviar junto con las muestras de agua.
Agua recogida en
Fuente:
(localidad)
Grifo
Bomba
Pozo
(sitio exacto)
Arroyo
No
S a:
metros de distancia
.C
Firma
284
Depsito
Ro
C. SEROLOGIA
40. Envo de muestras de suero y de sangre seca
para efectuar ensayos serolgicos
Suero
Los ensayos serolgicos se llevan a cabo con el fin de determinar si la sangre contiene anticuerpos contra
diversas enfermedades infecciosas.
La sangre se centrifuga para separar el suero de los eritrocitos coagulados. El suero se debe conservar en
condiciones de esterilidad.
Sangre seca
Algunos ensayos serolgicos se pueden realizar en gotas de sangre recogidas en piezas de filtro de papel en las
que se han dejado secar. Poco antes del ensayo se absorbe la sangre en un solvente.
SUERO
Materiales
Equipo para la extraccin de sangre
Una centrfuga
Un tubo para centrifugacin, de 10 mi, de fondo redondo,
con tapa de rosca o tapn de goma; un tubo "Vacutainer"
estril, o una jeringa estril y seca
Pipetas de Pasteur estriles
Chupetes
Una pinza
Un frasco estril, de 10 mi, con tapa hermtica a prueba
de aire (arandela de goma)
Un mechero Bunsen.
Envo
1. Pegue una etiqueta al frasco, con el nombre del
paciente y la fecha.
2. Selle la tapa del frasco con cinta adhesiva.
3. Envuelva el frasco con papel absorbente o gasa.
4. Coloque el frasco en un envase de aluminio y sujtelo
en su sitio por medio de dos cojincillos de algodn.
5. Ponga el envase en una caja de cartn o madera.
6. Asegrese que el tiempo de transporte no sea mayor de
3 das.
Las muestras que se enven en transportes terrestres se
empacarn en cajas hicieras.
Conservacin
La mayor parte de los sueros que se emplean en ensayos serolgcos se puede conservar en el compartimiento
congelador del frigorfico a 2C o temperaturas inferiores, por lo menos durante un mes.
286
Mtodo
1. Extraiga sangre capilar de un dedo, de la manera habitual
(pgina 189).
2. Recoja una gota grande de sangre en la porcin media
de la tira de filtro de papel. Deje que ste absorba
completamente la sangre. Djese secar al aire.
Envo
Escriba el nombre del paciente y el nmero de la muestra
en la pieza de filtro de papel. Deposite ste en una bolsa de
material plstico pequea, o en un sobre de papel ordinario.
Conservacin
Las muestras se conservan por lo menos durante 2 - 3
semanas a la temperatura ambiente en todos los climas.
Propsito
La sangre seca se emplea particularmente para:
elaborar el diagnstico serolgico de la frambesia y la
sfilis (ensayo de inmunofluorescencia de los treponemas)
detectar la IgM en la tripanosomiasis, etc.
287
Principio
1. Se examina el suero en busca de reaginas, anticuerpos que
se producen en las treponematosis (sfilis, frambesia, mal
del pinto).
2. La existencia de estos anticuerpos se pone de manifiesto
por un antgeno lipoide (no treponmico), que es una
suspensin de partculas minsculas.
3. La reaccin que ocurre entre este antgeno y los anticuerpos produce una floculacin de la suspensin
(microaglutinacin). En las regiones tropicales el ensayo
del V D R L se debe efectuar, de preferencia, a temperaturas
de 23 - 29 0 C.
Materiales
Un baomara a 56C
Una maquinilla de rotacin (180 r/min)
Un microscopio con oculares x 4 a x 6, un objetivo
a 10 y platina mecnica
Lminas para V D R L con anillos de fondo plano, de
cermica o parafina, de 14 mm de dimetro
Una jeringa de 2 mi (del tipo usado para insulina)
Una aguja especial sin bisel, que siministre 60 gotas
por mi (aguja de calibre 18 (1,2 mm), a la que se
haya cortado la punta con una sierra, o pipeta
capilar de Pasteur calibrada para suministrar 60
gotas por mi)
Pipetas de 0,2 mi con graduaciones de 0,05 mi
(o pipetas de 1,0 mi con graduaciones de 1/100)
Vasos para anlisis.
Reactivos
Antgeno V D R L , preparado el mismo da en que se use.
Sueros positivos conocidos, como testigos positivos y
dbilmente positivos.
Sueros negativos conocidos, como testigos negativos.
Preparacin de la suspensin de antgeno para el ensayo
del V D R L
1. El antgeno es una solucin alcohlica de I pidos
(cardiolipina y lecitina) y colesterol. Estas sustancias
son insolubles en agua.
2. La suspensin de antgeno se prepara mezclando
ste con la solucin de amortiguador para el ensayo
del V D R L . Las grasas se precipitan al ponerse en
contacto con el agua y se forman partculas
minsculas que producen una suspensin al agitar
la mezcla. La solucin deber cubrir completamente
el fondo del frasco.
288
so-ol
foi
Oii i
yo'
xe'~
LQ
oooo
oooo
oooo
0.4 mi
4.1 mi
Los sueros testigos cuya reactividad se ha determinado anticipadamente (reactivo, dbilmente reactivo, no
reactivo) se prueban contra la suspensin de antgeno.
2. Las reacciones que se produzcan con los sueros testigos debern dar los resultados que se esperan. Al emplear
el suero no reactivo habr una dispersin completa de las partculas de antgeno.
3.
290
4.
anillo 1
anillo 2
anillo 3
5.
6.
sa
4 mih
SSSS
292
Resultados de la microscopia
Suero no reactivo
(NR)
Materiales
Equipo adicional necesario para el ensayo cuantitativo:
Tubos de ensayo y gradillas
Pipetas de 0,2 mi divididas en graduaciones de
0,01 mi
Pipetas graduadas, de 0,1 mi
Una aguja de calibre 19 ( 1 , 0 - 1 , 1 mm) sin bisel
(deber suministrar 75 gotas de la suspensin de
antgeno por mililitro cuando la jeringa y la
aguja se sostengan en posicin vertical, y esto se
Mtodo
1.
/--^s
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V'
1.2
{*
1:4
A
)
y^N
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^ 0 * 1 mi
v y
V/
mm m
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mmmm
Cogiendo las lminas con ambas manos imprima un
movimiento rotatorio, aproximadamente durante
15 segundos, para mezclar los sueros y la solucin.
295
S~~7x
(>
0 13 0
STk
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0 0 00
00 00
Resultados
Notifique los resultados en trminos de la mayor dilucin de suero en que se haya servido reactividad.
Ejemplo
Suero sin diluir
1:2
R
O
N
D
R = reactivo
D = dbilmente reactivo
N = no reactivo
296
R
D
D
N
R
R
R
N
D
R
R
N
N
D
R
N
1:32
N
N
N
N
Reactivo, dilucin al
Reactivo, dilucin al
Reactivo, dilucin al
Dbilmente reactivo,
1:4
1:8
1:16
solo sin dilucin.
D. MICOLOGIA
42. Pitirasis versicolor: examen directo
MATERIALES
Cinta adhesiva de celofn
Un portaobjetos
Una pinza
Un cojincillo de gasa.
Si es posible, solucin acuosa de eosina en proporcin
de 10 g/l (1%) (reactivo No. 19). De lo contrario,
examnese sin tincin.
MTODO
1.
297
298
Cultivo
Hasta la fecha no se ha logrado preparar cultivos.
Tincin con solucin de yodo. La solucin de yodo produce descamacin de la piel y se observan principalmente
filamentos de micelio. No se recomienda este mtodo.
299
MATERIALES
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Escoja un pelo conveniente, que se encuentre dentro
de las placas de calvicie, pero cerca del borde. El pelo
infectado es corto, quebradizo, se halla retorcido y s
ms opaco que ios dems; a veces existe cierto tipo de
pus seco en la raz.
Ponga las pinzas precisamente en la base del pelo. Tire
con firmeza, pero gradualmente. El pelo afectado
generalmente se fija con escasa firmeza en su folculo
y es fcil extraerlo.
2.
EXAMEN MICROSCPICO
Examine la preparacin con el objetivo x 40 (de alto
poder) y despus, si es necesario, utilice el objetivo de
inmersin en aceite. Bsquense esporas (granulos
voluminosos y redondeados, con membrana transparente) alrededor o en el interior del pelo.
1. Esporas que se encuentran alrededor del pelo
Estas esporas se denominan ectothrx. Forman una
envoltura en la base del pelo y se pueden observar
las siguientes:
(a) Ectothrx de esporas pequeas: estas esporas,
de tamao sumamente reducido (2 - 3 tim) se
agrupan en varias capas (microesporas)
(b) Ectothrx de esporas grandes: estas suelen medir
5 - 8 / i m y se presentan en una o dos capas
(megaesporas).
Importante:
Estos exmenes pueden ser difciles, especialmente en
las primeras etapas de la enfermedad.
En caso de duda tome un pelo aparentemente normal,
de la misma longitud que el pelo enfermo, y colquelo
sobre el portaobjetos al lado del pelo infectado, para
compararlos. Solamente por medio de cultivos se puede
determinar con exactitud la especie de hongo que causa
la infeccin.
TERCERA PARTE
A. EXAMEN DE ORINA
1. Recoleccin y aspecto de las muestras de orina
Las muestras de orina se deben recoger:
de la manera apropiada
en los recipientes indicados.
Si estas muestras no se recogen adecuadamente, los
resultados que se obtengan en el laboratorio no sern
confiables.
305
MTODOS DE RECOLECCIN
Muestras obtenidas a la mitad de la miccin:
Este tipo de muestras se necesita para toda clase de
exmenes.
3 muestras separadas:
Estas se solicitan algunas veces por los mdicos. El
paciente orina sin detenerse en 3 vasos sucesivos,
marcados con los nmeros 1, 2 y 3. De esta manera se
puede determinar, por ejemplo, cul de los vasos contiene
la mayor cantidad de sangre, pus, etc.
Muestras obtenidas con sonda:
La obtencin de orina por medio de una sonda debe ser
efectuada por un mdico o una enfermera capacitados.
Este procedimiento se emplea para llevar a cabo algunos
ensayos bacteriolgicos, principalmente en mujeres. Sin
embargo, generalmente se aceptan para este fin muestras
obtenidas de la manera habitual despus de limpiar el
rea genital.
Nios:
La orina se puede recoger en una bolsa de material
plstico con boca adhesiva. Esta bolsa se fija alrededor de
los rganos genitales del nio durante 1 - 3 horas,
dependiendo del examen solicitado. Se pueden emplear
las bolsas para colostoma.
ASPECTO DE LA ORINA
Descrbase el aspecto de la orina:
el color, ya sea amarillo, oscuro, castao o incoloro
indquese si la orina es clara o turbia.
306
Materiales
1 urinmetro
1 termmetro (de 0 - 50 o C)
1 probeta (50 mi).
Se necesitan por lo menos 40 mi de orina.
Mtodo
1.
2.
3.
Clculos
Observe la temperatura a que se encuentra catibrado el urinmetro (el fabricante la indica marcndola en el
instrumento). Habitualmente es de 20C. Tome nota de la temperatura que se ha medido en la orina.
Aada a la GE registrada:
- 0,001 por cada 30C que mida la temperatura de la orina por arriba de la temperatura de calibracin del
urinmetro.
En el caso contrario reste de la GE que se ha registrado:
0,001 por cada 3oC que tenga la temperatura de la orina por debajo de la temperatura de calibracin.
Ejemplo
El urinmetro se ha calibrado a 20C.
La temperatura de la orina es de 26C.
La GE medida es de 1,021.
La temperatura de la orina es 60C mayor que la temperatura de calibracin.
Aada a la GE:
6 x 0,001 = 2 x 0,001 = 0,002
3
Por lo tanto, la GE real de la orina ser:
1,021 +0,002=1,023.
Resultados
GE normal: 1,020 (variacin normal: 1,010-1.025).
GE baja: menos de 1,010* (trastornos renales o endocrinos).
GE elevada: superiora 1,025 (glucosuria, proteinuria).
*Una cifra reducida carece de importancia si el paciente ha ingerido una gran cantidad de lquidos antes del ensayo.
MEDICIN DEL pH
Utilidad del ensayo
La orina normal producida recientemente es ligeramente cida, con un
pH de 6,0 aproximadamente. En ciertas enfermedades el pH de la orina
puede aumentar o disminuir.
Principio
Se sumerjen en la orina piezas de papel indicador de colores.
El color cambia segn el pH.
Los papeles se comparan entonces con un cuadro testigo estandarizado
en el que figuran las cifras correspondientes.
Materiales
Cristales de reloj
1 gotero
1 tenacilla
Papeles indicadores de tipo universal (para medir pH
de 1 a 10)
Papeles indicadores de graduacin limitada:
para el intervalo de 5,0 7,0 y el intervalo de
6,0 - 8,0.
La orina en que se haga el ensayo deber ser fresca.
Mtodo
En un cristal de reloj ponga una tira de papel
indicador de tipo universal (pH 1 10).
Deposite en el papel indicador algunas gotas de orina
fresca.
4.
Resultados
pH normal
aproximadamente 6,0 (lmite del intervalo normal, de 5,0 a 7,0 durante el da).
pH cido
pH alcalino
4,5 . 5,5 (si persiste, puede obedecer a algunas formas de diabetes, fatiga muscular, o acidosis).
7,8 - 8,0 (infecciones del aparato urinario; alimentacin vegetariana).
pH y depsitos de cristales
La determinacin del pH de la orina es til para identificar depsitos de cristales (vanse las pginas 3 3 2 - 3 3 5 ) .
Algunos cristales se depositan solo en la orina cida; otros lo hacen solamente en la orina alcalina.
Por ejemplo:
Orina cida: oxalatos, cido rico.
Orina alcalina: fosfatos, carbonatos.
Recordatorio:
310
Principio
La glucosa (azcar que se encuentra en la orina de los diabticos) es una sustancia reductora: reduce el sulfato
cprico, de color azul, de la solucin de Benedict, a xido cprico rojo,que es insoluble.
MTODO DE BENEDICT
Materiales
Tubos de ensayo de vidrio Pyrex
Un porta tubos de madera
Un vaso para anlisis
Un mechero Bunsen
Frascos para penicilina
Una pipeta
Solucin cualitativa de Benedict (reactivo No. 9)
5 mi
Mtodo
1. Con una pipeta deposite 5 mi de solucin de
Benedict en un tubo de ensayo.
Resultados
Examine la mezcla para saber si hay cambios de color o precipitados.
Color
Azul
Negativo
Verde
Huellas
14
Verde con
precipitado amarillo
28
Desde amarillo
hasta verde oscuro
++
56
Castao
+++
83
Desde anaranjado
hasta rojo ladrillo
++++
111 ms
Nota: Para detectar azcar en la orina por medio de tiras reactivas vase la pgina 323.
312
Materiales
Tubos de ensayo
Una pipeta de 5 mi, graduada
Solucin acuosa de cido sulfosaliclico en proporcin
de 300 g/l (reactivo No. 50).
^>o<oo
es?
Mtodo
1.
D C5
c^cTlllrx
5\ A
Z><=> C D O
=><=> O eO
313
Resultados
Resultado positivo
Al aadir el reactivo se forma un precipitado blanco.
Esta tcnica es til cuando se debe efectuar el ensayo
con numerosas muestras. Notiffquense los resultados de
la manera siguiente:
+
huellas
++
cantidad pequea
+++
cantidad mediana
111 i
gran cantidad (aspecto opaco).
Resultado negativo
No se forma el precipitado blanco al agregar el reactivo.
Nota: Para la deteccin de protenas mediante cintas reactivas vase la pgina 323.
Materiales
Solucin de cido sulfosaliclico en proporcin de 30 g/l (3%) (reactivo No. 51)
Tubos estandarizados con protenas.
Mtodo
1. Con una pipeta depostese 1 mi de orina en un tubo
pequeo, del mismo calibre que los tubos estandarizados.
2. Adanse 3 mi de solucin de cido sulfosaliclico.
Mzclese y djese reposar 5 minutos.
Resultados
Notifique la cantidad de albmina en g/l.* Si ei
resultado es superior a 1 g/l, diluya la orina con solucin
de cloruro sdico y repita el ensayo, haciendo los ajustes
necesarios en los clculos.
Ejemplo:
Para una dilucin de orina de 1 x 4 utilice 0,25 mi de
orina y 0,75 mi de solucin de cloruro sdico.
Mzclense. Multiplique por 4 el resultado que se obtenga.
