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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

FACULDADE DE VETERINRIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS VETERINRIAS

AVALIAO TOXICOLGICA DA PREPARAO FITOTERPICA CONTENDO


Piper methysticum FORST, PIPERACEAE (kava kava) SOBRE O
DESENVOLVIMENTO PR-NATAL EM RATOS WISTAR

Viviane Machado Pinto


Orientao: Dr. Joo Roberto Braga de Mello

Porto Alegre, 2004

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL


FACULDADE DE VETERINRIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS VETERINRIAS

AVALIAO TOXICOLGICA DA PREPARAO FITOTERPICA CONTENDO


Piper methysticum FORST, PIPERACEAE (kava kava) SOBRE O
DESENVOLVIMENTO PR-NATAL EM RATOS WISTAR

Autora: Viviane Machado Pinto


Dissertao apresentada como requisito
parcial para obteno do grau de Mestre
em Cincias Veterinrias na rea de
farmacologia .
Orientador: Dr. Joo Roberto Braga de Mello

Porto Alegre, 2004

AGRADECIMENTOS

Ao meu orientador Joo Roberto Braga de Mello pela pacincia, dedicao, exigncia e
incentivo no decorrer deste trabalho.
Ao professor Augusto Langeloh e professora Eliane Dallegrave pelos conselhos sbios no
desenvolvimento deste trabalho.
Ao professor de Hlio que foi fundamental na realizao da estatstica deste trabalho.
Vanessa e Bea, pela amizade e por estarem sempre dispostas a me ajudar no que fosse
necessrio.
s amigas Maringela, Rose e Eugnia que alm de auxlio na execuo dos
experimentos estavam sempre presentes nas horas mais difceis.
Ao meu marido, Andr, pelo amor, amizade e pacincia para suportar os momentos de
ausncia.
Ao meu irmo que estava sempre disposto a me ajudar no que fosse necessrio.
minha famlia, em especial minha me que sempre me apoiou e torceu por mim e
minha dinda Irene que esteve sempre presente com seu otimismo, bom humor e lanchinhos.
s colegas e amigas da ULBRA, Jussara, Virgnia, Beatriz e Cristine e Karine que me
apoiaram e sempre me incentivaram a seguir em frente.

SMRIO
LISTADE TABELAS............................................................................................................
LISTA DE FIGURAS............................................................................................................
LISTA DE ABREVIATURAS..............................................................................................
RESUMO...............................................................................................................................
ABSTRACT...........................................................................................................................

06
07
09
11
12

1
2
2.1.
2.1.1
2.2
2.2

INTRODUO.........................................................................................................
REVISO DE LITERATURA................................................................................
Fitoterpicos..............................................................................................................
Piper methysticum Forst, Piperaceae (kava kava)............................................
Toxicidade reprodutiva ..........................................................................................
Toxicidade heptica ................................................................................................

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OBJETIVOS............................................................................................................. 34

4
MATERIAIS E MTODOS....................................................................................
4.1
Toxicidade reprodutiva do Piper methysticum Forst, Piperaceae (kava kava)
4.1.1 Animais......................................................................................................................
4.1.2 Acasalamento............................................................................................................
4.1.3 Preparao fitoterpica testada.................................................................................
4.1.4 Tratamento dos animais.............................................................................................
4.1.5 Variveis avaliadas....................................................................................................
4.1.5.1 Ratas..........................................................................................................................
4.1.5.2 Avaliao dos fetos e rgos das ratas......................................................................
4.1.5.3 Mtodo de diafanizao e colorao.........................................................................
4.1.6 Avaliao dos ndices reprodutivos..........................................................................
4.1.7 Avaliao dos ndices fetais......................................................................................
4.1.8 Dosagem de enzimas hepticas e histopatologia do fgado......................................
4.1.9 Anlise estatstica......................................................................................................

35
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36
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40
41
41

5
RESULTADOS........................................................................................................
5.1
Toxicidade reprodutiva do Piper methysticum Forst, Piperaceae (kava kava)
5.1.1 Desenvolvimento ponderal das ratas durante a prenhez............................................
5.1.2 Consumos relativos de gua durante a prenhez.........................................................
5.1.3 Consumos relativos de rao durante a prenhez........................................................
5.1.4 ndices reprodutivos..................................................................................................
5.1.5 Massa relativa dos rgos..........................................................................................
5.1.6 ndices dos fetos........................................................................................................
5.1.7 Anormalidades esquelticas dos fetos.......................................................................
5.2
Toxicidade heptica.................................................................................................

