Artigo Cientifico

Universidade de Braslia
Instituto de Biologia
Programa de Ps-Graduao em Botnica
Morfologia, Anatomia, Histoqumica e Aspectos Fisiolgicos da

Lmina Foliar de Espcies de Clusia (Clusiaceae)
Dissertao apresentada como requisito parcial

obteno do grau de Mestre em Botnica,
Programa de Ps Graduao em Botnica,
Instituto de Biologia, Universidade de Braslia.
SILVIA DIAS DA COSTA FERNANDES

Orientadora: Prof Dr Dalva Graciano Ribeiro
Braslia
2007

Dissertao apresentada como requisito parcial

obteno do grau de Mestre em Botnica,
Programa de Ps Graduao em Botnica,
Instituto de Biologia, Universidade de Braslia.
Orientadora: Prof Dr Dalva Graciano Ribeiro
Braslia
2007
ii
TERMO DE APROVAO
MORFOLOGIA, ANATOMIA, HISTOQUMICA E ASPECTOS

FISIOLGICOS DA LMINA FOLIAR DE ESPCIES DE CLUSIA
(CLUSIACEAE)
Dissertao aprovada como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em

Botnica, Programa de Ps Graduao em Botnica, Instituto de Biologia, Universidade
de Braslia, pela seguinte banca examinadora:
Orientadora:
Prof Dr Dalva Graciano Ribeiro
Departamento de Botnica, UnB
Prof. Dr. Augusto Csar Franco

Prof Dr Letcia de Almeida Gonalves

Centro Universitrio de Gois UniANHANGERA
Prof Dr Sueli Maria Gomes

Braslia/DF, maro de 2007
iii
Dedicatria
vida
minha famlia
Aos meus amigos
persistncia na realizao de um sonho
Aos pesquisadores e pesquisados
iv
AGRADECIMENTOS
Agradeo principalmente minha me Adriana, pois sem seus conselhos,
exemplo, amor e dedicao, este trabalho no teria sequer comeado. Obrigada por
seu total apoio diante de algumas decises determinantes da minha vida e,
principalmente nunca me permitir duvidar sobre minhas capacidades.
Ao meu esposo Gleyson e minha filha Luiza pelo amor e compreenso,
principalmente durante o Mestrado, quando nossa vida pessoal passou por diversas
vezes a segundo plano. Peo desculpas pelas inmeras ausncias.
Ao meu irmo Mateus pela cumplicidade e por me fazer rir em todos os
momentos bons e difceis da vida.
Aos meus amigos pelas conversas, distraes, sorrisos e choros. Obrigada pela
pacincia.
Agradeo a todos os professores e pesquisadores de diversas instituies que
contriburam para minha formao educacional. No citarei nomes para no cometer a
indelicadeza de esquecer de algum.
Aos colegas antigos e atuais da Universidade de Braslia (UnB), pelos momentos
bons e difceis que passamos juntos. Em especial ao Jos Geraldo Antunes de Paiva
(Z), meu querido amigo dentro e fora do laboratrio, agradeo pelos ensinamentos
tcnicos e desabafos; e Suzane Margaret Fank de Carvalho (Suzi), nunca esquecerei
da sua boa vontade e disposio para me auxiliar nas diversas vezes que solicitei.
A todos os profissionais do Departamento de Botnica da UnB, obrigada pelo
convvio, bate papo e apoio durante o desenvolvimento do Mestrado. Eli, muito
obrigada por todo o auxlio tcnico na preparao das incontveis lminas. Vando,
agradeo a direo, companhia e apoio nas viagens de campo.
Ao Herbrio,
laboratrio de Fisiologia e, especialmente, ao laboratrio de Anatomia agradeo a

colaborao.
Obrigada ao laboratrio de Microscopia Eletrnica da UnB pelo apoio material e
tcnico, principalmente Prof Dr Snia Nair Bo.
Ao Fausto, fotgrafo do Instituto de Biologia da UnB, obrigada por toda ajuda e
conselhos.
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de nvel Superior (CAPES),

obrigada pela minha primeira bolsa-de-estudos, o que foi fundamental realizao
deste trabalho.
Reserva Ecolgica do Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica
(RECOR/IBGE) pela autorizao de coleta e consultas ao Herbrio. Grata a toda a
equipe, em especial ao Diasis pela companhia e todo o apoio nas viagens a campo.
Ao Laboratrio de Produtos Florestais do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e
dos Recursos Naturais Renovveis (IBAMA/Braslia-DF) pela permisso do uso das
instalaes e equipamentos, principalmente Dr Vera Coradin pela orientao.
Ao Prof. Dr. Fbio Rbio Scarano, Departamento de Ecologia da Universidade
Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), pela coleta e envio das amostras, alm do
esclarecimento sobre as caractersticas das mesmas.
Ao Prof. MSc. Maurcio Pimenta Magalhes por ter me apresentado a Anatomia
Vegetal e a profissionais que foram peas chave para minha formao educacional.
Ao Prof. Dr. Augusto C. Franco (Laboratrio de Fisiologia Vegetal - UnB) por ter
me apresentado ao gnero que trabalho e pela orientao nas anlises de fotossntese.
Em especial, agradeo Prof Dr Dalva Graciano Ribeiro (Laboratrio de
Anatomia Vegetal - UnB), minha orientadora desde a graduao. Muito obrigada pela
oportunidade, sinceridade, apoio e amizade. Espero que esta nossa parceria perdure e
renda muitos outros trabalhos.
vi
Epgrafe
No existe limite atingvel para o que pode ser aprendido ou para como
esta sabedoria pode ser colocada em prtica.
Vernon I. Cheadle
vii
SUMRIO
LISTA DE ILUSTRAES...............................................................................................x
RESUMO.........................................................................................................................xii
ABSTRACT....................................................................................................................xiii
INTRODUO GERAL....................................................................................................1
REVISO BIBLIOGRFICA............................................................................................4
A FAMLIA..............................................................................................................4
O GNERO............................................................................................................5
CARACTERIZAO DAS ESPCIES ESTUDADAS............................................7
MATERIAL BOTNICO.................................................................................................12
CAPTULO 1 MORFOLOGIA, ANATOMIA E HISTOQUMICA DA LMINA FOLIAR
DE ESPCIES DE CLUSIA (CLUSIACEAE)..................................................................14
Introduo..................................................................................................15
Material e Mtodos....................................................................................16
Resultados - Morfologia da Lmina Foliar.................................................18
Resultados - Anatomia da Lmina Foliar..................................................21
Resultados - Histoqumica da Lmina Foliar.............................................28
Discusso e Concluso.............................................................................38
CAPTULO 2 CARACTERIZAO EPIDRMICA DA LMINA FOLIAR DE
ESPCIES DE CLUSIA (CLUSIACEAE)........................................................................73
Introduo..................................................................................................74
Resultados - Estudos Paradrmicos.........................................................76
Resultados - Micromorfologia....................................................................80
Discusso e Concluso.............................................................................82
CAPTULO 3 TIPO DE METABOLISMO FOTOSSINTTICO E SUA RELAO COM
A ANATOMIA FOLIAR DE ESPCIES DE CLUSIA (CLUSIACEAE)............................96
Introduo..................................................................................................97
Resultados - Aspectos Anatmicos Influenciados pelo Tipo de
Metabolismo Fotossinttico..................................................................................99
Discusso e Concluso...........................................................................101
viii
CAPTULO 4 EFEITO DA IRRADIAO SOLAR NA ESTRUTURA, FOTOSSNTESE

E COMPOSIO QUMICA FOLIAR DE Clusia criuva Cambess...............................106
Introduo................................................................................................107
Material e Mtodos..................................................................................108
Resultados - Efeito da Irradiao Solar na Estrutura Foliar....................109
Resultados - Efeito da Irradiao Solar na Fotossntese e Composio
Qumica Foliar....................................................................................................111
Discusso e Concluso...........................................................................114
CONSIDERAES FINAIS.........................................................................................122
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS............................................................................126
ix
LISTA DE ILUSTRAES
Figuras
Figura 1
Figura 2
Figura 3
Figura 4
Figura 5
Figura 6
Figura 7
Figura 8
Figura 9
Figura 10
Figura 11
Figura 12
Figura 13
Figura 14
Figura 15
Figura 16
Figura 17
Figura 18
Figura 19
Figura 20
Figura 21
Figura 22
Figura 23
Figura 24
Figura 25
Figura 26
Figura 27
Figura 28
Figura 29
Figura 30
Figura 31
Figura 32
Figura 33
Figura 34
Figura 35
Figura 36
Figura 37
Figura 38
Figura 39
Figura 40
- Aspectos morfolgicos das espcies......................................................11

- Aspectos da morfologia e arquitetura foliar I...........................................48
- Aspectos da morfologia e arquitetura foliar II..........................................49
- Detalhe das folhas diafanizadas I...........................................................50
- Detalhe das folhas diafanizadas II..........................................................51
- Seces transversais da lmina foliar I...................................................52
- Seces transversais da lmina foliar II..................................................53
- Seces transversais da lmina foliar III.................................................54
- Seces transversais da lmina foliar IV................................................55
- Seces transversais da lmina foliar V.................................................56
- Seces transversais da lmina foliar VI................................................57
- Seces transversais da lmina foliar VII...............................................58
- Amostras dissociadas da lmina foliar I..................................................59
- Seces transversais dos feixes vasculares...........................................60
- Amostras dissociadas da lmina foliar II.................................................61
- Seces transversais na regio da nervura principal I............................62
- Seces transversais na regio da nervura principal II...........................63
- Seces transversais na regio da nervura principal III..........................64
- Seces transversais na regio da nervura principal IV.........................65
- Seces transversais na regio da nervura principal V..........................66
- Seces transversais na regio da nervura principal VI.........................67
- Testes histoqumicos I.............................................................................68
- Testes histoqumicos II............................................................................69
- Testes histoqumicos III...........................................................................70
- Testes histoqumicos IV..........................................................................71
- Testes histoqumicos V...........................................................................72
- Amostras paradrmicas..........................................................................87
- Amostras paradrmicas da superfcie abaxial I......................................88
- Amostras paradrmicas da superfcie abaxial II.....................................89
- Amostras paradrmicas da superfcie abaxial III....................................90
- Micromorfologia da superfcie adaxial I...................................................91
- Micromorfologia da superfcie adaxial II..................................................92
- Micromorfologia de ambas as superfcies...............................................93
- Micromorfologia da superfcie abaxial I...................................................94
- Micromorfologia da superfcie abaxial II..................................................95
- Seces transversais da lmina foliar VIII............................................103
- Seces transversais da lmina foliar IX..............................................104
- Seces transversais da lmina foliar X...............................................105
- Seces transversais e paradrmicas da folha de Clusia criuva..........120
- Seces transversais da folha Clusia criuva.........................................121
Tabelas
Tabela 1
- rea e razo entre comprimento e largura da lmina foliar....................19
Tabela 2
- Localizao dos compostos detectados em C. burchellii........................31
Tabela 3
- Localizao dos compostos detectados em C. criuva............................32
Tabela 4
- Localizao dos compostos detectados em C. fluminensis....................33
Tabela 5
- Localizao dos compostos detectados em C. gardneri.........................34
Tabela 6
- Localizao dos compostos detectados em C. insignis..........................35
Tabela 7
- Localizao dos compostos detectados em C. lanceolata......................36
Tabela 8
- Localizao dos compostos detectados em C. nemorosa......................37
Tabela 9
- Mdias e desvios-padres dos parmetros estomticos........................78
Tabela 10 - Determinao do tipo de metabolismo fotossinttico..............................99
Tabela 11 - Tipo de metabolismo fotossinttico e espessura do mesofilo...............100
Tabela 12 - Anlise comparativa das caractersticas anatmicas de espcimes de
Clusia criuva.................................................................................................................111
Tabela 13 - Anlise comparativa da composio qumica de espcimes de Clusia
criuva............................................................................................................................112
Tabela 14 - Anlise comparativa das caractersticas fisiolgicas de espcimes de
Clusia criuva.................................................................................................................114
Grficos
Grfico 1
- Regresso linear entre comprimento e densidade estomticos.............79
Grfico 2
- Regresso linear entre largura e densidade estomticas.......................79
Grfico 3
- Regresso linear entre razo comprimento/largura e densidade
estomticas.....................................................................................................................80
Grfico 4
- Relao entre densidade de fluxo de ftons na faixa fotossinteticamente
ativa e temperatura foliar..............................................................................................112
Grfico 5
- Relao entre a taxa de fotossntese e a densidade de fluxo de ftons na
faixa fotossinteticamente ativa......................................................................................113
xi

(Fernandes, S. D. C. Mestrado em Botnica)
RESUMO: As lminas foliares de 14 espcies do gnero Clusia foram analisadas em nvel
anatmico. Para a maioria das espcies tambm foram feitos estudos sobre a morfologia,
histoqumica, micromorfologia e tipos de metabolismo fotossinttico. Para as folhas de C.
criuva, alm dos aspectos acima, foi observada a influncia da irradiao solar na estrutura,
fotossntese e composio qumica foliar. As espcies foram coletadas em afloramento rochoso
na Mata Atlntica (Clusia aemygdioi, C. arrudae, C. intermedia, C. marizii e C.spiritusanctensis), na Restinga (C. fluminensis, C. hilariana, C. lanceolata e C. parviflora), em mata de
galeria no Cerrado (C. burchellii, C. criuva, C. gardneri e C. nemorosa) e na Floresta
Amaznica (C. insignis). As formas das lminas foliares variam de obovada a elptica, a
margem inteira, a base levemente assimtrica e decurrente, o pecolo tem insero marginal,
as folhas so peninrvias, do tipo camptdromo, levemente broquiddromas e com nervura
primria proeminente, as nervuras secundrias so de espaamento uniforme, as
intersecundrias so fortes, arcos formados por nervuras de terceira e quarta ordens delineam
a venao areolada pouco desenvolvida, a veia ltima marginal do tipo fimbrial. Em seco
transversal, as principais diferenas entre as espcies so: quantidade de camadas celulares
no mesofilo, espessura e forma da nervura principal, cutcula de diferentes alturas e
ornamentaes, quantidade de drusas, proporo de espaos intercelulares no parnquima
lacunoso, nmero de feixes vasculares na nervura principal, presena de tecido
esclerenquimtico subepidrmico apenas em C. burchellii. Com os testes histoqumicos foram
evidenciados compostos lipoflicos e ltex no interior dos ductos secretores; a concentrao e
localizao de acares redutores so distintas entre as espcies; gros de amido ocorrem
principalmente ao redor do cilindro vascular da nervura principal; os compostos fenlicos,
incluindo tanino, foram observados em praticamente todos os tecidos da lmina foliar. As
espcies so hipoestomticas, com arranjo paractico e clulas-guarda reniformes, apresentam
distribuio irregular, densidades distintas e formas que variam de circular a elptica. A
densidade inversamente proporcional ao comprimento estomtico, independente da espcie
ou da condio ambiental na qual se encontra. Os padres de deposio das ceras
epicuticulares so distintos entre as espcies, assim como o espessamento e ornamentao
das fibrilas celulsicas nas paredes das clulas subsidirias, e o espessamento das paredes
das clulas-guarda. As caractersticas anatmicas das espcies variam de acordo com o tipo
de metabolismo fotossinttico - C3, C3/CAM e CAM, sendo o mesofilo muito mais espesso nas
espcies CAM. A variao na disponibilidade de luz tambm pode alterar as caractersticas das
folhas de C. criuva relacionadas fotossntese, como rea foliar especfica, espessura foliar,
alteraes na proporo de tecidos fotossintetizantes em relao aos no fotossintetizantes,
contedo de clorofila e carboidratos.
Palavras-chave: densidade estomtica, estrutura foliar, Guttiferae, metabolismo C3 e CAM,
micromorfologia.
xii
Morphology, Anatomy, Histochemistry and Physiological Aspects of

Clusia Species (Clusiaceae) Leaf Laminas
(Fernandes, S. D. C. Botanical Master of Science)
ABSTRACT: The leaf lamina anatomy of 14 Clusia species was studied. For most of the
species the analysis also included morphological, histochemical, micromorphological and
photosynthetic aspects. The leaves of C. criuva were processed to the aspects above and
besides, the responses presented by these leaves to changes in light availability were observed
in structure, photosyntesis and chemical composition. The samples were collected in Atlantic
forest (Clusia aemygdioi, C. arrudae, C. intermedia, C. marizii e C.spiritu-sanctensis), in
Restinga (C. fluminensis, C. hilariana, C. lanceolata e C. parviflora), in a Cerrado-gallery forest
(C. burchellii, C. criuva, C. gardneri e C. nemorosa) and in Amazon forest (C. insignis). The leaf
lamina shapes vary from obovate to elliptic, the margin type is entire, the base is a little
asymmetrical and decurrent, the position of the petiolar attachment is marginal, the leaves are
pinnate, camptodromous, weak brochidodromous, the primary vein is prominent, the secondary
vein spacing is uniform, there are strong intersecondaries, areoles are poorly developed by the
third and fourth order venational, the marginal ultimate venation is compound by a fimbrial vein.
The main differences between the transversal sections are number of mesophyll celular layers,
the primary vein thickness and shape, the cuticle thickness and ornamentation, number of druse
crystals, the spongy parenchyma intercelular space proportions, number of vascular bundles in
the primary vein, presence of sclerenchymatic tissue under the epidermis only in C. burchellii.
The histochemical analysis showed lipophilic material inside the secretory ducts; the soluble
carbohydrates concentration and location are distinct between the species; starch occurs mainly
around the vasculat cylinder of the primary vein; phenolic material, and also tanin, were
observed in almost all leaf lamina tissues. The stomata occur only in the abaxial surface, they
are paracytic with kidney-shaped guard cells, in a irregular distribution, wiht distinct frequency
and shapes from circular to elliptic. There is an inverse proportion between stomata frequency
and length, this relation is independent of the species or the kind of environment. The
epicuticular wax depositions are distinct between the species, as well as the thickness and
orientation of the celulosic fibrils in the subsidiary cell walls and the thickness of the guard cell
walls. The species anatomy characteristics vary according to the type of photosynthetic
metabolism - C3, C3/CAM and CAM, the mesophyll is thicker in CAM species. The changes in
light availability can alter C. criuva leaf features related to photosynthesis, leaf specific area, leaf
thickness, alterations in th photosynthetic tissues proportion with reference to those nonphotosynthetic, carbohydrates and clorophyll contents.
Key-words: C3 and CAM metabolism, Guttiferae, leaf structure, micromorfology, stomata
frequency.
xiii
Morfologia, Anatomia, Histoqumica e Aspectos Fisiolgicos da Lmina Foliar de Espcies de Clusia (Clusiaceae)
INTRODUO GERAL
Clusiaceae Lindley (Guttiferae) tem distribuio quase inteiramente tropical com
alguns representantes nas regies semi-ridas da frica, sia e Oceania. No Brasil,
est representada por 19 gneros com ampla distribuio nos vrios Estados,
especialmente na regio Amaznica (Barroso, 1978).
Espcies de Clusia so de grande interesse paisagstico, manejo ambiental e
reflorestamento de reas de restinga (Correia et al., 1993), sendo que alguns
representantes do gnero tm importncia na medicina popular, sendo usados como
ungentos e tnicos no combate hipertenso, dores no corpo, lceras e feridas.
Gonzlez & Matamoros (1997) confirmaram a eficcia do extrato aquoso de Clusia
coclensis Standl. na diminuio da presso sangnea em camundongos hipertensos.
Conhecer as substncias capazes de causar o efeito medicinal popularmente
difundido uma preocupao que deve ser considerada para garantir a eficcia e
segurana do uso de tais drogas. Somente em 1975 foram isolados 4.083 compostos
naturais a partir de dicotiledneas; desses, 1.504 eram de estrutura qumica indita
(Figliuolo, 1979).
A folha um dos rgos mais expostos do vegetal, estando sujeita diretamente
s variaes do ambiente, sendo um elemento importante para a anlise autoecolgica de uma espcie ou em estudos de comunidades vegetais (Boeger et al.,
1997), podendo inclusive apresentar diferenas marcantes quando em diferentes
alturas de um mesmo indivduo (Yez-Espinosa et al., 2003). Desta maneira, este
rgo foi escolhido para ser analisado, sob diferentes aspectos, ao longo deste estudo.
A utilizao da anatomia na sistemtica ocorre h cerca de 150 anos e til
tanto para a identificao prtica, quanto para a caracterizao das relaes
filogenticas entre as plantas (Judd et al., 1999), especialmente quando associados
aos aspectos ecolgicos e comparativos (Metcalfe & Chalk, 1983).
DArcy & Keating (1979) realizaram um levantamento das caractersticas
anatmicas que auxiliam na taxonomia de Calophyllum (Clusiaceae) e concluram que
vrias caractersticas da folha podem ser teis para compreender a taxonomia e
evoluo do gnero, sendo que as caractersticas mais marcantes para distino de
Silvia Dias da Costa Fernandes
espcies so forma e angularidade da nervura principal, presena ou ausncia de

ductos e presena ou ausncia de hipoderme.
Neste trabalho foram estudadas 14 espcies arbreas - Clusia aemygdioi A.
Gomes da Silva & B. Weinberg, Clusia arrudae Planchon & Triana, Clusia burchellii
Engler, Clusia criuva Cambess., Clusia fluminensis Planchon & Triana, Clusia gardneri
Planchon & Triana, Clusia hilariana Schlecht., Clusia insignis Martius, Clusia intermedia
G. Mariz, Clusia lanceolata Cambess., Clusia marizii A. Gomes da Silva & B. Weinberg,
Clusia nemorosa G. Meyer, Clusia parviflora (Saldanha) Engler e Clusia spiritusanctensis G. Mariz & B. Weinberg. A escolha dessas espcies como objeto de estudo
devido ao fato das respectivas flores estarem presentes por apenas um pequeno
intervalo de tempo (cerca de 15 dias), alm de no manterem suas caractersticas
quando armazenadas em colees de herbrio, sendo a distino morfolgica baseada
em materiais vegetativos e frutos e, desta forma, podendo ser ambgua (Pipoly et al.,
1998). Outra dificuldade no estudo das espcies do gnero Clusia que a maioria
diica e, geralmente existe disposio apenas o exemplar de um dos sexos para a
identificao (Mariz, 1974). Portanto, os objetivos do presente trabalho foram:
1) descrever mofologicamente a lmina foliar, e comparar quantitativa e
qualitativamente
os
tecidos
presentes
para
utilizar
as
caractersticas
encontradas como ferramentas para o estudo taxonmico do gnero, por meio

da elaborao de uma chave de identificao, permitindo a
distino das
espcies em estgio vegetativo;

2) realizar triagens histoqumicas para deteco de compostos secretados ou
armazenados, que podem servir para a prospeco do(s) princpio(s) ativo(s)
dos vegetais para uso medicinal e/ou comercial;
3) caracterizar a epiderme das espcies, a fim de demonstrar detalhes das clulas
que possam ser importantes para a caracterizao da superfcie foliar; alm de
relacionar as dimenses lineares e a rea do estmato com as respectivas
densidades, verificando a existncia de caractersticas especficas;
4) identificar os tipos de metabolismo fotossinttico e verificar as possveis relaes
com a anatomia foliar, assim como as caractersticas de cada espcie que
indiquem aspectos ecolgicos e estratgias de adaptao aos ambientes de
onde se originam, auxiliando, desta maneira, na caracterizao ecofisiolgica

das espcies;
5) analisar folhas de sol e de sombra de C. criuva Cambess. para identificar as
caractersticas que respondem aos nveis contrastantes de irradiao solar em
nvel anatmico, bioqumico e fisiolgico.
REVISO BIBLIOGRFICA
A FAMLIA
De acordo com a classificao filogentica, Clusiaceae Lindley pertence ordem
Malpighiales Martius e considerada monofiltica com base em sinapomorfias
qumicas e anatmicas; o nome tradicional para a famlia, Guttiferae, significa portando
goma, em referncia secreo de colorao variada, caracterstica do grupo (Judd et
al., 1999). Nesta famlia ocorrem aproximadamente 40 gneros, a maioria deles em
regies tropicais. As cerca de 1200 espcies so predominantemente lenhosas e
possuidoras de ltex na maioria de seus tecidos (Oliveira et al., 1996).
As espcies desta famlia possuem hbitos bastante variados, podendo ser
plantas arbreas, epfitas, hemiepfitas ou, ocasionalmente, lianas. Suas principais
caractersticas so as folhas opostas, coriceas a cartilaginosas, sem estpulas, com
ductos secretores de forma variada, e as flores unissexuadas, as masculinas
usualmente com um nmero indefinido de estames (Gustafsson, 2000).
Clusiaceae circunscreve diversas plantas de valor econmico (Hutchinson,
1969). Suas espcies apresentam diversas utilidades, com vrios gneros conhecidos
como produtores de madeira de grande valor, como, por exemplo, Calophyllum. Alguns
gneros possuem propriedades medicinais (Kielmeyera) e outros so ornamentais,
destacando-se o gnero Clusia (Andrade, 1987).
No Brasil, a famlia possui aproximadamente 19 gneros, sendo que os mais
representativos so: Clusia, Kielmeyera, Tovomita e Vismia, com ampla distribuio
nos vrios Estados, especialmente na regio Amaznica (Andrade et al., 2002).
Solereder (1908) citou que aspectos anatmicos da famlia, tais como a
distribuio dos canais secretores no caule, raiz e folha; ocorrncia de cristais de
oxalato de clcio; raios medulares estreitos; caractersticas do aparelho estomtico e
ausncia de plos so teis para a diagnose de gneros e espcies. Em relao ao
mesofilo, mencionou a tendncia esclerificao ou ao espessamento das paredes
celulares.
Paula (1974a) realizou estudos sobre esta famlia, afirmando que, de modo
geral, as madeiras apresentam estrutura anatmica bastante heterognea o que pode
ser usado como subsdio identificao de gneros e espcies. Nesse mesmo ano,
Paula (1974b) elaborou uma chave taxonmica baseada na quantidade, morfologia e
dimenso dos estmatos para algumas espcies do gnero Clusia.
Segundo Barroso (1978), as plantas desta famlia apresentam espaos
intercelulares ao longo do mesofilo cheios de secreo. Metcalfe & Chalk (1983)
referem-se presena de ductos secretores que podem seguir o feixe vascular ou
correr independentemente deste no mesofilo, passando pela regio cortical e medular
do pecolo; tambm descrevem algumas caractersticas das folhas, tais como
estmatos paracticos presentes na epiderme abaxial, hipoderme de uma a vrias
camadas de clulas em contato com a epiderme adaxial e presena de cristais de
oxalato de clcio na forma de drusas nas clulas do mesofilo.
Em relao ao pecolo, Stevens (2006) afirmou que a famlia no apresenta uma
homogeneidade anatmica entre os gneros e espcies.
O GNERO
Clusia, pertencente subfamlia Clusioideae Engler, caracterizado por
aproximadamente 300 espcies (Stevens, 2006), distribudas geograficamente desde o
sul dos Estados Unidos at o sul do Brasil (Judd et al., 1999). Podem ocorrer em
diversos habitats, como plancies, florestas montanhosas, savanas ou dunas (Gehrig et
al., 2003). No Brasil, sua distribuio mais freqente na regio Amaznica (Andrade
et al., 2002), sendo todas sempre verdes e a maioria das espcies lenhosa (IBGE,
1988).
O nome Clusia foi proposto por Plumier em 1703, para homenagear o botnico
belga Jules Charles de lEcluse (Carolus Clusius), um dos pioneiros dos estudos
florsticos do Velho Mundo; entretanto, o gnero s foi efetivamente descrito por Linneu
em 1753, na primeira edio do Species Plantarum, tendo Clusia major L. como
espcie-tipo (Planchon & Triana, 1860).
A primeira referncia a uma espcie deste gnero para o Brasil foi feita por
Macgrave em 1648, cujo material foi coletado em Pernambuco e posteriormente
identificado como Clusia nemorosa Meyer (Andrade-Lima et al., 1977).
As espcies deste gnero, alm do valor ornamental (Andrade, 1987), tambm

so utilizadas para confeco de artesanatos, como Clusia amaznica (Alvino et al.,
2005). Na medicina, j foi comprovada a eficcia da atividade antitumoral de extratos
de Clusia rosea (Daz-Carballo et al., 2003).
As folhas nas plantas do gnero Clusia so simples, opostas, coriceas a
cartilaginosas, pecioladas, dotadas de glndulas (comumente visveis) ou no e sem
odor caracterstico (Machado, 1980). Contm ductos secretores com leo ou resina, a
qual pode ser amarela ou ter outra cor brilhante (Vieira & Silva, 1992). O pecolo reto
ou curvo, podendo ter lenticelas na face abaxial, apresenta-se adpresso ao ramo,
ocorrendo uma concavidade na face adaxial do rgo (Schneider, 1985).
De acordo com Morretes & Ferri (1972), Sobrado & Medina (1980) e Boeger et
al. (1997), que estudaram as folhas de algumas espcies do gnero, caracteres
habitualmente tidos como de adaptao a ambientes xricos esto presentes nos
espcimes com razovel freqncia: cutcula espessa, nmero elevado de estmatos e
abundncia de tecido mecnico.
Segundo Borland et al. (1998), a hipoderme de Clusia funciona como um tecido
de armazenamento de gua, como exemplos h C. aripoensis e C. minor que
apresentam hipoderme bastante desenvolvida na face adaxial. Kaul (1977) afirmou que
as clulas largas da hipoderme no so capazes de evitar uma perda de gua para o
ambiente, sendo a cutcula, geralmente espessa, responsvel por esta proteo.
As observaes do metabolismo cido das crassulceas (CAM) em Clusia so
importantes porque representam o primeiro registro de uma rvore dicotilednea com
adaptao a esse metabolismo, dentre as mais de 30 famlias CAM (Ting et al., 1987).
Segundo Franco et al. (1994), Roberts et al. (1998) e Herzog et al. (1999), espcies do
gnero Clusia pertencem a um pequeno grupo de rvores dicotiledneas que realizam
tanto metabolismo C3 quanto CAM. Franco et al. (1990) afirmaram que esta
flexibilidade no processo fotossinttico possibilitou a disperso geogrfica deste gnero
atravs dos trpicos.
Gehrig et al. (2003) realizaram anlises de DNA nuclear com o intuito de
compreender a origem do mecanismo CAM entre as espcies desse gnero e
concluram que Clusia um gnero monofiltico, formando um grupo irmo com os
gneros Chrysochlamys e Tovomita. Esta relao tambm foi mostrada por Gustafsson
et al. (2002), quando estudaram a filogenia de Clusiaceae baseada em seqncias do

gene rbcL de cloroplastos, que tambm concluram que o metabolismo CAM deve ter
origem mltipla e independente dentro do gnero Clusia.
CARACTERIZAO DAS ESPCIES

