CAPTULO 1

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QU ES LA INMUNOLOGA?

inmunologa es la parte de la ciencia que estudia los mecanismos por los

cuales los animales pueden diferenciar su propia estructura de la ajena,
reaccionar contra lo extrao y memorizarlo para el futuro.
La inmunologa como disciplina cientfica comienza a
estudiarse en el siglo XVIII como una parte de la
microbiologa. En esta poca aparece la primera vacuna
contra la viruela, al observar Edward Jenner (17491823) que las personas que haban presentado viruela
bovina, eran resistentes a la viruela humana. Estos
estudios siguieron avanzando hasta el siglo XIX, cuando
gracias a los trabajos de Louis Pasteur (1822-1895) se
desarrollan nuevas tecnologas que haran posible la
aparicin de vacunas frente a varias enfermedades
humanas y animales. Uno de los primeros conceptos
que se definieron en el desarrollo de la inmunologa fue
el del trmino inmune, para denominar a aquellas
personas o animales que o bien, al sobrevivir a una
infeccin o sin necesidad de llegar a sufrirla, eran
resistentes, apareciendo los dos conceptos de:
inmunidad natural e inmunidad adquirida.

La inmunidad natural es la primera barrera

inmunolgica no especifica. Los principales
mediadores de la inmunidad natural son las clulas
fagocticas, las clulas de citotoxicidad natural (NK)
y el interfern.

Instituto Pasteur, Pars.

Adems de las barreras fsicas (piel, secreciones

de las mucosas, pH cido del estomago, enzimas
proteolticas, etc.), de gran importancia en la lucha
frente a los antgenos, los mamferos disponen de
unos mecanismos no especficos que componen
lo que se denomina la inmunidad natural. La
inmunidad natural es la primera barrera
inmunolgica no especifica del cerdo frente a las
infecciones a las que no estaba inmunizado
previamente. Esta respuesta, se desencadena a
los pocos minutos u horas de sufrir la agresin y
est mediada fundamentalmente por clulas
fagocticas, clulas de citotoxicidad natural NK e
Interfern. Cuando esta primera barrera falla, se
establece la infeccin y comienza a desarrollarse
la inmunidad adquirida. Los mecanismos

inmunitarios relacionados con la inmunidad natural

estn ligados a mecanismos no especficos, es
decir, no estn producidos por la presencia de un
antgeno determinado.

La inmunidad adquirida es el resultado de la

respuesta inmune frente a una molcula o agente
extrao para el animal (antgeno). Se genera una
respuesta especfica frente a un estimulo ajeno.
Tras el proceso de captacin y reconocimiento de
los antgenos se pondrn en marcha los
mecanismos de presentacin y activacin de los
linfocitos para la produccin de anticuerpos y
linfocinas.
Desde los primeros conceptos hasta nuestros
das, el conocimiento de la inmunologa ha ido
avanzado de forma progresiva. En las ltimas
dcadas se han conseguido los avances ms
importantes en el conocimiento de la inmunologa
en general y de la porcina en particular. Tres, han
sido fundamentalmente los desarrollos que han
favorecido al mejor conocimiento de los diferentes
mecanismos inmunolgicos en la especie porcina:

La inmunidad adquirida se induce como respuesta

a un antgeno especfico, tras la colaboracin de
clulas fagocticas, linfocitos T y B y la
produccin de inmunoglobulinas (Ig) e linfocinas
(IL).

1.- El desarrollo de los cerdos

singnicos para el sistema de
histocompatibilidad porcino (SLA).
2.- Los anticuerpos monoclonales.
3.- Los avances en las tcnicas de
biologa molecular.

En el cerdo se han descrito tres antgenos

de histocompatibilidad denominados como:

SLA I.
SLA II.

SLA III.

1. Los cerdos singnicos para el sistema

de histocompatibilidad porcino (SLA)
han permitido conocer mejor el
control gentico de la respuesta
inmune porcina y su relacin con los
diferentes agentes patgenos.

2. Los anticuerpos monoclonales permitieron

disponer de unos reactivos de gran
especificidad frente a las diferentes clulas
del sistema inmune porcino y comprender
mejor su papel en los mecanismos de
repuesta inmune. Gracias a estos anticuerpos
tambin se han podido conocer mejor las
diferentes clases y subclases de
inmunoglobulinas e incluso, los antgenos de
histocompatibilidad porcinos (SLA).
Esquema de la produccin de anticuerpos
monoclonales.
En la primera fase se inocula a un ratn el
antgeno contra el que se desean producir los AM ,
hasta conseguir una buena inmunizacin. A
continuacin se extrae el bazo del animal
inmunizado y se fusiona con clulas de mieloma
para formar los hibridomas que se seleccionarn
en virtud del anticuerpo producido.

3. La biologa molecular ha facilitado la

consecucin de nuevos reactivos para el
diagnstico de los procesos infecciosos, as
como el desarrollo de vacunas de nueva
generacin, lo que ha permitido avanzar en el
conocimiento de la respuesta inmune porcina.

En estos diez captulos del curso de introduccin a la inmunologa porcina revisaremos

los principales componentes del sistema inmune porcino, sus mecanismos de accin y
sus aplicaciones ms importantes.
CAPTULO 1

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CULES SON LAS

PRINCIPALES
CARACTERSTICAS DEL
SISTEMA INMUNE?

Las principales caractersticas del sistema inmune porcino son:

1. La capacidad para diferenciar lo propio de lo

ajeno.

1. La especificidad de la respuesta.
1. La memoria.

1.- La capacidad para diferenciar lo

propio de lo ajeno.
El sistema inmune tiene la capacidad para
diferenciar lo propio de lo ajeno,
reaccionando contra todo lo extrao para l
(antgenos). El sistema inmune tiene una
capacidad extraordinaria de reaccionar frente
a cualquier molcula distinta de su propia
estructura por pequea que esta sea. Sin
embargo, no reacciona frente a sus
propios componentes. Esta caracterstica
de diferenciar lo propio de lo ajeno, es una
de las bases ms importantes de la
inmunologa. En la fase embrionaria los
linfocitos que pueden reaccionar con las
molculas propias del animal son
eliminadas mediante un mecanismos de
apoptosis (muerte celular programada). Al
sistema circulatorio solamente pasarn los
clones celulares capaces de reaccionar
contra antgenos extraos, siempre que
estn asociados a su mismo SLA, as
como los clones tolerantes a sus propias
estructuras. En esta seleccin juegan un
papel muy importante los antgenos de
histocompatibilidad (SLA). A veces pueden
ocurrir errores en el sistema inmune para

En el timo se seleccionan los linfocitos para que slo

puedan reaccionar frente a las molculas extraas al
organismo (seleccin positiva). Solamente estos
linfocitos pasaran al torrente circulatorio. Por el
contrario, se produce una destruccin celular
(apoptosis) de los linfocitos que pudieran reaccionar
contra la propia estructura.

2.- La especificidad del sistema inmune

se debe a que tanto los anticuerpos como los
linfocitos slo reconocen a un nico epitope
o determinante antignico. El sistema
inmune puede reconocer miles de millones
de antgenos diferentes, pero para cada

diferenciar lo propio de lo extrao. As, puede

ocurrir que el sistema inmune no responda a
alguna partcula extraa. Este fenmeno se
denomina tolerancia. Por el contrario, en
algunas circunstancias, el sistema inmune
puede reaccionar frente a sus propias
estructuras. Estas reacciones se denominan
autoinmunidad.

determinante se inducir un linfocito

especfico. Existen tantos linfocitos
estimulados, como determinantes formen
el antgeno.

3.- La memoria.
Cuando un antgeno, se presenta por vez
primera, al sistema inmune se produce una
respuesta primaria, quedando un linfocito
memoria por cada uno de los epitopes del
antgeno. Cuando ese antgeno vuelva a
estar en contacto con el sistema inmune
(respuesta secundaria), el linfocito memoria
se estimular para producir cuantos clones
de linfocitos especficos sean necesarios,
(frente a ese determinado epitope) de una
manera ms rpida y efectiva que en la
respuesta primaria.

CAPTULO 1

Reconocimiento especfico de un solo determinante

antignico (un determinante=una clula). Tras el
reconocimiento hay una proliferacin, por la cual unos
linfocitos pasan a formar parte de los linfocitos
memoria, y otros actuarn como clulas efectoras.

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QU COMPONE EL SISTEMA
INMUNE?

El sistema inmune del cerdo est formado por un conjunto de rganos

linfoides y varios tipos de clulas que le permiten reaccionar frente
agentes extraos, memorizarlos para una segunda posible infeccin y
preservar sus propias estructuras.

COMPONENTES DEL SISTEMA INMUNE.

RGANOS PRIMARIOS:
(produccin y diferenciacin de
linfocitos)

MDULA SEA: LINFOCITOS B

TIMO: LINFOCITOS T

GANGLIOS

BAZO

SISTMICOS:
RGANOS SECUNDARIOS:
(captacin y procesamiento de
antgenos)

AGRUPADOS:
TONSILAS
MUCOSAS:

PLACAS DE PEYER

AISLADOS:
FOLCULOS

Segn la funcin que desempean en el cerdo, se diferencian dos tipos de

rganos linfoides:

rganos linfoides primarios.

rganos linfoides secundarios.

LOS RGANOS LINFOIDES PRIMARIOS estn formados por la mdula sea y

el timo. Su funcin es la de producir y regular la produccin y diferenciacin de los
distintos linfocitos. En la medula sea se produce la maduracin de los linfocitos B y en el
timo la de las distintas poblaciones de linfocitos T.

La mdula sea: Se considera el principal rgano linfopoytico primario del cerdo, al

igual que en otros mamferos. Se encuentra distribuida en el interior de todos los huesos del
animal, principalmente en los huesos largos. En ella se producen las clulas madre
linfopoyticas que originarn los futuros macrfagos y linfocitos B y T. Estos ltimos (T), al
emigrar desde la mdula sea embrionaria a la corteza del timo.

Corte histolgico a nivel del estroma de la mdula sea porcina (200X) en el que
se puede observar las diferentes poblaciones de clulas hematopoyticas.

Desde el punto de vista estructural y funcional, la mdula sea del cerdo est formada por dos
grandes compartimentos relacionados entre s:

Estroma.

Hematopoytico.

El estroma de la medula sea est formado por un armazn de fibras y clulas reticulares que
tienen como misin la de sostener la parte hematopoytica de la mdula, as como producir
diferentes factores de crecimiento y desarrollo para activar las clulas precursoras producidas
en la parte hematopoytica. Se ha definido al estroma como el microambiente hematopoytico
necesario para que la parte productiva de la mdula pueda funcionar de forma correcta.

La parte hematopoytica, localizada en el parnquima de la mdula sea, la forman unas

colonias o nidos de clulas que se alojan en las redes de las fibras reticulares. Las clulas
progenitoras son denominadas "Unidades formadoras de Colonias". Estas clulas son las que
darn origen a las diversas lneas celulares, constituyendo el principal rgano
hematopoytico. No se conoce todava bien cmo inician el camino de diferenciacin celular
para convertirse en uno u otro tipo de clula.
Adems de en la mdula sea, los linfocitos B de cerdo tambin se producen, en menor
cantidad, en otros rganos linfoides asociados a las mucosas, y en el bazo

El timo es un rgano de gran importancia para el desarrollo del sistema inmune en la fase
embrionaria, ya que juega un importante papel en la seleccin de los linfocitos propios
(asociados al SLA de cada animal), as como en los primeros meses de vida del animal. En el
cerdo joven se extiende caudalmente desde el msculo digstrico, a lo largo de las arterias
cartidas, a ambos lados del cuello, hasta la entrada torcica, donde ambos lados del timo se
fusionan. Es un rgano que adquiere su tamao principal entre los cinco y ocho meses de

vida del animal y desaparece paulatinamente a partir del primer ao de vida.

En el cerdo, el timo presenta

una estructura formada por
diferentes lbulos, rodeados
por una fina capa de tejido
conjuntivo, que se contina en
finos septos que subdividen
los lbulos en varios lobulillos,
parcialmente separados.
Corte histolgico de timo de cerdo (25 X) en el que se puede observar un
Histolgica y
lbulo con los diferentes lobulillos separados por diferentes septos (a), la zona
funcionalmente se pueden
cortical corteza (b) con gran presencia de linfocitos, la zona medular
diferenciar dos zonas: Una
mdula (c) formada por clulas epiteliales y menor nmero de linfocitos.
corteza constituida
fundamentalmente por un
El timo es el primer rgano linfoide que se desarrolla a
gran acumulo de linfocitos en
partir de las clulas madre procedentes de mdula
proliferacin de diverso
sea. Una vez en el timo, estas clulas se diferencian en
tamao (entre 9 a 5 micras) y
Linfocitos T, permaneciendo en el timo o emigrando a
escasa presencia de clulas
otros rganos linfoides secundarios, formado las zonas
epiteliales, y una mdula
T-dependientes.
formada por numerosas
clulas epiteliales, que forman
estructuras concntricas
(denominadas corpsculos de
Hassall), y linfocitos T en
menor nmero que en la
corteza.
El proceso de aprendizaje de los linfocitos para adquirir la tolerancia a lo propio y su
capacidad para reaccionar frente a los extraos, se produce en gran medida en el paso
de la zona cortical a la medular del timo.

LOS RGANOS LINFOIDES SECUNDARIOS estn formados:

Ganglios linfticos.
A nivel sistmico por:

A nivel de mucosas por:

Bazo.

Tejido linfoide asociado a las

mucosas (tonsilas y placas de
Peyer)

La funcin principal de estos rganos es la de llevar a cabo el reconocimiento de los

antgenos y la iniciacin de la respuesta inmune.

A nivel sistmico:
Ganglios linfticos: Los
ganglios linfticos son unas
formaciones nodulares de
tejido conectivo denso y color
blanquecino que se
encuentran intercaladas en el
trayecto de los vasos
linfticos formando las
cadenas ganglionares. Su
funcin es la de retener los
antgenos que puedan
llegar a travs de los
lquidos linfticos y
proceder a su presentacin
y procesamiento
antignico mediante la
colaboracin de los
macrfagos y los linfocitos
que lo componen.
El cerdo presenta una
circulacin linftica y
disposicin celular
diferente a la de otros
mamferos.

Esquema del ganglio linftico de cerdo en el que se puede observar que su

distribucin celular y circulacin linftica es inversa al resto de los
mamferos. La zona cortical con sus folculos linfoides y su tejido linfoide
difuso se encuentra en la zona central del ganglio, estando la zona medular
en la periferia.

La linfa penetra por la superficie cncava (vaso linftico

aferente) y sale por la superficie convexa (vaso linftico
eferente).

Histolgica y funcionalmente se observan dos

zonas bien diferenciadas en el parnquima
ganglionar: el tejido cortical y el tejido medular.
El tejido cortical se localiza en el rea central de
las unidades nodulares y en las reas
subcapsulares, rodeando al hilio eferente. Est
constituido por los folculos linfoides y el tejido
linfoide difuso. Los folculos linfoides estn a su
vez constituidos por el centro germinal formado
fundamentalmente, por linfocitos B y algunas
poblaciones de linfocitos T (CD4+). Aqu tendr
lugar la seleccin de los linfocitos B de alta afinidad
para reaccionar con el antgeno.
El tejido linfoide difuso est considerado como
una zona T dependiente. Presenta un estroma
constituido por fibras y clulas reticulares que
forman una red tridimensional donde se pueden
observar, adems de linfocitos T, macrfagos y
clulas dendrticas.
El tejido medular se distribuye por la periferia de
las unidades nodulares y alrededor del hilio
eferente. Est constituido principalmente por
elementos celulares fijos formados por fibras
reticulares y colgeno. No presenta, como en otras
especies, ni cordones ni senos medulares. Forma
un entramado uniforme y difuso con menor
permeabilidad que en otras especies. Es pobre en
linfocitos, aunque s se observan macrfagos y
clulas dendrticas.

Corte histolgico de un ganglio linftico de cerdo

(25 X) en el que se puede observar su distribucin
diferencial con otras especies animales; as, la zona
cortical (a), se localiza en el centro del ganglio con
gran presencia de folculos linfoides (b) (linfocitos B
y T CD4+) y tejido linfoide difuso (c) y la zona
medular en la periferia (d)

El bazo es un rgano linfoide secundario, localizado en la parte izquierda de la cavidad

abdominal. Tiene forma alargada y estrecha y es de color rojo brillante. La funcin de este
rgano linfoide es doble. Por un lado, hace de filtro a nivel sanguneo (los ganglios linfticos
son filtros a nivel linftico) para realizar el reconocimiento de antgenos (funcin
inmunolgica).Y por otro lado, sirve como almacn de produccin de clulas sanguneas,
principalmente eritrocitos y plaquetas (funcin hematopoytica)

Esquema del bazo.

El bazo en el cerdo presenta un

armazn formado por una
moderada cpsula de fibras
musculares lisas, de las que
parten hacia el interior unas
trabculas de fibra muscular lisa
y colgeno, que sirven de soporte
para la parte funcional del bazo,
constituida por: la pulpa
esplnica blanca y la pulpa
esplnica roja.

En este esquema se representan los diferentes componentes estructurales del bazo. La pulpa blanca, formada por los
folculos linfoides y las vainas linfoides periarteriales y la pulpa roja con sus senos venosos, cordones esplnicos y capilares

envainados. Todo ello protegido por la cpsula.

La pulpa esplnica blanca es el tejido linfoide del bazo, distribuido siempre alrededor de una
arteria o arteriola, formando folculos linfoides y vainas linfoides periarteriales. Los
folculos linfoides estn constituidos por: linfocitos (principalmente B), algunas clulas
plasmticas y clulas presentadoras de antgenos (macrfagos, dendrticas). Las vainas
linfoides periarteriales estn sin embargo constituidas por linfocitos T, encontrndose
algunos linfocitos B en las zonas ms perifricas. Una caracterstica significativa del bazo de
cerdo es, que dentro de la poblacin de linfocitos T, son mucho ms numerosas las
poblaciones CD4+ que las CD8+

Corte histolgico del bazo de cerdo

(100 X) en el que se pueden observar
la cpsula (a), la pulpa roja (b), la
pulpa blanca (c) y las trabculas (d).

La pulpa esplnica roja en el cerdo est constituida por tres estructuras diferentes: Los
cordones esplnicos, los senos venosos y los capilares envainados.
Los cordones esplnicos del cerdo estn formados por un entramado de fibras musculares
que sostienen un gran nmero de clulas libres de la circulacin sangunea como monocitos,
eritrocitos y plaquetas. La otra poblacin celular que se observa son los macrfagos fijos que
estn fijados a las fibras musculares. Los senos venosos del cerdo son conductos anchos y
anastomosados que carecen de fenestracin de la membrana basal, lo que permite que los
macrfagos esplnicos puedan realizar ms fcilmente su labor fagoctica. Los capilares
envainados son capilares discontinuos que muestran un engrosamiento en sus paredes,
denominado "elipsoide" o "vaina macrofgica periarterial" que en el cerdo presenta un gran
desarrollo. Estn constituidos por un gran nmero de macrfagos.

A nivel de las mucosas:

Tejido linfoide asociado a las mucosas. Se conoce como tejido linfoide asociado a
las mucosas el sistema inmune localizado a lo largo de las mucosas, que presenta una
relativa independencia del sistema inmune sistmico. A lo largo del intestino del cerdo se
denomina tejido linfoide asociado al aparato digestivo ("Gut associated limphoid
tissues", GALT).
El Tejido linfoide asociado a las mucosas est formado por ndulos de tejido linfoide, que
se encargan de proteger las mucosas del cerdo de los diferentes ataques de los agentes
patgenos, a nivel local . El sistema inmune de las mucosas juega un papel muy
importante, ya que en el cerdo un gran nmero de agentes patgenos utiliza las
mucosas como vas de entrada. Sus mecanismos de actuacin estn, alrededor del 80%,
mediados por las inmunoglobulinas del isotipo IgA, excepto en las tonsilas donde la
inmunoglobulina sintetizada de forma mayoritaria es la IgG, seguida de la IgA. Las
estructuras ms organizadas del GALT en el cerdo estn formadas por:
Las tonsilas

Las placas de Peyer.

Las tonsilas forman parte de los

rganos linfoides secundarios.
Debido a su situacin en el velo del
paladar, entre el tracto respiratorio y
el digestivo, forman parte del
sistema de inmunidad de las
mucosas respiratorias y digestivas.
Son de gran importancia en los
mecanismos defensivos del cerdo
frente a los agentes infecciosos.

Corte histolgico de tonsila de cerdo (25 X) en el

que se observan: El epitelio estratificado (a),
criptas (b), folculos linfoides (c)
(fundamentalmente formados linfocitos B)
rodeados por tejido linfoide difuso (d) formado
fundamentalmente por linfocitos T.

Esquema de las tonsilas de cerdo. Se observa, la distribucin

interna formada por las criptas, con su diferente apariencia
segn el corte, y los folculos linfoides, con sus centros
germinativos y el tejido interfolicular o tejido difuso.

Estn formadas por un ndulo solitario o una

agrupacin de ndulos y tejido linfoide difuso. Se
localizan en la lmina propia, asociadas
ntimamente al epitelio, que segn su localizacin
es: estratificado plano (zona orofarngea) o
pseudoestratificado en la zona nasofarngea.
La superficie de las tonsilas puede ser lisas o con
profundas invaginaciones, como en el caso de la
tonsila paraepigltica del cerdo, lo que le permite
concentrar gran cantidad de clulas linfoides en
las invaginaciones.
La estructura linfoide de las tonsilas es
semejante a la de los ganglios linfticos.
Estn formadas por los folculos linfoides con sus
centros germinativos, que son agrupaciones
circunscritas y compactas formadas por gran
cantidad de linfocitos B, que se encuentran
dentro del tejido linfoide difuso, principalmente
formado por linfocitos T. Todo ello, asociado
ntimamente al epitelio.
En las tonsilas se produce fundamentalmente
IgG, seguido de IgA

Placas de Peyer. Son agrupaciones de tejido linfoide no encapsulado, y localizadas en la

submucosa del intestino. En el cerdo se pueden diferenciar por su tamao y localizacin dos

TULO 1

tipos:

Placas de Peyer yeyunales: de pequeo tamao: yeyuno y proximal de leon.

Placa de Peyer ileocecal. leon terminal.

Histolgica y funcionalmente se diferencia en
las placas de Peyer cuatro zonas:
Los folculos linfoides.
La corona.
La regin interfolicular.
La cpula.
Los folculos linfoides: Estn
localizados en la submucosa del
intestino. Presentan gran actividad
lifopoytica fundamentalmente a nivel de
los centros germinativos.

La corona: Es la zona de unin entre el

folculo linfoide y la cpsula, formada por
linfocitos T y B.

Corte histolgico de la placa de Peyer (25 X). Se

puede observar los folculos linfoides con sus
centro germinativo (a) la corona (b) la regin
interfolicular (c).

La regin interfolicular: formada por

vnulas postcapilares que favorecen la
circulacin de los linfocitos.
La cpula: Es la zona incorporada en la
mucosa del intestino que cubre los
folculos linfoides. Est formada por
linfocitos T sobre todo CD4+, linfocitos B,
macrfagos y clulas dendrticas. Al nivel
de la cpula, la mucosa del intestino se
modifica y desaparecen las vellosidades
y criptas, el epitelio no posee clulas
caliciformes y aparecen unas clulas M
que tienen misin de presentacin
antignica.

Placas de Peyer yeyunales: Son placas de pequeo tamao (alrededor de 25 a 35)

distribuidas a lo largo del yeyuno y porcin proximal del leon y que persisten durante toda la
vida del cerdo. Estn formadas por linfocitos B y T.

Las Placas de Peyer ileocecal: Son de grandes dimensiones, estn localizadas en la

porcin terminal del leon e involucionan durante el primer ao de vida del animal. Su
composicin celular tambin difiere de la de las placas yeyunales. As, en las ileocecal
existe una proporcin de linfocitos B diez veces superior que de linfocitos T.
Es tambin importante destacar que a lo largo del tracto digestivo del cerdo, sobre todo
en el estmago y en el intestino grueso, tanto al nivel de la mucosa como de la
submucosa, pueden observarse folculos linfoides aislados, cubiertos por un epitelio
similar al de las Placas de Peyer y cuya funcin parece ser tambin similar.

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CAPTULO 2

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Captulo 1

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CLULAS DEL SISTEMA INMU

PORC

Las clulas que forman el sistema inmune porcino son muy variadas tanto en
su estructura como en su funcin. Todas proceden de una clula madre
pluripotencial de la mdula sea, de la que se diferencian dos lneas
distintas:

La LNEA LINFOIDE. De la que derivan los diferentes tipos de linfocitos porcinos.

Esta lnea es la responsable de llevar a cabo las principales funciones que caracterizan
al sistema inmune y que le permite reaccionar frente a molculas extraas de forma
especfica, as como recordarlas para una futura posible invasin (memoria). De esta lnea
derivan:

Los LINFOCITOS B, producidos en la

mdula sea y responsables de la
produccin de los anticuerpos.
Inmunidad humoral.

Los distintos tipos de LINFOCITOS

T, que derivan del timo y son los
responsables de la colaboracin para
la produccin de anticuerpos y de los
mecanismos de la respuesta de
Inmunidad celular.

La LNEA MIELOIDE. De la que derivan las clulas denominadas accesorias o

presentadoras de antgenos que aunque no responden por mecanismos de especificidad,
forman parte de la inmunidad natural o innata, y juegan un papel esencial en la iniciacin de
la inmunidad adquirida. Las clulas accesorias incluso pueden actuar como clulas
efectoras en algunos mecanismos inmunitarios.

Este grupo de clulas presentadoras de antgeno est formado por:

MONOCITOS y MACRFAGOS.

GRANULOCITOS:

EOSINFILOS.

NEUTRFILOS.

BASFILOS.

CLULAS DENDRTICAS.

Siendo las funciones principales de estas clulas:

Fagocitosis
Presentacin de
antgenos

Produccin de
linfocinas

En este captulo repasaremos: los linfocitos porcinos, sus caractersticas, sus

funciones y los distintos mtodos actualmente disponibles para su estudio.
CAPTULO 2

Captulo 1

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CARACTERSTICAS DE LOS
LINFOCITOS PORCINOS

Los linfocitos porcinos se producen en los rganos linfoides primarios en

grandes proporciones. En la mdula sea se producen los linfocitos B,
responsables de la respuesta humoral y en el timo los linfocitos T,
responsables de la respuesta celular. Parte de estos linfocitos emigran a los
rganos linfoides secundarios para formar las zonas T o B dependientes.
Estas clulas son las responsables de las tres principales caractersticas del
sistema inmune:

DIFERENCIACIN DE LO PROPIO, ESPECIFICIDAD Y MEMORIA.

Desde un punto de vista morfolgico, por

microscopa ordinaria, no se encuentran
diferencias entre los linfocitos T de los B. Ambos
linfocitos son clulas de entre 7 a 9 micras de
tamao, presentan un ncleo voluminoso y
escaso citoplasma. Por microscopa
electrnica de barrido, existen algunas
diferencias notables. As, los linfocitos T
presentan una superficie suave y plana,
mientras que los linfocitos B presentan una
superficie con mltiples proyecciones, que
corresponden a las inmunoglobulinas de
superficie.

Foto de Linfocitos T y B obtenida mediante

microscopa electrnica de barrido

A lo largo de las ultimas dcadas, se han

diseando diferentes marcadores de
superficie para diferenciar las distintas
poblaciones de linfocitos, aunque ha
sido con el desarrollo de los anticuerpos
monoclonales (AcM), producidos frente a
las diferentes clulas linfocitarias
porcinas, los que han permitido diferenciar
las distintas poblaciones y agruparlas
segn sus antgenos de membrana y su
funcin.

Observacin de un linfocito teido con Giemsa, observado

mediante microscopa ordinaria

Los AcM han permitido tambin definir a una tercera poblacin linfocitaria, denominada,
hasta hace poco, como clulas nulas, por no presentar los marcadores tradicionales de
los linfocitos T o B (formacin de rosetas con los eritrocitos de carnero e inmunoglobulinas de
superficie, respectivamente). Estas clulas nulas, que en el cerdo pueden representar entre
un 9 a un 19% de los linfocitos circulantes, son realmente una subpoblacin de linfocitos T
(linfocitos T -)

Principales receptores utilizados

tradicionalmente para diferenciar los
linfocitos T de los B
Linfocitos B:

Linfocitos T:

Inmunoglobulinas de
superficie.
Rosetas con eritrocitos de
carnero.
Esterasa positiva.

Linfocitos T de cerdo formando

rosetas con eritrocitos de carnero.

Los linfocitos B de cerdo se producen en la

mdula sea en una proporcin aproximada de
entre doscientos a cuatrocientos millones diarios,
lo cual demuestra la enorme capacidad de
respuesta del sistema inmune. Recordad que un
linfocito B produce un anticuerpo especfico (1
clula = 1 tipo de anticuerpo). En sangre
perifrica, los linfocitos B del cerdo suponen entre
el 8 al 18% de los linfocitos totales. La membrana
de los linfocitos B est formada por un gran
nmero de molculas, muchas de las cuales se
han podido ir estudiando gracias a los AcM. De
entre ellas, es importante destacar, la conocida
como complejo BcR (B Cell Receptor) o receptor
de clulas B.
Esquema de un linfocito B

El BcR est formado por varias cadenas. Unas variables (son inmunoglobulinas), en las
que cada linfocito B presenta variaciones segn el tipo de inmunoglobulina (IgM e IgG
fundamentalmente) o (IgA e IgE) o segn el tipo de antgeno. Las otras dos cadenas son
invariables (formadas por dos cadenas y ), y comunes a todos los linfocitos B. La misin
de las cadenas variables, que realmente son inmunoglobulinas, es la de reaccionar con el
antgeno especfico, mientras que las cadenas invariables sirven para transmitir la seal
al interior de la clula para la iniciacin de la produccin de anticuerpos.
Los linfocitos B, por tanto caracterizan por
presentar inmunoglobulinas en su
superficie, fundamentalmente del tipo IgM
e IgG, lo que les permite reaccionar con
el antgeno en su forma nativa (los
linfocitos T no pueden reaccionar con
el antgeno en su forma nativa)
(Captulo 3). La mayora de los antgenos
que reaccionan con los linfocitos B son de
carcter proteico, aunque tambin pueden
reaccionar con polisacridos. La
iniciacin de la reaccin con el

antgeno siempre se realiza a travs de

las inmunoglobulinas de membrana
(seal BcR), pero la produccin de los
anticuerpos necesita de la
colaboracin de los linfocitos CD 4+ en
la mayora de los casos. (captulo 3). Los
antgenos que necesitan de esa
cooperacin con CD 4 se denominan:
Antgenos T dependientes (son la gran
mayora). Otros antgenos como ciertos
lipopolisacridos o polisacridos
bacterianos, no necesitan de los linfocitos
T para la estimulacin y produccin de
anticuerpos. Este tipo de antgenos se
denomina: Antgenos T
independientes.

Detalle del complejo BcR de los linfocitos B

Mediante los AcM se han podido diferenciar otros marcadores de linfocitos B. Estos
marcadores se han agrupado en los denominados cluster de diferenciacin (CD), en virtud
a sus diferencias antignicas y funcionales.

PRINCIPALES CD DESARROLLADOS
PARA EL ESTUDIO DE LINFOCITOS B

CD1: El antgeno CD1 que presenta gran homologa con el SLA I, se

observa en los linfocitos B (sIg+) de sangre perifrica en una proporcin del
30 al 60% y en los linfocitos T de la zona cortical del timo alrededor del 60%
de la totalidad.

CD 21: Se observa en la membrana de los linfocitos B maduros.

CD 45: Se observa en linfocitos B y en algunas subpoblaciones de

linfocitos T.

SWC7: Se localiza en los linfocitos B situados en los rganos linfoides, ya

que en los linfocitos de sangre perifrica no aparece.

Un linfocito B estimulado, tanto por antgeno T

dependientes como por T independientes, se
transforma en un clon de clulas plasmticas que
producirn y segregarn anticuerpos en gran
cantidad. Estos Ac son especficos frente al
eptope que indujo la respuesta inmune. Esta
respuesta inmune, mediada solo por anticuerpos,
se denomina: respuesta humoral. El linfocito B
estimulado o clula plasmtica presenta una
morfologa diferente a la originara del linfocito B
(ncleo grande y pequeo citoplasma) y ms tpica
de una clula factora con un ncleo pequeo
y un gran citoplasma. Estas clulas se localizan
fundamentalmente en los ganglios linfticos,
pulpa roja del bazo, mdula sea y mucosas
intestinales y respiratorias. In vivo su vida
media es muy corta de 2 a 3 das siendo in vitro
an menor, llegando a sobrevivir solamente horas.
Esquema de la estimulacin de un linfocito B,
transformacin en clula plasmtica y la produccin
de anticuerpos.

Los linfocitos T de cerdo se producen

Esquema de la formacin de rosetas en linfocitos T de cerdo

con eritrocitos de carnero.

en el timo y en menor proporcin en las

zonas T dependientes de los rganos
linfoides secundarios. A diferencia con
los linfocitos B, no presentan
inmunoglobulinas en su superficie, pero
forman rosetas con los eritrocitos de
carnero. Los linfocitos T juegan un papel
fundamental en la respuesta inmune, por
un lado en los mecanismos de
presentacin de antgenos a los
linfocitos B para la produccin de
anticuerpos y por otra parte, como
responsables de la inmunidad celular
(respuesta inmune mediada por clulas
no por anticuerpos).