43
43
43
45
47
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49
49
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DISCUSSO ...............................................................................................

58

CONCLUSES .....................................................................................................

64

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.................................................................................

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LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Massa corporal mdia (x) em gramas e erro padro da mdia (epm) das ratas
do grupo controle (0mg.kg-1); e tratadas com P.methysticum DH (5mg.kg-1);
DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao.....

45

TABELA 2 Mdia (x ) e erro padro da mdia (epm) do consumo de gua (ml), medida a
cada 3 dias nos grupos controle (0mg.kg-1) e tratadas com P. methysticum DH
(5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de
gestao...............................................................................................................

47

TABELA 3 Mdia (x ) e erro padro da mdia (epm) do consumo de rao (g), medida a
cada 3 dias nos grupos controle (0mg.kg-1) e tratadas com P. methysticum DH
(5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de
gestao...............................................................................................................

47

TABELA 4 ndices reprodutivos das ratas do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com P.
methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre
o 6 e o 15 dia de gestao..............................................................................

49

Massa relativa dos rgos das ratas do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas
com P. methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10
(50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao...............................................

50

ndices dos fetos das ratas do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com Piper
methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre
o 6 e o 15 dia de gestao .............................................................................

51

Prevalncia das anormalidades esquelticas (variaes) dos fetos das ratas


do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com P. methysticum DH (5mg.kg-1);
DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao...

52

Prevalncia das anormalidades esquelticas (malformaes) dos fetos das


ratas do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com Piper methysticum DH
(5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia
de gestao........................................................................................................

53

TABELA 9. Nveis sricos da atividade da FA e ALT das ratas grupo controle (0mg.kg-1)
e tratadas com P.methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10
(50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao ................................................

57

TABELA 5

TABELA 6

TABELA 7

TABELA 8

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1

FIGURA 2

FIGURA 3

FIGURA 4

FIGURA 5

FIGURA 6

FIGURA 7

FIGURA 8

FIGURA 9

Arbusto de P. methysticum Forst. Disponvel em:


<http://kavaroot.com/index.htm>. Capturado 10 de maio 2004.......................

20

Raiz
triturada
de
P.
methysticum
Forst.
Disponvel
em
<http://www.gpo.org.th/rdi/Netzine/V3N30/kava.htm> Capturado 10 de
maio 2004..........................................................................................................

20

Estrutura qumica das cavalactonas de maior relevncia farmacolgica.


Capturado
05
de
jun.
2004.
Disponvel
em:
<http://www.erowid.org/plants/Kava/Kava-chemistry2.shtml> ......................

21

Desenvolvimento ponderal relativo (1 dia = 100%) das ratas do grupo


controle (0mg.kg-1); e tratadas com P. methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7
(35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao. Dados
expressos pela mdia ........................................................................................

44

Consumo relativo de gua das ratas do grupo controle (0mg.kg-1); e tratadas


com P. methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10
(50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao. Dados expressos pela
mdia.................................................................................................................

46

Consumo relativo de rao (g) das ratas do grupo controle (0mg.kg-1); e


tratadas com P.methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10
(50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao. Dados expressos pela
mdia.................................................................................................................

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Fetos diafazinados de progenitoras do grupo controle e tratados com


P.methysticum. Figura A: feto do grupo controle demonstrando fontanela
normal. Figura B: feto do grupo DHx10 demonstrando fontanela aumentada.

54

Fetos diafazinados de progenitoras do grupo controle e tratados com


P.methysticum. Figura A: Feto do grupo controle apresentando costelas de
formato normal. Figura B: Costelas normais em detalhe. Figura C: Feto do
grupo DHx10 apresentando costelas onduladas. Figura D: Costelas
onduladas em detalhe........................................................................................

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Feto diafanizado do grupo


tratado com P. methysticum DHx10
apresentando ossificao incompleta do crnio...............................................

56

FIGURA 10. Fetos diafazinados de progenitoras do grupo controle e tratados com


P.methysticum. Figura A: Feto do grupo controle apresentando ossificao
completa das esternebras. Figura B: Feto do grupo DHx10 apresentando
ossificao incompleta das esternebras.............................................................