Nas espcies estudadas o hbito arbreo (Fig. 1a), as folhas so simples,
pecioladas, de filotaxia oposta, glabras, com textura variando de coricea
cartilaginosa, peninrvias, com bordos lisos, sem estpulas, discolores (face abaxial
verde clara e adaxial mais escura), com secreo de colorao branca a amarelada,
flores unissexuadas, actinomorfas com clice imbricado, reunidas em inflorescncias
cimosas, apicais e axilares, com rgos sexuais totalmente expostos (Fig. 1b), nmero
varivel de estames, frutos do tipo cpsula, alongados, secos e com deiscncia
septicida (Fig. 1c).
Clusia aemygdioi possui folhas obovadas e cartilaginosas, boto floral globoso e
imbricado, suas flores so amarelo claro com centro vermelho escuro, sendo
caracterizada por ausncia de estamindios na flor masculina, os verticilos frteis so
amarelados. O seu tipo foi coletado no municpio Domingos Martins ES, em 1985, o
epteto especfico homenagem a Luiz Emygdioi de Mello Filho, pioneiro que
introduziu o gnero em estudos ecolgicos (Silva & Weinberg, 1985).
Clusia arrudae possui folhas obovadas e coriceas, suas flores apresentam
ptalas brancas com centro avermelhado, ou totalmente vermelhas, os estamindios
so discretos, estigma e fruto jovem verdes. Seu tipo foi coletado no Rio de Janeiro por
J. A. Casaretto (Stevens, 2006).
Clusia burchellii possui folhas obovadas, coriceas a carnosas, suas flores
apresentam spalas verdes, ptalas vermelhas (Fig. 1b), filetes verdes e anteras
marrons, estilete e estigma amarelos, frutos imaturos verdes e vermelhos.
Popularmente esta planta conhecida como gameleira (Corra, 1931). Seu tipo foi
coletado em Gois por Burchell (Stevens, 2006).
Clusia criuva possui folhas carnosas, oblongas a obovadas, curto-pecioladas
(Corra, 1931). Suas flores so pentmeras de cor branca, apresentam spalas e
filetes verdes, e anteras, estilete e estigma amarelos (Fig. 1d), o gineceu circundado
por estamindios amarelos, o fruto verde quando jovem, contendo duas ou mais
sementes com arilo de cor abbora (Correia et al., 1993). Seu tipo foi coletado em
Minas Gerais por A. de Saint Hilaire em 1828.
Clusia fluminensis possui folhas obovadas, carnosas a coriceas, suas flores
so brancas, estames amarelos e anteras laranjas. Seu tipo foi coletado no Rio de
Janeiro por Gaudichaud em 1833 (Stevens, 2006).
Clusia gardneri possui folhas elpticas, semi-crassas a coriceas, suas flores
apresentam colorao vinho no centro e branco no restante das ptalas, estilete e
estigma so verdes, o fruto de cor verde com glndulas pretas quando imaturo (Fig.
1e), sendo a semente com arilo vermelho (Fig. 1c). Seu tipo foi coletado em Gois, por
Gardner em 1842 (Stevens, 2006).
Clusia hilariana possui folhas obovadas e crassas, suas flores so totalmente
brancas, ou brancas com interior rosa, ou totalmente rosas, o estigma e os estames
so amarelo claro, o boto floral esverdeado e o fruto jovem verde amarelado. O
tipo de C. hilariana foi coletado no Esprito Santo por A. de Saint Hilaire em 1888
(Stevens, 2006), sendo o epteto em homenagem ao mesmo. De acordo com Vesque
(1893), C. hilariana, por ser do tipo crassifoliado, deriva diretamente de C. lanceolata.
Clusia insignis, cujo tipo foi coletado em ManausAM por Spruce em 1805
(Stevens, 2006), possui ptalas com centro vermelho escuro e bordos brancos,
estamindios esto presentes, esta espcie cultivada como ornamental no Brasil e na
Venezuela (Maguire, 1977). Em Pernambuco foram introduzidas C. insignis e C.
fluminensis como ornamentais em praas e jardins (Andrade, 1987).
Clusia intermedia possui folhas oblongas e coriceas, suas flores so
esverdeadas, o boto floral esbranquiado e o fruto jovem amarelo. Clusia intermedia
foi uma das duas novas espcies do gnero descritas por Mariz (1974) para
Pernambuco. Seu epteto relativo posio intermediria do tipo, por ser tetrmero, o
que a afastaria das demais espcies de Clusia e a aproximaria de outro gnero.
Clusia lanceolata possui folhas elpticas e subcoriceas, suas flores so amarelo
claro com manchas vermelhas na periferia e fundo castanho, os verticilos frteis so
amarelos, o boto floral vermelho e os frutos vinceos. O tipo foi coletado na
Venezuela por Saint Hilaire em 1845 (Stevens, 2006). Machado & Emmerich (1981)
analisaram a presena de colteres na regio proximal do pecolo de C. lanceolata,

descrevendo a forma, estrutura e funo, citaram ainda a ocorrncia de formaes
semelhantes em C. fluminensis.
Silva & Weinberg (1984) descreveram C. marizii, uma nova espcie cuja
localidade tipo Cachoeiro de Itapemirim-ES. O epteto especfico foi homenagem a
Geraldo Mariz, especialista no gnero, segundo os autores esta espcie prxima de
C. fluminensis e C. spiritu-sanctensis. As folhas so oblongo-elipsides e subcoriceas,
as inflorescncias so tri a multiflora, as flores possuem ptalas vermelhas escuras,
estames livres dispostos em dois ciclos, estamindios nas femininas, frutos verdes
quando maduros, arilo alaranjado nas sementes. De acordo com IPEMA (2007), C.
aemygdioi e C. marizii so espcies includas no projeto de conservao da
biodiversidade da Mata Atlntica do Estado do Esprito Santo porque esto ameaadas
de extino nessa regio.
Clusia nemorosa possui folhas oblongas e cartceas, flores com ptalas brancas
e, ao redor dos verticilos frteis rosado (Fig. 1f), os estames so marrons, a secreo
produzida por estamindios nas flores de ambos os sexos (Mesquita & Franciscon,
1995). O tipo de C. nemorosa foi coletado no Suriname por Rodschied, seu epteto
significa a que mora na mata, por ser freqente nesse tipo de cobertura vegetal.
Clusia parviflora, cujo tipo foi coletado por Saint Hilaire em 1888, possui folhas
obovadas e coriceas, suas flores so brancas e os frutos verdes. Nogueira et
al.(2001) a consideram bastante similar a C. criuva, morfo e bioquimicamente, e
afirmaram que, provavelmente, seria melhor trat-la como subespcie desta.
Mariz & Weinberg (1982) descreveram C. spiritu-sanctensis como uma nova
espcie do gnero, encontrada em Vila Velha ES. Os tipos esto depositados no Rio
de Janeiro e em Pernambuco. Na diagnose da espcie enfatizaram os aspectos
morfolgicos da folha e do aparelho reprodutor feminino e masculino, sendo prxima de
C. fluminensis, da qual difere pelo nmero de estames e estamindios. As flores
possuem ptalas brancas e verticilos frteis amarelos.
Schneider (1985) descreveu a anatomia foliar de C. hilariana e C. spiritusanctensis ocorrentes no Estado do Esprito Santo. Alm das quantidades de camadas
celulares diversas em cada um dos tecidos das duas espcies, verificou que C.
hilariana apresenta cutcula espessa com ornamentao nas paredes anticlinais
externas, medula parenquimtica do cilindro vascular do pecolo escassa ou ausente e

estmatos com crista cuticular. Contudo, C. spiritu-sanctensis caracterizada por
cutcula espessa, lisa e apresentando flanges, presena de medula parenquimtica no
cilindro vascular do pecolo e estmatos com pequena cmara subestomtica. De
acordo com a autora, essas diferenas quantitativas e qualitativas nos tecidos das duas
espcies podem ser utilizadas no auxlio da taxonomia.
A natureza qumica dos compostos volteis pode estar relacionada com a
taxonomia das espcies e a interao entre os tipos de polinizadores observados
(Fahn, 2000). Nogueira et al. (2001) verificaram a composio de compostos volteis
de flores masculinas e femininas de C. grandiflora, C. parviflora e C. spiritu-sanctensis,
entretanto, no encontraram muita distino entre os produtos destas espcies.
Assis et al. (2004) realizaram um estudo de fitossociologia de uma floresta no
estado do Esprito Santo e consideraram C. hilariana e C. spiritu-sanctensis espcies
raras em florestas de restinga degradadas. Essas espcies so consideradas pioneiras
ou facilitadoras da entrada de outras espcies na comunidade.
10
Fig. 1. Aspectos morfolgicos das espcies de Clusia que ocorrem em mata de galeria no Cerrado. A: aspecto geral
do vegetal. B: folhas e inflorescncia feminina de Clusia burchellii. C: fruto e sementes de Clusia gardneri. D:
inflorescncias masculina e feminina de Clusia criuva. E: inflorescncia feminina e fruto de Clusia gardneri. F:
inflorescncia feminina de Clusia nemorosa.
11
MATERIAL BOTNICO
As 14 espcies arbreas deste estudo foram coletadas em afloramento rochoso
na Mata Atlntica (Clusia aemygdioi, Clusia arrudae, Clusia intermedia, Clusia marizii e
Clusia spiritu-sanctensis), na Restinga (Clusia fluminensis, Clusia hilariana, Clusia
lanceolata e Clusia parviflora), em mata de galeria no Cerrado (Clusia burchellii, Clusia
criuva, Clusia gardneri e Clusia nemorosa) e na Floresta Amaznica (Clusia insignis).
Amostras das espcies C. aemygdioi, C. intermedia, C. marizii e C. spirictusanctensis foram coletadas na Reserva Biolgica Santa Lcia, Santa Tereza - ES.
Clusia arrudae oriunda da Serra de So Jos, Tiradentes - MG. As espcies C.
hilariana, C. parviflora so originrias dos arredores de Maca - RJ, e C. fluminensis e
C. lanceolata dos arredores de Maric - RJ. Amostras de C. insignis foram coletadas
em Porto Trombetas - PA. As amostras dessas espcies so de indivduos femininos,
tambm foram coletadas amostras do indivduo masculino de C. intermedia. O material
vegetal foi previamente fixado em formaldedo : cido actico : etanol 70% (FAA 70%)
na proporo 1:1:18 por 24h, preservado em etanol 70% e enviado ao Laboratrio de
Anatomia Vegetal UnB pelo Prof. Dr. Fbio Rbio Scarano (Departamento de
Ecologia UFRJ).
As espcies do Cerrado (C. burchellii, C. criuva, C. gardneri e C. nemorosa)
foram coletadas na Reserva Ecolgica do Crrego do Roncador RECOR/IBGE - DF
em julho/2005 e janeiro/2006, matas nos arredores de Cavalcante - GO em
dezembro/2005 e Estao Ecolgica guas Emendadas DF em junho/2006. Em
todas essas coletas foram encontrados materiais frteis (flores e/ou frutos),
confeccionadas exsicatas que, posteriormente foram incorporadas no herbrio IBGE,
com os seguintes nmeros de tombo:
-
Clusia burchellii: 62681, 62682, 62683, 62684, 62688, 62689, 62744, 62745,
62747;
Clusia criuva: 62680, 62687, 62691, 62692, 62743, 64748;
Clusia gardneri: 62679, 62685, 62686, 62690, 62746;
Clusia nemorosa: 63432.
12
As duplicatas foram submetidas para o herbrio da Universidade de Braslia

(UB) e da Universidade Estadual de Campinas - SP (UEC). As espcies foram
identificadas pelo Dr. Volker Bittrich.
Amostras dos indivduos de ambos os sexos de C. criuva foram coletadas na
RECOR/IBGE - DF, nas coordenadas geogrficas 1556254S 4753193W, e em
Cavalcante - GO (1335066S 4731417W e 1400167S 4731235W). Para
esta espcie tambm foram realizados estudos sobre a influncia do ambiente (nveis
contrastantes de irradiao solar) na estrutura, fotossntese e composio qumica. As
amostras, incluindo os pecolos, foram obtidas de quatro plantas, sendo duas
localizadas na borda de uma mata de galeria (ambiente de sol) e duas localizadas no
interior da mata (ambiente de sombra). As duas coletas realizadas -julho/2005 e
janeiro/2006 correspondem respectivamente s estaes de seca e de chuva.
Em Cavalcante - GO, tambm foram coletadas amostras de ambos os sexos de
C. burchellii (1341595S 4728110W, 1347228S 4720177W e 1349334S
4727162W) e femininas de C. gardneri (1337708S 4728305W).
Amostras dos indivduos femininos de C. nemorosa foram coletadas na Estao
Ecolgica guas Emendadas - DF (1532577S 4734690W).
13
CAPTULO 1 - MORFOLOGIA, ANATOMIA E HISTOQUMICA

DA LMINA FOLIAR DE ESPCIES DE CLUSIA (CLUSIACEAE)
RESUMO: As lminas foliares de 14 espcies de Clusia foram examinadas em nvel
anatmico, destas, 8 tambm foram analisadas em nvel morfolgico e 7 em nvel
histoqumico. As formas das lminas foliares variam de obovada a elptica, a margem
inteira com base levemente assimtrica e decurrente, o pecolo tem insero marginal,
as folhas so peninrvias, do tipo camptdromo, levemente broquiddromas e com
nervura primria proeminente, as nervuras secundrias so de espaamento uniforme,
as intersecundrias so fortes, arcos formados por nervuras de terceira e quarta ordens
delineam a venao areolada pouco desenvolvida, a veia ltima marginal do tipo
fimbrial. Em seco transversal as folhas apresentam epiderme unisseriada, com
clulas de formas e tamanhos variados, recobertas por cutcula espessa, com flanges;
em sua face abaxial a epiderme apresenta clulas comuns menores e a cutcula menos
espessa que na face adaxial. As espcies so hipoestomticas e os estmatos
apresentam cristas cuticulares e so nivelados em relao s demais clulas
epidrmicas, podendo haver cmara subestomtica. O mesofilo heterogneo bifacial,
presena de ductos secretores e drusas. Ocorre hipoderme adaxial de 1-6 estratos com
clulas aclorofiladas, isodiamtricas, com disposio tabular e paredes espessas. O
parnquima palidico constitudo por 1-9 camadas de clulas alongadas. A regio
de transio entre os parnquimas palidico e lacunoso apresenta nervuras de mdio
e pequeno porte, compostas por feixes vasculares colaterais, envoltas por bainha
parenquimtica, ou esclerenquimtica em C. gardneri e C. hilariana. O parnquima
lacunoso composto por 12-30 camadas, entre as quais ocorrem espaos
intercelulares de dimetros distintos e clulas isodiamtricas a braciformes. A nervura
principal a que apresenta maior variabilidade entre as espcies, nesta regio os
feixes vasculares esto dispostos em forma de crculo elipse. Ocorre tecido
esclerenquimtico subepidrmico apenas em C. burchellii. Com os testes histoqumicos
foram evidenciados compostos lipoflicos no interior dos ductos secretores; a
concentrao e localizao de acares redutores so distintas entre as espcies;
gros de amido ocorrem principalmente ao redor do cilindro vascular da nervura
principal; os compostos fenlicos, incluindo tanino, foram observados em praticamente
todos os tecidos da lmina foliar. No houve distino qualitativa dos compostos
presentes na lmina foliar das espcies analisadas. No entanto, de acordo com as
diferenas morfolgicas e anatmicas encontradas possvel o reconhecimento das
espcies em estgio vegetativo.
Palavras-chave: anatomia, Clusia, folha, histoqumica, venao.
Agradecimentos: Ao Prof. MSC. Jos Geraldo Antunes de Paiva pelo emprstimo dos
reagentes para os testes histoqumicos e ao Fausto pelas fotografias das folhas
diafanizadas.
14
Introduo
Clusiaceae composta por diversas plantas de valor econmico (Hutchinson,
1969). Suas espcies apresentam diversas utilidades, com gneros produtores de
madeira de grande valor (Calophyllum), possuidores de propriedades medicinais
(Kielmeyera) e ornamentais Clusia (Andrade, 1987).
Clusia caracterizado por cerca de 300 espcies (Stevens, 2006), distribudas
desde o sul dos Estados Unidos at o sul do Brasil (Judd et al., 1999). Pode ocorrer em
diferentes ambientes, como plancies, florestas montanhosas, savanas ou dunas
(Gehrig et al., 2003). No Brasil, sua distribuio mais freqente na regio Amaznica
(Andrade et al., 2002), sendo todas sempre verdes e a maioria das espcies lenhosa
(IBGE, 1988).
A identificao das espcies deste gnero geralmente feita com base nas
caractersticas dos rgos reprodutivos, no entanto as respectivas flores esto
presentes por apenas um pequeno intervalo de tempo (cerca de 15 dias), e no
mantm suas caractersticas quando armazenadas em colees de herbrio (Pipoly et
al., 1998).
De acordo com Hickey (1974), as folhas so raramente utilizadas em estudos
morfolgicos comparativos e taxonmicos, devido falta de uma classificao
detalhada, padronizada e no ambgua. Uma descrio precisa das caractersticas da
folha pode auxiliar consideravelmente a classificao, alm de permitir o estudo de
efeitos do ambiente no vegetal.
Estudos anatmicos podem subsidiar trabalhos taxonmicos. DArcy & Keating
(1979) realizaram um levantamento das caractersticas anatmicas que auxiliam a
taxonomia de Calophyllum (Clusiaceae) e concluram que vrios caracteres da folha
podem ser teis para compreender a taxonomia e evoluo deste gnero.
Este trabalho visa a descrio morfolgica, anatmica e histoqumica da lmina
foliar de espcies de Clusia para permitir sua identificao em estgio vegetativo. Os
estudos histoqumicos podem gerar informaes que fornecem elementos de
comparao qualitativa para identificao de compostos para uso comercial e/ou
medicinal.
15
Material e Mtodos
A caracterizao morfolgica inicial das folhas e o registro fotogrfico foram
realizados no campo, e as complementaes de medidas, anlises e descries no
laboratrio. Todas as espcies apresentaram contaminao por fungos nas folhas
maduras, caracterstica ausente nas folhas jovens.
As tcnicas morfolgicas foram aplicadas s espcies C. burchellii, C. criuva, C.
fluminensis, C. gardneri, C. hilariana, C. insignis, C. lanceolata e C. nemorosa. Duas
folhas totalmente expandidas, retiradas a partir do 2 n a contar do pice de um ramo
adulto foram selecionadas de cada um dos dois indivduos analisados por espcie.
Para as demais espcies no foi aplicada esta tcnica porque as mesmas foram
enviadas j fracionadas.
A desidratao do material durante o transporte foi evitada atravs de seu
acondicionamento em sacos plsticos e cmara fria. As folhas foram submetidas ao
processo de diafanizao (modificado de Shobe & Lersten, 1967 - apud Kraus &
Arduin, 1997), com o objetivo de evidenciar a arquitetura foliar, acrescentando a
limpeza do material com esponja e sabo neutro, com o intuito de retirar o excesso de
cera e acelerar o processo.
A montagem das lminas foliares foi feita entre duas placas de vidro em resina
sinttica (Paiva et al., 2006), e a ampliao em papel fotogrfico branco e preto usando
os espcimes como positivo para gerao da imagem em negativo no papel. A
classificao e a descrio da arquitetura das folhas foram realizadas de acordo com
Hickey (1974 e 1979).
As seces transversais das regies medianas das folhas das 14 espcies deste
estudo foram realizadas mo livre e com infiltrao e incluso dos materiais em
parafina ou historesina Leica. Cinco folhas, de cada um dos quatro indivduos
analisados
por
espcie,
foram
selecionadas
coletadas
conforme
descrito
anteriormente. A limpeza do material foi realizada com pincis e imerso em gua com
posterior preservao em lcool etlico 70% (Jensen, 1962), permanecendo imerso
neste lquido at etapas posteriores do processamento.
As seces realizadas mo livre foram feitas em micrtomo de mesa (R.
Jungag Heidelberg), clarificadas por cerca de 4h com soluo de hipoclorito de sdio
16
50% (Kraus & Arduin, 1997), coradas por 5min com safranina 1% e azul de alcio 1%
aquosos na proporo 5:1 (Luque et al., 1996). Algumas seces foram montadas
entre lmina e lamnula em gelatina glicerinada de Kaiser (1880) como meio de
montagem; outras foram desidratadas em srie etlica, diafanizadas em acetato de
butila e montadas em resina sinttica (Paiva et al., 2006).
Para a infiltrao e incluso em parafina, o material foi desidratado em srie
etlica crescente, at a saturao (etanol absoluto), diafanizado em xilol, infiltrado e
includo. As seces foram obtidas em micrtomo rotativo Leica RM 2145, afixadas em
lminas histolgicas, submetidas aos corantes safranina 1% em lcool 50% por 20min
e passadas rapidamente no verde firme 0,5% em lcool 100% (Johansen, 1940) e
montadas entre lmina e lamnula em resina sinttica (Paiva et al., 2006).
A infiltrao e incluso em historesina Leica seguiu as orientaes do
fabricante. As seces foram obtidas em micrtomo rotativo Leica RM 2145, afixadas
em lminas histolgicas, submetidas aos corantes fucsina bsica 0,0125% aquosa por
1min e azul de astra 1% aquoso por 40min em estufa 60C (Roeser, 1972 apud
Kraus & Arduin, 1997), lavadas em gua, secas temperatura ambiente e montadas
em resina sinttica (Paiva et al., 2006).
Pores das folhas foram submetidas soluo de Franklin (1946 - apud Kraus
& Arduin, 1997) e mantidas em estufa 40C por cerca de 3 dias at a dissociao dos
tecidos, para obteno de clulas livres. A soluo foi filtrada em tecido sinttico
durante quatro lavagens em gua destilada, a suspenso foi corada com safranina 1%
em lcool 50% e montada entre lmina e lamnula usando gelatina glicerinada de
Kaiser (Kraus & Arduin, 1997) como meio de montagem.
Para os testes histoqumicos, amostras de lminas foliares, sem qualquer
tratamento (amostras fixadas no foram submetidas aos testes), foram envoltas em
papel alumnio e congeladas a -4C para a preservao de suas caractersticas
bioqumicas at o preparo das seces. As espcies analisadas foram C. burchellii, C.
criuva, C. fluminensis, C. gardneri, C. insignis, C. lanceolata e C. nemorosa, sendo que
para cada teste foram feitas 3 repeties por espcie.
Foram utilizadas seces feitas mo livre e submetidas a reagentes
especficos; segundo Kraus & Arduin (1997): teste de Fehling (Purvis et al., 1964) para
acares redutores; reagente de Steinmetz (Costa, 1970) para amido, celulose, cutina,
17
suberina, outros compostos lipoflicos, mucilagem e lignina; lugol (Langeron, 1949) para
gros de amido; cloreto de zinco iodado (Jensen, 1962) para gros de amido, celulose
e lignina; cido actico glacial e sulfrico 10% (Corso, 1991) para composio qumica
dos cristais; sudan III e IV (Jensen, 1962) para cutina, suberina, mucilagem e outros
compostos lipoflicos.
Outros testes histoqumicos foram efetuados de acordo com Johansen (1940):
soluo de acetato cprico aquoso 7% para resinas; soluo aquosa de vermelho de
rutnio 0,02% para substncias pcticas; soluo saturada aquosa de cido pcrico por
24h e reao conjugada s solues aquosas de ferrocianeto de potssio seguida de
cloreto frrico 5% para corpos proticos; dicromato de potssio aquoso 10% e soluo
aquosa de formalina 5% e sulfato ferroso 10% para compostos fenlicos; floroglucinol
clordrico para lignina; cristais de fenol para slica; sulfato ferroso aquoso para taninos.
Os teste histoqumicos realizados de acordo com Ascenso (2003) foram:
reagentes de Ellran (Furr & Mahlberg, 1981) e Dragendorff (Svendsen & Verpoorte,
1983) para alcalides; acetato neutro de chumbo aquoso 3% (Charrire-Ladreix, 1976)
e cloreto de alumnio aquoso 15% (Charrire-Ladreix, 1976) para compostos fenlicos;
vanilina clordrica 0,5% em cido clordrico 9% (Mace & Howell, 1974) para taninos;
azul brilhante de Coomassie (Fisher, 1968) para protenas.
Alm desses, azul de metileno para celulose (Langeron, 1949), sulfato de anilina
para lignina (Morita & Assumpo, 1972). Os controles foram feitos com as seces
sem qualquer tratamento ou conforme especificado pelos autores.
As fotomicrografias de todas as seces transversais foram obtidas com auxlio
do microscpio Olympus CX 31 acoplado mquina digital.
Resultados - Morfologia da Lmina Foliar

Foi realizado o estudo morfolgico da lmina foliar das espcies C. burchellii, C.
criuva, C. fluminensis, C. gardneri, C. hilariana, C. insignis, C. lanceolata e C.
nemorosa. Para as demais espcies no foi possvel aplicar esta tcnica porque as
amostras foram enviadas j fracionadas.
A forma das lminas foliares das 8 espcies analisadas variam de obovada a
elptica (Figs. 2 e 3). Clusia burchellii (Fig. 2a) e C. fluminensis (Fig. 2c) possuem forma
18
obovada; C. criuva (Fig. 2b), C. gardneri (Fig. 2d), C. hilariana (Fig. 3a), C. insignis (Fig.
3b), C. lanceolata (Fig. 3d) e C. nemorosa (Fig. 3c) possuem forma elptica.
A rea foliar (cm2) das espcies varia de 13,06 0,69 em C. lanceolata a 81,07
1,35 em C. nemorosa (Tab. 1). A razo comprimento/largura para as espcies com
folhas obovadas a mesma (1,3 : 1,0) e a menor dentre as espcies, para as elpticas
esta razo varia de 1,6: 1,0 a 2,5 : 1,0 (Tab. 1). De acordo com a dimenso da rea
foliar, todas as espcies foram classificadas como macrofilos, com exceo de C.
lanceolata, do tipo mesofilo.
Tab. 1. rea (cm2) e razo entre comprimento e largura da lmina foliar das espcies estudadas.
Valores expressos em mdia desvio-padro
Todas as folhas possuem margem inteira (Figs. 2 e 3), base levemente

assimtrica, decurrente, com ngulo agudo e so pecioladas, possuindo o pecolo
insero marginal e base dilatada.
Em relao ao pice, o ngulo agudo em C. criuva (Fig. 2b), C. insignis e C.
nemorosa (Fig. 3c); e obtuso em C. burchellii (Fig. 2a), C. fluminensis (Fig. 2c), C.
gardneri (Fig. 2d), C. hilariana (Fig. 3a) e C. lanceolata (Fig. 3d). A forma do pice
arredondada em C. burchellii (Fig. 2a), C. criuva (Fig. 2b) e C. fluminensis (Fig. 2c); e
retusa em C. gardneri (Fig. 2d), C. hilariana (Fig. 3a), C. insignis, C. lanceolata (Fig. 3d)
e C. nemorosa (Fig. 3c).
As folhas so peninrvias, do tipo camptdromo, levemente broquiddromas e
com nervura primria de orientao reta (Figs. 2 e 3), proeminente somente na face
abaxial, com maior calibre na base, atenuando em direo ao pice. Dependendo da
espcie, diferentes quantidades de pares de nervuras secundrias originam-se de
maneira alterna, por vezes oposta, divergindo gradualmente em ngulos entre agudo e
19
reto. Clusia lanceolata apresenta cerca de 10 pares de nervuras secundrias; C.

burchellii (Fig. 2a), C. fluminensis (Fig. 2c) e C. hilariana (Fig. 3a) apresentam
aproximadamente 16 pares; C. gardneri (Fig. 2d), C. insignis (Fig. 3b) e C. nemorosa
apresentam at 22 pares e C. criuva (Fig. 2b) apresenta at 28 pares.
O espaamento das nervuras secundrias uniforme (Figs. 4a e 4b), os ngulos
so uniformes e agudos moderados (Figs. 4d, 4e e 4f), exceto em C. criuva (Figs. 2b e
4b) e C. nemorosa (Fig. 5a) que so agudo amplo a reto. As veias intersecundrias so
fortes, com origem exmedial e ngulos agudos (Fig. 4), a maior concentrao destas
veias ocorre em C. insignis (Fig. 4f).
No pice da lmina foliar os ngulos agudos das nervuras secundrias tornamse mais reduzidos para C. fluminensis (Fig. 2c), C. gardneri (Fig. 2d), C. hilariana, C.
insignis, C. lanceolata (Fig. 3d); sendo que em C. hilariana (Fig. 3a) essas nervuras se
inclinam exmedialmente em direo ao pice. Em C. burchellii (Fig. 2a) os ngulos so
agudos amplos a retos, exceto no pice onde se tornam obtusos. Em C. criuva (Fig. 2b)
os ngulos so quase retos, e no pice h reduo angular. Em C. nemorosa (Fig. 5a)
os ngulos so agudos amplos.
As nervuras tercirias originam-se em ngulo predominantemente reto (Fig. 4a)
e uniforme (Fig. 5a), so exmedialmente ramificadas, o modelo de venao reticulado
aleatrio (Fig. 5b), a disposio densa, predominantemente alterna. Arcos formados
por nervuras de terceira e quarta ordens (Figs. 5c e 5d) delineam a venao areolada
pouco desenvolvida, com tamanho e forma bastante irregulares ao longo de toda a
lmina foliar. A quarta venao do tipo dicotmica e as vnulas so bastante
ramificadas (Fig. 5e).
As ramificaes nas veias de terceira e quarta ordens so maiores na regio do
pice para C. gardneri, C. insignis e C. lanceolata; para C. burchellii, C. criuva, C.
fluminensis, C. hilariana e C. nemorosa as ramificaes esto uniformemente
distribudas ao longo da lmina foliar.
A veia ltima marginal do tipo fimbrial (Figs. 2, 3a e 3b), apresentando
invaginaes nas reas de contato com as nervuras secundrias (Figs. 3d, 4c e 5b);
nas espcies C. burchellii (Fig. 2a), C. criuva, C. fluminensis (Fig. 2c), C.lanceolata
(Fig. 3d) e C. nemorosa tambm existe invaginao na rea de contato com a nervura
20
primria. A disposio desta veia perifrica em C. criuva, C. insignis e C. nemorosa

(Fig. 5b), e subperifrica nas demais espcies (Fig. 4c).
Resultados - Anatomia da Lmina Foliar