En la membrana de los linfocitos T, adems del SLA, se pueden diferenciar dos tipos
distintos de receptores especficos para el antgeno, denominados TcR de las palabras
inglesa T cell receptor. Estos receptores son:
Receptor (TcR ). Representan entre el 40 al 60% de los linfocitos de sangre
perifrica. Los LINFOCITOS T son: Linfocitos cooperadores CD4+ y Linfocitos
Citolticos CD 8+
Receptor (TcR ). Presente en la mayora de las clulas denominadas

anteriormente clulas nulas. En la actualidad son LINFOCITOS T

Estos receptores estn formados por dos

cadenas pesadas y ligeras, semejantes a las
cadenas de las inmunoglobulinas. Su funcin es
la de reaccionar con los antgenos que le son
presentados a travs de las clulas
presentadoras de antgeno y asociadas al SLA.
Esquema del complejo TcR de los linfocitos T porcinos.
Formado por sus cadenas pesadas y ligeras, compuestas por
una parte variable, que reacciona con el antgeno, y una parte
constante

Como en el caso de los linfocitos B, gracias a la produccin de AcM frente a los linfocitos
porcinos, se han podido diferenciar varias subpoblaciones de linfocitos T de cerdo,
agrupndose en los denominados cluster de diferenciacin (CD) en virtud de sus
diferencias antignicas y funcionales.
Gracias a estos marcadores, se ha podido
comprobar que el cerdo presenta algunas
diferencias con otras especies animales y con el
hombre. As, en el cerdo aparece una poblacin de
linfocitos doble positivos a CD4+ y CD8+
(CD4+CD8+) que aumenta su proporcin con la
edad del animal. As, cuando el animal tiene una
semana de edad el porcentaje de CD4+CD8+
representa menos del 2% de los linfocitos y a los 3
aos de edad supone alrededor del 30%. La
funcin de estos linfocitos, doble positivo, se
crea en un principio ligada a las clulas
memoria, sin embargo ltimamente se ha
relacionado con la actividad cooperadora de
los linfocitos T en las infecciones primarias.
As, parece que existen dos poblaciones de
clulas cooperadoras, las CD4+CD8- y las
CD4+CD8+. Ambas poblaciones actan en la
cooperacin celular en la respuesta primaria al
menos in vitro, mientras que en la respuesta
secundaria parecen actuar solamente las
CD4+CD8+. Por otra parte, se sabe que estas
poblaciones celulares doble positivas, adems de

PRINCIPALES CD
DESARROLLADOS PARA EL
ESTUDIO DE LOS
DIFERENTES LINFOCITOS T
CD 1: Se encuentra en el 60% de los
linfocitos T de la zona cortical del timo.
Tienen gran homologa con el SLA I.

CD 2: Presente en la mayora de los

linfocitos T con receptores TcR
(LINFOCITOS T ). Los linfocitos T
con TcR (LINFOCITOS T ) o son
negativos a CD2- o lo expresan en
porcentajes muy bajos (3 a 6%). Estos
linfocitos (), llamados anteriormente
como clulas nulas, son identificados

aumentar con la edad, se localizan en

proporciones importantes en las tonsilas (50%)
y en los ganglios (30%) del animal adulto. En
cuanto a los linfocitos citotxicos, se pueden
diferenciar dos subpoblaciones de CD4-CD8+ en
virtud a la expresin del CD 6. As, los linfocitos
que expresan el antgeno CD 6- est relacionados
con la citotoxicidad espontnea mientras que los
CD 6+ SLA I, lo estn con la citotoxicidad de
clulas infectadas por virus.

por el anticuerpo monoclonal SWC6

CD 3: Presente en linfocitos
relacionados con la activacin y
supresin celular. De gran importancia
en los xenotrasplantes.

CD 4: Presentes en los linfocitos T

cooperadores y en los responsables de
la respuesta de hipersensibilidad
retardada. Los linfocitos CD4+
reconocen el SLA II.

CD 6: Presente en las clulas ligadas

a la citotoxicidad.

CD 8: Se localizan en los linfocitos T

responsables de la citotoxicidad. Los
linfocitos CD 8+ reconocen el SLA I.

CD 16: Para diferenciar clulas NK.

Por ltimo, otra peculiaridad de los linfocitos T porcinos, es la expresin del SLA II en su
membrana. A diferencia del hombre o del ratn, cuyos linfocitos T no activados, no
presentan el antgeno de histocompatibilidad de clase II.
CAPTULO 2
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LOS OTROS LINFOCITOS

Adems de los linfocitos T -, anteriormente denominados clulas nulas y

que realmente son una subclase de linfocitos T, existen otros linfocitos, de gran
importancia en la respuesta inmune natural o innata en la especie porcina,
conocidos como clulas NK.

Las clulas NK presentan una actividad

citotxica frente a clulas infectadas por
virus y clulas tumorales, aunque no las
reconocen por un estmulo antignico
especfico (las NK no expresan TcR), ni
est restringida por el SLA, como ocurre
con los linfocitos T (CD 8). Sus
mecanismos de activacin se inician al
reconocer, de forma natural, clulas que
no expresan adecuadamente el SLA,
como ocurre en la mayora de las clulas
infectadas por virus. Por otra parte, liberan
mediadores solubles (Citocinas), tales
como: Factor de Necrosis Tumoral (TNF),
Interfern , lo que permite la estimulacin
de diferentes mecanismos linfocitarios.
Esquema de una clula NK expresando el receptor para
la fraccin Fc de las inmunoglobulinas.

En la especie porcina, las clulas NK son linfocitos pequeos o medianos agranulares,

a diferencia de la especie murina y humana en las que las clulas NK son linfocitos grandes y
granulares. Las clulas NK porcinas reaccionan con los anticuerpos monoclonales frente
a linfocitos T porcinos de los grupos CD 2 y CD 8, pero no con los CD 3, CD 5 y CD 6.
Adems, la reaccin con CD 8 es muy inferior a la de los linfocitos T citotxicos CD 8+. El
mejor anticuerpo monoclonal para el estudio de las clulas NK porcinas corresponde al
grupo CD 16.
Las clulas NK intervienen en la
respuesta inmune natural o innata. Estas
clulas se encuentran en mayor proporcin
en los animales jvenes, disminuyendo a
medida que el animal se va haciendo adulto,
lo que indica que el papel de las clulas
NK parece estar ms ligado a los
mecanismos de respuesta natural o
innata y no a los mediados por
estimulacin antignica especfica
(inmunidad adquirida)

CARACTERSTICAS DE LAS
CLULAS NK
Receptor para Fc de
Inmunoglobulinas
Liberacin de Citocinas: TNF
e If
No expresa TcR
CD para NK: CD 16
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CMO SE ESTUDIAN

CLULA

Como se indicaba al principio de este captulo, no es posible diferenciar los

linfocitos T de los B por microscopa ordinaria, ni en la sangre ni en los
rganos linfoides, aunque s se observaban algunas diferencias por
microscopa electrnica de barrido. No obstante, se disponen de varios
mtodos que permiten diferenciar y cuantificar los linfocitos, sus diferentes
subpoblaciones e incluso su capacidad de responder a distintos antgenos.
Los mtodos para el estudio de los linfocitos, ms utilizados en la actualidad,
los podemos agrupar en:
MARCADORES Y RECEPTORES DE MEMBRANA
ANTGENOS DE MEMBRANA
PRUEBAS FUNCIONALES

1. MARCADORES Y RECEPTORES DE MEMBRANA. Estos mtodos han sido

tradicionalmente utilizados para diferenciar y cuantificar poblaciones de linfocitos B
y T. Con la disponibilidad de los anticuerpos monoclonales, frente a las distintas
poblaciones linfocitarias porcinas, los mtodos tradicionales se utilizan cada vez menos.
Estos marcadores convencionales, estn basados en las caractersticas especficas
de ciertos receptores de membrana, presentes en ambas poblaciones de linfocitos.
Los principales marcadores son:

Para los linfocitos B:

En la membrana de los linfocitos B se encuentran inmunoglobulinas de superficie que pueden
ser detectadas con un suero o inmunoglobulina antinmunoglobulinas porcinas marcados con
fluorescencia o mediante un anticuerpo monoclonal, tambin marcado con isocianato de
fluorescena, contra cada isotipo de inmunoglobulinas. En el microscopio de fluorescencia se
puede observar que en la membrana aparece una reaccin fluorescente positiva.

Observacin, por microscopa de fluorescencia, de las

inmunoglobulinas de superficie de un linfocito B

Esquema de la tcnica para la observacin de las

inmunoglobulinas de superficie de un linfocito B. Un suero
policlonal o monoclonal (a) marcado con isocianato de
fluorescena (b) reacciona con las inmunoglobulinas porcinas de
la membrana.

Para los linfocitos T.

Rosetas con los eritrocitos. Los linfocitos T de
cerdo, como los de otras especies, presentan
la caracterstica de formar rosetas cuando se
unen a los eritrocitos de carnero (a). Se
pueden cuantificar los linfocitos mediante el
marcaje con naranja de acridina y la posterior
observacin al microscopio de fluorescencia y
luz ordinaria a la vez. Los linfocitos T y B se
marcan con la naranja de acridina, presentando
los linfocitos T rosetas mientras que los B se
marcan con la naranja de acridina pero no
forman rosetas.
Principales receptores utilizados
tradicionalmente para diferenciar los
linfocitos T de los B
Linfocitos B:

Inmunoglobulinas
de superficie

Rosetas con
eritrocitos de
carnero

Esterasa positiva.

Linfocitos T:

Es importante destacar que otro tipo de rosetas se puede formar

en clulas porcinas. En la foto superior se puede observar la
formacin de rosetas con eritrocitos porcinos en macrfagos
infectados con el virus de las Peste porcina Africana (b). Este
fenmeno conocido como hemoadsorcin no puede ser
confundido con la formacin de rosetas con eritrocitos de carnero
de los linfocitos T porcinos (a).

2. ANTGENOS DE MEMBRANA
Mediante anticuerpos monoclonales se pueden marcar las diferentes poblaciones linfocitarias
porcinas. Los mtodos ms utilizados son:

2.1. Anlisis por citometra de flujo.

2.2. Inmunohistoqumica.

2.1. Anlisis por citometra de flujo.

El citmetro de flujo es un aparato que
permite caracterizar e incluso separar las
diferentes poblaciones linfocitarias in vitro
mediante el uso de anticuerpos
monoclonales marcados con fluorescena
frente a los marcadores de superficie
especficos de cada subpoblacin que se desee
estudiar. La citometra de flujo permite hoy
da poder valorar varios fluorocromos a la
misma vez, pudindose por tanto estudiar
varias subpoblaciones celulares en la misma
muestra de linfocitos. Para llevar a cabo el
estudio, se puede partir de sangre completa
(los modernos citmetros permiten trabajar con
sangre completa) o de la poblacin linfocitaria
separada de la sangre. Las clulas, sobre las
que se adicionan los monoclonales (se pueden
valorar varios a la vez) frente al marcador
objeto de estudio (CD2, CD4, CD8, etc.) pasan

Fotografa de uno de los citmetros de flujo utilizados para el

estudio de poblaciones de linfocitos porcinos. Se puede observar

a travs de un haz de un lser que detecta su

capacidad para dispersar la luz (tamao de
las clulas) y la fluorescencia que emiten
(tipo de clula). Las mediciones obtenidas se
indican en porcentajes de cada poblacin.

la unidad bsica de lectura y el sistema de procesado de datos.

2.2. Inmunohistoqumica. Utilizando

anticuerpos monoclonales, marcados con
fluorescencia o con peroxidasa, frente a los
diferentes linfocitos porcinos, se puede
valorar la situacin de estas clulas en cualquier
tejido. Incluso utilizando dos anticuerpos
monoclonales, cada uno frente a una poblacin
linfocitaria distinta, y cada uno marcado con una
enzima diferente (doble marcaje) (peroxidasa
fosfatasa alcalina) se pueden estudiar dos
poblaciones celulares a la vez en cualquier tejido.
Estas tcnicas han sido de gran importancia para
el estudio de la patogenia de varias
enfermedades infecciosas del ganado porcino.
As por ejemplo, se pudieron estudiar las
poblaciones linfocitarias porcinas que
estaban o no afectadas por el virus de la Peste
porcina africana (VPPA) en diferentes
rganos, as como el VPPA afectaba la
expresin de los SLA, en los macrfagos
infectados. En la actualidad estas tcnicas son
de gran utilidad para conocer las poblaciones
afectadas en las diferentes infecciones vricas y
llevar a cabo estudios de patogenia.

Estudio de doble marcaje (marrn-azul) para la localizacin

de infeccin con el VPPA (marrn) en clulas marcadas con
un antgeno monoclonal anti macrfago porcino (azul). Se
puede observar como no todas las clulas que reaccionan
con el AcM anti macrfago (azul) estn infectadas, aunque
si la gran mayora.

3. PRUEBAS FUNCIONALES
Estos mtodos de estudios se basan en valorar la capacidad que tanto los linfocitos T como los B
tienen para reconocer a un antgeno determinado. Las tcnicas ms utilizadas son:

Estimulacin blstica o Blastognesis

La actividad citotxica de los linfocitos T (CD 8+)

ESTIMULACIN BLSTICA O
BLASTOGNESIS.

La estimulacin blstica o blastognesis. La

utilizacin de la transformacin linfocitaria o
blastognesis es actualmente una de las
tcnicas ms precisas y difundidas para el
estudio de la capacidad de estimulacin
especfica y no especfica de los linfocitos
in vitro. Esta tcnica se basa en la capacidad
que los linfocitos tienen para responder frente a
un antgeno (respuesta especfica) que por
vacunacin o por sufrir una infeccin, ha
inducido linfocitos memoria. Estos linfocitos al
estar de nuevo en contacto con el antgeno
inducen una transformacin blstica. Esta
estimulacin blstica tambin puede ser
inducida de forma no especfica gracias a la
capacidad de los linfocitos de reaccionar con
diferentes tipos de lectinas o mitgenos. Las
lectinas inducen una estimulacin blstica de
tipo inespecfico tanto en los linfocitos B
como en los T.

Esquema de la estimulacin blstica o blastognesis.

El mtodo de la blastognesis consiste, en

resumen, en cultivar los linfocitos de un animal
con los antgenos que quieren ser evaluados
o estudiados y con varios mitgenos que se
utilizan como control de la inmunoproliferacin
(estimulacin no especfica). La transformacin
blstica especfica se mide por la capacidad
que tiene el antgeno de inducir
inmunoproliferacin.
Tras un tiempo de incubacin determinado se
aade un istopo radioactivo (timidina-tritiada)
al medio de cultivo donde estn los linfocitos. Si
Fotografa de un equipo para la recogida de clulas cultivadas
hay estimulacin blstica (inmunoproliferacin) la
en placa ("Harvester"). Las clulas quedan en el papel de filtro.
Estos filtros se pasarn al contador de centelleo lquido o de
timidina se incorporar a los nuevos linfocitos,
partculas .
quedando por tanto las clulas marcadas
radiactivamente.
Mediante un recogedor especial de clulas (Harvester) se toman las clulas y el
sobrenadante de cada pocillo y se pasan por un filtro donde slo quedaran las clulas. Estos
filtros sern posteriormente llevados a un contador de centelleo lquido o de partculas .
Cuanta ms incorporacin de timidina-tritiada mayor estimulacin blstica.

LA ACTIVIDAD CITOTXICA DE LOS LINFOCITOS

T (CD 8+)

Esquema para los estudios de citotoxicidad en sus

diferentes formas de induccin: Por linfocitos CD
8+, por clulas NK y por inmunoglobulinas que
activan complemento. Su valoracin se realiza por
liberacin del cromo 51 en un contador de
partculas radioactivas al ser destruida la clula
diana.

La actividad citotxica de los linfocitos T (CD 8+)

frente a una clula diana se puede estudiar,
midiendo la capacidad de destruccin, que un
determinado nmero de linfocitos T tienen para
destruir un determinado nmero de clulas
diana, al estar ambas poblaciones en contacto.
Hay varios mtodos para poder valorar el porcentaje
de lisis o muerte celular que expresan las clulas
diana, aunque el ms utilizado por su precisin,
sensibilidad y reproducibilidad, es el de la liberacin
de cromo 51 procedente de las clulas diana.
Este mtodo consiste, brevemente, en lo siguiente:
Las clulas diana (que expresan los antgenos
determinados en su membrana) son marcadas con
Cromo 51 y puestas en contacto en una proporcin
adecuada con las clulas efectoras (linfocitos T).
Tras incubar ambas poblaciones celulares
conjuntamente por un periodo de incubacin
determinado, se centrifugan y seguidamente una
parte del sobrenadante resultante es medido
mediante un contador de partculas gama para
conocer el porcentaje de cromo 51 liberado al medio.
A mayor cantidad de cromo liberado mayor
actividad citotxica.

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Bibliografa

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ANTGENOS

HISTOCOMPATIBILIDAD PORCIN
(S

En todos los mamferos existen un conjunto de genes, que siguen las leyes de
Mendel, que codifican protenas que se expresan en la membrana de las
clulas y cuyo polimorfismo determina la aceptacin o el rechazo a un
injerto. Estos genes ayudan al sistema inmune a diferenciar lo propio de
lo extrao.
DISTRIBUCIN DEL SLA
PORCINO.

El grupo de estos genes se denominan:

SLA I: Todas las clulas con

ncleo.
SLA II: Monocitos, macrfagos,
clulas dendrticas, linfocitos B
SLA II: No est en las clulas

Complejo principal de
histocompatibilidad, de la traduccin de
los trminos ingleses Mayor
Histocopatibility Complex (MHC). Estos
genes juega un papel fundamental, no
slo en la respuesta inmune frente a los
injertos o transplantes, sino tambin en el
control de la presentacin antignica y en
el desarrollo de la respuesta inmune. Las
molculas que codifican los genes MHC
se unen a las protenas extraas para el
animal para marcarlas y permitir que el
sistema inmune las pueda reconocer y
actuar frente a ellas.

Todas las clulas porcinas, excepto los eritrocitos, presentan en su superficie unas protenas,
cuyo polimorfismo determina que exista o no rechazo entre los rganos transplantados de
dos animales diferentes. Estas protenas del Complejo principal de histocompatibilidad
(MHC), en el cerdo, se denominan SLA, siglas que provienen de las palabras inglesas
Swine Leucocyte Antigens. Se describieron por vez primera a principios de los aos 70,
al observarse una correlacin entre el rechazo agudo en el transplante y un grupo de
antgenos expresados en la superficie de los linfocitos perifricos. Los genes responsables
de la codificacin de los SLA se encuentran localizados en el cromosoma 7 con una
dimensin aproximada de 2 Mb, de los que alrededor de 70 genes han sido ya
caracterizados. Estn ligados a los genes que codifican para los sistemas que J y C. Al igual
que en otras especies animales, en el cerdo se han descrito tres antgenos de
histocompatibilidad en funcin a su estructura qumica, su distribucin tisular y su funcin,
denominados como:

SLA I

SLA II

Los antgenos de clase I y II son protenas

integradas en la membrana celular. Su
estructura la forman: Una regin
extracelular, un segmento que atraviesa la
membrana y una pequea parte que
penetra en el citoplasma.

SLA III

Los antgenos de la clase I y III estn separados por el centrmero del cromosoma 7 de los
de clase II, presentando una relacin espacial semejante a los MHC humanos.

Los antgenos de clase I se expresan

en la superficie de todas las clulas con
ncleo con la nica excepcin de las
neuronas y los trofoblastos. Segn se van
formando en la clula infectada (infeccin
viral), se enlazan con las protenas virales
(antgenos) que se estn sintetizando,
formando un complejo SLA I - Antgeno que
se expresa en la membrana de la clula
infectada. Este complejo ser reconocido
por un determinado linfocito T, el CD 8+ o
linfocito T citotxico, que destruir la clula
infectada. La presentacin de antgenos en
clulas infectadas a los CD8+, es una de
sus funciones principales de los SLA I.

Los antgenos de la clase I estn formados

por un heterodmero compuesto por dos
cadenas: una pesada denominada a de 45
kd de peso molecular y extremadamente
polimrfica y codificada por genes del SLA.
La otra cadena es ligera de peso molecular
inferior (12 kb) denominada B, no est
codificada por genes SLA y no es
polimrfica. Cada haplotipo del SLA codifica
2 o 3 loci clase I, denominados, al igual que
en la especie humana, como : A, B y C con
un total de entre 7 a 10 genes diferentes. Las
diferencias funcionales de los genes clase I
se pueden definir serolgicamente,
habindose identificado ms de 40 alelos
diferentes del SLA I

Los antgenos de clase II se expresan, en el cerdo, de forma ms restringida. Se

encuentran en los linfocitos B, las clulas presentadoras de antgenos y en varias
subpoblaciones de linfocitos T, estos ltimos tanto si estn activados como sin estarlo

(particularidad de la especie porcina). La funcin del SLA II es tambin la presentacin de

antgenos a los linfocitos T CD4+, pero en este caso, mediante las clulas fagocticas o
presentadoras de antgenos, las cuales procesan los antgenos por degradacin mediante
enzimas y no por infeccin celular como en el caso de los SLA I. Las molculas del agente
capturado por estas clulas y degradadas en pequeas partculas, son asociadas a los SLA y
expresadas en la membrana de la clula formando un complejo: SLA II Antgeno. En este
caso el linfocito T que reconocer al mencionado complejo ser el CD4 o linfocito T
cooperador. Tambin el linfocito B expresa SLA II. (captulo 3)

Los antgenos de clase II estn

representados por los loci: SLA-DR y
SLA-DQ. Los antgenos de clase II estn
formados por dos cadenas de
glicoprotenas denominadas y que
presenta un peso molecular de: 33 a 35 kb
la cadena y de 27 a 29 la cadena .
Ambas cadenas estn codificadas por
genes del SLA y que presenta un peso
molecular de: 33 a 35 kb la cadena alfa y de
27 a 29 la cadena B. La familia SLA est
formada por alrededor de 10 genes
diferentes.

Genes del SLA II

1 SLA-DRA
2 SLA-DRB
1 o 2 SLA-DQA
2 o 3 SLA-DQB
1 SLA-DPA
1 SLA-DPB

El SLA III codifica:

Los genes de clase III: A diferencia de

Factores de complemento: C4 y C2
21-Hidroxilasa
Factor de Necrosis Tumoral
.

los SLA I y SLA II, codifican protenas que

no se encuentran en la superficie de las
clulas sino en la sangre. As varios de los
componentes del complemento son
codificados por el SLA III, interviniendo
adems, en otras acciones del sistema
inmune menos especificas, como la
seleccin de factores de necrosis tumoral.

Los antgenos del SLA regulan la respuesta inmune frente a un gran nmero de agentes
patgenos, jugando un papel fundamental en los mecanismos de presentacin
antignica.
EL RECONOCIMIENTO DE LOS ANTGENOS POR LOS LINFOCITOS SE REALIZA POR
LA ASOCIACIN A LOS SLA.
CAPTULO 2

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CAPTULO 3

Captulo 2

Bibliografa
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Temario del curso

Temario del curso

LAS OTRAS
CLULAS

En la respuesta inmune, adems de los linfocitos T y B, intervienen otras clulas

denominadas: clulas accesorias. Estas clulas realizan una gran variedad de
funciones y juegan un papel muy importante en la presentacin y eliminacin
de los antgenos. Las clulas accesorias, derivadas de la lnea mieloide e
intervienen tanto en la respuesta inmune natural o innata como en la adquirida,
Dentro de este grupo de clulas, se encuentran:

LOS MACRFAGOS
LOS GRANULOCITOS
Neutrfilos
Basfilos

Eosinfilos

CLULAS DENDRTICAS

PAPEL DE LAS CLULAS FAGOCTICAS.

Dentro de las clulas fagocticas se

pueden diferenciar dos grupos de clulas:
1. Los monocitos-macrfagos, que
pueden fagocitar de forma repetida
y que, junto con las clulas
dendrticas y los linfocitos B, forman
parte del exclusivo grupo de las
clulas presentadoras de
antgenos (CPAg).
2. Los granulocitos: neutrfilos,
basfilos y eosinfilos que son
clulas fagocticas rpidas, pero no
de forma repetitiva. No presentan
antgenos. (no expresan SLA II)

Fotografa de la superficie de un macrfago, obtenida por

microscopa electrnica de barrido.

Los monocitos-macrfagos. Son unas

Esquema de la estructura de un macrfago.

clulas grandes, de alrededor de 15 m de

dimetro, con gran citoplasma y ncleo nico,
que puede ser: redondo, arrionado o lobulado.
En el citoplasma se puede observar un aparato de
Golgi muy desarrollado, el retculo endoplsmico
rugoso, mitocondrias y gran cantidad de
lisosomas, muy ricos en enzimas hidrolticas,

Los monocitos-macrfagos son

conjuntamente con las clulas dendrticas y
los linfocitos B, las nicas clulas
porcinas que expresan en su superficie
los antgenos de histocompatibilidad SLA
II y por tanto, las nicas clulas capaces de
poder presentar antgenos a los linfocitos
cooperadores CD4 +. Este grupo celular, se
conoce como: Clulas Presentadoras de
Antgenos (CPAg) o (APC) de las palabras
inglesas "Antigen Presenting Cels".

proteasas y lipasas; lo que indica su gran

capacidad para sintetizar y secretar protenas.
Provienen de la lnea mieloide, diferencindose,
primero como promonocitos, en la mdula sea,
transformarse en la sangre perifrica, en
monocitos, y por ltimo en macrfagos, en
diferentes rganos.

CLULAS PRESENTADORAS DE
ANTGENOS:
FAGOCTICAS:
Para la diferenciacin y estudio de los monocitos-macrfagos se utilizan, tambin en la
actualidad, los anticuerpos monoclonales. En el ltimo simposium de diferenciacin de clulas del
sistema inmune porcino, celebrado en 1998, se definieron tres anticuerpos monoclonales para
estudiar macrfagos porcinos, que se denominaron como SWC de las palabras inglesas Swine
Workshop Cluster ms un nmero. As, actualmente se utilizan los: SWC1 y SWC9 que
diferencian fundamentalmente monocitos y macrfagos y el SWC3 que reaccionan tanto con
monocitos como con macrfagos diferenciados y con granulocitos.
ANTICUERPOS MONOCLONALES PARA EL ESTUDIO DE MACRFAGOS Y
GRANULOCITOS.
SWC1

Recientemente, y gracias a estos

marcadores, se ha podido determinar que el
monocito es SCW1+SWC9- mientras que, al
transformarse en macrfagos se convierten
en: SWC1-SWC9+. Los estudios en sangre
perifrica de los monocitos se pueden
realizar por citometra de flujo, mientras que
el estudio en tejidos se utiliza las tcnicas de
inmunohistoqumica (cmo se estudian
las clulas?).

SWC9

SWC3

LOS MACRFAGOS SE ENCUENTRAN EN

UN GRAN NMERO DE RGANOS.

Hgado: Clulas de Kuffer

Tejido seo: Osteoclastos
Tejido nervioso: Clulas de microgla

Los macrfagos presentan, adems de diferente

morfologa dependiendo del rgano donde se
localicen, distinta actividad, segn su grado de
maduracin, su activacin y su propia localizacin.

Las clulas en suspensin a los que se les han aadido los

diferentes AcM pasan a travs de un tubo muy fino en una
sla fila de clulas, y son ledas por el lser y el haz de luz;
el primero identifica los anticuerpos marcados y el segundo,
el tamao de las clulas.

Entre estas actividades destacamos:

La FAGOCTICA. (actividad
antimicrobiana y
antitumoral)

Como PRESENTADORA DE
ANTGENOS. Estimulacin
de linfocitos

SINTETIZADORA de un gran
nmero de LINFOCINAS.

Los macrfagos, realizan funciones de fagocitosis y de lisis de microorganismos y clulas

infectadas y/o tumorales, ya sea de forma directa (inmunidad natural o innata) o a travs de sus
receptores Fc para las inmunoglobulinas, o de sus receptores para el complemento. Como clulas
presentadoras, participan en la induccin de la inmunidad adquirida capturando y procesando
los antgenos para, posteriormente asociados al SLA II, presentarlos al linfocito T (CD 4). Por
ltimo, los macrfagos sintetizan un gran nmero de linfocinas: Interleucinas: 1, 2, 6, 12,
interfern y y factor alfa de necropsis celular (TNF-). (Captulo 6) As como, los componentes
del complemento: C2, C3, C4 y C5. y varias enzimas. (Captulo 7).

Las clulas dendrticas son tambin

clulas presentadoras de antgenos (CPAg) y
por tanto disponen de capacidad para la
captacin de antgenos de forma natural. Las
clulas dendrticas, al igual que los
monocitos-macrfago, se localizan en los
tejidos de captacin (piel y mucosas) y en
los de presentacin (ganglios y bazo). En
una zona donde presentan especial actividad
es en la piel, donde su misin es capturar los
antgenos que entran por esa va y llevarlos

RECEPTORES DE LOS MACRFAGOS

Receptor para anticuerpos

Receptor para varios componentes del
complemento

al ganglio ms cercano para su presentacin

a los linfocitos T CD4+.

Receptor para linfocinas

Receptor de transporte: Transferrina

Los granulocitos. Se conocen con este

nombre al conjunto de clulas que presentan un
gran nmero de grnulos en su citoplasma as
como, diferentes formas y comportamientos
con los colorantes histolgicos.
Los granulocitos se encuentran en la sangre y
pasan a los tejidos solamente cuando son atrados
por la activacin de macrfagos o del
complemento y posterior liberacin de agentes
quimiotcticos. Este fenmeno, se conoce como
diapdesis.
El granulocito ms abundante e
importante en el cerdo es el Neutrfilo o
polimorfonuclear, denominado as, ya que
no incorporan colorantes histolgicos, ni
cidos ni bsicos,(neutrfilos) y a su ncleo
multilobular(polimorfonucleares). De la
mdula sea pasan al torrente circulatorio
y de ah al interior de los tejidos. Tienen
una vida media baja, pocos das. La misin
fundamental de estas clulas es la de
capturar y destruir sustancias extraas
mediante el mecanismos de la fagocitosis.
El Neutrfilo tiene una capacidad de
activacin muy rpida, que incluso puede ser
mayor en presencia de interfern , Sin
embargo, su capacidad de volver a fagocitar
es muy limitada. Es una primera e
importante lnea de batalla, pero no tiene
mucha duracin.

Esquema del Neutrfilo o Polimorfonuclear

En el proceso de la fagocitosis se pueden

diferenciar cuatro etapas distintas, si bien
es un proceso continuo. Estas etapas son:

Quimiotaxis o atraccin.
Adherencia y opsonizacin.
Ingestin y vacuolizacin.
Digestin o destruccin.

La activacin de la fagocitosis se realiza por la liberacin de

sustancias quimiotcticas (quimiotaxisis) al activarse el
complemento, por la liberacin de factores plaquetarios o por otras
sustancias. Una vez el macrfago se encuentra con la partcula
extraa, se debe unir a ella mediante la neutralizacin de las cargas
negativas (ambas se repelen). Este fenmeno se ve favorecido si la
partcula extraa est unida a inmunoglobulinas o al fragmento C3b
del complemento (Adherencia). La ingestin se lleva a cabo
mediante seudpodos que engloban la partcula y la incorporan al
citoplasma y la vacuolizan (fagosoma) (Ingestin). Por ltimo, la
partcula es destruida por la activacin de la oxidasa de las enzimas
lisosmicas (Destruccin).

Macrofago fagocitando clulas de Candida

albicans
James A. Sullivan, Cells Alive!
(152 Kb.)

El segundo grupo de los granulocitos en

importancia son los Eosinfilos,
denominados de esta forma ya que
incorporan colorantes histolgicos cidos,
como la eosina. El eosinfilo, pasa de la
mdula sea (casi inmaduro) al bazo
donde madura, para pasar posteriormente,
al torrente circulatorio y a los tejidos. Su
vida media es muy corta, menos de una
hora. Su misin fundamental es tambin la
fagoctica, aunque sus grnulos no
contienen lisozima pero, si grandes
cantidades de fosfatasa cida y peroxidasa,
Intervienen muy eficazmente en las
parasitosis.
En definitiva, los granulocitos, aunque no
reaccionan de forma especfica con los
antgenos, (el reconocimiento de los
antgenos est ligado a reacciones innatas,
generalmente debido a los receptores del
propio patgeno o a la activacin del
complemento) juegan un papel muy
importante en los procesos de fagocticos
e inflamatorios. En estos ltimo, sobre todo
en los de carcter agudo.
Sus receptores de membrana les permiten:
Fagocitar las partculas ya opsonizadas. Al
igual que, gracias a su receptor para la
fraccin Fc de las inmunoglobulinas,
actuar como clulas efectoras en los
procesos de citotoxicidad celular
dependiente de anticuerpos (ADCC)
CAPTULO 3

Captulo 2

RECEPTORES DE MEMBRANA DE LOS

GRANULOCITOS

Receptores Fc

Receptores para diversos factores

del complemento (C3b, C3bi).

Por ltimo, los granulocitos menos abundantes

son los basfilos (denominados de esta forma por
incorporar colorantes bsicos, como la
hematoxilina) La actividad de estas clulas est
ligada a la liberacin de aminas vasoactivas,
tales como: la histamina y la serotonina, por lo
que intervienen en la inflamacin de carcter
agudo, siendo un gran aviso de alarma para el
sistema inmune.

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Temario del curso

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Dep. Legal: B-19442-2001. ISBN: 84-699-4740-0

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Temario del curso

COLABORACIN
CELULAR EN LA
RESPUESTA
INMUNE.
RESPUESTA
PRIMARIA Y
SECUNDARIA.

La produccin de la mayora de los anticuerpos depende de la colaboracin

entre las clulas T cooperadoras y los linfocitos B.

La extirpacin del timo a un cerdito neonato impide el desarrollo de la respuesta celular y de

la mediada por anticuerpos (humoral), con la nica excepcin de la produccin de anticuerpos
inducidos por antgenos T independientes. Por tanto, la produccin de los anticuerpos se produce
cuando existe una eficaz colaboracin entre los linfocitos B y los linfocitos T cooperadores
(CD4+).

Cooperacin entre linfocitos B y linfocitos T. Produccin de anticuerpos por

presentacin de linfocitos B.
Los linfocitos B no son slo productores de inmunoglobulinas, tambin son eficaces clulas
presentadoras de antgeno (CPAg). Los linfocitos B tienen, por tanto, dos importantes
misiones que realizar en la respuesta inmune humoral:
1. Actuar como clulas presentadoras de antgenos.
2. Producir los anticuerpos.
Los linfocitos B presentan SLA II en su membrana, as como pueden reconocer al antgeno,
incluso en su forma nativa (antgeno libre sin necesidad de estar asociados al SLA o de haber
sido transformados), a travs de sus inmunoglobulinas de superficie.

Cmo se activa el linfocito B?

Esquema de la presentacin de Ags por linfocitos B.

Reaccin con el Ag en su forma nativa (1); internalizacin del
Ag (2); fragmentacin del Ag (3); unin al SLA II (4) y
expresin en la Membrana (5)

La produccin de anticuerpos se inicia con la

IgM y despus, si sigue el estimulo
antignico, cambiara la regin
constante de las cadenas mu (IgM)
por las gamma (IgG) y epsilon (IgE)
o alfa (IgA), pero conservar sus
regiones variables (las que se unen al
antgeno) originales. (captulo 4)
Este proceso es semejante al
originado por la presentacin del
antgeno a travs de clulas
presentadoras, pero es ms eficaz
ya que los linfocitos B slo
reaccionan con el antgeno,
mientras que los macrfagos
fagocitan todo tipo de partculas, y
adems, requiere menor cantidad
de antgeno.

