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HOSPITAL UNIVERSITRIO

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE


Triagem neonatal
O Programa Nacional de Triagem Neonatal (PNTN) foi elaborado em 06 de
junho de 2001, pelo Ministrio da Sade. Este programa amplia a triagem
neonatal no Brasil para quatro doenas fenilcetonria, hipotireoidismo
congnito, anemia falciforme e fibrose cstica objetivando atingir 100% da
cobertura dos recm-nascidos vivos.
O programa pblico, coordenado pelo Ministrio da Sade (embora conte com
laboratrios e outras instituies privadas em sua estrutura), consiste em cinco
etapas: teste laboratorial, busca ativa dos casos suspeitos, confirmao
diagnstica, tratamento e seguimento por equipe multidisciplinar.
O programa ocorre em trs fases. De acordo com o nvel de organizao e de
cobertura em cada estado so triadas as doenas:

FASE I: Fenilcentonria e hipotireoidismo congnito;


FASE II: Anemia falciforme e outras hemoglobinopatias;
FASE III: Fibrose cstica;

FENILCETONRIA
A fenilcetonria (PKU) uma desordem gentica autossmica recessiva causada
pela deficincia da atividade da fenilalanina hidroxilase heptica (PAH). Na
populao caucasiana, cerca de 1 em 50 so portadores e 1 em 10.000 so
afetados diretamente.
Como resultado da deficincia na PAH, a fenilalanina no convertida no
aminocido tirosina. Isso gera uma quantidade excessiva de fenilalanina e
metablitos txicos que se acumulam em vrias partes do corpo, incluindo o
crebro, sangue e urina. Esse excesso cria um desequilbrio qumico que resulta
em diversos graus de retardo mental.
Em alguns pacientes fenilcetonricos, os nveis de tirosina podem estar
anormalmente baixos, principalmente se os nveis do aminocido na dieta
forem insuficientes. Consequentemente, compostos derivados da tirosina
podem ser deficientes, assim como o pigmento melanina, o qual responsvel
pelo cabelo, pele e cor dos olhos; e como os neurotransmissores dopamina,
noradrenalina e adrenalina.

Os vrios nveis de comprometimento mental que ocorrem em pacientes com


PKU podem ser reduzidos atravs de implementao rigorosa de uma dieta com
baixos nveis de fenilalanina.
PRINCPIOS DO TESTE
O kit Neotatal Phenylalanine faz uso do mtodo da ninidrina
fluorescente. A ninidrina (2,2-diidroxi-hidrindeno-1,3-diona) um
produto qumico utilizado para a deteco de aminas primrias,
particularmente os aminocidos. Ao reagir com essas aminas livres, uma
cor azul escura ou roxa, conhecida como prpura de Ruhemann
produzida.
O ensaio se baseia no aumento da fluorescncia do produto da reao
fenilalanina-ninidrina pelo dipeptdeo L-leucil-L-alanina. Um tampo
succinato usado para aperfeioar a fluorescncia e aumentar a
especificidade. Um reagente de cobre (copper reagent) usado para
aumentar ainda mais a reao e reduzir o fundo. Esse mtodo demonstra
a fenilalanina quantitativamente em meio a outros aminocidos. A
fluorescncia lida usando um comprimento de onda de excitao de
390 nm e um comprimento de onda de emisso de 486 nm.

FIBROSE CSTICA
A fibrose cstica (FC) a disfuno gentica autossmica recessiva mais comum
encontrada em caucasianos com uma incidncia de 1 em 2500 nascimentos.
considerada a doena hereditria fatal mais comum que afeta indivduos
brancos nos EUA. Os principais sintomas clnicos caracterizam-se por
anomalias funcionais no epitlio das vias areas, no pncreas excrino, no trato
gastrointestinal e no canal secretor da glndula sudorpara, lavando
insuficincia pancretica e pulmonar. Em 1989, o gene responsvel pela FC foi
identificado por meio da clonagem posicional. O produto desse gene imperfeito
foi chamado de CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator,
Regulador Transmembrana da Fibrose Cstica). O gene composto por 27
xons, ocupando 250 kb do brao longo do cromossomo 7, e codifica uma
protena de 1480 aminocidos associada membrana. O regulador
transmembrana funciona como um canal seletivo de Cl- (on cloro) na
membrana das clulas epiteliais das vias areas, pncreas, trato gastrintestinal,
vias biliares e ductos deferentes, regulando o balano hdrico nos epitlios. Este
canal de Cl- ativado pela fosforilao mediada em A de quinase de protena e
pela ligao da molcula de ATP. Ausncia ou defeitos funcionais do CFTR
causam aumento da viscosidade das secrees excrinas, levando impactao
de muco e infeco crnica no pulmo.