Em seco transversal a lmina foliar das 14 espcies estudadas apresenta
forma linear de espessuras diversas (Figs. 6-12). A epiderme na face adaxial
apresenta-se uniestratificada, havendo somente clulas epidrmicas comuns (Figs. 69), as espcies que possuem clulas com formas quadradas so C. aemygdioi (Fig.
6a), C. arrudae (Fig. 6b), C. burchellii (Fig. 6c), C. criuva (Fig. 6d), C. fluminensis (Fig.
7a), C. gardneri (Fig. 7b), C. hilariana (Fig. 7c), C. insignis (Fig. 7d), C. intermedia (Figs.
8a 3 8b), C. nemorosa (Fig. 8c) e C. spiritu-sanctensis (Fig. 8d); as que possuem
formas retangulares, com eixo periclinal maior que anticlinal, so C. lanceolata (Fig.
9a), C. marizii (Fig. 9b) e C. parviflora (Fig. 9c). Essas clulas so recobertas por
cutcula espessa de diferentes alturas e aspectos.
A cutcula mais delgada em C. fluminensis (Fig. 7a) e mais espessa em C.
insignis (Fig. 7d). As espcies C. aemygdioi (Fig. 6a), C. arrudae (Fig. 6b), C. gardneri
(Fig. 7b), C. insignis (Fig. 7d), C. intermedia (Figs. 8a e 8b), C. marizii (Fig. 9b) e C.
nemorosa (Fig. 8c) apresentam ornamentaes. As espcies C. burchellii (Fig. 6c), C.
criuva (Fig. 6d), C. fluminensis (Fig. 7a), C. hilariana (Fig. 7c), C. lanceolata (Fig. 9a),
C. parviflora (Fig. 9c) e C. spiritu-sanctensis (Fig. 8d) apresentam cutcula lisa,
desprovida
de
ornamentaes.
Em
todas
essas
espcies,
cutcula,
independentemente de possuir ornamentaes ou no, penetra por entre as paredes

anticlinais, determinando a formao de flanges cuticulares.
A epiderme em sua face abaxial uniestratificada, as clulas epidrmicas
comuns so menores, principalmente em relao ao eixo periclinal, e a cutcula que
recobre esta superfcie menos espessa que a da face adaxial (Figs. 6b, 8b, 9c, 10d e
12c); presena ou ausncia de ornamentaes seguem o padro das respectivas
superfcies adaxiais. As espcies analisadas so hipoestomticas e os estmatos so
nivelados em relao s demais clulas epidrmicas (Figs. 10-12). As clulas-guarda
possuem espessamentos nas paredes periclinais externas e anticlinais, havendo
projeo em duas pequenas cristas em todas as espcies estudadas, sendo que em C.
21
aemygdioi (Fig. 9d e 12d), C. arrudae, C. gardneri (Fig. 10c), C. hilariana (Fig. 11a), C.
insignis (Fig. 11b) e C. parviflora as cristas so mais proeminentes. As clulas
subsidirias so maiores que as demais clulas epidrmicas da regio, e podem
possuir espessamentos nas paredes anticlinais que margeiam as clulas epidmicas
comuns adjacentes (Fig. 12f). Cmara subestomtica observada em C. aemygdioi
(Fig. 9d e 12d), C. arrudae (Fig. 6b), C. criuva (Fig. 10b), C. gardneri (Fig. 10c), C.
intermedia (Fig. 8b e 10d), C. lanceolata (Fig. 11d), C. marizii (Fig. 12a e 12f), C.
nemorosa (Fig. 11c), C. parviflora (Fig. 9c) e C. spiritu-sanctensis (Fig. 12b). Em C.
burchellii (Fig. 10a e 12e), C. fluminensis (Fig. 12c), C. hilariana (Fig. 11a) e C. insignis
(Fig. 11b) a cmara subestomtica est ausente ou discreta, quando presente em C.
burchellii (Fig. 12e) interrompe a camada esclerificada subepidrmica.
Clusia burchellii a nica espcie que possui tecido subepidrmico
esclerenquimtico em ambas as faces (Figs. 6c e 10a), composto por uma nica
camada de astroescleredeos e escleredeos raquiformes, tipos celulares encontrados
somente nesta espcie (Figs. 13a e 13b).
O mesofilo heterogneo bifacial, apresentando ductos secretores de dimetros
variados e origem esquizgena, alm de idioblastos com cristais de oxalato de clcio
em forma de drusas em praticamente todas as camadas (Figs. 6-12).
observada hipoderme adaxial de 1-6 estratos de clulas aclorofiladas,
isodiamtricas, com disposio tabular e paredes espessas, podendo conter no seu
interior gotculas lipdicas. Clusia insignis (Fig. 7d) possui apenas uma camada de
clulas neste tecido. Clusia nemorosa (Fig. 8c) possui aproximadamente 2 camadas
celulares. Clusia burchellii (Fig. 6c) e C. gardneri (Fig. 7b) apresentam cerca de 3
camadas celulares. Clusia aemygdioi (Fig. 6a), C. arrudae (Fig. 6b), C. criuva (Fig. 6c),
C. fluminensis (Fig. 7a), C. hilariana (Fig. 7c), C. intermedia (Figs. 8a e 8b), C.
lanceolata (Fig. 9a), C. marizii (Fig. 9b) e C. spiritu-sanctensis (Fig. 8d) possuem de 4-5
estratos. Clusia parviflora (Fig. 9c) a espcie que possui maior quantidade de
camadas, de 5-6. Este tecido possui clulas de tamanhos indiferenciados em C. spiritusanctensis (Fig. 8d); nas demais espcies, com exceo de C. insignis que
uniestratificada, as camadas prximas epiderme possuem clulas de dimetro menor
que as camadas mais internas.
22
As clulas do tecido fundamental (Figs. 13c-13h) de todas as espcies so

similares em forma e tamanho. O parnquima palidico constitudo por 1-9 camadas
de clulas alongadas (Fig. 13f), com maior comprimento no eixo anticlinal e paredes
periclinais curvas ou retas. Podem ocorrer gotculas lipdicas nessas clulas. Clusia
nemorosa (Fig. 8c) possui uma nica camada de clulas neste tecido. Clusia criuva
(Fig. 6d), C. gardneri (Fig. 7b), C. insignis (Fig. 7d) e C. parviflora (Fig. 9c) apresentam
cerca de 2 estratos celulares. Clusia aemygdioi (Fig. 6a), C. arrudae (Fig. 6b), C.
intermedia (Figs. 8a e 8b), C. lanceolata (Fig. 9a), C. marizii (Fig. 9b) e C. spiritusanctensis (Fig. 8d) apresentam de 3-4 camadas celulares. Clusia burchellii (Fig. 10a)
apresenta de 4-6 estratos celulares. Clusia hilariana (Fig. 7c) possui cerca de 6
camadas celulares e C. fluminensis (Fig. 7a) aproximadamente 9 estratos celulares.
Nas espcies com duas ou mais camadas celulares, as clulas prximas face adaxial
so mais longas, em relao ao eixo anticlinal, que as clulas mais internas.
As clulas das camadas mais internas estabelecem uma transio entre o
parnquima palidico e o lacunoso; nesta regio existem nervuras de mdio e
pequeno porte (Fig. 14), compostas por feixes vasculares colaterais. Algumas nervuras
de pequeno porte apresentam somente os elementos do xilema (Fig. 14b) elementos
de vaso (Fig. 15a), com espessamento de parede do tipo helicoidal (Fig. 15b) e
reticulado (Fig. 15c), traquedeos (Fig. 15d) e fibras libriformes (Fig. 15e). Os elementos
condutores do floema so abundantes, este tecido representado por elementos de
tubo crivado, clulas companheiras, parnquima e fibras floemticas, pode ocorrer
idioblastos cristalferos.
As nervuras de mdio e pequeno porte apresentam-se revestidas por uma nica
bainha parenquimtica, podendo conter cloroplastos em seu interior (Fig. 14c), alm de
calota esclerenquimtica relacionada ao floema, voltada para a face abaxial (Fig. 14a).
Em algumas nervuras de mdio porte foi evidenciada bainha parenquimtica com
clulas de parede espessada, ou ainda, bainha esclerenquimtica, como em C.
gardneri (Fig. 14a) e C. hilariana (Fig. 11a).
O parnquima lacunoso est organizado em um nmero varivel de camadas
(12-30) entre as quais ocorrem espaos intercelulares de dimetros distintos, as clulas
tm forma que varia de braciforme (Fig. 13g) a isodiamtrica (Fig. 13h) e tamanhos
diferentes, nas camadas mais prximas epiderme h espessamento das paredes e
23
diminuio do lume celular (Figs. 9-12). Idioblastos isodiamtricos com drusas de

oxalato de clcio so constantes. Clusia insignis (Fig. 11b) apresenta a menor
quantidade de clulas deste tecido, 12 camadas. Clusia nemorosa (Fig. 11c) possui
cerca de 13 estratos celulares. Clusia aemygdioi (Fig. 9d), C. arrudae (Fig. 6b), C.
criuva (Fig. 10b), C. gardneri (Fig. 10c), C. intermedia (Figs. 8a e 10d), C. lanceolata
(Fig. 11d), C. marizii (Fig. 12a) e C. parviflora (Fig. 9c) apresentam de 15-17 camadas
celulares neste tecido. Clusia hilariana (Fig. 11a) possui cerca de 18 camadas
celulares, C. burchellii (Fig. 10a) tem de 20-26 estratos de clulas, C. spiritu-sanctensis
(Fig. 12b) possui de 25-27 e C. fluminensis (Fig. 12c) apresenta a maior quantidade de
clulas neste tecido, cerca de 30; nessas espcies com maior quantidade de camadas
celulares h poucos e pequenos espaos intercelulares.
A regio da nervura principal a que apresenta maior variabilidade entre as
espcies (Figs. 16-19). Em C. fluminensis (Fig. 16a) e C. lanceolata (Fig. 16b) a regio
da nervura principal pode ser indiferenciada ou pouco mais espessa na face abaxial.
Em C. criuva (Fig. 16c), C. gardneri (Fig. 16d), C. marizii (Fig. 17a) e C. parviflora (Fig.
17b) a seo plano-convexa, a convexidade correspondendo superfcie abaxial. Em
C. aemygdioi (Fig. 17c) h convexidades, em propores semelhantes, para ambas as
faces. Em C. arrudae (Fig. 17d), C. insignis (Fig. 18a) e C. nemorosa (Fig. 18b) h
convexidades para ambas as faces, no entanto a da face abaxial maior que a da
adaxial. Em C. burchellii (Fig. 18c), C. hilariana (Fig. 18d) e C. spiritu-sanctensis (Fig.
19a) existe convexidade com intensa projeo triangular para a face abaxial, sendo que
em C. spiritu-sanctensis pode ocorrer leve concavidade na face adaxial. Clusia
intermedia pode apresentar convexidade somente para a face abaxial (Fig. 19b) ou
para ambas as faces, sendo a da face abaxial maior que a da adaxial (Fig. 19c).
A epiderme na face adaxial apresenta somente clulas epidrmicas comuns,
menores e com paredes e cutcula mais espessas em relao aos demais trechos da
lmina foliar, h maior proporo de flanges entre as paredes anticlinais (Figs. 19d e
20a). Em C. aemygdioi e C. insignis (Fig. 19d) as clulas apresentam forma papilosa.
A epiderme em sua face abaxial (Fig. 20), na regio da nervura principal,
apresenta as mesmas caractersticas que na face adaxial, salvo a presena de raros
estmatos. Algumas espcies podem apresentar clulas com forma papilosa, como
ocorre em C. aemygdioi, C. criuva (Fig. 20c), C. marizii e C. parviflora (Fig. 20b).
24
Assim como no restante da lmina foliar, C. burchellii a nica espcie que

possui tecido subepidrmico esclerenquimtico, composto por uma nica camada de
astroescleredeos e escleredeos raquiformes em ambas as faces (Figs. 20a e 20d).
A hipoderme, ao nvel da nervura principal, mostra maior nmero de camadas
(2-10) e clulas de lume menor, as demais caractersticas deste tecido so similares
em relao aos demais trechos da lmina foliar. Clusia insignis (Fig. 18a) possui de 2-3
camadas de clulas. Clusia burchellii (Fig. 18c), C. gardneri (Fig. 16d) e C. nemorosa
(Fig. 18b) apresentam de 4-5 estratos de clulas. Clusia criuva (Fig. 16c), C.
fluminensis (Fig. 16a), C. hilariana (Fig. 18d), C. lanceolata (Fig. 16b) e C. marizii (Fig.
17a) possuem de 6-7 camadas celulares. Clusia aemygdioi (Fig. 17c), C. intermedia
(Figs. 19b e 19c), C. parviflora (Fig. 17b) e C. spiritu-sanctensis (Fig. 19a) apresentam
at 8 estratos celulares. Clusia arrudae (Fig. 17d) possui aproximadamente 10
camadas de clulas.
Logo a seguir so evidenciadas de 1-8 camadas de tecido clorenquimtico com
clulas de forma isodiamtrica e retangular. Clusia criuva (Fig. 16c) apresenta 1
camada
de
parnquima
palidico
parcialmente
interrompido
por
clulas
parenquimticas isodiamtricas que seguem em mais 2 camadas, C. marizii (Fig. 17a)

tem de 1-2 camadas de parnquima palidico seguidas por 3 de clulas
isodiamtricas.
As
espcies
que
possuem
parnquima
palidico
totalmente
interrompido por clulas isodiamtricas so: Clusia aemygdioi (Fig. 17c) com 3
camadas; C. burchellii (Fig. 18c), C. gardneri (Fig. 16d) e C. nemorosa (Fig. 18b) de 4-5
camadas apresentando vrios ductos de secreo; C. arrudae (Fig. 17d), C. hilariana
(Fig. 18d) e C. insignis (Fig. 18a) com at 7 camadas; e C. lanceolata (Fig. 16b) com 3
camadas com clulas maiores e outras 3 com lume menor, estas circundando todo o
cilindro vascular. As espcies que apresentam clulas retangulares interrompendo o
parnquima palidico so: C. intermedia (Figs. 19b e 19c) de 2-3 camadas; C.
parviflora (Fig. 17b) de 1-2 camadas de clulas com abundncia em cloroplastos e
outras 4 com clulas isodiamtricas e menor proporo de cloroplastos; C. spiritusanctensis (Fig. 19a) com 3 camadas e outras 3 com clulas isodiamtricas e C.
fluminensis (Fig. 16a) com cerca de 8 camadas celulares.
O sistema vascular da nervura principal apresenta-se composto de 12-27 feixes
colaterais dispostos em forma de crculo a elipse, podendo estar separados por clulas
25
parenquimticas isodiamtricas ou por parnquima radial, cujas paredes so espessas

e lignificadas (Fig. 21). Cada feixe est acompanhado por uma calota de fibras e
escleredeos, localizados na regio do floema (Fig. 21a), estas calotas podem se unir
formando uma bainha esclerenquimtica de vrias camadas circundando o cilindro
vascular (Fig. 21b). Na regio perivascular ocorrem clulas parenquimticas contendo
gros de amido de forma ovide e tamanhos variados, formando uma bainha amilfera.
O floema abundante (Fig. 21), representado por elementos de tubo crivado,
clulas
companheiras
parnquima
floemtico,
podendo
ocorrer
idioblastos
cristalferos.
O xilema constitudo por fileiras simples, s vezes duplas, de 3-6 elementos de
proto e metaxilema, aquele freqentemente obliterado (Fig. 21e). As fibras xilemticas
so pouco numerosas e o parnquima radial exibe comumente clulas esclerificadas,
entre as quais ocorrem idioblastos cristalferos. Em alguns feixes observa-se o incio de
atividade cambial (Fig. 21e). Os elementos condutores encontrados so elementos de
vaso (Fig. 15a) de diferentes comprimentos com espessamentos do tipo helicoidal (Fig.
15b) e reticulado (Fig. 15c). Tambm foram encontrados raros traquedeos (Fig. 15d) e
fibras libriformes (Fig. 15e).
Na regio da medula evidenciam-se ductos secretores e 5-10 feixes vasculares
dispostos em faixa, com regio do floema voltada para face abaxial, imersos em clulas
parenquimticas isodiamtricas de paredes diversamente espessadas (Figs. 21a, 21c e
21d). A medula mais abundante, em relao ao nmero de clulas parenquimticas,
entre os feixes internos e os externos voltados para a face abaxial. Em C. arrudae e C.
gardneri (Fig. 21c) existem 2 fileiras de feixes vasculares na medula.
Observam-se dois feixes laterais que esto se desprendendo do arco vascular,
tambm so acompanhados de calota de fibras e escleredeos, e bainha amilfera
(Figs. 16-19). Em todas as espcies encontram-se escleredeos bifurcados (Fig. 13c),
osteoescleredeos (Fig. 13d) e escleredeos colunares (Fig. 13e) e, somente em C.
burchellii foram encontrados escleredeos raquiformes (Fig. 13a) e astroescleredeos
(Fig. 13b).
Ocorrem de 7-32 camadas de parnquima com clulas de forma isodiamtrica e
dimetros variveis, podendo conter cloroplastos, sendo que em direo face abaxial,
as paredes se tornam mais espessas e o lume menor. Clusia nemorosa (Fig. 18b) tem
26
aproximadamente 7 camadas celulares. Clusia insignis (Fig. 18a) possui de 9-10

camadas de clulas. Em C. aemygdioi (Fig. 17c), C. criuva (Fig. 16c), C. intermedia
(Figs. 19b e 19c) e C. lanceolata (Fig. 16b) h 11 estratos de clulas. Em C. parviflora
(Fig. 17b) h cerca de 13 estratos celulares. Clusia gardneri (Fig. 16d) apresenta cerca
de 15 camadas celulares. Clusia arrudae (Fig. 17d) e C. marizii (Fig. 17a) possuem
cerca de 16 estratos celulares. Clusia fluminensis (Fig. 16a) e C. spiritu-sanctensis (Fig.
19a) tm cerca de 22 camadas de clulas. Clusia burchellii (Fig. 18c) tem
aproximadamente 25 camadas celulares e C. hilariana (Fig. 18d) apresenta a maior
quantidade de camadas celulares, 32. Abundncia de ductos e idioblastos cristalferos,
principalmente com a proximidade da epiderme em face abaxial.
Seguem aproximadamente de 1-5 camadas de colnquima angular, com clulas
isodiamtricas. Clusia aemygdioi (Fig. 17c), C. insignis (Fig. 18a) e C. lanceolata (Fig.
16b) possuem de 1-2 camadas de clulas. Em C. criuva (Figs. 16c e 20c), C.
intermedia (Figs. 19b e 19c), C. marizii (Fig. 17a) e C. parviflora (Figs. 17b e 20b) h de
2-4 camadas celulares. Clusia arrudae (Fig. 17d), C. fluminensis (Fig. 16a), C. gardneri
(Fig. 16d) e C. nemorosa (Fig. 18b) tm aproximadamente 4 camadas de clulas.
Clusia burchellii (Fig. 18c e 20d), C. hilariana (Fig. 18d) e C. spiritu-sanctensis (Fig.
19a) possuem cerca de 5 estratos celulares. Abundncia de ductos e idioblastos
cristalferos.
Das trs espcies cujas amostras de ambos os sexos estavam disponveis,
somente C. intermedia apresentou dimorfismo sexual. A lmina foliar do indivduo
masculino (Fig. 8a) mais espessa que a do feminino (Fig. 8b) devido maior
quantidade de camadas celulares no mesofilo; na regio da nervura principal o
indivduo masculino apresenta convexidade somente para a face abaxial (Fig. 19b),
enquanto o feminimo apresenta para ambas as faces, sendo a da face abaxial maior
que a da adaxial (Fig. 19c).
27
De acordo com as diferenas observadas entre as espcies, em nvel

anatmico, foi possvel construir a seguinte chave para a identificao das mesmas.
1-Lmina foliar composta por at 20 camadas celulares no mesofilo..........................................................2
1-Lmina foliar composta por 21-29 camadas celulares no mesofilo..........................................................4
1-Lmina foliar composta por 30 ou mais camadas celulares no mesofilo.................................................8
2-Nervura principal convexa apenas na face abaxial...................................................................C. gardneri
2-Nervura principal convexa em ambas as faces, sendo na abaxial maior que na adaxial........................3
3-Presena de cmara subestomtica.......................................................................................C. nemorosa
3- Cmara subestomtica discreta ou ausente.............................................................................C. insignis
4-Nervura principal indiferenciada do restante da lmina foliar.................................................C. lanceolata
4-Nervura principal convexa apenas na face abaxial..................................................................................5
4-Nervura principal convexa em ambas as faces.......................................................................................6
5-Cutcula com ornamentao e clula comum quadrada na face adaxial da epiderme..........C. intermedia
5-Cutcula com ornamentao e clula comum retangular na face adaxial da epiderme..............C. marizii
5-Cutcula lisa e clula comum quadrada na face adaxial da epiderme.........................................C. criuva
5-Cutcula lisa e clula comum retangular na face adaxial da epiderme..................................C. parviflora
6-Convexidades semelhantes em ambas as faces...................................................................C. aemygdioi
6-Convexidade na face abaxial maior que na adaxial.................................................................................7
7-Parnquima palidico totalmente interrompido na regio da nervura principal....................... C. arrudae
7-Parnquima palidico parcialmente interrompido na regio da nervura principal................C.intermedia
8-Nervura principal convexa apenas na face abaxial...................................................................................9
8-Nervura principal indiferenciada do restante da lmina foliar............................................. C. fluminensis
9- Presena de cmara subestomtica...........................................................................C.spiritu-sanctensis
9-Cmara subestomtica discreta ou ausente..........................................................................................10
10-Presena de tecido esclerenquimtico subepidrmico...........................................................C. burchellii
10-Ausncia de tecido esclerenquimtico subepidrmico...........................................................C. hilariana
Resultados - Histoqumica da Lmina Foliar

Os testes histoqumicos foram realizados nas espcies Clusia burchellii (Tab. 2),
C. criuva (Tab. 3), C. fluminensis (Tab. 4), C. gardneri (Tab. 5), C. insignis (Tab. 6), C.
lanceolata (Tab. 7) e C. nemorosa (Tab. 8). Para as demais espcies no foi realizada
esta anlise porque as amostras j foram enviadas fixadas e preservadas em etanol
70%, no havendo material fresco.
A presena de celulose foi confirmada principalmente com o reagente especfico
azul de metileno. Em todas as espcies estudadas, s no foi detectada celulose na
cutcula (Figs. 22a e 22b) e nas fibras dos elementos condutores (Fig. 22c).
28
Os compostos lipoflicos - cutina, suberina e outros alm da mucilagem foram

detectados, em todas as espcies, com resultados semelhantes; as principais
estruturas que apresentaram reao positiva para estes compostos foram: cutcula
(Fig. 22d), os tecidos parenquimticos, principalmente o palidico (Figs. 22d e 22e),
os elementos de vaso e floema (Fig. 22f) e o interior dos ductos secretores (Fig. 23a).
Sendo que o teste com sudan IV tambm mostrou reao positiva para os compostos
lipoflicos presentes no ltex no parnquima palidico (Fig. 23b), nos elementos
condutores (Fig. 22f) e no interior dos ductos secretores (Fig. 23a).
A cutcula espessa em ambas as faces, com maior impregnao de compostos
lipoflicos, como cera, na face adaxial. Foram encontradas gotculas de lipdios em
clulas isoladas dos tecidos parenquimticos.
Foram detectados acares redutores no parnquima palidico (Fig. 23c), em
menor quantidade na epiderme (Fig. 23c), no parnquima lacunoso prximo face
abaxial (Fig. 23c) e nos elementos condutores do tecido floemtico (Fig. 23d). Nas
espcies Clusia burchellii, C. insignis (Fig. 23c) e C. nemorosa (Fig. 23d) ocorreu
reao positiva para esses acares em todas as estruturas mencionadas acima; C.
criuva, C. gardneri (Figs. 23e e 23f), C. fluminensis (Fig. 24a) e C. lanceolata
apresentaram reao apenas na epiderme.
Gros de amido foram evidenciados em todos os testes especficos aplicados e
em todas as espcies, principalmente ao redor do cilindro vascular da nervura principal
bainha amilfera (Fig. 24b), no tecido parenquimtico prximo face abaxial na regio
da nervura principal (Fig. 24c) e no tecido parenquimtico circundante aos elementos
condutores (Fig. 24d).
Os cristais presentes na lmina foliar de todas as espcies estudadas so
compostos de oxalato de clcio (Fig. 23e), confirmado pela reao positiva em cido
sulfrico e negativa em cido actico 70%.
Os compostos fenlicos foram observados, com os testes dicromato de potssio
e sulfato ferroso aquoso com formalina, nos tecidos parenquimticos, principalmente o
palidico (Fig. 24e), epiderme (Figs. 24e e 24f) e elementos condutores,
principalmente o floema (Fig. 25a), para as 7 espcies estudadas. A observao a
partir dos testes realizados com os fluorocromos acetato neutro de chumbo aquoso e
29
cloreto de alumnio aquoso no foi possvel porque as seces, sem a utilizao de

qualquer reagente, j emitiam fluorescncia.
Os taninos foram observados em praticamente todas as clulas dos tecidos
parenquimticos e elementos condutores, apresentando maior proporo que os
demais metablitos secundrios detectados (Fig. 25b). Foram realizados dois testes
para deteco destes compostos sulfato de ferro e vanilina clordrica, no entanto
somente o primeiro mostrou reao positiva.
As nervaes foliares das espcies analisadas so ricas em lignina, detectada
nas fibras ao redor dos feixes vasculares e nos elementos de vaso (Figs. 25c, 25d e
26a),
em
C.
burchellii
tambm
houve
deteco
de
lignina
nos
tecidos
esclerenquimticos subepidrmicos de ambas as faces (Fig. 26b).

As paredes celulares apresentam-se impregnadas por pectina. A reao ocorreu
em praticamente toda a lmina foliar, com exceo da cutcula (Fig. 26c) e fibras ao
redor dos feixes vasculares (Fig. 26d); no houve diferenas entre as espcies.
No foram encontrados os preciptados caractersticos de resinas aps sete dias
de imerso das seces em acetato cprico aquoso 7%. Tambm no foram
observadas reaes indicaticas da presena de alcalides, protenas e slica em
nenhum dos testes realizados.
30
Tab. 2. Localizao dos compostos detectados na lmina foliar de Clusia

burchellii atravs de testes histoqumicos.
Composto
Reagente
LF
Cut Ep Esc
Hip
NP
PP BF
Xil
Flo Fib
PL Clo BA Fib Flo
Xil
Md PR
Dc
Cr
Col
acar redutor
Fehling
++
++
++
++
++
++
Alcalide
Dragendorff
Ellran
cloreto zinco iodado
++
++
++
Amido
lugol
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
Carbonato
clcio
cido actico
Celulose
azul metileno
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Fenis
Lignina
Lipoflicos
Steinmetz
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
dicromato potssio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
sulfato ferro formalina
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
floroglucinol clordrico
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sulfato anilina
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sudan III
++
++
++
++
++
sudan IV
++
++
++
++
++
oxalato clcio
cido sulfrico
++
Pectina
vermelho rutnio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Protena
cido pcrico
azul Coomassie
ferrocianeto potssio
Resina
acetato cprico
Slica
cristal fenol
Tanino
sulfato ferro
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
vanilina clordrica
NOTAS: - reao negativa para o composto

+ reao em grupos de clulas e/ou com intensidade mediana
++ reao em toda a estrutura e/ou com intensidade forte
Legenda: Lmina foliar (LF), Nervura principal (NP), Ductos (Dc), Cristais (Cr),
Cutcula (Cut), Epiderme (Ep), Esclernquima (Esc), Hipoderme (Hip), Parnquima
Palidico (PP), Bainha de Feixe (BF), Xilema (Xil), Floema (Flo), Fibras (Fib),
Parnquima Lacunoso (PL), Clornquima (Clo), Bainha Amilfera (BA), Medula (Md),
Parnquima de Preenchimento (PR), Colnquima (Col).
31
Tab. 3. Localizao dos compostos detectados na lmina foliar de Clusia criuva

atravs de testes histoqumicos.
Composto
Reagente
LF
Cut Ep Hip
NP
PP BF Xil
Flo Fib
PL Clo BA Fib Flo Xil
Md PR
Dc
Cr
Col
acar redutor
Fehling
++
Alcalide
Dragendorff
Ellran
++
++
++
Amido
lugol
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
Carbonato
clcio
cido actico
Celulose
azul metileno
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Fenis
dicromato potssio
sulfato ferro
formalina
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Lignina

floroglucinol
clordrico
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
sulfato anilina
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sudan III
++
++
++
++
++
sudan IV
Lipoflicos
++
++
++
++
++
oxalato clcio
cido sulfrico
++
Pectina
vermelho rutnio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Protena
cido pcrico
azul Coomassie
Resina
acetato cprico
Slica
cristal fenol
Tanino
sulfato ferro
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
vanilina clordrica

Cutcula (Cut), Epiderme (Ep), Hipoderme (Hip), Parnquima Palidico (PP), Bainha
de Feixe (BF), Xilema (Xil), Floema (Flo), Fibras (Fib), Parnquima Lacunoso (PL),
Clornquima (Clo), Bainha Amilfera (BA), Medula (Md), Parnquima de Preenchimento
(PR), Colnquima (Col).
32

fluminensis atravs de testes histoqumicos.
Composto
Reagente
LF
NP
Cut
Ep
Hip
PP
BF
Xil
Flo
Fib
PL
Clo
BA
Fib
Flo
Xil
Md
PR
Col
Dc
Cr
Acar redutor
Fehling
++
Alcalide
Dragendorff
Ellran
Amido
++
++
++
lugol
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
carbonato clcio
cido actico
Celulose
azul metileno
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Fenis
Lignina
Lipoflicos
Steinmetz
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
dicromato potssio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
sulfato anilina
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sudan III
++
++
++
++
++
sudan IV
++
++
++
++
++
Oxalato clcio
cido sulfrico
++
Pectina
vermelho rutnio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Protena
cido pcrico
azul Coomassie
Resina
acetato cprico
Slica
cristal fenol
Tanino
sulfato ferro
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
vanilina clordrica

33

gardneri atravs de testes histoqumicos.
Composto
Reagente
Cut
Ep
Hip
PP
BF
Xil
Flo
Fib
PL
Clo
BA
Fib
Flo
Xil
Md
PR
Col
Acar redutor
Fehling
++
Alcalide
Dragendorff
Amido
LF
NP
Dc
Cr
Ellran
++
++
++
lugol
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
carbonato clcio
cido actico
Celulose
azul metileno
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Fenis
Lignina
dicromato potssio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
sulfato anilina
lipoflicos
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sudan III
++
++
++
++
++
sudan IV
++
++
++
++
++
Oxalato clcio
cido sulfrico
++
Pectina
vermelho rutnio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Protena
cido pcrico
azul Coomassie
Resina
acetato cprico
Slica
cristal fenol
Tanino
sulfato ferro
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
vanilina clordrica

34
Tab. 6. Localizao dos compostos detectados na lmina foliar de Clusia insignis

atravs de testes histoqumicos.
Composto
Reagente
LF
NP
Cut
Ep
Hip
PP
BF
Xil
Flo
Fib
PL
Clo
BA
Fib
Flo
Xil
Md
PR
Col
Dc
Cr
Acar redutor
Fehling
++
++
++
++
++
++
alcalide
Dragendorff
Ellran
Amido
++
++
++
lugol
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
carbonato clcio cido actico
celulose
azul metileno
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Fenis
Lignina
lipoflicos
dicromato potssio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
sulfato anilina
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sudan III
++
++
++
++
++
sudan IV
++
++
++
++
++
Oxalato clcio
cido sulfrico
++
Pectina
vermelho rutnio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
protena
cido pcrico
azul Coomassie
Resina
acetato cprico
Slica
cristal fenol
Tanino
sulfato ferro
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
vanilina clordrica

35

lanceolata atravs de testes histoqumicos.
Composto
Reagente
Cut
Ep
Hip
PP
BF
Xil
Flo
Fib
PL
Clo
BA
Fib
Flo
Xil
Md
PR
Col
acar redutor
Fehling
++
Alcalide
Dragendorff
Amido
LF
NP
Dc
Cr
Ellran
++
++
++
lugol
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
Carbonato
clcio
cido actico
Celulose
azul metileno
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Fenis
Lignina
Lipoflicos
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
dicromato potssio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
sulfato anilina
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sudan III
++
++
++
++
++
sudan IV
++
++
++
++
++
oxalato clcio
cido sulfrico
++
Pectina
vermelho rutnio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Protena
cido pcrico
azul Coomassie
Resina
acetato cprico
Slica
cristal fenol
Tanino
sulfato ferro
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
vanilina clordrica

Legenda: Lmina foliar (LF), Nervura principal (NP), Ductos (Dc), Cristais (Cr), Cutcula
(Cut), Epiderme (Ep), Hipoderme (Hip), Parnquima Palidico (PP), Bainha de Feixe
(BF), Xilema (Xil), Floema (Flo), Fibras (Fib), Parnquima Lacunoso (PL), Clornquima
(Clo), Bainha Amilfera (BA), Medula (Md), Parnquima de Preenchimento (PR),
Colnquima (Col).
36

nemorosa atravs de testes histoqumicos.
Composto
Reagente
LF
NP
Cut
Ep
Hip
PP
BF
Xil
Flo
Fib
PL
Clo
BA
Fib
Flo
Xil
Md
PR
Col
Dc
Cr
acar redutor
Fehling
++
++
++
++
++
++
Alcalide
Dragendorff
Ellran
++
++
++
Amido
lugol
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
carbonato clcio cido actico
Celulose
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Fenis
Lignina
Lipofilicos
azul metileno
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
dicromato potssio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
sulfato anilina
++
++
++
++
Steinmetz
++
++
++
++
++
sudan III
++
++
++
++
++
sudan IV
++
++
++
++
++
oxalato clcio
cido sulfrico
++
Pectina
vermelho rutnio
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
Protena
cido pcrico
azul Coomassie
Resina
acetato cprico
Slica
cristal fenol
Tanino
sulfato ferro
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
vanilina clordrica