El antgeno en su forma nativa reacciona

directamente con las inmunoglobulinas de la
membrana de los linfocitos B, sin ninguna
intervencin ni de clulas presentadoras ni de
linfocitos T, posteriormente el antgeno es
internalizado, fragmentado, asociado al SLA II y
expresado en la membrana del propio linfocito B.
En definitiva, acta de forma similar a las otras
CPAg, presentando dos diferencias principales:
a) El antgeno puede ser reconocido en su
forma nativa y de forma especfica mediante las
inmunoglobulinas de superficie y b) No hay
fagocitosis.
Una vez expresado el antgeno en la membrana de
los linfocitos B, si encuentra el estimulo
adecuado de un linfocito CD4+ , se podr iniciar
la produccin de inmunoglobulinas. Esta
colaboracin es esencial para la iniciacin de la
produccin de anticuerpos, frente a la gran
mayora de los antgenos. La colaboracin entre los
linfocitos B y los CD4+ se produce al contactar
ambas clulas gracias al SLA II y al antgeno, as
como a la liberacin de linfocinas, sobre todo de la
interleuquina 4.

Un linfocito B estimulado por un antgeno cambia su estructura y

funcin. El linfocito B se divide produciendo varios clones,
posteriormente se transforma, desarrollando retculo endoplsmico
rugoso, formndose finalmente una clula plasmtica.

La nica excepcin a este sistema lo

presentan los antgenos T independientes
que pueden producir anticuerpos sin la
colaboracin de los linfocitos T. Estos
antgenos, generalmente presentes en
algunas bacterias, suelen ser polisacridos
o lipopolisacridos , NO SON PROTEICOS,
pueden reaccionar directamente con los BcR
de forma entrecruzada, estimulando varios
BcR a la vez de forma que inducen el
estimulo suficiente como para iniciar la
induccin de anticuerpos. Pero solamente
son capaces de inducir IgM, ninguna otra
inmunoglobulina.

Cooperacin de las CPAg con los linfocitos T y B. Produccin de anticuerpos

por la presentacin de antgenos por clulas fagocticas presentadoras.
Los antgenos tambin pueden ser captados por los macrfagos o clulas dendrticas que actan
como clulas presentadoras de antgenos. Estas clulas CPAg pertenecen, junto con los
linfocitos B, al exclusivo grupo de clulas del sistema inmune que expresan en su membrana SLA
II (todas las clulas nucleadas presentan SLA I, pero no SLA II) por lo tanto son las nicas
capaces de poder presentar antgenos (epitopes) a los linfocitos T cooperadores CD 4+.
La captacin de estos antgenos se realiza,
en este caso, por un mecanismo
inespecfico (a diferencia de los linfocitos B)
que suele necesitar gran cantidad de
material antignico. El antgeno es
englobado dentro de una vescula (1) y
transportado a los lisosomas donde ser
degradado por las diferentes enzimas (2).
Los diferentes fragmentos del antgeno, ya
digerido, sern asociados mediante la
unin no covalente a los SLA II (3) y
transportados a la membrana del macrfago
(4) donde sern reconocidos por los
linfocitos T CD 4+ (los receptores TcR no

pueden reconocer los antgenos sin estar

asociados al SLA).
Al interrelacionar las clulas (CPAg y linfocito
T) se produce una activacin en ambas,
con liberacin de diferentes citocinas y de
sus receptores especficos, que permiten la
estimulacin y proliferacin de los
linfocitos T CD4+ (Expansin clonal de
CD4+). En este momento los linfocitos CD 4+
pueden estimular a los linfocitos B para la
produccin de anticuerpos. Esta estimulacin
esta mediada por el SLA II y el antgeno
(ambas clulas deben reconocer al menos
diferentes epitopes del mismo antgeno) y
favorecida por la liberacin de la interleuquina
4 (IL-4). La activacin de los linfocitos T
CD4+, requiere por tanto, de la actuacin
de clulas presentadoras de antgeno
(CPAg) y del antgeno de
histocompatibilidad tipo II (SLA II).

Esquema de la cooperacin celular para la presentacin de

antgenos mediante clulas presentadoras (macrfagos o
clulas dendrticas)

Por uno u otro mecanismo, los linfocitos B activados sufren una proliferacin, parte de las
clulas se transformaran en clulas plasmticas segregando anticuerpos y otra parte de los
linfocitos B quedaran como clulas memoria. Las clulas memoria son linfocitos de larga
vida, a diferencia de los linfocitos convencionales y de las clulas plasmticas que tienen una vida
muy corta. Esta larga vida viene regulada por un gen, conocido como bcl-2, presente slo en
los linfocitos memoria.

Caractersticas de la respuesta primaria:

Lentitud en la respuesta
Mayor predominio de la IgM que de
la IgG,
Ttulos bajos y de corta duracin.
Caractersticas de la respuesta
secundaria:
Ms rpida y efectiva que la
primaria,

Se producen mayores ttulos de

anticuerpos y de ms larga duracin.

Cuando un antgeno se presenta por vez primera al

sistema inmune se produce un tipo de reaccin
denominada respuesta primaria.
La respuesta primaria se produce
fundamentalmente en los ganglios linfticos y en el
bazo. Durante esta respuesta primaria, se producen
unos linfocitos memoria que recordarn la
estructura de cada eptope del antgeno para
posibles futuras infecciones.
Cuando un animal ya ha estado en contacto con un
antgeno determinado y, por tanto, ha podido
inducir linfocitos memoria y el antgeno penetra
de nuevo, se induce una respuesta inmune
denomina respuesta secundaria.

En la respuesta secundaria los niveles de IgM

son similares a los de la respuesta primaria,
pero los niveles de IgG son mucho ms altos y
mantenidos en el tiempo. En la respuesta
secundaria tambin se producen otras
inmunoglobulinas como la IgA e IgE. La
respuesta secundaria se produce
fundamentalmente en la mdula sea, seguidos
del bazo y ganglios linfticos.

En el caso de los antgenos T

independientes el patrn de respuesta es
igual tanto para la respuesta primaria como
para la secundaria, presentando en ambos
casos slo inmunoglobulina IgM.

CAPTULO 3
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Temario del curso

Bibliografa

Temario del curso

PAPEL DE LAS
MUCOSAS.

Las mucosas juegan un papel muy importante en la defensa

inmunolgica del cerdo, ya que un gran nmero de agentes patgenos
utilizan las mucosas como va de entrada.

El tejido linfoide asociado a las mucosas forma parte del sistema inmune
aunque, con cierta independencia del sistema sistmico. Es el encargado de
proteger las mucosas del cerdo del ataque de los agentes patgenos, tanto en
una respuesta primaria como secundaria. Est formado por ndulos de tejido
linfoide que, segn su localizacin, se denominan: GALT y BALT

La denominacin GALT proviene de las

palabras inglesas "Gut Associated
Lymphoid Tissues" y cuya traduccin sera:
Tejido linfoide asociado al intestino. El
GALT est formado por todo el tejido
linfoide que se encuentra en las paredes
intestinales (ganglios, placas de Peyer,
folculos linfoides aislados). (rganos

linfoides secundarios)
La denominacin BALT tienen su origen en
las palabras inglesas "Broncus Associated
Lymphoid Tissues" en espaol: tejido
linfoide asociado a los bronquios. Est
formado por todo el tejido linfoide
(tonsilas, ganglios, folculos linfoides)
localizado en las mucosas respiratorias,
desde las fosas nasales hasta los
pulmones.
Una particularidad del BALT en la especie
porcina, a diferencia de los roedores o de la
especie humana, es la gran presencia, en
los pulmones, de macrfagos
intravasculares que presentan gran
actividad.

INMUNIDAD DE LAS MUCOSAS.

Una ejemplo de la gran importancia, que el tejido linfoide de las mucosas presenta en los
mecanismos de defensa del cerdo frente a las infecciones, lo prueba la gran cantidad de tejido
linfoide disponible.
Este tejido linfoide se distribuye de forma estratgica en las siguientes zonas:

Zonas de procesamiento e inicio de la respuesta inmune. Zonas Inductoras.

Zonas de respuesta (humoral y celular) denominadas. Zonas efectoras.

Las zonas de inicio o inductoras de la respuesta inmune de las mucosas, disponen de

elementos semejantes a los componentes del sistema inmune sistmico para realizar la
captacin de los antgenos e iniciar la respuesta inmune. Con la nica diferencia de las
clulas M, que son unas clulas epiteliales especializadas en el transporte de antgenos,
los dems componentes (clulas presentadoras, linfocitos T y linfocitos B) actan de forma
similar al sistema sistmico. Estos componentes celulares estn localizados en: las tonsilas,
placas de Peyer, ganglios y en el tejido linfoide difuso. En definitiva, tanto en las zonas GALT
como las BALT ( rganos secundarios del cerdo) tiene lugar el contacto con el antgeno,
transporte, procesamiento y presentacin a los linfocitos T y B.

Los antgenos suelen entrar en el animal

por inhalacin o ingestin. Mediante un
proceso ligado a las clulas M, CPAg o
directamente sobre linfocitos B
(semejante al descrito en cooperacin
celular), habr una estimulacin de
clulas B (precursoras
fundamentalmente de IgA) y de linfocitos
T. Las clulas estimuladas en estas
zonas de inicio, abandonan el rea
mediante el sistema sanguneo,
migrando hacia las diferentes zonas
efectoras.
Este mecanismo permite, que aunque la
estimulacin antignica haya sido a nivel
local, la respuesta inmune sea
generalizada en todo el organismo del
animal, por lo que se define como:
respuesta inmune secretora y
generalizada.

Esquema de la estructura de una inmunoglobulina IgA

Estimulacin del tejido linfoide de las mucosas BALT o

GALT. Este mecanismo permite que, aunque la estimulacin
antignica haya sido local, la respuesta inmune sea
generalizada.

En las zonas efectoras la mayor parte de las

clulas inmunes son linfocitos T, que se
encuentran entre las clulas epiteliales
(linfocitos intraepiteliales) y por debajo de
ellas en la lamina propia. Fundamentalmente
CD 8 (77%) y CD 4 -. Tambin hay linfocitos
B, que pueden reaccionar con el antgeno.
Las clulas plasmticas productoras,
fundamentalmente de inmunoglobulina del
isotipo IgA, se encuentran principalmente en
los ganglios linfticos y en las clulas
plasmticas difusas, que se localizan en las
paredes del intestino y sistema respiratorio.
Estas clulas son fundamentales en la
respuesta inmune de las mucosas,
secretando alrededor del 80% de IgA, con la
nica excepcin de las tonsilas, donde la
inmunoglobulina sintetizada de forma
mayoritaria es la IgG seguida de la IgA.

El transporte de los antgenos a las

zonas inductoras (Placas de Peyer y
folculos linfoides) se realiza
fundamentalmente mediante las clulas
M. Las clulas M, son clulas epiteliales
especializadas en el transporte de
antgenos. No actan enzimticamente
sobre los antgenos. Las clulas M
captan a los antgenos de la luz del
intestino y los transportan
completamente intactos a la
presentacin de los linfocitos
intraepiteliales (dentro de la propia
clula) o pasan por el espacio
intercelular hacia el lquido hstico y
presentan el antgeno a las clulas
presentadoras (macrfagos, clulas
dendrticas y linfocitos B) presentes en
el espacio subepitelial o en la lamina
propia. Los mecanismos de activacin a
nivel de la lamina propia siguen un
esquema semejante al descrito en la
cooperacin celular.

El antgeno en la zona efectora, entra por endocitosis

o a travs de las uniones estrechas.

PRESENTACIN ANTIGNICA EN LA ZONA INDUCTORA DE

LAS MUCOSAS. El antgeno que penetra en los enterocitosis
se destruye rpidamente por los lisosomas. Sin embargo, el
antgeno que es capturado por las clulas M, es trasportado sin
degradacin y presentado a los linfocitos intraepiteliales. A partir
de ah podr pasar a los ganglios linfticos.

En las zonas efectoras tambin pueden

presentarse antgenos, aunque el mecanismo
de entrada suele ser diferente al de las zonas
inductoras. En las zonas efectoras el
antgeno puede acceder por endocitosis
mediante las clulas epiteliales o
atravesando por las llamadas zonas o
uniones estrechas. La captura y presentacin
se realiza mediante macrfagos, clulas M o
linfocitos B y los pasos siguientes siguen un
procedimiento al anteriormente descrito.
La capacidad de induccin de una respuesta
inmune a nivel de las mucosas, generalmente
requiere de mayor cantidad de antgeno y a
veces mayor nmero de inmunizaciones que
en el sistema sistmico, sobre todo en las
inmunizaciones por va oral.

Esto es debido a las mltiples alteraciones y degradaciones enzimticas que sufren los
antgenos por esta va. Este mecanismo es bueno para la defensa del animal, pero hay
que tenerlo en cuenta a la hora de disear vacunas orales. Aunque como ya veremos en el
captulo 8, existen varias estrategias para inducir una buena respuesta inmune tambin por va
oral. No obstante, es generalmente ms fcil, inducir inmunidad en las mucosas
respiratorias mediante una inmunizacin oral, que inducir respuesta inmune en las
mucosas intestinales, mediante inmunizacin nasal.

ESQUEMA DE ACTUACIN DE LA IgA. La IgA puede

actual a nivel de la luz intestinal (lumen), evitando la
adherencia al epitelio de virus y/o bacterias (1), dentro de
los enterocitos incluso neutralizando virus (2) y por
ltimo, en el lquido hstico (3).

La IgA (captulo 4) juega un papel

importantsimo en la respuesta inmune de
las mucosas. Su configuracin en forma de
dmero o como tretrmero, le permite
disponer de entre 4 a 8 sitios de unin al
antgeno, lo que la hace tremendamente
efectiva frente a diferentes antgenos
bacterianos, mediante reacciones del tipo
ADCC, ya que la IgA no es bactericida.
Aunque si presenta gran capacidad para la
neutralizacin de algunos virus, incluso
dentro de las clulas epiteliales. Es la nica
inmunoglobulina capaz de poder actuar
dentro de una clula, pero sobre todo su
principal actividad en la defensa de las
mucosas es la de evitar la adherencia de
bacteria y virus a la superficie del epitelio. La
IgA, por tanto puede actuar en tres lugares y
de forma distinta. Por un lado, puede unirse al
antgeno en la luz intestinal, para evitar la
adherencia de virus y/o bacterias a la superficie
del epitelio o dentro de los enterocitos, y por
ltimo, en el lquido hstico.

Una muestra ms de la importancia que esta inmunoglobulina presenta en los

mecanismos de defensa de la especie porcina, lo representa el hecho que en la cerda, el
85% de las clulas que contienen inmunoglobulinas en la lamina propia del intestino

presentan IgA.
CAPTULO 3

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CAPTULO 4

Captulo 3

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Temario del curso

Temario del curso

INMUNOGLOBULINAS
PORCINAS

Se denominan inmunoglobulinas al conjunto de protenas producidas

por los linfocitos B estimulados (clulas plasmticas) por un antgeno.

Se encuentran en el suero y fluidos tisulares de todos los mamferos en

forma de secrecin (ANTICUERPOS) o unidas a la membrana de los linfocitos
B (RECEPTOR BcR). Son las mediadoras de la respuesta humoral. En el

cerdo se han descrito cuatro tipos de inmunoglobulinas, denominadas:

IgM, IgG, IgA e IgE.
COMO SE PRODUCEN LAS INMUNOGLOBULINAS?

Las inmunoglobulinas son producidas tras

la estimulacin de un linfocito B (por
antgenos T dependientes o T
independientes) y la posterior
transformacin en clula plasmtica. La
clulas plasmticas no se dividen,
tampoco cambian de isotipo, ni
expresan SLA II, ni inmunoglobulinas en
su superficie. Por tanto, no pueden
interaccionar con ningn tipo de antgeno.
Son clulas-factora de
Inmunoglobulinas.
Dada la enorme complejidad estructural
que tienen la mayora de los antgenos,
cuando se produce una respuesta humoral
frente a cualquiera de ellos, se inducen un
gran nmero de anticuerpos distintos
dirigidos a los diferentes eptopes que
componen el antgeno inductor de la
respuesta inmune. Por ello, la respuesta
inmune humoral es policlonal, ya que
hay miles de clones estimulados y
secretando anticuerpos distintos.
La respuesta inmune mediada por
anticuerpos, se denomina respuesta
humoral.
La respuesta humoral es policlonal y
puede ser una respuestas primaria o
secundaria

Esquema de linfocito B y su transformacin en clula

plasmtica

Las inmunoglobulinas producidas por cada

clon de clulas plasmticas sern especficas
frente al eptope inductor de la respuesta
inmune. Existirn tantos clones productores de
anticuerpos como eptopes hayan inducido la
respuesta inmune. En una respuesta
inducida por un antgeno (formado por varios
eptopes) habr diferentes clones de clulas
plasmticas segregando anticuerpos
especficos para cada eptope.

CMO ES LA ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS?

Estructuralmente, las inmunoglobulinas de

cerdo, al igual que en otras especies, son
glicoprotenas formadas bsicamente
por cuatro cadenas polipeptdicas. Dos
de ellas, denominadas PESADAS o
cadenas H (Heavy: pesado), con un peso
molecular de entre 55 a 77 kilodalton
(kDa) y dos LIGERAS o L (Light: Ligera)
con un peso molecular de entre 23 a 26
kDa. Las dos cadenas H y las dos L
mantienen idntica estructura entre
ellas. Las dos cadenas pesadas se unen
entre si covalentemente mediante puentes
de azufre y la cadena pesada se une a la
ligera mediante un puente disulfuro. Cada
una de las cadenas consta de una
regin constante y otra variable.
Estructura bsica de las inmunoglobulinas formada por
dos cadenas pesadas (rojo) y dos cadenas ligeras
(amarillo)

Si una molcula de inmunoglobulina es tratada

por proteasas, como la pepsina o la papaina,
se parte en dos fragmentos denominados: Fab,
de las palabras inglesas antigen binding
Fragment y Fc (Crystalizable Fragment). En el
primer fragmento (Fab), reside la
especificidad de la inmunoglobulina, y por
tanto su capacidad para reaccionar con el
antgeno, mientras que el segundo
fragmento (Fc) realiza las funciones
efectoras de las inmunoglobulinas (fijacin
del complemento, receptores celulares, etc.)

Tanto las cadenas pesadas como las

ligeras, estn formadas por unas
estructuras proteicas conservadas
denominadas Dominio de
Inmunoglobulinas. Estos dominios estn
formados por aproximadamente 110
aminocidos. Las cadenas ligeras estn
formadas por dos dominios, uno variable
(VL) y otro constante (CL) y las cadenas
pesadas por una parte variable (VH) y
tres (IgG e IgA) o cuatro (IgM e IgE)
constantes (CH1, CH2, CH3 y CH4). Los
dominios son idnticos en las dos cadenas
ligeras entre si y en las dos cadenas

pesadas.
En las cadenas H tambin existe una
regin adicional, que no forma parte de los
dominios, denominada regin bisagra. La
regin bisagra est localizada entre los
dominios CH1 y CH2 y permite la
movilidad a las inmunoglobulinas.
El anlisis de aminocidos de la regin
bisagra demuestra que est formada por
un gran numero del aminocido prolina lo
que permite su flexibilidad, pero tambin
su susceptibilidad al ataque de
proteasas, de ah, su fragmentacin en
Fab y Fc.

Estructura de los dominios de las inmunoglobulinas. En

las cadenas ligeras existen dos dominios,uno variable (VL)
y otro constante (CL). Las cadenas pesadas presentan un
dominio variable (VH)y tres o cuatro constantes (CH).

Los dominios variables (VL y VH) tienen

como funcin la unin al antgeno y por tanto,
son los responsables de la especificidad de
la inmunoglobulina, mientras que los dominios
constantes permiten la diferenciacin de los
cinco isotipo de cadenas pesadas (
que formaran las inmunoglobulinas (IgM, IgG,
IgE, IgA e IgD) y de los dos tipos de cadenas
ligeras: capa ( ) y landa (. As como, son
los responsables de las funciones efectoras
de las inmunoglobulinas (fijacin del
complemento, receptores celulares, etc.)
La variabilidad observada en las zonas
variables de ambas cadenas (L y H) se
localiza en tres segmentos, de alrededor de
10 aminocidos, denominados regiones
hipervariables, tambin conocidos como:
CDR1, CDR2 y CDR3 (Complementary
Determining Regions o Regin determinante de
Complementariedad). Estos segmentos forman
el denominado sitio de unin con el
antgeno. Por lo tanto, cada molcula de
inmunoglobulina tiene dos sitios de unin con
el antgeno.

Localizacin de los sitios de unin con el antgeno

Por otra parte, en la estructura de las

inmunoglobulinas tambin juega un papel
importante los hidratos de carbono,
sobre todo en la regin constante de las
cadenas pesadas, y en particular en la
zona CH2 y en la regin bisagra, aunque
en las regiones variables de las cadenas
pesadas slo representa alrededor de un
15%. El papel de los azucares no esta
del todo claro, pero parece ligado a su
catabolismo y tambin afecta a alguna
de sus funciones, as se ha podido
comprobar que las IgG deglicosiladas
pierden o disminuyen su capacidad para
unirse a receptores celulares e inducir
ADCC, as como para activar el
complemento.
CAPTULO 4

Captulo 3

Esquema dela reaccin de citotoxicidad mediada por

anticuerpos. La especificidad la proporciona el anticuerpo
y la accin citotxica la clula

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Temario del curso

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Dep. Legal: B-19442-2001. ISBN: 84-699-4740-0

CAPTULO 4

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Temario del curso

CMO SE REGULA
LA FORMACIN DE
INMUNOGLOBULINAS?

Sera lgico disponer de tantos genes predeterminados como eptopos

estarn en contacto a lo largo de la vida de un cerdo?
Como se podra conocer a priori qu antgenos afectarn a un animal?
Cuantos miles de millones de genes seran necesarios?

El control gentico de la produccin de inmunoglobulinas, resuelve con

elegancia y creatividad lo que podra ser un grave problema.

Los dominios variables y constantes

de las inmunoglobulinas estn
codificados por genes distintos,
pero no suficientes para la enorme
diversidad de inmunoglobulinas que
se producen en la respuesta inmune.

Organizacin gentica de las

inmunoglobulinas porcinas.
La organizacin gentica para la
formacin de inmunoglobulinas est muy
bien estudiada en la especie humana y
mrina, siendo en la especie porcina
cada vez ms conocida.
A diferencia de la mayora las protenas
que son codificadas por genes nicos
(copia materna y paterna) las
inmunoglobulinas disponen de
mltiples versiones de los diferentes
genes. Cada precursor de linfocito B
podr elegir cualquiera de las
diferentes versiones de disponibles
que codifican para las diferentes
regiones. Este fenmeno, que es
totalmente aleatorio, es la base
principal que permite al sistema
inmune producir anticuerpos con gran
diversidad.

Para resolver esta aparente limitacin, la

produccin de inmunoglobulinas
dispone de una organizacin especial
del genoma y diferentes mecanismos de
expresin, que permiten producir gran
diversidad, con menos genes fijos.

LA DIVERSIDAD DE
ANTICUERPOS se puede producir
gracias a:
Existencia de mltiples genes fijos V, D
y J en la clula madre.
Modificacin del ADN en el paso de
preclulas B a clula B madura.
Mltiples posibilidades de
recombinacin de los cadenas pesadas
con la cadenas ligeras.
Mutaciones somticas.
Recombinaciones mltiples.

En definitiva, por un lado los genes pueden reordenarse de forma aleatoria para la sntesis
de anticuerpos, y por otra parte, en los precursores de los linfocitos B pueden producirse
procesos de hipermutacin, lo que unido a las mltiples combinaciones entre las cadenas
pesadas y ligeras, permite, que con relativamente pocos genes fijos, se pueda expresar o
codificar la enorme diversidad de anticuerpos inducidos en la respuesta inmune.

Genes de las inmunoglobulinas

Existen tres grupos de genes ligados a la codificacin de las
inmunoglobulinas, localizados en distintos cromosomas.
Los genes que codifican las regiones constantes y variables de las inmunoglobulinas se
encuentran muy separados en el genoma de todas las clulas del organismos, excepto en
los linfocitos B. La aproximacin de estos genes durante el proceso de maduracin de las
clulas B es lo que les permite llevar a cabo los procesos de recombinacin somtica al
azar y aumentar las posibilidades de diversidad.
Estos genes estn formando por tres locus distintos, denominados:
V
Dominio variable

D
J

Locus H. Codifican: Cadenas

pesadas, dominios variables y

constantes.

C
Dominio constante
C
C

Locus Kappa (). Codifican:

Cadenas ligeras

Locus Lambda (). Codifican:

Cadenas ligeras

El locus H codifica las cadenas pesadas

de las inmunoglobulinas. Est formado por
dos grupos de genes. Un grupo codifica
los dominios variables de las cadenas
pesadas y est formado por tres genes
diferentes:

GENES V

V
J
V
J

Los genes V. Denominados as porque

codifican variabilidad.
Los genes D. Codifican la diversidad.

GENES D
GENES J

Los genes J. Unin.

Los genes V, son los ms abundantes, codifican la mayor parte de los dominios variables, en
la especie porcina slo se ha identificado una familia de este gen.
Los genes D son muy diversos habindose descrito desde 1 a ms de 15 segmentos son muy
variables, presentando el mayor nmero de variaciones en la secuencia de sus nucletidos de
los tres tipos de genes del locus H.
Los genes J codifican la regin variable, en el cerdo slo se ha encontrado un segmento J (en
el ratn hay cuatro y en el hombre, nueve).

La parte constante de las cadenas

pesadas est codificada por los genes
C, C, y Cde los que en el cerdo slo
se ha encontrado un tipo de gen y que
codificaran las cadenas pesadas de las
inmunoglobulinas IgM, IgE e IgA,
respectivamente. Sin embargo se han
descrito ocho copias de genes
correspondientes al gen C El estudio de
estos genes ha puesto de manifiesto, que
en el cerdo, al menos existen cinco
subclases de IgG, que estaran
codificadas por los genes C1, C2a,
C2b, C3 y C4.
El Locus Kappa () slo presenta un segmento
denominado CK. El locus lambda ( est
formado por dos genes y dos segmentos. Los
genes localizados en estos locus son los
responsables de la codificacin de las
cadenas ligeras Kappa y Lambda.

Esquema de la produccin de la cadena ligera de las inmunoglobulinas porcinas.

Genticamente tambin se regula el

cambio de Isotipo de las
inmunoglobulinas. Generalmente, la
respuesta inmune comienza con la
produccin de IgM para despus pasar a
IgG o IgA o IgE, cuyo fragmento Fc tiene
distintas propiedades biolgicas. En el
extracto 5' de todos los genes CH,
existe una secuencia denominada S
que es la que permite el cambio de
isotipo. La diferencia est producida por
la deleccin de genes.

Variantes de las inmunoglobulinas encontradas.

Gracias a los anticuerpos monoclonales
se han podido estudiar la variabilidad
gentica de las inmunoglobulinas
porcinas, pudindose diferenciar tres
tipos:

Variantes ISOTPICAS
Variantes ALOTPICAS
Variantes IDIOTPICAS

Las variantes Isotpicas estn

codificadas por genes que se
encuentran en la misma especie
animal, por lo que ese tipo de
inmunoglobulinas ser comn entre todos
los miembros de la especie porcina. La
parte de la molcula de una
inmunoglobulina que permite diferenciar
los distintos isotipos se localiza en las
regiones constantes de las cadenas
pesadas. En el cerdo se han
caracterizado cuatro isotipos
principales de inmunoglobulinas
denominados IgM, IgA, IgG e IgE.
Las variantes Alotpicas se encuentran
solamente en las inmunoglobulinas de
algunos animales de la especie porcina, es
como un marcador allico que se expresa en
las zonas constantes de las cadenas
pesada y ligeras de las inmunoglobulinas de
algunos animales de esa misma especie.

La variantes Idiotpicas se pueden

encontrar en un solo individuo de una
misma especie o en varios,
dependiendo si estuvieron o no en
contacto con el mismo antgeno. Estn
inducidas por los diferentes eptopes de
los antgenos y se localizan en las zonas
hipervariables de las cadenas pesadas
y ligeras.
CAPTULO 4
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CAPTULO 4

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Temario del curso

CUNTOS TIPOS DE
INMUNOGLOBULINAS SE CONOCEN?

En el cerdo se han descrito cuatro isotipos de inmunoglobulinas: IgM, IgG,

IgA e IgE. La posible existencia de la IgD porcina todava no se ha podido

demostrar de forma concluyente.

Ninguna de las inmunoglobulinas atraviesan la placenta.

La transferencia de inmunoglobulinas de madre a feto se realiza a travs del
calostro, los lechones absorben por va intestinal las inmunoglobulinas,
pasando posteriormente al suero.

La inmunoglobulina M.

Es la primera inmunoglobulina en
producirse tras una respuesta inmune y
el isotipo predominante en la respuesta
primaria.
La IgM es la segunda inmunoglobulina en
concentracin en suero, despus de la
IgG, representando entre un 10 y un 12%.
Del total de inmunoglobulinas porcinas. Su
concentracin en suero es entre 1 y 5
mg/mL, en leche materna entre 0,3 y 0,9 y
en calostro entre 2,5 y 3,2 mg/mL.
No se han descrito diferentes subclases
de IgM en el cerdo, aunque s se ha podido
observar una variante alotpica en algunos
animales.
Como todas las inmunoglobulinas, se puede presentar formando parte del BcR de los linfocitos
B; en este caso, como un monmero de 180 kDa, o en forma de anticuerpo secretado a los
fluidos corporales, en cuyo caso se presenta como un polmero de cinco monmeros de
180 kDa que representa un peso molecular de 900 kDa y un coeficiente de sedimentacin de
17,8 S.

Los diferentes monmeros estn unidos

entre si, formando un pentmero, mediante
un pequeo polipptido muy rico en cistena,
denominado como cadena J. Cada
monmero de IgM tiene una estructura como
la descrita de forma general para las
inmunoglobulinas, con dos cadenas pesadas
mu () y dos cadenas ligeras kappa () o
lambda (). La IgM no presenta zona
bisagra, aunque dispone de un fragmento
CH4 en sus cadenas pesadas por donde se
produce la activacin del complemento.
Esquema de la estructura de la IgM. En verde la cadena J

El papel de la IgM es de gran importancia como primera inmunoglobulina de defensa en

la respuesta humoral y auque su grado de afinidad para reaccionar con el antgeno es inferior
al de la IgG, su formacin pentamrica le permite unirse de forma mltiple con antgenos y
poder activar el complemento. Una sola molcula de IgM pentamrica unida a antgeno es
capaz de iniciar la activacin del complemento y la fagocitosis. La IgM es una
inmunoglobulina particularmente efectiva frente a un gran nmero de bacterias gram
negativas y puede neutralizar agentes virales. Debido a su gran tamao se encuentra
fundamentalmente en el suero sanguneo.

La inmunoglobulina G.
La inmunoglobulina IgG es el isotipo principal en el cerdo, representando entre el 80 y el
85% de las inmunoglobulinas porcinas en el suero y calostro, siendo adems el anticuerpo
ms importante en la respuesta secundaria. Su concentracin en suero es entre 17- 29
mg/mL, en leche materna entre 1- 3 y en calostro entre 30 - 70 mg/mL. Se han descrito, al
menos, cinco subclases de IgG: IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 e IgG4. Sin embargo, el estudio
de ADN ha puesto en evidencia que existen 8 genes que codifica la regin constante C.
El papel de esta inmunoglobulina en la respuesta humoral es vital.

Su estructura es igual cuando forma parte

del BcR que cuando est en forma de
anticuerpo. En ambos casos, forma un
monmero de 180 kDa. Con dos cadenas
pesadas gamma () idnticas y dos
cadenas ligeras, tambin idnticas, del tipo
kappa () o lambda (). Presenta zona
bisagra.

Esquema de la estructura de la IgG

La IgG, debido a su pequeo tamao,

puede fcilmente dejar el torrente
circulatorio e instalarse a nivel tisular
donde lleva a cabo importantes papeles de
defensa. Presenta un elevado ndice de
afinidad por los antgenos, pudiendo
opsonizarlos para facilitar la fagocitosis
(captulo 3), aglutinarlos o precipitarlos. La
IgG presenta una importante capacidad
de neutralizacin viral, es importante en la
actividad antibacteriana y puede activar le
complemento por las dos vas, as como
intervenir en los fenmenos ADCC.

La inmunoglobulina A.

Concentracin de las
inmunoglobulinas porcinas
mg/mL.

IgG

IgM

IgA

IgE

Suero

17-29

1-5

0.5-5

Leche

1.3

0.30.9

3-7

30.70

2.53.2

9.5-10

Calostro

Es la inmunoglobulina ms importante del

cerdo en la inmunidad de las mucosas y
la principal en la lactancia del animal. Su
concentracin en suero es entre 0,5 y 5
mg/mL, en leche materna entre 3 y 7
mg/mlL y en calostro entre 9,5 y 10
mg/mL.
Se han descrito dos subclases en el cerdo
IgA1 e IgA2.

Esquema de la IgA monmerica

La estructura de la IgA bsica es la de un

monmero de 150 kDa, aunque
normalmente es secretada en forma de
dmero mediante una cadena J. Tambin
puede observarse en forma de trmeros e
incluso como polmeros mayores. Como las
otras inmunoglobulinas, su estructura
bsica, presenta dos cadenas pesadas
alfa () idnticas y dos cadenas ligeras
kappa o lambda.
Esquema de la IgA en forma de dmero unidos por la
cadena J

La actividad de la IgA est relacionada de

forma esencial en la inmunidad de las
mucosas donde puede actuar a tres
niveles diferentes evitando la penetracin
de los antgenos en la pared del intestino,
neutralizando la actividad de algunos virus,
incluso dentro de las clulas epiteliales y
fuera de ellas.
La IgA no activa la cascada del
complemento ni puede actuar como
opsonina.
Esquema de los diferentes niveles de actuacin de la
IgA. (1) en el Lumen, (2) enterocitos y (3) lquido hstico

La inmunoglobulina E.
La IgE representa menos del 0,01% de las
inmunoglobulinas circulantes en el ganado
porcino. Esta inmunoglobulina se ha podido
determinar mediante mtodos funcionales,
incluso inducida por la presencia de virus
como el de la Peste porcina africana.
La IgE es un monmero de coeficiente de
sedimentacin 8S. Sus cadenas pesadas
presentan, al igual que la IgM cuatro
dominios constantes (CH), siendo su peso
molecular de 190 KDa y por tanto superior al
de la IgG. La fraccin Fc de la IgE

presenta un fragmento con gran afinidad

para unirse a la membrana de los
basfilos donde reaccionara con el
antgeno permitiendo la liberacin de los
diferentes productos inflamatorios
contenidos en los grnulos de estas clulas,
fundamentalmente en el cerdo se libera gran
cantidad de histamina sobre todo a nivel
intestinal y respiratorio. Estos mecanismos
de defensa son de gran importancia en
las infecciones parasitarias.