56

LISTA DE ABREVIATURAS

ALT

Alanina-aminotrasferase

ANOVA

Anlise de varincia

ANVISA

Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

AVMA

American Veterinary Medical Association -Associao Americana de Medicina


Veterinria

Graus Celsius

COBEA

Colgio Brasileiro de Bem Estar Animal

CREAL

Centro de Reproduo e Experimentao Animal

EPA

Enviromental Protection Agency - Agncia de Proteo Ambiental

epm

Erro padro da mdia

FA

Fosfatase alcalina

FDA

Food and Drugs Administration - Administrao de Drogas e Alimentos

GABA

cido gama-aminobutrico

GL

Graus Gay Lussac

Horas

ICBS

Instituto de Cincias Bsicas da Sade

kg

Quilograma (s)

LTDA

Limitada

MAs

Membros anteriores

mg

Miligrama (s)

ml

Mililitro (s)

MPs

Membros posteriores

Nmero

Na

Sdio

OECD

Organizao para o desenvolvimento e cooperao econmica - Organization for


Economic Cooperation and Development

10

Probabilidade, nvel de significncia alcanado

SNC

Sistema Nervoso Central

Tx

Taxa

UFRGS

Universidade Federal do Rio Grande do Sul

VO

Via oral

Porcento

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RESUMO

A kava kava (Piper methysticum Forst), pertencente famlia Piperaceae, utilizada para
diminuir a ansiedade e medo e tratar distrbios comportamentais. um fitoterpico utilizado em
vrios pases, entretanto pouco se sabe, sobre seus efeitos no desenvolvimento embrionrio. O
presente trabalho avaliou o possvel efeito teratognico da formulao fitoterpica contendo
Piper methysticum Forst durante o perodo de organognese em ratas Wistar. As ratas foram
tratadas com 0mg.kg 1 (controle), 5mg.kg 1 ; 35mg.kg 1 e 50mg.kg 1 da preparao fitoterpica
(kava kava), por via oral, do 6 ao 15 dia de prenhez. Os resultados revelaram ausncia de
toxicidade sistmica e reprodutiva nas variveis avaliadas, fundamentados pela ausncia de
alteraes no desenvolvimento ponderal, consumos de rao e gua, na massa relativa dos
rgos, nas reabsores embrionrias, na massa corporal, na vitalidade, no nmero de fetos por
progenitora e nas alteraes macroscpicas externas e esquelticas dos fetos. Adicionalmente as
enzimas alanina aminotrasferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) foram determinadas no soro das
ratas tratadas, para avaliar o possvel efeito hepatotxico da preparao fitoterpica. No houve
alterao na atividade das enzimas ALT e FA, bem como alteraes histopatolgicas do fgado
das ratas, no confirmando a hepatotoxicidade. Conclui-se que o fitoterpico kava kava, at
35mg.kg 1, no determina o aparecimento de teratogenicidade.

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ABSTRACT
The kava kava (Piper methysticum Forst), belongs to Piperaceae family, is used to reduce
anxiety and fright and to treat behavior disturbs. In spite of the phytoterapeutic use in several
countries. The effects on embryonic development is not know. The present study evaluated the
possible teratogenic effects of the phytotherapic formulation that contains Piper methysticum
Forst (kava kava) during the organogenesis period in Wistar rats. The rats were treated with
0mg.kg1 (control), 5mg.kg1, 35mg.kg1 and 50mg.kg1 of the phytotherapic preparation, through
oral tract, from day 6 up to day 15 of pregnancy. The results showed absence of systemic and
reproductive toxicity on the evaluated variables, since there were no changes on weight
development, food and water consumption, on relative organs mass, on embryonary
reabsorptions, on body mass, on vitality, on fetus number and on external macroscope and
skeletal abnormalities of the fetus. In addition the alanine aminotransferase (ALT) and alkaline
phosphatase (AP) were determined on the serum of treated female rats, to evaluet the possible
hapatotoxic effect of the phythotherapic preparation. No changes on ALT and AP enzymes were
observed, as well as histophatologic changes on rats liver, not confirming the liver toxicity. As
conclusion, the kava kava phythotherapic, up to 35mg.kg1, doesnt determine teratogenic effecs.