Legenda: Lmina foliar (LF), Nervura principal (NP), Ductos (Dc), Cristais (Cr), Cutcula
(Cut), Epiderme (Ep), Hipoderme (Hip), Parnquima Palidico (PP), Bainha de Feixe
(BF), Xilema (Xil), Floema (Flo), Fibras (Fib), Parnquima Lacunoso (PL), Clornquima
(Clo), Bainha Amilfera (BA), Medula (Md), Parnquima de Preenchimento (PR),
Colnquima (Col).
37
Discusso e Concluso
Existem duas principais funes para a venao foliar: transporte atravs dos
tecidos condutores e estabilizao mecnica devido presena de elementos
esclerificados. Estas caractersticas da venao foliar so, geralmente, geneticamente
fixados, podendo servir como ferramenta taxonmica para a identificao de espcies
(Roth-Nebelsick et al., 2001), alm de prover informaes adicionais para propor
hipteses de relaes filogenticas entre espcies ou variedades (Lis, 1992).
Confirmando dados obtidos por Machado (1980) para Clusia lanceolata, o
padro de venao das espcies analisadas do tipo pinadocamptdromobroquiddromo. De acordo com a padronizao sugerida por Hickey (1974 e 1979), as
espcies apresentam nervuras de at quatro ordens, pois as venaes mais finas
formam um retculo relativamente uniforme que no permite diferenciao de calibre
entre as mesmas.
As espcies estudadas possuem alguns padres de venao distintos, o que
no suficiente para a identificao das mesmas, mas torna possvel a separao em
grupos, o que pode ser utilizado, quando associado a outros carcteres, no
reconhecimento das mesmas quando em estgio vegetativo. Os caracteres mais
confiveis para a distino entre as espcies so: ngulo e forma do pice, ngulo das
nervuras secundrias (principalmente quando comparado o pice com o restante da
lmina foliar), posio da veia ltima marginal e presena de invaginao desta veia na
regio da nervura principal.
Em relao ao pice, o ngulo agudo em C. criuva, C. insignis e C. nemorosa.
Clusia criuva apresenta forma arredondada do pice, enquanto C. insignis e C.
nemorosa tm forma retusa. Ainda em relao regio apical, C. insignis possui
reduo nos ngulos agudos das nervuras secundrias; em C. criuva os ngulos so
quase retos, e no pice h reduo angular; em C. nemorosa os ngulos so agudos
amplos. Essas trs espcies apresentam veia ltima marginal em posio perifrica,
sendo que em C. criuva e C. nemorosa existe invaginao desta veia na regio da
nervura primria.
O pice obtuso em C. burchellii, C. fluminensis, C. gardneri, C. hilariana e C.
lanceolata. A forma do pice arredondada nas duas primeiras e retusa nas demais.
38
Em C. burchellii os ngulos so agudos amplos a retos, exceto no pice onde se

tornam obtusos. Em C. fluminensis, C. gardneri, C. lanceolata e C. hilariana o pice
apresenta ngulos agudos das nervuras secundrias mais reduzidos. As espcies C.
burchellii, C. fluminensis e C.lanceolata tm invaginao na veia ltima marginal na
rea de contato com a nervura primria.
Quanto anatomia foliar, as espcies estudadas possuem caractersticas
semelhantes s observadas por Solereder (1908) e Metcalfe & Chalk (1983), verifica-se
que encontram-se perfeitamente situadas no quadro de caracteres gerais da famlia:
dorsiventralidade do mesofilo, cutcula espessa, estmatos restritos face abaxial,
hipoderme apenas na face adaxial em uma ou vrias camadas, cristais de oxalato de
clcio do tipo drusa geralmente presentes e ductos secretores de ampla ocorrncia.
Machado (1980) observou em Clusia lanceolata Cambess. var. lanceolata e
Clusia lanceolata var. oblongifolia Engler as caractersticas anatmicas gerais das
Clusiaceae, como folhas hipoestomticas, cutcula espessa e mesofilo heterogneo
contendo ductos secretores. Embora tenha verificado uma acentuada uniformidade
estrutural nessas duas variedades, a autora ressalta algumas diferenas na quantidade
de camadas celulares, provavelmente em decorrncia dos fatores ambientais.
As espcies aqui estudadas tambm possuem acentuada uniformidade em nvel
anatmico, no que se refere aos aspectos gerais da lmina foliar, como tipo e
disposio dos tecidos presentes.
As espcies analisadas apresentam cutcula espessa, o que as tornam
resistentes a perodos de seca ou baixa precipitao, principalmente para aquelas
oriundas do Cerrado. De acordo com Helbsing et al. (2000), sob severas condies
ambientais, como deficinia hdrica e altas temperaturas, os estmatos freqentemente
se fecharo, e a sobrevivncia do vegetal pode ento depender fortemente das perdas
de quantidades residuais de gua, determinadas, em diferentes nveis, pelas taxas de
transpirao cuticular. Esau (1974) afirma que a cutcula, assim como as camadas
cutinizadas e a cera superficial, desempenham relevante papel na reduo da perda de
gua.
No foram evidenciados tricomas nas espcies analisadas, corroborando os
dados de Solereder (1908) que relatou ausncia de plos na famlia. No entanto,
Metcalfe & Chalk (1983) afirmaram que os tricomas so raros entre os representantes
39
de Clusiaceae e, Morretes & Ferri (1972) observaram pontos de insero de tricomas

na face abaxial da epiderme de Clusia spathulaefolia.
Boeger et al. (1997) fizeram a anlise anatmica de C. criuva e concluram que a
mesma apresenta epiderme da face adaxial pluriestratificada com paredes anticlinais
externas recobertas por uma espessa cutcula. No entanto, na face adaxial das folhas
das espcies estudadas, evidenciaram-se vrios estratos cujas clulas diferem
daquelas da epiderme, quer pela forma, quer pelo aspecto e espessura das paredes.
Embora no tenham sido desenvolvidos estudos ontogenticos, foi possvel observar
em folhas muito jovens, que esses estratos celulares se originam pela diviso periclinal
das clulas subepidrmicas. Tal fato sugere que as camadas subepidrmicas
ocorrentes nas espcies em estudo constituem uma autntica hipoderme.
Esau (1974) menciona que clulas hipodrmicas podem ser aclorofiladas ou
portadoras de poucos cloroplastos, e Metcalfe (1983), ao tecer consideraes sobre a
origem e as caractersticas das clulas hipodrmicas, faz meno a 3 tipos especiais
de hipoderme: colenquimatosa, esponjosa e esclertica, e acrescenta que estas
variantes podem ser teis na taxonomia. A hipoderme, em todas as espcies
analisadas, de natureza colenquimatosa, sendo nela observados ductos secretores
esquizgenos e idioblastos cristalferos encerrando drusas de oxalato de clcio.
Wylie (1949) refere que a hipoderme pode estar presente em um grande nmero
de xerfitas, como tecido armazenador de gua, auxiliando na translocao
extravascular da folha, sendo que as paredes de suas clulas podem variar em
espessura.
Clusia insignis, oriunda da Floresta Amaznica, apresenta somente uma camada
de clulas na hipoderme, resultado que corrobora a funo deste tecido. Uma vez que
nesta regio geogrfica no ocorrem longas secas, no se fazendo necessria a
presena de um tecido armazenador de gua. Enquanto que nas espcies do Cerrado
este tecido apresenta at 5 camadas celulares, o que sugere uma adaptao aos
perodos de baixa precipitao.
Cutter (1986a) cita que as clulas da hipoderme geralmente apresentam
paredes delgadas. Nas espcies estudadas neste trabalho, a hipoderme possui clulas
de paredes espessas e impregnadas por substncias pcticas, confirmando dados de
Solereder (1908) que mencionou a tendncia esclerificao ou ao espessamento das
40
paredes celulares na hipoderme foliar das espcies desta famlia. Este espessamento
pode estar relacionado, alm do armazenamento de substncias, sustentao da
folha.
Machado (1980) faz meno presena de uma hipoderme na face adaxial das
folhas de C. lanceolata, constituda por clulas incolores, em 3-4 camadas contendo
ductos secretores esquizgenos e drusas de oxalato de clcio. Estes resultados
tambm foram encontrados neste trabalho para a mesma espcie.
O mesofilo de C. criuva caracterizado por aproximadamente 2 camadas de
parnquima palidico e 16 de parnquima lacunoso. Boeger et al. (1997) realizaram a
anlise anatmica da mesma espcie e concluram que o parnquima palidico
constitudo por uma camada de clulas e o lacunoso por at 12 camadas. Esta
divergncia entre o resultado encontrado e o observado pelos demais autores pode-se
tratar de plasticidade fenotpica devido a mudanas no ambiente onde o vegetal se
encontra, como ocorreu entre as variedadas de C. lanceolata analisadas por Machado
(1980).
A origem esquizgena dos ductos das Gutifferae foi referida por Solereder
(1908) e Metcalfe & Chalk, (1983). Paula (1966) menciona a origem esquizgena dos
ductos secretores de Clusia grandiflora e a origem esquizolisgena para os canais de
Clusia aff. macropoda. Machado (1980), por sua vez, considera que os canais
secretores de Clusia lanceolata so esquizgenos e esquizolisgenos.
Embora no tenham sido realizados estudos ontogenticos com relao aos
ductos secretores das espcies analisadas, pde-se evidenciar que na planta adulta
eles se apresentam bem delimitados pelas clulas epiteliais, sem qualquer vestgio de
lise, sugerindo a hiptese da origem esquizgena e, confirmando resultados de Curtis
& Lersten (1990) para espcies de Hypericum (Clusiaceae).
Os ductos secretores que ocorrem nas espcies estudadas se encontram
circundados por clulas epiteliais bem demarcadas, de nmero varivel. Estes ductos
esto dispersos ao longo do mesofilo e, com maior concentrao, na regio da nervura
principal. Clusia fluminensis a nica espcie que se destaca das demais devido ao
maior dimetro e abundncia dos ductos secretores. Solereder (1908) frisa que a
distribuio desses ductos pode ser til para a diagnose de gneros e espcies na
famlia, sendo que os ductos secretores de Clusia podem percorrer o mesofilo
41
independentemente das nervuras ou estar a elas relacionados; menciona ainda, sua

ocorrncia na hipoderme e mais raramente no parnquima dos feixes vasculares em
Clusia eugenioides, C. flava, C. minor e C. pana-panari. Esta localizao tambm foi
observada em todas as espcies analisadas.
Nas espcies analisadas foram evidenciados escleredeos, geralmente junto aos
feixes vasculares e, muito raramente, difusos no parnquima da nervura principal. Via
de regra so curtos, nas formas de escleredeos colunares, osteoescleredeos e
escleredeos
bifurcados
e,
somente
em
C.
burchellii
foram
encontrados
astroescleredeos e escleredeos raquiformes, o que pode ser utilizado para separar

esta espcie das demais.
Os escleredeos so interpretados como estruturas relacionadas funo
mecnica ou de suporte (Eames & MacDaniels, 1947; Esau, 1974; Cutter, 1986a e
Fahn,1982), podendo ser utilizados como subsdios em taxonomia (Carlquist, 1961) e
se diferenciar junto aos traquedeos das terminaes vasculares (Esau, 1974). Paula
(1966 e 1976) relata a ocorrncia de escleredeos nas folhas de Clusia grandiflora
Splitg. e Clusia aff. macropoda Klotzsch., respectivamente. Morretes & Ferri (1972)
tambm citam a presena desses elementos no parnquima lacunoso de Clusia
spathulaefolia Engl. Como os escleredeos foram observados em diversas espcies do
gnero em diferentes ambientes, pode-se deduzir que uma caracterstica filogentica
e, conseqentemente, til na taxonomia.
Em relao s clulas condutoras do xilema, foram observados muitos
elementos de vaso, de tamanhos e espessamentos de parede distintos, entretanto a
quantidade de traquedeos foi muito inferior quando comparada a dos elementos de
vaso, sugerindo maior especializao das clulas para o transporte. Paula (1974a)
tambm constatou que os traquedeos eram escassos ou ausentes na madeira de
diferentes espcies deste gnero.
A literatura revela que as espcies do gnero Clusia manifestam relativa
constncia no tocante ao sistema vascular da lmina foliar (Paula, 1966; Machado,
1980; Sobrado & Medina, 1980 e Schneider, 1985). As pequenas variaes referentes
quantidade de clulas nos tecidos condutores, mencionadas por Machado (1980),
no invalidam tal assertiva. O comportamento do sistema vascular das lminas foliares
das espcies estudadas, como a disposio dos tecidos condutores, tambm se
42
assemelha ao que tem sido referido para os demais representantes do gnero, sendo
que as principais diferenas observadas foram a forma do cilindro vascular, variando de
circular a elptica, a possvel separao dos feixes vasculares por tecido
parenquimtico e a espessura nas paredes das clulas da medula.
Stace (1965) ressalta que normalmente os estmatos no ocorrem na epiderme
da nervura principal e quando isto acontece, no so funcionais. Nas espcies
estudadas, os estmatos tambm so observados na epiderme da nervura principal.
Entretanto, embora no tenham sido desenvolvidos experimentos para testar sua
funcionalidade, nada indica o contrrio.
De acordo com Schreiber & Riederer (1996) as plantas sempre verdes com
caractersticas escleromrficas, como epiderme com clulas altas e recoberta por
espessa cutcula, esto adaptadas sobrevivncia em perodos de seca, quando a
elevada evaporao de gua deve ser evitada, caracterizando a baixa taxa de
permeabilidade hdrica desses organismos.
As
espcies
estudadas
so
sempre
verdes
apresentam
algumas
caractersticas xricas como cutcula e camadas cuticulares espessas, esclernquima

abundante e parnquima palidico em vrias camadas. At o momento, os estudos
realizados sobre as espcies do gnero Clusia no abordam os caracteres edficos
dos respectivos ambientes, o que torna desaconselhvel levantar quaisquer hipteses
sobres as possveis causas determinantes do aparecimento das caractersticas
escleromrficas das espcies aqui estudadas.
As substncias secretadas pelas plantas tm merecido ateno de vrios
pesquisadores que tm procurado elucidar sua natureza qumica e o que elas
representam para o vegetal (Pyykk, 1966; Metcalfe, 1983; Fahn, 1988 e 2000; Olveira
et al., 1996; Gonzlez et al., 1997 e Nogueira et al., 2001), sendo que Metcalfe (1983)
ressalta que algumas dessas substncias fornecem subsdios para estudos
taxonmicos.
Para a qualificao de compostos de interesse nos tecidos vegetais podem ser
usados mtodos de colorao histoqumica com controles adequados e, sempre que
possvel, dois procedimentos devem ser utilizados para a qualificao da mesma
substncia (Jensen, 1962). Isto ocorre porque os testes usados para reconhecimento
43
de metablitos celulares, em geral, no apresentam especificidade para apenas uma

substncia (Kraus & Arduin, 1997).
Os compostos qumicos das plantas esto didaticamente divididos em
compostos originrios do metabolismo primrio ou do secundrio; o metabolismo
primrio envolve os metablitos ou macromolculas essenciais, com funes vitais bem
definidas: lipdios, protdeos, glicdeos (Poser & Mentz, 2001). Herrmann & Weaver
(1999) e Poser & Mentz (2001) explicam que os produtos do metabolismo secundrio
so ligados atravs de diversas rotas de biossntese aos do metabolismo primrio.
Os metablitos secundrios so usados principalmente como auto-proteo
contra ataques microbianos, herbivoria e radiao UV ou na interao benfica com
outros organismos, como polinizao de flores, so encontrados em concentraes
relativamente baixas e em determinados grupos taxonmicos (Poser & Mentz, 2001 e
Endt et al., 2002).
Os metablitos primrios encontrados foram os acares redutores, os gros de
amido e os compostos lipoflicos. De acordo com Fahn (1988), dentre os materiais
lipoflicos secretados pelas plantas esto os terpenos, lipdios, ceras e flavonoides,
sendo que resinas e leos esseniais tambm possuem grande variedade de terpenos.
J os metablitos secundrios evidenciados foram os cristais e os compostos fenlicos,
dentre eles, lignina e tanino.
Em relao aos tecidos secretores, Fahn (1982, 1988, 2000) afirmou que os
mesmos so usualmente classificados de acordo com as substncias produzidas, mas
como o mesmo tecido pode produzir um nmero diferente de substncias, a
classificao torna-se complexa. Segundo Esau (1974), em Clusiaceae ocorrem
grandes e abundantes clulas parenquimticas secretoras nos tecidos vasculares e
fundamental da folha, mas com contedos no especificados. Com os testes
realizados, foram detectados, nos tecidos vasculares e parenquimticos, acares
redutores, compostos fenlicos, taninos e lipoflicos, sendo que no parnquima
palidico tambm foram detectados compostos lipoflicos do ltex.
Em todas as espcies a cutcula apresenta-se espessa e com impregnao de
cera e outros compostos lipoflicos, o que acarreta maior proteo dessecao.
Corroborando informaes de Esau (1974) sobre a reduo da perda de gua realizada
pela cutcula, camadas cutinizadas e a cera superficial. Cutter (1986a) relata que a
44
composio qumica da cutcula e dos estratos cutinizados varivel, no que diz

respeito proporo de cutina e de cera nas diferentes camadas.
Os acares redutores apresentaram localizaes distintas entre as espcies,
estando presentes no parnquima palidico, no parnquima lacunoso prximo face
abaxial, no tecido floemtico e em menor quantidade na epiderme. Nas espcies C.
criuva, C. gardneri, C. fluminensis e C. lanceolata houve reao apenas na epiderme.
Koroleva et al. (1997) afirmaram que a epiderme de folhas de gramneas pode funcioar
como um compartimento reserva de acares, podendo abranger 5-15% de glicose e
frutose foliares.
As espcies aqui estudadas apresentam hipoderme com paredes ricas em
pectina e contedo citoplasmtico portador de compostos lipoflicos, taninos e outros
compostos fenlicos. Os compostos armazenados por este tecido esto de acordo com
Eames & MacDaniels (1947); no entanto, a composio das paredes diverge, esses
autores associam a ocorrncia de hipoderme a fatores ambientais e referem que a
mesma pode ser de natureza cutinizada ou mais comumente lignificada.
Entre as substncias armazenadas e/ou secretadas pelas plantas os compostos
fenlicos, principalmente os taninos, so muito freqentes nas xerfitas (Pyykk, 1966).
Pyykk (1966), Esau (1974) e Fahn (1988 e 2000) mencionaram a possibilidade das
substncias tnicas estarem relacionadas com a proteo contra dessecao,
apodrecimento e ataque por fungos e bactrias. Montenegro et al. (1980) e Levin
(1971) citaram que os taninos podem inibir o ataque dos insetos, reduzindo o valor
nutritivo das folhas e alterando seu paladar. Cooper-Driver & Bhattacharya (1998)
afirmaram que vrios compostos fenlicos so utilizados na medicina como
antioxidantes e no tratamento de cncer e doenas cardacas.
Cutter (1986b) enfatiza que, alm dos compostos fenlicos, a cutcula tambm
extremamente resistente ao ataque de microorganismos, reduzindo a permeabilidade
da epiderme e tomando parte efetiva na proteo da planta contra esses agentes
externos.
Confirmando dados de Paula (1966), Machado (1980) e Schneider (1985) sobre
a presena de taninos nas espcies por eles estudadas, as espcies deste trabalho
portam grande quantidade de taninos, em quase todos os tecidos da lmina foliar. No
entanto, a presena de depsitos de cera, somados cutcula e aos compostos
45
fenlicos no apresentaram uma barreira efetiva contra a penetrao dos fungos

atravs das clulas epidrmicas, o que foi observado no campo e sob microscopia
ptica.
Haberlandt (1928) focaliza a ocorrncia de clulas secretoras de resinas nas
Clusiaceae. Carmo et al. (2002) fazem referncia importncia da resina das flores
feminina e masculina de Clusia arrudae, apesar de no terem realizado estudos
histoqumicos para a confirmao deste composto. No entanto, no estudo aqui
realizado, no foram encontrados os precipitados caractersticos de resinas aps sete
dias de imerso das seces em acetato cprico aquoso 7%, confirmando dados de
Curtis & Lersten (1990), que tambm no encontraram resinas em algumas espcies
da famlia.
Dentre as estruturas secretoras, os ductos e cavidades constituem um dos
aspectos mais abordados (Solereder, 1908; Metcalfe, 1983; Fahn, 1988 e 2000). Os
ductos secretores das espcies estudadas apresentam compostos lipoflicos no seu
interior. No entanto, Curtis & Lersten (1990) evidenciaram pouco ou nenhum contedo
de leo nos ductos de duas espcies de Hypericum (Clusiaceae). J Metcalfe & Chalk
(1983) referem que o fluido contido no interior dos ductos secretores de Clusia e de
outros gneros da famlia tem aspecto leitoso e semelhante ao ltex.
Alm de estruturas secretoras, tambm foram observados cristais sob a forma
de drusas, cuja composio oxalato de clcio, ocorrendo em maior freqncia no
mesofilo. Trabalhos anteriores relatam a ocorrncia deste tipo de cristal em Clusia
(Solereder, 1908; Machado, 1980 e Metcalfe & Chalk, 1983).
Segundo Pyykk (1966) a ocorrncia de cristais nas folhas um carter
exclusivo em nvel de famlia ou gnero, no havendo relao com o ambiente. Quando
em propores acima do normal, pode refletir algumas vezes, uma resposta a
condies patolgicas (Metcalfe & Chalk, 1983).
De acordo com Fahn (1982) muitas plantas possuem em suas clulas depsitos
de excreo constitudos de matria inorgnica, na maioria das vezes, sais de clcio
formando os cristais. Conforme Prychid & Rudall (1999), os cristais, alm de
importncia taxonmica, podem representar formas de armazenamento de clcio e
cido oxlico, e tambm serem depsitos de substncias de metabolismo secundrio.
Finley (1999) mencionou a importncia dos cristais como defesa contra herbivoria, que
46
podem causar injrias no aparato bucal ou dificultar a digesto dos predadores, nas
espcies aqui analisadas no havia indcios de predao.
Preiss & Sivak (1996) observaram gros de amido na maioria das plantas e em
diferentes estruturas: razes, ramos, folhas, frutos e gros de plen. Ocorrem dentro de
plastdeos, organizados em grnulos semicristalinos de tamanhos e formas que variam
entre espcies, rgos e estgios de desenvolvimento. Os gros de amido, nas
espcies estudadas, apresentam forma ovide e foram encontrados, principalmente, ao
redor do cilindro vascular da nervura principal bainha amilfera, no tecido
parenquimtico acima da epiderme abaxial na regio da nervura principal e no tecido
parenquimtico circundante aos elementos condutores.
A utilizao de anlises histoqumicas combinadas visou determinao da
natureza qumica dos principais cristais e produtos secretados nas diferentes espcies
em estudo. Esta determinao possibilitou somente a separao de C. burchellii das
demais espcies do gnero, pois foi a nica que apresentou lignina no tecido
subepidrmico de ambas as faces; outra diferena entre as espcies foi a distribuio
dos acares redutores ao longo da lmina foliar ou somente na epiderme. As anlises
histoqumicas podem tambm, futuramente, auxiliar no entendimento das possveis
substncias de interesse medicinal ou comercial dessas espcies.
47
Fig. 2. Aspectos da morfologia e arquitetura foliar I. Folhas peninrvias mostrando nervura primria (np) reta,
secundria (ns) com espaamento uniforme e ngulos geralmente agudos moderados, intersecundrias (is) com
origem exmedial e ngulos agudos e veia ltima marginal (vm) do tipo fimbrial. A: Clusia burchellii com folha
obovada, com pice obtuso e arredondado. B: C. criuva com folha elptica, com pice agudo e nervuras secundrias
com ngulo agudo amplo. C: Clusia fluminensis com folha obovada, com pice obtuso e arredondado e reduo dos
ngulos das nervuras secundrias nesta regio. D: Clusia gardneri com folha elptica, com pice obtuso e retuso e
reduo dos ngulos das nervuras secundrias nesta regio.
48
Fig. 3. Aspectos da morfologia e arquitetura foliar II. Folhas peninrvias mostrando nervura primria (np) reta,
secundrias (ns) com espaamento uniforme e ngulos agudos moderados, intersecundrias (is) com origem
exmedial e ngulos agudos e veia ltima marginal (vm) do tipo fimbrial. A: Clusia hilariana com folha elptica, pice
obtuso e retuso e reduo dos ngulos das nervuras secundrias nesta regio. B: Clusia insignis com folha elptica
e pice agudo. C: Clusia nemorosa com folha elptica, pice agudo e retuso. D: Clusia lanceolata com folha elptica,
pice obtuso e retuso e reduo dos ngulos das nervuras secundrias nesta regio, notam-se invaginaes nas
reas de contato entre veia ltima marginal e nervura secundria.
49
Fig. 4. Detalhe das folhas diafanizadas I, mostrando nervura primria (np) reta, secundria (ns) com espaamento
uniforme, intersecundrias (is) com origem exmedial e ngulos agudos, tercirias (nt) com ngulos retos. A: Clusia
burchellii com nervuras secundrias com ngulos agudos moderados e tercirias com ngulos retos. B: Clusia criuva
com nervuras secundrias com ngulo agudo amplo. C: Clusia fluminensis com veia ltima marginal (vm) do tipo
fimbrial e invaginaes na rea de contato com as nervuras secundrias. D: Clusia gardneri com nervuras
secundrias com ngulos agudos moderados. E: Clusia hilariana com nervuras secundrias com ngulos agudos
moderados. F: Clusia insignis com nervuras secundrias com ngulos agudos moderados.
50
Fig. 5. Detalhe das folhas diafanizadas II. A: Clusia nemorosa com nervura primria (np) reta, secundria (ns) com
ngulos agudos moderados, tercirias (nt) com ngulos retos. B: Clusia nemorosa com nervuras tercirias (nt) com
ngulos retos e veia ltima marginal (vm) com invaginaes no contato com as nervuras secundrias (ns). C: Clusia
criuva com vnulas (v) ramificadas dicotomicamente. D: Clusia lanceolata com vnulas (v) ramificadas
dicotomicamente. E: Clusia nemorosa apresentando a venao dicotmica das vnulas (v).
51
Fig. 6. Seces transversais I, face adaxial da lmina foliar evidenciando epiderme (ed), hipoderme (hp),
parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia aemygdioi com clulas epidrmicas comuns
quadradas, recobertas por cutcula ornamentada, hipoderme de 4-5 estratos, parnquima palidico de 3-4 estratos
com ductos secretores (*) e parnquima lacunoso com espaos intercelulares. B: Clusia arrudae com clulas
epidrmicas comuns quadradas, recobertas por cutcula ornamentada, hipoderme de 4-5 estratos, parnquima
palidico de 3-4 estratos, parnquima lacunoso de 15-17 estratos com espaos intercelulares, epiderme em sua
face abaxial (eb) com clulas menores e cutcula menos espessa que na face adaxial. C: Clusia burchellii com
clulas epidrmicas comuns quadradas, recobertas por cutcula lisa com flanges, tecido esclerenquimtico
subepidrmico (te) e hipoderme com cerca de 3 estratos. D: Clusia criuva com clulas epidrmicas comuns
quadradas, recobertas por cutcula lisa, hipoderme de 4-5 estratos, parnquima palidico com cerca de 2 estratos e
parnquima lacunoso com numerosos espaos intercelulares.
52
Fig. 7. Seces transversais II, face adaxial da lmina foliar evidenciando epiderme (ed), hipoderme (hp),
parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia fluminensis com clulas epidrmicas comuns
quadradas, recobertas por cutcula ornamentada, hipoderme de 4-5 estratos e parnquima palidico com cerca de
9 estratos com ductos secretores (*). B: Clusia gardneri com clulas epidrmicas comuns quadradas, recobertas por
cutcula ornamentada, hipoderme com cerca de 3 estratos, parnquima palidico com 2 estratos e parnquima
lacunoso com feixes vasculares (fv) e numerosos espaos intercelulares. C: Clusia hilariana com clulas
epidrmicas comuns quadradas recobertas por cutcula lisa, hipoderme de 4-5 estratos, parnquima palidico com
cerca de 6 estratos e parnquima lacunoso com ductos secretores (*). D: Clusia insignis com clulas epidrmicas
comuns quadradas recobertas por cutcula ornamentada, hipoderme com uma nica camada, parnquima palidico
com cerca de 2 estratos, ducto secretor (*) no limite entre hipoderme e parnquima palidico, parnquima lacunoso
com numerosos espaos intercelulares.
53
Fig. 8. Seces transversais III, face adaxial da lmina foliar evidenciando epiderme (ed), hipoderme (hp),
parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia intermedia, folha masculina, com clulas
epidrmicas comuns quadradas, recobertas por cutcula ornamentada, hipoderme com cerca de 5 estratos,
parnquima palidico de 3-4 estratos celulares e parnquima lacunoso com espaos intercelulares. B: Clusia
intermedia, folha feminina, com clulas epidrmicas comuns quadradas, recobertas por cutcula ornamentada,
hipoderme com cerca de 4 estratos, parnquima palidico de 2-3 estratos celulares, parnquima lacunoso com
numerosos espaos intercelulares e epiderme em face abaxial (eb) com estmaros (st) nivelados. C: Clusia
nemorosa com clulas epidrmicas comuns quadradas recobertas por cutcula ornamentada, hipoderme com cerca
de 2 estratos celulares, parnquima palidico com uma nica camada de clulas, parnquima lacunoso com feixe
vascular (fv) e numerosos espaos intercelulares, ductos secretores (*) dispersos ao longo do mesofilo. D: Clusia
spiritu-sanctensis com clulas epidrmicas comuns quadradas recobertas por cutcula lisa, hipoderme de 4-5
estratos de clulas indiferenciadas entre si, parnquima palidico de 3-4 estratos com ducto secretor (*).
54
Fig. 9. Seces transversais da lmina foliar IV, evidenciando epiderme em face adaxial (ed), hipoderme (hp),
parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia lanceolata com clulas epidrmicas comuns
retangulares, recobertas por cutcula lisa, hipoderme de 4-5 estratos, parnquima palidico de 3-4 estratos
celulares, parnquima lacunoso com espaos intercelulares, presena de ductos secretores (*) ao longo do mesofilo
e feixe vascular (fv) com bainha parenquimtica. B: Clusia marizii com clulas epidrmicas comuns retangulares,
recobertas por cutcula ornamentada, hipoderme de 4-5 estratos com drusa (d), parnquima palidico de 3-4
estratos celulares, parnquima lacunoso com numerosos espaos intercelulares, ductos secretores (*) ao longo do
mesofilo e feixe vascular (fv) com bainha parenquimtica. C: Clusia parviflora com clulas epidrmicas comuns
retangulares recobertas por cutcula lisa, hipoderme com maior nmero de camadas entre as espcies (5-6),
parnquima palidico com cerca de 2 camadas e presena de drusas (d), parnquima lacunoso de 15-17 camadas
com feixe vascular (fv) e epiderme em face abaxial (eb) com estmatos (st) evidenciando cmara subestomtica e
cristas. D: Clusia aemygdioi com ducto secretor (*) no parnquima palidico, parnquima lacunoso de 15-17
estratos e epiderme em face abaxial (eb) com estmatos (st) evidenciando cmara subestomtica.
55
Fig. 10. Seces transversais da lmina foliar V, evidenciando epiderme em face adaxial (eb), hipoderme (hp),
parnquima palidico (pp), parnquima lacunoso (pl) e epiderme em face abaxial (eb). A: Clusia burchellii com
mesofilo denso, com poucos espaos intercelulares no parnquima lacunoso de 20-26 estratos, presena de feixe
vascular (fv) e tecido esclerenquimtico subepidrmico (te). B: Clusia criuva com parnquima lacunoso de 15-17
estratos, com feixe vascular (fv) e ductos secretores (*), epiderme em face abaxial com estmatos (st) com cmara
subestomtica. C: Clusia gardneri com parnquima lacunoso de 15-17 camadas com feixe vascular (fv) e epiderme
em face abaxial (eb) com estmatos (st) evidenciando cristas. D: Clusia intermedia, folha masculina com
parnquima lacunoso de 15-17 estratos e epiderme em face abaxial (eb) com estmatos (st) evidenciando cmara
subestomtica.
56
Fig. 11. Seces transversais da lmina foliar VI, evidenciando parnquima palidico (pp), parnquima lacunoso
(pl) e epiderme em face abaxial (eb). A: Clusia hilariana com mesofilo denso, com poucos espaos intercelulares no
parnquima lacunoso com cerca de 18 estratos, presena de feixe vascular (fv) circundado por fibras. B: Clusia
insignis com o menor nmero de camadas no parnquima lacunoso (12), presena de ducto secretor (*), epiderme
em face abaxial cutcula espessa e estmato (st) com crista e cmara subestomtica ausente. C: Clusia nemorosa
com parnquima lacunoso com cerca de 13 camadas com feixe vascular (fv) envolto por bainha parenquimtica,
ductos secretores (*) ao longo do mesofilo e epiderme em face abaxial (eb) com estmato (st) evidenciando cristas.
D: Clusia lanceolata com parnquima lacunoso de 15-17 estratos com reduzidos espaos intercelulares e epiderme
em face abaxial (eb) com estmatos (st) evidenciando cmara subestomtica.
57
Fig. 12. Seces transversais da lmina foliar VII, evidenciando epiderme em face adaxial (ed) e abaxial (eb) com
presena de estmato (st), hipoderme (hp), parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia marizii
com muitos espaos intercelulares no parnquima lacunoso de 15-17 estratos, presena de feixe vascular (fv) com
bainha parenquimtica e ductos secretores (*). B: Clusia spiritu-sanctensis com parnquima lacunoso de 25-27
estratos celulares, com reduzidos espaos intercelulares e ducto secretor (*), epiderme em face abaxial com
estmato com cmara subestomtica. C: Clusia fluminensis com a maior quantidade de camadas celulares no
parnquima lacunoso (30) e ducto secretor (*). D: Clusia aemygdioi com estmato com cmara subestomtica e
cristas. E: Clusia burchellii com discreta cmara subestomtica interrompendo parcialmente o tecido
esclerenquimtico (te) e presena de ducto secretor (*) no parnquima lacunoso. F: Clusia marizii com clulas
subsidirias maiores que as demais clulas epidrmicas e ducto secretor (*) no parnquima lacunoso.
58
Fig. 13. Amostras dissociadas da poro mediana das lminas foliares I. A: Escleredeo raquiforme de Clusia
burchellii. B: Astroescleredeos de Clusia burchellii. C: Escleredeo bifurcado de Clusia fluminensis. D:
Osteoescleredeo de Clusia nemorosa. E: Escleredeo colunar de Clusia criuva. F: Clulas alongadas do
parnquima palidico de Clusia arrudae. G: Clulas braciformes do parnquima lacunoso de Clusia intermedia. H:
Clulas parenquimticas isodiamtricas contendo drusas no interior, de Clusia lanceolata.
59
Fig. 14. Seces transversias dos feixes vasculares (fv) presentes no parnquima lacunoso (pl). A: Clusia gardneri
apresentando nervura de pequeno porte com feixes vascular envolto por bainha parenquimtica e nervura de mdio
porte com feixe vascular envolto por bainha esclerenquimtica e calota esclerenquimtica na regio do floema. B:
Clusia arrudae apresentando feixe vascular composto por apenas elementos do xilema. C: Clusia criuva
apresentando feixe vascular envolto por bainha parenquimtica contendo cloroplastos no interior das clulas.
60
Fig. 15. Amostras dissociadas da poro mediana das lminas foliares II. A: Elemento de vaso de Clusia gardneri.
B: Espessamento helicoidal do elemento de vaso de Clusia gardneri. C: Espessamento reticulado do elemento de
vaso de Clusia burchellii. D: Traquedeos de Clusia burchellii. E: Fibra libriforme de Clusia hilariana.
61
Fig. 16. Seces transversais na regio da nervura principal I, evidenciando epideme em sua face adaxial (ed) e
abaxial (eb), hipoderme (hp), parnquima palidico (pp), clornquima (cl), parnquima de clulas isodiamtricas (pi)
e colnquima angular (co). A: Clusia fluminensis com nervura principal indiferenciada do restante da lmina e
parnquima palidico interrompido por clulas retangulares de clornquima. B: Clusia lanceolata com nervura
principal indiferenciada do restante da lmina e parnquima palidico totalmente interrompido por clulas
isodiamtricas de clornquima. C: Clusia criuva com convexidade apenas para a face abaxial e parnquima
palidico parcialmente interrompido pelas clulas isodiamtricas do clornquima. D: Clusia gardneri com
convexidade apenas para a face abaxial e parnquima palidico totalmente interrompido pelas clulas
isodiamtricas do clornquima.
62
Fig. 17. Seces transversais na regio da nervura principal II, evidenciando epideme em sua face adaxial (ed) e
e colnquima angular (co). A: Clusia marizii com convexidade apenas para a face abaxial e parnquima palidico
parcialmente interrompido pelo clornquima de clulas isodiamtricas. B: Clusia parviflora com convexidade apenas
para a face abaxial e parnquima palidico totalmente interrompido pelas clulas retangulares do clornquima. C:
Clusia aemygdioi com nervura principal com convexidades semelhantes para ambas as faces e parnquima
palidico totalmente interrompido pelas clulas isodiamtricas do clornquima. D: Clusia arrudae com nervura
principal com convexidades para ambas as faces, mas com maior proeminncia para a abaxial e parnquima
palidico totalmente interrompido pelas clulas isodiamtricas do clornquima.
63
Fig. 18. Seces transversais na regio da nervura principal III, evidenciando epideme em sua face adaxial (ed) e
e colnquima angular (co). A: Clusia insignis com convexidades para ambas as faces, mas com maior proeminncia
para a abaxial e parnquima palidico totalmente interrompido pelelas clulas isodiamtricas do clornquima. B:
Clusia nemorosa com convexidades para ambas as faces, mas com maior proeminncia para a abaxial e
parnquima palidico totalmente interrompido pelas clulas isodiamtricas do clornquima. C: Clusia burchellii com
convexidade com projeo triangular para a face abaxial e parnquima palidico totalmente interrompido pelas
clulas isodiamtricas do clornquima. D: Clusia hilariana com convexidade com projeo triangular para a face
abaxial e parnquima palidico totalmente interrompido pelas clulas isodiamtricas do clornquima.
64
Fig. 19. Seces transversais na regio da nervura principal IV, evidenciando epideme em sua face adaxial (ed) e
e colnquima angular (co). A: Clusia spiritu-sanctensis com convexidade com projeo triangular para a face abaxial
e parnquima palidico totalmente interrompido pelas clulas retangulares do clornquima. B: Clusia intermedia,
folha masculina, com convexidade somente para a face abaxial e parnquima palidico interrompido pelas clulas
retangulares do clornquima. C: Clusia intermedia, folha feminina, com convexidades para ambas as faces, mas
com maior proeminncia para a face abaxial e parnquima palidico interrompido pelas clulas retangulares do
clornquima. D: Clusia insignis com epiderme em sua face adaxial com clulas comuns papilosas e flanges
cuticulares, alm de ductos secretores (*) na hipoderme.
65
Fig. 20. Seces transversais na regio da nervura principal V, evidenciando epideme em sua face adaxial (ed) e
abaxial (eb), hipoderme (hp), parnquima de clulas isodiamtricas (pi) e colnquima angular (co). A: Clusia
burchellii com cutcula espessa recobrindo a epiderme em sua face adaxial e tecido esclerenquimtico
subepidrmico (te). B: Clusia parviflora com epiderme em sua face abaxial recoberta por cutcula espessa com
flanges, alm de ductos secretores (*) na regio do parnquima. C: Clusia criuva com epiderme em sua face abaxial
recoberta por cutcula espessa com flanges, alm de ductos secretores (*) na regio do parnquima. D: Clusia
burchellii com epiderme em sua face abaxial recoberta por cutcula espessa com flanges, tecido esclerenquimtico
subepidrmico (te), alm de ductos secretores (*) na regio do colnquima angular e parnquima.
66
Fig. 21. Seces transversais na regio da nervura principal VI, evidenciando o cilindro vascular composto por fibras
do floema (fi), elementos do floema (flo), elementos de vaso (ev) e medula (md). A: Clusia nemorosa apresentando
cilindro vascular incompleto com feixes separados por clulas parenquimticas, medula parenquimtica composta
por clulas de parede delgada. B: Clusia burchellii com cilindro vascular totalmente envolto pelas fibras do floema,
medula parenquimtica composta por clulas de parede espessada desprovida de feixes vasculares internos. C:
Clusia gardneri com duas fileiras de feixes na medula parenquimtica. D: Clusia aemygdioi com somente uma fileira
de feixes vasculares na medula parenquimtica. E: Clusia burchellii apresentando incio de crescimento secundrio,
nota-se elemento do protoxilema obliterado (+) e presena de parnquima radial ().
67
Fig. 22. Testes histoqumicos I. A: Clusia gardneri em azul de metileno mostrando ausncia de celulose na cutcula
da face adaxial (cd). B: Clusia nemorosa em azul de metileno mostrando ausncia de celulose na cutcula da face
abaxial (cb). C: Clusia insignis em azul de metileno no evidenciando celulose nas fibras dos elementos condutores
(f). D: Clusia burchellii em reagente Steinmetz evidenciando compostos lipoflicos na cutcula da face adaxial (cd) e
no parnquima palidico (pp). E: Clusia nemorosa em sudan III evidenciando compostos lipoflicos na cutcula da
face adaxial (cd) e no parnquima palidico (pp). F: Clusia criuva em sudan IV evidenciando reao positiva para
compostos lipoflicos no tecido floemtico (fl) e elementos de vaso (ev).
68
Fig. 23. Testes histoqumicos II. A: Clusia gardneri em sudan IV, indicando compostos lipoflicos presentes no ltex
no interior dos ductos secretores. B: Clusia gardneri em sudan IV apresentando compostos lipoflicos presentes na
cutcula das faces adaxial (cd) e abaxial (cb) e no ltex nos parnquimas palidico (pp) e lacunoso (pl). C: Clusia
insignis com deteco de acares redutores na epiderme das faces adaxial (ed) e abaxial (eb) e nos parnquimas
palidico (pp) e lacunoso (pl). D: Clusia nemorosa com reao positiva para acares redutores nos elementos
condutores do floema (fl). E: Clusia gardneri com reao positiva para acares redutores na epiderme das faces
adaxial (ed) e abaxial (eb); nota-se a presena de cristais de oxalato de clcio na forma de drusas (d). F: Clusia
gardneri em maior aumento evidenciando a epiderme da face abaxial (eb).
69
Fig. 24. Testes histoqumicos III. A: Clusia fluminensis com reao positiva para acares redutores na epiderme da
face adaxial (ed). B: Clusia nemorosa em reagente de Steinmetz evidenciando gros de amido (am) na bainha
amilfera. C: Clusia insignis em cloreto de zinco iodado evidenciando gros de amido (am) no tecido parnquimtico
acima da epiderme da face abaxial na regio da nervura principal. D: Clusia gardneri em lugol evidenciando gros
de amido (am) no tecido parenquimtico circundante aos elementos condutores. E: Clusia nemorosa em dicromato
de potssio evidenciando compostos fenlicos na epiderme das faces adaxial (ed) e abaxial (eb) e nos tecidos
parenquimticos palidico (pp) e lacunoso (pl). F: Clusia insignis em dicromato de potssio em maior aumento
mostrando reao positiva para compostos fenlicos no tecido parenquimtico (tp) e epiderme da face abaxial (eb).
70
Fig. 25. Testes histoqumicos IV. A: Clusia criuva em sulfato ferroso com formalina evidenciando reao positiva
para compostos fenlicos no tecido floemtico (fl). B: Clusia insignis em sulfato de ferro. C: Clusia criuva em cloreto
de zinco iodado evidenciando lignina nas fibras (f) e elementos de vaso (ev). D: Clusia lanceolata em sulfato de
anilina evidenciando lignina nas fibras (f) e elementos de vaso (ev).
71
Fig. 26. Testes histoqumicos V. A: Clusia insignis em floroglucinol clordrico apresentando reao positiva para
lignina nas fibras (f) e elementos de vaso (ev). B: Clusia burchellii em floroglucinol clordrico evidenciando lignina no
tecido esclerenquimtico (te). C: Clusia insignis em vermelho de rutnio evidenciando ausncia de pectina na
cutcula da face adaxial (cd). D: Clusia criva em vermelho de rutnio evidenciando ausncia de pectina nas fibras (f).
72
CAPTULO 2 - CARACTERIZAO EPIDRMICA DA LMINA