Esquema de unin de dos molculas de

IgE con el basfilo.
CAPTULO 4
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Temario del curso

Temario del curso

QU PAPEL TIENEN
LAS
INMUNOGLOBULINAS
EN LA RESPUESTA
INMUNE?

La misin principal de las inmunoglobulinas es la de reaccionar con los

antgenos para facilitar su eliminacin.

Las inmunoglobulinas reaccionan con el antgeno de dos formas:

1. Unidas al linfocito B formando el receptor BcR, lo que les permite reaccionar con
el antgeno de forma nativa, y que el linfocito B pueda actuar como eficaz clula
presentadora.

2. Libres en los fluidos. Permite actuar a las inmunoglobulinas como anticuerpos

en distintas funciones biolgicas.

1. Unidas a la membrana de los

linfocitos B. como vimos en el captulo 2,
la membrana de los linfocitos B est formada
por el complejo BcR (B Cell Receptor) o
receptor de clulas B. El BcR est formado
por varias cadenas; unas variables,
formadas por inmunoglobulinas, en las que
cada linfocito B presenta variaciones segn
el isotipo de inmunoglobulina (IgM e IgG, IgA
e IgE) o segn el tipo de antgeno inductor.
Las otras dos cadenas son invariables
(formadas por dos cadenas y ), y
comunes a todos los linfocitos B. La misin
de las cadenas variables, que son
inmunoglobulinas, es la de reaccionar con
el antgeno especfico, mientras que las
cadenas invariables sirven para transmitir
la seal al interior de la clula para la
iniciacin de la produccin de
anticuerpos. Este sistema permite a los
linfocitos B actuar como eficaces clulas
presentadoras de antgeno en su forma
nativa.(captulo 3)

2. Inmunoglobulinas libres en los fluidos. Hemos visto que la especificidad

de una inmunoglobulina depende de la regin variable de ambas cadenas, siendo
la reaccin con el antgeno especifico una de sus misiones principales. Por otra parte,
las inmunoglobulinas tienen otras funciones, que dependen de las regiones
constantes (funciones efectoras). Es decir, pudiera suceder que inmunoglobulinas
con la misma especificidad frente a un antgeno, pero de diferentes isotipo, realicen
funciones efectoras distintas. En definitiva, a un mismo antgeno se le puede atacar
de diferentes formas segn el isotipo de la inmunoglobulina.

Las principales funciones biolgicas de las inmunoglobulinas son:

Activacin del complemento
Aglutinacin
Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
Neutralizacin
Opsonizacin
Proteccin de mucosas

La activacin del complemento. El

complemento es un mecanismo inespecfico de la
defensa del sistema inmune (inmunidad innata) que
interviene en muchas reacciones inflamatorias,
citotxicas y de activacin de macrfagos. Se activa
por varios mecanismos (va clsica, activacin
alternativa), Algunas inmunoglobulinas pueden
activar el complemento por la conocida como va
clsica. La activacin del complemento por la va
clsica es llevado a cabo fundamentalmente por la
IgM seguido de la IgG mediante sus fragmentos Fc.
Esta activacin del complemento por anticuerpos,
que estn unidos a la membrana de una clula
infectada o una bacteria, desencadena una accin
citotxica de gran eficacia capaz de destruir la
membrana celular. Por la va alternativa (capitulo
7) pueden activar el complemento la IgG y la IgA.

Aglutinacin. La aglutinacin de
partculas, bacteria y/o virus es otra de
las actividades biolgicas de las
inmunoglobulinas, sobre todo de la
IgM.

Citotoxicidad celular
dependiendo de anticuerpos
(ADCC). Los fenmenos citotxicos
no son slo inducidos por linfocitos T
CD 8+, otras clulas del sistema
inmune como los macrfagos o las
clulas NK pueden destruir tambin
clulas mediante la colaboracin con
anticuerpos. Este proceso se produce
cuando un anticuerpo, generalmente
del tipo IgG y en menor proporcin
IgE reconoce un antgeno en la
membrana de una clula y reacciona
con en ella rodendola (fenmeno
semejante a la opsonizacin), dejando
la fraccin Fc libre. Las clulas con
capacidad citotxica y receptores para
Fc, como las clulas NK y los
macrfagos, se unirn al fragmento
Fc de la inmunoglobulina e inducirn la
citotoxicidad en la clula. En este caso
la citotoxicidad es inducida por las
clulas pero la especificidad de la
reaccin la proporciona el anticuerpo.
En este fenmeno intervienen tanto
el fragmento Fab (unin a los
antgenos de membrana) como el Fc
(unin a la clula efectora: NK,
macrfago)

Neutralizacin. Es el fenmeno por el cual algunos isotipos de inmunoglobulinas como

IgG, IgM e IgA son capaces unirse a una toxina, bacteria o virus y neutralizar su actividad
(captulo 5). En el caso de los virus el fenmeno de neutralizacin permite a los anticuerpos
evitar que el virus infecte una clula al cubrir la parte viral necesaria para el anclaje con
la clula. En este caso slo interviene fragmento Fab.

Opsonizacin. Es el fenmeno por

el cual los anticuerpos que envuelven
un antgeno (bacteria, virus, etc)
activan la fagocitosis mediante los
receptores Fc de los macrfagos,
neutrfilos o polimorfonucleares.

Proteccin de las mucosas. La IgA recubre

las mucosas para protegerlas de la entrada de
agentes infecciosos. Su configuracin en forma de
dmero o de tretrmero, le permite disponer de
entre 4 a 8 sitios de unin al antgeno, lo que la
hace tremendamente efectiva frente a diferentes
antgenos bacterianos, mediante reacciones del
tipo ADCC, ya que la IgA no es bactericida y
mediante su gran capacidad de neutralizar
algunos virus.

ESQUEMA DE ACTUACIN DE LA IgA. La IgA

puede actuar a nivel de la luz intestinal (lumen),
evitando la adherencia al epitelio de virus y/o
bacterias (1), dentro de los enterocitos incluso
neutralizando virus (2) y por ltimo, en el lquido
hstico (3).

CAPTULO 3

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CAPTULO 5

Captulo 4

Bibliografa
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Temario del curso

Temario del curso

CMO SE
ESTUDIAN LAS
INMUNOGLOBULINAS
?

Las inmunoglobulinas porcinas se encuentran en dos formas diferentes: formando

parte del receptor BcR de los linfocitos B o como anticuerpos en el suero, fluidos
corporales y tejidos. Su estudio representa un arma fundamental en Sanidad

Animal.

INMUNOGLOBULINAS DE
SUPERFICIE
Como vimos en el captulo 2 Cmo se
estudian los linfocitos B?, existen varios
mtodos para estudiar las inmunoglobulinas de
membrana de los linfocitos B que forman el
receptor BcR. Los dos mas utilizadas son:

El estudio mediante conjugados

monoclonales o policlonales frente a los
diferentes isotipos de inmunoglobulinas,
marcados con isocianato de
fluorescena y observados al
microscopio de fluorescencia.

El anlisis por citometra de flujo,

utilizando anticuerpos monoclonales
frente a cada isotipo de
inmunoglobulina.

Esquema de funcionamiento del citmetro de flujo para la

deteccin de inmunoglobulinas de superficie en linfocitos
B. Las clulas en suspensin a los que se les han aadido
los diferentes AcM (anti IgA e IgG) pasan a travs de un
tubo muy fino en una sla fila de clulas, y son ledas por el
lser y el haz de luz; el primero identifica los anticuerpos
marcados y el segundo, el tamao de las clulas.

Las inmunoglobulinas libres en suero, calostro,

leche, fluidos, etc. pueden ser estudiadas
como inmunoglobulinas totales, sin
considerar frente a que antgeno reaccionan, o
como anticuerpos especficos frente a
distintos antgenos de inters. Para este
ltimo tipo de estudios, que sin duda es el ms
interesante, se disponen de un gran nmero
de tcnicas que van desde las clsicas de
precipitacin, fijacin de complemento, etc; a las
ms modernas y cada da mas utilizadas
tcnicas inmunoenzimaticas.
Imagen de una aglutinacin en tubo

Las diferencias de sensibilidad,

especificidad, capacidad de utilizacin a
gran escala, etc. son algunos de los
conceptos ms importantes a la hora de
seleccionar una u otra tcnica. As, respecto
a la sensibilidad podemos observar que hay
tcnicas con niveles bajos como las de
precipitacin, de sensibilidad media como las
aglutinacin bacteriana, fijacin de
complemento y otras de sensibilidad mayor
como el ELISA, la seroneutralizacin o la
actividad bactericida.
El desarrollo de la biologa molecular y la
produccin de anticuerpos monoclonales,
ha permitido disponer, en los ltimos aos,
de reactivos de diagnstico de gran
sensibilidad y especificidad, incluso en
forma de KITS, de fcil y sencilla realizacin
e interpretacin.

Sensibilidad de las diferentes

tcnicas para la deteccin de
anticuerpos (g/ml)
SENSIBILIDAD
(g/ml)

MTODO

Precipitacin en gel
Precipitacin en anillo
Aglutinacin bacteriana
Fijacin de complemento

De entre todos los mtodos actualmente

disponibles, destacaremos en este captulo, por
una parte, aquellos que presentan las
mayores posibilidades para llevar a cabo
estudios serolgicos a gran escala y pueden
ser realizados sin necesidad de grandes
medios tcnicos.

Hemaglutinacin pasiva
Inhibicin de la
hemaglutinacin
Inmunofluorescencia
ELISA
Neutralizacin bacteriana

30
18
0,05
0,05
0,01

0,005

0,005
0,0005
0,00005

Por otra parte, repasaremos otros mtodos que permiten estudiar un nmero reducido de
muestras, pero que presentan buenos ndices de sensibilidad, especificidad y que no
requieren gran equipamiento. Por ltimo, veremos una tcnica de referencia para todos los
estudios serolgicos, que precisa de mayor infraestructura y tiempo de realizacin, pero que
debido a su importancia incluimos.
Los principales mtodos que renen estas caractersticas son:

ELISA

ELISA

INMUNOELECTROTRANSFERENCIA O
WESTERBLOT

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA O
INMUNOPEROXIDASA

SERONEUTRALIZACIN

La tcnica inmunoenzimtica ELISA forma parte

de aquellas reacciones serolgicas que utilizan
conjugados para poder visualizar la reaccin
ANTIGENO-ANTICUERPO. El ELISA, se basa
en el uso de anticuerpos marcados con una
enzima (generalmente la peroxidasa), de forma
que los conjugados resultantes tengan actividad
tanto inmunolgica como enzimtica. Al estar
uno de los componentes (antgeno
anticuerpo) insolubilizados sobre la placa, la
reaccin antgeno-anticuerpo quedar
inmovilizada y por tanto, podrn fcilmente
ser revelada mediante la adicin del
sustrato, que al actuar sobre la enzima,
producir un color observable a simple vista o
cuantificable mediante un colormetro.
Existen bastantes KITS comerciales disponibles
y por tanto pueden realizarse estudios
serolgicos sin necesidad de grandes medios.

En la actualidad el ELISA es uno de los

mtodos ms utilizados para el diagnstico
serolgico de distintas enfermedades
infecciosas porcinas.
El mtodo ELISA est recomendado
fundamentalmente para el estudio de
poblaciones. Es una tcnica altamente
sensible y de gran especificidad, que
permite realizar en un corto espacio de
tiempo estudios sobre grandes poblaciones,
de manera sencilla y econmica. Esta tcnica
presenta adems una buena reproducibilidad y
facilidad en la interpretacin de los resultados.

En la primera lnea se observa el suero control positivo y en

la segunda el negativo. Los sueros problema por duplicado
han sido colocados en el resto de la placa, se observan
positivos (azul) y negativos (sin color).

Se han adaptado varios tipos del mtodo ELISA tanto para la determinacin de ANTGENOS
como de ANTICUERPOS:
DETERMINACIN DE ANTGENOS
La modalidad ms frecuente del mtodo
ELISA para la determinacin de antgenos es
el modelo ELISA "Sandwich". En esta forma,
la placa suele ya venir con un anticuerpo fijado
(monoclonal policlonal) frente al antgeno
problema, sobre el que se aadir el macerado
del rgano sospechoso, que en caso de
reaccionar con el anticuerpo de la placa, ser
puesto en evidencia tras la adicin del segundo
anticuerpo marcado con la enzima. Por ltimo,
se aade el substrato para revelar la reaccin.
Fases de la tcnica Elisa Sandwich. (1) Un anticuerpo
monoclonal o policlonal anti antgeno suele estar ya unido a
la placa. (2) se incuba con la muestra problema. (3) se
aade el conjugado. (4) por ltimo el sustrato. Todos los
pasos van precedidos de incubaciones y lavados.

DETERMINACIN DE ANTICUERPOS
Para la determinacin de anticuerpos especficos frente a un determinado antgeno se utilizan
normalmente las siguientes modalidades del mtodo ELISA:

ELISA INDIRECTO.

ELISA COMPETICIN.
ELISA INDIRECTO
Es el mtodo ms utilizado para la
determinacin de anticuerpos. Bsicamente,
consiste en la inmovilizacin a la placa de
ELISA del antgeno (en los Kits ya viene fijado)
del que queremos conocer si en el suero
problema existen anticuerpos especficos. Se
pueden utilizar como antgenos, protenas
virales o bacterianas e incluso virus completos.

Fase de la tcnica Elisa indirecto. (1) El antgeno se pega a

la placa (2) Se aade el suero problema. (3) posteriormente,
el conjugado. (4) y por ltimo, el sustrato.

Cada da es ms frecuente utilizar

exclusivamente las protenas de inters
inmunolgico y no todas las protenas
antignicas. Los pasos siguientes serian la
adicin del suero problema, incubacin y
lavado, adicin del conjugado, incubacin y
lavado, finalizando con la adicin del
sustrato, el frenado de la reaccin y la
lectura.

ELISA DE COMPETICIN
En este sistema tambin es muy utilizado para
la deteccin de anticuerpos especficos. Se
parte de un anticuerpo (monoclonal o
policlonal), frente a un antgeno conocido, que
previamente ha sido inmovilizado en la placa.
Se denomina de competicin ya que el suero
problema es incubado previamente con el
antgeno, antes de incubarlo con el antisuero
fijado en la placa, y por tanto compite con l.
Los pasos siguientes es la adicin e incubacin
del conjugado, lavado y finalizacin con el
sustrato y lectura.
Fases de la Tcnica Elisa de competicin. (1) Se incuba el
suero problema con el antgeno. (2) La mezcla anterior se
deposita sobre los pocillos donde previamente se ha fijado
un suero anti antgeno (3) se aade el conjugado. (4)
despus, el sustrato. En este caso la ausencia de color
sera positivo.

INMUNOELECTROTRANSFERENCIA O
WESTERBLOT
La inmunoelectrotransferencia "westerblot" o
"Immunoblotting" es una tcnica
inmunoenzimtica que se utiliza para la
deteccin de anticuerpos especificos. Se
recomienda cuando no hay que estudiar un
gran nmero de sueros o para analizar
sueros dudosos por otras tcnicas. Este
mtodo utiliza como soporte antignico filtros de

nitrocelulosa, donde las protenas del antgeno

han sido previamente transferidas, manteniendo
total o parcialmente sus propiedades
antignicas.

Material necesario para la realizacin de la

inmunotransferencia: Tiras de nitrocelulosa antigenadas,
Tampon PBS, sueros de referencia positivo y negativo,
conjugado, solucin sustrato y soporte plastico para
realizar todos los procesoso.

Para la obtencin de los filtros antigenados, las protenas son separadas previamente mediante
electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) y transferidas a continuacin, mediante
corriente elctrica, al filtro de nitrocelulosa. Este filtro es recortado en pequeas tiras, que
constituirn el soporte de tiras antigenadas. Sobre cada una de ellas se incubara el suero problema
y los sueros control positivo y negativo. Tras un periodo de incubacin y posterior lavado se agrega
un conjugado anti inmunoglobulina G o M (segn cual de ella se desee estudiar). Si hay
inmunoglobulinas unidas a las protenas antignicas sern reveladas por el conjugado. Se podr
observar una o varias lneas de precipitacin especificas segn existan anticuerpos frente a
una o varias protenas. La especificidad se demuestra al reaccionar con las protenas cuyo
peso molecular coincida con las protenas antignicas.
Es una tcnica muy sensible, de fcil
manejo, ejecucin e interpretacin. No
necesita de equipos especial para su
realizacin.
Esta tcnica est fundamentalmente
indicada en el estudio de un nmero no muy
elevado de sueros. Al no necesitar ningn tipo
de equipo especial, es de fcil realizacin
incluso con pocas condiciones laboratoriales.
En la actualidad existen algunos Kits
disponibles, pero la oferta ir progresivamente
en aumento.
Fase final de la tcnica. Se pueden observar la aparicin de
las diferentes bandas con las que ha reaccionado el suero
problema y los sueros control.

LA INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA O
INMUNOPEROXIDASA
La inmunofluorescencia indirecta o la
inmunoperoxidasa, segn se utilice el isocianato
de fluorescena o la peroxidasa, son tcnicas
que utilizan la especificidad de la histologa
(pueden ver la clula y comprobar que la
reaccin inmunolgica se produce en un
sitio especifico) con la sensibilidad de las
tcnicas inmunolgicas.

Estas tcnicas utilizan normalmente cultivos

celulares (primarios o de lneas estables)
infectados con el virus o la bacteria sobre la que
se desea comprobar si hay o no anticuerpos en
el suero problema. Tras la incubacin con el
suero problema; si hay anticuerpos se unirn a
las clulas infectadas pero no a las no
infectadas (especificidad histolgica
observable). La unin se visualiza tras la adicin
de un conjugado anti-inmunoglobulina marcado
con isocianato o con peroxidasa y la posterior
observacin al microscopio de fluorescencia o
convencional respectivamente.
Tcnica de inmunofluorescencia indirecta. Clulas MS
infectadas con el virus de la Peste porcina africana. Se
puede observar como los anticuerpos se han unido a la
clulas infectadas, destacndose en el citoplasma unas
zonas con una intensidad mayor, que corresponden a zonas
de mayor replicacin viral, y por tanto mayor fijacin de
anticuerpos.

SERONEUTRALIZACIN
Este mtodo est considerado de referencia para cualquier estudio serolgico pues es el que
ms se correlaciona entre la respuesta "in vitro" y la respuesta "in vivo". En esta prueba se
puede valorar la capacidad que tienen los anticuerpos presentes en un suero problema para
neutralizar la actividad biolgica de un antgeno.
Los mtodos descritos hasta ahora permiten valorar la capacidad que un suero determinado tiene
para reconocer un antgeno concreto, en la seroneutralizacin se avanza un paso ms y se
indica la capacidad que tiene un suero para neutralizar la actividad biolgica del antgeno.
Estos mtodos son ampliamente utilizados en los laboratorios para valorar la capacidad de un
suero frente a toxinas bacterianas, bacteria y/o virus. Estas pruebas son ms laboriosas,
requieren de cultivos celulares, esterilidad, adems de ser generalmente ms lentas que todas las
anteriores. Sin embargo son altamente especificas y sensibles, y se consideran las pruebas de
referencia para cualquier valoracin serolgica.
En el caso de los virus, se puede medir la
capacidad que un determinado suero tiene para
neutralizar la infectividad del virus sobre una
lnea celular sensible. Se aade una mezcla
de virus a una concentracin constante que
previamente ha estado en contacto con
diferentes diluciones del suero problema sobre
las clulas. Se van observando las clulas
sobre la que se han aadidos las distintas
diluciones para ver si el virus las ha infectado o
no mediante la tincin con un conjugado o por el
efecto citoptico. De esta forma se puede medir
la capacidad de neutralizacin viral de un suero
problema.
Tapiz celular infectado.

CAPTULO 5

Captulo 4

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Temario del curso

Copyright Dr. Snchez-Vizcano 2001. Todos los derechos reservados.

Dep. Legal: B-19442-2001. ISBN: 84-699-4740-0

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Temario del curso

QU SON LOS
SEROPERFILES?

Se conocen como seroperfiles, los estudios serolgicos seriados realizados en

una explotacin, para conocer su perfil inmunolgico y sanitario.

Los seroperfiles se basan en la

deteccin de los anticuerpos circulantes
mediante cualquiera de las tcnicas
actualmente disponibles, con el fin de
poder obtener informacin sobre la
situacin del animal en ese momento, o
en estados previos. Estos estudios son
cada da ms utilizados para el control
sanitario de las explotaciones porcinas,
representando en muchos casos un
importante medio para reducir costes y
aumentar el nivel sanitario.
Los anlisis serolgicos permiten, entre
otras posibilidades: conocer la situacin
sanitaria, elegir el mejor momento para
vacunar, controlar los programas
vacunales y evitar la entrada de
enfermedades en la explotacin.

Para hacer un buen estudio serolgico es una explotacin debemos tener en cuenta, en
primer lugar, los siguientes puntos:
1. Qu deseo conocer de mi explotacin?. Cul es la pregunta que quiero hacer?.
Puede resolver estas dudas la serologa?
2. A qu animales y en qu momento les debo preguntar?.
3. Qu nmero de muestras debo recoger y como hacerlo?.
4. Qu diferencias hay entre las tcnicas de laboratorio?

1. Qu deseo conocer de mi
explotacin?
Est es la primera pregunta que
debemos tener clara antes de
iniciar un estudio. Qu queremos
saber de nuestra explotacin?.
Como veremos mas adelante, la
serologa nos puede ayudar para
conocer algunas cosas, pero no
para otras. Es importante
conocer estas limitaciones. La
dinmica de aparicin de los
anticuerpos, la dificultad para
diferenciar anticuerpos vacunales
de anticuerpos de enfermedad, el
tiempo que tardan los anticuerpos
en aparecer tras una infeccin, etc.
son algunas consideraciones que
debemos siempre recordar al
planificar el estudio serolgico.
Deseo conocer la presencia o no de alguna enfermedad? Cmo va el
programa vacunal? Cul es el estado sanitario de los animales de
reposicin?, etc. Estas son algunas de las preguntas que se pueden formular y
para las que los estudios serolgicos son indicados. En las aplicaciones de la
serologa veremos como podemos plantear estos estudios.

2. A qu animales y en qu momento les

debo preguntar?
Esta es otra pregunta importante que
debemos tener definida. Recordar que los
animales de las distintas fases de
produccin pueden presentar diferentes
seroperfiles; luego debemos preguntar a los
animales que puedan contestar a nuestra
pregunta. Como ejemplo, debe recordarse
que las inmunoglobulinas no atraviesan la
placenta, por lo que el lechn no presenta
inmunoglobulinas hasta que tome el calostro
materno.

A partir de la toma del calostro ira adquiriendo inmunidad humoral. Esta respuesta humoral ser
el reflejo de la inmunidad de la madre todava no la del lechn. La mxima adsorcin del
calostro se produce entre las 6 y las 36 horas despus del parto, siendo la presencia de
inmunoglobulinas en sangre detectada entre las 12 y 24 horas despus de ingerir el calostro,
mantenindose en el mbito sanguneo por tiempos muy variables dependiendo del tipo de
inmunoglobulina, estatus inmunolgico de la madre, tipo de agente infeccioso, etc. En general se
pueden encontrar inmunoglobulinas calostrales entre las 3, 8 y 20 semanas de vida del animal. Por
este y otros motivos es importante saber, dependiendo de la pregunta que queramos realizar, en
que edad tomar la muestra y a que animales: Madres, lechones, cebo, etc.

3. Qu nmero de muestras son necesarias para un estudio serolgico?

Esta es otra de las preguntas clave para que los resultados sean significativos de la
situacin. Adems, de tomar muestras de las diferentes zonas de la explotacin y de las
diferentes reas productivas, es tambin importante definir cuantas muestras
necesitar de cada zona. Dos aspectos son importantes a la hora de evaluar una
explotacin porcina: Aquellos encaminados a conocer si existe o no una determinada
enfermedad en la explotacin y los estudios que en caso afirmativo, pretenden
conocer su prevalencia. En otras palabras las preguntas seran: Existe tal o cual
enfermedad en mi explotacin? En caso afirmativo Cul es su prevalencia?. Para
contestar a una u otra pregunta es vital determinar el tamao de la muestra que debemos
analizar. Este tamao de muestra tambin depender del grado de precisin que deseemos
obtener. Para estos estudios existen tablas (ver otras fuentes de informacin) que indican el
nmero de muestras que necesitamos en funcin de la prevalencia esperada, la precisin y
el nivel de confianza deseado. El nmero de muestras necesarias vara mucho
dependiendo del nivel de confianza que deseemos obtener y la prevalencia que
sospechemos. En general, desde un punto de vista prctico y sencillo, se pueden aplicar
las siguientes cifras para un muestreo serolgico:

Para reproductoras:
En explotaciones con menos de 25 animales: Se estudiaran todos
En explotaciones entre 25 y 100 reproductoras: Se tomaran 25 muestras que en las
siguientes determinaciones irn rotando.
En explotaciones con mas de 100 reproductoras: 30 muestras y se rotarn.
En cebo:
Al menos 30 muestras por cada rea de cebo.

La otra pregunta sera: qu tipo de muestra necesito y como tomarla?. Los

seroperfiles se llevan a cabo fundamentalmente a partir del suero de los animales,
aunque a veces tambin interesa conocer la cantidad de inmunoglobulinas
presentes en el calostro y/o en la leche materna. Las muestras de calostro se
debe recoger durante las 24 horas despus del parto. Si se va a remitir a
laboratorio de forma inmediata conviene refrigerarlo y enviarlo con refrigerante. Si el
envi se realizar en los das siguientes se debe congelar y enviar posteriormente
bajo refrigeracin.
La sangre, para la obtencin del suero,
se suele extraer fundamentalmente de:
Vena marginal de la oreja. Mediante
lanceta y posterior recoleccin en tubo o
directamente por puncin con jeringas y
aguja de entre 16 mm y 25 mm. La ventaja
de este sistema es su sencillez, pero
presenta como principales dificultades la
poca cantidad que se suele poder
obtener y las altas contaminaciones que
se producen.
Vena del rabo. Se utiliza jeringas (agujas
de 25 mm), tubos de vaco o amputacin
parcial. Es un mtodo relativamente

sencillo pero del que slo se pueden

obtener alrededor de 0, 5 ml. Tampoco
es el ideal.
Vena yugular. Es uno de los mtodos
ms utilizados sobre todo en madres. Se
utilizan jeringas, "vacutainer" o "monovet"
con agujas adecuadas al tamao del
animal. Se pueden extraer de 10 a 30 ml.
Vena Cava. Se utiliza para sangrar todo
tipo de animales desde lechones a
adultos y sobre todo cuando se necesita
gran cantidad de sangre. Las agujas
cambiaran segn el peso del animal (10
Kg. 25 mm, 45 Kg. 38 mm, 100 Kg. 50 mm,
madres 100 mm.)
Por ltimo, Qu hago con la sangre una
vez extrada?. La sangre debe quedar a
temperatura ambiente (en una sombra, en
zona fresca) hasta su coagulacin
(aproximadamente entre una y dos horas),
despus debe mantenerse a + 4 C
(frigorfico) toda la noche. Posteriormente,
es aconsejable centrifugarla o al menos
separar el suero del coagulo antes de su
envo al laboratorio. Los tubos deben ir
claramente marcados y empaquetados. Si
el estudio que se desee llevar a cabo
implica la realizacin de dos
determinaciones con un intervalo de 21
das (seroconversin) sera mejor congelar
el suero una vez coagulado y separado del
coagulo y esperar a la siguiente toma para
hacer la misma operacin y enviar ambos
sueros a la vez. Un buen diagnstico
depende en gran medida de una buena
muestra. Evitar contaminaciones o
alteraciones del suero siempre es una
garanta para el diagnstico.

4. Qu diferencia hay entre las tcnicas de laboratorio?

Como hemos reflejado al principio de este captulo, hoy da existen multitud de tcnicas de

laboratorio disponibles para llevar a cabo un estudio serolgico. La capacidad diagnstica de un

mtodo, viene determinada por el clculo de la sensibilidad y especificidad de ese
determinado mtodo, frente a la tcnica considerada de referencia. Hay algunos conceptos que
convienen recordar para saber valorar cada una de las tcnicas disponibles. Estos conceptos son:
Sensibilidad: Es la capacidad de un mtodo para detectar sueros positivos frente a una
determinada enfermedad. La sensibilidad permite que todos los positivos sean detectados.
Especificidad: Es la capacidad de un mtodo para diferenciar sueros positivos de los sueros
negativos en una determinada enfermedad. La especificidad evita dar resultados falsos
positivos. Ningn negativo debe ser considerado por la tcnica como positivo.
Valor predictivo: Es la capacidad de una tcnica para distinguir entre animales que estn
padeciendo una determinada enfermedad de los que no la estn padeciendo. En definitiva,
predecir la sensibilidad y especificidad para un caso negativo o para un caso positivo. El
valor predictivo puede ser:
Positivo: Es la frecuencia de la enfermedad entre los animales con resultado
positivo.
Negativo: Es la frecuencia de ausencia de la enfermedad en los animales con
resultado negativo.
Eficacia: Porcentaje de animales clasificados correctamente con un mtodo determinado.
Positivo verdadero: Animal enfermo correctamente clasificado por la tcnica.
Positivo falso: Animal incorrectamente clasificado por la tcnica empleada.
La valoracin de los parmetros de
sensibilidad, especificidad y valor
predecible se realiza comparando los
resultados de una tcnica de referencia, o
de la enfermedad real con los obtenidos
con la tcnica que deseemos valorar
mediante la siguiente formula:

La sensibilidad y especificidad de una tcnica ser mayor

cuanto mayor puedan ser los diferencias obtenidas en la
distribucin de las poblaciones positivas y negativas que
establecen el punto de corte.

Tcnica Control o Infeccin real

Tcnica objeto
de
valoracin

A: Positivos en que coinciden ambas

tcnicas.
B: Positivos reales que la tcnica objeto de
valoracin da como negativos.
C: Positivos de la tcnica objeto de
valoracin que son realmente negativos.
D: Negativos por ambas tcnicas.
A
SENSIBILIDAD =

x 100
A+B
D

ESPECIFICIDAD =

x 100

Sensibilidad y especificidad baja

C+D
Valor predictivo para positivo:
A/A+C
Valor predictivo para negativos:
C/B+D

Sensibilidad y especificidad media

Sensibilidad y especificidad alta

De las tcnicas actualmente en uso, las que presentan mejores niveles de sensibilidad y
especificidad son la seroneutralizacin y las tcnicas de ELISA. Aunque dependiendo del
laboratorio, se pueden usar otras y obtenerse resultados semejantes. Lo importante en este sentido,
es recordar que para comparar resultados de evolucin, diferentes estados, etc., conviene
que siempre se hayan estudiado los sueros con la misma tcnica e incluso del mismo
laboratorio, pues de lo contrario podran obtenerse resultados diferentes y confundir el diagnstico.

CAPTULO 5
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Bibliografa

Temario del curso

Temario del curso

QU
APLICACIONES
PRCTICAS
PRESENTAN LOS
SEROPERFILES?

Los estudios serolgicos, en las explotaciones porcinas, se utilizan

fundamentalmente para:

Prevenir la entrada de enfermedades en los animales de reposicin.

Elegir el momento de vacunacin ms adecuado en la explotacin.

Hacer seguimientos de los programas vacunales, as como conocer el

estado sanitario de la explotacin.

Prevencin de entrada de
enfermedades.
Prevenir la entrada de enfermedades en la
explotacin es uno de los temas que puede
resolver la serologa. Una de las principales
vas de entrada de enfermedades en una
explotacin se deben a los animales de
reposicin sin cuarentena ni anlisis
serolgicos. El primer paso para evitar
infecciones en una explotacin sera no
incorporar animales enfermos y/o
portadores. Estudiar el suero de un animal
antes de integrarlo con los existentes evitar
contagiar la explotacin, previniendo perdidas
econmicas importantes. El conocimiento
serolgico de la explotacin origen es
recomendado, as como la realizacin de un
periodo de cuarentena entre 4 a 8 semanas,
segn la enfermedad que queramos controlar.
Conviene recordar que cada enfermedad
infecciosa tiene un periodo de incubacin y otro
de eliminacin que vara considerablemente.

PRINCIPALES APLICACIONES DE LOS

SEROPERFILES

Prevencin de entrada de
enfermedades.

Eleccin del momento de

vacunacin.

Seguimiento de un
programa vacunal.

Conocimiento del estado

sanitario.

Vigilancia serolgica de
reas.

Indicativos de proteccin.

Una sola determinacin, el da de la llegada

de los animales, no es suficiente para
conocer el estado sanitario del animal,
podran encontrarse en un periodo de
incubacin o iniciando la infeccin y
obtenindose resultados negativos. De ah la
importancia de realizar una buena
cuarentena, dedicando el tiempo necesario
para permitir a cualquier enfermedad que se
exprese clnica y/o serolgicamente. Los
estudios de presencia o no de anticuerpos,
frente a las distintas enfermedades durante la
cuarentena, nos permitir conocer el estado
sanitario del animal antes de incorporarlo a la
explotacin.
El tiempo de cuarentena idneo depende del agente
infeccioso, su periodo de incubacin y su capacidad de
expresin. En general, de 4 a 8 semanas es el tiempo
recomendado para las enfermedades porcinas

Eleccin del momento de

vacunacin.
La eleccin del momento de vacunacin es
otra de las aplicaciones ms interesante que
ofrece la valoracin serolgica de una
explotacin.

En el momento ideal de vacunacin (zona amarilla) los

anticuerpos maternales no interfieren con la vacunacin,
pero todava son protectivos (lnea azul). Esta situacin
permite el desarrollo de los anticuerpos vacunales (lnea
verde), evitando la infeccin y la posterior aparicin de los
anticuerpos de infeccin.

Determinar el momento ms idneo para

llevar a cabo la vacunacin de los
lechones, es otro de los estudios que las
determinaciones serolgicas pueden resolver.
Uno de los objetivos de este estudio es
encontrar la ventana inmunolgica, donde el
animal deja de estar protegido por los
anticuerpos maternales y el tiempo en que
comienza a producir sus propios
anticuerpos. Si vacunamos, cuando existen
muchos anticuerpos maternales, nos
exponemos a que la vacuna pueda ser
interferida y no sirva para inmunizar
adecuadamente, si por el contrario esperamos
demasiado, podemos dejar al animal
desprotegido, permitiendo la aparicin de la
enfermedad. Cundo es el momento?. Es
fundamental conocer cuando los anticuerpos
maternales presentan niveles bajos (no
protectivos) para adelantarnos en la
administracin de la vacuna.