'Para convertir los valores expresados en mg/100 mi en valores
que se expresen en g/l, divdase entre 100.
Ejemplo: 100 mg/100 mi x 0,01 = 1 g/l.
315
Mtodo
1. En un tubo de ensayo coloqense:
4 mi de orina.
2. Agregue:
4 gotas de solucin yodurada de Lugol.
Agtese el tubo.
Observe el color que se forme inmediatamente.
316
Resultados
Resultado negativo
Se forma un tnue color castao amarillento.
Resultado positivo
Se produce un color verde:
verde plido: +
verde intenso: ++
Tubos de ensayo
Un embudo
Filtro de papel
Una pipeta gotera o un frasco gotero
Una probeta de 10 mi
Solucin acuosa de cloruro brico en concentracin
de 100 g/l (10%) (reactivo No. 8)
Reactivo de Fouchet (reactivo No. 27).
Mtodo
1. Mezcle en un tubo de ensayo:
5 mi de orina
2,25 mi de solucin de cloruro brico.
Se formar un precipitado.
2. Filtre la mezcla.
El precipitado (que contiene los pigmentos biliares)
se quedar en el filtro de papel.
317
Resultados
Resultado negativo: el color no cambia.
Resultado positivo: el precipitado toma un color verde.
318
6. Urobilingeno en la orina
MATERIALES
Reactivo de Ehrlich (vase el reactivo No. 18).
Un tubo de ensayo.
MTODO
1.
2.
z> <z> o o
=> o
f^
"te
"K^
O G> o LJ
3.
1J<=A
o o <=> 1
RESULTADOS
Color rojo intenso: indica que la cantidad de
urobilingeno ha aumentado.
Color de rosa a castao tnues: indican que la
cantidad de urobilingeno es normal.
Nota: Vase el uso de tabletas indicadoras en la pgina 324.
319
MATERIALES
Tubos de ensayo
Una gradilla
Una probeta de 10 mi
Una pipeta gotera
Pentacianonitrosilferrato (2-) sdico (cristales)
Acido actico glacial
Amonaco.
MTODO
1. Preparacin de la solucin de
pentacianonitrosilferrato
(2-) sdico
Inmediatamente antes de llevar a cabo el ensayo
deposite algunos cristales de pentacianonitrosilferrato (2-) sdico en un tubo de ensayo (solo
los suficientes para cubrir el fondo del tubo).
2.
*En la etiqueta del frasco de que disponga en su laboratorio pueden figurar el nombre recomendado internacionalmente,
pentacianonitrosilferrato (2-) sdico, o el ms antiguo y ampliamente usado, aunque no recomendado, nitroprusido. Ambos
nombres corresponden a la misma sustancia, pero diferentes fabricantes usan uno u otro.
320
3.
/= = * ^ Y
ACIDO
ACTlo
Afiada a la orina:
- 10 gotas de cido actico.
5.
A continuacin agregue:
10 gotas de la solucin recientemente preparada
de pentacianonitrosilferrato (2-) sdico.
6.
Mzclese bien.
1 <= ^
c W \
321
RESULTADOS
Resultado negativo: ei color no cambia.
Resultado positivo: se forma un anillo de color violeta
en ia superficie.
Anillo de color de rosa: +. Anillo rojo: ++.
Anillo violeta intenso: +++.
Nota: Vase el uso de tabletas o papeles indicadores en la
pgina 323.
322
IP
c^
Instrucciones y precauciones
Conservacin: conserve estos productos en lugares muy secos. Coloque el tapn en el frasco correspondiente
inmediatamente despus de usarlos.
Siga las instrucciones del fabricante.
Utilidad
Ventajas:
Inconvenientes:
este mtodo es rpido, fcil y no requiere utensilios de vidrio, balanzas o sustancias qumicas.
estos reactivos suelen ser costosos. Algunos resultados son difciles de interpretar. En ciertos
casos las cintas o tabletas son poco estables y no reaccionan.
A. Cintas reactivas
Siga las instrucciones del fabricante.
B. Tabletas
La manera de usarlas depende del ensayo que se pretenda realizar; vase ms adelante.
2.
Ensayo de la proteinuria
Papeles (impregnados con azul de tetrabromofenol).
Resultado positivo: por lo general el papel toma un color verde amarillento (huellas de protenas) o verde
azulado (resultado intensamente positivo).
Inconveniente
Con frecuencia, los papeles para el ensayo de protenas son demasiado sensibles y pueden dar resultados
dbilmente positivos que son falsos.
*En todos los casos respete absolutamente las instrucciones del fabricante.
323
Ensayo de sangre
Papeles (impregnados con ortotolidina).
Resultado positivo: casi siempre aparece en el papel
en menos de 1 minuto un color azul.
9. Sedimentos urinarios
Principio
La orina contiene elementos microscpicos en suspensin (clulas, cristales, etc.). Estos elementos se recogen por
centrifugacin y para examinarlos se pone una gota del sedimento formado entre un portaobjetos y un
cubreobjetos.
Como todos estos elementos en suspensin se sedimentan en la orina, si sta se deja en reposo durante algunas
horas, se les llama sedimentos urinarios.
Obtencin da la orina
Examine una muestra producida en una sola miccin.
Examine asimismo tan pronto como sea posible una muestra de orina fresca obtenida a la mitad de la miccin;
esta muestra deber ser:
obtenida en el mismo laboratorio, o bien
llevada rpidamente del cuarto del paciente al laboratorio (antes de que transcurran 2 horas desde la miccin).
El recipiente ser proporcionado por el laboratorio.
A las mujeres se les indicar se laven sus rganos genitales antes de orinar (vase la pgina 306).
Nunca se examinen muestras de orina que se hayan conservado en el frigorfico.
Utilidad
En ciertas enfermedades del aparato urinario los sedimentos se alteran considerablemente. En estas condiciones
se pueden encontrar los elementos siguientes:
pus
nmero anormal de eritrocitos
cristales anormales, etc.
diversas formas de parsitos.
Preservacin de la orina mediante solucin de formaldehido
Para efectuar el examen de sedimento la orina se puede preservar agregando:
8 gotas de solucin de formaldehido al 10% por cada 300 mi de orina.
La orina tratada de esta manera no se puede utilizar en otros ensayos, sea cual fuere su naturaleza.
MATERIALES
Una centrfuga elctrica o manual
Un tubo cnico para centrifugacin, de 15 mi
Una pipeta capilar gotera (pipeta de Pasteur), si es
posible, calibrada para suministrar 50 gotas por cada mi
Un portaobjetos y un cubreobjetos de 20 x 20 mm
Si es necesario, solucin de formaldehido al 10%
(reactivo No. 25).
A
A5 /z
/
325
f\
PREPARACIN D E L SEDIMENTO
1.
2.
3.
\* <^r^<S:::::iii:i::S:)
A. i Eritrocitos
Pueden estar:
(a) intactos: pequeos discos amarillentos, ms oscuros
en los bordes (8 /m)
(b) festoneados: con bordes espinosos y dimetro
reducido (5 6 fim)
(c) henchidos: crculos de poco espesor y dimetro
aumentado (9 10 im).
Normalmente no hay eritrocitos en la orina.
Nota: Se pueden encontrar eritrocitos en la orina de mujeres si las
muestras se obtienen durante el periodo menstrual.
Eritrocitos
0 1 0 eritrocitos por campo
escasos eritrocitos
(normal)
abundantes eritrocitos
Leucocitos
escasos leucocitos
(normal)
abundantes leucocitos
racimos de ms de 20 leucocitos
degenerados
C. Levaduras
No se deben confundir con eritrocitos.
Tamao: 5 1 2 nm
Forma:
cuerpos redondeados u ovales de varios
tamaos, que se hallan juntos. Se pueden
observar brotes.
No son solubles en cido actico.
Las levaduras se observan ocasionalmente en muestras
de orina que contienen glucosa. Verifique que la orina
sea fresca.
328
D. Trichomonas
Tamao:
15 fim (equivalente a 2 eritrocitos)
Forma:
redonda, globular
Movilidad: mviles en la orina fresca (giran y se
vuelven)
Membrana
undulante: lateral
Flagelos: 4 flagelos ms o menos visibles.
Vase tambin la pgina 187.
E. Espermatozoides
Se encuentran ocasionalmente en la orina de hombres.
Cabeza:
muy pequea (5 xm)
Flagelo:
largo y flexible (50 tm)
Movilidad: mviles en la orina muy fresca.
F. Clulas epiteliales
1. Clulas epiteliales escamosas
Grandes y rectangulares; provienen de la descamacin
(desprendimiento de clulas del epitelio de los
conductos y rganos urinarios).
Se originan en:
el urter, o
la vagina.
5.
Clula' renales
Las clulas renales son pequeas:
su tamao es el de 1 - 2 leucocitos (L)
son sumamente granulosas.
Los ncleos refractan la luz y son claramente visibles.
Casi siempre se encuentran junto con las protenas
urinarias.
G. Cilindros
Los cilindros son cilindricos y alargados, y cruzan casi
todo el campo cuando se examinan con el objetivo x 40.
Se forman durante las enfermedades de los tbulos
renales, que se pueden llenar de sangre, de otras clulas
y de depsitos de sustancias qumicas.
1.
Cilindros hialinos
Son transparentes y refractan ligeramente la luz;
los extremos pueden ser redondeados o delgados.
(Se suelen encontrar en individuos sanos despus
de esfuerzos musculares intensos.)
2.
Cilindros granulosos
Estos cilindros son ms bien cortos, llenos de
granulos voluminosos, de color amarillento y
extremos redondeados.
Los granulos provienen de clulas epiteliales
degeneradas de los tbulos renales.
330
Cilindros sanguneos
Estos cilindros se encuentran llenos de eritrocitos
ms o menos degenerados, de color acastaado.
5. Cilindros de pus
Contienen leucocitos degenerados. Los verdaderos
cilindros de pus se llenan completamente de
leucocitos (a).
Los cilindros hialinos pueden contener algunos
leucocitos (b).
8. Falsos cilindros
No se deben confundir con cilindros:
- las acumulaciones de cristales de fosfatos, que
son pequeas y claramente delimitadas (a)
las acumulaciones de moco translcido, cuyos
extremos se adelgazan hasta tomar forma de
hilos (b).
I. Cristales
Los cristales tienen formas geomtricas uniformes (A),
a.diferencia de los residuos amorfos, que consisten en
acumulaciones de granulos pequeos sin forma
definida (B).
'*r
> *
#
(b) RESIDUOS
AMORFOS
1. Fosfatos amorfos (en orina alcalina)
2.
laminillas hexagonales
30 60 nm
incoloras; refractan intensamente la luz.
2.
Tamao:
Color:
Solubles en ter.
3.
Bi/irrubina
Forma:
Tamao:
Color:
(muy rara)
diversos cristales sumamente pequeos,
cuadrados, esfricos o en agujas
5/im (aproximadamente 1/2 eritrocito)
castao.
**
Jf
<
,.
*4r
*m
^
<
A . ENSAYO INMUNOQUMICO
Existen numerosos reactivos comerciales para llevar a cabo este estudio:
en un tubo de ensayo, o
en un portaobjetos.
1.
Resultado
positivo
2.
positivo
Los resultados positivos se suelen obtener 9 - 1 5 das despus de que ha faltado el primer periodo menstrual,
dependiendo de los reactivos y del tipo de ensayo que se aplique.
336
337
( *
fe
1.-.
2.
y w
339
V
1l
CONCENTRACIN T O T A L DE LEUCOCITOS EN
EL LCR
Materiales
una cmara para recuento de Fuchs y Rosenthal
(si no se dispone de ella, se puede emplear una
cmara de Neubauer mejorada, para recuento)
una pipeta de Pasteur con perilla de goma
Solucin de Trk (reactivo No. 54).
Mtodo
1.
2.
4.
Importante:
Si se emplea LCR sin diluir, examine las clulas con el objetivo x 40 para cerciorarse de que se trata
efectivamente de leucocitos. Si hay eritrocitos haga el recuento utilizando el objetivo x 40.
342
i\
-ii
--
'l
^
\ *v
i\
\f-
r.
->-
'-
-4k^7
-4Q
T^o
-11-fl-
-dO.
-i
4fiL_
Me
HA
111 iCr
1 1 -io1 ===^*= = =t a= === =
SSa
Vg*/
Principio
En la meningitis (especialmente la meningitis purulenta) se reduce considerablemente la cantidad de glucosa
en el LCR.
MATERIALES
Los mismos que se utilizan para calcular la glucosa en la sangre (vase la pgina 429).
MTODO
El mismo que se emplea para calcular la glucosa sangunea, con la diferencia de que se necesita una cantidad de
LCR cuatro veces mayor.
En los individuos sanos la cantidad de glucosa del LCR es de 2,5 - 4,2 mmol/l.*
Importante:
Ya que la glucosa del LCR se descompone rpidamente una vez que se ha recogido el lquido, es importante que
esta determinacin se efecte tan pronto como sea posible.
Si existe la posibilidad de una tardanza, el LCR se deber preservar con oxalato de flor (vase el reactivo No. 23).
*En unidades tradicionales, 45 - 75mg/100ml.
344
Principio
La cantidad total de protenas del LC R se mide diluyendo ste en cido sulfosaliclico al 3% y comparando la
turbidez que se produce con la de un juego de tubos que contienen protenas estandarizadas.
Por medio de la prueba de Pandy se determina el aumento de las globulinas en el LC R, agregando ste a una
solucin de fenol.
MATERIALES
LC R: centrifugelo y utilice el lquido sobrenadante
cido sulfosaliclico (reactivo No. 51) en proporcin
de 30 g/l
reactivo de Pandy (reactivo No. 39)
pipetas graduadas
protenas estandarizadas (vase la pgina 314).
2.
V I
m
CS
3.
C3
Resultados
El total de protenas del LC R normal es de
0,1 0,45 g/l.*
Las protenas del LC R aumentan:
en la meningitis, las hemorragias subaracnoideas y
las compresiones vertebrales
en la tripanosomiasis africana
*En unidades tradicionales, 10 45 mg/100 mi.
345
Y
2.
3.
4.
346
II
1.
Resultados
El descubrimiento de tripanosomas mviles en el LCR
indica que la enfermedad ha llegado a su etapa tarda en
que el sistema nervioso se encuentra infectado. Por
medio de la prueba de Pandy se determina si existe un
aumento en las protenas del LCR. Asimismo el lquido
contiene una cantidad mayor de leucocitos.
2.
Resultados
La presencia de cualesquiera microorganismos que se
observen en el frotis con la tincin de Gram se deber
notificar, indicando:
su reaccin al mtodo de Gram: positiva o negativa
su morfologa: cocos, diplococos, bacilos, etc.
la cantidad observada.
No es posible identificar con claridad las especies
empleando solamente el frotis teido. Se necesita
cultivar los microorganismos.
Meningococos
gramnegativos
diplococos que se sitan uno al lado de otro
intracelulares; se hallan en el interior de los
neutrfilos.
Ocasionalmente se observan afuera de los leucocitos
en cantidad reducida.
B.
Neumococos
grampositivos
diplococos que se juntan por los extremos
se rodean de una cpsula que no es visible con
la tincin de Gram
generalmente son numerosos.
348
gramnegativos
bacilos pequeos (cocobacilos)
no son intracelulares
suelen ser numerosos.
En todas estas formas de meningitis los leucocitos que se observan son neutrfilos.
Bacilos grampositivos
Se observan raras veces. Pueden pertenecer al grupo de Listeria. Su cultivo es esencial.
3. PREPARACIN DE ZIEHL Y NEELSEN PARA
RECONOCER LA MENINGITIS TUBERCULOSA
Si se sospecha que existe una meningitis tuberculosa,
la muestra de LCR se debe dejar en reposo. Generalmente se forma un cogulo frgil. Este cogulo se
debe extraer, extenderlo en un portaobjetos y
tratarlo con el mtodo de Ziehl y Neelsen, como se
indica en la pgina 249.
Resultados
Si se observan microorganismos, informe que en el frotis
se han encontrado "bacilos resistentes a los cidos".
4.
HONGOS EN EL LCR
G
o. ?
350
SeS*'
C. HEMATOLOGIA
16. Las clulas sanguneas
La hematologa es el estudio de la sangre, que comprende las clulas sanguneas y el lquido que las rodea.
Existen 3 tipos diferentes:
1. Glbulos rojos o eritrocitos
Aspecto:
7,5 tim
Tamao:
Concentracin
de nmero:
aproximadamente 5 x 10 12 por
litro (5 000 000 por m m 3 ) de
sangre
Los eritrocitos transportan la hemoglobina, que se combina con el
oxgeno y lo lleva desde los
pulmones hasta los tejidos.