FOLIAR DE ESPCIES DE CLUSIA (CLUSIACEAE)
RESUMO: A face adaxial da epiderme, em vista frontal, dotada apenas de clulas
epidrmicas comuns, de forma e tamanho variveis, dispostas irregularmente, de modo
geral so poligonais, tendo de 4-6 lados, mais freqentemente 5, e suas paredes so
retas e espessas. As clulas epidrmicas comuns da face abaxial so um pouco
menores, com paredes menos espessas. As espcies estudadas so hipoestomticas,
ocorrendo estmatos do tipo paractico com clulas-guarda reniformes, apresentando
distribuio irregular, densidades distintas e formas que variam de circular a elptica. As
clulas epidrmicas comuns adjacentes ao aparelho estomtico apresentam arranjo
radial em torno do mesmo, e suas paredes so delgadas e levemente curvas. Podem
ocorrer estmatos geminados. A densidade inversamente proporcional ao
comprimento estomtico, independente da espcie ou da condio ambiental na qual
se encontra. Os padres de deposio das ceras epicuticulares so distintos entre as
espcies, Ambas as superfcies apresentaram o mesmo padro de deposio de ceras
epicuticulares, sendo classificadas como camadas fissuradas, crostas ou grnulos,
diferindo tambm no volume, salincia e posio dos depsitos de ceras. Fibrilas nas
paredes das clulas subsidirias foram observadas em C. aemygdioi, C. arrudae, C.
criuva e C. hilariana, em todas essas espcies a disposio das fibrilas radial em
relao ao ostolo. O espessamento e a ornamentao das paredes das clulas
subsidirias variam de acordo com a espcie, C. burchellii, C. fluminensis e C. spiritusanctensis so desprovidas de espessamento; C. insignis, C. marizii e C. nemorosa
apresentam espessamento, mas sem ornamentao; presena de espessamento com
leve ornamentao ocorre em C. intermedia, C. lanceolata e C. parviflora; as espcies
com mdia a muita ornamentao so C. aemygdioi, C. arrudae, C. criuva, C. gardneri
e C. hilariana. As clulas-guarda podem apresentar espessamento nas paredes
ventrais em contato com o ostolo, isto ocorre em C. aemygdioi, C. arrudae, C.
fluminensis, C. gardneri, C. hilariana, C. insignis, C. intermedia, C. lanceolata, C.
parviflora e C. spiritu-sanctensis. As caractersticas observadas em ambas as
superfcies podem ser utilizadas para a distino das espcies em estgio vegetativo.
Palavras-chave: cera epicuticular, densidade estomtica, Guttiferae, micromorfologia.
Agradecimentos: Ao Laboratrio de Produtos Florestais IBAMA (Braslia - DF) pela
utilizao do programa Image Pro-Plus e ao Laboratrio de Microscopia Eletrnica da
UnB pelo apoio material e tcnico.
73
Introduo
Jones (1998) afirma que os estmatos foram evolutivamente selecionados para
promover meios de controle da perda hdrica e das trocas gasosas, auxiliando no
controle tanto da transpirao como da fotossntese.
As caractersticas dos estmatos podem ser vistas sob diferentes perspectivas,
e serem utilizadas em estudos de ecologia, evoluo, fisiologia, morfologia e
taxonomia. A funo dessas clulas especializadas e, provavelmente a sua
distribuio, tem papel importante na evoluo e conquista terrestre das plantas
(Croxdale, 2000).
A folha um dos rgos que melhor reflete as variaes estruturais tanto de
origem gentica como ambiental. Apesar da uniformidade anatmica deste rgo ser
grande entre as espcies de Clusia, muitas de suas caractersticas internas so
utilizadas para a diferenciao das espcies (Solereder, 1908). A anlise microscpica
da superfcie da lmina foliar pode ser mais uma ferramenta na determinao das
diferentes espcies do gnero Clusia de maneira mais precisa que somente a utilizao
dos caracteres morfolgicos externos. Segundo Medina et al. (2004), a folha representa
mais um parmetro que pode ser utilizado tanto na taxonomia das espcies como no
entendimento sobre mecanismos de adaptao ao ambiente.
Neste trabalho foram estudadas 14 espcies do gnero, coletadas em
afloramento rochoso na Mata Atlntica (Clusia aemygdioi, C. arrudae, C. intermedia, C.
marizii e C.spiritu-sanctensis), na Restinga (C. fluminensis, C. hilariana, C. lanceolata e
C. parviflora), em mata de galeria no Cerrado (C. burchellii, C. criuva, C. gardneri e C.
nemorosa) e na Floresta Amaznica (C. insignis), sendo que um dos objetivos
relacionar as dimenses lineares e a rea do estmato com as respectivas densidades.
Um segundo objetivo deste trabalho apresentar uma caracterizao mais
precisa das estruturas da superfcie foliar com o uso da microscopia eletrnica de
varredura, visando uma melhor anlise dos aparelhos estomticos e, tambm a
compreenso dos padres diferenciados de deposio de ceras.
74
Material e Mtodos
A epiderme da regio mediana das folhas das 14 espcies analisadas foi obtida
com soluo de Franklin (1946 - apud Kraus & Arduin, 1997) em estufa 40C em um
perodo de 24h-48h at a separao da mesma, a retirada do restante do mesofilo foi
feita sob lupa com auxlio de pincel fino.
Os fragmentos de epiderme foram corados com azul de metileno 1% aquoso e
brax (Langeron, 1949) por 5min, desidratadas em srie etlica, diafanizadas em
acetato de butila e montadas entre lmina e lamnula em resina sinttica (Paiva et al.,
2006). Para verificar possveis alteraes nas dimenses celulares devido ao preparo
das lminas, foram feitas comparaes com segmentos paradrmicos feitos mo livre
e sem qualquer tratamento.
Para cada uma das cinco folhas de cada espcie, foram escolhidos,
aleatoriamente, cinco campos de 1mm2 de rea. Para cada campo fez-se a
quantificao dos estmatos para a obteno da densidade estomtica e escolheu-se,
tambm aleatoriamente, um estmato para a medio de seus comprimento e largura
mximos (ostolo aberto), totalizando 25 medidas para cada espcie.
A partir das medies feitas, obteve-se a razo comprimento/largura e a rea do
estmato, considerando-o como uma elipse (rea = * comprimento* * largura * ).
As variveis densidade estomtica, comprimento, largura e rea foram submetidas
transformao logartmica para alcanar a normalidade e mesma magnitude dos
dados, essa transformao no foi necessria para a varivel comprimento/largura.
As medies de comprimento e largura mximos do estmato, bem como a
quantificao por unidade de rea foram realizadas com auxlio do programa de anlise
de imagens IMAGE-PROPLUS do Laboratrio de Produtos Florestais, IBAMA
(Braslia-DF).
As anlises estatsticas foram realizadas com o programa R: A Language and
Environment for Statistical Computing (2006). Os resultados foram considerados
significativos a nvel de 5%. A anlise de varincia (ANOVA) hierrquica foi utilizada em
todas as variveis para verificar onde ocorre maior variao dentro ou entre as
espcies. A hiptese nula testada foi: no existe diferena nas dimenses e
densidades estomticas entre as espcies estudadas. Tambm foram feitas anlises
75
de Regresso Linear isoladas tendo a densidade estomtica como varivel dependente

e o restante das variveis como independentes.
A anlise de microscopia eletrnica de varredura foi feita para todas as espcies,
mas para as espcies que foram enviadas fixadas e preservadas em etanol no foi
possvel a visualizao dos depsitos de ceras epicuticulares. A fixao especfica foi
feita com soluo fixadora Karnovsky (Bozzola & Russel, 1992) modificada (2%
glutaraldedo e 2% paraformaldedo em tampo cacodilato de sdio pH 7,2 a 0,05M)
por 12h, e ps-fixao em tetrxido de smio 1% no mesmo tampo por 1h.
Os tecidos fixados foram desidratados em srie etlica crescente at a saturao
(etanol 100%), secos ao ponto crtico (Balzers CPD 30), montados em porta espcimen
e cobertos com ouro (Balzers SCD 050). O exame do material foi feito em microscpio
eletrnico de varredura JEOL JEM 840A a 10 KV. As fotografias foram feitas em
mquina digital a partir do monitor do microscpio e a classificao e terminologia
foram feitas de acordo com Barthlott et al. (1998).
Para verificar possveis deformaes do material devido fixao e
desidratao, algumas amostras foram simplesmente secas ao ar, montadas, cobertas
com ouro e examinadas.
Resultados - Estudos Paradrmicos

A face adaxial da epiderme, em vista frontal, dotada apenas de clulas
epidrmicas comuns, de forma e tamanho variveis, dispostas irregularmente. De
modo geral so poligonais, tendo de 4-6 lados, mais freqentemente 5 e suas paredes
so retas e espessas (Fig. 27a). As clulas epidrmicas comuns da face abaxial so
semelhantes quelas da face adaxial, embora um pouco menores, com paredes
igualmente retas e menos espessas (Figs. 27-30).
Todas as espcies estudadas so hipoestomticas, ocorrendo estmatos do tipo
paractico com clulas-guarda reniformes (Figs. 27b, 27c, 27d-30), esta classificao
seguiu Van Cotthem (1970), que reformulou a antiga classificao feita por Vesque
(1893, apud Schneider, 1985), na qual os estmatos eram considerados rubiceos.
No foram encontradas diferenas significativas entre as amostras desidratadas e
diafanizadas com aquelas retiradas mo livre e sem qualquer tratamento.
76
As clulas epidrmicas comuns adjacentes ao aparelho estomtico apresentam

arranjo radial em torno do mesmo, e suas paredes so delgadas e levemente curvas
(Figs. 27b, 27c, 27d-30), em C. burchellii (Fig. 27d) essas clulas apresentam forma
retangular. Os estmatos possuem distribuio irregular e formas que variam de
circular a elptica (Figs. 27b, 27c, 27d-30), podem ocorrer estmatos geminados (Fig.
28a).
As clulas-guarda podem apresentar espessamento nas paredes ventrais em
contato com o ostolo, isto ocorre em C. aemygdioi (Fig. 27b), C. arrudae (Fig. 27c), C.
fluminensis (Fig. 28b), C. gardneri (Fig. 28c), C. hilariana (Fig. 28d), C. insignis (Fig.
29a), C. intermedia (Fig. 29b), C. lanceolata (Fig. 29c), C. parviflora (Fig. 30b) e C.
spiritu-sanctensis (Fig. 30c).
Uma outra caracterstica distinta entre as espcies a presena de
ornamentao nas paredes das clulas subsidirias, sendo mais proeminente em C.
aemygdioi (Fig. 27b). Esta ornamentao no ocorre em: C. burchellii (Fig. 27d), C.
fluminensis (Fig. 28b), C. insignis (Fig. 29a), C. marizii (Fig. 29d), C. nemorosa (Fig.
30a) e C. spiritu-sanctensis (Fig. 30c).
Com base na razo comprimento/largura (Tab. 9), foram calculados 3 intervalos
para a classificao das formas dos estmatos: 1,09 1,75 (circular), 1,76 2,41
(intermedirio) e 2,42 3,07 (elptico). A maioria das espcies possui estmatos
circulares: C. aemygdioi (Fig. 27b), C. burchellii (Fig. 27d), C. fluminensis (Fig. 28b), C.
gardneri (Fig. 28c), C. insignis (Fig. 29a), C. lanceolata (Fig. 29c), C. nemorosa (Fig.
30a) e C. parviflora (Fig. 30b). As espcies com forma intermediria so: C. arrudae
(Fig. 27c), C. intermedia (Fig. 29b) e C. marizii (Fig. 29d). As espcies com estmatos
elpticos so: C. criuva (Fig. 28a), C. hilariana (Fig. 28d) e C. spiritu-sanctensis (Fig.
30d).
O intervalo de comprimento 10,901,21m 33,782,28m (Tab. 9), sendo os
estmatos mais curtos presentes em C. burchellii (Fig. 27d) e os mais alongados em C.
hilariana (Fig. 28d); em relao largura, o intervalo de 9,141,03m
21,672,85m (Tab. 9), C. spiritu-sanctensis (Fig. 30c) apresenta os estmatos mais
estreitos e C. nemorosa (Fig. 30a) os mais largos.
A rea estomtica varia entre as espcies (Tab. 9), C. burchellii (Fig. 27d)
apresenta a menor rea 86,8717,58m2, e C. nemorosa (Fig. 30a), a maior rea
77
475,63106,23m2. As densidades tambm so distintas entre as espcies (Tab. 9), C.

spiritu-sanctensis (Fig. 30c) possui a menor concentrao de estmatos por unidade de
rea 105,7510,0 estmatos/mm2, e C. criuva (Fig. 28a) a maior concentrao
233,5628,62 estmatos/mm2.
Tab. 9. Mdias e desvios-padres de comprimento e largura (m), razo
comprimento/largura, rea (m2) e densidade (estmatos/mm2) das espcies
estudadas.
Espcie
Comprimento
Largura
Comprimento/Largura
rea
Densidade
Forma
Clusia aemygdioi
16,551,26
10,731,33
1,560,17
140,0623,46
200,4612,41
circular
Clusia arrudae
17,821,44
10,372,21
1,790,38
146,2838,44
137,0115,51
intermediria
Clusia burchellii
10,901,21
10,081,20
1,090,12
86,8717,58
195,8611,72
circular
Clusia criuva
26,882,75
9,830,75
2,740,24
208,3932,78
233,5628,62
elptica
Clusia fluminensis
22,381,61
18,191,42
1,230,11
320,1938,61
205,0615,75
circular
Clusia gardneri
21,732,11
15,961,61
1,370,14
273,8247,71
143,9114,48
circular
Clusia hilariana
33,782,28
11,081,19
3,070,37
294,7444,74
146,2113,10
elptica
Clusia insignis
16,281,23
12,481,27
1,380,18
159,5719,34
225,7520,46
circular
Clusia intermdia
25,292,13
11,351,21
2,240,21
226,6239,35
222,5313,68
intermediria
Clusia lanceolata
25,232,97
18,292,28
1,380,10
366,5481,59
166,4412,87
circular
Clusia marizii
31,214,00
15,012,65
2,100,22
374,39109,46
146,6723,34
intermediria
Clusia nemorosa
27,662,81
21,672,85
1,280,09
475,63106,23
218,8514,25
circular
Clusia parviflora
17,592,44
11,421,63
1,550,15
160,1640,70
215,6318,50
circular
Clusia spiritu-sanctensis
25,072,66
9,141,03
2,760,27
181,2335,01
105,7510,00
elptica
Como a variao dos dados entre as espcies foi maior que dentro de cada
espcie, foi possvel realizar as anlises de Regresso para todas as variveis
(P<2,2*10-16).
A regresso linear entre densidade (d) e comprimento (c) estomticos (Graf. 1)
mostrou-se significativa (P=3,52*10-6) e inversamente proporcional.
A regresso linear entre densidade e largura (L) estomticas (Graf. 2) mostrouse significativa (P=0,02) e diretamente proporcional.
A regresso linear entre densidade e razo comprimento/largura (Graf. 3)
tambm foi significativa (P=2,64*10-10) e inversamente proporcional.
A regresso linear entre densidade e rea estomticas no foi significativa
(P=0,14).
78
1.1
0.9
1.0
densidade
1.2
1.3
Graf. 1. Regresso linear entre comprimento (m) e densidade

(estmatos/mm2) dos estmatos. As variveis esto log-transformadas, sendo r2 de
0,76, e a equao d = -0,19c + 1,46.
1.0
1.1
1.2
1.3
1.4
1.5
1.6
comprimento
1.2
1.1
1.0
0.9
0.8
densidade
1.3
1.4
Graf. 2. Regresso linear entre largura (m) e densidade (estmatos/mm2) dos

estmatos. As variveis esto log-transformadas, sendo r2 de 0,64, e a equao d =
0,1L + 1,07.
0.9
1.0
1.1
1.2
1.3
largura
79
2.5
2.0
1.0
1.5
densidade
3.0
3.5
Graf. 3. Regresso linear entre comprimento/largura e densidade

(estmatos/mm2) dos estmatos. A varivel densidade est log-transformada, sendo
r2 de 0,81, e a equao d = -0,06c/L + 1,29.
0.9
1.0
1.1
1.2
1.3
comprimento/largura
Resultados - Micromorfologia
Na anlise em microscopia eletrnica de varredura (Figs. 31-35) foram
observados os detalhes no aparelho estomtico e os padres de deposio das ceras
epicuticulares. No foram encontradas diferenas estruturais entre as amostras fixadas
e desidratadas e aquelas simplesmente secas ao ar.
Ambas as superfcies apresentaram o mesmo padro de deposio de ceras
epicuticulares, sendo classificadas como camadas fissuradas, crostas ou grnulos;
para cada tipo tambm foram analisados volume, salincia e posio dos depsitos de
ceras.
O tipo camada fissurada s foi observado em C. lanceolata (Fig. 33a).
Clusia aemygdioi (Fig. 31a) apresenta crosta levemente plana, C. fluminensis
(Fig. 31d) e C. nemorosa (Fig. 33b) possuem crostas planas; C. hilariana (Fig. 32b) tem
crostas salientes e C. intermedia (Fig. 32d) apresenta crostas homogneas em ondas.
O tipo de deposio em grnulos isodiamtricos foi predominante nas espcies
oriundas do Cerrado, ocorrendo tambm em C. insignis (Fig. 32c), a qual proveniente
da Floresta Amaznica. Clusia burchellii (Fig. 31b) e C. criuva (Fig. 31c) apresentam
80
grnulos com volumes maiores e, C. gardneri (Fig. 32a) e C. insignis (Fig. 32c)
possuem grnulos com volumes menores.
As formas dos aparelhos estomticos confirmaram os dados encontrados nos
estudos paradrmicos, variando de circular a elptica. As principais diferenas entre as
espcies foram: espessamento das paredes e ornamentao das fibrilas celulsicas
das clulas subsidirias, e o espessamento das paredes das clulas-guarda. Quando
observadas, as fibrilas celulsicas das paredes das clulas subsidirias tm disposio
radial em relao ao ostolo.
As espcies cujas paredes das clulas subsidirias so desprovidas de
espessamento so C. burchellii (Fig. 33e), C. fluminensis (Fig. 34b) e C. spiritusanctensis (Fig. 35e).
As espcies que apresentam espessamento, mas sem
ornamentao so C. insignis (Fig. 34e), C. marizii (Fig. 35b) e C. nemorosa (Fig. 35c),
sendo o espessamento mais proeminente em C. insignis (Fig. 34e) e C. nemorosa (Fig.
35c). Presena de espessamento com leve ornamentao em C. intermedia (Fig. 34f),
C. lanceolata (Fig. 35a) e C. parviflora (Fig. 35d). As espcies com mdia a muita
ornamentao so C. aemygdioi (Fig. 33c), C. arrudae (Fig. 33d), C. criuva (Fig. 34a),
C. gardneri (Fig. 34c) e C. hilariana (Fig. 34d).
O espessamento das paredes ventrais (em contato com o ostolo) das clulasguarda, visualizado em microscopia de luz, foi confirmado para todas as espcies
citadas anteriormente, sendo mais destacado em C. fluminensis (Fig. 34b), C. gardneri
(Fig. 34c) e C. lanceolata (Fig. 35a).
81
As caractersticas das ceras epicuticulares e dos aparelhos estomticos so

diferenciadas entre as espcies estudadas, desta maneira foi possvel a confeco da
seguinte chave.
1- Clulas subsidirias com espessamento nas paredes....................................................................2
1- Clulas subsidirias sem espessamento nas paredes.....................................................................6
2- Ornamentao nas paredes das clulas subsidirias.....................................................................3
2- Ausncia de ornamentao nas paredes das clulas subsidirias...................................................5
3- Depsito de cera em crostas planas............................................................................C. aemygdioi
3- Depsito de cera em crostas salientes.............................................................................C. hilariana
3- Depsito de cera em crostas em ondas........................................................................C. intermedia
3- Depsito de cera em camada fissurada.......................................................................C. lanceolata
3- Depsito de cera em grnulos........................................................................................................4
4- Estmatos circulares...........................................................................................................C.gardneri
4- Estmatos elpticos................................................................................................................C.criuva
5- Depsito de cera em crostas planas...............................................................................C. nemorosa
5- Depsito de cera em grnulos............................................................................................C. insignis
6- Depsito de cera em crostas planas.............................................................................C. fluminensis
6- Depsito de cera em grnulos..........................................................................................C. burchellii
Discusso e Concluso
Vesque (1893) no aceitou a possibilidade de atribuir valor taxonmico aos tipos
de estmatos, j que tipos idnticos podem ocorrer em famlias bastante distintas. No
entanto, medida que aumenta a quantidade de dados referentes a estmatos, mais
autores se convencem do valor taxonmico dos mesmos (Van Cotthem, 1970).
Confirmando resultados de Solereder (1908) e Metcalfe & Chalk (1983), neste
gnero ocorrem estmatos somente na face abaxial da folha, apresentando arranjo
paractico, sendo que o primeiro autor faz referncias a determinadas caractersticas do
aparelho estomtico, como posio das clulas subsidirias em relao s clulasguarda e ornamentao nas paredes de ambos os tipos celulares, que podem servir
para fins taxonmicos.
Dunn et al. (1965) consideraram o tamanho dos estmatos nas dicotiledneas
um carter pobre ou inconsistente, devido s variaes nas dimenses provocadas
pelo ambiente. No entanto, nesta anlise a variao das dimenses e densidade
82
estomticas foram distintas entre as espcies, independentemente se pertenciam ao

mesmo ambiente, o que mostra uma maior importncia da influncia filogentica que
do ambiente, sendo possvel inclusive a separao das espcies pela presena e tipo
de ornamentao nas paredes das clulas subsidirias, e presena de espessamento
nas paredes ventrais das clulas-guarda.
Com os resultados obtidos, as variaes nas dimenses e densidade
estomticas foram maiores entre as espcies que dentro de uma mesma espcie,
favorecendo, portanto a maior influncia filogentica sobre a ambiental. Entretanto,
Stace (1965) avaliou a influncia dos fatores ambientais sobre a freqncia estomtica
no gnero Combretum, e enfatizou que essa influncia mais relevante do que a
filognese. O mesmo autor chama a ateno para a variabilidade no tamanho dos
estmatos, o que considera um carter de relativa importncia e de valor sistemtico.
No foi detectada diferena significativa entre a densidade estomtica de ambos
os sexos nas espcies estudadas, provavelmente porque as coletas foram realizadas
durante o perodo de florao simultnea entre eles. No entanto, Machado (1980)
observou que a freqncia de estmatos por mm2 em Clusia lanceolata Cambess.
maior nos indivduos femininos que nos masculinos. A autora levanta a hiptese de que
tal circunstncia esteja relacionada ao maior dispndio de energia pelos indivduos
femininos na fase de formao dos frutos.
A regresso linear entre densidade e comprimento estomticos mostrou-se
significativa e inversamente proporcional, este resultado sugere um mecanismo de
compensao, o que verificado nitidamente em C. insignis e C. lanceolata; e tambm
comprovado, inversamente, em C. hilariana, C. marizii e C. spiritu-sanctensis que
possuem maiores comprimentos e baixas densidades, confirmando dados de
Muenscher (1915), que afirmou que plantas com baixa densidade estomtica
geralmente possuem estmatos grandes, e aquelas com alta densidade possuem
estmatos pequenos. Eckerson (1908), tambm relata uma relao inversamente
proporcional entre quantidade e comprimento dos estmatos.
A regresso linear entre densidade e largura estomticas mostrou-se
significativa e diretamente proporcional. Enquanto que a regresso linear entre
densidade e razo comprimento/largura tambm foi significativa, mas inversamente
proporcional. Nas espcies estudadas, geralmente quanto maior a largura, o estmato
83
mostra-se mais circular, como ocorre em C. nemorosa, e inversamente em C. criuva e