A mutao mais comum que causa a FC uma excluso dos trs pares de bases
resultando na perda de um resduo de fenilalanina na posio 508 (F508). H
uma diferena na frequncia de F508 dependendo da populao. A frequncia
cerca de 50% no sul da Europa, cerca de 90% em grande parte do norte da
Europa Ocidental e cerca de 70% na Amrica do Norte. H mais de 1000
mutaes identificadas no gene CFTR. O diagnstico de FC sugerido pelas
manifestaes de infeco sinopulmonar crnica e insuficincia pancretica
excrina. O diagnstico deve ser sempre confirmado por um teste de suor.
O tripsinognio um dos principais componentes dos produtos secretores do
pncreas humano, o que torna o seu nvel no sangue um indicador especfico da
funo pancretica. Das enzimas pancreticas, a tripsina a nica produzida
exclusivamente pelo pncreas. As clulas acinares pancreticas produzem as
duas principais isoenzimas do tripsinognio enzimaticamente inativo
(PM~24.000), que so ativadas pela tripsina na clivagem de um hexapeptdeo
do N-terminal. A tripsina ativa est ligada aos inibidores 1-antitripsina, 2macroglobulina e inter--tripsina. O aumento de tripsinognio imunorreativo
(IRT) e outras enzimas pancreticas no sangue de recm-nascidos com FC devese provavelmente ao bloqueio das secrees canaliculares no pncreas,
ocasionando o refluxo dessa enzima para o sangue pela obstruo dos ductos
pancreticos.
PRINCPIOS DO TESTE
O ensaio AutoDELFIA Neonatal IRT um fluoroimunoensaio de dois
stios em fase slida com base na tcnica direta de sanduche, na qual
dois anticorpos monoclonais (derivados de camundongos) so dirigidos
contra dois determinantes antignicos separados na molcula de IRT.
Calibradores, controles e amostras do teste contendo IRT reagem
simultaneamente com anticorpos monoclonais imobilizados dirigidos a
um stio especfico antignico na molcula de IRT e anticorpos
monoclonais marcados com eurpio (dirigidos com uma posio
antignica diferente) em soluo tampo. Esta soluo tampo (buffer
solution) especfica para o teste e tem a funo de eluir o IRT do sangue
seco nos discos de papel filtro. Uma soluo intensificadora
(enhancement solution) dissocia os ons de eurpio do anticorpo
marcado e em seguida formam quelatos altamente fluorescentes com
componentes desta soluo. A fluorescncia medida em cada poo
diretamente proporcional concentrao de IRT nas amostras.
O traador diludo com tampo utilizado para eluir o antgeno IRT a
partir da amostra de sangue. Durante o perodo de incubao, o antgeno
(proveniente da amostra) se liga simultaneamente ao anticorpo revestido
sobre as paredes dos poos na placa de teste e ao anticorpo marcado com
eurpio. Aps a concluso da imunorreao, os poos so lavados e
aspirados para remover o anticorpo com eurpio no ligado. O baixo pH

da soluo intensificadora dissocia efetivamente os ons de eurpio a


partir do composto marcado. Esta dissociao promove a formao dos
quelatos fluorescentes e os impulsos contados a partir do decaimento da
fluorescncia traduzem de forma indireta a quantidade de IRT presente
na amostra.

HIPOTIREOIDISMO CONGNITO
O hormnio estimulante da tireoide humana (hTSH) um hormnio
glicoproteico sintetizado e secretado pelo lobo anterior da hipfise, cuja funo
principal estimular a produo dos hormnios tireoideanos pela tireoide. A
funo do hTSH regular a sntese e a secreo da tiroxina (T 4) e 3,5,5triiodotironina (T3), hormnios de extrema importncia para o controle dos
processos metablicos. O nvel de hTSH regulado pelo equilbrio entre os dois
principais fatores de oposio. O primeiro a influncia do hormnio regulador
da tireoide (TRH), um peptdeo produzido pelo hipotlamo que age sobre a
hipfise para estimular a sntese e a secreo do hTSH. O segundo fator so os
prprios hormnios da tireoide, que reduzem a reao dos tireotrofos ao TRH.
Imediatamente aps o nascimento, um rpido aumento na concentrao de
hTSH, conhecido como pico de hTSH, observado no sangue neonatal. A
concentrao se estabiliza a um nvel mais baixo alguns dias aps o nascimento
se a tireoide do beb estiver funcionando normalmente.
Uma concentrao elevada de hTSH no sangue do neonato a primeira
manifestao laboratorial disponvel do hipotireoidismo primrio. Como o
organismo no manifesta nenhum sinal imediato aps o nascimento, o
diagnstico clnico muito difcil, nesse sentido, a alta especificidade e
sensibilidade do teste de hTSH o mtodo de triagem escolhido para deteco
do hipotireoidismo neonatal.

TRH
hTSH

Sensibilidade dos tireotrofos

T3, T4

PRINCPIOS DO TESTE
O ensaio AutoDELFIA Neonatal hTSH, assim como o ensaio IRT,
um fluoroimunoensaio de dois stios em fase slida com base na tcnica
direta de sanduche, no qual dois anticorpos monoclonais so dirigidos
contra dois determinantes antignicos separados na molcula de hTSH.
Um anticorpo dirigido conta um stio antignico especfico na
subunidade hTSH e outro anticorpo marcado com eurpio se dirige
contra um stio antignico diferente, localizado parcialmente entre as
subunidades e na soluo tampo.
A soluo intensificadora dissocia os ons de eurpio do anticorpo
marcado e em seguida formam quelatos altamente fluorescentes. A
fluorescncia em cada poo proporcional quantidade de hTSH
presente na amostra.