Tambin llevan el bixido carbnico
de los tejidos a los pulmones,
efectundose as la eliminacin
del material ms importante al que
se degradan por los procesos
metablicos casi todas las sustancias
orgnicas que se encuentran en el
cuerpo.
Funcin:
2.
CLULAS SANGUNEAS
O
3. Plaquetas o
trombocitos
Aspecto:
Tamao:
Concentracin
de nmero:
2 - 5 nm
aproximadamente 300 x 10 9 por
litro (300 000 x m m 3 ) de sangre
Funcin:
e
4
Coagulacin de la sangre
Cuando la sangre se coloca en un tubo de vidrio se
solidifica en 5 - 10 minutos, formando un cogulo; en
otras palabras, la sangre se ha coagulado.
Si se aade a la sangre un anticoagulante especial tan
pronto como se extraiga, se evitar que se coagule y
seguir siendo lquida. Entre otros anticoagulantes se
encuentran el oxalato de fluoro, el citrato trisdico, la
solucin salina bipotsica de EDTA y la mezcla de
Wintrobe (vanse las pginas 465 y siguientes).
o
3
Principio
La sangre venosa se extrae de una vena del brazo por
medio de una aguja y una jeringa.
MATERIALES
Para desinfectar la piel
Etanol al 70%, q tintura de yodo
Algodn.
Para la puncin de la vena
Un torniquete hecho con un tubo de goma de
2 - 5 mm de calibre
Agujas
longitud: 30 - 40 mm
dimetro o calibre: 0,9 mm
(calibre 20)
1.0 mm
(calibre 19)
1.1 mm
T,2mm
(calibre 18)
bisel: mediano
(Los tamaos de las agujas se indican generalmente por su
longitud y dimetro). Para extraer sangre de nios menores de
cinco aos se usan agujas de calibre 23 (0,6 mm) 25 (0,5 mm)
MTODO
Lase cuidadosamente la planilla de solicitud del paciente
Decida la cantidad de sangre que se necesitar
Prepare el frasco o el tubo adecuado, que se usar en
el ensayo correspondiente.
Antes de extraer la sangre lvese las manos con agua y
jabn.
vs^
Uso de la jeringa
1.
Aplique el torniquete.
2.
Importante:
Nunca se intente puncionar una vena por un lado.
Nunca se introduzca la aguja con el bisel hacia abajo.
356
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359
La concentracin de nmero de leucocitos (glbulos blancos) es el nmero de ellos que se encuentra en un litro
de sangre. (En unidades tradicionales se expresa como el nmero de leucocitos por milmetro cbico y se llama
"recuento" de leucocitos o glbulos blancos.)
Principio
La sangre se deposita en un lquido para diluir leucocitos, que:
destruye los eritrocitos (hemolisis)
deja intactos los glbulos blancos.
A continuacin se cuentan los leucocitos (glbulos blancos) en una cmara para recuento, por medio del
microscopio, y se calcula el nmero que existe en cada litro de sangre.
Utilidad
En ciertas enfermedades se altera el nmero de leucocitos. Por ejemplo, durante algunas infecciones ocurre un
aumento.
MATERIALES
Pipetas
1.
2.
Lquido para
dilucin
MTODO
1.
2.
3.
o
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5.
361
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7.
8.
362
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Recuento de leucocitos
(a) Uso de la cmara cuadriculada de Neubauer mejorada
rea de la cmara = 9 mm2
Profundidad de la cmara = 0,1 mm
Cuente las clulas en un rea de 4 m m 2 utilizando
los cuadros numerados 1, 3, 7 y 9, como se indica
en la figura.
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106
= clulas contadas x 50 x 10 6
= clulas contadas x 0,05 x 10 9
Ejemplo:
En los cuatro cuadros se cuentan 188 clulas. Por lo tanto, el nmero de clulas por milmetro cbico de sangre
sin diluir es:
188x10x20 ( =
y el nmero de clulas por litro es: 1 ^
IP
188 x
so = 9400)
x 20
El clculo y el ejemplo se han expresado en unidades SI. Sin embargo, en el texto tambin se explica la unidad tradicional (nmero
de clulas por milmetro cubico). (La multiplicacin del nmero de clulas contadas x 50 proporciona el nmero de clulas por
milmetro cbico.)
363
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RESULTADOS
Mrgenes normales
Unidades SI
(clulas x 10 9 x litro)
Hombres y mujeres
Nios de 10 aos
Nios de 3 aos
Nios pequeos ( 3 9 meses)
Recin nacidos
410
410
411
415
1020
Unidades tradicionales
(clulas x mm 3 )
400010000
4 00010000
400011000
400015000
1000012000
Valores elevados
El aumento del nmero total de leucocitos circulantes se llama leucocitosis. Se observa en el curso de algunas
infecciones bacterianas pigenas. En la leucemia se pueden encontrar concentraciones de nmero de leucocitos
que varan desde 50 x 10 9 /l hasta 400 x 10 9 /l ( 5 0 0 0 0 / m m 3 a 4 0 0 0 0 0 / m m 3 ) y an ms. Por lo tanto, se
necesita emplear una dilucin mayor de sangre para determinar la concentracin de nmero; por ejemplo,
0,05 mi de sangre y 1,95 mi del lquido para dilucin, de modo que se obtenga una dilucin de 1 x 40. Si se
emplea esta dilucin el nmero de clulas contadas se deber multiplicar por 0,1 en vez de 0,05 para obtener
el nmero por 10 9 por litro (si se usan unidades tradicionales, multiplique por 100 en vez de 50 para obtener
el nmero por m m 3 ) .
Valores reducidos
La disminucin del nmero total de leucocitos circulantes se denomina leucopenia. Se observa en algunas
infecciones como la tifoidea y el paludismo, y despus de usar durante cierto tiempo algunos medicamentos.
Cuando la concentracin de nmero de leucocitos es muy reducida, el grado de dilucin de la sangre deber
ser menor; por ejemplo, 0,05 mi de sangre y 0,45 mi del lquido para dilucin, con lo que se obtendr una
dilucin de 1 x 10. Si se emplea esta dilucin, el nmero de clulas contadas se deber multiplicar por 0,25 en
vez de 0,05 para obtener el nmero por 10 9 por litro (si se usan unidades tradicionales multiplique por 25 en
vez de 50 para obtener el nmero por m m 3 ) .
Clculo*
La concentracin de nmero de normoblastos (por litro) es:
Nmero de normoblastos contados
100 + No. de normoblastos contados
Ejemplo
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentracin de nmero de leucocitos es 6 x 1 0 9 / l , la concentracin de
nmero de normoblastos ser:
50
100 + 50
x 16 = 5,3 x 10 9 /l
* En unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se expresan por milmetro cbico. En tales unidades
el clculo correspondiente al ejemplo que se ha dado sera:
50
100 + 50
x 16000=5300/mm3
El nmero de eritrocitos (glbulos rojos) contenidos en un litro de sangre se denomina concentracin de nmero
de eritrocitos. (En unidades tradicionales se expresa como el nmero de clulas por milmetro cbico y se llama
"recuento" de eritrocitos o glbulos rojos.) Es difcil lograr determinaciones precisas de la concentracin de
nmero de eritrocitos con una cmara para recuento, y se recomienda que en vez de intentarlas se determinen
la fraccin de volumen de eritrocitos (hematocrito o volumen de sedimentacin globular) y la concentracin
de hemoglobina. Sin embargo, en este manual se describe el recuento de glbulos rojos considerando que existen
lugares donde no es posible determinar la fraccin de volumen.
Principio
La sangre se diluye por medio del lquido para diluir
eritrocitos.
Los eritrocitos se cuentan con el microscopio en una
cmara para recuento y se calcula el nmero por litro
de sangre.
MATERIALES
Pipetas:
(a) Una pipeta para sangre (conocida tambin como
pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mi
(20 m m 3 2 0 / i l ) , con tubo de goma y boquilla.
No se recomienda el uso de pipetas con perilla, ya que
son imprecisas, difciles de emplear y limpiar, y ms
costosas.
MTODO
1.
2.
366
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6.
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HM
Recuento de eritrocitos
Por medio de una cmara de Neubauer mejorada:
Cuente las clulas en un rea de 0,2 m m 2 , empleando
los cuadros A, B, C , D y E.
Incluya en este recuento las clulas que se encuentren
sobre las I neas de dos lados de cada cuadro revisado,
como se indica a continuacin:
Este cuadro representa uno de los cinco en que se ha
hecho el recuento, que son los cuadros A, B, C, D y E.
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...
millones
Ejemplo:
En los primeros cinco cuadros se cuentan 390 clulas. Por lo tanto, el nmero de clulas en 1 mm 3 de sangre
sin diluir es 390 x 0,01 x 10 6 = 3,9 millones. La concentracin por litro de sangre sin dilures 390 x 0,01 x 10 1 2 ,
3,9x 1012/l.
368
RESULTADOS
Mrgenes normales
Unidades SI:
clulas x 10 12 por litro
Unidades tradicionales
millones de clulas
por milmetro cbico
4,5-5,5
4,0-5,0
4.2-5,2
3,8-5,2
5,0-6,0
4,5-5,5
4,0-5,0
4,2-5,2
3,8-5,2
5,0-6,0
Hombres
Mujeres
Nios (4 aos)
Lactantes ( 1 - 6 meses)
Recin nacidos
Observe que las cifras son iguales en unidades SI y unidades tradicionales; por ejemplo, 5,0 x 10 , 2 /l 5,0 millones/mm 3 . Sin
embargo, algunas veces los valores expresados en unidades tradicionales se escriben completos; por ejemplo, 5 000 000/mm 3 .
Concentraciones bajas
Se encontrarn concentraciones bajas en pacientes con anemia causada por prdida de eritrocitos o hemolisis.
Concentraciones elevadas
Se observarn concentraciones elevadas de eritrocitos en pacientes con deshidratacin o policitemia.
369
Pipetas obstruidas
Introduzca un hilo delgado de nylon (tipo 000) por
la punta de la pipeta al mismo tiempo que se
succiona por el extremo contrario.
Si de este modo no se consiguen resultados, sumerja
la pipeta durante 12 horas en un vaso para anlisis
que contenga solucin limpiadora de bicromato.
5.
Cuando se van a llevar a cabo varios estudios, limpie la cmara tan pronto como sea posible despus de cada
ensayo, enjuagndola con agua y secndola con una pieza de gnero suave y limpia. Es necesario que la cmara se
limpie ms minuciosamente una vez al mes, como se ha indicado anteriormente.
370
La hemoglobina es el pigmento rojo que se encuentra en los eritrocitos. Se compone de cadenas de protenas y
molculas que contienen hierro. Transporta oxgeno a las clulas de los tejidos del organismo.
Unidades de medicin
Estrictamente, la unidad SI para expresar las concentraciones de hemoglobina es el milimol por litro (mmol/l).
Cuando se usa esta unidad se necesita especificar la estructura qumica a la que se aplica. En la prctica esto
significa que se debe emplear el trmino "hemoglobina (Fe)" en vez de la palabra "hemoglobina" sola. Sin
embargo, como medida temporal antes de hacer el cambio a mmol/l, algunos laboratorios utilizan la unidad
"gramo por litro" (g/l). Cuando se usa esta unidad basta el trmino simple "hemoglobina" y no se necesita decir
"hemoglobina (Fe)". Los valores en gramos por litro se pueden convertir en valores expresados en mmol/l
multiplicndolos por 0,062. Ejemplo:
hemoglobina, 150 g/l x 0,062 = hemoglobina (Fe) 9,3 mmol/l
En este manual los clculos y valores se expresan generalmente en ambas formas. Tmese nota de que si se usa
la unidad "gramo por litro" los valores son 10 veces mayores que cuando se usa la unidad tradicional "gramo
por 100 mi". Por ejemplo, 150 g/l = 15,0/100 mi.
Principio
La sangre se diluye en I iquido de Drabkin, que destruye los eritrocitos y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina. La solucin que se produce se examina por medio de un espectrofotmetro o un colormetro. Su
grado de absorbencia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre.
El mtodo fotoelctrico de la cianometahemoglobina permite hacer los clculos ms precisos de la cantidad de
hemoglobina existente. Se debe usar siempre que sea posible.
MATERIALES
Un colormetro fotoelctrico* o un espectrofotmetro
Pipetas
(a) Una pipeta para sangre (pipeta de Sahli)
graduada hasta 0,02 mi (20 mm3 20/il), con
tubo de goma y boquilla.
(b) Una pipeta graduada, de 5 mi.
Tubos de ensayo
Lquido de Drabkin para dilucin (reactivo No. 16).
Este reactivo se puede adquirir en tabletas o polvos para
disolver en 1 litro de agua destilada. Si se dispone de una
balanza analtica la preparacin se puede hacer en el
laboratorio (vase el reactivo No. 16). Esta solucin se puede
conservar durante un mes en un frasco de vidrio oscuro.
Deschese si se enturbia.
El lquido de Drabkin no debe enfriarse demasiado, pues
puede causar una descoloracin con reduccin del ferricianuro.
Mtodo
1. Calcule la concentracin de hemoglobina de la solucin de referencia en gramos por litro empleando la
frmula siguiente:
concentracin en mg/100 ml x 10
,-,
xt>1
(Nota: 10 es el factor que convierte 100 mi en 1 litro; 1000 es el factor que convierte miligramos en gramos
y 251 es el factor de dilucin cuando 0,02 mi de sangre se diluyen con 5 mi del lquido de Drabkin).
Ya que 10 x 251/1000 es casi 2,5, la frmula anterior se puede simplificar de la manera siguiente:*
contenido de hemoglobina de la solucin de referencia en gramos por litro = concentracin en
mg/100ml x 2,5
Ejemplo
Concentracin de la solucin de referencia = 60 mg/100 mi
Valor de la hemoglobina = 60 x 2,5
= 150/1
*S se emplea una dilucin de 1 x 200 (por ejemplo, 0,02 mi de sangre y 4 mi de lquido de Drabkin), multiplique por 2,0 en vez
de 2,5.
2.
Tubo nmero
Solucin
estandarizada
4,0 mi
2,0 mi
1,3 mi
1,0 mi
2,0 mi
2,7 mi
3,0 mi
1 x2
1 x3
1 x4
Lquido de
Drabkin
Dilucin de la
solucin
estandarizada
372
Sin diluir
3.
4.
5.
4 : 4
Ejemplo
La concentracin de la solucin de referencia se ha
calculado en 15 g/l
in
Solucin
estandarizada
Concentracin
de hemoglobina
35,0
Ti
on
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1 x2
1 x3
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150
Absorbencia
(g/D
Sin diluir
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J
1S0
Importante:
Al
373
2.
374
8,4-12,1
7.0- 8,1
7 . 1 - 9,2
7,1-10,2
8,1-11,2
Hemoglobina
9/1
136-196
113-130
115-148
115-165
130-180
Principio
Este es un mtodo visual para calcular la hemoglobina.
La solucin de ensayo se compara con una serie estandarizada de cristales de colores que indican la cantidad de
hemoglobina existente.
MATERIALES
Un comparador para hemoglobina con cristales
estandarizados que abarquen los mrgenes de
3-13 g de hemoglobina por decilitro (g/dl)
Dos tubos comparadores
Pipetas de 0,05 mi (50 m m 3 50/il)
Lquido para diluir la hemoglobina. Se prepara
aadiendo 0,4 mi de solucin fuerte de amonaco a
un litro de agua destilada.
MTODO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
376
Ar-* v -
mma
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1
1
Principio
La sangre se diluye en una solucin cida y la
hemoglobina se transforma en hematina cida. El color
de la solucin de ensayo se compara con el de un
cristal de referencia.
MATERIALES
Un hemoglobinmetro de Sahli
Una pipeta de Sahli (graduada hasta 2 0 m m 3 ;
es decir, 0,02 mi, 20^1)
Una varilla de vidrio, pequea
Una pipeta gotera
Papel absorbente
Acido clorhdrico (HCL) en concentracin
de 0,1 mol/1 (0,1 N) (reactivo No. 14).
MTODO
1.
2.
3.
4.
6.