C. spiritu-sanctensis, que possuem estmatos mais estreitos e elpticos. Os dados
referentes razo comprimento/largura confirmam aqueles obtidos nas regresses
anteriores e acrescentam que quanto mais circular for o estmato, maior ser sua
densidade, o que comprovado em C. aemygdioi, C. burchellii, C. insignis, C.
nemorosa e C. parviflora, e inversamente em C. spiritu-sanctensis que possui
estmatos elpticos e em menor densidade.
A regresso linear entre densidade e rea estomticas no foi significativa
(P=0,14), portanto a variao da densidade por rea no significativamente diferente
da variao aleatria. Segundo Eckerson (1908), a passagem de gases pelo estmato
dependente do comprimento, e no da rea dessas estruturas, o que corrobora o
resultado aqui obtido.
Com base nos resultados obtidos, possvel estabelecer relaes entre as
dimenses lineares do estmato (comprimento e largura) com as respectivas
densidades, independente da espcie ou da condio ambiental na qual se encontra.
A evoluo das tcnicas de preparao de material biolgico e o advento da
microscopia eletrnica permitiram a observao e anlise dos tecidos e clulas com
diferentes capacidades de resoluo (Souza, 1998). Os caracteres observados atravs
da microscopia eletrnica de varredura so denominados micromorfolgicos (Judd et
al., 1999).
A escolha do fixador tetrxido de smio, apesar de sua alta toxidade, foi devido
preservao de estruturas celulares, pois penetra nos tecidos de maneira
extremamente lenta, mas reage bastante rpido, promovendo uma fixao uniforme,
portanto um dos melhores fixadores para a tcnica (Feder & OBrien, 1968).
A presena ou ausncia das fibrilas da parede das clulas subsidirias pode ser
utilizada para a distino entre as espcies estudadas. Sack & Paolillo, Jr. (1983)
afirmaram que a maioria das plantas com clulas-guarda com forma reniforme
apresenta fibrilas da parede celular orientadas radialmente em relao ao ostolo,
sendo que essas fibrilas nem sempre esto presentes.
Estudos da micromorfologia foliar possibilitam a visualizao das esculturas
cerosas nas superfcies foliares com adaptaes ao ambiente fsico, auxiliando plantas
com alta velocidade de transpirao na reflexo da luz e na impermeabilizao da
84
epiderme tanto para reduzir as perdas de gua quanto para auxiliar na defesa contra
infeco por fungos (Salatino et al., 1986).
O tipo camada fissurada s foi observado em C. lanceolata. Segundo Barthlott et
al. (1998), tais fissuras podem ser resultantes da quebra das camadas de cera pela
expanso da superfcie epidrmica durante o crescimento do vegetal, o que leva
produo de ceras em taxas diferenciadas.
A maioria das espcies possui deposio de ceras em crostas, como Clusia
aemygdioi que apresenta crosta levemente plana, C. fluminensis e C. nemorosa com
crostas planas; C. hilariana tem crostas salientes e C. intermedia apresenta crostas
homogneas em ondas. Barthlott (1998) considera a deposio de ceras em crostas o
tipo caracterstico de plantas com folhas carnosas.
A deposio em grnulos isodiamtricos foi predominante nas espcies oriundas
do Cerrado, ocorrendo tambm em C. insignis. Clusia burchellii e C. criuva apresentam
grnulos com volumes maiores e, C. gardneri e C. insignis possuem grnulos com
volumes menores.
Por manter contato direto com o ambiente, a epiderme est sujeita a
modificaes estruturais em decorrncia de vrios fatores ambientais (Cutter, 1986a,
1986b). Medina et al. (2004) afirmam que a anlise das ceras pode levar ao
entendimento sobre mecanismos de adaptao ao ambiente. No entanto, no foram
encontrados padres de ceras ou aparelhos estomticos tpicos entre as espcies
oriundas de um mesmo ambiente; ao contrrio, foram evidenciadas caractersticas
bastante divergentes em C. criuva e C. nemorosa, ambas oriundas de matas de galeria
do Cerrado.
De acordo com Barthlott et al. (1998), as ceras que cobrem a cutcula foliar
possuem grande diversidade qumica e ultraestrutural, sendo que a maioria possui
significado taxonmico, alm de apresentar importncia ecolgica na interao entre
plantas e o ambiente. Medina et al. (2004) indicaram caractersticas da deposio das
ceras epicuticulares teis na taxonomia de algumas espcies do gnero Clusia, o que
tambm foi observado neste trabalho.
Denton (1994) concluiu que as anlises das ceras epicuticulares so
ferramentas teis para a distino entre as espcies de Crassulaceae estudadas pela
autora. Yang & Lin (2005) elaboraram uma chave taxonmica com base na anatomia e
85
micromorfologia da epiderme foliar das espcies de Schisandra, afirmaram que as

caractersticas da epiderme so constantes, no apresentando variaes significaticas
entre populaes da mesma espcie.
Neste trabalho, foi verificado que as caractersticas das ceras so diferenciadas
entre as espcies, assim como os aparelhos estomticos. Desta maneira foi possvel a
separao das espcies de acordo com essas caractersticas, proporcionando mais um
parmetro a ser utilizado na distino entre as espcies do gnero Clusia.
86
Fig. 27. Amostras paradrmicas evidenciando as clulas epidrmicas comuns (ec) e o arranjo paractico e a
distribuio irregular dos estmatos (st). A: Superfcie adaxial de Clusia parviflora apresentando somente clulas
epidrmicas comuns poligonais e dispostas irregularmente. B: Superfcie abaxial de Clusia aemygdioi com
estmatos circulares com espessamento nas paredes ventrais das clulas-guarda () e ornamentao nas clulas
subsidirias (). C: Clusia arrudae com estmatos intermedirios com espessamento nas paredes ventrais das
clulas-guarda (). D: Clusia burchellii com estmatos tipicamente circulares e com a menor rea entre as
espcies, notam-se clulas comuns retangulares ao redor do aparelho estomtico.
87
Fig. 28. Amostras paradrmicas da superfcie abaxial I, evidenciando o arranjo paractico e a distribuio irregular
dos estmatos (st). A: Clusia criuva com estmatos elpticos e com a maior densidade entre as espcies, presena
de estmatos geminados (). B: Clusia fluminensis com estmatos circulares com espessamento nas paredes
ventrais das clulas-guarda () . C: Clusia gardneri com estmatos circulares com espessamento nas paredes
ventrais das clulas-guarda (). D: Clusia hilariana com estmatos elpticos, bastante alongados e com
espessamento nas paredes ventrais das clulas-guarda ().
88
Fig. 29. Amostras paradrmicas da superfcie abaxial II, evidenciando o arranjo paractico e a distribuio irregular
dos estmatos (st). A: Clusia insignis com estmatos circulares com espessamento nas paredes ventrais das
clulas-guarda (). B: Clusia intermedia com estmatos de forma intermediria com espessamento nas paredes
ventrais das clulas-guarda (). C: Clusia lanceolata com estmatos circulares. D: Clusia marizii com estmatos de
forma intermediria.
89
Fig. 30. Amostras paradrmicas da superfcie abaxial III, evidenciando o arranjo paractico e a distribuio irregular
dos estmatos (st). A: Clusia nemorosa com estmatos circulares e com a maior rea entre as espcies. B: Clusia
parviflora com estmatos circulares e com espessamento nas paredes ventrais das clulas-guarda (). C: Clusia
spiritu-sanctensis com estmatos elpticos, com a menor densidade entre as espcies e com espessamento nas
paredes ventrais das clulas-guarda ().
90
Fig. 31. Micromorfologia da superfcie adaxial I, evidenciando o padro de deposio das ceras epicuticulares. A:
Clusia aemygdioi com crostas levemente planas. B: Clusia burchellii com grnulos volumosos. C: Clusia criuva com
grnulos volumosos. D: Clusia fluminensis com crostas planas.
91
Fig. 32. Micromorfologia da superfcie adaxial II, evidenciando o padro de deposio das ceras epicuticulares. A:
Clusia gardneri com grnulos com volumes menores. B: Clusia hilariana com crosta saliente. C: Clusia insignis com
grnulos com volumes menores. D: Clusia intermedia com crosta homognea em ondas.
92
Fig. 33. Micromorfologia de ambas as superfcies, evidenciando na superfcie abaxial as clulas-guarda (cg) e
subsidirias (cs). A: Clusia lanceolata com deposio de ceras em camadas fissuradas. B: Clusia nemorosa com
deposio de ceras em crostas planas. C: Clusia aemygdioi com clulas subsidirias com muita ornamentao. D:
Clusia arrudae com clulas subsidirias com paredes espessadas e ornamentao mdia. E: Clusia burchellii
desprovida espessamento nas paredes das clulas subsidirias.
93
Fig. 34. Micromorfologia da superfcie abaxial I, evidenciando as clulas-guarda (cg) e subsidirias (cs). A: Clusia
criuva com espessamento nas paredes das clulas subsidirias com muita ornamentao. B: Clusia fluminensis
desprovida de espessamento nas paredes das clulas subsidirias, mas apresentando espessamento nas paredes
ventrais () das clulas-guarda. C: Clusia gardneri com espessamento nas paredes das clulas subsidirias com
ornamentao mdia, e espessamento nas paredes ventrais () das clulas-guarda. D: Clusia hilariana com
espessamento nas paredes das clulas subsidirias com ornamentao mdia. E: Clusia insignis com denso
espessamento nas paredes das clulas subsidirias sem ornamentao. F: Clusia intermedia com leve
espessamento nas paredes das clulas subsidirias com pouca ornamentao.
94
Fig. 35. Micromorfologia da superfcie abaxial II, evidenciando as clulas-guarda (cg) e subsidirias (cs). A: Clusia
lanceolata com leve espessamento nas paredes das clulas subsidirias com pouca ornamentao, e
espessamento nas paredes ventrais () das clulas-guarda. B: Clusia marizii com espessamento nas paredes das
clulas subsidirias sem ornamentao. C: Clusia nemorosa com denso espessamento nas paredes das clulas
subsidirias, mas sem ornamentao. D: Clusia parviflora com leve espessamento nas paredes das clulas
subsidirias com pouca ornamentao. E: Clusia spiritu-sanctensis desprovida de espessamento nas paredes das
clulas subsidirias.
95
CAPTULO 3 - TIPO DE METABOLISMO FOTOSSINTTICO E

SUA RELAO COM A ANATOMIA FOLIAR DE ESPCIES DE CLUSIA
(CLUSIACEAE)
RESUMO: O gnero Clusia caracterizado pela presena de espcies
exclusivamente C3, ou adaptadas a ambos os metabolismos C3/CAM, ou ainda CAM
exclusivas. Foi realizado um estudo comparativo entre 12 espcies do gnero, as
espcies cuja via fixadora de carbono apenas o ciclo de Calvin, plantas C3, so
Clusia nemorosa e C. parviflora; as espcies que apresentam metabolismo
intermedirio C3/CAM so C. aemygdioi, C. criuva, C. gardneri, C. intermedia, C.
lanceolata e C. marizii; as espcies com predomnio do metabolismo cido das
crassulceas so C. burchellii, C. fluminensis, C. hilariana e C. spiritu-sanctensis. O
objetivo deste estudo foi identificar variaes nas caractersticas anatmicas de acordo
com o tipo de metabolismo fotossinttico. Os tecidos presentes no mesofilo da lmina
foliar foram as principais estruturas influenciadas pelo metabolismo fotossinttico. O
mesofilo muito mais espesso nas espcies CAM, de espessura intermediria nas
espcies que realizam ambos os metabolismos e mais delgado nas espcies C3. No
entanto, a hipoderme apresenta-se mais espessa nas espcies C3 e intermedirias,
sendo que a espcie que possui maior quantidade de camadas celulares (5-6) neste
tecido C. parviflora, uma planta C3. Desta maneira, as clulas da hipoderme podem
no ser suficientes para evitar a perda dgua em condies ambientais extremas,
sendo necessria a presena de espessa cutcula, uma outra caracterstica dessas
espcies. Apesar da associao entre suculncia e CAM sugerir adaptaes a
ambientes ridos, Clusia tem uma ampla distribuio tropical, no estando restrita a
ambientes secos ou a hbito de epifitismo, o que leva a crer que todas as espcies
Clusia tm um certo potencial gentico a CAM.
Palavras-chave: estrutura foliar, fisiologia, Guttiferae, metabolismo C3 e CAM.
Agradecimentos: Ao Prof. Leonel da Silveira Lobo Sternberg (University of Miami)

pela determinao dos tipos de metabolismo fotossinttico e ao Laboratrio de
Produtos Florestais IBAMA (Braslia - DF) pela utilizao do programa Image ProPlus
96
Introduo
Plantas que utilizam apenas o ciclo de Calvin como via fixadora de carbono so
denominadas C3 (Raven et al., 1996). Uma outra via fotossinttica o metabolismo
cido das crassulceas (CAM), o qual caracterizado pela absoro noturna de CO2
atravs da abertura estomtica, sendo que durante o dia, os estmatos esto fechados,
e como conseqncia a demanda de evaporao do vapor dgua baixa, desta
maneira as plantas perdem menos gua durante a assimilao de CO2 (Ting et al.,
1985).
O ciclo de Calvin iniciado quando o dixido de carbono ligado
covalentemente a ribulose 1,5-bifosfato (RuBP), o composto resultante quebrado
imediatamente formando duas molculas de 3-fosfoglicerato (PGA), a enzima
responsvel pelo processo a RuBP carboxilase (Rubisco). O produto imediato do
ciclo o gliceraldedo 3-fosfato, com posterior sntese da glicose (Raven et al., 1996).
As plantas consideradas CAM so aquelas cujas clulas so capazes de fixar
dixido de carbono no escuro via a enzima PEP carboxilase, formando o cido mlico
que armazenado nos vacolos. Durante o perodo seguinte de luz, o cido mlico
descarboxilado e o dixido de carbono transferido para Rubisco no ciclo de Calvin
(Raven et al., 1996). Em relao as Clusiaceae, tambm h a sntese de cido ctrico,
com o posterior armazenamento nos vacolos e descarboxilao no perodo seguinte
de luz (Ting et al., 1985; Borland et al., 1998 e Herzog et al., 1999).
Segundo Roberts et al. (1998), membros do gnero Clusia pertencem a um
pequeno grupo de rvores dicotiledneas que realizam tanto metabolismo C3 quanto
CAM. Haag-Kerwer et al. (1992) afirmaram que algumas espcies do gnero so
capazes de expressar estas duas vias fotossintticas, dependendo das condies
ambientais. De acordo com Franco et al. (1990) esta flexibilidade no processo
fotossinttico possibilitou a disperso geogrfica deste gnero atravs dos trpicos.
Existem evidncias moleculares dentro do gnero para uma evoluo independente
desta flexibilidade no processo de fotossntese (Vaasen et al., 2002).
Neste trabalho foi realizado um estudo comparativo entre 12 espcies do gnero
(Clusia aemygdioi, C. burchellii, C. criuva, C. fluminensis, C. gardneri, C. hilariana, C.
intermedia, C. lanceolata, C. marizii, C. nemorosa, C. parviflora e C. sipiritu-sanctensis)
97
com objetivo de verificar possveis influncias do metabolismo fotossinttico na

expresso das caractersticas anatmicas da lmina foliar.
Material e Mtodos
A confeco das lminas das seces transversais seguiu os mesmos
protocolos utilizados no captulo 1 Morfologia, Anatomia e Histoqumica da Lmina
Foliar de Espcies de Clusia (Clusiaceae).
Para as comparaes quantitativas dos mesofilos das 14 espcies deste estudo
foram feitas medies de espessura do mesofilo com o auxlio do programa de anlise
de imagens IMAGE-PROPLUS verso 4.1 (Media Cybernetics Silver Spring, EUA)
do Laboratrio de Produtos Florestais do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e
Recursos Naturais Renovveis - IBAMA (Braslia - DF).
Foram realizadas 25 medidas por espcie, anlise de varincia (ANOVA) foi
aplicada, assim como o teste Tukey para comparao mltipla das mdias. Foi utilizado
o programa R: A Language and Environment for Statistical Computing (2006). A
hiptese nula testada foi: no existe diferena na espessura do mesofilo entre as
espcies de diferentes tipos de metabolismo fotossinttico. Os valores obtidos foram
considerados significativos a nvel de 5%.
A determinao dos respectivos tipos de metabolismo fotossinttico das
espcies C. burchellii, C. criuva, C. gardneri e C. nemorosa foi feita atravs da
quantificao da razo de istopos de carbono (13C) das folhas secas e pulverizadas,
realizada pelo Prof. Leonel da Silveira Lobo Sternberg (University of Miami).
Para as demais espcies no foi possvel realizar a quantificao bioqumica
para a determinao dos respectivos tipos de metabolismo porque as amostras foram
enviadas fixadas e preservadas em lcool, o que interferiria na anlise. A confirmao
dos tipos de metabolismo fotossinttico foi feita atravs da literatura e comunicao
pessoal com o Prof. Fbio Rbio Scarano.
98
Resultados - Aspectos Anatmicos Influenciados pelo Tipo de Metabolismo

Fotossinttico
As espcies cuja via fixadora de carbono apenas o ciclo de Calvin, plantas C3,
so: Clusia nemorosa (Tab. 10) e C. parviflora. As espcies que apresentam
metabolismo intermedirio C3/CAM so: Clusia aemygdioi, C. criuva (Tab. 10), C.
gardneri (Tab. 10), C. intermedia, C. lanceolata e C. marizii. As espcies com
predomnio do metabolismo cido das crassulceas so: Clusia burchellii (Tab. 10), C.
fluminensis, C. hilariana e C. spiritu-sanctensis.
Tab. 10. Determinao do tipo de metabolismo fotossinttico atravs da
quantificao da razo de istopos de carbono (13C) das folhas das espcies oriundas
de mata de galeria do Cerrado. Valores expressos em (%o), onde CAM representado
pelo intervalo -16 a -15, C3/CAM por -27 a -26 e C3 por -31 a -28.
Espcies
Clusia burchellii
Clusia criuva
Clusia gardneri
Clusia nemorosa
13C
-15,50
-27,19
-26,49
-31,41
Metabolismo
CAM
C3/CAM
C3/CAM
C3
Como as caractersticas anatmicas das espcies j foram descritas no captulo

1 Morfologia, Anatomia e Histoqumica da Lmina Foliar de Espcies de Clusia
(Clusiaceae), aqui somente sero abordadas as diferenas estruturais entre as
espcies de diferentes metabolismos.
Os tecidos presentes no mesofilo da lmina foliar foram as principais estruturas
influenciadas pelo metabolismo fotossinttico. O mesofilo muito mais espesso nas
espcies CAM (Fig. 36a e Tab. 11), de espessura intermediria nas espcies que
realizam ambos os metabolismos (Fig. 36b e Tab. 11) e mais delgado nas espcies C3
(Fig. 36c e Tab. 11). O mesofilo mais espesso da espcie CAM C. spiritu-sanctensis,
com 1223,8750,45 m, e o mesofilo mais delgado da espcie C3 C. nemorosa, com
446,6918,56 m. Esta maior espessura do mesofilo nas espcies CAM no s
devido a um possvel aumento no nmero de camadas celulares, mas principalmente
ao maior volume celular.
99
Tab. 11. Tipo de metabolismo fotossinttico e respectiva espessura do mesofilo

(m) das espcies estudadas. Valores expressos em mdiadesvio-padro, letras
iguais representam valores que no diferiram significativamente a 5% de probabilidade.
Espcie
Clusia aemygdioi
Clusia burchellii
Clusia criuva
Clusia fluminensis
Metabolismo
Mesofilo
C3/CAM
574,7922,64
CAM
1170,17109,86
C3/CAM
678,6943,73
CAM
1183,8921,52
Clusia gardneri
C3/CAM
496,7838,11
Clusia hilariana
CAM
1271,8222,40
Clusia intermedia
C3/CAM
568,7540,33
Clusia lanceolata
C3/CAM
615,9621,96
Clusia marizii
C3/CAM
610,6741,83
Clusia nemorosa
C3
446,6918,56
Clusia parviflora
C3
490,9013,62
CAM
1223,8750,45
Clusia spiritu-sanctensis
A hipoderme apresenta-se mais espessa nas espcies C3 e intermedirias,

apesar de C. nemorosa (Fig. 36d), uma espcie C3, possuir aproximadamente 2
camadas celulares e, C. gardneri (Fig. 37a), uma espcie C3/CAM, possuir cerca de 3
camadas celulares, estas tm hipoderme com volumes celulares maiores que em C.
burchellii (Fig. 37b), uma espcie CAM que tambm apresenta cerca de 3 camadas
celulares. Sendo que a espcie que possui maior quantidade de camadas celulares (56) neste tecido C. parviflora (Fig. 37c), uma planta C3.
O parnquima palidico possui menor nmero de camadas nas espcies C3 e
intermedirias. Clusia nemorosa (Fig. 36d), uma planta C3, possui uma nica camada
de clulas neste tecido, enquanto que as espcies CAM, como C. fluminensis (Fig.
37d), apresentam de 4-9 estratos celulares.
O nmero de camadas do parnquima lacunoso segue a mesma caracterizao
observada no parnquima palidico, apresentando maior nmero de camadas
celulares nas espcies CAM (Fig. 36a). O parnquima lacunoso de C. parviflora (Fig.
37c), uma espcie C3, caracterizado por cerca de 16 estratos celulares, uma das
maiores quantidades dentre as espcies que realizam o mesmo tipo de metabolismo,
no entanto o volume de suas clulas menor que nas espcies CAM (Fig. 38). As
espcies CAM apresentam parnquima lacunoso de 18-30 camadas celulares, outra
caracterstica dessas espcies referente aos espaos intercelulares, poucos e
pequenos (Fig. 38).
100
Discusso e Concluso
Alguns trabalhos confirmam os tipos de metabolismos aqui encontrados.

Segundo Franco et al. (1994) C. lanceolata espcie C3/CAM. De acordo com Herzog
et al. (1999) C. criuva uma espcie capaz de se adaptar facilmente, apresentando os
dois tipos de metabolismo. As espcies que desenvolvem o metabolismo CAM so C.
fluminensis (Franco et al., 1994) e C. hilariana (Gehrig et al., 2003 e Berg et al., 2004).
O aumento dos valores da razo dos istopos de carbono pode refletir alguma
atividade CAM, com a baixa discriminao de
13
CO2 pela PEP carboxilase quando
comparada a Rubisco (Herzog et al., 1999). As razes isotpicas de carbono das folhas
variam de 14%o nas espcies onde o dixido de carbono capturado pela enzima
PEP carboxilase a -28%o em espcies onde a maioria do dixido de carbono
capturada pela Rubisco (Borland et al., 1992 e Roberts et al., 1996). Neste trabalho
foram encontrados valores superiores aos encontrados na literatura, como em C.
nemorosa, onde 13C = -31,41%o.
Clusia caracterizado pela presena de espcies C3, C3/CAM e CAM crescendo
simpatricamete em muitas reas tropicais (Franco et al., 1994), como por exemplo, no
Cerrado, onde so encontradas C. burchellii (CAM), C. criuva (C3/CAM) e C. nemorosa
(C3).
As espcies CAM de Clusia tendem a ter as folhas mais suculentas, o que pode
estar relacionado ao aumento do nmero de clulas do mesofilo, sendo este tecido
muito mais espesso nas espcies CAM (Ting et al., 1987).
Wylie (1949) afirma que a hipoderme pode estar presente em um grande nmero
de xerfitas, como tecido armazenador de gua. No entanto, as espcies CAM C.
burchellii, C. fluminensis, C. hilariana e C. spiritu-sanctensis - apresentaram menor
nmero de camadas deste tecido, alm de clulas pouco volumosas, desta maneira as
clulas da hipoderme podem no ser suficientes para evitar a perda dgua em
condies ambientais extremas, sendo necessria a presena de espessa cutcula.
Os tecidos parenquimticos apresentam menor nmero de camadas nas
espcies C3 e intermedirias. As espcies CAM alm de possurem maior nmero de
estratos celulares, apresentam poucos e pequenos espaos intercelulares. Segundo
101
Borland et al. (1998), suculncia foliar um pr-requisito para armazenamento vacuolar

de cidos orgnicos, com conseqente reduo do volume dos espaos intercelulares.
As caractersticas estruturais distintas entre os tipos de metabolismo
fotossinttico observados neste trabalho foram: espessura da hipoderme e tecidos
parenquimticos, e quantidade e volume dos espaos intercelulares tambm foram
observadas nos resultados de Borland et al. (1998), quando analisaram 3 espcies de
Clusia C. aripoensis (C3), C. minor (C3/CAM) e C. rosea (CAM).
De acordo com Borland et al. (1998), diferenas na anatomia foliar entre as
espcies de Clusia sugerem que a associao entre suculncia do mesofilo e
capacidade para CAM foi selecionada para ambirntes ridos. Entretanto, Clusia tem
uma ampla distribuio tropical, no estando restrita a ambientes secos ou a hbito de
epifitismo (Franco et al., 1994), o que leva a crer que todas as espcies Clusia tm um
certo potencial gentico a CAM. Alm do que, segundo Franco et al. (1990), para
plantas tropicais, como as Clusiaceae, o metabolismo cido das crassulceas pode ser
um importante mecanismo para a recuperao do dixido de carbono perdido pela
respirao noite.
102
Fig. 36. Seces transversais da lmina foliar VIII, evidenciando epiderme em face adaxial (ed) e abaxial (eb),
hipoderme (hp), parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia burchellii, espcie CAM, com
maior espessura do mesofilo, mas apenas de 2-3 camadas celulares na hipoderme e aproximadamente 30 estratos
celulares nos tecidos parenquimticos. B: Clusia criuva, espcie C3/CAM, com mesofilo de espessura intermediria
e de 4 camadas celulares na hipoderme. C: Clusia parviflora, espcie C3, com menor espessura do mesofilo e de 45 camadas na hipoderme. D: Clusia nemorosa, espcie C3,, com 2 camadas de clulas na hipoderme, mas com
maior volume que nas espcies CAM.
103
Fig. 37. Seces transversais da lmina foliar IX, evidenciando epiderme em face adaxial (ed) e abaxial (eb),
hipoderme (hp), parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia gardneri, espcie C3/CAM, com 3
camadas celulares na hipoderme, mas com volumes maiores que nas espcies CAM e apenas 1-2 camadas
celulares no parnquima palidico. B: Clusia burchellii, espcie CAM, com hipoderme apresentando volumes
celulares reduzidos. C: Clusia parviflora, espcie C3, com menor espessura do mesofilo e de 4-5 camadas na
hipoderme, com maior volume celular que as espcies CAM. D: Clusia fluminensis, espcie CAM,, com clulas da
hipoderme de volume reduzido e cerca de 9 camadas de clulas no parnquima palidico.
104
Fig. 38. Seces transversais da lmina foliar X, evidenciando epiderme em face adaxial (ed) e abaxial (eb),
hipoderme (hp), parnquima palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: Clusia burchellii, espcie CAM, com
cerca de 30 camadas celulares nos tecidos parenquimticos, com poucos e pequenos espaos intercelulares. B:
Clusia fluminensis, espcie CAM, com aproximadamente 30 camadas de clulas no parnquima lacunoso, com
poucos e pequenos espaos intercelulares. C: Clusia hilariana, espcie CAM, com cerca de 18 camadas celulares
no parnquima lacunoso, com poucos e pequenos espaos intercelulares. D: Clusia spiritu-sanctensis, espcie
CAM, com cerca de 26 camadas de clulas no parnquima lacunoso com poucos e pequenos espaos
intercelulares.
105
CAPTULO
EFEITO
DA
IRRADIAO
SOLAR
NA
ESTRUTURA, FOTOSSNTESE E COMPOSIO QUMICA FOLIAR DE

CLUSIA CRIUVA CAMBESS.
RESUMO: As respostas apresentadas pelas plantas variao na disponibilidade de
luz costumam envolver alteraes nas caractersticas das folhas relacionadas
fotossntese, como rea foliar especfica, espessura foliar, alteraes na proporo de
tecidos fotossintetizantes em relao aos no fotossintetizantes, contedo de clorofila e
carboidratos. O objetivo desse estudo foi avaliar esses parmetros em folhas de Clusia
criuva Cambess. de locais sombreados (folhas de sombra) e no sombreados (folhas
de sol). As coletas foram realizadas na Reserva Ecolgica do Roncador (RECORIBGE)-Distrito Federal em regio de mata de galeria no Cerrado. Plantas sob maior
luminosidade apresentaram menor rea foliar especfica, aumento na espessura da
cutcula na face adaxial, reduo da rea ocupada pelo parnquima palidico e da
quantidade de ductos secretores e cristais em forma de drusas. Desta forma, menos
material vegetal por unidade de rea fica diretamente exposto luz, reduzindo a perda
de gua e aumentando o auto-sombreamento entre cloroplastos. O contedo de
clorofila foi significativamente maior nas folhas de local sombreado. No entanto, no
houve diferena na eficincia fotossinttica entre folhas de sol e sombra. Os dados
encontrados mostram alteraes no metabolismo dos carboidratos. s 9h30min, o
contedo dos carboidratos no estruturais estava significativamente maior, acares
solveis, sacarose, glicose e frutose apresentavam-se em dobro e o amido nove vezes
maior nas folhas de sol do que nas de sombra. Folhas de sol apresentaram maior
atividade fotossinttica e metablica, quando comparadas com folhas de ambientes
sombreados.
Palavras-chave: estrutura foliar, fisiologia, folha de sombra, folha de sol, Guttiferae.
Agradecimentos: Ao Prof. Augusto C. Franco (Universidade de Braslia) pelas

anlises de fotossntese; Prof. Birgit Orthen (University of Mnster, Germany) pelas
anlises bioqumicas; ao Laboratrio de Produtos Florestais IBAMA (Braslia - DF)
pela utilizao do programa Image Pro-Plus; aos bilogos Mariana Saraceno e Davi
Rodrigo Rossatto pelo auxlio na manipulao dos aparelhos LI-COR LI-6400, Data
Logger LI-COR LI-1000 acoplado ao piranmetro LI COR LI-200 e, termmetro
infravermelho HORIBA IT-330.
106
Introduo
A folha um dos rgos que melhor reflete as variaes estruturais de origem

gentica e, por se tratar de um dos rgos mais expostos do vegetal, est sujeita
diretamente s variaes do ambiente, tornando-se um elemento importante para a
anlise auto-ecolgica de uma espcie ou em estudos de comunidades vegetais
(Boeger et al. 1997).
Segundo Franco et al. (1994) e Roberts et al. (1998), membros do gnero Clusia
pertencem a um pequeno grupo de rvores dicotiledneas que realizam tanto
metabolismo C3 quanto CAM, algumas espcies so capazes de expressar estas duas
vias fotossintticas, dependendo das condies ambientais (Haag-Kerwer et al. 1992).
Franco et al. (1990) postulou que esta flexibilidade no processo fotossinttico
possibilitou a disperso geogrfica deste gnero atravs dos trpicos. De acordo com
Vaasen et al. (2002), existem evidncias moleculares dentro do gnero para uma
evoluo independente desta flexibilidade no processo de fotossntese. A espcie em
estudo apresenta principalmente o metabolismo C3 (Herzog et al. 1999).
A variao na disponibilidade de luz costuma envolver alteraes nas
caractersticas das folhas de uma mesma espcie. Segundo Givnish (1988), os
mecanismos de adaptao a nvel da irradiao podem envolver mudanas na forma,
fisiologia e organizao da folha, assim como na integrao funcional das folhas com
outras partes da planta. Tais alteraes em indivduos de mesma espcie so
consideradas plasticidade fenotpica, definida por Bradshaw (1965) como a alterao
na expresso do gentipo pelas influncias ambientais, podendo se manifestar tanto
morfolgica como fisiologicamente.
Estudos anatmicos so importantes, especialmente quando associados aos
aspectos ecolgicos e comparativos, subsidiando trabalhos taxonmicos (Metcalfe &
Chalk 1983). Neste trabalho apresentado um estudo comparativo sobre a folha de
espcimes de Clusia criuva Cambess. oriundos de ambientes de sol e sombra de uma
mata de galeria do Cerrado, com o objetivo de identificar as caractersticas foliares que
respondem irradiao solar, em nvel anatmico, bioqumico e fisiolgico para plantas
desta espcie em condies naturais.
107
Material e Mtodos
As amostras foliares de C. criuva, incluindo os pecolos, foram obtidas de quatro
plantas, sendo duas localizadas na borda de uma mata de galeria do Cerrado
(ambiente de sol) e duas localizadas no interior da mata (ambiente de sombra). As
coletas foram realizadas em julho/2005 (estao de seca) e janeiro/2006 (estao de
chuva).
Para a anlise dos espcimes de C. criuva foram coletadas 25 folhas totalmente
expandidas por condio de luz (sol x sombra). As lminas das seces transversais
foram feitas mo livre e seguiram os mesmos protocolos utilizados no captulo 1
Morfologia, Anatomia e Histoqumica da Lmina Foliar de Espcies de Clusia
(Clusiaceae). A confeco das lminas dos segmentos paradrmicos, assim como a
metodologia para as medidas dos estmatos foram realizadas de acordo com o
protocolo utilizado no captulo 2 Caracterizao Epidrmica da Lmina Foliar de
Espcies de Clusia (Clusiaceae).
Para as comparaes quantitativas dos indivduos de C. criuva de ambientes
distintos foram feitas medies de espessura da lmina foliar, nervura principal,
cutcula, epiderme, tecidos parenquimticos e da hipoderme, do dimetro do pecolo e
ductos e do comprimento e largura estomticos com o auxlio do programa de anlise
de imagens IMAGE-PROPLUS verso 4.1 (Media Cybernetics Silver Spring, EUA)
do Laboratrio de Produtos Florestais do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e
Recursos Naturais Renovveis - IBAMA (Braslia - DF).
As taxas de fotossntese foram obtidas a partir de 2 folhas por indivduo, 4 por
condio de luz, com o sistema porttil LI-COR LI-6400. A concentrao de CO2 do ar
foi mantida em 400 ppm e a temperatura foliar em 28oC. Essas medies foram feitas
nos dias 29 de junho e 20 de julho de 2005.
Para
caracterizao
da
densidade
de
fluxo
de
ftons
na
faixa
fotossinteticamente ativa e seus efeitos na temperatura foliar foram analisadas 10

folhas por condio de luz com os aparelhos Data Logger LI-COR LI-1000 acoplado ao
piranmetro LI COR LI-200 e termmetro infravermelho HORIBA IT-330. As
medies foram realizadas no dia 25 de agosto de 2006, em intervalos de 30 minutos
entre 9h e 17h, totalizando 16 medidas ao longo do dia.
108
A concentrao de clorofila foi determinada a partir de 2 folhas por indivduo, 4

por condio de luz. Pequenas pores das folhas foram coletadas (9h30min),
armazenadas no gelo durante o transporte e maceradas utilizando acetona 80% como
solvente (Linder, 1974). A quantidade de clorofila a e b foi determinada atravs de
espectrofotometria.
A determinao de acares e cidos orgnicos foi feita a partir de 2 folhas por
indivduo, 4 por condio de luz, coletadas (9h30min), armazenadas no gelo, mortas
em forno microondas por 10-30 minutos, posteriormente secas at 80C para clculo
da massa seca, maceradas e extrados em gua (10mg massa seca/mL gua
destilada) para a determinao em espectrofotometria.
O contedo de amido foi determinado por degradao enzimtica e os
contedos de sacarose, frutose e glicose foram analisados a partir da reao acoplada
com NADP+/NADPH+H+, em espectrofotmetro (Bergmeyer & Brent, 1974). Em todas
estas anlises foi utilizado o espectrofotmetro Gnesis 2 (Pittsford).
Os resultados obtidos entre folhas de sol e sombra foram comparados atravs
do teste t (Student), sendo considerada a folha como unidade amostral. Foi utilizado o
programa R: A Language and Environment for Statistical Computing (2006). A
hiptese nula testada foi: no existe diferena na estrutura, fotossntese e composio
qumica foliar de C. criuva sob dois diferentes nveis de irradiao solar. Os valores
obtidos foram considerados significativos a nvel de 5%. Em relao caracterizao
da densidade de fluxo de ftons e seus efeitos na temperatura foliar, ambas as
variveis sofreram a anlise de varincia (ANOVA) hierrquica verificar onde ocorre
maior variao dentro ou entre os espcimes de ambientes distintos, a hiptese nula
testada foi: no existe diferena nas taxas de densidade de fluxo de ftons e de
temperatura foliar os espcimes estudados, tambm foram feitas anlises de
correlao entre essas variveis.
Resultados - Efeito da Irradiao Solar na Estrutura Foliar

