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UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE, FACULTAD DE CIENCIAS APLICADAS INGENIERA EN BIOTECNOLOGA, SANGOLQU - ECUADOR.

Obtencin de plantas libres de enfermedades mediante el


cultivo de meristemos de Gladiolo (Gladiolus imbricatus) y
Cartucho (Zantedeschia aethiopica)
Hernndez J.* y Paredes P.*
*Estudiante de la carrera de Ingeniera en Biotecnologa. Universidad de las Fuerzas Armadas.
jlhernandez@espe.edu.ec
Sangolqu- Ecuador
Febrero de 2015
Resumen Los virus y patgenos en general producen grandes prdidas en los cultivos de especies
vegetales, gran parte de estos patgenos se transmiten desde la planta madre a la planta hija, sin embargo con
la regeneracin de plantas in vitro a partir del cultivo de meristemos se puede evitar contaminacin de la
planta hija y obtenerse plantas libres de enfermedades, esta tcnica se suele utilizar para clonacin,
conservacin de plantas ya que se aprovechan algunas de las ventajas que poseen los tejidos meristemticos
con respecto a la contaminacin por agentes patgenos. En el presente trabajo se obtuvieron meristemos de
dos plantas ornamentales: el gladiolo (Gladiolo inbricatus) y el cartucho (Zantedeschia aethiopica), los
cuales fueron cultivados en medio MS enriquecido. Se pudo apreciar que la generacion de brotes a partir de
meristemos, fue exitoso en dos de los tres explantes de Gladiolo (Gladiolus imbricatus), mientras que en
cartucho fue exitoso en todos los expantes de Cartucho (Zantedeschia aethiopica).
Palabras Clave- Meristemos, gladiolo, cartucho, in vitro
Abstract- Viruses and pathogens generally produce large crop losses of vegetal species, most of these
pathogens are transmitted from the mother plant to daughter plant, however with regeneration in vitro from
meristem culture you can avoid contamination of the daughter plant and we can obtain disease-free plants,
this technique is often used for cloning, plant conservation and takes advantage of some meristematic tissues
characteristics about contamination by pathogens. In the present work were obtained meristems of two
ornamental plants: gladiolus (Gladiolus inbricatus) and cartridge (Zantedeschia aethiopica), which were
cultured on enriched MS medium. We observed that the generation of shoots from meristems, was successful
in two of the three explants Gladiolus (Gladiolus imbricatus), while in cartridge was successful in all
expantes Cartridge (Zantedeschia aethiopica).
Key words-. Meristems, gladiolus, cartridge, in vitro

INTRODUCCIN
Los virus en las plantas producen grandes prdidas
en los cultivos, una gran parte de patgenos no se
trasmiten por semilla lo que produce que las
especies que se multiplican por esta va logren
librarse de ellos de forma natural, sin embargo
cuando las especies se propagan de manera agmica,
los virus son transmitidos con alta eficiencia desde
la planta madre hasta a su descendencia (Conci,
2010).
Segn Conci, 2010, muchas especies se han liberado

de patgenos a travs de la regeneracin de plantas


invitro, el cultivo in vitro de tejidos permite obtener
plantas libres de enfermedades y propagar
masivamente material vegetal en cualquier poca
del ao, conservando su potencial gentico y calidad
sanitaria (Mujib et al. 2004).
El sistema con ms uso debido al xito que ofrece es
el cultivo de meristemos, esta tcnica consiste en
aislar el meristemo y sembrarlo en un medio de
cultivo que posibilite el desarrollo de una planta
completa (Ayabe y Sumis, 2001).