Principio
El volumen total que ocupan los eritrocitos (glbulos rojos) en un volumen dado de sangre, dividido entre el
volumen de sangre, se denomina fraccin de volumen de eritrocitos. Por ejemplo, si el volumen de los eritrocitos
en 1 litro (1000 mi) de sangre es de 450 mi, la fraccin de volumen de eritrocitos ser 450 ml/1000 mi = 0,45
(ya que la fraccin consiste en mililitros divididos entre mililitros, la unidad " m i " se cancela y el resultado es una
fraccin decimal simple, sin unidad). El resto de la sangre se compone casi completamente de plasma, junto con
una reducida cantidad de glbulos blancos (leucocitos). Si estos se pasan por alto, la fraccin de volumen del
plasma de este ejemplo ser 550 ml/1000 mi = 0,55 (obsrvese que 0,45 + 0,55 = 1,0 o sea que la fraccin de
volumen de eritrocitos ms la fraccin de volumen de plasma = 1). Por lo tanto, la fraccin de volumen de
eritrocitos es una forma de medir la proporcin de stos en el plasma. Se usa para calcular la concentracin
media de hemoglobina en los eritrocitos (vase la pgina 386) y se aprovecha tambin para elaborar el
diagnstico en pacientes que sufren de deshidratacin, choque o quemaduras.
Antes de la introduccin de las unidades SI, la fraccin de volumen de eritrocitos se denominaba "hematocrito"
o "volumen de sedimentacin globular" (VSG) y se notificaba como un porcentaje, y no como una fraccin
decimal. Segn el sistema tradicional, el "volumen de sedimentacin globular" correspondiente al ejemplo dado
sera de 45%. Tmese nota de que al emplear las unidades SI el valor numrico no cambia, pero se convierte en
0,45 en vez de 45%.
Macroescala
La sangre (mezclada con un anticoagulante) se coloca en
un tubo graduado y se centrifuga con el fin de que los
eritrocitos se sedimenten. A continuacin, en el tubo
graduado se mide directamente el nivel de la columna
de glbulos rojos.
Microescala
La sangre se deposita en un tubo capilar largo y se
centrifuga empleando un "cabezal para microhematocrito". A continuacin se mide el nivel de
la columna de eritrocitos por medio de una escala
especial.
Se debe preferir este mtodo; es ms rpido y se puede
emplear sangre extrada de un dedo.
379
MTODO: MICROESCALA
Materiales
Una centrfuga (elctrica) para "microhematocrito"
con cabezal plano para girar a alta velocidad
Una escala especial para medir los resultados
(generalmente se suministra junto con la centrfuga)
Tubos capilares con heparina:
de 75 mm de longitud, y
de 1,5 mm de dimetro interior
(estos tubos contienen un depsito de heparina seca
como anticoagulante).
Si se usa sangre venosa mezclada con sal bipotsica de EDTA no
ser necesario que los tubos capilares contengan heparina; se
pueden emplear tubos ordinarios.
Cera blanda o arcilla plstica para modelar (o una
lmpara de alcohol)
Una lanceta y etanol, para la extraccin de sangre
capilar.
2.
380
horizontal.
4.
Si no se cuenta con una escala u otro tipo de utensilio pa ra efectuar la medicin se puede preparar uno utiliza ndo
papel milimtrico de 15 - 20 cm de anchura. En la orilla izquierda del papel, comenzando desde abajo, ma rque
10 puntos con una distancia de 4 mm entre uno y otro. En la orilla derecha ma rque 10 puntos con espacios de
6 mm. Con una regla trace 10 lneas que unan cada punto de la orilla izquierda con el punto correspondiente
de la orilla derecha . En la orilla izquierda , junto al punto donde comience la lnea horizonta l ms inferior, escriba
"0". Contine ha cia arriba por la orilla izquierda , numerando ca da lnea tra za da en el siguiente orden: 0,1, 0,2,
0,3, etc.; la lnea ms alta tendr por nmero 1,0. En la orilla derecha escriba los mismos nmeros junto al
extremo de las I neas trazadas. A continuacin, nuevamente con una regla trace una sucesin de I neas
horizontales mucho ms tnues que las primeras. Cada una de estas I neas tnues se deber tra za r precisa mente a
la mitad de la distancia entre dos lneas gruesas. Por ltimo, siguiendo las lneas impresas en el papel milimtrico
trace I neas verticales gruesas, separadas por espacios de unos 3 cm. La escala resultante deber ser similar a la
que se ilustra en la parte inferior de esta pgina. (Si se desea, en vez de elaborar una escala se puede usar la que
se ha impreso en esta pgina, para determinar la s fracciones de volumen de eritrocitos.)
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-JOPE DE LA COLUMNA
DE ERITROCITOS
03
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Resultados
Valores normales
Hombres
Mujeres
Nios (5 aos)
Lactantes (3 meses)
Recin nacidos
Fraccin de volumen
de eritrocitos
0,40-0,50
0,37-0,43
0,38-0,44
0,35-0,40
0,50-0,58
40-50%
37-32%
38-44%
35-40%
50-58%
Se suelen encontrar valores reducidos en los pacientes que sufren de anemia; en los hombres, la fraccin de
volumen de eritrocitos es inferior a 0,4 y en las mujeres desciende a menos de 0,37 (los respectivos volmenes
de sedimentacin globular son 40% y 37%).
Se suelen observar fracciones de volumen de eritrocitos elevadas en casos de prdida de plasma, quemaduras
graves, deshidratacin, diarrea infantil y clera (tambin, aunque raras veces, en la policitemia).
MTODO: MACROESCALA
Materiales
Una centrfuga elctrica ordinaria, capaz de generar
una fuerza sostenida de 2 3 0 0 g en la base de las
cubetas
Tubos especiales, graduados (tubos de Wintrobe):
calibre: 0,6 cm
longitud: 9,5 cm
calibraciones: 0 - 1 0 0
Una pipeta capilar Pasteur larga y delgada (de
longitud suficiente para llegar al fondo del tubo) con
perilla de goma.
Obtencin de la muestra
Extraiga sangre venosa y depostela en un tubo que
contenga un anticoagulante (sal bipotsica de EDTA o
solucin de Wintrobe).
383
Mtodo
1.
Resultados
Los valores normales son iguales a los que se han
indicado al tratar el mtodo de microescala.
blancos)
Examine la capa que forman los leucocitos inmediatamente arriba de la columna de glbulos rojos. En
condiciones normales es sumamente delgada; cuando aparentemente sea gruesa, determine la concentracin de
nmero de leucocitos. Esta capa ser anormalmente gruesa si la concentracin de nmero de leucocitos es
superior a 20 x 10 9 /l (20000 m m 3 ) . En casos de leucemia, en que la concentracin de nmero de leucocitos
puede ser de 100-200 x 10 9 /l (100000-200000 m m 3 ) , esta capa tendr varios milmetros de espesor.
385
La concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos es una medida del contenido promedio de esta
sustancia en los glbulos rojos. Se expresa en gramos de hemoglobina por litro o en milimoles de hemoglobina
(Fe) por litro,* y se calcula dividiendo la concentracin de hemoglobina de la sangre entre la fraccin de
volumen de eritrocitos.
Ejemplos
(1) Si la hemoglobina se expresa en gramos de hemoglobina por litro:
hemoglobina = 150 g/l; fraccin de volumen de eritrocitos = 0,43
concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos = 150/0,43 = 349 g/l
(2) Si la hemoglobina se expresa en milimoles de hemoglobina (Fe) por litro:
hemoglobina (Fe) = 9,3 mmol/l; fraccin de volumen de eritrocitos = 0,43
concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos = 9,3/0,43 = 21,7 mmol/l
(Nota: para convertir valores en g/l a valores en mmol/l multiplique por 0,062 06.
As, empleando el ejemplo anterior, 349 g/l x 0,06206 = 21,7 mmol/l.)
RESULTADOS
Normalmente la concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos se encuentra entre los lmites siguientes:
(a) lmite inferior: hemoglobina, 322 g/l o hemoglobina (Fe), 20 m m o l / l ; (b) lmite superior: hemoglobina, 371 g/l o
hemoglobina (Fe), 23 mmol/l. Cuando la cifra se halla entre estos lmites se dice que los glbulos rojos son
"normocrmicos" (de color normal). Si los valores descienden debajo del lmite inferior de los mrgenes
normales indicarn que los eritrocitos son "hipocrmicos" (de color menos intenso que el de los eritrocitos
normales), como ocurre en las anemias hipocrmicas. Si los valores son ms altos que el lmite superior de los
mrgenes normales debern despertar sospechas y se habr de determinar nuevamente la concentracin media
de hemoglobina en los eritrocitos. Los glbulos rojos nunca son "hipercrmicos" (de color ms intenso que el
normal), pero pueden aumentar de tamao y, en estas condiciones, contener mayor cantidad de hemoglobina
que los eritrocitos normales; en este caso la concentracin media de hemoglobina puede ascender hasta 380 g/l
(hemoglobina (Fe) = 23,6 mmol/l), aunque nunca es superior a esta cifra.
Unidades tradicionales
En el sistema tradicional la concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos se denominaba "concentracin globular media de hemoglobina" (abrevindola generalmente como CGMH) y se expresaba por un
porcentaje. Se calculaba dividiendo la concentracin de hemoglobina de la sangre expresada en gramos por
100 mi entre el volumen de sedimentacin globular expresado como un porcentaje y multiplicando por 100.
Ejemplo: concentracin de hemoglobina, 15,0 g/100 m i ; volumen de sedimentaciqn globular, 43%; concentracin globular media de hemoglobina = (15,0/43) x 100 = 34%. En este sistema los mrgenes normales son de
3 2 - 3 6 % y los valores nunca ascienden a ms de 38%.
'Vase la nota sobre la forma de expresar la concentracin de hemoglobina, en la pgina 3 7 1 .
386
Principio
La extensin se prepara repartiendo uniformemente una
gota pequea de sangre sobre un portaobjetos de manera
que solo se deposite una capa de clulas.
Despus de teirlas, las extensiones de sangre se usan:
para determinar las fracciones de nmero de los
tipos de leucocitos
para detectar glbulos rojos anormales
para identificar ciertos parsitos.
MATERIALES
Portaobjetos de vidrio limpios y desgrasados
2Z3
Cmo hacer un instrumento para extender el frotis
1.
PREPARACIN DE PORTAOBJETOS
Los portaobjetos que se habrn de usar para extensiones
sanguneas se lavarn minuciosamente y, si es necesario,
se limpiarn con una pieza de tela suave embebida en
una mezcla de etanl y ter.
387
Importante.
PREPARACIN DE LA EXTENSIN
1.
2.
3.
388
4.
5.
SECADO DE LA EXTENSIN
Es esencial que la extensin se seque de manera
adecuada para conservar su calidad, en especial
en climas hmedos.
CONSERVACIN
Fije las extensiones con metanol.
Envulvanse por separado una vez que estn secas, con hojas de papel blanco.
390
Principio
Las extensiones de sangre se colorean con las tinciones de Romanowski, que contienen azul de metileno y eosina.
Entre las tinciones de Romanowski ms ampliamente usadas figuran:
La de Leishman y la de Wright, que proporcionan resultados similares y se emplean como tinciones
individuales
La de MayGrnwald y la de Jenner, cuyos resultados son semejantes y se emplean con la tincin de Giemsa
La de Giemsa, que se puede usar como tincin individual o junto con la de MayGrnwald o la de Jenner
Las de Field, A y B, que se preparan con agua a diferencia de las otras tinciones mencionadas, que se
elaboran con metanol. Las tinciones de Field se usan por igual en extensiones de sangre y de gota gruesa.
El colorante de Romanowski con metanol se pueden utilizar para fijar las extensiones antes de diluirlo en los
portaobjetos para la tincin. Los mejores resultados se obtienen haciendo primero la fijacin con metanol y
coloreando a continuacin con colorantes diluidos, preparados anticipadamente como se indica ms abajo.
TINCIN DE LEISHMAN
Materiales
Dos varillas de vidrio colocadas a travs del fregadero
o sobre una cubeta para tincin
Una probeta de 50 mi 100 mi
Un frasco de lavado con agua amortiguada (reactivo
No. 5)
Un cronmetro para marcar los intervalos
Una gradilla para secar los portaobjetos
Tincin de Leishman (reactivo No. 34)
Metanol.
MfcM(
J^P
^Mir^i'^Vjl^^^
lsiip^lllis*^y
^^^^^^^^^:/;/
Mtodo
2.
MU^
^Mf^yt r^~
;;:*;::
391
3.
4.
Lave el colorante con una corriente de agua amortiguada. No escurra el colorante porque dejara un
depsito sobre la extensin.
5.
iM
IIMP
''^^j^
$:%fyr
^^ssiR
^ ^^mmSi IMT
^^&-'''$?$^\'&'!y'
^i^s
Resultados
En una extensin adecuadamente teida:
Neutrfilos
el citoplasma se tie de color rosceo y en su interior se observan granulos pequeos
de color malva
Eosinfilos
el citoplasma se tie de color rosceo y en su interior se observan granulos voluminosos
de color rojo
Monocitos
el citoplasma se tie de color azul grisceo
Linfocitos (grandes)
el citoplasma se tie de color azul claro
(pequeos)
el citoplasma se tie de color azul oscuro
Basfilos
numerosos granulos de color azul malva oscuro llenan la clula
Eritrocitos
se tien de color rojo plido
Plaquetas
se tien de color malva rosceo.
392
Mtodo
1. Fije la extensin con metanol durante 2 - 3 minutos.
2.
4.
393
i ^^^P
4$.
^^K
^
Resultados
Similares a los que se obtienen con la tincin de
Leishman (vase la pgina 391).
394
fe^
^mWmKjr
S*
ir
Materiales
Colorantes A y B de Field (reactivo No. 22).
Frascos o vasos para anlisis con agua limpia (no se
necesita agua amortiguada).
Los colorantes A y B de Field se pueden usar sin diluir
mientras proporcionen resultados satisfactorios. Se
deben filtrar cada 2 - 3 das.
Mtodo
1. Fije la extensin con metanol durante 2 - 3 minutos.
395
4.
Resultados
Similares a los que se obtienen con la tincin de
Leishman (pgina 392).
PRECAUCIONES ESENCIALES PARA OBTENER RESULTADOS PROVECHOSOS
Evite la formacin de depsitos de colorante. En las extensiones tienen el aspecto de acumulaciones de manchas
negras y pequeas.
Evite las tinciones defectuosas, que dan por resultado extensiones demasiado azules, demasiado rojizas o
demasiado oscuras.
1. Utensilios de vidrio completamente limpios. Lvense todos los das. No utilice cidos. Elimine los depsitos
de colorantes con metanol.
2. Agua neutra (amortiguada, si es posible). Vase la tcnica para su preparacin en la pgina 6 1 . El agua
cida hace que el frotis sea demasiado rojo; el agua alcalina hace que sea demasiado azul. El agua neutra que
se use se deber haber preparado recientemente, ya que se acidifica al exponerse al aire.
3. Mezcla de Giemsa. Preprese con lentitud y cuidado. Los sacudimientos producen precipitaciones en los
colorantes.
Depsitos de colorantes
Son causados por la tincin de May-Grnwald o el agua neutra y se pueden observar a simple vista en el
lquido que se encuentra sobre el portaobjetos. Escurra el colorante. Enjuague el portaobjetos dos veces con
metanol. Djese secar y talo de nuevo con colorantes de May-Grnwald frescos o filtrados.
2.
3.
396
No todos los leucocitos (glbulos blancos) que circulan en la sangre son idnticos. Hay cinco tipos principales,
que se diferencian por el tamao, la forma del ncleo, el color de los granulos del citoplasma y otros caracteres.
La proporcin de cada tipo de leucocitos es importante para el diagnstico. Esta proporcin se denomina
fraccin de nmero del tipo de leucocitos.
Principio
Se cuentan 100 leucocitos y se anota el nmero que se
ha encontrado de cada tipo de ellos. La proporcin de
cada tipo de leucocitos se expresa como una fraccin
decimal.*
Ejemplo:
neutrfilos
0,56
linfocitos
0,25
eosinfilos
0,12
monocitos
0,06
basfilos
0,01
La suma de todas las fracciones deber ser igual a 1 .
MATERIALES
Un microscopio (con oculares x 5 x 6 y un
objetivo x 100, de inmersin en aceite; tambin se
puede usar un objetivo seco x 40 con cubreobjetos).
Aceite para inmersin.
Una extensin de sangre, bien extendida y teida
con el mtodo de Romanowski (vase la pgina 393).
Si es posible, un contador especial provisto de teclas,
o uno en que se haga la cuenta por medio de
abalorios, frijoles o granos de maz, que se puede
fabricar en el laboratorio.
MTODO
Examen de la extensin
Empleando el objetivo x 100, de inmersin en aceite,
verifique que los glbulos blancos se encuentran
uniformemente distribuidos en la extensin.