Como as caractersticas anatmicas da lmina foliar de C. criuva j foram
descritas no captulo 1 - Morfologia, Anatomia e Histoqumica da lmina Foliar de
Espcies de Clusia (Clusiaceae), aqui somente sero abordadas as diferenas
109
estruturais entre as folhas de sol e de sombra, alm das variaes relativas a

fotossntese e composio qumica.
Nos espcimes que se desenvolvem na sombra, a cutcula e as clulas
epidrmicas da superfcie adaxial apresentam-se menos espessas (Tab. 12), os tecidos
do mesofilo apresentam mais camadas celulares e suas clulas maiores volumes (Fig.
39a), alm de maior quantidade de cristais que os espcimes que se desenvolvem em
maior luminosidade.
Nos espcimes de sombra (Fig. 39c) os estmatos so maiores e em menor
densidade (Tab. 12) que aqueles encontrados no espcime de sol (Fig. 39d).
Nas amostras dos espcimes de sombra, a nervura principal apresenta mais
camadas celulares em todos os tecidos do mesofilo estudados (Tab. 12), alm de
volumes celulares geralmente maiores, uma vez que a espessura da nervura principal
nas folhas de sol 511,14165,89 m e nas folhas de sombra de 663,5893,32 m;
conseqentemente, o dimetro do cilindro vascular e a concavidade da folha para a
face abaxial so maiores (Fig. 40a) em relao aos espcimes de sol (Fig. 40b).
O pecolo, em seco transversal, apresenta forma variando de cilndrica a
plana. A epiderme mostrou-se uniestratificada composta por clulas de tamanhos
variados, recobertas por cutcula espessa penetrando entre as paredes anticlinais,
ausncia de estmatos.
A regio cortical do pecolo possui clulas parenquimticas de tamanhos e
espessamentos de parede desiguais. Presena de cristais em forma de drusas
preenchendo quase todo o espao intracelular. Nota-se ductos secretores normalmente
cilndricos de origem esquizgena (Fig. 40c).
Cilindro vascular formado por feixes colaterais normalmente dispostos em arco
aberto em direo ao lado adaxial com extremidades curvadas para a parte interna
(Fig. 40e). Da base para o pice estas extremidades tornam-se completamente
fechadas.
A regio medular formada por clulas parenquimticas de tamanhos variados,
formando espaos intercelulares, clulas contendo cristais em forma de drusas em
menor quantidade que no crtex (Fig. 40e).
As amostras de folhas de sombra apresentaram dimetro do pecolo maior
(4123,83773,45 m) que as folhas de sol (2135,46751,31 m), (Tab. 12), alm de
110
maior quantidade de espaos intercelulares no crtex e abundncia de cristais em

forma de drusas nos folhas de sombra (Fig. 40c).
Tab. 12. Anlise comparativa das caractersticas anatmicas entre folhas de sol
e de sombra de Clusia criuva. Valores expressos em termos de mdia desvio padro;
N = 50 observaes para cada varivel. Mdias acompanhadas de mesma letra dentro
de uma mesma linha no diferiram significativamente a 5% de probabilidade.
Clusia criuva sol Clusia criuva sombra
Dimetro
2135,46751,31a
4123,83773,45b
a
cutcula
5,35 1,87
5,14 1,32a
epiderme
9,963,14a
8,39 2,08b
a
espessura
747,1994,34
824,7976,54b
Lmina Foliar (m)
cutcula adaxial
5,341,23a
4,251,23b
a
epiderme adaxial
8,451,79
6,881,51b
a
hipoderme
186,5253,36
194,8446,74a
p. palidico
88,0819,76a
117,5423,08b
a
p. lacunoso
433,1859,77
457,2539,09a
epiderme abaxial
9,812,53a
9,682,38a
a
cutcula abaxial
4,371,17
4,241,05a
511,14165,89a
663,5893,32b
Nervura Principal (m) Espessura
a
Dimetro
41,909,41
41,6210,62a
Ductos (m)
densidade(mm2)
220,3441,81a
162,8613,78b
Estmatos
a
Comprimento(m)
26,264,85
34,393,09b
a
largura(m)
9,170,88
7,970,32b
Estruturas
Pecolo (m)
Resultados - Efeito da Irradiao Solar na Fotossntese e Composio Qumica

Foliar
Plantas de sol e sombra diferem em estrutura e composio qumica. A rea
especfica foliar foi aproximadamente 25% menor nas amostras de folhas de sol
(6,020,81 m2kg-1) que nas de sombra (8,082,45 m2kg-1). O contedo de clorofila por
unidade de rea foliar, bem como por massa seca, foi significativamente maior nas
folhas de local sombreado. Os dados encontrados mostram diferenas na magnitude
do metabolismo dos carboidratos e cidos orgnicos, s 9h30min, o contedo dos
carboidratos no estruturais foi significativamente maior, sacarose e frutose
apresentavam-se em dobro e o amido nove vezes maior nas folhas de sol do que nas
de sombra (Tab. 13).
111
Tab. 13. Anlise comparativa das caractersticas e composio qumica das

folhas de sol e de sombra de Clusia criuva. Contedo de gua por porcentagem de
massa seca (%MS), rea foliar especfica (SLA) e contedo de carboidratos, cidos
orgnicos e clorofila. Dados expressos em termos de mdia desvio padro; N = 4
folhas para cada condio de luz. Mdias acompanhadas de mesma letra dentro de
uma mesma linha no diferiram significativamente a 5% de probabilidade.
Medidas
gua
Clusia criuva sol

contedo (%MS)
455,6333,85
425,9947,92a
6,020,81a
8,082,45b
1,701,93b
SLA (m2 Kg-1)

-2
Carboidratos
sacarose(mmol m )
4,361,32
glicose(mmol m-2)
4,812,25a
-2
12,434,67b
frutose(mmol m )
45,513,10
21,668,23b
amido(mmol m-2)
18,186,73a
1,881,71b
-2
3,411,39b
cidos Orgnicos malato(mmol m )

-2
Clorofila
Clusia criuva sombra
6,141,62
citrato(mmol m )
67,616,35
52,6813,15b
A (g cm-2)
46,218,31a
62,689,14b
B (g cm-2)
25,875,01a
32,393,94b
Tanto a densidade de fluxo de ftons na faixa fotossinteticamente ativa quanto a

temperatura foliar apresentaram valores significativamente diferentes entre os
indivduos de diferentes ambientes. A densidade de fluxo de ftons na faixa
fotossinteticamente ativa medida nas folhas de sol teve mdia 10484,25 mol/m-2s-1,
enquanto a mdia para as folhas de sombra foi 775,06 mol/m-2s-1. Existe correlao
significativa e diretamente proporcional entre luminosidade e temperatura (Graf. 4).
26
24
22
20
temperatura
28
30
32
Graf. 4. Relao entre densidade de fluxo de ftons na faixa fotossinteticamente

ativa (DFF mol/m-2s-1) e temperatura foliar (C) nos indivduos de sol e de sombra,
sendo r2 de 0,72 para as folhas de sol e 0,68 para as folhas de sombra. N = 10 folhas
para cada condio de irradiao de luz.
5000
10000
15000
densidade de fluxo de ftons
112
Os indivduos de sol apresentaram maior taxa fotossinttica de acordo com a

variao da intensidade luminosa, sendo que algumas folhas mantiveram a respectiva
taxa crescente mesmo a uma densidade de fluxo de ftons na faixa fotossitenticamente
ativa de 1750 mol m-2 s-1 (Graf. 5).
Nos indivduos de sombra, a taxa fotossinttica mxima mostrou-se menor que
naqueles de sol e a saturao foi alcanada, por volta da intensidade luminosa 1250
mol m-2 s-1 (Graf. 5).
Graf. 5. Relao entre a taxa de fotossntese (A CO2/molm-2s-1) e a densidade
de fluxo de ftons na faixa fotossinteticamente ativa nos indivduos de sol e de sombra
(DFF mol/m-2s-1). Foi ajustada uma hiprbole retangular, sendo r2 de 0,97 para as
folhas de sol e 0,98 para as folhas de sombra. N = 4 folhas para cada condio de
irradiao de luz.
18
folhas de sol
-2
-1
ACO2 (mol m s )
15
12
9
6
folhas de sombra
3
0
-3
300
600
900
1200
-2
1500
1800
-1
DFF (mol m s )
Os valores mdios referentes a assimilao mxima de dixido de carbono,

condutncia estomtica e e eficincia intrnseca do uso de gua foram obtidos a uma
densidade de fluxo de ftons de 1500 e 1750 mol m-2 s-1. Folhas de sol apresentaram
maiores valores de assimilao mxima de CO2, condutncia estomtica. No foram
encontradas diferenas na eficincia intrnseca de uso de gua entre folhas de sol e
sombra (Tab. 14).
A eficincia fotossinttica e o ponto de compensao de luz foram obtidos a
partir de regresso linear para os pontos iniciais da curva de resposta luz (DFF de 0 a
100 mol m-2 s-1) para cada folha individual. No foram encontradas diferenas na
113
eficincia fotossinttica folhas de sol e sombra, mas os valores de ponto de

compensao de luz foram mais altos para as folhas de sol. Os valores de respirao
foram obtidos na ausncia de luz, sendo que folhas de sol apresentaram maiores
valores de respirao (Tab. 14).
Tab. 14. Anlise comparativa das caractersticas fisiolgicas entre folhas de sol
e de sombra de Clusia criuva. Valores mximos de assimilao de CO2 (Amax; mol m-2
s-1), condutncia estomtica (Gmax; mol m-2 s-1) e eficincia intrnseca de uso de gua
(Amax/Gmax; mol / mol), eficincia fotossinttica (EF; mol CO2/mol ftons), ponto de
compensao de luz (PTL; mol m-2 s-1) e respirao no escuro (Resc; mol m-2 s-1).
Dados expressos em termos de mdia + erro padro; N = 4 folhas para cada condio
de irradiao solar. Mdias acompanhadas de mesma letra dentro de uma mesma linha
no diferiram significativamente a 5% de probabilidade.
Valores
Clusia criuva sol
Clusia criuva sombra
Amax
15,60,92a
11,50,54b
Gmax
max
/G
0,3300,0167a
max
EF
PTL
esc
47,31,219
0,0520,0024a
a
0,2190,0274b
54,15,161a
0,0510,0006a
151,1b
304,6
1,60,20
0,90,01b
Discusso e Concluso
Esau (1974) ressalta que as caractersticas de adaptao ao ambiente podem
ser de ordem morfolgica, anatmica e fisiolgica, podendo variar ou serem fixados
geneticamente, a despeito das variaes do meio.
A lmina foliar a parte da planta que mais se modifica nas interaes com o
ambiente, sendo importante nos estudos de anatomia ecolgica das espcies (Paviani,
1978). A mesma autora, em trabalho posterior (1984) defende a necessidade de
abordar, nos estudos de anatomia ecolgica, aspectos no exclusivamente
anatmicos, pois h uma estreita interdependncia entre a morfologia interna e
externa, a fisiologia e do indivduo com o ambiente.
Diversos estudos relatam a ocorrncia de alteraes na organizao do mesofilo
em funo da luminosidade (Chabot et al., 1979; Voltan et al., 1992; Cao, 2000; Hanba
et al., 2002 e Justo et al., 2005). Os resultados obtidos indicam que C. criuva
apresentou plasticidade anatmica expressa por vrias caractersticas foliares
114
dimetro do pecolo, espessura da nervura principal, altura da cutcula e clulas

epidrmicas, espessura do mesofilo, proporo de tecidos fotossintetizantes,
densidade e dimenses estomticas.
A regio onde os indivduos de C. criuva foram coletados caracterizada por
duas estaes climticas bem definidas seca e chuva. Os resultados obtidos para o
mesmo espcime, tanto na primeira coleta (seca) quanto na segunda (chuva), foram
similares, confirmando os dados de Geeske et al. (1994), de que no h evidncia que
o nvel de precipitao afete consideravelmente a anatomia foliar. Por outro lado,
confirmando informaes anteriores de Morretes & Ferri (1972), Sobrado & Medina
(1980) e Boeger et al. (1997), que estudaram este gnero, caracteres habitualmente
tidos como de adaptao a ambientes xricos esto presentes nos espcimes com
razovel freqncia: cutcula espessa, nmero elevado de estmatos e presena de
tecido mecnico.
Para Esau (1974) e Esprito Santo & Pugialli (1999), o crescimento e a
organizao da lmina foliar so influenciados por fatores ambientais como a
temperatura, a intensidade de luz e a disponibilidade de gua. Goulet & Bellefleur
(1986) afirmam que os efeitos da luz (sol e sombra) tambm influenciam na
plasticidade foliar, alterando a espessura, a rea e outras caractersticas desse rgo
vegetal. As diferenas encontradas entre espcimes de sol e de sombra para a maioria
das caractersticas morfo-anatmicas examinadas confirmam a plasticidade da lmina
foliar desta espcie em resposta a luz.
Segundo Voltan et al. (1992) e Dickison & Weitzman (1996), variaes na
espessura da lmina e cutcula, grau de desenvolvimento do parnquima palidico,
volume dos espaos intercelulares, freqncia dos estmatos e densidade dos feixes
vasculares podem estar relacionados com a eficcia da fotossntese, quantidade de luz
que alcana a planta e disponibilidade de gua. Na espcie estudada, as estruturas
citadas pelos autores apresentam-se de forma diferenciada dependendo do ambiente
de origem da planta parnquima palidico, volume dos espaos intercelulares e
densidade dos feixes vasculares so caractersticas mais evidenciadas no espcime de
sombra.
Os fatores ambientais influenciam de maneira notvel a espessura e a
composio da cutcula (Eames & MacDaniels, 1947; Skoss, 1955 e Bleckmann et al.,
115
1980). Segundo Pyykk (1966), as folhas de sol so dotadas de cutcula mais espessa
e com maior proporo de cera do que as que se desenvolvem em ambiente mido.
Esau (1974), por sua vez, frisa que a cutcula, assim como as camadas cutinizadas e a
cera superficial, desempenham relevante papel na reduo da perda de gua.
Confirmando esses trabalhos, nos espcimes estudados a cutcula na superfcie
adaxial mostrou-se mais espessa nos indivduos mais expostos ao sol.
A densidade dos estmatos foi superior nos indivduos que se desenvolvem no
sol (220,3441,81 estmatos/mm2) em relao aos que se desenvolvem na sombra
(162,8613,78 estmatos/mm2), assim como o comprimento estomtico nas folhas de
sol (26,264,85 m) e de sombra (34,393,09 m). Carey (1938) refere que o tamanho
das clulas epidrmicas reflete uma interao entre os fatores ambientais e
hereditrios, conseqentemente o aparelho estomtico tambm sofre tais influncias
que se fazem sentir sobre cada indivduo, sendo algumas espcies mais plsticas do
que outras. Segundo Gindel (1968) e Figuera et al. (2004), condies como
deficincia hdrica no solo e clima rido podem resultar em modificaes morfolgicas,
como aumento da densidade estomtica, geralmente acompanhada pela diminuio do
comprimento dos estmatos. Entretanto, Wilkinson (1983) afirmou que condies secas
e/ou de pleno sol tendem a produzir estmatos grandes.
Paula (1974b), utilizou critrios de freqncia estomtica para identificar gneros
e espcies de Clusiaceae. Entretanto, no presente estudo, as densidade e largura
estomticas so maiores nos espcimes de sol, apoiando Esau (1974) e Fahn (1982)
que afirmam que o nmero de estmatos por unidade de rea muito varivel e pode
ser influenciado por fatores ambientais, sendo uma caracterstica de pouco valor
taxonmico. Densidade e largura estomticas maiores nos espcimes de sol reflete em
maiores valores de condutncia estomtica e taxa fotossinttica para estes indivduos,
mas no ocorreram diferenas na eficincia de uso de gua entre indivduos de sol e
sombra.
Na anlise anatmica dos espcimes de sol, ocorre aumento na espessura da
cutcula adaxial, reduo da rea ocupada pelo parnquima palidico, da quantidade
de ductos secretores e de cristais em forma de drusas. Desta forma, menos material
vegetal por unidade de rea fica diretamente exposto luz, reduzindo a perda de gua
e aumentando o auto-sombreamento entre cloroplastos. Por manter contato direto com
116
o ambiente, a epiderme est sujeita a modificaes estruturais em decorrncia de

vrios fatores ambientais (Cutter 1986a). As clulas epidrmicas adaxiais dos
indivduos que se desenvolvem no sol so revestidas por cutcula mais espessa que
aquelas dos indivduos que se desenvolvem na sombra. De acordo com Cutter (1986b),
esse espessamento representa uma importante funo mecnica na proteo do rgo
no caso de escassez de gua, de acordo com as condies ambientais de luz e
umidade.
As clulas da hipoderme no apresentaram diferenas significativas em relao
espessura; segundo Borland et al. (1998), a hipoderme de Clusia funciona como um
tecido de armazenamento de gua, apesar das clulas largas no serem capazes de
evitar uma perda de gua para o ambiente, desta maneira a presena de cutcula
espessa se faz necessria (Kaul, 1977), corroborando com os dados encontrados.
Os espaos intercelulares do parnquima lacunoso so menores e h menor
quantidade de drusas e ductos secretores no tecido parenquimtico do espcime de
sol. Segundo Esprito Santo & Pugialli (1999), dois fatores que contribuem para um
aumento na dimenso das folhas de sombra so a maior disponibilidade de gua e a
reduo da luz, o que est de acordo com este trabalho.
Nos indivduos estudados existem cristais em maior quantidade nos espcimes
de sombra. De acordo com Fahn (1982) muitas plantas possuem em suas clulas
depsitos de excreo constitudos de matria inorgnica, na maioria das vezes sais de
clcio, formando os cristais. Conforme Prychid & Ruddal (1999), os cristais, alm da
importncia taxonmica, podem representar formas de armazenamento de clcio e
cido oxlico, e tambm serem depsitos de substncias de metabolismo secundrio.
Os ductos secretores esto em maior proporo no pecolo em relao lmina
foliar. Neste estudo no foram encontradas diferenas significativas entre os dimetros
dos ductos dos indivduos de sol e de sombra.
O pecolo apresenta o mesmo padro dos resultados verificados na lmina foliar,
salientando que as clulas do crtex possuem volumes maiores naqueles indivduos de
ambiente de sombra.
As plantas sob maior luminosidade apresentaram menor rea foliar especfica;
segundo Niinemets (1995), um maior investimento de carbono pela folha pode ser
utilizado para manuteno mecnica. No entanto, esta diferena no se deve a um
117
aumento da espessura da folha em resposta a altos nveis de irradiao solar, pois nos
espcimes estudados, as folhas de sombra apresentaram maior espessura. Estas
diferenas se devem provavelmente a um aumento da densidade nas folhas em
ambientes iluminados, que apresentaram menor quantidade de espaos intercelulares
e uma maior quantidade de carbono por unidade de rea foliar.
O fato do contedo de clorofila por unidade de rea foliar, bem como por massa
seca, ter sido significativamente maior nas folhas de local sombreado, reflete maior
investimento na captura de luminosidade sob baixa irradiao. No entanto, no houve
diferena na eficincia fotossinttica entre folhas de sol e sombra. Por outro lado,
folhas de sol apresentaram maior atividade metablica, tendo em vista a maior fixao
de carboidratos e valores mais altos de respirao. Herzog et al. (1999) tambm no
encontraram diferenas na eficincia fotossinttica entre plantas de sol e sombra,
utilizando medidas de fluorescncia da clorofila em resposta a variaes na intensidade
luminosa.
De maneira geral o metabolismo fotossinttico e de cidos orgnicos de C.
criuva responde a diferentes regimes luminosos. A anlise dos cidos orgnicos pode
ser utilizada para testar a atividade CAM (Herzog et al., 1999). Assim como encontrado
por Roberts et al. (1998), quando analisaram folhas de C. minor de ambientes distintos,
os indivduos de ambiente mais exposto apresentaram maior concentrao de cidos
orgnicos. Este resultado pode sugerir uma maior expresso do metabolismo cido das
crassulceas em indivduos mais expostos irradiao solar. Segundo Herzog et al.
(1999), esta adaptao promove forte proteo contra a fotoinibio durante perodos
de alta irradiao pelo estabelecimento de uma alta concentrao intermna de CO2.
De acordo com Evans (1999), o parnquima palidico mais prximo
superfcie facilita a penetrao da luz para o interior da folha, enquanto o parnquima
lacunoso promove a disperso de molculas de clorofila para melhorar a absoro de
luz; o que confirmado no espcime que se desenvolve ao sol, o qual apresenta
diminuio da rea ocupada pelo parnquima palidico e menor contedo de clorofila
por unidade de rea, visto que est submetido a uma intensidade luminosa maior.
No foram encontradas diferenas na eficincia fotossinttica e na eficincia
intrnseca de uso de gua entre folhas de sol e sombra, confirmando dados de
Yamashita et al. (2002) que afirmam que pequenas variaes na espessura da folha
118
resultam em significativas variaes na fotossntese em algumas espcies, enquanto

outras apresentam grande plasticidade na espessura foliar com pouca variao na
capacidade fotossinttica.
Diante dos resultados aqui presentes, conclui-se que as caractersticas
anatmicas e o metabolismo do carbono em C. criuva apresentam plasticidade
fenotpica em resposta s condies luminosas. As caractersticas mais marcantes nos
indivduos que se desenvolvem na sombra so: estmatos maiores e em menor
densidade demogrfica, maior espessura foliar devido ao maior nmero de camadas
dos tecidos do mesofilo, maior concentrao de ductos e cristais e maior dimetro do
pecolo. Folhas de sol apresentaram maior atividade fotossinttica e metablica,
quando comparadas com folhas de ambientes sombreados.
119
Fig. 39. Seces transversais de Clusia criuva da lmina foliar (A-B) e paradrmicas da superfcie abaxial (C-D)
evidenciando epiderme em face adaxial (ed) e abaxial (eb), esta com estmatos (st), hipoderme (hp), parnquima
palidico (pp) e parnquima lacunoso (pl). A: folha de sombra, apresentando hipoderme e parnquima lacunoso
com maiores volumes e camadas celulares. B: folha de sol, apresentando reduo na espessura do mesofilo. C:
folha de sombra, com estmatos maiores em menor frequncia. D: folha de sol, com estmatos menores e em maior
freqncia.
120
Fig. 40. Seces transversais da folha de Clusia criuva, nervura principal (A-B) e pecolo (C-E) evidenciando
epiderme em face adaxial (ed) e abaxial (eb), hipoderme (hp), parnquima palidico (pp) e parnquima com clulas
isodiamtricas (pi), e no pecolo epiderme (e), crtex (c), medula (md) e drusas (d). A: folha de sombra,
apresentando nervura principal com maior espessura e camadas celulares. B: folha de sol, apresentando nervura
principal com menor espessura. C: folha de sombra, com maior quantidade de clulas e drusas no crtex. D: folha
de sol. E: Detalhe do pecolo de Clusia criuva, folha de sol, apresentando cilindro vascular em arco.
121
CONSIDERAES FINAIS
Na anlise estrutural das folhas das 14 espcies do gnero Clusia foram
observados padres de venao distintos, o que pode auxiliar no reconhecimento das
mesmas em estgio vegetativo, sendo os caracteres mais confiveis o ngulo e a
forma do pice, ngulo das nervuras secundrias (principalmente quando comparado o
pice com o restante da lmina foliar), posio da veia ltima marginal e presena de
invaginao desta na regio da nervura principal.
As espcies possuem acentuada uniformidade em nvel anatmico, no que se
refere aos aspectos gerais da lmina foliar, como tipo e disposio dos tecidos
presentes. Uma das distines entre as mesmas a quantidade de camadas celulares
em cada tecido. No entanto, amostras de uma mesma espcie, quando submetida a
diferentes ambientes tambm pode apresentar estas variaes, uma plasticidade
fenotpica, como foi observado em espcimes de C. criuva sob diferentes intensidades
luminosas; desta maneira no confivel aplicar valor taxonmico apenas s
quantidades diferentes de camadas celulares. Entretando, quando associado a outros
parmetros, e em intervalos de espessura distintos, possvel utilizar o nmero de
camadas celulares para a distino das espcies.
Foram descritas nas lminas foliares caractersticas escleromorfas como
cutcula e camadas cuticulares espessas, clulas volumosas na hipoderme,
esclernquima abundante e parnquima palidico em vrias camadas. Essas
caractersticas podem conduzir hiptese da ocorrncia de adaptao evolutiva a
ambientes como o Cerrado. Entretanto, vrias outras espcies, que tambm possuem
tais caractersticas, so oriundas de ambientes desprovidos de clima rido ou semirido, por exemplo, Restinga, Mata Atlntica e Floresta Amaznica. Alm do mais, os
estudos realizados sobre as espcies do gnero Clusia no abordam os caracteres
edficos dos respectivos ambientes. Desta maneira pode-se acreditar na origem
filogentica dessas caractersticas escleromorfas.
Os estudos histoqumicos demonstraram a presena de compostos lipoflicos,
carboidratos estruturais e no-estruturais nas folhas. Entre os metablitos secundrios
constatou-se a presena de lignina e outros compostos fenlicos, principalmente
taninos, importantes para a defesa dessas espcies contra predao e, diminuio do
122
ndice de parasitismo. No foram encontrados alcalides, resinas e slica. De acordo

com os testes realizados, o produto de secreo dos ductos constitudo de
compostos lipoflicos.
A anlise das amostras paradrmicas da superfcie abaxial, acrescentou vrias
informao sobre estrutura, tamanho e densidade dos estmatos, confirmando, com
valores significativos estatisticamente, trabalhos anteriores como Muenscher (1915)
que mencionou a relao inversamente proporcional entre comprimento e densidade
estomticos, e Eckerson (1908), que afirmou que a passagem de gases pelo estmato
dependente do comprimento, e no da rea dessas estruturas.
Os resultados dos estudos paradrmicos foram obtidos a partir da anlise de
todas as espcies, desta maneira, as relaes entre as dimenses lineares do
estmato com as respectivas densidades, independem da espcie ou da condio
ambiental na qual se encontra.
O estudo das superfcies sob microscopia eletrnica de varredura forneceu
informaes detalhadas relacionadas micromorfologia com possvel aplicao
taxonmica. Dentre as principais caractersticas distintas entre as espcies esto: tipo
de deposio das ceras epicuticulares; tipo de espessamento e ornamentao das
fibrilas celulsicas na parede celular das clulas subsidirias; e espessamento nas
paredes ventrais das clulas-guarda. Confirmando o valor taxonmico das superfcies
foliares citado em trabalhos anteriores (Van Cotthem, 1970; Denton, 1994; Barthlott et
al., 1998; Medina et al., 2004; e Yang & Lin, 2005).
Nogueira et al. (2001) afirmaram que, devido similaridade morfolgica e
bioqumica entre C. parviflora e C. criuva, seria melhor considerar a primeira como uma
subespcie da segunda. Em relao s seces transversais ambas so bastante
similares, diferindo basicamente no nmero de camadas celulares do mesofilo.
Entretanto, os estmatos de C. criuva so elpticos e os de C. parviflora so circulares;
C. parviflora apresenta espessamento nas paredes ventrais das clulas-guarda,
caracterstica ausente em C. criuva; C. criuva possui muita ornamentao nas paredes
das clulas subsidirias e C. parviflora tem pouca ornamentao nessas paredes; C.
parviflora realiza somente o ciclo de Calvin como via fixadora de carbono, enquanto C.
criuva tambm adaptada ao metabolismo cido das crassulceas. Devido a todas as
diferenas mencionadas, mais adequado consider-las duas espcies distintas.
123
Foram analisadas 2 espcies que utilizam apenas o metabolismo C3 (C.