Grfica modelo de la evolucin de los anticuerpos

maternales y aparicin de los anticuerpos de infeccin (a
partir de los 60 das) en la E. A. Se puede observar la
zona critica de infeccin, generalmente, entre los 35 a 40
das.

Seguimiento del programa vacunal.

Para llevar a cabo este estudio se tomaran
sueros de diferentes lechones en diferentes
das tras el nacimiento, desde el da 0 hasta
el da 40. De esta manera se puede conocer el
estado inmunitario de los lechones y en qu
momento presentan el ndice mas bajo de
anticuerpos. As, se podr calcular de forma
adecuada el momento de la vacunacin. Otra
forma de poder establecer el seroperfil de los
lechones, sera elegir un numero de
lechones de diferentes camadas y evaluar
sus anticuerpos frente a la enfermedad, que
se desea estudiar, durante distintos das del 0
al 40, pero en este caso, siempre a los mismos
animales.
Hay que recordar que los perfiles
serolgicos sirven para conocer la situacin
sanitaria en las condiciones productivas del
estudio. Si alguno de esos parmetros
cambiara (distinta vacuna, edad de
vacunacin, diferentes animales, etc), tambin
podra cambiar el resultado de los perfiles,
por lo que habra que realizar los estudios
serolgicos cada vez que se realicen cambios
en la explotacin.

Las vacunas son importantes armas para evitar la difusin de las enfermedades y
mantener el sistema inmune estimulado. Pero para que realmente sean efectivas deber
utilizarse de forma adecuada.

Conocimiento del estado sanitario.

Otra de las aplicaciones de la serologa es conocer la presencia o no de enfermedades
infecciosas y su evolucin en una explotacin determinada. Conocer el estado sanitario de

nuestra explotacin debe ser uno de los principales objetivos para incrementar la calidad y
reducir los costes de produccin. Para ello los estudios serolgicos, conjuntamente con las
inspecciones en matadero e incluso la monitorizacin con animales centinelas y su posterior
evaluacin serolgica, son buenas armas de estudio. Sin embargo, para llevar a cabo estos
estudios de vigilancia epidemiolgica, recordad que los anticuerpos tardan un tiempo en
aparecer y poder ser detectados mediante las tcnicas convencionales. Este tiempo oscila entre 10
a 30 das, por ello la serologa no es la tcnica ms adecuada para establecer un diagnstico
precoz de una infeccin, ya que puede darse el caso de que todas las muestras sean negativas
por estar los animales en medio del perodo de incubacin y la enfermedad este incubndose.
La serologa es mas til para detectar una
situacin larvada o crnica que para una
situacin aguda. Para estudiar la presencia de
una determinada enfermedad en la explotacin,
se deben realizar dos determinaciones del
mismo animal con una diferencia de alrededor
de 20 das. En todos los casos, excepto en la
Enfermedad de Aujeszky, en la que gracias a
las vacunas gE negativas, que actualmente se
utilizan, se puede diferenciar el animal enfermo
o portador del animal vacunado, y por tanto en
una sola determinacin diferenciar la situacin.

Gracias a la utilizacin de vacunas gE negativas y

mtodos de ELISA indirecto de competicin para la
valoracin de anticuerpos anti gE y gB, se puede
determinar, en la Enfermedad de Aujeszky, mediante una
sola determinacin, si un suero corresponde a un animal
(1) vacunado (slo tiene anticuerpos anti gB), (2)
infectado (tiene anticuerpos anti gB y anti gE), (3)
negativo a enfermedad y no vacunado (no tiene
anticuerpos ni frente a gE, ni gB).

En los dems casos, como no existen vacunadas marcadas , para llevar a cabos este tipo de
estudios se deben realizar determinaciones del mismo animal, con intervalos de tres o cuatro
semanas, y valoracin del titulo de anticuerpos que se obtiene en cada determinacin. En
estos estudios no vale el resultado positivo o negativo, se necesita conocer el titulo (cantidad
de anticuerpos) obtenido en cada determinacin. As, podremos conocer con total garanta la
situacin de las enfermedades infecciosas que puedan afectar la explotacin.
Tras obtener los resultados de ambas determinaciones puede ocurrir:

1. Que el ttulo de la primera

determinacin sea superior al de la
segunda. En este caso el animal
estara recuperndose de una
infeccin pasada (siempre que no se
haya vacunado) seronegativizacin.
2. Que el ttulo de la primera
determinacin sea inferior al de la
segunda. El animal estara en un
proceso agudo de infeccin donde el
sistema inmune estara respondiendo
adecuadamente. Seroconversin.

SERONEGATIVIZACIN

3. Que en ambas determinaciones se

obtengan ttulos semejantes. En este
caso se trata de una respuesta basal
y dependiendo de que enfermedad ha
sido estudiada podra tratarse de un
posible animal portador. (estado basal)
En definitiva, con este tipo de estudios se
puede conocer si el animal est terminando
o iniciando una fase aguda de una
determinada infeccin, si es portador de la
misma, o si se encuentra en perodo de
recuperacin.

SEROCONVERSIN

ESTADO BASAL

Vigilancia serolgica de reas

Igualmente, la serologa est indicada para conocer el estado sanitario de un rea que se ha visto
afectada por una determinada enfermedad y sobre la que hay que recomendar o no el
levantamiento de las restricciones al movimiento de animales. Para este tipo de estudios se realizan
los anlisis serolgicos de las distintas explotaciones del rea, generalmente a partir de los 30 das
posteriores al ltimo caso. Si la serologa es negativa se levantaran las restricciones.

Indicativos de proteccin.
Como veremos en el captulo 7 el grado de
proteccin real "in vivo" frente a un
determinado agente infeccioso, est
condicionado a la capacidad de la respuesta
tanto humoral como celular de un determinado
animal, de ah que la valoracin
exclusivamente humoral no sea un dato
excesivamente seguro, sobre todo en los casos
negativos. Es decir, cuando existe una
respuesta humoral baja, no necesariamente
implica que el animal no est protegido. No
obstante, la valoracin de la respuesta humoral
y en particular la valoracin de los anticuerpos
neutralizantes son indicativas de la capacidad
de proteccin frente a un determinado agente
infeccioso. La seroneutralizacin es la
tcnica de eleccin para valorar el nivel de
proteccin de un animal. No obstante, la
valoracin de anticuerpos especficos,
mediante otros mtodos serolgicos, puede
indicar el grado de proteccin de los animales,
pero su correlacin es inferior a la obtenida por
seroneutralizacin.

En la tcnica de seroneutralizacin, se valora la

capacidad del suero problema (a diferentes diluciones)
para neutralizar la infectividad de un virus, sobre una
lnea celular sensible. Si el anticuerpo problema
neutraliza el virus, no habr replicacin viral (ausencia
de efecto citoptico) si no lo neutraliza, habr replicacin
viral (efecto citoptico). En los virus que no producen
efecto citoptico, la posible replicacin viral se observa
mediante tcnicas de inmunofluorescencia o peroxidasa.

OTRAS APLICACIONES DE LA SEROLOGA.

La serologa es tambin utilizada para el estudio de los grupos sanguneos mediante tcnicas
de hemlisis. En el cerdo se han descrito 15 sistemas de grupos sanguneos, identificndose
con las letras que van desde la A hasta la O, siendo el ms abundante el grupo A. La sustancia A
y O son antgenos solubles que se encuentran en el suero de los cerdos y que se adsorben sobre
los eritrocitos de cada animal tras el nacimiento. Existen anticuerpos anti A. As, en los cerdos A
negativos pueden presentarse anticuerpos anti A y en el caso de recibir una transfusin de un A
positivo producirse un colapso transitorio con hemoglobinuria.
Los grupos sanguneos estn regulados bajo el control de dos locus. Uno llamado locus A, que
contiene dos alelos: A y O. El otro, denominado locus S, de secretor, que tambin tiene dos alelos:
el S y uno recesivo denominado s. El locus S, controla la expresin del sistema A, de manera que
slo se expresaran A u O si el animal presenta un gen recesivo s.
Los genotipos identificados hasta la fecha son:
AA

AO

OO

SS

Ss

ss

De estos genotipos se han podido identificar diferentes combinaciones de animales. As, sern:
Eritrocitos A positivos las combinaciones:
AASS, AASs, AOSS, AOSs

Eritrocitos O positivos:
OOSS, OOSs
Eritrocitos A y O negativos:
Aass, OOSS, Ooss.
CAPTULO 5
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LAS CITOCINAS

Se denominan citocinas al conjunto de protenas que secretan diferentes

clulas, fundamentalmente del sistema inmune, como respuesta a una
estimulacin inmunolgica o como seal intercelular tras la estimulacin
de una de ellas. Las citocinas presentan gran variedad de funciones y
son de gran importancia en la respuesta inmune, tanto natural o innata
como adquirida.

Se han agrupado bajo el nombre genrico

de citocinas todas las protenas,
generalmente glicosiladas y de bajo peso
molecular, secretadas por las clulas del
sistema inmune, fundamentalmente por
monocitos y linfocitos T, aunque tambin
producen citocinas otras clulas no
inmunes, como: clulas endoteliales y
fibroblastos. Anteriormente, se
denominaban las citocinas en funcin del
origen de la clula secretora, as se
definieron como: linfocinas (producidas
por linfocitos) monocinas (monocitos) o
dependiendo de su actividad:
quimiocinas, interleucinas, interferones.
Hoy da se conoce que la misma citocina
pueden estar producida por distintas

LAS CITOCINAS PUEDEN ACTUAR COMO:

1. Mediadores de la respuesta inmune
innata (inflamacin, quimiotaxis,
activacin de macrfagos, clulas
NK) y adquirida (humoral y celular).
2. Reguladores de la activacin,
proliferacin y diferenciacin de los
linfocitos.
3. Estimuladoras del crecimiento de
los precursores hematopoyticos.

RECEPTORES DE LAS CITOCINAS.

MECANISMOS DE ACTIVACIN

clulas e incluso que un mismo tipo de

citocina puede realizar funciones diversas.
De ah, que su clasificacin en virtud de la
clula origen o de su funcin ha dejado de
utilizarse, para denominarlas con el trmino
genrico de CITOCINAS, que engloba a
los productos secretados por las diferentes
clulas y a todas sus funciones
En la ltima dcada, gracias al desarrollo
de las tcnicas moleculares que han
permitido la clonacin de muchas citocinas,
as como su anlisis y cuantificacin, se ha
avanzado mucho en el conocimiento de
las citocinas, tanto en sus aspectos
estructurales como funcionales, sobre
todo en la especie humana y en el ratn.
En la especie porcina, tambin se ha
incrementado notablemente en el
conocimiento de un gran numero de
citocinas en los ltimos aos. En este
captulo, veremos la estructura, funcin y
valoracin de las citocinas de forma
general, dedicando especial atencin al
repaso especfico de las citocinas porcinas.

1. Unin de la citocina al receptor.

Actuacin de las Citocinas A: Autocrina; E:

Endocrina; P: Paracrina. La accin de las citocinas es
predominantemente de carcter local (autocrina y
paracrina) y en menor proporcin Endocrina

La actuacin de las citocinas es semejante a las

de las hormonas, de hecho tambin se conocen
a las citocinas como las hormonas del
sistema inmune. Las citocinas estn implicadas
en la respuesta inmune innata o natural
mediante la activacin de los macrfagos y de
las clulas NK induciendo procesos inflamatorios
y quimiotcticos , as como en la respuesta
inmune adquirida, tanto humoral como celular,
actuando sobre los linfocitos T y los linfocitos B y
facilitando la comunicacin entre las diferentes
poblaciones celulares. La principal diferencia
entre las citocinas y las hormonas es, que las
primeras actan sobre diferentes poblaciones
celulares y tejidos, mientras que las
hormonas, suelen actuar sobre un solo
rgano. Adems, una sola clula puede producir
diferentes citocinas, cosa que no ocurre con la
produccin de hormonas.

Por ultimo, las citocinas suelen actuar, fundamentalmente, de forma local, tanto sobre la misma
clula que las produce (actividad autocrina) como sobre las clulas vecinas (actividad
paracrina), ms que en acciones sobre clulas y tejidos distantes de su produccin (actividad
endocrina). Esta situacin es, sin embargo, ms comn en las hormonas. No obstante,
algunas citocinas, especialmente de efectos pro-inflamatorios como la IL-1 y el TNF, actan
mediante difusin a travs de la sangre en clulas diana distantes (actividad endocrina).
CUANTOS TIPOS SE CONOCEN?
En los ltimos aos se han descrito varios tipos de citocinas e incluso se han clonado un
gran nmero de ellas. As, en la especie humana y el ratn se han clonado 36 citocinas,
aunque en la especie porcina solamente se disponen de 19.
NMERO DE CITOCINAS CLONADAS

CITOCINAS CLONADAS HASTA LA FECHA

Especie humana y murina:

36

TNF-(1989)

TGF2 (1993)

Especie Bovina:

23

IL-1- (1990)

TGF3 (1988)

Especie Ovina:

20

IL-1- (1993)

AMCF-II (1992)

Especie porcina:

19

IL-2 (1991)

IL-12 (1997)

Especie felina y equina:

11

IL-4 (1993,1994)

IL-15 (1998)

Especie avcola:

Especie canina:

IL-6
(1991,1992,1993,1994)

GSC-F (1995)

IL-8 (1994,1992)

VEG-F (1995)

TGF1 (1992)

GM-CSF (1995)

Especies acucolas:

4 (en
peces)

Las distintas familias de citocinas se agrupan segn el tipo de receptor, aunque debido a que
los diferentes tipos de receptores estn ligados a funciones distintas, la clasificacin actual
de las citocinas es una mezcla estructural y funcional. As, las citocinas: IL 2, IL 4, IL 7, IL 9
y la IL 15 comparten receptor y funcin comn, as comparten el receptor de cadena (c CD
123) el cual se encuentra ligado a la funcin de activacin del crecimiento de linfocitos T. Igual
ocurre en el caso de las citocinas: IL 3, IL 5 y GM-CSF que comparten el receptor de cadena

(c) el cual est ligado a las funciones de proliferacin y diferenciacin de precursores

hematopoyticos.
CLASIFICACIN DE LOS RECEPTORES DE MEMBRANA DE LAS CITOCINAS

1. Receptores de factores de crecimiento hematopoytico. Pertenecen a la familia

de receptores , y . Se han reconocido en este grupo, las siguientes
citocinas: IL 2, IL 3, IL 4, IL 5, IL 6, IL7, IL 9, IL 13, IL 15, GM-CSF (Factor
estimulador de colonias: Granulocito Macrfago) y G-CSF (Factor estimulador de
colonias de granulocitos).

2. Receptores de Interfern. Tienen receptores y Pertenecen a esta familia:

IFN, IFN, IFN.

3. Receptores de factores de crecimiento transformante (TGF). Pertenecen a esta

familia: TGF y TGF

4. Receptores del factor de Necrosis tumoral (TNF). Pertenecen: (TNF) y (TNF).

5. Receptores de la superfamilia de las inmunoglobulinas. Pertenecen a esta
familia: IL 1, IL 1 , IL 16.

6. Receptores de quimiocinas (receptores siete tramos): IL 8, Factor activador de las

plaquetas (PAF).
Desde un punto de vista funcional las citocinas se agrupan en los siguientes grupos
cuyas acciones y mecanismos de actuacin revisaremos en los temas siguientes:
Mediadoras de la inmunidad natural y de la inflamacin
Mediadoras de la Hematopoyesis
Mediadoras de la quimiotaxis
Mediadores de la activacin, proliferacin, diferenciacin y muerte de los
linfocitos T y B.
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CMO
INTERVIENEN LAS
CITOCINAS EN LA
RESPUESTA
NATURAL O INNATA?

Las citocinas juegan un papel fundamental en la respuesta natural o

innata mediante mecanismos de accin directa frente al agente invasor,
en la fase temprana de la infeccin, o mediante mecanismos
inmunoreguladores que llevan consigo la activacin de las clulas NK y
de los monocitos-macrfagos con la consiguiente liberacin posterior de
ms citocinas.

Si un antgeno atraviesa las barreras fsicas

y qumicas se pondr en marcha la
inmunidad natural. La inmunidad natural es
la primera barrera inmunolgica no
especifica del cerdo. En este tipo de
respuesta, las citocinas juegan un papel
de gran importancia tanto de forma
directa, por ejemplo, evitando la replicacin
viral gracias al interfern (IFN), como
mediante diversos mecanismos
inmunoreguladores que actan, entre otras
formas, como iniciadores de la inflamacin,
elevando la temperatura corporal, activando
las clulas NK y los macrfagos. Las
citocinas que actan en esta fase son
fundamentalmente producidas por los
monocitos-macrfagos y por otras clulas no
inmunes como los fibroblastos y las clulas
endoteliales.
Las principales citocinas que intervienen
en la respuesta natural son:

IL 1
IL 6
IL 12
IL 16
FACTOR DE NECROSIS
TUMORAL (TNF )
INTERFERN y

Las citoquinas juegan un papel fundamental en la

respuesta natural mediante mecanismos de accin directa
frente al agente invasor (evitando la infeccin de las
clulas por diferentes virus ) o mediante mecanismos de
activacin celular (NK y macrfagos) que a su vez liberan
ms citocinas

Las IL 1, IL 6, IL 12 intervienen en la
respuesta natural activando a los
monocitos-macrfagos y a las clulas NK,
as como, facilitando la activacin de los
mecanismos de elevacin de la
temperatura corporal, para activar el sistema
inmune y reducir el poder de multiplicacin /
replicacin del agente patgeno.
El factor de necrosis tumoral (TNF ) es el
principal iniciador de la respuesta
inflamatoria, acta sobre los vasos de la zona
afectada aumentado la permeabilidad
vascular, facilitando la extravasacin a la zona
de inmunoglobulinas, complemento, factores
quimiotcticos, etc. De esta manera ayuda a
en la defensa contra la agresin aportando
mayores medios.
La citocina IL 16 parece estar ligada a la
activacin de linfocitos T CD 4+.

CARACTERSTICAS DE LAS CITOCINAS RELACIONADAS EN LA RESPUESTA NATURAL

CITOCINA

ESTRUCTURA

C. PRODUCTORA

FUNCIN

IL 1

Monmero (18 kD)

macrfagos

Elevacin de la
Temperatura
Activacin de
Linfocitos T y
Macrfagos

IL 6

Monmero (26 kD)

Linfocitos
Macrfagos

Activacin linfocitos T
yB

IL 12

Heterodmero (75kD)

Neutrfilos
Macrfagos

Diferenciacin de
Linfocitos
Activacin de clulas
NK

IL 16

Homotrmero (13kD)

Linfocitos T

Quimiotaxis

TNF

Homotrmero (17kD)

Macrfagos
Linfocitos
Clulas N
Mastocitos

Inflamacin local
Cambios de
permeabilidad
Elevacin
Temperatura

IFN

Monmero (18kD)

Linfocitos

Activacin SLA I

Monmero (20kD)

Fibroblastos
Otras clulas

Activacin NK
Inhibicin de la
replicacin de los
virus

Homodmero

Linfocitos
Clulas NK

Induccin de SLA I y
SLA II
Presentacin de
antgenos

IFN

IFN

El interfern (IFN) que presenta los tipos:

, y puede actuar de formas distintas
para evitar la infeccin viral. La primera de
ellas, inducidas por el IFN y , que son
producidos fundamentalmente por
monocitos-macrfagos y en menor
proporcin por fibroblastos, es la de inducir
en las clulas susceptibles a la infeccin
por virus un estado de resistencia
transitoria frente a la infeccin de una
gran gama de agentes vricos. Este efecto,
de gran poder anti viral, no requiere de
grandes cantidades de interfern y constituye
uno de los mecanismos principales en la
respuesta natural.

Resistencia transitoria

El IFN tambin acta mediante la sntesis

de molculas con actividad anti vrica,
como la oligoadenilatosintetasa, que
interfiere con la replicacin del ADN y
ARN o inhibiendo la sntesis de protenas
celulares, gracias a las distintas enzimas
que producen las cuales, en presencia de
dobles cadenas de ARN, inhiben la sntesis
proteica mediante la activacin de la RNAsa,
la cual a su vez, degrada el ARN
mensajero.

Degradacin del ARN mensajero. Inhibicin de la sntesis

de protenas

Por ltimo, los IFN y parecen activar

diversos genes que expresan protenas
antivirales, como el gen Mx que determina
hace resisten a clulas susceptibles contra la
influenza murina. En este mecanismo, las
clulas infectadas son capaces de secretar
interfern que protege a las clulas vecinas,
no-infectadas, de la infeccin.
Por otra parte, estos interferones aumentan
la expresin del SLA I en las clulas
infectadas, lo que favorece el
reconocimiento de las mismas por los
linfocitos CD 8+ y clulas NK con el
consiguiente aumento de la actividad
citotxica.
Activacin de genes que expresan protenas antivirales

Incremento de la expresin del SLA

El IFN presenta una estructura distinta a

los IFN y .
Es producido por los linfocitos T CD4+ y CD8+
y por las clulas NK tras recibir una
estimulacin antignica. El IFN , adems de
presentar actividad antiviral, interviene en
muchas funciones inmureguladoras, tales
como: Aumentar la expresin del SLA I
(favorece la citotoxicidad) y del SLA II
(favorece la colaboracin celular para la
presentacin de los antgenos y la produccin
de anticuerpos)

Cooperacin celular para la presentacin de antgenos y

produccin de anticuerpos. Las citocinas juegan un
papel fundamental en estos procesos

Mediante las tcnicas de citotoxicidad por liberacin de

cromo 51 se pueden valorar los mecanismos citotoxicos
"in vitro".

En el cerdo se ha detectado interfern durante la infeccin con varios virus (Gastroenteritis

transmisible, Influenza, Peste porcina clsica, Enfermedad de Aujeszky), comprobndose, en
algunas de ellas, su capacidad para aumentar o modular la expresin de los SLA.
El IFN- es una de las citocinas que ha sido clonada en mas especies, y se han hecho
gran cantidad de estudios de homologas y reactividad cruzada. De stos estudios se concluye
que estructuralmente se pueden clasificar en tres grandes grupos, segn su homologa
funcional y estructural: El primer grupo estara formado por el IFN humano y de otros
primates, el segundo por los: bovinos, ovinos, ciervo, cerdos y caballos. En el tercero
grupo estara el ratn y la rata. En general, la mayora de las citocinas clonadas presentan una
homologa en cuanto a secuencia y por tanto de reactividad cruzada entre ellas.
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CMO ACTIVAN LA
HEMATOPOYESIS Y LA
ATRACCIN DE LOS
LINFOCITOS?

Las citocinas juegan un papel muy importante en la estimulacin de la

hematopoyesis de las clulas inmunes, actuando sobre las poblaciones
inmaduras potenciando su maduracin y proliferacin. Otra accin
importante de las citocinas, es la atraccin de los leucocitos a zonas
afectadas. Este es uno de los mecanismos de defensa con los que cuenta la
respuesta inmune tanto natural como adquirida. Ambas acciones estn

mediadas por diferentes citocinas producidas fundamentalmente por clulas

inmunes, aunque algunas lo estn por clulas no inmunes.

Citocinas que estimulan la

hematopoyesis
El otro grupo funcional en el que
se agrupan las citocinas, es el
conocido como estimuladoras
de la hematopoyesis. Debido al
enorme esfuerzo celular que lleva
consigo la respuesta inmune, se
requiere de un sistema que le
permita reponer rpidamente el
nmero de clulas para poder
afrontar nuevas infecciones. Las
citocinas encargadas de este
trabajo actan
fundamentalmente sobre
clulas inmaduras potenciado
su maduracin y proliferacin.
Muchas citocinas pueden realizar
est importante funcin aunque
las ms importantes son:

Factor estimulador de colonias granulocito macrfago

(GM-CSF)
Factor estimulador de clulas precursoras
IL 3
Factor estimulador de macrfagos (M-CSF)
IL 7
Eritropoyetina (Epo).

Principales citocinas que estimulan la hematopoyesis.

Casi todas presentan una estructura en forma de monmeros de entre 19 a 26 kD, con
excepcin de la M-CSF que es un dmero de 40 kD. La mayora estn producidas por los

macrfagos y por las clulas endoteliales. Su funcin principal est relacionada con la
proliferacin y diferenciacin celular, favoreciendo la madurez celular.

Citocinas que estimulan

la atraccin de leucocitos
Se denominan quimiocinas al
conjunto de citocinas, ms de
15 protenas pequeas (7 a 15
kD), producidas por diferentes
clulas inmunes (monocitomacrfago, linfocitos T) y no
inmunes (fibroblastos y clulas
endoteliales) que tienen una
fuerte capacidad quimiotctica.
Su estructura es un monmero o
dmero de entre 7 a 15 kD con
unos receptores de membrana
caracterizados por poseer siete
tramos transmembranales.

CLASIFICACIN DE LOS RECEPTORES DE MEMBRANA

DE LAS CITOCINAS

1. Receptores de factores de crecimiento

hematopoytico. Pertenecen a la familia de
receptores , y . Se han reconocido en este
grupo, las siguientes citocinas: IL 2, IL 3, IL 4, IL
5, IL 6, IL7, IL 9, IL 13, IL 15, GM-CSF (Factor
estimulador de colonias: Granulocito Macrfago) y
G-CSF (Factor estimulador de colonias de
granulocitos).

2. Receptores de Interfern. Tienen receptores

y Pertenecen a esta familia: IFN, IFN , IFN .

3. Receptores de factores de crecimiento

transformante (TGF). Pertenecen a esta familia:
TGF y TGF

4. Receptores del factor de Necrosis tumoral (TNF).

Segn su estructura qumica y en
particular la posicin de dos
residuos de cistena, se pueden
agrupar estas citocinas en:

Grupo
Grupo

Pertenecen: (TNF) y (TNF ).

5. Receptores de la superfamilia de las

inmunoglobulinas. Pertenecen a esta familia: IL 1,
IL 1, IL 16., IL 1 , IL 16.

6. Receptores de quimiocinas (receptores siete

tramos): IL 8, Factor activador de las plaquetas
(PAF).

Grupo

CITOCINAS del grupo

En el grupo se engloban las citocinas con capacidad de

atraccin de neutrfilos y linfocitos pero no de
monocitos, La citosina ms importante de este grupo es la
IL 8 y el PAF (Factor activador de las plaquetas). Estn
producidas fundamentalmente por macrfagos, linfocitos,
granulocitos, clulas endoteliales y hepatocitos.

El grupo lo forman las citocinas

con capacidad para la atraccin
fundamentalmente de
linfocitos T y B y monocitos y

CITOCINAS del grupo

O6

PTULO 6

algunas de este grupo tambin

pueden atraer basfilos y
eosinfilos. A este grupo
pertenecen las protenas
inhibidoras de macrfagos
(MIP) y las que atraen los
monocitos (MCP). Estn
producidas por macrfagos,
linfocitos T y B y neutrfilos.
CITOCINAS del grupo

El grupo tambin presenta capacidad de atraccin sobre

monocitos y linfocitos, la ms conocida de este grupo es la
denominada linfotactina.

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Bibliografa

Temario del curso

CMO SE ACTIVAN LOS

LINFOCITOS?

tocinas intervienen en la activacin y diferenciacin de los linfocitos T y B, en la regulacin del nmero de li

os en cada momento y en la duracin de su vida media, incluyendo los linfocitos memoria. En definitiva, las
regulan las principales actividades de estas importantes clulas del sistema inmune.

cooperacin celular en la respuesta inmune, la activacin de los

tiene lugar mediante un complejo procesos en el que intervienen,
os linfocitos, las clulas presentadoras de antgeno y el propio antgeno

nte proceso, de la respuesta inmune adquirida, tambin intervienen las

eciendo la activacin de los linfocitos T y B.

focitos T se activen y entre en la fase G1 del ciclo celular, se requieren dos

oveniente de la interaccin con el antgeno y otra co-estimuladora.

Esquema de la cooperacin celul

inmune adquirida. Las citocinas ju
importante en estos pr

ncia de esta estimulacin se secretan la citocina IL 2, la cual permite la expansin y diferenciacin de los linfocitos T en dos subtipo
operadores CD4+ (T helper) los linfocitos Th 1 (T helper 1) y los linfocitos Th 2 (T helper 2).
nes producen diferentes tipos de citocinas.
h 1. Estn ligados fundamentalmente a la activacin de los macrfagos en
Estas citocinas promueven la
eliminacin de antgenos intracelulares, mediante la activacin de la
de efectores citotxicos, sien
los procesos de activacin de las clulas NK, para inducir citotoxicidad
importantes:
fectadas. Por otra parte, como respuesta a una estimulacin antignica
IL 2. Interleucin
as pro-inflamatorias.

TNF . Factor de Nec

IFN. Interfer

h 2. Estn ligadas a la activacin y diferenciacin de los linfocitos B. Los

conocen el antgeno en la superficie de los linfocitos B, junto con las
LA-II, e inducen la expansin clonal de las clulas B y la subsiguiente
a clulas plasmticas productoras de anticuerpos. Los Th 2 tambin
a activacin de los eosinfilos.

citocinas secretadas por estas clulas son:

IL 5

IL6

IL10

IL 13

subtipos de linfocitos cooperadores Th 1 y Th 2 se ha descrito el linfocito

0 que parece estar ligado a un proceso intermedio de diferenciacin entre
h 0 puede secretar citocinas de ambos grupos celulares (Th 1 y Th 2).

Activacin de los linfo

orcina no se han generado hasta el momento clones de linfocitos cooperados con patrones definidos de citocinas, pero si se han

unes mayoritariamente del tipo Th1 o Th2.

os linfocitos CD8+, que son linfocitos mayoritariamente citotxicos, se ha descrito que secretan citocinas del tipo Interfern (IFN-) y
ral (TNF-) las cuales activan mecanismos citotxicos en macrfagos y granulocitos, y por tanto tienen un patrn Tc1, semejante al Th 1
CITOCINAS RELACIONADAS EN LA RESPUESTA INMUNE ADQUIRIDA

CINA

ESTRUCTURA

Monmero (18 kD)

Monmero (26 kD)

C. PRODUCTORA
Macrfagos
Linfocitos Th2
Macrfagos
Macrfagos

12

Heterodmero (75 kD)

Neutrfilos
C. Dendrtica

16

Homdmero (13 kD)

Linfocitos T CD8
Macrfagos

Homotrmero (17 kD)

Linfocitos
Clulas NK
Mastocitos

FUNCIN
Elevacin de la temperatura

Activacin de Linfocitos T y Macrfagos

Activacin linfocitos T y B

Diferenciacin de Linfocitos th1

Activacin de clulasNK
Induccin del receptor para IL2
Inflamacin local
Cambios de permeabilidad
Elevacin de Temperatura

Monmero (18 kD)

Linfocitos

Activacin SLA I

Monmero (20 kD)

Fibroblastos

Activacin NK

Homodmero

Linfocitos

Induccin de SLA I y SLA II

Clulas NK

Presentacin de antgenos.

Cmo se estudian las citocinas?

as citocinas presenta diferentes problemas. Unos ligados a sus propias caractersticas como su baja concentracin, vida media corta
biolgicos, lo que dificulta su estudio. Y otros, asociados a la falta de reactivos para el estudio de las citocinas en cualquier especie excep
humana, aunque este ltimo factor, gracias a la obtencin de citocinas recombinantes, se est solucionando progresivamente.
Los mtodos ms utilizados son:

Mtodos inmunolgicos
Mtodos moleculares.

s inmunolgicos. La obtencin de diferentes citocinas recombinantes

o producir anticuerpos monoclonales y desarrollar diversos mtodos de
inmunolgica para varias citocinas. Estos mtodos, fundamentalmente
cos del tipo ELISA, presentan elevada sensibilidad y especificidad para la
antificacin de citocinas, pero tienen el inconveniente que pueden detectar y
cuantificar citocinas no activas biolgicamente.

Los mtodos molecu

podido desarrollar gracias a

de las diferentes secuenci
nmero de citocinas, que h
adaptacin de tcnicas de
de PCR, permitiendo dete
citocinas en diferentes tej
Estas tcnicas, que hoy d
tambin cuantitativas, pue
cuantificar las diferentes cit
como en el caso de los
inmunolgicos, su detecci
necesariamente, activida

Esquema de la produccin de anticuerpos monoclonales

Imagen de un gel de

estudio de las citocinas porcinas, a pesar de la importancia que esta especie tiene como modelo para la investigacin en los trasplantes,
ransplantes y como especie ganadera, todava presenta varios problemas. Por un lado, son muy pocas las citocinas clonadas en es
comparacin con otras

NUMERO DE CITOCINAS CLONADAS

Especies humana y murina

36

Especie bobina

23

Especie ovina

20

Especie porcina

19

Especies felinas y equinas

11

Especies avicolas

Especie canina

Especies acucolas

4 (peces)

el nmero de reactivos disponibles, para el estudio del funcionamiento y la regulacin de las citocinas porcinas, es muy escaso. La pro
ombinantes es en la actualidad muy limitada y no se disponen en el mbito comercial, lo cual limita la produccin de anticuerpos mon
mejor opcin actual para el estudio de las citocinas porcinas es la utilizacin de las tcnicas moleculares de PCR cuantitativa.
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Temario del curso

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Temario del curso

MECANISMO DE
ACTIVACIN DE LA
RESPUESTA INMUNE.
RESPUESTA NATURAL
Y ADQUIRIDA.

La activacin de la respuesta inmune,- natural o adquirida-, se produce por

una serie de mecanismos que, de forma coordinada, activan diferentes
poblaciones celulares y la secrecin de diferentes molculas, con la finalidad
de eliminar el agente extrao.

En los diferentes captulos previos hemos podido observar como el sistema inmune dispone de
diferentes poblaciones celulares (linfocitos T y B, macrfagos, clulas presentadoras, clulas NK,
etc.) y molculas (anticuerpos, citocinas y complemento) que de forma coordinada son capaces
de responder ante la entrada de un agente extrao. Vimos como para entrar y progresar en la
infeccin, un agente extrao tiene que superar diferentes etapas, en las cuales intervienen distintos
mecanismos de proteccin.
Comenzando con las barreras fsicas
(piel, secreciones de las mucosas, enzimas
proteolticas, pH del estomago, etc.), que
permiten rechazar un gran nmero de
ellos. Seguido de la respuesta natural o
innata que es la primera barrera
inmunolgica no especfica del cerdo, la
cual mediante la activacin de factores
humorales como el complemento o
celulares como la fagocitosis o la
activacin de las clulas NK, presentan
una alta capacidad de eliminacin de
agentes infecciosos, para terminar, en caso
necesario (no siempre hace falta, ya que
muchas infecciones no progresan) con la
inmunidad adquirida, colofn de la
respuesta inmune, que debido a su
especificidad y memoria (caractersticas
del sistema inmune) presenta una mayor

La activacin de la fagocitosis se realiza en cuatro fases 1

quimiotaxisis, 2 adherencia, 3 ingestin y 4 destruccin.

eficacia y sobre todo, permite al sistema

inmune recordar el agente extrao para
futuras infecciones.