En un frotis defectuosamente extendido es posible que
los neutrfilos se hallen agrupados en la ltima porcin.
*En el sistema tradicional las fracciones de nmero de los tipos
de leucocitos se denominan "recuento diferencial de leucocitos
(o glbulos blancos)" y la proporcin de cada tipo se notifica
como un porcentaje; as, el ejemplo anterior se expresan'a de la
manera siguiente: neutrfilos, 56%; linfocitos, 25%; eosinfilos,
12%; monocitos, 6%; basfilos, 1%.
397
Recuento de leucocitos
1. Inicie el recuento en la ltima porcin de la
extensin, precisamente donde se observe que los
eritrocitos comienzan a agruparse y sobreponerse.
2. Examine una porcin rectangular de la extensin
mediante un movimiento ordenado, de un campo al
siguiente, como se indica en la ilustracin. Tome
nota del tipo de leucocitos que se observe en cada
campo.
3. Cuente un total de 100 leucocitos.
2.
4.
Clulas normales
os neutrfilos poUmorfonucleares (P) poseen:
un ncleo con varios lbulos
granulos en el citoplasma (de aqu su nombre
habitual: granulocitos)
os linfocitos (L) y los monocitos (M) tienen:
un ncleo compacto
citoplasma con granulos o sin ellos.
Ia. NEUTRFILOS
POLIMORFONUCLEARES
Tamao:
Forma:
Citoplasma:
Granulos:
12-15 im
redonda, bien definida
abundante, rosceo
de color malva, muy pequeos, numerosos
pero separados
Ncleo:
varios lbulos (2 - 5), unidos por bandas
de cromatina. La croma ti na tiene el
aspecto de una masa uniforme de color
morado oscuro.
(A medida que el leucocito envejece aumenta el nmero
de lbulos del ncleo.)
INMADUROS
2. EOSINOFILOS POLIMORFONUCLEARES
Tamao:
12 - 15 /um
Granulos:
voluminosos, redondos, de color rojo
anaranjado, abundantes y agrupados
estrechamente
Ncleo:
generalmente consta de dos lbulos.
Algunas veces se observa que estos leucocitos se han
daado y los granulos se encuentran diseminados en el
exterior.
3. BASFILOS POLIMORFONUCLEARES
Este es el tipo ms raro de los granulocitos.
Tamao:
11 - 1 3 //m
Forma:
redonda
Grnulos:
muy voluminosos, redondos, de color
morado oscuro, abundantes pero menos
estrechamente agrupados que los granulos
de los eosinfilos
Ncleo:
difcil de observar, pues se halla cubierto
por los granulos
Vacuolas:
en el citoplasma se encuentran escasas
vacuolas incoloras y pequeas.
4. LINFOCITOS PEQUEOS
Tamao:
7 - 10/im
Forma:
redonda
Ncleo:
voluminoso; ocupa la mayor parte de la
clula; la cromatina es de color morado
oscuro, y densa
Citoplasma:
la cantidad visible es reducida, de color
azul y sin granulos.
5. LINFOCITOS GRANDES
Tamao:
Forma:
Ncleo:
Citoplasma:
Grnulos:
lO-IS/im
redonda o irregular
oval o redondo; puede ocupar un lado de
la clula
abundante, de color azul plido
escasos, voluminosos y azurfilos (de
color rojo oscuro).
6. MONOCITOS
Tamao:
15 - 25 jum; son los leucocitos ms
voluminosos
Forma:
irregular
Ncleo:
variable, frecuentemente con forma de
rion; la cromatina se dispone en cordones
irregulares de color malva plido
Granulos:
sumamente pequeos; semejan partculas
de polvo; generalmente rojizos
Vacuolas:
casi siempre hay vacuolas en el citoplasma.
En los pacientes que sufren de paludismo el citoplasma suele contener
depsitos de color negro castao, formados por el pigmento paldico.
1 2 - ISpim
redonda u oval
redondo, excntrico, con la cromatina
aglutinada y frecuentemente dispuesta de
tal manera que recuerda una rueda
de color azul oscuro, con un rea que se
tie dbilmente alrededor del ncleo
numerosas y muy pequeas; visibles
con dificultad.
9.
8 - 10 xm
redonda o irregular
de color rosa o azul grisceo, sin
granulos
redondo, a menudo excntrico, con
cromatina aglutinada y densa, se tie
de color oscuro.
GRANULOCITOS INMADUROS
7/. LINFOCITOSATPICOS
Los linfocitos atpicos se pueden encontrar en
infecciones vricas, especialmente la mononucleosis
infecciosa (fiebre glandular), la tos ferina y el sarampin.
Tambin es posible que se detecten en casos de tuberculosis y paludismo grave.
muy variable, de 12 - 18/im
Tamao:
generalmente irregular
Forma:
redondo o irregular; con frecuencia ocupa
Ncleo:
un lado de la clula, con nuclolos visibles
casi siempre es de color ms oscuro que el
Citoplasma:
de los linfocitos grandes; se oscurece a
medida que se acerca a la pared de la
clula.
12. MIELOBLASTOS
Constituyen el tipo ms joven (e inmaduro) de todos los
leucocitos. Se observan en extensiones sanguneas de
pacientes con leucemia.
Tamao:
Ncleo:
Citoplasma:
voluminoso, de 15 - 25 /im
grande, redondo, de color malva plido,
provisto invariablemente de 1 - 5 nuclolos
de color azul oscuro, con un rea clara
que no se tie, situada alrededor del ncleo.
13. MEGACAflOCITOS
Son los precursores de las plaquetas en la mdula sea.
Tamao:
muy voluminosos, de 60 - lOO/im
Ncleo:
sumamente irregular, denso y con
abundantes lbulos
Citoplasma:
lleno de granulos pequeos, principalmente
azurfilos, y de plaquetas. La pared celular
no est claramente definida.
(Muy raras veces se encuentran en la sangre.)
404
MTODOS DE RECUENTO
Mquina especial para recuento, con teclado
Esta mquina contadora tiene un teclado, cada tecla
corresponde a un tipo de leucocitos; la cantidad de cada
tipo se registra automticamente. Su costo es elevado.
Lpiz y papel
Para registrar los diversos tipos de leucocitos a medida
que se cuentan, proceda de la manera siguiente:
Trace un cuadro con:
(a) 5 columnas verticales (N, E, B, L y M) y
(b) 10 lneas horizontales (vase la figura).
Una vez que se hayan hecho 10 marcas en la primera
lnea, pase a la siguiente. De este modo, cuando se haya
llenado la dcima lnea se habrn contado 100 leucocitos.
A continuacin sume las marcas de las columnas
verticales.
Los totales de las columnas correspondern al porcentaje
de cada tipo de leucocitos. Estos totales se convertirn
en fracciones decimales colocando un punto a la
izquierda de los dos ltimos nmeros de cada cifra (en
algunos casos se necesitar intercalar un 0). As, 59 se
convertir en 0,59; 8 sr 0,08; 1 se volver 0,01; 28
se transformar en 0,28, etc., como se observa en la
ltima lnea de la figura. Estas cifras decimales son las
fracciones de nmero de cada tipo de leucocitos y
constituyen los resultados que se deben comunicar
cuando se usan unidades SI.
RESULTADOS
Valores normales por grupos de edad*
Recin nacidos
Despus de 4 das
14 aos
10 aos
Adultos
Neutrfilos polimorfonucleares
0,550,65
0,400,48
0,360,48
0,450,55
0,550,65
Eosinfilos polimorfonucleares
0,020,04
0,020,05
0,020,05
0,020,05
0,020,04
Basfilos polimorfonucleares
Linfocitos
0,300,35
0,400,48
0,440,54
0,380,45
0,250,35
Monocitos
0,030,06
0,050,10
0,030,06
0,030,06
0,030,06
La distribucin
de los diferentes
tipos de leucocitos
tiene dos formas
principales
0,01
0,01
0,01
0,01
predominio de
linfocitos
lactantes y nios
"* menores de 10 aos
predominio de
neutrfilos
polimorfonucleares
0,01
En lugar de la fraccin de nmero de cada tipo de leucocitos se puede notificar su concentracin de numero
(nmero de clulas por litro). Esta se calcula multiplicando la fraccin de nmero de un tipo de leucocitos por
la concentracin de nmero del total de leucocitos. Ejemplo:**
Concentracin de nmero de leucocitos = 5 x 1 0 /I
Fraccin de nmero de neutrfilos
=0,42
Concentracin de nmero de neutrfilos = 0,42 x 5 x 109 2,1 x 10 /I
Resultados anormales
(a) NEUTROFILIA: aumento de la proporcin de neutrfilos (ms de 0,65). Ocurre especialmente en las
infecciones agudas.
(b) EOSINOFILIA: aumento de la proporcin de eosinfilos (arriba de 0,05). Casi siempre sugiere que existe
en los tejidos una infestacin por parsitos: esquistosomas, filarias, ancilostomas, ascaris, etc. Tambin puede
obedecer a una alergia.
(c) LINFOCITOSIS: aumento de la proporcin de linfocitos (por encima de 0,35). Se suele observar en algunas
infecciones vricas (sarampin, etc.), ciertas infecciones crnicas (paludismo, tuberculosis, etc.) y vanos
estados txicos.
(d) MONOCITOSIS: aumento de la proporcin de monocitos (arriba de 0,06). Se observa en algunas infecciones
bacterianas y parasitarias como la fiebre tifoidea, el paludismo y la leishmaniasis visceral.
(e) NEUTROPENIA: disminucin del nmero de neutrfilos. Puede ocurrir en ciertas infecciones y algunas
otras enfermedades..
Estos valores se indican en unidades SI; es decir, como fracciones de nmero. Para obtener los valores correspondientes en
unidades tradicionales (expresados como porcentajes) multipliqese cada cifra por 100.
" E n unidades tradicionales este clculo se hace multiplicando el porcentaje de neutrfilos por el total de los leucocitos que se
han contado y dividiendo a continuacin entre 100. Ejemplo:
Total de leucocitos contados
= 5000/mm
Porcentaje de neutrfilos
= 42%
"Recuento absoluto de neutrfilos" = (42 x 5000)/100 = 2 100/mm
406
EXAMEN MICROSCPICO
Dnde se deben observar los eritrocitos
Los eritrocitos se deben observar poco antes
del extremo donde termina la extensin de
sangre; en esta porcin se hallan diseminados y
se tocan unos a otros sin sobreponerse.
Error
En esta porcin la extensin es demasiado gruesa;
los eritrocitos se aglomeran.
Error
En esta porcin los eritrocitos son demasiado
escasos.
407
ERITROCITOS NORMALES
Tamao:
7 - 8/im
Forma:
redonda o ligeramente irregular
irregular
Tincin:
la periferia se tie de color de rosa intenso;
el centro lo hace de color rosa plido, o
bien es casi incoloro.
ERITROCITOS ANILLADOS
Tamao:
Forma:
Tincin:
6-8 /xm
redonda o ligeramente irregular
el centro y la orilla se tien intensamente,
pero entre ambos se observa un anillo
incoloro.
Este tipo de eritrocitos se suele encontrar en la talasemia,
la anemia drepanoctica y otras anemias causadas por la
existencia de hemoglobinas anmalas, as como en la
anemia ferropnica.
8-10 jim
redonda y, frecuentemente, irregular
pequeo, de color morado oscuro,
frecuentemente excntrico y provisto de
cromatina densa
Citoplasma: de color rosa o azul grisceo.
Los normoblastos se observan en las anemias graves,
como la anemia drepanoctica, en ciertas infecciones
bacterianas graves y en las leucemias.
ERITROCITOS FALCIFORMES
Forma:
alargada y estrecha, frecuentemente con
uno o ambos extremos curvos.
Se suelen hallar en la anemia falciforme o drepanoctica
y latalasemia falciforme junto con eritrocitos nucleados,
eritrocitos normales y muchas veces tambin macrocitos.
El examen de los eritrocitos falciformes en preparaciones hmedas se describe en la pgina 4 1 1 .
408
ANISOCITOSIS
Este trmino se emplea para sealar una afeccin en que
hay eritrocitos de tamaos diferentes en la misma sangre;
por ejemplo, eritrocitos de 9 /im mezclados con
pequeos glbulos rojos de 6 fim.
Se observan en anemias de numerosos tipos.
POIQUILOCITOS
Los poiquilocitos son eritrocitos de formas diferentes
que se encuentran en la misma sangre; por ejemplo,
puede haber una mezcla de clulas redondas, ovales,
triangulares, piriformes y dentadas.
Se encuentran en numerosos tipos de anemias.
MICfOCITOS (m)
Los microcitos son eritrocitos pequeos, que miden
aproximadamente 5 jm.
Se suelen observar en la anemia ferropnica.
MACROC/TOS (M)
Son eritrocitos grandes que miden 9-10 /jm.
Se observan en las anemias macrocticas causadas por
deficiencias de cido flico o vitamina B-12 y en ciertos
padecimientos hepticos.
Los eritrocitos voluminosos que se tien de color malva
azulado (policromasia) se denominan reticulocitos
(vase la pgina 414).
ESFEROCITOS (E)
Tamao:
Forma:
Tincin:
pequeo (6 ^m)
completamente redonda
uniforme; todo el eritrocito se tie
intensamente.
409
ELIPTOCITOS
Tamao:
normal (8 /im)
Forma:
oval
Tincin:
ms oscura en la periferia (especialmente
en los polos)
Se observan muy raras veces. Se hallan en la eliptocitosis
hereditaria.
410
Principio
En un portaobjetos se mezcla una gota de sangre con
una gota de un reactivo elaborado a base de metabisulfito sdico. Si los eritrocitos contienen una hemoglobina
anormal denominada hemoglobina S, adoptan formas de
hoz o media luna.
El reactivo mencionado desplaza el oxgeno de los
eritrocitos, con lo que sobreviene el cambio de forma
de stos.
La hemoglobina S es un compuesto anormal de tipo
hereditario. Si se hereda de ambos progenitores produce
anemia falciforme (drepanoctica), una enfermedad
grave. Cuando solo se hereda de un progenitor determina
una propensin gentica a la formacin de clulas
falciformes, aunque generalmente no causa la enfermedad.
En el frotis para la prueba de los eritrocitos falciformes
no se distingue entre la anemia falciforme propiamente
dicha y la propensin gentica a ella.
La hemoglobina S se suele encontrar en las regiones
tropicales de Africa, aunque tambin se observa en
el Oriente Medio y entre los negros de las Amricas.
rP-H
MATERIALES
Un portaobjetos y un cubreobjetos de vidrio
Una pipeta Pasteur (o una pipeta gotera)
Metabisulfito sdico en solucin de 20 g/l, fresca
(reactivo No. 46)
Un recipiente, que puede ser una saja de Petri, para
evitar que la preparacin se seque.
LJ
<=>
7]
"^b^3
cQ)
RESULTADOS
Resultado negativo: los eritrocitos conservan su forma
redonda.
OTROS MTODOS
1.
2.
3.
Importante:
Si el resultado del frotis es positivo se deber examinar
una extensin de sangre. En los pacientes que sufren de
anemia falciforme se suelen encontrar al mismo tiempo
clulas con forma irreversible de hoz, eritrocitos nucleados, eritrocitos anillados, abundantes poiquilocitos y,
con frecuencia, tambin numerosos macrocitos. Por lo
general, los pacientes que tienen el rasgo gentico
falciforme no son anmicos y la morfologa de sus
glbulos rojos es normal. Siempre que sea posible se
deber efectuar un estudio de la hemoglobina por
electroforesis para confirmar el diagnstico de anemia
falciforme. Tal estudio se har en un laboratorio de
referencia.
30. Reticulocitos
Los reticulocitos son glbulos rojos inmaduros que emigran de la medula sea al torrente sanguneo. La cantidad
de reticulocitos que se encuentre en la sangre indicar el grado de actividad de la mdula sea, y cuando sta es
muy activa (como ocurre en las anemias) su nmero aumenta.
Principio
Los reticulocitos contienen granulos pequeos que se pueden teir con azul de cresil brillante. Este colorante se
aplica a una extensin de sangre y a continuacin se observa con el microscopio cierto nmero de eritrocitos. Con
este examen se calculan: a) el nmero de reticulocitos por litro de sangre, o b) la proporcin de glbulos rojos
que integran los reticulocitos.
MATERIALES
Portaobjetos (desgrasados)
Un portaobjetos recortado, para la extensin
Tubos de ensayo pequeos
Un embudo
Filtro de papel
Dos pipetas Pasteur con chupetes
Si es posible, un contador manual
Solucin saturada de azul de cresil brillante
(reactivo No. 15).