nemorosa e C. parviflora), 6 espcies adaptadas a ambos os metabolismos C3/CAM (C.
aemygdioi, C. criuva, C. gardneri, C. intermedia, C. lanceolata e C. marizii) e 4 espcies
CAM (C. burchellii, C. fluminensis, C. hilariana e C. spiritu-sanctensis). No houve
relao entre o ambiente de origem e o tipo de metabolismo fotossinttico, uma vez
que espcies oriundas do mesmo ambiente, como as espcies de mata de galeria do
Cerrado - C. burchellii, C. criuva e C. nemorosa - apresentaram tipos de metabolismo
fotossinttico distintos, sugerindo maior influncia filogentica que ambiental para esta
caracterstica.
As espcies CAM apresentaram folhas mais suculentas devido ao aumento do
nmero de camadas celulares do mesofilo. Outra caracterstica em comum nessas
espcies a presena de poucos e pequenos espaos intercelulares.
Alm do tipo de metabolismo fotossinttico, a variao na disponibilidade de luz
tambm envolveu alteraes nas caractersticas das folhas, sendo observada
plasticidade fenotpica em C. criuva.
Na anlise anatmica das lminas foliares dos espcimes de sol, ocorrem
estmatos menores e em maior proporo, aumento na espessura da cutcula adaxial,
reduo da rea ocupada pelo parnquima palidico, dos espaos intercelulares do
parnquima lacunoso, da quantidade de ductos secretores e de cristais em forma de
drusas. No pecolo, as clulas do crtex possuem volumes maiores nos indivduos de
ambiente de sombra.
As plantas sob maior luminosidade apresentaram menor rea foliar especfica,
esta diferena se deve provavelmente a um aumento da densidade nas folhas em
ambientes iluminados, que apresentaram menor quantidade de espaos intercelulares
e uma maior quantidade de carbono por unidade de rea foliar.
O contedo de clorofila por unidade de rea foliar, bem como por massa seca,
foi significativamente maior nas folhas de sombra, reflete maior investimento na captura
de luminosidade sob baixa irradiao. Entretanto, no houve diferena na eficincia
fotossinttica entre folhas de sol e sombra, apesar das folhas de sol apresentaram
maior atividade metablica, devido a maior fixao de carboidratos e cidos orgnicos,
e valores mais altos de respirao.
124
A presente dissertao apenas o incio de um processo de anlises sobre um

gnero encontrado em uma ampla variedade de ambientes, e que apresenta
importncia econmica (plantas medicinais e ornamentais) e ecolgica (plantas
pioneiras ou facilitadoras da entrada de outras espcies na comunidade), cujas
algumas espcies esto ameaadas de extino. Outro fator que eleva o interesse
neste gnero o fato de apresentar espcies CAM, sendo, at o momento, o nico
registro de uma rvore dicotilednea com adaptao a este metabolismo.
So necessrios vrios estudos adicionais, principalmente com diferentes
espcies do gnero, levando-se em conta aspectos estruturais e fisiolgicos, para
melhorar o processo de identificao das espcies, determinar e isolar os provveis
princpios ativos para o uso medicinal, e encontrar alternativas de conservao.
125
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
_______ IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica. Geografia do Brasil Regio Centro-Oeste. Rio de Janeiro, 1988.
_______ IPEMA Instituto de Pesquisa da Mata Atlntica. Conservao da
biodiversidade da Mata Atlntica do Estado do Esprito Santo. Disponvel em
http://www.biodiversitar.org.br/florabr/ES-especies-ameacadas.pdf; acessado em
28/02/2007.
ALVINO, F. O; SILVA, M. F. & RAYOL, B. P. Potencial de uso das espcies arbreas
de uma floresta secundria, na Zona bragantina, Par, Brasil. Acta Amaznica, v.
35(4), p. 413-420. 2005.
ANDRADE, V. C. DE. O gnero Clusia L. (Clusiacaea Lindley) no Estado de
Pernambuco (Brasil). Recife: Tese de Mestrado.1987
ANDRADE, V. C. DE; MARIZ, G; CAVALCANTI, L. H. & ANDRADE, L. H. C.
Distribuio das espcies do gnero Clusia L. (Clusiaceae) Pernambuco. In:
Tabarelli, M. & Silva, J. M. C (Org.) Diagnstico da biodiversidade de
Pernambuco, Recife. Pernambuco: sectma fundaj. 2002.
ANDRADE-LIMA, D. DE; MAULE, A. F.; PEDERSEN, T. M. & RAHN, K. Marcgrave
Brasilian Herbarium Collected 1638-44. Botanisk Tidsskrift, v. 71, p. 121-160.
1977.
ASCENSO, L. Tcnicas Histoqumicas Convencionais e de Microscopia de
Fluorescncia Aplicadas em Espcies de Cerrado. Univ. Est. Campinas:
Apostila. 2003.
ASSIS, A. M. DE; PEREIRA, O. J. & THOMAZ, L. D. Fitossociologia de uma floresta
de restinga no Parque Estadual Paulo Csar Vimha, Setiba municpio de Guarapari
(ES). Revista Brasil. Bot., v. 27(2), p. 349-361. 2004.
BARROSO, G. M. Sistemtica de angiospermas do Brasil, v.1 LTC/EDUSP Editora
da Universidade de So Paulo. 1978.
BARTHLOTT, W.; NEINHUIS, C.; CUTLER, D.; DITSCH, F. THEISEN, I. & WILHELMI,
H. Classification and terminology of plant epicuticular waxes. Botanical Journal of
the Linnean Society, v. 126, p. 237-260. 1998.
BERG, A.; ORTHEN, B.; MATTOS DE E. A.; DUARTE, H. M. & LTTGE, U.
Expression of crassulacean acid metabolism in Clusia hilariana Schlechtendal in
different stages of development in the field. Trees, v. 18, p. 553-558. 2004.
BERGMEYER, H. U. & BRENT, E. Methods of Enzymatic analysis, In: Bergmeyer HU,
editors, Verlag Chemie Weinhein, New York: Academic Press, p. 735-760. 1974.
BOEGER, M. R. T.; ALVES DE BRITO, C. J. F. & NEGRELLE, R. R. B. Relao entre
caractersticas morfo-anatmicas foliares e esclerofilia em oito espcies arbreas de
um trecho de floresta pluvial Atlntica. Arq. Biol. Tecnol., v. 40 (2), p. 493-503.
1997.
BORLAND, A. M.; TECSI, L. I.; LEEGOOD, R. C. & WALKER, R. P. Inducibility of
crassulacean acid metabolism (CAM) in Clusia species; physiological/biochemical
126
characterization and intercellular localization of carboxylation and descarboxylation

processes in three species which exhibit different degrees of CAM. Planta, v. 205, p.
342-351. 1998.
BOZZOLA, J. J. & RUSSEL, L. D. Electron Microscopy: principles and techniques for
biologists. Boston: Jones and Bartlett Publishers. 1992.
BRADSHAW, A. D. Evolutionary significance of phenotypic plasticity in plants.
Advances in Genetics, v. 13, p. 115-155. 1965.
CAO, K. F. Leaf anatomy and chlorophyll content of 12 woody species in contrasting
light conditions in a Bornean heath forest. Canadian Journal Botany, v. 71(10), p.
1245-1253. 2000.
CAREY, G. Comparative anatomy of leaves from species in two habitats around
Sidney. Proc. Linn. Soc. N. S. Wales, v.63 (5/6), p. 439-450. 1938.
CARLQUIST, S. Comparative Plant Anatomy. New York: Holt, Rinehart and Winston.
1961.
CARMO, R. M. & FRANCESCHINELLII, E. V. Polinizao e biologia floral de Clusia
narrudae Planchon & Triana (Clusiaceae) na Serra da Calada, municpio de
Brumadinho, MG. Revista Brasileira de Botnica, v. 25(3), p. 351-360. 2002.
CHABOT, B. F.; JURIK, T. W. & CHABOT, J. F. Influence of instantaneous and
integrated light-flux density on leaf anatomy and photosynthesis. American Journal
of Botany, v. 66(8), p. 940-945. 1979.
COOPER-DRIVER, G. A & BHATTACHARYA, M. Role of phenolics in plant evolution.
Phytochemistry, v. 40(5), p. 1165-1174. 1998.
CORRA, P. M. Diccionario das plantas teis do Brasil e das exticas cultivadas
por M. Pio Corra. v. 2 .RJ Ministrio da Agricultura. 1931.
CORREIA, M. C. R.; ORMOND, W. T.; PINHEIRO, M. C. B. & LIMA, H. A. Estudo da
biologia floral de Clusia criuva Camb. Um caso de minetismo. Bradea, v. 6(24), p.
209-219. 1993.
CROXDALE, J. L. Stomatal patterning in angiosperms. American Journal of Botany,
v. 87(8), p. 1069-1080. 2000.
CURTIS, J. D. & LERSTEN, N. R. Internal secretory structures in Hypericum
(Clusiaceae): H. Perforatum L. And H. Balearicum L. New Phytologist, v. 114(4), p.
571-580. 1990.
CUTTER, E. G. Anatomia Vegetal Parte I Clulas e Tecidos. So Paulo: Rocca, 2
edio. 1986a.
CUTTER, E. G. Anatomia Vegetal Parte II rgos Experimentos e Interpretao.
So Paulo: Rocca. 1986b.
DARCY, W. G. D & KEATING, R. C. Anatomical support for the taxonomy of
Calophyllum (Guttiferae) in Panama. Annals of the Missouri Botanical Garden, v.
66 (3), p. 557-571. 1979.
DENTON, M. F. SEM analysis of leaf epicuticular waxes of Sedum section Gormania
(Crassulaceae). Brittonia, v. 46(4), p. 296-308. 1994.
127
DAZ-CARBALLO, D.; SEEBER, S.; STRUMBERG D. & HILGER, R. A. Novel

antitumoral compound isolated from Clusia rosea. International Journal of Clinical
Pharmacology and Therapeutic, v. 41(12), p. 622-623. 2003.
DICKISON, W. C. & WEITZMAN, A. L. Comparative anatomy of the young stem, node,
and leaf of Bonnetiaceae, including observations on a foliar endodermis. American
Journal of Botany, v. 83(4), p. 405-418. 1996.
DUNN, D. B.; SHARMA, G. K. & CAMPBELL, C. C. Stomatal patterns of dicotyledons
and monocotyledons. American Midland Naturalist, v. 74(1), p. 185-195. 1965.
EAMES, A. J. & MACDANIELS, L. H. An Introduction to Plant Anatomy. New York:
McGraw-Hill. 1947.
ECKERSON, S. H. The number and size of the stomata. Botanical Gazette, v.46 (3),
p. 221-224. 1908.
ENDT, D. V.; KIJNE, J. W. & MEMELINK, J. Transcription factors controlling plant
secondary metabolism: what regulates the regulators? Phytochemistry, v. 61, p.
107-114. 2002.
ESAU, K. Anatomia das Plantas com Sementes; traduo: Berta Lange de Morretes.
So Paulo: Edgard Blucher. 1974.
ESPRITO SANTO, A. DO & PUGIALLI, H.R.L. Estudo da plasticidade anatmica de
Stromanthe thalia (Vell.) J.M.A. Braga (Marantaceae) em dois ambientes de Mata
Atlntica. Rodrigusia, v. 50(76/77), p.109-124. 1999.
EVANS, J. R. Leaf anatomy enables more equal access to light and CO2 between
chloroplasts. New Phytologist, v. 143, p. 93-104. 1999.
FAHN, A. Anatomia Vegetal. Madrid: Pirstarchs. 1982.
FAHN, A. Secretory tissues in vascular plants. New Phitol, v. 108, p. 229-257. 1988.
FAHN, A. Structure and Function of secretory cells. Advances in Botanical
Research, v. 31, p. 37-75. 2000.
FEDER, N. & OBRIEN, T. P. Plant microtechnique: some principles and new methods.
Amer. J. Bot., v. 55(1), p. 123-142. 1968.
FIGLIUOLO, R. A floresta e os produtos qumicos naturais. Acta Amaznica, v. 9(4),
p. 165-172. 1979.
FIGUEIRA, J. M.; BARBOSA, D. C. A. & SIMABUKURO, E. A. Crescimento de folhas
jovens de Myracrodruon urundeuva Allemo (Anacardiaceae) sob diferentes
regimes hdricos. Acta bot. bras., v. 18 (3), p. 573-580. 2004.
FINLEY, D. S. Patterns of calcium oxalate crystals in young tropical leaves: a possible
role as an anti-herbivory defense. Revista de Biologia Tropical, v. 47(12), p. 2731. 1999.
FRANCO, A. C.; BALL, E. & LTTGE, U. Patterns of gas exchange and organic
oscillations in tropical trees of the genus Clusia. Oecologia, v. 85, p. 108-114. 1990.
FRANCO, A. C.; OLIVARES, E.; BALL, E.;LUTTGE, U. & HAAG-KERWER, A. In situ
studies of crassulacean acid metabolism in several sympatric species of tropical
trees of the genus Clusia. New Phytol, v. 126, p. 203-211. 1994.
128
GEESKE, J.; APLET, G. & VITOUSEK, P. M. Leaf morphology along environmental

gradients in hawaiian Metrosideros polymorpha. Biotropica, v. 26(1), p. 17-22.
1994.
GEHRIG, H. H.; ARANDA, J.; CUSHMAN, M. A.; VIRGO A.; CUSHMAN, J.C.;
HAMMEL, B. E. & WINTER, K. Cladogram of Panamanian Clusia based on nuclear
DNA: implications for the origins of crassulacean acid metabolism. Plant biol., v. 5,
p. 59-70. 2003.
GINDEL, I. Stomatal number and size as related to soil moisture in tree xerophytes in
Israel. Ecology, v. 50(2), p. 263-267. 1968.
GIVNISH, T. J. Adaptation to sun and shade: a whole-plant perspective. Australian
Journal of Plant Physiology, v. 15, p. 63-92. 1988.
GONZLEZ, M. G. & MATAMOROS, O. M. Efecto del extracto acuoso de las hojas de
"copey", Clusia coclensis (Clusiaceae) sobre la respuesta del reflejo barorreceptor
en ratas. Journal of the Tropical Biology, v. 45(3), p. 993-998. 1997.
GOULET, F. & BELLEFLEUR, P. Leaf morphology plasticity in response to light
environment in deciduos tree species and its implication on forest sucession.
Canadian Journal of Forest Research, v.16, p. 1192-1195. 1986.
GUSTAFSSON, M. H. Floral morphology and relationships of Clusia gundlachii with a
discussion of floral organ identity and diversity in the genus Clusia.
Int. J. Plant Sci., v. 161(1), p. 43-53. 2000.
GUSTAFSSON, M. H. G.; BITTRICH, V. & STEVENS, F. Phylogeny of Clusiaceae
based on rbcL sequences. Internationa Journal of Plant Sciences, v. 163,
p.10451054. 2002.
HAAG-KERWER, A.; FRANCO, A. C. & LTTGE, U. The Effect of Temperature and
Light on Gas Exchange and Acid Accumulation in the C3-CAM Plant Clusia minor L.
Journal of Experimental Botany, v.43, p. 345-352. 1992.
HABERLANDT, G. Physiological Plant Anatomy. Londres: MacMillan. 1928.
HANBA, Y. T.; KOGAMI, H. & TERASHIMA, I. The effect of growth irradiance on leaf
anatomy and photosynthesis in Acer species differing in light demand. Plant, Cell
and Environment, v. 25(8), p. 1021-1030. 2002.
HELBSING, S.; RIEDERER, M. & ZOTZ, G. Cuticles os vascular epiphytes: efficient
barriers for water loss after stomatal closure?. Annals of Botany, v. 86, p. 765-769.
2000.
HERRMANN, K. M. & WEAVER, L. M. The shikimate pathway. Annual Review of
Plant Physiology and Plant Molecular Biology, v. 50, p. 473-503. 1999.
HERZOG, B.; GRAMS, T. E. E,; HAAG-KERWER, A.; BALL, E.; FRANCO, A.C. &
LUTTGE,U. Expression of modes of photosynthesis (C-3, CAM) in Clusia criuva
Camb. in a Cerrado gallery forest transect. Plant Biology, v. 1, p. 357-364. 1999.
HICKEY, L. J. Clasificacion de la arquitectura de las hojas de dicotiledoneas. Boletin
de la sociedad Argentina de Botnica, v. 16(2), p. 1-26. 1974.
HICKEY, L. J. A revised classification of the architecture of dicotyledonous
leaves. p. 25-39, In Metcalfe, C. R., & Chalk, L. (eds), Anatomy of the Dicotyledons.
129
Second Edition. v.1. Systematic Anatomy of Leaf and Stem, With a Brief History of
the Subject. Oxford: Clarendon Press. 1979.
HUTCHINSON, J. Evolution and Phylogeny of Flowering Plants. Dicotyledons:
Fact and Theory. Londres: Academic Press. 1969.
JENSEN, W. A. Botanical histochemistry: principles and pratices. San Francisco:
W.H. Freeman. 1962.
JOHANSEN, D. A. Plant Microtechnique. New York: Mc Graw Hill Book. 1940.
JONES, H. G. Stomatal control of photosynthesis and transpiration. Journal of
Experimental Botany, v. 49, p. 387-398. 1998.
JUDD, W. S.; CAMPBELL, C. S. ; KELLOG, E. A. & STEVENS, P. F. Plant
Systematics a phylogenetic approach. Sunderland, Massachusetts: Sinauer
Associates, Inc. 1999.
JUSTO, C. F.; SOARES, A. M.; GAVILANES, M. L. & CASTRO, E. M. Plasticidade
anatmica das folhas de Xylopia brasiliensis Sprengel (Annonaceae). Acta Bot.
Bras., v.19(1), p. 111-123. 2005.
KAISER, E. Verfahren zur Herstellung Einer Tadellosen Glycerin Gelatine.
Botanisch Zentralb, v. 180, p. 25-26. 1880.
KAUL, R. B. The role of the multiple epidermis in foliar succulence of Pepermia
(Piperaceae). Botanical Gazette, v. 138(2), p. 213-218. 1977.
KOROLEVA, O. A.; FARRAR, J. F.; TOMOS, A. D. & POLLOCK, C. J. Patterns of
solute in individual mesophyll, bundle sheath and epidermal cells of barley leaves
induced to accumulate carbohydrate. New Phytologist, v. 136(1), p. 97-104. 1997.
KRAUS, J.E. & ARDUIN, M. Manual Bsico em Mtodos em Morfologia Vegetal.
Rio de Janeiro: EDUR. 1997.
LANGERON, M. Prcis de Microscopie, ed. 7. Paris: Masson & Cie. 1949.
LEVIN, D. A. Plant phenolics: an ecological perspective. The American Naturalist, v.
105(942), p. 157-181. 1971.
LINDER, S. A proposal for the use of standardised methods for chlorophyll
determination in ecological and ecophysiological investigations. Physiologica
Plantarum, v. 32, p. 154-156. 1974.
LIS, R. A. Leaf architectural survey of Cercocarpus (Rosaceae) and its systematic
significance. Intenational Journal of Plant Sciences, v. 153(2), p. 258-272. 1992.
LUQUE, R.; SOUSA, H. C. & KRAUS, J. E. Mtodos de colorao de Roeser (1972)
modificado e Kropp (1972) visando a substituio do azul de astra por azul de
alcio 8GS ou 8GX. Acta bot. Bras., v. 10(2), p. 199-212. 1996.
MACHADO, M.M.P. Estudo sobre a anatomia foliar de Clusia lanceolata Cambess.
Rio de Janeiro: Tese de Mestrado. 1980.
MACHADO, M. M. P. & EMMERICH, M. Presena de colteres em Clusia lanceolata
Cambess. Bol. Mus. Nac. Bot., v. 59, p. 1-7. 1981.
130
MAGUIRE, B. A revision of Clusia L. section Cochlanthera (Choisy) Engler. Caldasia,

v. 11(55), p. 129-146. 1977.
MARIZ, G. Chaves para as espcies de Clusia nativas no Brasil. Mem. Inst. Bioc.
Univ. Fed. Pe., v. 1(1), p. 249-314. 1974.
MARIZ, G. & WEINBERG, B. Clusia spiritu-sanctensis uma espcie nova de
Guttiferae. Bradea, v. 3(29), p. 223-228. 1982.
MEDINA, G.; AGUIAR, G.; GMEZ, M. & MEDINA, J. D. Patterns of leaf epicuticular
waxes in species of Clusia: taxonomical implications. Interciencia. v. 29 (10), p.
579-582. 2004.
MESQUITA, R. C. G. & FRANCISCON, C. H. Flower visitors of Clusia nemorosa G. F.
W. Meyer (Clusiaceae) in an amazonian white-sand campina. Biotropica, v. 27, p.
254-258. 1995.
METCALFE, C. R. Secretes mineral substances, pp.82-97. In C. R. Metcalfe & L.
Chalk, Anatomy of the dicotyledons, v. II, Oxford: Clarendon Press. 1983.
METCALFE C. R. & CHALK, L.
Clarendon Press. 1983.
Anatomy of the dicotyledons, v. II, Oxford:
MONTENEGRO, G. JORDAN, M. & ALJARO, E. Interactions between Chilean

matorral shrubs and phytophagous insects. Oecologia, v. 45, p. 346-349. 1980.
MORITA, T. & ASSUMPO, M. V. Manual de Solues, Reagentes e Solventes
padronizao, preparao, purificao. So Paulo: Edgard Blcher LTDA. 1972.
MORRETES, B. L. DE & FERRI, M.G. Contribuies ao conhecimento da anatomia de
folhas de uma caatinga do Rio Negro (Amazonas). Revista de Biologia, v. 8(14),p. 97-122. 1972.
MUENSCHER, W. L. C. A study of the relation of transpiration to the size and number
of stomata. American Journal of Botany, v. 2(9), p. 487-504. 1915.
NIINEMETS, . Distribution of foliar carbon and nitrogen across the canopy of Fagus
sylvatica: adaptation to a vertical light gradient. Acta Oecologica, v. 16, p. 525-541.
627-635. 1995.
NOGUEIRA, P. C.; BITTRICH, V.; SHEPHERD, G. J.; LOPES, A. V. & MARSAIOLI, A.
J. The ecological and taxonomic importance of flower volatiles of Clusia species
(Guttiferae). Phytochemistry, v. 56(5), p. 443-452. 2001.
OLIVEIRA, C. M. A.; PORTO, A. M.; BITTRICH, I. V. & MARSAIOLI, A. J. Floral resin
of Clusia spp.: chemical composition and biological function. Tetrahedron Letters,
v. 37(36), p. 6427-6430. 1996.
PAIVA, J. G. A; FANK-DE-CARVALHO, S. M.; MAGALHES, M. P. & GRACIANORIBEIRO, D. Verniz vitral 500*: uma alternativa de meio de montagem
economicamente vivel. Acta Bot. Bras., v. 20, p. 257- 264. 2006.
PAULA, J. E. DE. Notas sobre anatomia de Clusia grandiflora Splitg. (Guttiferae). Inst.
Nac. Pesq. Amaz. Bot., v. 22, p. 1-24. 1966.
PAULA, J. E. DE. Anatomia de madeira. Guttiferae. Acta Amaznica, v. 4(1), p. 2764. 1974a.
131
PAULA, J. E. DE. Estmatos de Guttiferae estudo morfolgico, dimensional e

quantitativo. Acta Amaznica, v. 4(1), p. 23-39. 1974b.
PAULA, J. E. DE. Anatomia de Lorostemon coelhoi Paula, Caraipa valioi Paula e
Clusia aff. macropoda Klotzch. Acta Amaznica, v. 6(3), p. 273-291. 1976.
PAVIANI, T. I. Anatomia vegetal e Cerrado. Cincia e Cultura, v. 30(9), p. 1076-1986.
1978.
PAVIANI, T. I. Situao da anatomia ecolgica no Brasil. Cincia e Cultura, v. 36(6),
p. 927-932. 1984.
PIPOLY, J. J.; KEARNS, D. M. & BERRY, P. E. Clusia. In Flora of the Venezuelan
Guayana, v.4, Caesalpiniaceae-Ericaceae (Berry, P. E.; Holst, B. K.; Yattskievych,
K., eds.), St. Louis, Missouri: Missouri Botanical Garden Press, p. 260-294. 1998.
PIZZOLATO, T. D. Staining of Tilia Mucilages with Mayer's Tannic Acid-Ferric Chloride.
Bulletin of the Torrey Botanical Club., v. 104(3), p.277-279. 1977.
PLANCHON, J. & TRIANA, J. Memoire sur la famille ds Guttifres. Annales des
Sciences Naturelles. Paris. 1860. In: Andrade, V. C. de. O gnero Clusia L.
(Clusiacaea Lindley) no Estado de Pernambuco (Brasil). Recife: Tese de
Mestrado. 1987
POSER, G. L. & MENTZ, L. A. Diversidade biolgica e sistemas de classificao. In:
Simes, C. M. O.; Schenkel, E. P.; Gosmann, G.; Mello, J. C. P. De; Mentz, L. A.;
Petrovick, P. R. Farmacognosia da planta ao medicamento. 3 ed. Porto
Alegre/Florianpolis: UFRGS/UFSC. 2001.
PREISS, J. & SIVAK, M. N. Starch synthesis in sinks and sources. In: Zamsky, E. &
Schaffer, A. A. Photoassimilate distribution in plants and crops: source-sink
relationships. New York: Marcel Dekker Inc. 1996.
PRYCHID, C. J. & RUDALL, P. J. Calcium oxalate crystals in monocotyledons:
structure and systematics. Annals of Botany, v. 84(6), p. 725739. 1999.
PYYKK, M. The leaf anatomy of east Patagonian xeromorphic plants. Ann. Bot.
Fenn., v. 3(4), p. 453-622. 1966.
RAVEN, P. H.; EVERT, R. F. & EICHHORN, S. E. Biologia Vegetal. 5 ed. Rio de
Janeiro: Guanabara-Koogan. 1996.
ROBERTS, A.; BORLAND, A. M.; MAXWELL, K. & GRIFFITHS, H. Ecophysiology of
the C-3-CAM intermediate Clusia minor L. in Trinidad: seasonal and short-term
photosynthetic characteristics of sun and shade leaves. Journal of Experimental
Botany, v. 49(326), p. 1563-1573. 1998.
ROTH-NEBELSICK, A.; UHL, D.; MOSBRUGGER, V. & KERP, H. Evolution and
function of leaf venation architecture: a review. Annals of Botany, v. 87, p. 553-566.
2001.
SACK, F. & PAOLILLO, Jr., D. J. Structure and development os walls in Funaria
stomata. American Journal of Botany, v. 70(7), p. 1019-1030. 1983.
SALATINO, A.; MONTENEGRO, G. & SALATINO, M. L. F. Microscopia eletrnica de
varredura de superfcies foliares de espcies lenhosas do Cerrado. Revista
Brasileira de Botnica, v. 9, p. 117-124. 1986.
132
SCHNEIDER, S. Z. Anatomia foliar de Clusia hilariana Schlecht. e Clusia spiritusanctensis G. Mariz et Weinberg (Guttiferae) ocorrentes no estado do Esprito
Santo. Rio de Janeiro: Tese de Mestrado. 1985.
SCHREIBER, L. & RIEDERER, M. Ecophysiology of cuticular transpiration:
comparative investigation of cuticular water permeability of plant species from
different habitats. Oecologia, v. 107, p. 426-432. 1996.
SILVA, A. G. DA & WEINBERG, B. Clusia marizii, uma nova espcie de Guttiferae
para o Esprito Santo, Brasil. Bradea, v. 4(4), p. 21-26. 1984.
SILVA, A. G. DA & WEINBERG, B. Clusia aemygdioi, uma nova espcie de Guttiferae
do Espirito Santo, Brasil. Bradea, v. 4(24), p. 161-164. 1985.
SKOSS, J. D. Structure and composition of plant cuticle in relation to environmental
factors and permeability. Botanical Gazette, v.117, p. 55-72. 1955.
SOBRADO, M. A. & MEDINA, E. General morphology, anatomical structure, and
nutrient content of sclerophyllous leaves of the Bana vegetation of Amazonas.
Oecologia, v. 45, p. 341-345. 1980.
SOLEREDER, H. Systematic anatomy of dicotyledons. Oxford: Claredon Press, v.
1. 1908.
SOUZA, W. Tcnicas bsicas de microscopia eletrnica aplicadas s cincias
biolgicas. Rio de Janeiro: Sociedade Brasileira de Microscopia. 1998.
STACE, C. A. Cuticular studies as an aid to plant taxonomy. Bull. British Mus. Nat.
Hist., v. 4, p. 3-78. 1965.
STEVENS, P. F. Angiosperm Phylogeny Website. version 7, 2006; acessado em
26/02/2007.
TING, I. P.; HANN, J..; HOLBROOK, N. M.; PUTZ, F. E.; STERNBERG, L. DA S. L.;
PRICE, D. & GOLDSTEIN, G. Photosynthesis in hemiepiphytic species of Clusia
and Ficus. Oecologia, v. 74, p. 339-346. 1987.
TING, I. P.; LORD, E. M.; STERNBERG, L. DA S. L. & DENIRO, M. J. Crassulacean
acid metabolism in the strangler Clusia rosea Jacq. Science, v. 229, p. 969-971.
1985.
VAN COTTHEM, W. A classification of stomatal types. Botanical Journal of the
Linnean Society, v. 63, p. 235-246. 1970.
VESQUE, J. La tribu ds Clusies. Journal de Botanique, v. 7(1), p. 69-72. 1893.In:
Schneider, S.Z. Anatomia Foliar de Clusia hilariana Schlecht. e Clusia spiritusanctensis G. Mariz et Weinberg (Guttiferae) Ocorrentes no Estado do Esprito
Santo. Rio de Janeiro: Tese de Mestrado. 1985.
VIEIRA, C. M. & SILVA, A. G. Clusia studartiana, uma nova espcie de Clusiaceae
para o Rio de Janeiro, Brasil. Bradea, v. 6(10), p. 69-73. 1992.
VOLTAN, R. B. Q.; FAHL, J. I. & CARELI, M. L. Variao na anatomia foliar de
cafeeiros submetidos a diferentes intensidades luminosas. Revista Brasileira de
Fisiologia Vegetal, v. 4(2), p. 99-105. 1992.
133
WILKINSON, H. P. The plant surface (mainly leaf). In C. R. Metcalfe & L. Chalk,

Anatomy of the dicotyledons, v. II, Oxford: Clarendon Press. 1983.
WYLIE R. B. Differences in foliar organization among leaves from four locations in the
crown of an isolated tree (Acer platanoides). Proc. Iowa Acad. Sci., v. 56, p. 189198. 1949.
YAMASHITA, N.; KOIKE, N. & ISHIDA, A. Leaf ontogenetic dependence of light
acclimation in invasive and native subtropical trees of different successional status.
Plant, Cell and Environment, v. 25(10), p. 1341-1356. 2002.
YEZ-ESPINOSA, L.; TERRAZAS, T.; LPEZ-MATA L. & VALDEZ-HERNNDEZ, J.
I. Leaf trait variation in three species through canopy strata in a semi-evergreen
Neotropical forest. Canadian Journal of Botany, v. 81(4), p. 398404. 2003.
YANG, ZR. & LIN, Q. Comparative morphology of the leaf epidermis in Schisandra
(Schisandraceae). Botanical Journal of the Linnean Society, v. 148, p. 39-56.
2005.
134

Artigo Cientifico

Enviado por

Dados do documento

Título original

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Artigo Cientifico

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Universidade de Braslia

Morfologia, Anatomia, Histoqumica e Aspectos Fisiolgicos da

Dissertao apresentada como requisito parcial

SILVIA DIAS DA COSTA FERNANDES

SILVIA DIAS DA COSTA FERNANDES

Morfologia, Anatomia, Histoqumica e Aspectos Fisiolgicos da

Dissertao apresentada como requisito parcial

Orientadora: Prof Dr Dalva Graciano Ribeiro

MORFOLOGIA, ANATOMIA, HISTOQUMICA E ASPECTOS

Dissertao aprovada como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em

Prof. Dr. Augusto Csar Franco

Prof Dr Letcia de Almeida Gonalves

Prof Dr Sueli Maria Gomes

Braslia/DF, maro de 2007

laboratrio de Fisiologia e, especialmente, ao laboratrio de Anatomia agradeo a

Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de nvel Superior (CAPES),

CAPTULO 4 EFEITO DA IRRADIAO SOLAR NA ESTRUTURA, FOTOSSNTESE

- Aspectos morfolgicos das espcies......................................................11

Morfologia, Anatomia, Histoqumica e Aspectos Fisiolgicos da

Morphology, Anatomy, Histochemistry and Physiological Aspects of

Silvia Dias da Costa Fernandes

espcies so forma e angularidade da nervura principal, presena ou ausncia de

encontradas como ferramentas para o estudo taxonmico do gnero, por meio

espcies em estgio vegetativo;

Silvia Dias da Costa Fernandes

onde se originam, auxiliando, desta maneira, na caracterizao ecofisiolgica

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

As espcies deste gnero, alm do valor ornamental (Andrade, 1987), tambm

Silvia Dias da Costa Fernandes

et al. (2002), quando estudaram a filogenia de Clusiaceae baseada em seqncias do

CARACTERIZAO DAS ESPCIES

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

analisaram a presena de colteres na regio proximal do pecolo de C. lanceolata,

Silvia Dias da Costa Fernandes

externas, medula parenquimtica do cilindro vascular do pecolo escassa ou ausente e

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

Clusia criuva: 62680, 62687, 62691, 62692, 62743, 64748;

Clusia gardneri: 62679, 62685, 62686, 62690, 62746;

Clusia nemorosa: 63432.

Silvia Dias da Costa Fernandes

As duplicatas foram submetidas para o herbrio da Universidade de Braslia

Silvia Dias da Costa Fernandes

CAPTULO 1 - MORFOLOGIA, ANATOMIA E HISTOQUMICA

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

Resultados - Morfologia da Lmina Foliar

Silvia Dias da Costa Fernandes

Todas as folhas possuem margem inteira (Figs. 2 e 3), base levemente

Silvia Dias da Costa Fernandes

reto. Clusia lanceolata apresenta cerca de 10 pares de nervuras secundrias; C.

Silvia Dias da Costa Fernandes

primria. A disposio desta veia perifrica em C. criuva, C. insignis e C. nemorosa

Resultados - Anatomia da Lmina Foliar

independentemente de possuir ornamentaes ou no, penetra por entre as paredes

Silvia Dias da Costa Fernandes

Silvia Dias da Costa Fernandes

As clulas do tecido fundamental (Figs. 13c-13h) de todas as espcies so