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1 INTRODUO

A utilizao de extratos vegetais com fins teraputicos (fitoterpicos), tem sido crescente
tanto nos pases desenvolvidos como nos pases em desenvolvimento (SHARAPIN, 1996).
Acredita-se que uma das razes para esta crescente popularidade da utilizao dos fitoterpicos
na medicina humana, seja pela falsa idia de que os medicamentos a base de vegetais no
possuem toxicidade (HAMID et al., 1997).
Na medicina veterinria tem ocorrido um aumento do interesse por tratamentos
alternativos, tanto por parte de veterinrios como dos proprietrios de pequenos animais. A
Associao Americana de Medicina Veterinria (American Veterinary Medical AssociationAVMA) reconhece a acupuntura veterinria, a terapia fsica, a massagem veterinria, bem como
a homeopatia veterinria, a medicina holstica veterinria, e a fitoterapia veterinria como
alternativas teraputicas (SCHWARTZ, 2000).
A kava kava ( Piper methysticum Forst), um fitoterpico, pertencente famlia das
Piperaceae que tem sido cultivado por mais de 3000 anos por todo sul do Pacfico e norte do
Havai. comercializado em vrios pases, sendo conhecido como kava kava, awa, kava, yangona
(BASKO, 2002). indicado tanto em casos de ansiedade e insnia (SIMES, 2001) como
calmante, para induzir o relaxamento, tratamento de asma, reumatismo, para promover perda de
peso, entre outros (SINGH, 1992). Os medicamentos preparados com P. methysticum tm
eficcia ansioltica sem apresentar os mesmos efeitos adversos dos benzodiazepnicos, como
prejuzo das funes cognitivas, sonolncia e reduo da coordenao motora (TYLER &
ROBBERS, 2000).
Os distrbios da ansiedade esto cada vez mais freqentes nos consultrios mdicos. Em
humanos acredita-se que possa vir a substituir a depresso, que a mais comum das doenas
psiquitricas (HAYES & KIRKWOOD, 1992). Assim como em humanos, os distrbios de

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ansiedade e alteraes comportamentais, como angstia por ficar sozinho, agressividade,


excitao excessiva, esto se tornando rotina na clnica de pequenos animais. Para o tratamento
desses distrbios, a medicina tem buscado tratamentos alternativos, como o uso de fitoterpicos.
Espcies de plantas como a camomila, kava kava, erva de St. Johns, ginseng, ginkgo biloba e
valeriana so associadas com o crescimento do nmero de estudos clnicos que investiguem seus
valores teraputicos nos distrbios psiquitricos em pessoas. Produtos contendo essas plantas
esto disponveis em farmcias e lojas de produtos nutricionais (health foods stores) nos Estados
Unidos. Entretanto, essas preparaes variam em suas concentraes, dosagens, efeitos colaterais
e interaes com outras drogas (SCHWARTZ, 2000).
Apesar das plantas medicinais serem utilizadas em pequenos animais, muitas no
apresentam dosagens estabelecidas para uso em pacientes no humanos. Tem se provado que a
Ginkgo biloba benfica em ces diagnosticados com a sndrome da disfuno cognitiva canina
e em gatos velhos com excessiva vocalizao com causa no identificada. A raiz da valeriana
utilizada como hipntico e ansioltico, podendo ser til, entre outras, no controle de um grande
nmero de casos de ansiedade ou medo, como o medo de trovoadas e outras fobias de barulhos,
assim como andar de carro e ansiedade por separao (SCHWARTZ, 2000).
O magnetismo do rtulo de um produto indicando que seus componentes so naturais
evidente. Entretanto, natural no garante que o produto benfico ou seguro. Segundo Ernst
(2002a), efeitos colaterais tm sido relatados com o uso de algumas plantas como o caso da
erva de St. Johns (Hypericum perforatum L.), indicada como antidepressiva, que pode causar
fotosensibilizao em pessoas e em alguns animais. Um outro exemplo o ginseng (Panax
ginseng), indicado como afrodisaco, antidepressivo e diurtico, podendo apresentar como efeitos
adversos, diarria, hiper ou hipotenso, nusea, excitao. Segundo Dantas (2004), algumas
espcies de plantas so reconhecidas pela sua alta toxicidade e conseqentemente um potencial
abortivo, como a espirradeira (Nerium oleander L.) e a comigo-ningum-pode (Dieffenbachia
picta Shott). Outras espcies so usadas no meio popular habitualmente, na maioria das vezes,
sem ter o conhecimento que podem levar ao aborto ou anomalias congnitas, se forem
consumidas durante a gravidez. Dentre estas podemos citar: artemsia (Artemsia vulgaris L.),
alecrim (Rosmarinus officinalis L.), erva moura (Solanum americanum Mill.), melo de So