MTODO
Filtre al interior de un tubo de ensayo una cantidad
pequea de la solucin de azul de cresil.
En el fondo de otro tubo deposite:
2 gotas de la solucin filtrada de azul de cresil.
2.
si
3.
1 ^ "7
1
1
4.
1
1
1
1
1
/
'w
^ , \
A
/ \
\
/ \
\
'
x^\:
i >\-A
\W^w
"J
6.
7.
Squela al aire.
415
Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo x 100 de inmersin en aceite. Cuente cuidadosamente:
a) la cantidad total de glbulos rojos examinados, y b) el nmero total de reticuiocitos que haya entre ellos.
(Estos recuentos se efectan ms fcilmente si se reduce el tamao del campo microscpico. Tal cosa se logra
colocando en el ocular una pieza de papel negro y rgido en la que se haya abierto un orificio de unos 5 mm
de dimetro.)
Mrgenes normales
Nios al nacer
Adultos y nios
concentracin de nmero
de reticuiocitos "
fraccin de nmero
de reticuiocitos
1 0 0 x 1 0 ' / l - 3 0 0 x lO'/l
20 x lOT3 - 6 0 x 10"3
8x 10 /l- IlOxIO'/l
2 x IO"3 - 2 0 x lOT3
'Estos clculos (y el cuadro de mrgenes normales) se expresan aqu en unidades SI. En el sistema tradicional la cant.dad de
reticuiocitos se indicaba mediante un porcentaje (el porcentaje de reticuiocitos integrantes del total de eritrocitos circulantes).
As si se han observado 500 eritrocitos en la extensin sangunea y n de ellos son reticuiocitos, el porcentaie correspondiente
se calcular multiplicando n x 0,2. Ejemplo: de 500 eritrocitos estudiados, 25 son reticuiocitos; en consecuencia, el porcentaie
de reticuiocitos ser 25 x 0,2 = 5%. En los recin nacidos los mrgenes normales son de 2,0-6,0%; en los nios y los adultos son
de 0,2- 2,0%.
**Estas son cifras aproximadas^La concentracin depende de la concentracin de nmero de eritrocitos; vase el cuadro de la
pgina 369.
416
417
Principio
La sangre recogida en un recipiente que contiene un
anticoagulante se deposita en un tubo largo y graduado,
que se mantiene en posicin vertical.
Los eritrocitos se sedimentan en el fondo del tubo y
sobre este sedimento se forma una columna de plasma.
La altura de la columna de plasma, medida despus de
una hora, indica la velocidad de sedimentacin de los
eritrocitos (glbulos rojos).
MATERIALES
Un tubo de Westergren para medir la VSE:
de 2,5 mm de dimetro interior
graduado de 0 a 200 mm (con frecuencia, la
graduacin es de 1 a 20, en que 1 equivale a
10, 2 a 20, etc.)
Una gradilla de Westergren
Anticoagulante: solucin de citrato trisdico en
proporcin de 38 g/l (3,8%) (reactivo No. 53), que
se deber conservar en el frigorfico
Una jeringa graduada, de 5 mi
Un cronmetro.
MTODO
1.
2.
418
3.
RESULTADOS
El resultado se expresar de la manera siguiente:
VSE
mm de altura.
Mrgenes normales
Hombres: 1 -10 mm de altura
Mujeres:
3-14mmdealtura.
VSE en la anemia
Si el paciente sufre de una deficiencia de eritrocitos,
la medicin de la VSE tendr escasa utilidad.
Carece de utilidad medir la VSE de pacientes cuya
fraccin de volumen de eritrocitos sea inferior a 0,3
(volumen de sedimentacin globular inferior a 30%).
Temperatura del ensayo
La VSE aumenta con la temperatura (a partir de 23 C).
En los pases clidos se debe vigilar que la gradilla de
Westergren no se coloque en un lugar caluroso del
laboratorio (por ejemplo, bajo la luz del sol).
Lavado de los tubos de Westergren
Enjuague los tubos con agua y a continuacin djelos
en remojo en agua limpia durante 12 horas.
Djelos secar completamente (si es posible, en una
incubadora, a 37C).
No utilice polvos para lavar, cidos o etanol.
420
VSE en la deshidratacin
Si el paciente se encuentra deshidratado, la medicin
de la VSE tendr escasa utilidad.
VSE aumentada
Todas las enfermedades que producen cambios en
las protenas del plasma hacen que aumente la VSE.
Tambin ocurre as durante las infecciones crnicas.
La VSE suele ser de cifras muy elevadas en:
la tuberculosis
las tripanosomiasis
el cncer.
En el curso del embarazo normal tambin aumenta
la VSE.
MATERIALES
MTODO
1. Limpie con suavidad el lbulo de la oreja utilizando
una pieza de algodn embebida en ter. No frote.
Djese secar.
3. Despus de 30 segundos:
Recoja la primera gota de sangre en una esquina del
papel secante.
No toque la piel con el papel.
421
4.
5.
6.
RESULTADOS
Comunique el tiempo de sangrado redondendolo al
medio minuto ms cercano.
Indique tambin los mrgenes normales que correspondan
al mtodo empleado.
Ejemplo: tiempo de sangrado: 314 minutos (tiempo
normal segn el mtodo de Duke: 1 - 5 minutos).
Mrgenes normales
1 - 5 minutos.
Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensin de sangre teida segn el mtodo de Romanowski
(vase la pgina 391) para observar si las plaquetas son
escasas (se debe usar sangre venosa).
422
MATERIALES
Dos tubos de ensayo limpios, de 75 x 10 mm, del
mismo calibre, marcados en el nivel de 1 mm
Un cronmetro
Un baomara a 37C, o un matraz al vaco, con
agua a la misma temperatura
Utensilios y materiales para puncin venosa.
MTODO
1.
5.
RESULTADOS
Registre el tiempo de coagulacin en minutos, redondendolo al medio minuto ms cercano.
Mrgenes normales
5 - 1 2 minutos.
Si el tiempo de coagulacin se prolonga, enve al
paciente a un centro especializado a fin de que se ample
la investigacin.
424
Principio
El tiempo de coagulacin de la sangre intacta se mide
como se ha indicado en la pgina 423.
Los tubos de ensayo que contienen la sangre se
guardan para:
observar la retraccin del cogulo
medir el tiempo en que el cogulo se disuelve (Iisis).
Estas observaciones se hacen:
para establecer el diagnstico de ciertos
padecimientos hemorrgicos
antes y despus de las operaciones quirrgicas.
MTODO
1. C oloque en el baomarfa los tubos que contienen la
sangre (o djelos a la temperatura ambiente).
Examine el cogulo:
a la hora
a las 2 horas
a las 3 horas
a las 4 horas.
Normalmente el cogulo sigue siendo slido durante
las primeras 4 horas, si bien comienza a retraerse
desde la primera hora.
-iD-fT-T^)
-~>
^ i
b>
>_
"^T"
J
/ \
/
/
7l
k
u M
/
5Lfc
^^^LxJj^r
^fa^g
1 f
RESULTADOS
(a) Retraccin normal
El cogulo rojo se separa completamente y en su
parte ms alta se adhiere a la superficie interior del
tubo de ensayo.
En el fondo del tubo se suele formar un pequeo
sedimento de glbulos rojos; su espesor no debe ser
mayor de 5 mm.
425
iSmresTasajgSSi
I
^^35^S!K;^(
4.
Resultados
Tiempo normal de lisis del cogulo: 72 horas o ms.
Disminucin del tiempo de lisis dei cogulo: 1 - 4 8 horas.
En algunas afecciones fibrinolticas agudas ei cogulo
se puede disolver en 1 - 4 horas.
Comunique en horas el tiempo transcurrido hasta que
sobrevino la lisis del cogulo.
427
D. QUMICA SANGUNEA
35. Clculo de la glucosa en la sangre y en el LCR:
mtodo de la ortotoluidina
Principio
Primeramente se provoca la precipitacin de las protenas de la sangre por medio de cido tricloroactico. En el
producto resultante, filtrado, la glucosa reacciona con la ortotoluidina y se forma un color verde, cuya intensidad
se mide en un colormetro fotoelctrico.
La determinacin de la glucosa (azcar) sangu nea es necesaria para establecer el diagnstico de la diabetes
mellitus y otras enfermedades en que existen alteraciones en el metabolismo de los carbohidratos. En la diabetes
mellitus hay una deficiencia de insulina,.hormona que regula el proceso metablico del azcar en el organismo.
En el curso de esta enfermedad se suele encontrar glucosa en la orina {vase la pgina 311). La determinacin
de azcar en el LC R es necesaria para diagnosticar casos de meningitis (vase la pgina 344).
MATERIALES
*S se emplea sangre venosa es conveniente utilizar oxalato de flor (reactivo No. 23) como anticoagulante. De este modo se
evitar que la glucosa se descomponga en la sangre.
J A
i
MTODO
1.
JN|
/UAT
2.
/ f !:
;' ^m
'-m'
'''
v^y
4.
6.
H
7.
8.
En el tubo de referencia:
1,0 mi de solucin de referencia para trabajar
con glucosa y
5,0 mi del reactivo de ortotoluidina
9.
f ^
C2
CALCULO
Calcule la concentracin de glucosa en la sangre o el lquido cefalorraqudeo como se indica a continuacin:'
(a) En la sangre:
Concentracin de glucosa = (Ap/AH)
(b) En el liquido
cefalorraqudeo:
Mrgenes normales
Los mrgenes normales de concentracin de glucosa en la sangre de pacientes en ayunas son aproximadamente
los siguientes:
sangre venosa, suero o plasma: 3 5 mmol/l
sangre capilar:
3,3 5,5 mmol/l
En el lquido cefalorraqudeo estos mrgenes son, aproximadamente, 2,54,2 mmol/l.
Concentraciones elevadas o bajas
Si se encuentran concentraciones de glucosa exageradamente elevadas o bajas, repita el ensayo para confirmar
los resultados, como se indica a continuacin:
Concentraciones superiores a 16,5 mmol/l: Diluya las soluciones T (testigo) y P (paciente) con cantidades
iguales de cido actico glacial. Coloque la solucin T diluida en la cubeta del colormetro y ponga la aguja en 0
Despus vea en el tablero el grado de absorbencia Ap con la solucin P diluida en la cubeta. C alcule otra vez la
concentracin de glucosa utilizando la nueva cifra de Ap y el valor de AR obtenido anteriormente. Multiplique
el resultado por 2 (puesto que la solucin P se ha diluido al 1 x 2) para conocer la concentracin verdadera de
la glucosa.
Concentraciones inferiores a 2,2 mmol/l: Si se obtienen cifras tan reducidas como stas, repita todo el ensayo
En el paso 1 utilice 1,8 mi de solucin de cido tricloroactico (en vez de 1,9 mi) y en el paso 2 utilice 0 2 mi
de sangre, suero o plasma (en vez de 0,1 mi). El ensayo y el clculo del resultado se harn exactamente con el
mismo procedimiento usado anteriormente. Divida el resultado entre 2 para conocer la concentracin verdadera
de la glucosa.
Estos clculos se expresan en unidades SI. En unidades tradicionales las concentraciones de glucosa en la sangre se calculan por
medio de la frmula W p / 4 R ) x 200 = concentracin en mg/100 mi; las concentraciones de glucosa en el LCR se calculan por la
frmula \.Ap/A) x 50 = concentracin en mg/100 mi. Los mrgenes normales aproximados son: en la sangre venosa
55 90 mg/100 mi; en la sangre capilar, 6 0 1 0 0 mg/100 mi; en el lquido cefalorraqudeo, 4 5 7 5 mg/100 mi
431
MATERIALES
MTODO
1.
Prepare el reactivo colorante inmediatamente antes de usarlo, depositando una solucin de trabajo de
diacetiimonoxima/tiosemicarbacida al 1 x 6 en el reactivo cido.
Ejemplo: Se necesitarn 5 mi del reactivo colorante, respectivamente, para el tubo testigo, el de referencia
y el que corresponda al paciente.
Por lo tanto:
Reactivo cido
Diacetilmonoxima/
tiosemicarbacida
para trabajo
15 mi
20 mi
25 mi
3 mi
4 mi
5 mi
2. Con una pipeta coloque en un tubo cnico para
centrifugacin:
0,8 mi de agua destilada
0,2 mi de sangre total tratada con sal bipotsica
de EDTA, o bien la misma cantidad de suero
o plasma.
Mezcle.
3.
4.
M
p
CALCULO
Calcule la concentracin de urea en la sangre de la manera siguiente:*
Concentracin de urea = {Ap/A^) x 16,7 mmol/l (milimoles por litro).
Mrgenes normales
Los mrgenes normales de la concentracin de urea en la sangre son, aproximadamente, de 3 - 7 mmol/l.
Concentraciones elevadas
Si se obtienen cifras superiores a 25 mmol/l, repita todo el ensayo empleando 0,1 mi de sangre total tratada con
sal bipotsica de EDTA, o bien suero o plasma, y 0,9 mi de agua destilada en el paso 2 del procedimiento.
Efecte el ensayo y calcule el resultado exactamente de la misma manera que se ha descrito anteriormente, pero
esta vez divida el resultado entre 2 para obtener la concentracin real de urea.
"Este clculo se expresa en unidades SI. En unidades tradicionales las concentraciones de urea en la sangre se calculan por la
frmula {AP/AR)
X 100 = concentracin de urea en miligramos por 100 mililitros (mg/100 mi). En las unidades tradicionales los
mrgenes normales son aproximadamente de 2 0 - 4 0 mg/100 mi. Los ensayos se deben repetir si se obtienen cifras superiores a
150 mg/100 mi.
434
E. TRANSFUSIN DE SANGRE
37. Grupos sanguneos: teora
El propsito de las transfusiones sanguneas consiste en lograr que el paciente reciba sangre sin sufrir riesgos.
Esto implica:
que se determine el grupo o tipo de sangre que posee
que se estudie cuidadosamente la compatibilidad de su sangre con la sangre de un donador escogido
(compatibilidad sangunea).
Grupo sanguneo
del individuo
anti-B
anti-A
Y
anti-B
anti-A
En los eritrocitos:
Rh positivo
Rh negativo
Hay antgeno D
No hay antgeno D
Los individuos que pertenecen al grupo Rh negativo no poseen normalmente el anticuerpo anti D en el plasma.
Se pueden producir anticuerpos Rhesus en las personas que no los tenan al recibir antgenos Rhesus. Esto puede
ocurrir a consecuencia de una transfusin sangunea o un embarazo.
Otros sistemas de grupos sanguneos
Los sistemas Li, Lutheran, P, Lewis, MN, Kidd, Kell, Duffy, etc. son menos importantes para prevenir trastornos
hemolticos en el recin nacido y reacciones consecutivas a transfusiones sanguneas.
*EI sistema Rhesus es complejo y no solo comprende el antgeno D, sino tambin otros antgenos Rhesus; por ejemplo, C, E, c y e.
435
Determine con cuidado extremo los grupos sanguneos de cada donador y cada receptor:
probando los glbulos rojos (para reconocer sus antgenos) con sueros clasificadores conocidos, anti A,
anti B y anti AB (vase la pgina 437)
probando el plasma o el suero (para identificar sus anticuerpos) con eritrocitos de ensayo conocidos,
pertenecientes a los grupos A, B y O (vase la pgina 443)
probando los glbulos rojos, con respecto a la ndole del factor Rh, con un suero anti D conocido
(vase la pgina 448) y, cuando sea necesario, tambin con otros antisueros especficamente contrarios
al sistema Rhesus (en laboratorios especializados).
2.
Seleccione la sangre del grupo adecuado, que se pueda administrar al paciente. Siempre que sea posible el
paciente deber recibir sangre de su propio grupo.
En los hospitales pequeos y especialmente en casos de urgencia puede ser que el paciente deba recibir sangre
de un grupo distinto al suyo. Apliqense las reglas siguientes:
Paciente del grupo A
Deber recibir sangre del grupo A y, si no se dispone de ella, se usar sangre
del grupo O
Paciente del grupo B
Deber recibir sangre del grupo B; si no se dispone de ella, se utilizar sangre
del grupo O
Paciente del grupo AB
Deber recibir sangre del grupo AB; si no se dispone de ella se podr usar sangre
del grupo A, del grupo B o del grupo O (en este orden)
Paciente del grupo O
Solamente podr recibir sangre del grupo 0 .
3.
Estudie cuidadosamente la compatibilidad del suero del paciente con los glbulos rojos del donador (prueba
de compatibilidad) para estar seguro que la transfusin no significa riesgos.