ESTABLECIMIENTO DE CALLOGNESIS A PARTIR DE RAZ DE ZANAHORIA (DAUCUS CAROTA)

El cultivo de meristemos se ha utilizado con xito


para distintos objetivos, los ms frecuentes son la
rpida clonacin, conservacin de germoplasma a baja
temperatura y la obtencin de plantas libres de
patgenos sistmicos (Fraccioli y Marani, 1998). Los
meristemos poseen pocos o ningn virus, esto debido
a tres razones principales: Su sistema vascular es poco
diferenciado, posee una elevada actividad metablica
y al poseer una elevada concentracin de 2,4.D, se
inhibe la multiplicacin de los virus (Hernndez,
2001)

Las muestras fueron sumergidas en 500 mL de una


solucin de detergente al 2% p/v a la que se aadieron
tres gotas de tween 20 y se mantuvieron en agitacin
durante 20 minutos, luego se lav las muestras dos
veces con agua destilada y una con agua estril. A
continuacin se las sumergi en 500 mL de una
solucin de cloro al 2.5% v/v a la cual se le aadieron
3 gotas de Tween 20 y se las mantuvo en agitacin
durante 10 min. Inmediatamente se trasladaron las
muestras a la sala de siembra.

El gladiolo (Gladiolo inbricatus), es una especie en


peligro de extincin perteneciente a las comunidades
vegetales de praderas hmedas, este es originario del
centro
de
Europa
donde
ha
disminuido
considerablemente, pertenece al grupo de las geofitas
debido a que es una planta perene con rgano de
almacenamiento subterneo (Kubcova y Zeidler,
2011).
El cuartucho (Zantedeschia aethiopica), posee un
rgano basa subterrneo conocido como rizoma, una
formacin constituida a partir del tallo, crece paralelo
al suelo y presenta ms de una yema por estructura, el
cartucho es una de las plantas ms conocidas a nivel
mundial y proviene de africa a pesar de ser venenosa,
estudios han demostrado que puede ser muy til en
sistemas de humedales artificiales para limpiar aguas
residuales y evitar el crecimiento de algas (Belmont y
Metcalfe, 2003).

Siembra e incubacin: Se realizaron tres lavados con


agua destilada estril dentro de la cmara, se retiraron
los explantes del agua y se realizaron cortes para
retirar las capas de tejidos hasta llegar al meristemo.
Se coloc un explante por frasco de medio, se flame
la boca del frasco y se cerr con dos capas de plstico
para cocina y ligas de hule.
Se evalu la contaminacin despes de una semana y
se registraron los datos las semanas siguientes.
Finalmente se flameo la boca del frasco y se sell con
2 capas de plstico para cocina y ligas de hule. Se
incub en luz y se realizaron evaluaciones semanales.
RESULTADOS
Se realizaron evaluaciones semanales de los explantes
para controlar en primer lugar contaminacin y luego
el nmero de brotes as como variaciones en la forma,
color y grosor (Tabla 1.)

El objetivo del presente trabajo fue la obtencin de


plantas libres de enfermedades mediente el cultivo de
meristemos de Gladiolo (Gladiolo inbricatus) y de
cartucho (Zantedeschia aethiopica) en medio MS
enriquecido con 2mg/L de KIN y 0.5mg/L de AIA.
MATERIALES Y MTODOS
Preparacin de la sala de siembra: Se desinfect el
piso con Kalipto, seguidamente se limpiaron las
cmaras de siembra con papel toalla estril y alcohol
al 90%. Se introdujo en la cmara todo el material
para luego encender las lmparas UV de las cabinas
de flujo durante 20 min.
Muestreo y desinfeccin: Los explantes de gladiolo y
de cartucho se obtuvieron a partir de bulbos de las
respectivas plantas, los cuales fueron lavados para
eliminar los residuos de tierra.

Tabla 1. Resultados evaluacin cualitativa

DPT. CIENCIAS DE LA VIDA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

Fig2: En las siguiente imagen se muestran los


explantes de Cartucho , en los frascos 1, 2, las fotos
fueron tomadas el 21 de Enero de 2015.

Fig3: En las siguiente imagen se muestran los


explantes de Gladiolo , en los frascos 1, 2, las fotos
fueron tomadas el 28 de Enero de 2015.