MECANISMOS DE DEFENSA
BARRERAS FSICAS Y QUMICAS
- PIEL
- SECRECIONES
- pH DEL ESTOMAGO
- ENZIMAS
RESPUESTA NATURAL O INNATA (RESPUESTA INMUNE NO
ESPECFICA) (FACTORES HUMORALES Y CELULARES):

- COMPLEMENTO VA ALTERNATIVA
- FAGOCITOSIS
- ACTIVACIN DE LAS CLULAS NK
- CITOCINAS
RESPUESTA ADQUIRIDA (RESPUESTA INMUNE ESPECFICA)
(FACTORES HUMORALES Y CELULARES)

- ANTICUERPOS
- COMPLEMENTO VA CLSICA
- CITOCINAS
- CITOTOXICIDAD: ADCC y CD 8+

En este captulo repasaremos los diferentes mecanismos de activacin de la respuesta inmune

frente a los diversos tipos de infecciones.

Cmo funciona el sistema inmune en las infecciones?.

Si un microorganismo atraviesa las barreras fsicas (piel), qumicas (pH gstrico, enzimas, etc) o
biolgicas (microorganismos saprofitos de intestino, etc) de defensa no inmune y no especfica
de un animal, se podrn en marcha una serie de mecanismos inmunolgicos (humorales y
celulares) que de forma consecutiva y coordinada respondern a la infeccin. La primera
respuesta, est mediada por los diferentes mecanismos de la respuesta natural que se inician de
forma inmediata tras la entrada de un agente extrao (4 minutos a 4 horas).

La respuesta natural o innata.

La respuesta natural o innata es la primera barrera inmunolgica NO ESPECIFICA del
sistema inmune, est mediada por una serie de mecanismos humorales (activacin del
complemento y algunas citocinas) y celulares (activacin de macrfagos y clulas NK) que,
dependiendo de su secuencia de actuacin, podemos agruparlos en:

A. Actuacin rpida (entre los 4 minutos y las 4 horas) mediada por:

1. Activacin del complemento por la va alternativa.

2. Activacin de los macrfagos.
B. Actuacin media y lenta (entre las 4 horas y los 4 das) mediada por:
1. La inflamacin.
2. La activacin de las clulas NK.
3. La produccin y liberacin de Interfern.

A.1.Activacin del complemento. Se conoce como el sistema del complemento a un

conjunto de protenas plasmticas y protenas de membrana que se activan en cascada y
que tienen como finalidad la eliminacin del agente extrao, o bien de forma directa,
mediante la lisis del microorganismo; o de forma indirecta, mediante la fagocitosis de los
agentes extraos, la activacin de la inflamacin (con la atraccin de diferentes clulas y
molculas que ayudaran a la eliminacin) y la eliminacin de los inmunocomplejos antgenoanticuerpo. El complemento es uno de los mecanismos de defensa ms importante con los
que cuenta el sistema inmune, tanto en la respuesta natural como en la adquirida. Sus
mecanismos de activacin pueden llevarse a cabo por las siguientes vas:

Va clsica.

Va alternativa.

Va de las lectinas.

Activacin del complemento por la va

clsica. Slo se activa en la respuesta
especfica inducida por la reaccin
antgeno-anticuerpos (respuesta
adquirida). Las protenas se activan en
cascada para formar el complejo de
ataque a la membrana del
microorganismo o de la clula
infectada, que previamente han
reaccionado con los anticuerpos,
provocando su lisis.
Lisis celular por la Activacin del complemento por la va clsica

Activacin del complemento por la va alternativa y la va de las lectinas, se activan de forma

espontnea en respuesta a un gran nmero de agentes extraos y forman por tanto parte de la
primera lnea de defensa de la respuesta natural. La va alternativa se activa a partir del
fragmento C3b, o bien formado en la activacin de la va clsica o de forma espontnea.
La va de las lectinas, ha sido descrita recientemente, se activa por una lectina que est
presente en la membrana de un gran nmero de microorganismos denominada MBL de las
palabras inglesas "Mannose Binding Lectin" en espaol "Lectinas que se Unen a Manosa". La MBL
es capaz de activar el complejo de ataque del complemento y provocar la lisis de la
membrana de varios microorganismos sin necesidad de la activacin de los anticuerpos.

A.2. Activacin de los macrfagos.

Los macrfagos realizan funciones de fagocitosis y de lisis de microorganismos, ya sea de forma
directa (inmunidad natural o innata) a travs de sus receptores para el complemento (C3b) o bien
en la respuesta adquirida mediante sus receptores para la fraccin Fc de las inmunoglobulinas.
Es decir, los macrfagos son activados en la respuesta natural por sus receptor para el
complemento y en la respuesta adquirida por su fraccin para el fragmento Fc de las
inmunoglobulinas. La activacin de los macrfagos puede verse favorecida con la liberacin de
varias citocinas como por ejemplo el interfern y a su vez, su propia activacin, producir mas
citocinas que inducirn inflamacin, pasando a la segunda fase de la respuesta natural.
Macrfago fagocitando clulas de Candida albicans
(152 Kb) James A. Sullivan, Cells Alive!

La inflamacin. Los macrfagos y las

clulas NK estimuladas liberan diversas
citocinas que inducen inflamacin local,
y otras acciones de carcter general,
como la elevacin de la temperatura
corporal. Estas acciones juegan un papel
defensivo muy importante en la respuesta
natural, ya que estimulan la atraccin de
las clulas inmunes a la zona afectada.
Las principales citocinas que intervienen
en este tipo de respuesta las vimos en:
Cmo intervienen las citocinas en la
respuesta natural o innata?. En ese
mismo captulo tambin revisamos la
activacin de las clulas NK y la
produccin y actuacin del interfern.

Las citoquinas juegan un papel fundamental en la respuesta

natural mediante mecanismos de accin directa frente al agente
invasor (evitando la infeccin de las clulas por diferentes virus ) o
mediante mecanismos de activacin celular (NK y macrfagos) que
a su vez liberan ms citocinas

Si a pesar de la activacin de todos estos mecanismos de la respuesta natural la infeccin

sigue progresando, el sistema inmune pondr en marcha los mecanismos de la respuesta
adquirida.

La respuesta adquirida

La respuesta inmune adquirida es una

respuesta ESPECFICA inducida por un
antgeno concreto que genera una
respuesta para ese antgeno. Se pone en
marcha tras el fracaso de la respuesta
natural y sus primeras acciones comienzan
ha observarse entre las 96 y las 120 horas
post infeccin. Los agentes extraos o
antgenos, no eliminados durante la
respuesta natural, son llevados por los
macrfagos desde la puerta de entrada
hasta los rganos linfoides secundarios
(ganglios linfticos) donde las clulas
presentadoras comenzaran su
procesamiento del antgeno para iniciar la
presentacin a los linfocitos T CD 4+
(cmo se estimulan los linfocitos B?)
Mecanismos de presentacin de antgenos. Cooperacin celular
entre las clulas presentadoras de antgeno y los linfocitos T CD4 y
los B. La actuacin de diferentes citocinas es fundamental en el
proceso.

y estimulacin de los linfocitos B gracias a la

cooperacin de los linfocitos Th 2 y la posterior para
la produccin de anticuerpos. Este tipo de
respuesta puede ser primaria o secundaria. Durante
la respuesta primaria se producirn los linfocitos
memoria, que permitirn al sistema inmune
reaccionar de forma mas rpida y eficaz ante otra
posible infeccin del mismo antgeno, en la respuesta
secundaria. Gracias a este tipo de respuesta
inmune los animales vencen las infecciones que
no han podido ser cortadas por la respuesta
inmune natural y gracias a la memoria que
persiste les puede hacer resistentes a futuras
reinfecciones.
Los anticuerpos inducidos en la respuesta
inmune adquirida podrn reaccionar frente
al antgeno y poner en marcha diferentes
funciones biolgicas tales como:
La activacin del complemento por la
va clsica.
La aglutinacin,
La neutralizacin (seroneutralizacin)
La citotoxicidad ADCC,

La activacin de la fagocitosis, etc.

En la tcnica de seroneutralizacin, se valora la capacidad del

suero problema (a diferentes diluciones) para neutralizar la
infectividad de un virus, sobre una lnea celular sensible. Si el
anticuerpo problema neutraliza el virus, no habr replicacin viral
(ausencia de efecto citoptico) si no lo neutraliza, habr
replicacin viral (efecto citoptico). En los virus que no producen

efecto citoptico, la posible replicacin viral se observa mediante

tcnicas de inmunofluorescencia o peroxidasa.

Adems, de la citotoxicidad inducida por los

anticuerpos (ADCC) y por la activacin del
complemento por la va clsica, en la respuesta
adquirida intervienen otros procesos citotxicos
mediados por los linfocitos CD 8+ que estn
especializados en eliminar clulas que expresan
fragmentos de antgenos en su membrana asociados
al SLA I. Gracias al reconocimiento por parte del TcR
del complejo antgeno-SLA I, los linfocitos CD 8+
pueden diferenciar las clulas infectadas de las
normales.

Por ltimo, al igual que en la respuesta inmune natural, en la respuesta inmune adquirida
intervienen un gran nmero de citocinas.

Respuesta humoral y celular

Como hemos visto en la descripcin de los mecanismos inmunitarios de la inmunidad natural y
adquirida en ambos tipos de respuestas intervienen factores humorales y celulares, por lo que
tambin se puede hablar de una respuesta inmune humoral y otra celular; aunque en realidad
ambos mecanismos actan de forma coordinada. En la respuesta natural el mecanismo
humoral ms importante es el complemento (va alternativa) mientras que en la respuesta
adquirida son los anticuerpos. En cuanto a los mecanismos celulares en la respuesta natural
el mecanismo ms importante es la activacin de los macrfagos y las clulas NK, mientras que
en la inmunidad adquirida es la activacin de los linfocitos CD 4 + y CD 8 +. En ambas
respuestas, juegan un papel de gran importancia las citocinas.
En general, se entiende como respuesta
humoral la inducida por molculas, de
forma que se pueda transferir inmunidad
de un animal a otro solamente transfiriendo
esas molculas, que fundamentalmente,
son los anticuerpos. Mientras que la
inmunidad celular o mediada por
clulas, es la inmunidad que podemos
transferir de un animal a otros mediante
clulas (fundamentalmente linfocitos
citotxicos) sin necesidad de anticuerpos.
En realidad, en el animal ambos tipos de
respuesta se producen generalmente de
forma coordinada y conjunta, aunque
dependiendo del agente extrao, como
veremos en los prximos captulos, puede
ser ms relevante un tipo de respuesta que
el otro.

Esquema de la estructura de las inmunoglobulinas.

CAPTULO 7

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QUE RUTA SIGUEN

LAS INFECCIONES?
QUE DIFERENCIA
REPRESENTAN LAS
DIFERENTES RUTAS?

La puerta de entrada y las caractersticas del agente infeccioso

influyen en la activacin de los diferentes mecanismos de defensa, tanto
en la respuesta natural como adquirida.

A lo largo de los captulos anteriores

hemos podido repasar los diferentes
mecanismos inmunitarios
(respuesta natural y adquirida) y no
inmunitarios (barreras fsicoqumicas) de los que dispone el
sistema inmune porcino, as como las
diferencias entre la respuesta primaria
y secundaria. En este captulo
repasaremos la importancia de la
ruta de infeccin a la hora de
estimular unos u otros mecanismos
inmunitarios, as como el papel que
las caractersticas de infeccin del
propio agente infeccioso puede
jugar en la activacin inmunolgica.
Preguntas como: la infeccin es
extracelular?, Slo intracelular? o
ambas? , tienen importancia a la
hora de valorar cual de los diferentes
mecanismos inmunitarios sern ms

PARMETROS DE INTERS EN LAS

INFECCIONES
INFECCIN:
PRIMARIA o SECUNDARIA
LOCAL o SISTMICA

RUTA DE INFECCIN:
PIEL
MUCOSAS

CARACTERSTICAS DE INFECCIN DEL

AGENTE:

relevantes.

INTRACELULAR
EXTRACELULAR
AMBAS

Las rutas de infeccin ms frecuentes

En el cerdo los agentes extraos
suelen penetrar mas frecuentemente a
travs de las mucosas respiratoria y
digestiva y por la piel. En menor
proporcin se localizan las infecciones
por va urogenital.
Las mucosas estn protegidas por los
mecanismos de inmunidad natural y
adquirida gracias al tejido linfoide
asociado a las mucosas, formado
por ndulos de tejido linfoide que
segn su localizacin, se denominan:
GALT (mucosas del intestino) y BALT
(mucosas respiratorias). La
inmunidad de las mucosas presenta
algunas caractersticas muy
importantes respecto a la inmunidad
sistmica, tanto en sus elementos
estructurales (clulas M, mayor
importancia de la IgA) como
funcionales, que le permite a partir de
una estimulacin antignica local,
inducir tanto una respuesta local como
general. Toda la informacin y
caractersticas de la respuesta inmune
de las mucosas, se puede repasar en
el captulo 3.

El interfern interviene en la respuesta natural

induciendo una resistencia transitoria en las
clulas

Si el agente extrao no fuera

extracelular, se podran en marcha los

Estimulacin del tejido linfoide de las mucosas. BALT o GALT.

Este mecanismo permite que aunque la estimulacin antignica
haya sido local, la respuesta inmune sea generalizada.

La otra va de infeccin ms comn en el cerdo

es a travs de la piel, bien sea por pequeas
heridas, por inoculacin con jeringa o por parsitos.
Normalmente, la mayora de las infecciones no
progresan, gracias a la activacin de los
mecanismos de la respuesta natural (fagocitosis,
activacin de NK, activacin de la va alternativa del
complemento, interfern, etc) pero, si la infeccin
progresa, el antgeno sera llevado por los
macrfagos al ganglio linftico local, all sera
procesado por las clulas presentadoras de
antgeno, presentado a los linfocitos CD 4+,
inicindose la produccin de los anticuerpos y la
de todos los mecanismos humorales defensivos
ya descritos.

Linfocitos T citotxicos
James A. Sullivan, Cells Alive!

mecanismos citotxicos mediados por

ADCC y por CD 8+.
(187 Kb.)

La va urogenital se comporta, en la primera parte de su tramo, como en la inmunidad de

las mucosas. As en el moco cervicovaginal de la cerda, la inmunoglobulina predominante es
la IgA. Sin embargo, en el interior del tero la inmunoglobulina predominante es la IgG. A nivel
genital, adems de los mecanismos de la inmunidad natural, se pueden inducir mecanismos
tanto celulares como humorales de la respuesta adquirida.

Las caractersticas de infeccin del agente extrao.

Las caractersticas de infeccin del

agente extrao, tambin juegan un
papel importante a la hora de
seleccionar los mecanismos de mayor
inters o ms efectivos. As por
ejemplo, si el ciclo de infeccin del
agente extrao es intracelular, los
mecanismos ms efectivos sern los
que induzcan la citotoxicidad,
fundamentalmente de carcter
celular; bien inducidos en la
respuesta natural Clulas NK, la
activacin del complemento por la
va clsica, o bien por los
mecanismos de la inmunidad
Macrofago fagocitando clulas de Candida albicans
adquirida, como: activacin de los
James A. Sullivan, Cells Alive!
linfocitos CD 8+, activacin de los
(152 Kb.)
macrfagos, por los linfocitos CD 4
Th1, o incluso por la activacin del
complemento por la va clsica o la
activacin de los mecanismos
citotxicos mediados por anticuerpos
(ADCC)
Mientras que si el agente extrao presenta un ciclo de infeccin extracelular los
mecanismos mas importantes sern de tipo humoral, mediados por los anticuerpos
estimulados por los linfocitos Th 2. Los anticuerpos inducirn la neutralizacin del agente
extrao, su opsonizacin para favorecer su fagocitosis por los macrfagos gracias al receptor
para Fc.
Algunos agentes extraos, por ejemplo un gran nmero de virus, presentan durante su
infeccin ambos ciclos. As, aparecer el virin extracelular, pero tambin las clulas
infectadas mostrarn en su membrana antgenos de infeccin que inducirn diferentes
mecanismos citotxicos.

CAPTULO 7

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CMO FUNCIONA EL
SISTEMA INMUNE
FRENTE A VIRUS?

Dependiendo de la naturaleza del agente infeccioso, la respuesta inmune

utilizar sus recursos ms efectivos. En las infecciones vricas se desarrollan
diferentes mecanismos, tanto frente al virus libre, como contra la clula
infectada.

Los virus necesitan de la maquinaria

celular que infectan para sintetizar sus
protenas. Son parsitos intracelulares
que dependen de la clula infectada
para poder llevar a cabo su
replicacin. Los virus presentan
generalmente formas muy sencillas,
compuestas por protenas y un cido
nucleico, aunque su estructura y
composicin es muy variable. Se
clasifican en virtud del cido nucleico que

Fotografa del virus de la Peste Porcina Africana (PPA) por

microscopa electrnica

portan en: virus ADN y ARN, y por su

forma y estructura en diferentes familias.

PRINCIPALES ENFERMEDADES VRICAS DEL CERDO

VIRUS

FAMILIA

. NCLEICO

ADENOVIRIDAE

ADN (cd)

HERPESVIRIDAE

ADN (cd)

CIRCOVIRIDAE

ADN (cs)

PICORNAVIRIDAE

ARN (cs)

FLAVIVIRIDAE

ARN (cs)

ENFERMEDAD DE AUJESZKY

HERPESVIRIDAE

ADN (cd)

ENFERMEDAD DEL OJO AZUL

PARAMYXOVIDAE

ARN (cs)

ENFERMEDAD VESICULAR DEL

CERDO

PICORNAVIRIDAE

ARN (cs)

ENTEROVIRUS PORCINO

PICORNAVIRIDAE

ARN (cs)

ESTOMATITIS VESICULAR

RHABDOVIRIDAE

ARN (cs)

CALICIVIRIDAE

ARN (cs)

PICORNAVIRIDAE

ARN (cs)

CORONAVIRUS CORONAVIRIDAE

ARN (cs)
ARN (cs)

ORTHOMYXOVIRIDAE

ARN (cs)

PARVOVIRIDAE

ADN (cs)

ADENOVIRUS

CITOMEGALOVIRUS PORCINO

CIRCOVIRUS PORCINO

ENCEFALOMIOCARDITIS
PORCINA

ENCEFALISTIS JAPONESA

EXANTEMA VESICULAR

FIEBRE AFTOSA

GASTROENTERITIS TRANSMISIBLE
PORCINA

INFLUENZA PORCINA

PARVOVIRUS PORCINO

Familia sin nombre

(genero ASF -Like Virus)

ADN (cd)

PESTE PORCINA CLSICA

FLAVIVIRIDAE

ARN (cs)

ROTAVIRUS PORCINO

REOVIRIDAE

ARN (cd)

ARTERIVIRIDAE

ARN (cs)

PESTE PORCINA AFRICANA

SNDROME REPRODUCTIVO Y
RESPIRATORIO PORCINO

(cs): cadena sencilla. (cd): cadena doble

Desde el punto de vista inmunolgico, interesa conocer el ciclo de replicacin viral, para
prever las oportunidades que tienen los diferentes mecanismos inmunitarios para interaccionar
con la partcula viral, con las clulas infectadas, o con ambas. Normalmente, el ciclo de
replicacin viral comienza por la unin del virus (virus libre) a la clula husped a travs de
receptores especficos (adsorcin) (1), estos receptores son los que marcan el tropismo y la
especificidad de la infeccin (no pueden infectar cualquier clula ni a cualquier especie, tienen su
tropismos especfico), una vez en la clula, el virus elimina su cubierta dejando su cido nucleico
libre (descubrimiento) (2), para iniciar el proceso de replicacin vrica.
En esta fase, la sntesis de protenas
celulares se inhibe y solamente se
procesarn la informacin gentica del
virus, los mecanismos que actan en esta
fase dependen del tipo de cido nucleico
del virus (ADN o ARN). En el caso de los
virus ADN, se produce una replicacin
(3), formando un ADN viral nuevo. El ADN
viral nuevo, mediante transcripcin,
pasa a ARN viral (azul), el cual mediante
traduccin, ira realizando las diferentes
protenas virales y posteriormente el
ensamblaje viral (4). En el caso de los
virus ARN, no hace falta la transcripcin,
pasando directamente el ARN viral nuevo
a la produccin de las protenas. Este
mecanismo de replicacin de ARN, es
diferente para los retrovirus, los cuales
a partir del ARN viral, mediante una
Esquema del ciclo de replicacin viral.(1) adsorcin (2)
transcriptasa inversa, forman ADN viral
Descubrimiento (3) Replicacin y (4) Ensamblaje y liberacin viral.
(se une al genoma celular) a partir del
cual comienzan las diferentes fases de
replicacin, etc.

Esquema de los diferentes mecanismos

inmunitarios frente a la partcula viral (anticuerpos,
citocinas, complemento) o frente a la clula
infectada (NK, CD 8, ADCC, complemento).

En la mayora de las infecciones virales, el

sistema inmune tiene la oportunidad de
enfrentarse a la partcula viral durante algn
momento de la infeccin, (antes de penetrar en la
clula o al salir de ella, tras la replicacin), as como
de enfrentarse a las clulas infectadas (en la fase
de produccin de protenas o en la del ensamblaje
viral), ya que en ellas aparecen antgenos de infeccin
en la membrana, que activan la respuesta inmune. En
algunos casos, como en los retrovirus endgenos
porcinos, (se han descrito tres tipos: A, B, B1 y C), o
en los herpes virus (Enfermedad de Aujeszky), la
infeccin puede cursar durante largos periodos de
tiempo, sin que aparezca la partcula viral, ni las
clulas infectadas expresen antgenos de
membrana. En estos momentos, los mecanismos del
sistema inmune son ineficaces, ya que el enemigo no
ofrece ningn tipo de seal, pero en un momento
determinado (no se conocen bien todas las
circunstancias) la infeccin se reactiva y pasan a
liberar nuevos viriones infecciosos.

Infeccin por retrovirus

Desde el punto de vista inmunolgico, las infecciones vricas pueden combatirse,- una vez
que atraviesen las barreras fsico qumicas-, luchando contra la partcula viral (virin), contra
las clulas infectadas o contra ambas, mediante los diferentes mecanismos de la respuesta
natural y adquirida.

Respuesta natural frente a los virus

Los mecanismos de la respuesta natural ms activos frente a las infecciones virales estn
mediados por el interfern y por la activacin de las clulas NK. Estos mecanismos van ms
dirigidos hacia las clulas infectadas.

El interfern es una citocina de la que

se conocen tres tipos, denominados: ,
y . Los dos primeros, estn producido
fundamentalmente por los monocitosmacrfagos y en menor proporcin por
los fibroblastos, mientras que el interfern
lo producen los linfocitos CD4 y CD 8 y
las clulas NK. El interfern, presenta
gran capacidad antiviral, induciendo
diferentes mecanismos, tales como:
resistencia transitoria de las clulas la
induccin de diferentes molculas con
actividad antivrica, activar genes que
expresan protenas antivirales e
incrementar la expresin del SLA I y del
SLA II.

Activacin de genes inductores de protenas antivirales

Las clulas NK se activan de manera natural frente

a clulas infectadas por virus. El mecanismo de
activacin parece estar ligado a las alteraciones
en la expresin del SLA en las clulas infectadas.
La reaccin de las NK con las clulas infectadas, no
est basada en una reaccin antignica (las NK no
tiene TcR). Este mecanismos citotxico es muy eficaz
en las infecciones vricas.
Por ltimo, la va alternativa del complemento
tambin activa la virlisis de las partculas virales
con gran eficacia.

Esquema de la clula NK

Respuesta adquirida frente a los virus.

La inmunidad adquirida reacciona frente a las infecciones vricas, tanto a nivel de la partcula
viral, como frente a la clula infectada. Frente a la partcula viral, el mecanismo inmunolgico
ms importante son los anticuerpos, mientras que frente a la clula infectada, lo son
mecanismos citotxicos, mediados por clulas (CD 8+) o por anticuerpos y clulas (ADCC) o
anticuerpos y complemento (va clsica).

Frente a la partcula viral.

Frente a la clula infectada.

La cpside de la partcula viral est

formada por protenas, por lo que es muy
antignica, e induce gran cantidad de
anticuerpos que pueden ejercer diferentes
acciones frente a los virus:
Neutralizar la infeccin (IgG, IgM e

Las clulas infectadas por virus pueden expresar en

su membrana antgenos virales, mucho antes de
que se produzca el ensamblaje viral, por lo que su
destruccin, es un excelente mecanismo para evitar la
formacin de ms virus. La respuesta adquirida
hace frente a las clulas infectadas tanto mediante

IgA), evitando que el virus pueda entrar

en las clulas.
Aglutinacin viral (IgM), reduciendo el
nmero de unidades infecciosas
disponibles.
Activacin de la fagocitosis al formar el
complejo antgeno anticuerpo y estimular
el receptor Fc de los macrfagos.

anticuerpos (sistema ADCC, activacin del

complemento por la va clsica, activacin de la
fagocitosis) como por la citotoxicidad celular
mediada por linfocitos CD 8+ que es uno de los
mecanismos ms efectivos frente a las infecciones
virales.

Mecanismo citotxico inducido por los linfocitos CD 8

Linfocitos T citotxicos
James A. Sullivan, Cells Alive!
(187 Kb.)

CAPTULO 7
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Bibliografa

Temario del curso

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MECANISMOS
INMUNITARIOS FRENTE
A BACTERIAS Y
PARSITOS

La respuesta inmune natural y adquirida dispone de un gran nmero de

mecanismos para luchar frente a las infecciones
bacterianas y parasitarias.

Inmunidad frente a bacterias

Los principales inmunitarios ms efectivos frente a las bacterias dependern de la estructura de
la superficie bacteriana y de los mecanismos por los que inducen su patogenicidad.
Una clasificacin segn la
estructura de la superficie
bacteriana puede ser:
Bacterias GRAM positivo
Bacterias GRAM negativo
Micobacterias
Espiroquetas
As, para destruir la membrana
bacteriana de las bacterias GRAM
positivo, el mecanismo ms efectivo
es la fagocitosis, mientras que para
las GRAM negativo, las micobacterias
y las espiroquetas, debido a su bicapa
lipdica; la citotoxicidad mediada por el
complemento y por las clulas
citotxicas es ms efectiva.
Por otra parte, segn sean sus
mecanismos de patogenicidad (por
si misma o por las toxinas que liberan)
unos mecanismos inmunitarios sern
ms o menos efectivos. As, en el
caso de las bacterias cuya toxicidad
est ligada a las toxinas, los
anticuerpos son tremendamente tiles,
mientras que en las patologas
directamente relacionadas con la
bacteria, los mecanismos citotxicos
sern ms efectivos.

Aspecto de colonias de Bacterias GRAM negativo (Salmonella) en el

medio de cultivo XLD.

Aspecto de colonias de bacterias GRAM positivo (Staphylococcus

aureus) en Agar sangre.

Principales mecanismos de la respuesta natural y adquirida frente a

bacterias
Adems de las barreras fsico-qumicas, que en el caso de las bacteria juegan un papel de gran
importancia; la repuesta natural dispone de varios mecanismos de inters defensivo. En primer
lugar, la activacin del complemento por la va alternativa, especialmente para las bacteria GRAM
negativo, la fagocitosis no activada por Fc, la liberacin de ciertas citocinas, el factor de necrosis
tumoral y la interleucina IL 1 y la activacin de las clulas NK.

En cuanto a la respuesta adquirida, la produccin de

anticuerpos juega un papel de gran importancia,
mediante varios mecanismos: En la neutralizacin de
las toxinas bacterianas, En la proteccin de las
mucosas (IgA) y en la activacin del complemento
por la va clsica provocando la destruccin
bacteriana o activando la fagocitosis por activacin
del receptor para Fc. La fagocitosis es uno de los
mecanismos ms efectivos en la lucha frente a las
infecciones bacterianas por lo que la liberacin de
citocinas es de gran importancia en este tipo de
infecciones.

Respuesta inmune frente a parsitos

Las enfermedades parasitarias en el cerdo presentan gran importancia econmica

PRINCIPALES ENFERMEDADES PARASITARIAS EN EL CERDO

PARSITOS EXTERNOS:
Sarna sarcotipica
PARSITOS INTERNOS:
ENTERITIS VERMINOSAS: Ascaris spp., Strongyloides spp., Echinorhynchus spp.
TRIQUINOSIS: Trichinella spiralis
TENIASIS: Taenia spp., Cysticercus spp.
SARCOCISTOSIS: Sarcocystis suihominis
Ms parsitos e imgenes (Dr. Colin Johnstone. School of Veterinary Medicine. University of
Pennsylvania)
Sin embargo, debido a la gran complejidad de sus estructuras, todava no son bien conocidos
muchos de los mecanismos inmunolgicos que intervienen. Las principales caractersticas de la
respuesta inmunolgica frente a los parsitos, que las diferencian de la respuesta frente a
bacterias o virus, las podemos resumir en los siguientes puntos:

1. Los parsitos estn formados por una mayor cantidad de antgenos debido a su
mayor tamao y complejidad estructural.

2. Las infecciones, tanto en el cerdo como en otras especies, suelen ser de carcter
subclnico, con gran tendencia a la cronicidad. El parsito suele vivir durante largos
periodos de tiempo en su husped, induciendo una estimulacin antignica prolongada,
con activacin de gran nmero de mecanismos inmunitarios tanto de tipo humoral como
celular. Dentro de ellos, los anticuerpos y los mecanismos citotxicos juegan el papel
ms importante.

3. Los parsitos desarrollan diferentes mecanismos para evadir la respuesta inmune

o al menos que no sea muy eficaz. Entre ellos: Cambio en su estructura antignica en
los diferentes ciclos parasitarios, modificacin de los antgenos de superficie, o

infecciones intracelulares sin cambios en la membrana de la clula parasitada.

Principales mecanismos de la respuesta natural y adquirida frente a

parsitos
A pesar de la gran capacidad antignica que presentan los parsitos, no todas las
respuesta inmunes que inducen son efectivas. Esto es debido, fundamentalmente, a los
cambios en sus ciclos biolgicos, que generan nuevos antgenos en cada ciclo. La lucha
inmunolgica contra las enfermedades parasitarias todava presentan grandes limitaciones.
La primera lnea de actuacin frente a
los parsitos viene inducida por los
macrfagos, los neutrfilos y los
eosinfilos as como las citocinas
ligadas a la respuesta natural como: IL
1, IL 6, IL 12, y TNF.
En definitiva, los mecanismos
fagocticos estn ligados a las fases
iniciales de la infeccin parasitaria.
En la respuesta adquirida, los
anticuerpos y los procesos
citotxicos sern los mecanismos
ms importantes. Los anticuerpos
actuarn mediante accin directa,
activacin de la fagocitosis (Fc),
activacin del complemento (la va
clsica) o de los mecanismos ADCC.
Por ultimo, la activacin de las
clulas CD 8+, juega un importante
papel defensivo junto con varias
citocinas ligadas a la inflamacin,
sobre todo en la fase sangunea.
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VACUNAS

Cuando un microorganismo completo (vivo o muerto) o algunas de sus

protenas, son capaces de inducir una respuesta inmune protectora y
duradera, frente al mismo microorganismo virulento, sin producir efectos

secundarios, se define como vacuna.

El sistema inmune puede prepararse frente a un determinado microorganismo de manera

preventiva, para que si en algn momento apareciera el mismo microorganismo en forma
virulenta, sea reconocido de forma rpida y pueda combatirse eficazmente.
Esta preparacin preventiva, basada en
En la sueroterapia, se transfiere de forma
la memoria del sistema inmune, en la
inmediata una respuesta humoral al animal
que se consigue una respuesta
receptor, basada exclusivamente en anticuerpos
adquirida, tanto humoral como celular,
(respuesta humoral) (principales funciones
se denomina inmunizacin activa o
biolgicas de la inmunoglobulinas que no es muy
vacunacin. Otra forma de inducir
duradera, debido al catabolismo de las
inmunidad a un animal, en un momento
inmunoglobulinas
determinado y con fines curativos ms
que preventivos, ya que es una
inmunidad no duradera, es la
denominada inmunizacin pasiva o
sueroterapia. La sueroterapia, consiste
en transferir inmunoglobulinas
especficas frente a un determinado
antgeno de un animal a otro
(generalmente de la misma especie para
evitar reacciones adversas de
rechazo). Estos anticuerpos se producen
en el animal donante tras una respuesta
activa mediante diferentes vacunaciones
o estimulaciones antignicas.
En la especie porcina, la sueroterapia
no se utiliza en la actualidad, aunque si
es de gran utilidad en otras especies,
como en la canina para el tratamiento del
moquillo, en la felina para la
panleucopenia y en la equina frente al
ttanos.
El descubrimiento de los anticuerpos monoclonales hizo alentar grandes esperanzas en la
sueroterapia, incluso frente a diferentes tipos de tumores, sin embargo, al slo poder producirse
hibridomas en ratn hasta la fecha, se ha limitado su utilizacin por problemas de rechazo
inmunolgico.

Qu es una vacuna?

Cuando se presenta al sistema inmune

un agente infeccioso, completo o
incompleto, vivo o muerto, de manera
que se induzca una respuesta inmune
(humoral y celular) mas o menos
duradera, frente al mismos
microorganismo patgeno, sin
producir lesiones, ni primarias ni
secundarias, se dispone de una
vacuna
La primera vacuna, de la que se disponen
datos cientficos, la llevo a cabo Edward
Jenner (1749-1823) en 1796 frente a la
viruela humana. Jenner, observ que las
personas que haban sufrido la viruela
vacuna (enfermedad mucho ms benigna
que la viruela humana) no padecan la
viruela humana, por lo que decidi hacer
un preparado, con las vesculas de vacas
infectadas, que inoculado a personas
sanas, las protega frente a la viruela
humana. De ah, el nombre de vacuna,
por la administracin del virus
"vaccinia" o vacuna.

Un agente infeccioso (completo o fragmentado, vivo o muerto)

capaz de inducir una respuesta inmune, mas o menos duradera, sin
producir ningn tipo de lesiones se considera como una vacuna.