4.
Haga estos estudios junto con un experto hasta que tenga los conocimientos tericos y prcticos suficientes
para trabajar con seguridad y responsabilidad.
436
Principio
Los eritrocitos se ensayan con 3 antisueros:
suero anti A
suero anti B
suero anti AB.
El estudio se puede efectuar:
en un portaobjetos, o bien
en un tubo de ensayo (especialmente en los casos
dudosos).
A. MTODO DEL PORTAOBJETOS
Materiales
Una pipeta gotera (calibrada para suministrar 20
gotas por mi)
Pipetas Pasteur con perillas de goma
Vasos para anlisis
Una centrfuga
Un lpiz graso
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
Tubos de ensayo de 50 x 11 mm, para el lavado de
los eritrocitos
Eritrocitos testigos de los grupos A, B y O.
Antisueros: anti A, anti B y anti AB:
Consrvense segn las instrucciones del fabricante, ya
sea a 4oC o en el compartimiento de congelacin del
frigorfico.
Si hay turbidez en un antisuero es probable que se
encuentre contaminado por bacterias; no se deber usar.
Los frascos que se hayan abierto se debern conservar
en el frigorfico a 40C.
2.
438
en el portaobjetos
No. 1
en el portaobjetos
No. 2
en el portaobjetos
No. 3
1 gota de
suero anti A
1 gota de
suero anti B
1 gota de
suero anti AB
1 gota
1 gota
Resultados
Portaobjetos 1 Portaobjetos 2 Portaobjetos 3 Grupo sanguneo
anti A
anti B
anti AB
del paciente
Grupo A
Grupo B
Grupo AB
Grupo 0
Importante:
No es posible determinar un grupo sanguneo
solo por este mtodo (con antisueros).
Se debe efectuar un segundo ensayo del plasma
o el suero del paciente empleando glbulos rojos
conocidos (vase la pgina 443).
439
No. 2
No. 3
1 gota de
suero anti A
1 gota de
suero anti B
1 gota de
suero anti AB
i
w
a.
ft
i%
Agregue a cada t u b o :
1 gota de la suspensin de eritrocitos al 2% que se
va a ensayar.
440
<<
3.
4.
5.
Examen de la reaccin
Sacudiendo ligeramente el fondo del tubo de ensayo
examine el sedimento de glbulos rojos. Se puede
usar el espejo cncavo de microscopio.
TESTIGOS
La calidad de los antisueros utilizados se deber
confirmar ensayando:
los sueros anti A y anti B con eritrocitos conocidos
de los grupos A, B y O, por el mtodo del tubo de
ensayo.
441
Principio
El suero o plasma cuyo grupo se pretende identificar
se ensaya con tres suspensiones de eritrocitos conocidos:
eritrocitos del grupo A i
eritrocitos del grupo B
eritrocitos del grupo O.
Este ensayo se puede llevar a cabo:
en portaobjetos, o
en tubos de ensayo (particularmente en los casos
dudosos).
Sangre degrupo A i
Ensaye varias muestras de sangre del grupo A cor: el
suero anti A , , como se indica en la pgina 437 (mtodo
del portaobjetos) o en la pgina 440 (mtodo del tubo
de ensayo).
Con el mtodo del portaobjetos la aglutinacin ocurre
en menos de 30 segundos si la sangre ensayada pertenece
al grupo A , .
443
Realizacin de la prueba
Prepare 3 portaobjetos marcados con las identificaciones
A , , B y O.
Coloque:
en el portaobjetos Ai en el portaobjetos B en el portaobjetos O
1 gota de
suspensin al 10%
de eritrocitos A ,
444
1 gota de
suspensin al 10%
de eritrocitos 8
1 gota de
suspensin al 10%
de eritrocitos O
F\ Fr ~\
i
^ACDi
1$
*
u
0
Resultados
Eritrocitos
A,
Eritrocitos
B
Eritrocitos
0
Grupo A
Grupo B
Grupo AB
Grupo 0
Grupo del
paciente
Reacciones dudosas
Examine la preparacin con el microscopio.
La formacin de "columnas de monedas" se puede
identificar como se indica en la pgina 442.
445
Realizacin de la prueba
Marque 3 tubos de ensayo con las identificaciones
A , , B y O.
Coloque:
en el tubo A i
en el tubo B
en el tubo O
2 gotas
2 gotas
2 gotas
Agregue:
al tubo A ,
al tubo B
al tubo O
1 gota de la
1 gota de la
1 gota de la
suspensin al 2% suspensin al 2% suspensin al 2%
de eritrocitos A j de eritrocitos B de eritrocitos O
Examen de la reaccin
Sacudiendo el tubo con suavidad, observe si ha
ocurrido la aglutinacin:
Aglutinacin positiva:
los eritrocitos forman pequeos conglomerados.
Aglutinacin negativa:
los eritrocitos se suspenden nuevamente con facilidad, sin que se formen conglomerados visibles.
446
'
YII
\
4,
Combinacin de resaltados
ANTISUEROS
Anti A
AntiB
ERITROCITOS DE REFERENCIA
Anti AB
A,
Grupo A
Grupo B
Grupo AB
Grupo 0
Razas amarillas
Razas negras
Grupo 0
43%
36%
48%
Grupo A
44%
28%
27%
Grupo B
9%
23%
21%
Grupo AB
4%
13%
4%
447
Principio
Se hace un ensayo de los eritrocitos para detectar el
antgeno D, empleando el suero anti D.
Se dice que los individuos son Rhesus (Rh) positivos
cuando son portadores del antgeno D.
Son Rhesus (Rh) negativos los individuos que carecen
del antgeno D.
448
Mtodo
1.
Si no se dispone de un calentador elctrico los portaobjetos se pueden calentar sobre la llama de una lmpara
de alcohol antes de iniciar el ensayo. Pruebe la temperatura sobre el dorso de la mano; el calor deber ser
soportable.
2.
Resultados
Aglutinacin = Rh positivo
En el centro y la periferia de la mezcla se observa
claramente un gran nmero de pequeas aglutinaciones
de eritrocitos. Estas aglutinaciones se debern formar en
menos de 3 minutos.
Falta de aglutinacin
= Rh negativo
Testigos
Se recomienda que para cada serie de ensayos cotidianos
se disponga de:
un testigo positivo de sangre Rh positiva y
un testigo de sangre Rh negativa (si se puede
conseguir).
Para comprobar que la sangre estudiada es Rh positiva
y sospechosa de causar autoaglutinacin, se puede
efectuar un ensayo de los glbulos rojos del paciente en
su propio suero.
Formacin de vetas
En la preparacin se forman vetas despus de 2
minutos, especialmente en la periferia.
Pueden obedecer a que los eritrocitos se hayan
acumulado en "columnas de monedas" a causa de
la evaporacin (calentamiento excesivo), a que no se
haya empleado la cantidad suficiente de anticoagulante o a que el contenido de protenas del plasma
sea muy elevado.
11l
V
2.
LJ
I=I
mi
Reaccin fh positiva
Se observan pequeas aglutinaciones de eritrocitos en
un lquido claro.
Reaccin Rh negativa
Los eritrocitos permanecen suspendidos y no se
observan aglutinaciones.
Examen microscpico
En caso de duda, caliente un portaobjetos, aspire una
gota del sedimento de eritrocitos con una pipeta Pasteur
y prepare un frotis. Examnelo con el microscopio
(empleando el objetivo x 10).
451
c.
1.
Contaminacin
3.
4.
5.
D. U T I L I D A D DE LA IDENTIFICACIN DE LOS
GRUPOS RHESUS
1.
En transfusiones repetidas
Ejemplo: el paciente es O, Rh negativo
primera transfusin: se le administra sangre O, Rh positiva y se forman anticuerpos anti D;
segunda transfusin: nuevamente se le administra sangre O, Rh positiva y los anticuerpos anti D
que se han formado pueden aglutinar los eritrocitos Rh positivos (D) del donador.
2.
98 -100%
91 - 97%
82 - 94%
9 4 - 97%
82 - 94%
8 0 - 85%
Rhesus
Rhesus
Rhesus
Rhesus
Rhesus
Rhesus
positivos
positivos
positivos
positivos
positivos
positivos
Principio
El estudio de la compatibilidad sangunea se lleva a cabo
para evitar que ocurran reacciones consecutivas a las
transfusiones de sangre. El objeto de esta clase de
estudio consiste en determinar si el suero del paciente
contiene algunos anticuerpos que puedan aglutinar los
eritrocitos del donador.
MATERIALES
PROCEDIMIENTO HABITUAL
Seleccione sangre de un donador apropiado para estudiar
su compatibilidad con el grupo sanguneo del paciente
(vase la pgina 436).
1.
2.
1
1
3.
30 min
se
<
20min
c ^jjlgj
(S
RESULTADOS
No hay
aglutinacin
Aglutinacin intensa o
hemolisis en el tubo 1, con
menor aglutinacin en el
tubo 2
Solo hay aglutinacin
en el tubo 1
Hay aglutinacin
en los 4 tubos
"Columna de monedas'
Principio
El suero fresco del donador se incuba con una cantidad sumamente pequea de eritrocitos A , y B. Si la
titulacin de anticuerpos anti A y anti B es elevada sobrevendr una hemolisis y el suero tomar un color rojizo.
MTODO
Prepare:
una suspensin de eritrocitos A ! al 5% en solucin
de cloruro sdico
una suspensin de eritrocitos B al 5% en solucin
de cloruro sdico
(Ponga en prctica las instrucciones que se han dado
para preparar eritrocitos de referencia, en la pgina 443).
Lave los eritrocitos dos veces.
1.
1
2.
En el tubo A ,
En el tubo B
9 gotas
9 gotas
456
1 gota
*i
^-^
v
'
4
9
M
&
\^j/
vS
LU
3.
4.
457
Mtodo
1. Diga al donador que se acueste en una cama y
que apoye la cabeza en un cojn.
Prepare el frasco recolector de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Si el frasco es de vidrio
y no tiene sistema de vaco:
limpie con etanol la tapa que se va a perforar
introduzca la aguja extractora de aire
introduzca a continuacin la aguja del juego
recolector, cerciorndose de que la punta quede
en un nivel ms bajo que la punta de la aguja
extractora de aire.
Si las puntas de ambas agujas se encuentran en el mismo nivel,
la sangre puede entrar en la aguja extractora de aire, y
obstruirla.
458
3.
5.
6.
Importante:
Si el flujo de sangre al interior del frasco se detiene,
nunca reduzca la presin del esfigmomanometro sin que
antes se haya introducido en el frasco otra aguja extractora de aire. Puede ser que el flujo de sangre se ha
detenido debido a que est tupida la aguja extractora
de aire producindose as, un aumento de la presin
del aire en el frasco. Si la presin del esfigmomanometro se reduce, el aire saldr del frasco por el tubo
del equipo recolector y ascender hasta la vena del
paciente, causando una embolia area que puede ser
mortal.
7.
Cuando la sangre llegue a la marca del frasco recolector, que generalmente indica 540 mi (120 mi de
anticoagulante de ACD y 420 mi de sangre):
disminuya la presin
apriete con la pinza el tubo recolector, cerca
del frasco
retire el objeto que el paciente ha estado
apretando con la mano.
8.
9.
La hepatitis vrica se puede transmitir por transfusin sangunea. Si se cuenta con los medios apropiados es
aconsejable que se lleve a cabo el ensayo del antgeno de Australia para detectar la presencia de virus.
'Tcnica:
462
Deposite una gota de formaldehido al 40% (comercial) en 1 mi de suero sanguneo. Si el resultado es positivo, el suero se
coagular completamente en pocos segundos (no escurrir al invertir el tubo de ensayo). La mezcla se enturbiar en 20
minutos. Esta reaccin ouede ser lenta en la primera etapa de la enfermedad.
1 gota de
anti-A
1 gota de
eritrocitos
del paciente
Eritrocitos A ,
Anti-AB
Anti-B
Anti-A
1 gota de
anti-B
1 gota de
eritrocitos
del paciente
1 gota de
eritrocitos
A,
1 gota de
suero del
paciente
1 gota de
anti-AB
- 1 gota de
eritrocitos
del paciente
6.
1 gota de
eritrocitos
0
- 1 gota de
suero del
paciente
1 gota de
eritrocitos
B
1 gota de
suero del
paciente
Anti-D
3. Mezcle.
4. Coloque el portaobjetos con la preparacin
anti-D en el calentador.
5.
Eritrocitos 0
Eritrocitos B
-
1 gota de anti-D
1 gota de eritrocitos del paciente
(suspensin en suero)
Eritrocitos O
Anti-D
Erictrocitos Aj
Eritrocitos B
Grupo
Anti-A
Anti-B
A Pos
BPos
ABPos
OPos
Anti-AB
6
W
1 gota de
anti-A;
1 gota de
eritrocitos
del
paciente
2 gotas de
suero del
paciente;
1 gota de
eritrocitos
O
1 gota de
anti-B;
1 gota de
eritrocitos
del
paciente
\J
1 gota de
anti-AB ;
1 gota de
eritrocitos
del
paciente
KJ
2 gotas de
suero del
paciente;
1 gota de
eritrocitos
A,
<J
2 gotas de
suero del
paciente;
1 gota de
eritrocitos
B
1 gota de
anti-D;
1 gota de
eritrocitos
del
paciente
(suspensin en suero).
3.
4.
Mezcle.
Incube el tubo de ensayo con la preparacin anti-D a 37 0 C.
5.
6.
ESTUDIO DE LA COMPATIBILIDAD
Estudio habitual
1. Prepare una suspensin de eritrocitos del donador y el paciente en solucin de cloruro sdico al 2%.
2.
3.
4.
5.
\ l
\ l
Estudio de anticuerpos
del paciente en albmina
2 2 gotas de suero
del paciente;
1 gota de eritrocitos
I , del paciente
4
\
Estudio de anticuerpos
del pacien te en cloruro sdico
2 gotas de suero
del paciente;
1 gota de eritrocitos
del paciente.
Mezcle.
Coloque en la incubadora todos los tubos a 37 0 C durante 1 hora.
Agregue 2 gotas de albmina bovina al 20% en los tubos 2 y 4. NO SE MEZCLE.
2.
3.
4.
5.
464
Losreactivosy su elaboracin
Orden
La relacin de reactivos se ha dispuesto en orden alfabtico. Por ejemplo:
actico, cido
bovina, albmina
fenicada, fucsina
potsico, hidrxido
sdico, carbonato
se encuentra
se encuentra
se encuentra
se encuentra
se encuentra
en
en
en
en
en
....
....
. ., .
....
....
A
B
F
P
S
A cada reactivo se ha dado un nmero, que figura inmediatamente despus del nombre
(estos nmeros tambin se encuentran junto a las descripciones de las tcnicas).
2,45 g
2,20 g
0.89 g
: . . . 100 mi
20 mi
q s . 200 mi
3 mi
97 mi
A M O R T I G U A D A , AGUA (No. 5)
Solucin amortiguadora para las tinciones de May-Grnwald, de Giemsa
y de Leishman.
Hidrofosfato disdico (Na 2 HPO4. 2H 2 O)
3,76 g
Fosfato de potasio y dihidrgeno ( K H 2 P 0 4 ) anhidro
2,1 g
Agua destilada
q.s. 1 000 mi
Mida el pH por medio de cintas de papel reactivo de graduacin reducida o
de un comparador, como se indica en la pgina 6 1 . El pH deber oscilar
entre 7,0 y 7,2.
17,3 g
173,0 g
100,0 g
1 000 mi
Bicromato potsico ( K 2 C r 2 0 7 )
100 g
Agua
i 000 mi
Acido sulfrico puro (H2SO4)
100 mi
Disuelva el bicromato en el agua. Aada el cido poco a poco y con mucho
cuidado, revolviendo continuamente. Invariablemente se debe aadir el
cido al agua, y NO el agua al cido. En general, si se dispone de detergentes
comerciales como Teepol 053, Labrite o Extran, la solucin limpiadora de
bicromato no es necesaria.
Advertencia: puesto que el bicromato potsico y el cido sulfrico son corrosivos y su
mezcla an ms, evite usar esta solucin siempre que sea posible.
50 mi
q.s. 100 mi
10 mi
5 m!
Tambin existe una solucin comercial al 22%. Se puede emplear sin diluirla
y algunos especialistas la recomiendan.
467
1,0 g
0,4 g
468
2g
20 mi
80 mi
1g
q.s. 100 mi
2g
q.s. 1 ml
3g
100 mi
10g
q.s. 200 mi
lOml
90 mi
COLORANTE B DE FIELD:
Elaboracin a partir de polvos preparados:
Polvos para colorante B de Field
AS g
Agua destilada caliente
Q5 6 0 0 m l
Mezcle bien hasta que se disuelva. Filtre la mezcla cuando se haya
enfriado.