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Caetano (Momordica charantia L.), quebra-pedra (Phyllanthus sp.), arruda (Ruta graveolens L.),
boldo (Peumus boldus Mol.).
Wong (1979), cita que em vrios anos de observao da prescrio de plantas medicinais
para os habitantes de Singapura, trouxe a tona o uso de certas plantas como principais
medicamentos para mulheres gestantes, mesmo no sabendo sobre os efeitos especficos dessas
plantas, mas levando em considerao os possveis benefcios psicossomticos. Todavia, no
possvel esquecer que, os princpios ativos das plantas podem atravessar a placenta, chegar no
feto podendo levar a malformaes. A kava kava um fitoterpico com ao ansioltica e
sedativa, que normalmente utilizada por perodos de at trs meses. Na literatura no existem
estudos controlados na gravidez e, portanto, prudente evitar o uso da kava kava neste perodo
(KAVA, 2001).
Recentemente o P. methysticum foi associado a casos de hepatotoxicidade na Sua e
Alemanha (SINGH; DEVKOTA, 2003). Estes casos incluem hepatite, cirrose e insuficincia
heptica. Estes fatos conduziram a retirada , no mercado francs, alemo e suo, de todos os
produtos contendo P. methysticum, at que se tenham estudos mais especficos. Nos EUA foi
solicitado que consumidores e mdicos informassem sobre qualquer efeito adverso da kava kava
(FDA, 2002). No Brasil, foi indicada uma mudana nas embalagens de produtos contendo o P.
methysticum, na qual deve ser includa a frase : Venda sob prescrio mdica (BRASIL, 2002).
Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade reprodutiva da
preparao fitoterpica contendo P. methysticum (kava kava), do laboratrio Herbarium,
utilizada em humanos e recentemente em animais de companhia, avaliando-se os efeitos da
exposio, de ratas Wistar, durante a fase de organognese. Alm disso, devido a recentes relatos
de hepatotoxicidade associados ao uso de kava kava, realizou-se uma avaliao heptica por meio
de dosagem das enzimas alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e
histopatologia do fgado das ratas.

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2 REVISO DE LITERATURA

2.1 Fitoterpicos

A Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) vinculada ao Ministrio da Sade


define um produto fitoterpico como um medicamento obtido empregando-se exclusivamente
matrias-primas vegetais. caracterizado pelo conhecimento da eficcia e dos riscos de seu uso,
assim como pela reprodutibilidade e constncia de sua qualidade. Sua eficcia e segurana so
validadas atravs de levantamentos etnofarmacolgicos de utilizao, documentaes
tecnicocientficas em publicaes de ensaios clnicos (BRASIL, 2004b).
Segundo a Portaria ou resoluo RE n 90 da ANVISA, os estudos de toxicidade dos
fitoterpicos devem ser conduzidos com amostras padronizadas do medicamento fitoterpico ou
do derivado vegetal a partir do qual produzido. Deve ser realizado o teste de toxicidade aguda,
no qual ocorre a avaliao da toxicidade aps exposio a uma dose nica ou fracionada
administrada no perodo de 24 horas, e adicionalmente pode ser necessrio o teste de toxicidade
de doses repetidas (longa durao), no qual devem ser utilizadas, pelo menos, duas espcies de
mamferos, sendo uma roedora e uma no-roedora. Devem ser utilizados machos e fmeas,
adultos jovens. Os grupos experimentais devem ser compostos por pelo menos 10 animais
devendo incluir um grupo controle com o veculo da formulao. O estudo deve ser realizado
utilizando no mnimo trs doses do medicamento fitoterpico (BRASIL, 2004c).
Relatos de riscos hepticos, como hepatite, cirrose e insuficincia heptica, tm sido
associados ao uso de kava kava, fato este que levou a retirada do mercado alemo, suo, francs,
canadense e do Reino Unido de produtos que apresentassem P. methysticum em sua formulao,
desde dezembro de 2001, para maiores investigaes. Apesar dos danos hepticos serem
considerados raros, nos Estados Unidos a FDA acredita que os consumidores devero ser