Alrededor de cien aos despus de esta primera

vacuna, Louis Pasteur (1822-1895) demostraba que
se poda inducir inmunidad, ms o menos
duradera, utilizando microorganismos homlogos
(Jenner utiliz microorganismos heterlogos, virus de
vacuno para prevenir la enfermedad en el hombre)
modificados, bien en su virulencia, como por su
inactivacin total. As nacieron las vacunas
inactivadas, ensayadas por Pasteur en el carbunco
y las vacunas atenuadas, producidas por primera
vez, por el mismo autor en 1885, frente al virus de
la rabia. Aunque Pasteur no llego a conocer los
mecanismos de activacin inmunitaria, ni de induccin
de memoria inmune, su diseo de vacunas ha sido de
gran importancia hasta la fecha. Estas vacunas,
denominadas hoy da como convencionales, han
tenido mucho xito en el control y lucha frente a
un gran nmero de enfermedades animales y
humanas, desde la viruela, iniciadora de estos
estudios, a la rabia, pasando por enfermedades
porcinas, tan importantes como la Fiebre aftosa o la
Peste porcina clsica.
El mecanismo inmunitario de la vacunacin fue
finalmente aclarado en 1957, cien aos despus de
Pasteur, por Frank Burnet (1899-1985) mediante la
teora de la seleccin clonar y con el posterior
descubrimiento del papel de los linfocitos T y B en

Fotos del laboratorio-museo de Louis Pasteur,

Paris.

1965

La estimulacin de los antgenos que componen una vacuna induce una respuesta primaria con
estimulacin o expansin clonal de linfocitos T y B memoria (clulas memoria) capaces de inducir
una respuesta secundaria si los mismos antgenos penetran de nuevo.

Cuntos tipos de vacunas

existen?
Los avances en el conocimiento de la
respuesta inmune, los mecanismos de
presentacin antignica, junto a los
progresos conseguidos en las tcnicas de
biologa molecular, identificacin de las
protenas de inters inmunolgico y la
obtencin de diferentes vectores para la
expresin de las mismas, han permitido
disear y obtener diferentes tipos de
vacunas, denominadas de nueva
generacin, algunas de las cuales
permiten diferenciar el animal
vacunado del animal enfermo. No
obstante, la gran mayora de las
vacunas actualmente en uso, frente a
un gran nmero de enfermedades
bacterianas y vricas, todava
pertenecen a las denominadas
vacunas convencionales.

Desde un punto de vista tecnolgico, se podran

clasificar los diferentes tipos de vacunas actuales, en
dos grandes grupos:

a) Convencionales:
Vivas atenuadas
Muertas inactivadas

b) Nueva generacin:
Subunidades
Pptidos sintticos
Recombinantes
Vacunas de ADN

A lo largo de este captulo y del siguiente repasaremos cada uno de estos tipos de vacunas
destacando sus ventajas e inconvenientes.

CAPTULO 8

Captulo 7

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Temario del curso

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VACUNAS
ATENUADAS E
INACTIVADAS

Temario del curso

Las vacunas atenuadas y/o muertas han sido la base inmunolgica

principal para el control y erradicacin de la gran mayora de las
enfermedades infecciosas hasta nuestros das.

Desde los trabajos de Louis Pasteur hasta la actualidad, han sido muchas las vacunas que,
frente a diferentes enfermedades de origen bacteriano y vrico, se han desarrollado utilizando
diferentes mtodos, tanto para atenuar la virulencia de los agentes infecciosos y seleccionar
cepas no virulentas, como mediante la inactivacin total de los mismos, para la produccin de
vacunas muertas.

Qu es una vacuna atenuada?

Una vacuna atenuada consiste en utilizar un agente infeccioso (vacunas monovalentes)

o varios (vacunas polivalentes) vivo/os y homlogo/s al que produce la enfermedad,
pero cuya virulencia haya sido atenuada, de manera que sin producir ninguna lesin
secundaria al animal, induzca inmunidad duradera frente al agente homlogo virulento.
Generalmente, este tipo de vacunas se
realizan a partir, o bien de cepas
VACUNAS
VACUNAS
homologas a las virulentas, pero que se
ATENUADAS
INACTIVADAS
han atenuado de forma natural, o bien a
partir de aislados virulentos, a los que
Estimulacin CD 4+
Fundamentalmente
mediante mtodos de atenuacin se
y CD 8+
CD 4+
consiguen atenuar de forma estable.
CITOCINAS
Menos CITOCINAS
(Interfern)
El sistema de atenuacin ms utilizado en
la actualidad, se basa en realizar un gran
numero de pases o replicaciones del
virus o bacteria virulento en lneas
celulares (virus) o medios de cultivo
(bacterias), de tal manera que los
microorganismos pierdan virulencia, no
produzca ningn tipo de lesin en el
animal, pero sigan teniendo la
capacidad de replicarse o multiplicarse
lo suficiente para que el sistema inmune
pueda procesarlo.

MENOR ANTGENO

MAYOR ANTGENO

MENOR
ESTABILIDAD
ALMACENAMIENTO

MAYOR
ESTABILIDAD
ALMACENAMIENTO

MENOS SEGURAS

MS SEGURAS

ADYUVANTES NO
CRTICOS

ADYUVANTES SON
CRTICOS

El principal problema de este tipo de vacunas

es que la atenuacin no sea estable y pueda
revertir a las formas virulentas. La estabilidad
de la atenuacin es el factor ms crtico en
estas vacunas.
Otro aspecto crtico de estas vacunas es, que al
estar formada por microorganismos vivos,
necesitan mantenerse en cadena de fro
permanentemente, para evitar que el
microorganismo muera parcial o totalmente.
La mayora de los virus se cultivan en lneas celulares
estables. Estas clulas generalmente se adhieren a la
superficie de los frascos de cultivo (algunas lneas
celulares estn en suspensin) donde posteriormente
sern infectadas con el inculo viral para la
produccin de gran nmero de partculas vrales.

En general, las vacunas vivas atenuadas

inducen una respuesta inmune superior a las
vacunas inactivadas o muertas, esto en el
caso de los virus, se debe a que al infectar las
clulas husped se inducen todos los
mecanismos inmunitarios, tanto de
presentacin antignica ligados a linfocitos
CD4+ y al SLA II, como de activacin
citotxica ligados a linfocitos CD 8+ y el SLA I,
as como la liberacin de diversas citocinas.

Cultivo de virus en huevos embrionados. Algunos virus no

se pueden cultivar en lneas celulares y se replican en
huevos de ave.

Qu es una vacuna muerta o inactivada?

PRINCIPALES VACUNAS UTILIZADAS

EN EL GANADO PORCINO
Actinobacillus pleuropneumoniae
ENFERMEDAD DE AUJESZKY
ENFERMEDAD DE GLASSER
ENTEROTOXEMIAS
FIEBRE AFTOSA
INFLUENZA PORCINA

Las vacunas muertas o inactivadas estn

formadas por el o los microorganismos
completos pero inactivado por algn mtodo
fsico o qumico. Estas vacunas, presentan
como principales ventajas, frente a las vacunas
atenuadas, su estabilidad y seguridad, as
como su conservacin. Sin embargo, suelen
inducir una respuesta inmunitaria menor que
las vacunas atenuadas, fundamentalmente
ligada a linfocitos CD 4+ con produccin de
anticuerpos.

MAL ROJO
RINITIS ATRFICA
PARVOVIROSIS
PESTE PORCINA CLSICA
SNDROME REPRODUCTIVO Y RESPIRATORIO
PORCINO (PRRS)
Mycoplasma hyopnemoniae

Los mtodos para llevar a cabo la inactivacin

de los antgenos vacunales ms utilizados en la
actualidad, estn basados en tratamientos
qumicos o fsicos que no produzcan
modificaciones en las protenas que puedan
alterar la respuesta inmune. Los ms utilizados
hoy da son: el formaldehdo y los agentes
quelantes tales como: xido de etileno,

Pasteurella multocida
Serpulina

propiolactona, etilenoimina, etc. Estos agentes,

producen uniones cruzadas en las cadenas de
los cidos nucleicos, inactivando al
microorganismo pero no alterando sus protenas.
Las vacunas inactivadas o muertas tambin
se han producido a partir de exotoxinas
bacterianas inactivadas, como es el caso del
ttanos con notable xito.

Vista parcial de una unidad de centrifugacin industrial de

bacterias para la produccin de vacunas bacterianas.

La superficie para cultivar clulas se puede

incrementar mucho ms utilizando los microcarries.
Son unas partculas que permiten que millones de
clulas puedan adherirse y crecer sobre ellas. De esta
manera se multiplica por "n" veces la superficie para
cultivar clulas.

Qu son los adyuvantes?

A principios del siglo pasado se observo que diferentes sales unidas al material antignico,
inducan un aumento de la produccin de anticuerpos y de la memoria de la respuesta
inmune, en los animales que eran vacunados con esas mezclas. Estas sustancias,
denominadas adyuvantes, actan fundamentalmente favoreciendo la presentacin de
los antgenos al sistema inmune, mediante el secuestro de los antgenos vacunales y la
posterior liberacin de manera lenta y prolongada, as como produciendo una ligera
inflamacin que activa la atraccin de las clulas presentadoras y por tanto
favoreciendo la quimiotaxis

Los adyuvantes ms utilizados al principio

fueron las sales de aluminio (hidrxido
de aluminio o fosfato de aluminio), que
cuando se unen al antgeno e inoculan en
un animal producen un ligero granuloma
que favorece la lenta eliminacin del
antgeno (estimulacin antignica ms
duradera) y la atraccin de las clulas
presentadoras por lo que aumentaba la
capacidad de la respuesta inmune. El
hidrxido de aluminio todava es
utilizado en la especie porcina, sobre
todo para antgenos altamente
inmunognicos, como en la vacuna de
parvovirus. Otras formas de adyuvantes,
son la mezcla del antgeno en una
emulsin de agua y aceites minerales,
conocida como adyuvante incompleto de
Freund (el adyuvante completo adems
est compuesto por Mycobacterium
tuberculoso muerto). El efecto de este
adyuvante es similar al anterior, induciendo
una reaccin inflamatoria con atraccin de
clulas presentadoras. Este tipo de
adyuvante son tambin utilizados en la
especie porcina, sobre todo con
antgenos de baja capacidad
inmunognica como el virus de la fiebre
aftosa o la influenza porcina.

Ms recientemente se van incorporando otro tipo

de adyuvantes como el Carbomer, las saponinas
(Quil A), aunque esta ltima, dado su carcter
destructivo, no se utiliza con frecuencia. Los
denominados "immune stimulating complexes"
ms conocidos como ISCOMS, presentan una
buena accin estimulante sin efectos
secundarios, pero su utilizacin comercial es
muy reducida. Por ltimo, la asociacin de
antgenos vacunales, adyuvantes
convencionales o no y algunas citocinas como
la IL 2 o el interfern, se estn cada da
estudiando ms por su potencial de estimulacin
antignico y probablemente sern en un futuro
cada vez ms utilizados.

PRINCIPALES ADYUVANTES UTILIZADOS

EN LAS VACUNAS PORCINAS
HIDRXIDO DE ALUMINIO
ACEITES MINERALES

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Temario del curso

CAPTULO 8

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Bibliografa

Temario del curso

QU PROBLEMAS PUEDEN
PRESENTAR LAS VACUNAS
CONVENCIONALES?

A pesar de los excelentes resultados obtenidos con las vacunas

convencionales en el control de la mayora de las enfermedades
porcinas, existen algunos problemas como la imposibilidad de

diferenciar animales vacunados de enfermos y la dificultad para

conseguir una vacuna eficaz para todas las enfermedades.

Las vacunas convencionales han sido y siguen siendo la base inmunolgica principal
para luchar contra la mayora de las enfermedades porcinas. Sin embargo, varios son
los problemas que este tipo de vacunas presentan.
Entre ellos caben destacarse los siguientes:
SEGURIDAD.
La posible reversin a la virulencia de las
vacunas vivas y los fallos en la total
inactivacin de las vacunas inactivadas,
son los problemas, que aunque no
frecuentes, que se pueden detectar en las
vacunas convencionales. Otros problemas
que afectan tambin a la seguridad de las
vacunas, estn originados por las
contaminaciones con agentes bacterianos
o virales no detectados. En algunas
ocasiones se pueden contaminar las lneas
celulares donde se prepara el inculo de la
vacuna con virus que no producen efecto
citoptico, y que se replican en paralelo con
el virus vacunal. Aunque los controles de
calidad y seguridad de los diferentes lotes de
vacunas deberan detectar estos problemas,
no siempre ocurre.

PRINCIPALES INCONVENIENTES
DE LAS VACUNAS CONVENCIONALES
Seguridad: Reversin a la virulencia.
Falta de inactivacin total.
Contaminaciones.
Efectos secundarios: Inflamacin.
Fiebre.
Hipersensibilidad.
Inmunosupresin.
Cadena de fro: Refrigeracin.
No disponibles frente a todas las enfermedades:
PPA.
No diferenciacin entre vacunados y enfermos.

EFECTOS SECUNDARIOS.
Los efectos secundarios originados por la
vacunacin con algunas vacunas
convencionales son otros de los problemas
observados. Generalmente, estos efectos
secundarios se producen solamente a nivel
local con inflamacin o edema en el punto
de inoculacin, a veces aparece fiebre, y
ms infrecuentemente, aunque tambin
ocurren, otros problemas ms serios como
reacciones de hipersensibilidad o de
inmunosupresin pasajera.

CADENA DEL FRO.

Las vacunas convencionales, tanto inactivadas como atenuadas (en estas es crtico),
necesitan mantenerse durante su almacenamiento y transporte en temperaturas de
refrigeracin alrededor de los + 4 a + 6 C. Estos requerimiento impiden en algunas

ocasiones, sobre todo en pases del tercer mundo o en zonas poco desarrolladas, que las
vacunas se mantengan en buen estado antes de su utilizacin hacindolas menos efectivas.

NO DISPONIBLES FRENTE A TODAS LAS

ENFERMEDADES.
Mediante estas tecnologas convencionales
no se han podido desarrollar vacunas
frente a todas las enfermedades porcinas.
As, frente al virus de la Peste Porcina
Africana no ha sido posible, hasta la fecha,
desarrollar una vacuna efectiva frente a esta
importante enfermedad que est generando
grandes perdidas econmicas y sociales en
un alto nmero de pases africanos,
impidiendo el desarrollo del sector porcino.
Fotografas del virus de la Peste Porcina Africana (PPA)
por microscopa electrnica y lesiones que provoca.

NO DIFERENCIACIN DE ANIMALES
VACUNADOS DE ENFERMOS.
Quizs el principal problema de este tipo de
vacunas convencionales es la imposibilidad
para diferenciar los animales vacunados
de los animales enfermos. Dado que las
vacunas convencionales estn formadas por
el virus o bacterias completos (atenuados o
inactivados), el sistema inmune detecta los
mismos antgenos que cuando se produce
una infeccin y su respuesta por tanto es la
misma. Este inconveniente ha impedido,
por ejemplo, a los pases de la Unin
Europea utilizar vacunas frente a algunas
enfermedades como la Peste Porcina
Clsica, que aunque son muy efectivas, no
permiten diferenciar al animal vacunado del
enfermo o portador.

La estructura molecular y antignica es idntica tanto

para el agente infeccioso como en el vacunal por lo
que los anticuerpos inducidos por ambos son
idnticos.

Virus de la PPC

Algunos de estos problemas han sido resueltos con las nuevas tecnologas y la
produccin de vacunas de nueva generacin como veremos en el prximo captulo.
CAPTULO 8

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Bibliografa

Temario del curso

CAPTULO 9

Captulo 8

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Temario del curso

VACUNAS DE
NUEVA GENERACIN
Los avances en el conocimiento de la respuesta inmune y en las
tcnicas de biologa molecular conseguidos en los ltimos aos, han
permitido identificar, en un gran nmero de agentes infecciosos, las
protenas de inters inmunolgico y expresarlas en diferentes vectores
de amplificacin; o bien eliminar aquellas que no representan inters
inmunolgico y/o puedan estar relacionadas con la virulencia. De esta
manera, se han desarrollado nuevas vacunas que no estn formadas por
el agente infeccioso completo, y que permiten, entre otras ventajas, la
diferenciacin serolgica de los animales vacunados frente a los
enfermos.

Gracias al actual conocimiento de la respuesta inmune frente a los agentes infecciosos,

y al desarrollo de diferentes tcnicas de ingeniera gentica, se estn diseando nuevas
vacunas que permitirn resolver los problemas actualmente existentes con la utilizacin
de las vacunas convencionales.

Qu son estas nuevas vacunas?

La estrategia para la obtencin de estas

nuevas vacunas se basa en la
identificacin de la protena o protenas
de un agente infeccioso capaces de
inducir una respuesta inmune protectiva
de forma semejante a la que inducira el
agente infeccioso completo; o bien, en
la identificacin de aquellas protenas
que no tienen inters ni inmunolgico ni
replicativo, o que pudieran estar
relacionadas con la virulencia y por
tanto no necesarias. De esta manera y
mediante tcnicas de ingeniera gentica,
se pueden seleccionar los genes
correspondientes clonarlos y
expresarlos en diferentes vectores o
eliminarlos mediante una deleccin
selectiva. Una variante de este sistema
sera, una vez identificada la protena de
inters inmunolgico, la obtencin de la
protena o protenas por sntesis
proteica.

Otra caracterstica importante en la estrategia de obtencin de estas nuevas vacunas es la

posibilidad de incorporar, adems de las protenas de inters inmunolgico, otras secuencias
de otros antgenos que puedan aumentar la estimulacin de los linfocitos B y Linfocitos
T, e incluso la liberacin de citocinas. De esta manera se podra mejorar la presentacin
de los antgenos al sistema inmune.

Cuntos tipos conocemos?

En base a las diferentes metodologas utilizadas (recombinacin, deleccin gnica) o al tipo

de producto obtenido (protenas inactivas, vacunas atenuadas-deleccionadas,
recombinantes) se pueden clasificar las vacunas de nueva generacin, en los siguientes
grupos:
CLASIFICACIN DE LAS VACUNAS
DE NUEVA GENERACIN PORCINAS
PROTENAS INACTIVADAS:
Vacunas de subunidades :
Fiebre aftosa
Peste porcina clsica
Parvovirus porcino (experimental)
Vacunas de protenas sintticas:
Fiebre aftosa

VACUNAS VIVAS DELECCIONADAS:

Enfermedad de Aujeszky
RECOMBINATES VIVOS
Slo Experimental
VACUNAS DE ADN
Slo Experimental

PROTENAS INACTIVADAS.

Las tcnicas moleculares ms utilizadas

para la obtencin de grandes cantidades
de protenas antignicas en la actualidad
son:
La tcnica de ADN recombinante:
Vacuna de subunidades.
La produccin de protenas sintticas:
Vacunas sintticas.

La tcnica de ADN recombinante.

Esta tcnica se basa en la produccin de una protena o protenas de un agente
infeccioso sin necesidad del propio microorganismo, mediante tcnicas de ingeniera
gentica que fragmentan el ADN correspondiente, y lo expresan en diferentes vectores de
expresin "in vitro". As, se producen grandes cantidades de una nica protena (subunidad) o
de varias protenas de un agente infeccioso, que pueden ser utilizadas como vacuna de
subunidades. Los pasos de esta metodologa son los siguientes:

Una vez identificada la protena/s de inters

inmunolgico de un determinado agente causal y
su secuencia, se puede aislar el fragmento de
ADN que codifica la mencionada protena e
insertarlo en un plsmido que hace de vector
de transferencia (el tipo de plsmido utilizado
depender del tipo de vector de expresin) y
este a su vez en el vector de expresin.
Algunos de estos vectores de expresin
aceptarn el nuevo gen y producirn la protena
que codifica. Mediante diferentes sistemas de
marcaje se podr diferenciar el vector que
expresa el nuevo gen del que no lo ha
incorporado.
Una vez conocida el fragmento de ADN y su
secuencia, la protena de inters inmunolgico, se
asla el fragmento de ADN (1), y se inserta en un
plsmido (2). Este plsmido se introduce en un vector
de expresin (E. coli, Baculovirus) (3). Algunos
aceptarn el gen y producirn el recombinante (4).
Otros, la mayora, no (5).

Los vectores de expresin mas

utilizados son las bacterias,
fundamentalmente el E. coli, las
levaduras y sobre todo los baculovirus.
Las bacterias presentan problemas para
glicosilar adecuadamente los
polipptidos producidos, por lo que
normalmente, las protenas obtenidas,
presentan menor capacidad
inmunognica.
ltimamente, se est utilizando mucho el
baculovirus en la produccin de vacunas
de subunidades, debido a su enorme
capacidad de expresin. El baculovirus es
un virus de insectos que se puede
replicar en lneas celulares estables de
insecto y cuyo promotor de expresin
es el gen de la polihidrina. Este gen
supone aproximadamente el 60% de las
protenas totales del baculovirus y
puede ser sustituido por genes forneos.
Mediante este sistema, se han producido y
expresado protenas en las clulas de
insecto frente a varios virus animales
como: la lengua azul, el parvovirus porcino
y canino, Peste porcina clsica y el virus de
la Peste equina africana. Incluso se han
logrado expresar varias protenas a la
vez en forma semejante a del virin
("Virus like particles VLP" o partculas
que parecen virus,) como es el caso de la

VECTORES DE EXPRESIN
MS UTILIZADOS
BACTERIAS: Escherichia coli
LEVADURAS.
BACULOVIRUS.

Microscopia electrnica de la estructura de un VLP ("virus

like particles") de varias protenas del virus de la "lengua
azul" . Cortesia de P. Roy.

"lengua azul", producindose un producto

de gran capacidad inmunognica.
Mediante la tcnica de ADN recombinante se
consigui la primera vacuna de subunidades
frente al virus de la Fiebre aftosa (VFA) a
mediados de los aos 80. Se clon y expres
el gen de la protena VP1 del VFA en el E. Coli,
producindose gran cantidad de VP

Lesiones ocasionadas por el virus de la Fiebre Aftosa

en el cerdo.

Lamentablemente, la respuesta inmunitaria

obtenida con esta vacuna de subunidades
fue muy inferior a la obtenida con la vacuna
inactivada convencional. Para conseguir una
reaccin inmune similar a la vacuna
convencional se requera aproximadamente de
1000 veces mas cantidad de VP 1.

Recientemente, se ha desarrollado una vacuna de subunidades frente al virus de la

Peste porcina clsica (VPPC), formada exclusivamente por la glicoprotena (gp 55). Esta
protena induce inmunidad y proteccin, a nivel experimental contra el VPPC virulento. El gen
de la gp 55 ha sido clonado y expresado mediante un sistema de baculovirus. La
protena as producida e inoculada en cerdos experimentales ha producido anticuerpos
neutralizantes capaces de proteger la infeccin con el virus virulento.
Produccin de protenas sintticas.
Vacunas sintticas. Si se logra identificar
en la compleja estructura de una protena
los eptopes o determinantes
antignicos de inters inmunolgico,
como ha ocurrido con la protena VP 1 del
virus de la Fiebre aftosa, en la que se
conoce que entre los aminocidos 140 y
160 se encuentra el eptope para la
induccin de los anticuerpos
neutralizantes, se puede reproducir su
secuencia mediante la sntesis qumica
y realizar un pptido de sntesis idntico
al del virus, lo que se denomina una
vacuna sinttica. Lamentablemente, los
niveles de proteccin conseguidos, en el
caso de la Fiebre aftosa, con la protena
sinttica no han superado el 50% de los
animales.
La causa de esta falta de inmunidad protectiva parece deberse a que el eptope situado
entre los aminocidos 140 y 160 es eficazmente reconocido por los linfocitos B, pero no
por los linfocitos T que no lo reconocen bien. En la actualidad, se esta trabajando en la
identificacin de eptopos que pudieran estimular eficazmente a los linfocitos T para incluirlos
en una futura vacuna.
CAPTULO 9

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CUAN
TOS
TIPOS
CONOCEMOS II?
Una posibilidad que nos brinda la ingeniera gentica es la eliminacin de
genes que expresan protenas relacionadas con la virulencia para conseguir
cepas ms atenuadas. Igualmente se pueden incorporar distintos genes de
diferentes microorganismos en uno solo que acta como vector. Son otras
vacunas de nueva generacin.

VACUNAS VIVAS DELECCIONADAS

Gracias al desarrollo de la biologa

molecular se ha podido avanzar en el
conocimiento de los diferentes genes
que componen los microorganismos y
las protenas que codifican. De esta
manera se ha podido modificar la
estructura genmica de algunos
microorganismos, como el virus de la
Enfermedad de Aujeszky (EA),
eliminando genes que codifican
protenas ligadas a la virulencia,
consiguiendo cepas atenuadas de
manera estable y segura.

El conocimiento del genoma del virus de la EA

demostr a mediados de los aos 80 que algunas de
las cepas virales, utilizadas para la elaboracin de
vacunas vivas atenuadas, presentaban una
deleccin en la regin Us de su genoma que
afectaba a los genes que codifican las
glicoprotenas gE (antes denominada gI) y la actual gI
(antes gp 63).

Esquema de la estructura del virin, sus diferentes

protenas (con su nueva nomenclatura) y del ADN
del virus de la E.A.

As la cepa Bartha K/61 presentaba una deleccin en la

regin Us que afectaba a la gE y la actual gI (antigua gp
63). La cepa NIA-4 tambin presenta una deleccin en
la regin Us y por tanto no expresa la protena gE. La
cepa Alfort 26 presentaba una deleccin en las fraccin
Us pero slo afectaba a la expresin de la actual gI y no
de la gE. Por todo ello, las vacunas producidas con
estas cepas inducan buena proteccin en los
animales, pero no inducan anticuerpos frente a la
protena gE, por lo que los animales vacunados con
ellas podan ser diferenciados de los animales
infectados, ya que el virus que produce la enfermedad
s presenta la protena gE.

Esquema de la estructura del virin del virus de la EA con la

localizacin de las diferentes protenas.

Esquema de la estructura del ADN del virus de la

Enfermedad de Aujeszky. En el fragmento Us se
localizan los genes de las gE y g I .

Los hallazgos mencionados estimularon la investigacin molecular sobre el virus de la EA.

Mediante tcnicas de ingeniera gentica, se iniciaron diferentes trabajos para eliminar genes que
codificaban o bien protenas ligadas a la virulencia (timidn-kinasa) o protenas que, como la gE, no
son importantes en la induccin de la respuesta inmune y permita diferenciar las cepas vacunales.
As, se obtuvieron cepas menos virulentas, al eliminar el gen de la timidn-kinasa y marcadas, al
eliminar el gen de la gE.)

RECOMBINATES VIVOS

Las vacunas recombinantes vivas

estn basadas en la utilizacin de un
microorganismo (virus o bacteria) que
actuara como vector para expresar
genes de otro microorganismo
diferente. De esta forma, este nuevo
microorganismo recombinante, puede
utilizarse como vacuna frente a ambos

El microorganismo que se ha utilizado ms

frecuentemente como vector de expresin ha sido el
virus de la vacuna ("vaccinia"), ya que dispone de
genoma amplio y bien estudiado lo que permite insertar
genes extraos sin alterar su maquinaria replicativa. As,
se ha producido por ejemplo un recombinante frente al
virus de la rabia, insertando en el genoma del virus
"vaccinia" el gen de la protena G del virus rabico. El
inconveniente de este vector es que al ser un virus
capaz de infectar la mayora de las especies
animales, incluso al hombre, se obtendra una vacuna
viva no especifica de especie y por tanto susceptible de
inmunizar a cualquier animal.
Una de las ultimas vacunas conseguidas mediante esta
tecnologa recombinate, pero no utilizando el virus
vaccinia, ha sido la obtenida por nuestro grupo, frente al
virus de la Mixomatosis y de la Enfermedad vrica
hemorrgica del conejo. En esta vacuna, se ha
utilizado el virus de la mixomatosis como vector
sobre el que se ha insertado el gen de la protena VP

60 del virus de la hemorrgica. El resultado ha sido la

obtencin de una vacuna que induce proteccin frente a
ambas enfermedades.

En la especie porcina, se ha utilizado

de forma experimental una vacuna
recombinante utilizando el virus de la
Enfermedad de Aujeszky, deleccionando
el gen de la gE e insertado el gen de la
glicoprotena gp 55 del virus de la Peste
porcina clsica, para inducir inmunidad
frente a ambas enfermedades. La
ventaja de este vector es la
especificidad de especie, pero la
desventaja es que no siempre se
desea utilizar una vacuna viva frente a
la Enfermedad de Aujeszky. Otras
aproximaciones que se estn estudiando
es la de utilizar virus especficos de
porcino, como los Poxvirus porcinos no
patognicos, que presentan la gran
ventaja de su capacidad para la
insercin y expresin de genes, su
especificidad para el husped y el no
estar relacionados con ninguna
enfermedad. Por ltimo, se estudia
tambin experimentalmente la
posibilidad de utilizacin del
adenovirus como vector, dado que no
es patognico, pero si se replica y
expresa en un gran nmero de
sistemas celulares con lo que
inducen una gran respuesta inmune
tanto humoral como celular e incluso
a nivel de las mucosas.
En cuanto a los vectores bacterianos,
el ms utilizado hasta la fecha ha sido
una variante atenuada de la

Esquema de la construccin del recombinante entre el virus de la

Mixomatosis y la protena vp 60 del virus de la Enfermedad vrica
hemorrgica del conejo.

Microscopia electrnica de partculas virales de Mixoma y

Enfermedad vrica hemorrgica del conejo.

Salmonella que induce una buena

respuesta inmune, incluso a nivel de
las mucosas entricas, pero que en el
caso de la especie porcina podra
presentar problemas diagnsticos.

VACUNAS DE ADN

ltimamente se est estudiando la

posibilidad de utilizar directamente
una fraccin de ADN purificado que
contenga el gen de la protena capaz
de inducir una respuesta inmune
protectiva. Esta fraccin de ADN se
inserta en un plsmido, que hace de
vector. Las clulas animales captan
estos plsmidos, mediante procesos
todava no bien entendidos, y los
incorporan en el ncleo celular,
permitiendo la expresin del gen forneo
y la produccin de la correspondiente
protena. Esta protena, se expresa en
la superficie de la clula o es liberada al
medio, por lo que el sistema inmune la
puede reconocer en su forma nativa,
de la misma manera que durante una
infeccin natural con el agente
completo, induciendo por tanto una
excelente respuesta inmune.

Por ltimo, destacar que a nivel experimental existe otro

tipo de vacunas de nueva generacin denominadas
vacunas antiidiotipo, que aunque nunca se han
utilizado en la especie porcina, conviene recordar. Estas
vacunas se basan en el reconocimento de las
estructuras en la reaccin antgeno anticuerpo. Cuando
un animal es inoculado con un determinado antgeno se
produce una respuesta humoral.
Las inmunoglobulinas que se inducen presentan, en el
sitio de unin ultimo prrafo (idiotipo) de la regin
variable, la estructura inversa del epitope inductor de la
reaccin. Si inoculramos esos sitios de unin a otro
animal, se produciran anticuerpos frente a esas
estructuras, que seran tambin complementarias
(anticuerpos antidiotipo).

El antgeno (1) induce unos anticuerpos (2) cuyos

sitios de unin son complementarios a la

estructura (1). Cuando los sitios de unin de (2) se
inoculan a otro animal, inducirn otros
anticuerpos (3) cuyos sitios de unin sern
complementarios de (2) e idnticos a (1) ya que
presentan la misma estructura. Estos sitios de
unin podran ser utilizados como vacuna frente al
antgeno (1)

En definitiva, los anticuerpos inducidos contra el idiotipo (antidiotipo) tendran la misma estructura
que el antgeno original y por tanto serviran como antgenos para inmunizar frente al primer
antgeno que inicio la cadena. Los anticuerpos antidiotipo pueden ser anticuerpos policlonales o
anticuerpos monoclonales y podran ser utilizados como vacunas, especialmente en aquellos
casos en los que es muy difcil obtener las protenas o codificar los genes correspondientes a las
protenas de inters inmunolgico.

CAPTULO 9

CAPTULO 9

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Temario del curso

Temario del curso

COMO

FUNCIONAN LAS
VACUNAS DE NUEVA
GENERACIN?
Las vacunas de nueva generacin actan de forma semejante a las
vacunas convencionales, pero presentan algunas e importantes ventajas con
respecto a ellas.

Las vacunas de nueva generacin actan

sobre el sistema inmune de forma distinta
segn el tipo de vacuna de que se trate. As las
vacunas de subunidades o de protenas
sintticas (Protenas inactivadas) presentan
un patrn de respuesta similar al de las
vacunas inactivadas convencionales, aunque
requieren en general mas cantidad de

VACUNAS
ATENUADAS

VACUNAS
INACTIVADAS

Estimulacin CD 4+
y CD 8+

Fundamentalmente
CD 4+

CITOCINAS

Menos CITOCINAS

antgenos (son ms pobres antignicamente)

para inducir respuestas semejantes.
La gran ventaja es, que al no estar formadas
por la totalidad de la estructura del agente
infeccioso, es posible diferenciar
serolgicamente a los animales vacunados
de los animales enfermos. Esta particularidad
es an ms importante en las vacunas vivas
deleccionadas o en las vacunas
recombinantes, las cuales, al ser vacunas
vivas, presentan una mejor respuesta inmune
que las de protenas inactivadas, debido a que
expresan el antgeno de forma creciente y ms
prolongada, con patrones semejantes a los de
las vacunas atenuadas convencionales, y
tambin pueden diferenciarse.

(Interfern)
MENOR ANTGENO

MAYOR ANTGENO

MENOR
ESTABILIDAD
ALMACENAMIENTO

MAYOR
ESTABILIDAD
ALMACENAMIENTO

MENOS SEGURAS

MS SEGURAS

ADYUVANTES NO
CRTICOS

ADYUVANTES SON
CRTICOS

Las vacunas ADN, formadas por un fragmento

de ADN unido a un promotor, inducen una
respuesta inmune muy buena tanto a nivel
humoral como celular. Este tipo de vacunas
representan una importante esperanza para el
futuro.

Imagen de la ltima parte del desarrollo de la tcnica ELISA

Esquema del mtodo ELISA de Competicin para el
diagnstico de la Enfermedad de Aujeszky. Los animales
vacunados presentaran anticuerpos slo frente a gB,
mientras que los infectados tendrn anticuerpos frente a
gE.

Qu problemas pretenden resolver?