Fig4: En las siguiente imagen se muestran los


explantes de Cartucho , en los frascos 1, 2, las fotos
fueron tomadas el 28 de Enero de 2015.
Grafico Estadstico 1: En el siguiente grafico se
muestra el porcentaje de brotes que se generaron de
los explantes de Gladiolo.
Fig1: En las siguiente imagen se muestran los
explantes de Gladiolo , en los frascos 1, 2, las fotos
fueron tomadas el 21 de Enero de 2015.

Brotes Obtenidos
2.5
2

Brotes
Exitosos

1.5

Brotes Fallidos

1
0.5
0

Explantes
DPT. CIENCIAS DE LA VIDA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

ESTABLECIMIENTO DE CALLOGNESIS A PARTIR DE RAZ DE ZANAHORIA (DAUCUS CAROTA)

Grafico Estadstico 2: En el siguiente grafico se


muestra el porcentaje de brotes que se generaron de
los explantes de Cartucho.

Conclusiones:

Se pudo apreciar que la generacion de brotes


a partir de meristemos, fue exitoso en dos de
los tres explantes de Gladiolo (Gladiolus
imbricatus), mientras que en cartucho fue
exitoso en todos los expantes de Cartucho
(Zantedeschia aethiopica).

No existe contaminacion en niguno de los


explantes tanto en Gladiolo como en
Cartucho, demostrando buena desinfeccion
de los explantes, y tambien que hubo un buen
manejo de los explantes dentro de camara.

Dos de los tres explantes de Gladiolo


presentan viabilidad para generar a una
planta nueva a partir de mersitemo. Todos los
explantes de Cartucho presentan viabilidad
para generar plantas a partir de meristemos.

Brotes Obtenidos
2.5
2

Brotes
Exitosos

1.5

Brotes Fallidos

1
0.5
0

Explantes

DISCUSIN
Como indican George, Uddin y Titov muchos
radicales libres son liberados a lo largo del proceso de
desinfeccin del explante, el exceso de estos lleva al
dao de tejidos, incluso a la muerte. Siendo as la
presencia de estos radicales los posibles causantes del
dao en los tejidos de los explantes obtenidos en esta
prctica.
Debido al dao que sufrieron los explantes se buscan
soluciones alternativas para futuros ensayos, asi
Yadav explica que la oxidacin de los explantes puede
ser reducida, por medio de la disminucin del proceso
de escisin y esterilizacin, evitando as el prolongado
contacto con los agentes qumicos, en nuestro caso la
solucin de cloro.
Finalmente en nuestro caso particular la prolongada
exposicin de los explantes a la solucin de cloro,
produjeron danos en los tejidos, algo que Wijesekara
indica en sus ensayos donde el agente desinfectante es
el causante del dao en los explantes, se debe realizar
el cambio del mismo para evitar asila muerte de los
mismos. As este autor indica que en su estudio la
utilizacin de NaOCl a diferentes concentraciones y
tiempos, provoco el oscurecimiento de los tejidos,
provocando as su muerte.

BIBLIOGRAFA

Ayabe, M. y Sumi, S., (2001)., A Novel And efficient


tissue culture method-stem-disc dome culture-for
producing virus-free garlic (Allium sativum L.). Plant
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Belmont, M.A. & Metcalfe, C.D. (2003). Feasibility
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http://www.kew.org/science-conservation/plantsfungi/zantedeschia-aethiopica-arum-lily , Consultado
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virus, Cap. IV, Biblioteca Virtual Universal,
Argentina,
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de:
http://www.biblioteca.org.ar/default.asp , Consultado
el: [01/02/15]
DPT. CIENCIAS DE LA VIDA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