17

informados sobre este risco, e recomenda que os consumidores de kava kava e os mdicos que
receitem estes suplementos dietticos, relatem qualquer caso de alteraes hepticas tanto os
sintomas especficos como ictercia e urina marrom, como os sintomas inespecficos como
nuseas, vmitos e dores abdominais (FDA, 2002).
No Brasil, aps relatos mundiais de hepatotoxicidade relacionados ao uso da kava kava,
foi determinada a apreenso, em todo o territrio nacional, de qualquer produto farmacutico a
base de Piper methysticum, que no possua tarja vermelha contendo os dizeres Venda sob
prescrio mdica, ou que no possuam registro (BRASIL, 2002).
A legislao e regulao das plantas medicinais so carentes em muitos pases. Nos EUA,
por exemplo, as plantas medicinais so classificadas como suplementos nutricionais sendo
isentos de informao ou declarao de sua eficcia teraputica nos rtulos dos produtos, de
acordo com a legislao de 1994. Mediante comprovao de toxicidade, a FDA pode determinar
a retirada de produtos contendo o P. methysticum do mercado. A classificao de suplementos
nutricionais tem trazido alguns problemas para o Brasil pois, a legislao brasileira em vigor,
para os alimentos, permite a entrada no Pas, sem registro, de alimentos importados em suas
embalagens originais. Isto tem permitido a entrada, no Brasil, de centenas de suplementos
nutricionais que, aqui, so comercializados efetivamente como medicamentos, mas no
obedecem s normas brasileiras dessa classe de produtos. Para tentar solucionar este problema foi
criada a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) pela Lei n9782, de 26 de janeiro
de 1999. Em seu artigo 42, a Lei alterou o artigo 57 do Decreto-Lei n 986/69, submetendo a
importao de alimentos, aditivos e outras substncias relacionadas s suas exigncias, o que
amplia a possibilidade de interveno mais efetiva nesse problema envolvendo fitoterpicos
importados como alimentos. No entanto, a aplicao prtica deste expediente ainda deixa muito a
desejar (MARQUES & PETROVICK, 2002).
No Reino Unido, muitas plantas medicinais so vendidas de acordo com as normas dos
alimentos de 1990 (Food Act), com a exceo de alguns remdios tradicionais que so registrados
de acordo com as normas dos medicamentos de 1968 (Medicine Act). Entretanto, alguns pases da

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Europa, como a Alemanha, a Frana e Sua tm implementado estratgias para o licenciamento


das plantas medicinais (Herbal Medicine, 2003).
No Brasil, de acordo com a Resoluo n 89

foi criada uma Lista de Registro

Simplificado de Fitoterpicos. Nesta lista so encontradas a nomenclatura botnica, o nome


popular, a parte usada, a padronizao, formas de uso, indicaes e aes teraputicas, dose diria
via de administrao e restrio de uso. As plantas que estiverem nesta lista, no necessitam de
comprovaes. As plantas que no estiverem na lista de registro simplificado de fitoterpicos
devero seguir a Resoluo n 48, na qual os medicamentos fitoterpicos devero apresentar
segurana de uso e as indicaes teraputicas devero ser avaliadas atravs de uma das trs
opes:
1) Atingir no mnimo 6 pontos, com estudos publicados entre as obras da Lista de Referncias
Bibliogrficas para Avaliao de Segurana e Eficcia de Fitoterpicos (RE n 88),
conferidos de acordo com a escala:
a) Trs (3) pontos a cada incluso em obra relacionada no Grupo I
b) Dois (2) pontos a cada incluso de obra relacionada no Grupo II
c) Um (1) ponto a cada incluso em obra relacionada no Grupo III
d) Meio (0,5) ponto a cada incluso em publicao tcnico-cientfica, brasileira e/ou
internacional, no includas nos Grupos I, II e III, que contenham informaes
relativas segurana de uso e s indicaes teraputicas propostas. No mnimo 50%
da pontuao obtida dever originar-se de estudos em seres humanos.
2) Apresentar comprovao de segurana de uso atravs de testes (toxicologia pr-clnica,
toxicologia clnica) e de eficcia teraputica (farmacologia pr-clnica, farmacologia clnica)
do medicamento. Os ensaios clnicos devero atender s exigncias estipuladas pelo Conselho
Nacional de Sade (CNS), (RE n90).
3) Apresentar

um

levantamento

bibliogrfico

(etnofarmacolgico

de

utilizao,

documentaes tecnicocientficas ou publicaes), que ser avaliado consoante aos seguintes


critrios: indicao de uso; coerncia com relao s indicaes teraputicas propostas;
ausncia de risco txico ao usurio; ausncia de grupos ou substncias qumicas txicas,

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presentes dentro de limites comprovadamente seguros; comprovao de uso seguro por um


perodo igual ou superior a 20 anos.
Caso o medicamento fitoterpico integre a ltima publicao da Lista de Registro
Simplificado de Fitoterpicos, nas condies ali definidas, no h necessidade de validar as
indicaes teraputicas e a segurana do uso (BRASIL, 2004a).