Las vacunas de nueva generacin resuelven algunos de los problemas que se producen con las
vacunas convencionales entre ellos caben destacar los siguientes:

Seguridad: Las vacunas de subunidades o

de protenas sintticas solucionan el
problema de la falta de inactivacin total
que se pueden presentar en las vacunas
inactivadas convencionales. Estas nuevas
vacunas no necesitar ser inactivadas ya que
slo estn producidas por protenas. De igual
manera, las vacunas de deleccin o
recombinantes resuelven el problema de la
posible reversin a la virulencia.

Diferenciacin entre animales vacunados y

enfermos: Esta es probablemente una de las
mejores ventajas de las vacunas de nueva
generacin en comparacin con las
convencionales. As, en el caso de la
Enfermedad de Aujeszky la utilizacin de las
vacunas gE negativas (antes denominadas gI
negativas) est permitiendo llevar a cabo
programas de erradicacin frente a la
enfermedad, pudiendo detectar los animales
portadores y o enfermos de los vacunados
gracias a que los animales vacunados
presentan solamente anticuerpos frente a gp II
(no frente a gE) mientras que los animales
enfermos o portadores presentan anticuerpos
frente a gE y gII. Igual se est intentando con
las nueva vacuna de subunidades frente al
virus de la PPC.

Cadena de Fro: Las vacunas de subunidades o

sintticas presentan menores requisitos de fro
que las vacunas convencionales.

Proceso de clonacin de la protena E2 y expresin en

baculovirus para la produccin de la vacuna de subunidades
frente al virus de la PPC.

Los animales enfermos de PPC, presentan anticuerpos

frente a las diferentes protenas del virus, mientras que los
animales vacunados con la vacuna de subunidades E2,
slo presentarn anticuerpos frente a E2

CAPTULO 9

El mtodo ELISA diferencia para animales vacunados con la

vacuna de subunidades (E2). Los animales vacunados slo
presentan anticuerpos frente a E2, los portadores y/o
enfermos, presentan anticuerpos contra E2 y Erns.

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CAPTULO 10

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Captulo 9

Temario del curso

Temario del curso

LOS
RETOS DE
LA
INMUNOLOGA.
A pesar de los avances conseguidos en el conocimiento de la inmunologa
porcina en los ltimos aos, todava quedan retos importantes que requieren
mayor investigacin y desarrollo.

Qu seguimos sin conocer bien?

El conocimiento de la inmunologa, como el de las dems ciencias, se encuentra en

constante avance en paralelo con el desarrollo tecnolgico. A pesar de los importantes
progresos conseguidos en los ltimos aos, son todava muchos los retos que quedan por
conocer en esta apasionante ciencia. En este captulo repasaremos algunos de esos retos,
comenzando por las clulas del sistema inmune para terminar con los mecanismos de

proteccin.

En el conocimiento de las clulas del

sistema inmune todava quedan algunas
lagunas por despejar, tanto con respecto a
los receptores de los linfocitos y
, como sobre todo de las clulas
presentadoras de antgenos (CPAg) y en
particular sobre las clulas dendrticas,
que nos ayuden a conocer mejor los
mecanismos de colaboracin celular en la
respuesta inmune.
Esquema de la cooperacin celular en la respuesta inmune
adquirida

Conocer mejor los mecanismos de la inmunidad de

las mucosas relacionados con el transporte de
antgenos y las rutas de infeccin que permitan
aumentar la estimulacin antignica a ese nivel y
conseguir una mejor respuesta inmunitaria, es otro de
los retos de la inmunologa porcina.
Sobre el conocimiento de las inmunoglobulinas
porcinas, se necesitara avanzar en el estudio de la
inmunoglobulina IgE. la cual slo ha podido
valorarse hasta ahora de forma indirecta. As como,
estudiar definitivamente si existe o no la IgD porcina y
ampliar la informacin sobre el papel protector de la
inmunoglobulina IgA.

PRESENTACIN ANTIGNICA EN LA ZONA

INDUCTORA DE LAS MUCOSAS. El antgeno que
penetra en los enterocitosis se destruye rpidamente por
los lisosomas. Sin embargo, el antgeno que es capturado
por las clulas M, es trasportado sin degradacin y
presentado a los linfocitos intraepiteliales. A partir de ah
va a los ganglios linfticos.

Otros de los importantes retos de la inmunologa

porcina es avanzar en el conocimiento de las
citocinas solamente se han clonado 19 porcinas.
Conocer mejor como intervienen en la respuesta
innata y adquirida, en la hematopoyesis y en
activacin de los linfocitos, son algunos de los temas
que requieren mayor investigacin.

Una de las acciones de las citocinas en su capacidad para la

atraccin de las diferentes clulas del sistema inmune.
Las citocinas juegan un papel fundamental en la
respuesta natural mediante mecanismos de accin
directa frente al agente invasor (evitando la infeccin
de las clulas por diferentes virus ) o mediante
mecanismos de activacin celular (NK y macrfagos)
que a su vez liberan ms citocinas

Por ltimo, se debe avanzar ms en los

mecanismos inmunitarios frente a los
agentes infecciosos y parasitarios. En
particular de los parsitos que, dada la
compleja estructura antignica y sus
diversos ciclos vitales, inducen diversos
mecanismos de evasin de la respuesta
inmune, con infecciones intracelulares o
cambios en su estructura antignica, que
no son del todo bien conocidos. La
inmunologa parasitaria, es otro de los
grandes retos pendientes. As mismo,
conseguir vacunas ms efectivas frente
a agentes bacterianos y vricos (todava
existen lagunas en muchas enfermedades)
es otro de los aspectos que necesitan
mayor investigacin. Las vacunas de ADN
sern, probablemente en el futuro
prximo, una excelente opcin.
Esquema de los diferentes tipos de vacunas de nueva generacin

Como evolucionaran los estudios inmunolgicos?

Los temas antes descritos, y otros muchos que todava estn sin resolver completamente, irn
conocindose cada da mejor gracias al avance y desarrollo de las nuevas tecnologas. Los
avances en la ingeniera gentica, que permiten clonar y expresar diferentes genes, y por tanto
conocer el papel de las protenas que codifican, y el desarrollo de animales de experimentacin
transgnicos que, o bien se les ha suprimido y por tanto no expresan algn gen regulador de

alguna funcin (animales nulos o knock out),

o se les incorpora algn gen concreto; son
algunas de las nuevas tecnologas
disponibles, que sin duda ayudaran al
avance en el conocimiento de la respuesta
inmune.
Todo ello, sin olvidar el importantsimo
papel que los anticuerpos monoclonales
siguen jugando en el estudio de las
diferentes poblaciones y subpoblaciones de
los linfocitos, y en el conocimiento de los
distintos epitopes de diferentes antgenos y
el de los animales singnicos para el
sistema de histocompatibilidad. Gracias
a todas estas tcnicas se continuar
avanzando en el conocimiento de la
inmunologa porcina, que como todas las
ciencias vivas, se encuentra en
permanente y constante desarrollo.

Esquema de la produccin de anticuerpos monoclonales

Qu papel puede jugar el cerdo en el futuro?

La produccin porcina es hoy da la principal fuente de materia prima para la industria crnica en la
Unin Europea, jugando un importante papel en la produccin final agraria. Esta produccin se
espera incrementar en el futuro gracias, entre otros, al desarrollo de la produccin en nuestro pas.
Todo ello, hace del cerdo un animal de enorme importancia estratgica para el desarrollo
econmico futuro, y por tanto, la investigacin sobre esta especie continuar siendo de vital
importancia. Adems, en los ltimos aos el cerdo se est viendo no slo como una
importantsima fuente de protenas, sino lo que es o puede ser an ms importante, como una
fuente de rganos para el transplante a la especie humana.
Los xenotransplantes (transplantes de rganos entre especies diferentes) se vislumbra como
una importante alternativa futura a la falta de rganos para transplante en la especie
humana. Incluso en nuestro pas, que presenta la mayor tasa de donacin de rganos del mundo,
son insuficientes los rganos disponibles para las necesidades de transplante requeridos. Dentro
de las posibles especies animales para realizar los xenotransplantes, el cerdo presenta
importantes ventajas como donante frente a otras especies animales anteriormente
seleccionadas, como los primates y especialmente los babuinos.

Entre estas ventajas se destacan: su

facilidad para la reproduccin, su
tamao compatible con el humano, el
menor riesgo de infecciones cruzadas
(con la nica excepcin de los retrovirus
endgenos porcinos, cuyo significado
sanitario se encuentra actualmente en
estudio) y la posibilidad de producir
cerdos transgnicos o politransgnicos
que expresen diferentes genes, para
evitar el rechazo hiperagudo o el
rechazo vascular agudo que son en la
actualidad los principales problemas para
el xito del xenotransplante. En la
actualidad, ya existen cerdos
transgnicos al DAF Decay
accelerating factor. El DAF es capaz de
inhibir la formacin de la cobertasas de C3
y de C5, rompiendo de esta manera la
activacin de la cascada del
complemento a nivel de ambas vas, lo
que permitir el rechazo hiperagudo.

Imagen de microscopia electrnica de retrovirus

Lo expuesto anteriormente permite sugerir que el estudio del cerdo en los prximos aos ocupara
un importante papel en la estrategia cientfica de la mayora de los pases industrializados.

Foto de un babuino. Esta especie fue en sus

da considerada como la principal candidato para los
xenotransplantes a la especie humana.

CAPTULO 10

En la actualidad, los cerdos transgnicos

y especialmente los politransgnicos del futuro
parecen ser la especie animal candidata
para ser donante en los xenotransplantes
a la especie humana.

Captulo 9

Temario del curso

Copyright Dr. Snchez-Vizcano 2001. Todos los derechos reservados.

Dep. Legal: B-19442-2001. ISBN: 84-699-4740-0

Diseo: ACCEDE. Internet al servicio de la Ciencia y la Tecnologa.

CAPTULO 10

Captulo 9

Temario del curso

LOS
RETOS DE
LA
INMUNOLOGA.
A pesar de los avances conseguidos en el conocimiento de la inmunologa
porcina en los ltimos aos, todava quedan retos importantes que requieren
mayor investigacin y desarrollo.

Qu seguimos sin conocer bien?

El conocimiento de la inmunologa, como el de las dems ciencias, se encuentra en

constante avance en paralelo con el desarrollo tecnolgico. A pesar de los importantes
progresos conseguidos en los ltimos aos, son todava muchos los retos que quedan por
conocer en esta apasionante ciencia. En este captulo repasaremos algunos de esos retos,
comenzando por las clulas del sistema inmune para terminar con los mecanismos de
proteccin.

En el conocimiento de las clulas del

sistema inmune todava quedan algunas
lagunas por despejar, tanto con respecto a
los receptores de los linfocitos y
, como sobre todo de las clulas
presentadoras de antgenos (CPAg) y en
particular sobre las clulas dendrticas,
que nos ayuden a conocer mejor los
mecanismos de colaboracin celular en la
respuesta inmune.
Esquema de la cooperacin celular en la respuesta inmune
adquirida

Conocer mejor los mecanismos de la inmunidad de

las mucosas relacionados con el transporte de
antgenos y las rutas de infeccin que permitan
aumentar la estimulacin antignica a ese nivel y
conseguir una mejor respuesta inmunitaria, es otro de
los retos de la inmunologa porcina.
Sobre el conocimiento de las inmunoglobulinas
porcinas, se necesitara avanzar en el estudio de la
inmunoglobulina IgE. la cual slo ha podido
valorarse hasta ahora de forma indirecta. As como,
estudiar definitivamente si existe o no la IgD porcina y
ampliar la informacin sobre el papel protector de la
inmunoglobulina IgA.

PRESENTACIN ANTIGNICA EN LA ZONA

INDUCTORA DE LAS MUCOSAS. El antgeno que
penetra en los enterocitosis se destruye rpidamente por
los lisosomas. Sin embargo, el antgeno que es capturado
por las clulas M, es trasportado sin degradacin y
presentado a los linfocitos intraepiteliales. A partir de ah
va a los ganglios linfticos.

Otros de los importantes retos de la inmunologa

porcina es avanzar en el conocimiento de las
citocinas solamente se han clonado 19 porcinas.
Conocer mejor como intervienen en la respuesta
innata y adquirida, en la hematopoyesis y en
activacin de los linfocitos, son algunos de los temas
que requieren mayor investigacin.

Una de las acciones de las citocinas en su capacidad para la

atraccin de las diferentes clulas del sistema inmune.
Las citocinas juegan un papel fundamental en la
respuesta natural mediante mecanismos de accin
directa frente al agente invasor (evitando la infeccin
de las clulas por diferentes virus ) o mediante
mecanismos de activacin celular (NK y macrfagos)
que a su vez liberan ms citocinas

Por ltimo, se debe avanzar ms en los

mecanismos inmunitarios frente a los
agentes infecciosos y parasitarios. En
particular de los parsitos que, dada la
compleja estructura antignica y sus
diversos ciclos vitales, inducen diversos
mecanismos de evasin de la respuesta
inmune, con infecciones intracelulares o
cambios en su estructura antignica, que
no son del todo bien conocidos. La
inmunologa parasitaria, es otro de los
grandes retos pendientes. As mismo,
conseguir vacunas ms efectivas frente
a agentes bacterianos y vricos (todava
existen lagunas en muchas enfermedades)
es otro de los aspectos que necesitan
mayor investigacin. Las vacunas de ADN
sern, probablemente en el futuro
prximo, una excelente opcin.
Esquema de los diferentes tipos de vacunas de nueva generacin

Como evolucionaran los estudios inmunolgicos?

Los temas antes descritos, y otros muchos que todava estn sin resolver completamente, irn
conocindose cada da mejor gracias al avance y desarrollo de las nuevas tecnologas. Los
avances en la ingeniera gentica, que permiten clonar y expresar diferentes genes, y por tanto
conocer el papel de las protenas que codifican, y el desarrollo de animales de experimentacin
transgnicos que, o bien se les ha suprimido y por tanto no expresan algn gen regulador de
alguna funcin (animales nulos o knock out),
o se les incorpora algn gen concreto; son
algunas de las nuevas tecnologas
disponibles, que sin duda ayudaran al
avance en el conocimiento de la respuesta
inmune.
Todo ello, sin olvidar el importantsimo
papel que los anticuerpos monoclonales
siguen jugando en el estudio de las
diferentes poblaciones y subpoblaciones de
los linfocitos, y en el conocimiento de los
distintos epitopes de diferentes antgenos y
el de los animales singnicos para el
sistema de histocompatibilidad. Gracias
a todas estas tcnicas se continuar
avanzando en el conocimiento de la
inmunologa porcina, que como todas las
ciencias vivas, se encuentra en
permanente y constante desarrollo.

Esquema de la produccin de anticuerpos monoclonales

Qu papel puede jugar el cerdo en el futuro?

La produccin porcina es hoy da la principal fuente de materia prima para la industria crnica en la
Unin Europea, jugando un importante papel en la produccin final agraria. Esta produccin se
espera incrementar en el futuro gracias, entre otros, al desarrollo de la produccin en nuestro pas.
Todo ello, hace del cerdo un animal de enorme importancia estratgica para el desarrollo
econmico futuro, y por tanto, la investigacin sobre esta especie continuar siendo de vital
importancia. Adems, en los ltimos aos el cerdo se est viendo no slo como una
importantsima fuente de protenas, sino lo que es o puede ser an ms importante, como una
fuente de rganos para el transplante a la especie humana.
Los xenotransplantes (transplantes de rganos entre especies diferentes) se vislumbra como
una importante alternativa futura a la falta de rganos para transplante en la especie
humana. Incluso en nuestro pas, que presenta la mayor tasa de donacin de rganos del mundo,
son insuficientes los rganos disponibles para las necesidades de transplante requeridos. Dentro
de las posibles especies animales para realizar los xenotransplantes, el cerdo presenta
importantes ventajas como donante frente a otras especies animales anteriormente
seleccionadas, como los primates y especialmente los babuinos.

Entre estas ventajas se destacan: su

facilidad para la reproduccin, su
tamao compatible con el humano, el
menor riesgo de infecciones cruzadas
(con la nica excepcin de los retrovirus
endgenos porcinos, cuyo significado
sanitario se encuentra actualmente en
estudio) y la posibilidad de producir
cerdos transgnicos o politransgnicos
que expresen diferentes genes, para
evitar el rechazo hiperagudo o el
rechazo vascular agudo que son en la
actualidad los principales problemas para
el xito del xenotransplante. En la
actualidad, ya existen cerdos
transgnicos al DAF Decay
accelerating factor. El DAF es capaz de
inhibir la formacin de la cobertasas de C3
y de C5, rompiendo de esta manera la
activacin de la cascada del
complemento a nivel de ambas vas, lo
que permitir el rechazo hiperagudo.

Imagen de microscopia electrnica de retrovirus

Lo expuesto anteriormente permite sugerir que el estudio del cerdo en los prximos aos ocupara
un importante papel en la estrategia cientfica de la mayora de los pases industrializados.

Foto de un babuino. Esta especie fue en sus

da considerada como la principal candidato para los
xenotransplantes a la especie humana.

CAPTULO 10

En la actualidad, los cerdos transgnicos

y especialmente los politransgnicos del futuro
parecen ser la especie animal candidata
para ser donante en los xenotransplantes
a la especie humana.

Captulo 9

Temario del curso

Copyright Dr. Snchez-Vizcano 2001. Todos los derechos reservados.

Dep. Legal: B-19442-2001. ISBN: 84-699-4740-0
Diseo: ACCEDE. Internet al servicio de la Ciencia y la Tecnologa.

CAPTULO 1
Bibliografa

Captulo 2

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. EL TIMO DE CERDO
A)

ES UN RGANO SECUNDARIO DEL SISTEMA

INMUNE
B)
ES EL PRODUCTOR DE LOS LINFOCITOS B
C)
INVOLUCIONA A PARTIR DEL PRIMER AO DE VIDA
D)
NINGUNA ES CIERTA
2. RECUERDAS LAS PRINCIPALES CARACTERSTICAS DEL SISTEMA
INMUNE? Cul es la menos correcta?

A)
ESPECIFICIDAD
B)
MEMORIA
C)
DIFERENCIAR LO PROPIO DE LO EXTRAO
D)
RAPIDEZ
3. LOS GANGLIOS LINFTICOS DE CERDO
A)
SON IGUALES A LOS DE OTRAS ESPECIES
B)
SON DISTINTOS EN SU ESTRUCTURA PERO NO EN
SU CIRCULACIN
C)
SON DISTINTOS EN ESTRUCTURA Y CIRCULACIN
D)
NINGUNA ES CORRECTA
4. LOS RGANOS DEL SISTEMA INMUNE PORCINO SE CLASIFICAN
EN:
A)
PRIMARIOS Y SECUNDARIOS
B)
SECUNDARIOS Y LINFTICOS
C)
MIXTOS
D)
NINGUNA ES CORRECTA
5. LOS LINFOCITOS B DE LOS GANGLIOS LINFTICOS SE SITAN
NORMALMENTE EN:

A)
TEJIDO LINFOIDE DIFUSO
B)
FOLCULOS LINFOIDES
C)
AMBOS
D)
NINGUNA ES CORRECTA
6. EL BAZO DE CERDO ES:
A)
UN RGANO LINFOIDE PRIMARIO
B)
UN RGANO LINFOIDE SECUNDARIO
C)
SLO PRODUCE LINFOCITOS B
D)
SLO PRODUCE ERITROCITOS
SOLUCIONES

TULO 1
Bibliografa

CAPTULO 2

Captulo 2

Temario del curso

Bibliografa

Captulo 3

Temario del curso

AUTOEVALUACI

1. DE LA LNEA LINFOIDE DERIVAN:

A) LOS EOSINFILOS
B) LAS CLULAS PRESENTADORAS DE
ANTGENO
C) LOS MACRFAGOS

D) LOS LINFOCITOS.
2. LA FORMACIN DE ROSETAS CON LOS ERITROCITOS DE CARNERO
SON ESPECIFICAS DE:
A) LINFOCITOS B.
B) MACRFAGOS.
C) LINFOCITOS T.
D) TODAS LAS POBLACIONES
LINFOCITARIAS.
3. EL MARCADOR CD8+ PERTENECE A:
A)
B)
C)
D)

LOS LINFOCITOS B
LOS LINFOCITOS T COOPERADORES
LOS LINFOCITOS T CITOTXICOS
LOS MACRFAGOS

4. EL MARCADOR CD 4+ PERTENECE A:
A)
B)
C)
D)

LOS LINFOCITOS B
LOS LINFOCITOS T COOPERADORES
LOS LINFOCITOS T CITOTXICOS
LOS MACRFAGOS

5. LOS ANTGENOS DE CLASE II SE EXPRESAN EN:

A) TODAS LAS CLULAS
B) EN ALGUNOS FACTORES DEL
COMPLEMENTO
C) LAS CLULAS PRESENTADORAS DE
ANTGENO
D) LOS LINFOCITOS CD 8+
6. LOS ANTGENOS DE CLASE I, SE EXPRESAN EN:
A) LA MAYORA DE LAS CLULAS DEL
CERDO.
B) EN TODAS LAS CLULAS DEL CERDO.
C) EN LAS CLULAS PRESENTADORAS
DE ANTGENO.
D) EN ALGUNOS COMPONENTES DEL
COMPLEMENTO.
SOLUCIONES
CAPTULO 2

Bibliografa

Captulo 3

Temario del curso

CAPTULO 3

Bibliografa

Captulo 4

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. LOS MACRFAGOS SON CLULAS?

A) FAGOCTICAS
B) PRESENTADORAS DE
ANTGENOS
C) SINTETIZADORAS DE
LINFOCINAS
D) TODAS SON CORRECTAS
E) NINGUNA ES CORRECTA

2. CUL DE LAS SIGUIENTES CLULAS

NO PRESENTAN SLA II?
A) LOS MACRFAGOS
B) LOS LINFOCITOS B
C) LAS CLULAS
DENDRTICAS
D) LOS LINFOCITOS T CD8+

3. LOS NEUTRFILOS O
POLIMORFONUCLEARES SON:
A) CLULAS
PRESENTADORAS DE
ANTGENO
B) CLULAS
PRESENTADORAS DE
INMUNOGLOBULINAS
C) CLULAS NO
FAGOCITARIAS
D) TODAS SON CORRECTAS
E) TODAS SON
INCORRECTAS

4. CUNDO UN LINFOCITO CD4+

RECONOCE A UN ANTGENO?.
A) CUANDO EL ANTGENO
EST ASOCIADO AL SLA I
B) CUANDO EL ANTGENO

EST ASOCIADO AL SLA II

C) CUANDO EL ANTGENO
EST ASOCIADO AL CD8 +
D) CUANDO EL ANTGENO
EST ASOCIADO A UNA
INMUNOGLOBULINA

5. LOS ANTGENOS T INDEPENDIENTES

INDUCEN LAS SIGUIENTES
INMUNOGLOBULINAS:
A) IgM
B) IgA
C) IgG
D) IgE
E) TODAS

6. LA ESPECIFICIDAD DE LA
CITOTOXICIDAD ADCC EST INDUCIDA
POR:
A) LAS CLULAS NK
B) LOS LINFOCITOS T
C) LOS LINFOCITOS B
D) LAS INMUNOGLOBULINAS
SOLUCIONES
CAPTULO 3
CAPTULO 4

Bibliografa
Bibliografa

Captulo 4
Captulo 5

Temario del curso

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. LA CADENA J SE ENCUENTRA EN:

A) TODAS LAS INMUNOGLOBULINAS
B) EN LA IgG
C) EN LA IgE

D) EN LA IgM
2. LAS INMUNOGLOBULINAS FORMAN PARTE DEL RECEPTOR:
A) TcR
B) BcR
C) BdR
D) NINGUNA ES CORRECTA
3.LA ESPECIFICIDAD DE UNA INMUNOGLOBULINA RESIDE EN:
a) VL Y VH
b) CL Y VH
c) VL Y HC1
d) CL Y HC3
4. CUAL DE LOS SIGUIENTES GRUPOS DE GENES NO CODIFICA LAS
INMUNOGLOBULINAS PORCINAS:
a) GENES A
b) GENES D
c) GENES J
d) GENES V
5.LA ZONA BISAGRA DE LAS INMUNOGLOBULINAS SE ENCUENTRA EN:
a) TODAS LAS INMUNOGLOBULINAS
b) SOLO EN ALGUNAS SUBCLASES DE IgG
c) EN LA IgM
d) EN LA IgG
6. EN LAS REACCIONES ADCC INTERVIENEN LAS SIGUIENTES PARTES DE LAS
INMUNOGLOBULINAS:
a) LA FRACCIN Fc
b) LA FRACCIN Fab
c) NINGUNA DE LAS DOS
d) LAS DOS FRACCIONES.
SOLUCIONES
CAPTULO 4

Bibliografa

Captulo 5

CAPTULO 5

Bibliografa

Captulo 6

Temario del curso

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. CUAL DE LAS SIGUIENTES TCNICAS

DE DIAGNSTICO PRESENTA MAYOR
NDICE DE SENSIBILIDAD ?
A)
INMUNOFLUORESCENCIA.
B) FIJACIN DEL
COMPLEMENTO.
C) SERONEUTRALIZACIN.
D) ELISA.
2. EL MTODO ELISA INDIRECTO SE
UTILIZA PARA:
A) DETECCIN DE
ANTGENOS.
B) DETECCIN DE
ANTICUERPOS.
C) DETECCIN DE
LINFOCINAS.
E) PARA NINGUNA DE LAS
MENCIONADAS.
3. DE LOS SIGUIENTES PARMETROS
CUAL CONSIDERAS EL MS
IMPORTANTE PARA REALIZAR UN
ESTUDIO DE SEROPERFILES?:
A) LA MUESTRA A TOMAR.
B) LOS ANIMALES OBJETO
DE ESTUDIO.
C) LA ZONA DONDE DESEO
LLEVAR A CABO EL
ESTUDIO.
D) EL OBJETIVO DEL
ESTUDIO.
4. QUE PARMETRO ES IMPORTANTE
PARA VALORAR UNA TCNICA DE
DIAGNSTICO?
A) LA PREVALENCIA.
B) LA SENSIBILIDAD.
C) LA CONFIANZA.

D) LA CADUCIDAD.
5. QU TCNICA DE DIAGNSTICO
CORRELACIONA MEJOR SUS
RESULTADOS CON LA SITUACIN IN VIVO?
A)
INMUNOFLUORESCENCIA.
B)
INMUNOTRANSFERENCIA.
C) SERONEUTRALIZACIN.
D) ELISA.
6. DE LAS POSIBLES APLICACIONES DEL
ESTUDIO SEROLGICO EN UNA
EXPLOTACIN CUAL SERA LA MENOS
INDICADA?
A) EL DIAGNSTICO DE UNA
ENFERMEDAD.
B) ESTABLECER EL
MOMENTO DE
VACUNACIN.
C) ESTUDIAR LOS ANIMALES
DE REPOSICIN.
D) HACER UNA VALORACIN
DEL PROGRAMA VACUNAL.
SOLUCIONES
CAPTULO 5

Bibliografa

Captulo 6

Temario del curso

CAPTULO 6

Bibliografa

Captulo 7

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. LAS CITOCINAS PUEDEN ACTUAR

COMO:
A) MEDIADORES DE LA
RESPUESTA INMUNE INNATA
Y ADQUIRIDA.

B) REGULADORES DE LA
ACTIVACIN,
PROLIFERACIN Y
DIFERENCIACIN DE LOS
LINFOCITOS.
D) ESTIMULADORAS DEL
CRECIMIENTO DE LOS
PRECURSORES
HEMATOPOYTICOS.
E) TODAS SON CORRECTAS.
F) NINGUNA ES CORRECTA.
2. CUAL DE LAS SIGUIENTES CITOCINAS
NO INTERVIENEN EN LA RESPUESTA
INNATA:
A) IL 2
B) IL 6
C) FACTOR DE NECROSIS
TUMORAL (TNF)
D) INTERFERN.
3. EN CUANTOS GRUPOS SE DIVIDEN
LAS CITOCINAS QUE ESTIMULAN LA
ATRACCIN DE LEUCOCITOS ?

A) DOS
B) TRES
C) CUATRO
D) CINCO
4. CUL DE LAS SIGUIENTES CITOCINAS
NO ES SINTETIZADA POR LOS LINFOCITOS
TH1?
A) IL 2.
B) FACTOR DE NECROSIS
TUMORAL (TNF) a b g.
C) IFN g. INTERFERN.
D) IL 5
5. CUL DE LAS SIGUIENTES CITOCINAS
NO ES SINTETIZADA POR LOS LINFOCITOS
TH 2?
A) IL 2
B) IL 4
C) IL 6
D) IL 10
6) PARA ESTUDIAR LAS CITOCINAS SE
UTILIZA?:

A) LOS ANTICUERPOS
POLICLONALES
B) LA PCR
C) LA
INMUNOFLUORESCENCIA
D) LA
SERONEUTRALIZACIN
SOLUCIONES

CAPTULO 6

Bibliografa

CAPTULO 7

Bibliografa

Captulo 7
Captulo 8

Temario del curso

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. EN LA ACTIVACIN DEL
COMPLEMENTO POR LA VA ALTERNATIVA
INTERVIENEN?
A) LOS ANTICUERPOS
B) EL FRAGMENTO C3B
C) EL FRAGMENTO C1Q
D) NINGUNO DE LOS
MENCIONADOS
2. LOS MACRFAGOS PUEDEN SER
ACTIVADOS POR?:
A) CITOCINAS
B) INMUNOGLOBULINAS
C) COMPLEMENTO
D) TODAS LAS RESPUESTAS
E) NINGUNA ES CORRECTA
3. LAS PRINCIPALES ACCIONES DE LOS
ANTICUERPOS EN LAS INFECCIONES
SON?:
A) ACTIVACIN DEL
COMPLEMENTO POR LA VA
ALTERNATIVA
B) POR LA VA CLSICA

C) ACTIVACIN DE LOS CD
8+
D) NINGUNA ES CORRECTA
4. LAS BARRERAS FSICO-QUMICAS
ESTN MEDIADAS POR?:
A) CITOCINAS
B) COMPLEMENTO
C) MECANISMOS
INMUNITARIOS
D) MECANISMOS NO
INMUNITARIOS
5. SI EL ANTGENO PRESENTA UNA FASE
EXTRACELULAR DURANTE LA INFECCIN
QU MECANISMO INMUNITARIO SER
MS EFECTIVO?
A) LOS ANTICUERPOS
NEUTRALIZANTES
B) LA CITOTOXICIDAD
LIGADA A CD 8+
C) LAS ACTIVACIN DE NK
D) NINGUNO DE LOS
MENCIONADOS
6. EN LAS INFECCIONES BACTERIANAS
GRAM POSITIVO EL MECANISMO MS
EFECTIVO PARA DESTRUIR SU
MEMBRANA ES?
A) ACTIVACIN DEL
COMPLEMENTO
B) CITOTOXICIDAD POR
ADCC
C) LA FAGOCITOSIS
D) ACTIVACIN DE
LINFOCITOS CD 8
SOLUCIONES
CAPTULO 7

Bibliografa

CAPTULO 8

Bibliografa

Captulo 8
Captulo 9

Temario del curso

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. LA RESPUESTA INMUNE FRENTE A UNA VACUNA SE

CARACTERIZA POR?
A) UNA RESPUESTA HUMORAL.
B) UNA RESPUESTA CELULAR.
C) AMBAS RESPUESTAS.
D) NINGUNA DE LAS DOS.

2. LA DIFERENCIA ENTRE LA RESPUESTA INMUNE A

UNA VACUNA Y EN LA SEROTERAPIA SE CARACTERIZA
POR?:
A) LA RESPUESTA CELULAR.
B) LA DURACIN DE LA INMUNIDAD.
C) LAS DOS SON CORRECTAS.
D) NINGUNA ES CORRECTA.

3. LA ATENUACIN DE LAS VACUNAS SE REALIZA

POR?:
A) CONGELACIN Y DESCONGELACIN.
B) TRATAMIENTOS QUMICOS.
C) TRATAMIENTOS DE CALOR.
D) NINGUNA ES CORRECTA.

4. EL PAPEL DE LOS ADYUVANTES SE BASA EN?:

A) LIBERACIN LENTA DEL ANTGENO.
B) ATRACCIN DE LAS CLULAS
PRESENTADORAS.
C) NINGUNA ES CORRECTA.
D) LAS DOS SON CORRECTAS.

5. EL PRINCIPAL PROBLEMA DE UNA VACUNA

ATENUADA ES?
A) REVERTIR A FORMAS VIRULENTAS.
B) FALTA DE INACTIVACIN TOTAL.
C) LAS DOS SON CORRECTAS.
D) NINGUNA ES CORRECTA
SOLUCIONES

CAPTULO 8
CAPTULO 9

Bibliografa
Bibliografa

Captulo 9

Temario del curso

Captulo 10

Temario del curso

AUTOEVALUACIN

1. LA RESPUESTA INMUNE FRENTE A UNA VACUNA SE CARACTERIZA POR:

A) UNA RESPUESTA HUMORAL
B) UNA RESPUESTA CELULAR
C) AMBAS RESPUESTAS
D) NINGUNA DE LAS DOS
2. LA DIFERENCIA ENTRE LA RESPUESTA INMUNE A UNA VACUNA Y EN LA
SEROTERAPIA SE CARACTERIZA POR?:
A) LA RESPUESTA CELULAR
B) LA DURACIN DE LA INMUNIDAD
C) LAS DOS SON CORRECTAS
D) NINGUNA ES CORRECTA
3. LA ATENUACIN DE LAS VACUNAS SE REALIZA POR?:
A) CONGELACIN Y DESCONGELACIN
B) TRATAMIENTOS QUMICOS
C) TRATAMIENTOS DE CALOR
D) NINGUNA ES CORRECTA
4. EL PAPEL DE LOS ADYUVANTES SE BASA EN?:
A) LIBERACIN LENTA DEL ANTGENO
B) ATRACCIN DE LAS CLULAS PRESENTADORAS
C) NINGUNA ES CORRECTA
D) LAS DOS SON CORRECTAS
5. EL PRINCIPAL PROBLEMA DE UNA VACUNA ATENUADA ES:
A) REVERTIR A FORMAS VIRULENTAS
B) FALTA DE INACTIVACIN TOTAL
C) LAS DOS SON CORRECTAS
D) NINGUNA ES CORRECTA
6. EL PRINCIPAL PROBLEMA DE LAS VACUNAS ATENUADAS ES:

A) REVERTIR A FORMAS VIRULENTAS

B) FALTA DE INACTIVACIN TOTAL
C) LAS DOS SON CORRECTAS
D) NINGUNA ES CORRECTA
SOLUCIONES
CAPTULO 9

Bibliografa

Captulo 10

Temario del curso