Fraccioli, G. y Marani, F. (1998). Virus elimination by


meristem tip culture and tip micrografting: 346-380
in: A. Hadidi, R.K. Khetarpal, and H. Koganezawa.
Plant virus deasease control. The American
Phythopathology Society. St. Paul, Minnesota, USA.
George, E. 1996. Plant propagation by tissue culture;
part 2. In Practice. 2 ed. Exegetics Limited. England.
1361 p.
Hernndez R., (2001). Electrotheraphy Technique
eliminates viral and bacterial infection from plant
shoottip cultures. INIVIT Santo Domingo, Cuba.
Kubcova P., Zeidler M., (2011), Habitat demands
and population characteristics of the rare plant
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(NE Moravia, the Czech Republic), Casopis slezskho
zemskho muzea (A). Volume 60, Issue 2, Pages 154
164, ISSN (Print) 1211-3026, DOI: 10.2478/v10210011-0016-5, November 2011. Recuperado de:
http://www.degruyter.com/view/j/cszma.2011.60.issue
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Mujib, A., Myeong-je C, Predieri, S. y S. Banerjee.
(2004). In Vitro Application in crop improvement.
Enfield, New Hampshire, United States of America.
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Tabiyeh, D; Bernard, F; Shacker, H. (2006).
Investigation of glutathione, salicylic acid and GA3
effects on browning in pistacia vera shoot tips culture.
Acta Horticulturae 726: 201-204.
Seneviratne, P; Wijesekara, G. (1996). The problem of
phenolic exudates in in vitro culture of mature Hevea
brasiliensis. Journal of Plantation Crop 24: 54-62.
Yadav, U; Lal, M; Jaiswal, V. (1990). In vitro
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cuminii L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 21:
87-92.

DPT. CIENCIAS DE LA VIDA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

ESTABLECIMIENTO DE CALLOGNESIS A PARTIR DE RAZ DE ZANAHORIA (DAUCUS CAROTA)

Anexos
1. Realice una table de comparacin entre
los cambios morfolgicos de los ensayos
de su grupo.

Caractersticas

# de brotes

Contaminacin

Meristemos

Tabla 2. Comparacin de cambios morfolgicos

Meristemo 1

NO

Meristemo 2

NO

Oxidacin

Meristemo 3

NO

Generaci
n de hojas

Meristemo 4

NO

Expansin
en
el
meristemo

Meristemo 5

NO

Expansin
en
el
meristemo

2. Cules son las condiciones necesarias


para la propagacin de plntulas libres
de virus?
Para la obtencin de plantas libres de virus se
requiere realizar tcnicas como al termoterapia
o tcnicas in vitro
como el cultivo de
meristemos. La tcnica del cultivo de
meristemos consiste en la diseccin e
incubacin del meristemo apical de una planta
en condiciones de asepsia. Los meristemos

carecen de tejidos vasculares y a encontrarse en


constante divisin mittica se encuentran libres
de patgenos (Roca y Beltran, 1984). El
tamaao del meristemo es el factor ms critico
de esta tcnia y el xito en el saneamiento es
mayor cuando ms pequeo es el explante.
Los requerimiento de los medios de cultivo no
son muy exigentes salvo si se cultiva el domo
meristemtico sin primordios foliares (Lpez y
Cazola, 2006).
3. Porqu es aconsejable utilizar vstagos
en crecimiento para el cultivo de
meristemos?
De este modo se cuenta con certeza con tejido
embrionario con potencial de diferenciacin,
que tiene la capacidad de formar todos los
tejidos de la planta, constituye un punto activo
de crecimiento de yema vegetal y a partir de
este se podr regenerar plntulas completas
(Rafael, 1987)

Bibliografa
Lpez C., y Cazola J.,(2006), Saneamiento de
material vegetal: Cultivo de Meristemos.
Recuperado
de:
http://www.encuentros.uma.es./encuentros41/mer
istemos.html
Rafael M., (1987), Regeneracin in vitro de
explantes caulinares de cafeto (Cofiea arabica)
Caracas, Vnezuela: Escuela de Biologa, Facultad
de Ciencias, Universidad Central de Venzuela.
Roca W., Beltran J.,(1984), Cultivo de
meristemos
para
la
conservacin
de
germoplasma de yuca in vitro.Cali, Colombia:
CIAT.

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