2.1.1 Piper methysticum Forst, Piperaceae (kava kava)

O Piper methysticum Forst (pertencente famlia Piperaceae) foi identificado pelo


botnico Johann Gorg Adam Forster, nas ilhas do Sul do Pacfico, em 1771. um arbusto perene
que pode chegar a 3m de altura, apresenta folhas verdes com aproximadamente 15 a 20 cm de
comprimento (Figura 1) (Rhizoma...,2004). um fitoterpico usado em quase todas as ilhas do
Oceano Pacfico, embora ocorra principalmente na Polinsia Ocidental, com exceo da Nova
Zelndia, Nova Calednia, e a maioria das ilhas Salomo (SINGH, 1992; NORTON & RUZE,
1994). Nos anos 80, tambm foi introduzido nas comunidades aborgines da Austrlia, onde se
tornou uma droga de abuso, pela ausncia de controle (SINGH, 1992). Originalmente, era usada
apenas em ritos religiosos, com seu consumo limitado ao chefe e seus sacerdotes. A kava kava
era ritualmente usada por jovens homens ou mulheres que cortavam e mastigavam pedacinhos da
raiz e aps cuspiam os pedaos dentro de uma vasilha onde era acrescentado o leite de coco ou
gua para fazer uma infuso. Entretanto, por razes sanitrias, a tcnica de mastigao foi
abandonada e optou-se por ralar ou triturar a raiz (Figura 2) (ROBBERS et al., 1996).
A kava kava um dos nomes populares, mais utilizados, do Piper methysticum Forst, o qual
possui aspectos sociais relevantes na Oceania, estando sempre presente em cerimoniais
importantes (NORTON & RUZE, 1994). Apresenta tambm uma srie de propsitos mgicoreligiosos, sendo um dos mais importantes, o derrame da bebida em citao aos deuses
(BRUNETON, 1993).

20

FIGURA 1. Arbusto de P. methysticum Forst


Disponvel em:
<http://kavaroot.com/index.htm>.

FIGURA 2. Raiz triturada do P. methysticum Forst


Disponvel em:
<www.gpo.org.th/rdi/Netzine/V3N30/kava.htm>

Alm dos aspectos sociais, em muitas reas do Pacfico acreditava-se que a kava kava tinha
efeito benfico sobre a sade e por isso era usada para muitos fins, tais como: calmante, induzir o
relaxamento, dormir para contrabalanar a fadiga, congesto no trato urinrio, asma, reumatismo,
para perder peso, entre outros (SINGH, 1992).
Basko (2004), alerta para a necessidade de pesquisas e experincias clnicas para
descobrir a melhor forma de usar a kava kava na medicina veterinria. Ele utiliza o extrato seco
da kava kava h mais de dez anos, utilizando para produzir o relaxamento muscular, para tratar
problemas de ansiedade, utiliza como um anestsico tpico e como anticonvulsivante. Mais
recentemente tem combinado a kava kava com outras plantas, vitaminas e minerais para o
tratamento de desordens de ansiedade em ces, gatos e cavalos. Malsch e Kieser (2001) sugerem

21

o uso do fitoterpico kava kava sozinho ou associado ao Hypericum perforatum, como ansioltico
e sedativo.
A maioria dos estudos realizados com a kava kava foi de durao mdia de 4 semanas,
no sendo capaz de detectar efeitos adversos decorrentes do uso crnico. Porm

Tyler &

Robbers (2000) descrevem um ensaio clnico multicntrico de longa durao (25 semanas),
utilizando extrato de kava lipoflico contendo 70% de cavalactones, os pacientes recebiam 100
mg de extrato ou placebo trs vezes ao dia. Os resultados deste estudo corroboram com os
obtidos nos estudos de curta durao em relao eficcia na ansiedade e boa tolerabilidade.
Como componentes ativos do P. methysticum Forst, foram identificadas dezoito
cavalactonas,

destas,

seis

tm

maior

relevncia

farmacolgica:

cavana,

iangonina,

desmetoxiiangonina, 7,8-di-hidrocavana, metisticina e 7,8-di-hidrometisticina (Figura 3)


(LECHTENBERG et al., 1999). Estudos farmacolgicos tem demonstrado que as cavalactonas
so mais ou menos potentes, sobre a atividade central e como relaxante da musculatura
esqueltica (ROBBERS, 2000). As cavalactonas contidas nas raizes do Piper methysticum podem
variar significativamente de planta para planta (3-20%) dependendo do crescimento, colheita e
condies de processamento (KAVA, 1988).