Elaboracin a partir de colorantes y agentes qumicos
originales:
12 9
Oxalato potsico
'09
5 100 ml
Agua destilada
P
Para usar este anticoagulante, trasldelo con una pipeta de 0,1 ml a
recipientes pequeos con capacidad para 2 ml de sangre (o LC R).
Advertencia: el fluoruro sdico y el oxalato potsico son sustancias txicas.
3 0
'
1.0 "I
I000 ml
100,0 ml
300,0 ml
470
0 75 g
65 mi
35 mi
15g
q.s. 500 mi
REACTIVO DE ORTOTOLUIDINA
Tiourea
0,75 g
470 mi
30 mi
Disuelva la tiourea en el cido actico glacial. (Si esto resulta difcil, coloque
el matraz en un recipiente con agua caliente). Aada la ortotoluidina y
mezcle bien. Vace en un frasco oscuro y consrvese a la temperatura
ambiente.
Advertencia: evite tocar estos agentes qumicos; el cido actico glacial es sumamente
corrosivo.
1g
q.s. 1 000
5 mi
q.s. 1 000 mi
471
472
5g
q.s. 'lO mi
0,3 g
! . . 100 mi
M I F ( N o . 38)
1.
200 mi
25 mi
5 m|
250 mi
30 g
500 mi
Coloque el fenol en un frasco de 1000 mi. Agregue el agua. Agite vigorosamente. Deje en reposo durante un da. Observe si hay alguna parte de fenol
que no se haya disuelto. Si es as, fltrelo. (Si todo el fenol se ha disuelto,
aada otros 10 g y espere durante un da ms antes de filtrar). El reactivo
de Pandy es una solucin saturada de fenol.
Advertencia: el fenol es sumamente corrosivo y txico.
51 g
3d ml
20 g
q.s. 100 mi
473
2,5 g
P-S- 100 mi
10 mi
90 mi
SOLUCIN DE C U R A T O TRISODICO AL 5%
Citrato trisdico
Agua destilada
5 9
P-s-100 mi
24 mi
10 mi
qs- 100 mi
-O* 5 ?
Urea
10 mi
50 mi
q.s. 100 mi
2g
20 mi
0,8 g
80,0 mi
0,2 g
10 mi
Solucin A 2 :
Azul de metileno
Metanol anhidro ("absoluto")
0,7 g
10 mi
0,3 g
3 mi
97 ml
2,5 g
5,0 g
1,0 g
q.s. 100 mi
5 mi
NDICE
A
ABO, clasificacin de grupos sanguneos,
435-436
por medio de antisueros, mtodo del
portaobjetos, 437-439, 443-445,463
mtodo del tubo del ensayo,
440-441,446,463
por medio de eritrocitos estandarizados,
mtodo del portaobjetos (mosaico),
437-439, 443-445, 463
mtodo del tubo de ensayo,
440-441,446.463
Accidentes, 98
prevencin de, 101
ACD, solucin de, 444,458,466
Actico, cido, 175, 331, 334,466
Acido, reactivo, 432,466
Acido y etanol, 249, 253, 257,466
modificado, 259
Actinomicetos, 240
Agitadores, fabricacin, 66
Agua, amortiguada, 61-63,466
desmineralizada, 59
destilada, 57
limpia, 56
muestreo para anlisis, 279-284
para usar en el laboratorio, 56
pHdel, 58, 60, 61-63
Agujas, 105,226,265
esterilizacin, 34
limpieza, 32
para ensayo del VDRL, 288, 294
puncin venosa, 353
Aire caliente, homo de, 37
Alcohol polivinlico, 73, 173, 174
Amebas, 73
formas mviles, 147-148, 150-152, 165
quistes, 157-158
Ancylostoma duodenale, 123, 142
helmintos, 146
huevos, 125, 126,163
larvas, 169
Anillados, eritrocitos, 408,413
Anisocitosis, 409
Anticoagulantes, 68-69, 72, 352,466, 469,
470, 475, 477
Antgeno D, 435,448
distribucin geogrfica, 452
ntrax, bacilos, 239
APV, vase Alcohol polivinlico
Asa para siembra, fabricacin, 232
B
Bacilos, cidorresistentes, 249, 252
ntrax, 239
difteria, 270, 271
gramnegativos, 240, 244
grampositivos, 239, 244
lepra, 252, 259-263, 264
peste, 265-267
ttanos, 239
tuberculosis, 249-258, 277
Balanzas, 48-57
Balantidium coli, quiste, 155,159
forma mvil, 148, 159
Brico, solucin acuosa de cloruro, 100 g/l,
317,467
Basfilos polimorfonucleares, 401
Basof licos, granulos, 410
Bencidina, ensayo de la, 177
Benedict, mtodo para determinar glucosa en
la orina, 311-312
Benedict, solucin cualitativa, 311, 467
Benzoico, cido, 429,471
Bicromato, solucin limpiadora de, 30, 369,
467
Biliares, pigmentos en la orina, 316-318
Biopsia, material de, fijacin y envo, 73,
75-77
Blanco, reactivo (cido tricloroactico), 432,
467
Blastoquistes, en las heces fecales, 160
Borrelia. 241
Bovina, albmina, al 20%, 453, 464, 467
Brugia malayi, 213, 214
Buretas, 46
Burker, cmara cuadriculada de, para
recuentos de clulas sanguneas, 364
479
c
Cabot, cuerpos de, 410
Candida, 270, 272, 349
Cantidades, nombres de, 7-10
Cary y Blair, medio de transporte de, 265,
268,468
Centrfugas, 52-55
vase tambin Microhematocrito,
centrfuga para
Chagas, enfermedad de
vase Tripanosomiasis americana
Chilomastix mesnili, 154
formas mviles, 148, 154
quistes, 158
Ciliados, 147, 156
formas mviles, 147, 148
quistes, 155, 158
Cilindros, en sedimentos urinarios, 330-332
Clono rchis sinensis. 123
helmintos, 146
huevos, 125, 128, 141,163
Clorhdrico, cido, 0,1 mol/1, 377,468
Coagulacin, tiempo de, 421-422
sangre entera, 423-427
Cogulo, tiempo de retraccin y tisis, 425-427
Coccidios, en las heces fecales, 161
Cocobacilos, gramnegativos, 240
Cocos, gramnegativos, 244
grampositivos, 239, 244
Clera, vibrin del, 72, 268, 269
"Columnas de monedas", formacin de, 442,
450,455
Compatibilidad sangunea, ensayo de la,
453-455, 464
Compatibilidad sangunea, ensayo para transfusiones, 453-455,464
Concentracin, mtodos de, 223-225
de microfilarias, 223-225
de parsitos en las heces fecales, 162-169
de tripanosomas, 207-208
Corynebacterium diphtheriae, 270, 271
Cresil brillante, azul de, 414, 417,468
Cristalera, utensilios de, 27-32, 34, 37,
64-67, 105,369-370
Cristales, en los sedimentos urinarios, 332-335
D
Diabetes mellitus, 429
Oiacetil monoxima con tiosemicarbacida,
mtodo para la determinacin de urea,
432-434
480
Dicrccoelium, 123,142
helmintos, 146
huevos, 128, 141, 163
Dientamoeba frgilis, 158
forma mvil, 148, 152
Difteria, bacilos, 271
Dipetalonema perstans, 213
Dlpetalonema streptocerca, 218
Diphyllobothrum latum, 123, 142
huevos, 128,141
Diplococos, gramnegativos, 239, 243
Dipylldium caninum, 123.142
helmintos, 129
huevos, 145
Drabkin, lquido para dilucin, 371,468
Duke, mtodo para el tiempo de sangrado,
421 422
E
Echinococcus granulosas, 185
EDTA, solucin salina bipotsica, 68, 72, 352,
380, 383, 388, 413,414, 418,433,437,
448,469
Ehrlich, reactivo de, 319,469
Elctrico, equipo, instalacin y conservacin,
87-93
Elctrico, choque, 101
Eliptocitos, 410
Embarazo, pruebas dei, 336
Endofimax nana, 152
forma mvil, 152
quistes, 158
Enfermedad de Chagas,
vase Tripanosomiasis americana
Entamoeba coli, 148,150
forma mvil, 150, 151
quistes, 157
Entamoeba hartmanni, 148
forma mvil, 152
quistes, 157
Entamoeba histoly tica, 142, 148, 150
forma mvil, 148, 150, 151
quistes, 155, 157, 159
En terobius vermicularis, 123, 129
helmintos, 143
huevos, 125, 129, 140
recoleccin de huevos, 119-121
Eosina, solucin acuosa de, 10 g/l, 297, 469
solucin salina de, 20 g/l, 147, 469
Eosinofilia, 406
Eosinfilos polimorfonucleares, 401
Epiteliales, clulas en los sedimentos urinarios,
329
Eritrocitos, 351
anormales, 407-410
en los sedimentos urinarios, 327
F
Falciformes, clulas, 408,411-413
Farngeo, exudado, muestras de, envo,
71,273
examen, 270-272
preparacin de hisopos, 274
Fasciola heptica, 123, 142
helmintos, 140
huevos, 125, 130, 141, 163
Fascio/opsis buski, 123, 142
helmintos, 146
huevos, 125,130, 141, 163
Fenicada, fucsina de Kinyoun, 257,472
de Ziehl y Neelsen, 249, 253,469
modificada para el ensayo de lepra, 259
Field, tincin de,
vase Tincin, Field
G
Gametocitos. 197, 200-201
Giardia lamblia,
forma mvil, 148, 153
quistes, 155, 158, 159
Giemsa, tincin de,
vase Tincin Giemsa
Glicerol, solucin salina amortiguada de,
72, 269, 466
Glbulos blancos, vase Leucocitos
Glbulos rojos, vase Eritrocitos
G/ossina, 226
Glucosa,
clculo en el lquido cefalorraqudeo,
344, 429
clculo en la sangre, 429-431
clculo en la orina, 311-312
Glucosa, reactivos para, 429, 471
Gonococos, 239, 243-244
Gonorrea, 231, 243-244
Gram, tincin de,
vase Tincin, Gram
Granulocitos, 403
Gravedad especfica de la orina, 307-308
481
482
Intoxicacin, 100
Informes, del examen bacteriolgico, 242
del examen de heces fecales, 172
mensual, del laboratorio, 84
lodamoeba butschli,
forma mvil, 148, 152
quistes, 158
J
Jenner, tincin de,
vase Tincin, Jenner
Jeringas, 105
esterilizacin, 34
K
Kala-azar (leishmaniasis visceral), ensayo
de la sangre en, 462
Kinyoun, fucsina fenicada de, 257,472
L
Laboratorio, aparatos y equipo del,
27-28,104-107
Laboratorio, utensilios de vidrio del, 27
fabricacin, 64-68
limpieza, 29-32
Laboratorio, planos del, 102-103
Laboratorio, ejemplos de registros del, 78-83
Lactofenol, solucin de azul algodn de,
300, 472
Lavado, matraz, preparacin de, 67
M
Macrocitos, 409
Mal de pinto, 288
N
Necator amercanus, 123, 142
helmintos, 146
huevos, 125, 132, 140,163
Neissera gonorrhoeae, 243
Neubauer, cmara cuadricu'ada de, para
recuentos de clulas sanguneas, 363, 368
Neutrofilia, 406
Neutrfilos polimorfonucleares, 400
en cayado, 4 0 0
inmaduros, 400
Meutropenia, 406
Normoblastos, 364, 4 0 3 , 408
O
Onchocerca volvulus, 215
en la orina, 181
rasgos para reconocerlo, 218
Oncocercosis, 215-219
Opistorchis felineus, 123
helmintos, 146
huevos, 133, 1 4 1 , 163
Orina, registro de anlisis, 80
aspecto, 306
bacilos de la tuberculosis en la, 277
cultivos de, 278
examen bacteriolgico directo de la,
275-277
glucosa en la, 311-312, 323
gravedad especfica de la, 309-310
papeles indicadores para examinar la,
323-324
parsitos en la, 178-182
pH,309-310
pigmentos biliares en la, 316-318
protenas en la, 313-315, 323
pruebas del embarazo en la, 336
recoleccin de la, 275, 305
sangre en la, 337
sustancias cetnicasen la, 320-321
urobilingeno en la, 319, 324
P
Paludismo, parsitos del, 1S6-203
densidad, 198, 203
distribucin geogrfica, 199
en la sangre de los donadores, 462
etapas de desarrollo, 197
preparacin de frotis de sangre, 196
extensiones sanguneas, 387-390
frotis de gota gruesa, 189-192
rasgos distintivos, 200-202
Pandy, ensayo de globulinas en el LCR por el
mtodo de, 346
Pandy, reactivo de, 346, 473
Paragonimus westermani, 123
huevos, 125, 133, 141, 163, 183-184
Parsitos, 111
concentracin en las heces fecales, 162
en la orina, 178-182
vanse tambin los parsitos especficos
de cada caso
Pasteurella pestis, vase Yersinia pestis
Perifrico, laboratorio, equipo para el,
104-107
plano, 102-103
Peste, 265-267
pH, determinacin en el agua, 60, 61-63
en la orina, 309-310
Piel, lesiones de la, bacilos de la lepra en las,
259-262
Pigmentos biliares, en orina, 316-318
Pinto, 288
Pipetas, 43
de Pasteur, 64, 246
goteras, 46
limpieza, 30
Pitiriasis versicolor, examen directo, 297 299
Pityrosporum frfur, 297
Planillas para registre y registros del laboratorio, 79-83
anlisis de orina, 80-81
donadores de sangre, 82
hematologa, 79
Lquido cefalorraqudeo, 80-81
parasitologa, 83
qumica sangunea, 79
transfusiones de sangre, 80-81
serologa, 83
Plaquetas, vase Trombocitos
Plasma, sangre, 352
Plasmticas, clulas, 402
Plasmocitos, 402
Q
Quemaduras, por cidos, 98
por lcalis, 99
por calor, 100
Quistes, aspecto microscpico, 157-159
en las heces fecales, 155-161
examen en portaobjetos, 155
objetos, no confundir con hongos, 160, 161
rasgos distintivos, 156
R
Reactivos, preparacin, 465-477
Recipientes para muestras, 68-73
agua, 279
desecho y esterilizacin, 39-41
esputo, 70, 255
exudado farngeo, 7 1 , 273
heces fecales, 72-73, 114, 268
lquido cefalorraqudeo, 7 1 , 350
orina, 73, 305
sangre, 6 8 - 6 9 , 72, 286-287, 461
tejidos para bipsias, 73, 76
Recuento de glbulos blancos,
vase Leucocitos, concentracin de
nmero
Recuento de glbulos rojos,
vase Eritrocitos, concentracin de
nmero
Registros, 78-83
Reticulocitos, 414-417
concentracin de nmero, 9, 416
fraccin de nmero, 9, 416
Rhesus, clasificacin de grupos sanguneos,
435-436
mtodo del portaobjetos, 4 4 8 - 4 5 0
mtodo del tubo de ensayo, 451-463
Ros, ceguera de los,
vase Oncocercosis
Romanowski, tincin de,
vase Tincin, Romanowski
T
Taenia saginata, 123, 142
helmintos, 144, 145
huevos, 125, 137, 140, 163
U
Unidades SI, 6-10
Urea, clculo, 432-434
Urea, reactivos para, 432, 475
Urobilingeno, 319, 324
V
VDRL, ensayo del, 248, 288
cualitativo, 291-293
cuantitativo, 294-296
preparacin de la suspensin antignica,
288
solucin amortiguadora para, 289,46
Vidrio, utensilios de,
vase Cristalera
Vincent, angina de, 241, 272
Violeta cristal de Hucker, modificado,
235,468
Volumen de sedimentacin globular,
vase Eritrocitos, fraccin de volumen de
Volumen, medicin del, 42-47
VSE,
vase Eritrocitos, velocidad de sedimentacin de
w
Willis, tcnica de concentracin de,
162 164
Willis, solucin de, 163, 477
Wintrobe, mezcla de, 352, 383,477
Wright, tincin de,
vase Tincin, Wright
Wuchereria bancrofti, 212, 214
en la orina, 181
en los sedimentos urinarios, 332
X
Xantocromia, 342
Y
Yersinia pests, 265, 267
z
Zenker, fijador de, 73, 75, 477
Precio: US$15,00
PXT02
ISBN - 92 75 31439 X