Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
De Colesterol
Instituto Politcnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas
Departamento de Bioqumica
Prctica 8 Separacin de fosfolpidos por cromatografa en capa fina y
determinacin de colesterol en yema de huevo
INTRODUCCIN
Los lpidos son compuestos de origen biolgico que se disuelven en
compuestos no polares como el cloroformo o el dietil ter y se clasifican en
compuestos y simples. Los lpidos compuestos contienen cidos grasos por
lo que son saponificables.
Los lpidos simples esteroides son derivados del isopreno y no son
saponificables. Entre ellos se encuentran el colesterol, hormonas sexuales,
cidos biliares y algunas vitaminas. Son molculas cclicas.
El colesterol es uno de los esteroides ms abundantes y se asla de la
extraccin de casi todos los tejidos animales. Se encuentra distribuido
ampliamente en el cuerpo humano, pero an no se conocen todas sus
funciones biolgicas y es esencial para la vida; sin embargo, no es necesario
ingerirlo en los alimentos porque el cuerpo sintetiza la cantidad adecuada.
OBJETIVOS
* Separar fosfolpidos de la yema de huevo por cromatografa en capa fina.
* Comparar las ventajas de dicha tcnica con la cromatografa en papel.
* Determinar la concentracin de colesterol en la yema de huevo por el
mtodo de Lieberman-Burchard.
Imagen2. Placa con revelador de NINHIDRINA. (Grupos amino)
Imagen 1. Placa expuesta con cristales de YODO. (Dobles enlaces)
RESULTADOS
Tabla 1. Valores de los Rf de fosfolpidos.
Frente de la mancha: 5.4 cm |
MOLIBDATO |
| Recorrido | RF |
Mancha 1 | 0.9 | 0.16 |
Mancha 2 | 1.3 | 0.24 |
Mancha 3 | 2 | 0.37 |
Mancha 4 | 3 | 0.55 |
Mancha 5 | 3.9 | 0.72 |
YODO |
Mancha 1 | 2.4 | 0.44 |
Mancha 2 | 3.7 | 0.68 |
Mancha 3 | 4.7 | 0.87 |
NINHIDRINA |
Mancha 1 | 1.5 | 0.27
Mancha 2 | 3.5 | 0.64
BISMUTO |
Mancha 1 | 0.7 | 0.13
Mancha 2 | 2 | 0.37 |
Mancha 3 | 2.9 | 0.53
|
|
|
|
Pata
Gallina
47g---5l 235000g---25000l = 235 mg /yema
67g---5l 335000g---25000l = 335 mg /yema
DISCUSIONES
Realizamos 4 cromatografas de la misma muestra de huevo porque solo de
esta forma identificamos mayor variedad de fosfolpidos presentes en la
yema dndose a conocer mediante la aplicacin de diferentes tipos de
reveladores. La prueba de molibdato presenta el mayor nmero
deinterpretaciones debido a que es una prueba general para fosfolpidos y
se visualiza con manchas de color azul; podramos decir que solo para este
experimento nos bastara aplicar solamente el revelador molibdato porque
cubre todas las expectativas; sin embargo, la fosfatidil serina y la fosfatidil
colina no se llegan a separar por completo, por lo que se tendran que
realizar otras pruebas para evitar confusiones. Otro punto importante a
aclarar es que la mancha que representa a lpidos neutros como el
colesterol no presenta el color azul caracterstico de la prueba sino se
expresa una tonalidad plida y amarillenta.
La prueba de ninhidrina es especfica para fosfolpidos que presenten
grupos amino y es positivo con manchas de color violeta solo para fosfatidilserina y fosfatidil-etanol-amina. En cuanto a la prueba de Yodo, ste nos
permiti visualizar de color caf lpidos con dobles enlaces dando positivo
Prueba de Yodo
Prueba de Ninhidrina
Prueba de Bismuto
Prueba
|
| cm frente de disolvente
| 3.2 | | 0.592
| 1.8 | | 0.333
| 2.0 | | 0.370
|1
| | 0.185
| 0.5 | | 0.092
| 1.4 | | 0.259
Bismuto
| 2.9 | | 0.537
| 1.7 | | 0.277
| 0.4 | | 0.074
| Rf
| cm frente de soluto
Lifosfatidil colina
| 0.17| +
|+
|-
Esfingomielina
| 0.26| +
|+
|-
Fosfatidilcolina
| 0.33| +
|+
|-
|-
|+
|-
|+
|-
|-
Esta tabla
muestra lo valores de Rf conocidos de algunos fosfolpidos.
a 640nm
a 640nm
Masa g
Masa g