Cavana

Metisticina

22

7,8- Di-hidrocavana

Iangonina

7,8-Di-hidrometisticina

Desmetoxiiangonina

FIGURA 3. Estrutura qumica das cavalactonas de maior relevncia farmacolgica. Disponvel em:
<http://www.erowid.org/plants/Kava/Kava.chemistry2.shtml>

Produtos contendo extratos ou mesmo p de razes e rizomas de P. methysticum tm sido


comercializados na Europa. Estudos farmacolgicos em animais indicaram ao sedativa,
relacionada com a ativao da transmisso dopaminrgica e serotoninrgica na regio
mesolmbica, o que estaria associado com a reduo da excitabilidade emocional e alteraes
comportamentais. Como substncias responsveis pela atividade no sistema nervoso central
(SNC), foram isoladas lactonas denominadas cavalactonas ou cavapironas. Posteriormente, foram
desenvolvidas preparaes enriquecidas com essas substncias (teor no extrato bruto de 5 a 8% e,
no extrato enriquecido, em torno de 70%). Estudos de biodisponibilidade foram realizados em
animais, demonstrando a absoro e eliminao rpida das lactonas cavana e di-hidrocavana.

23

Produtos contendo racemato de cavana sinttico no podem ser vistos como anlogos aos
extratos do vegetal, j que a biodisponibilidade altamente influenciada pelos demais
componentes do extrato (SIMES, 2001).
O mecanismo de ao das cavalactonas ainda no completamente esclarecido, existindo
na literatura relatos contraditrios sobre a interao das cavalactonas com o receptor do cido
gama-aminobutrico (GABA). Um trabalho indica aumento dos stios de ligao (modulao de
receptores), enquanto outro relata ausncia de atividade significativa nos stios de ligao GABAA e GABA-B e no stio de ligao de benzodiazepnicos. Tanto em estudos in vivo como in

vitro apenas uma fraca atividade de ligao com GABA foi observada (DAVIES et al., 1992).
Um outro estudo, entretanto, estabelece que a ligao com o GABA um mecanismo para alguns
efeitos sedativos da kava (KELEDJIAN et al., 1988). Estudos, in vitro tem demonstrado que
embora no sendo compreendido o eficiente bloqueio da serotonina pelas cavalactonas, a inibio
de noradrenalina foi demonstrada por trs lactonas, indicando outros possveis mecanismos de
ao. Segundo Gleitz et al. (1996), em modelos experimentais com animais, a kava kava
conhecida por inibir a convulso induzida experimentalmente. Pesquisas indicam que este efeito
anticonvulsivante possa ser mediado por stios receptores de canais de sdio (Na+).
So descritos ensaios clnicos controlados, em humanos, com resultados positivos em
ansiedade usando uma preparao contendo 70 ou 100mg de extrato enriquecido(70% de
cavalactonas), administrado trs vezes ao dia, pelo perodo de quatro semanas (SIMES, 2001).
A dosagem indicada para humanos varia de 70 a 240 mg de extrato seco da raiz. Dosagem acima
de 330mg/dia tem sido testada sem aumentar a freqncia de efeitos adversos (ERNST, 2002b).
J no caso de pequenos animais, como os caninos e felinos, a dosagem recomendada varia de 5,5
a 11mg/kg (BASKO, 2002).
Por ter ao antidepressiva, antiestresse, ansioltica, relaxante muscular e sedativa, a kava
kava passou a ter uma demanda crescente. Atualmente, so encontrados no mercado brasileiro,
um nmero expressivo de fitoterpicos preparados a partir de P. methysticum, entre eles: KAVA
KAVA (FLORA MEDICINAL), KAVA KAVA (TEUTO), KAVA KAVA (HERBARIUM),
CALMITON, ANSIOPAX, KAVASEDON

(ANVISA, 2002). Em farmcias de

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manipulao, so preparadas frmulas magistrais, em geral cpsulas, utilizando-se como matriaprima o extrato seco padronizado com 70% de cavalactonas (RATES et al., 2002).
Entre as atividades relatadas da kava kava, podemos citar: relaxante muscular, analgsica,
sedativa (KELEDJIAN, et al., 1988; SEITZ et al., 1997; SCHIRMACHER et al., 1999),
anticonvulsivante e anestsica (GRUNZE et al., 2001), espasmoltica, ansioltica (MALSCH et
al., 2001; SMITH et al., 2001) e neuroprotetor (SCHMIDT; FERGER, 2001). A maioria dos
relatos de sistemas in vitro ou estudos pr-clnicos em animais. As aes ansioltica e
sedativa so respaldadas por ensaios clnicos (MALSCH; KIESER, 2001).
A kava kava pode apresentar como efeitos adversos reaes alrgicas, pigmentao da
pele, fotossensibilizao e prurido (LITTI, 2001). A ingesto da bebida em doses equivalentes a
mais de 300g da raiz de P. methysticum por semana, durante alguns meses pode causar
dermopatia, caracterizada por edema de face, colorao amarelada dos cabelos e unhas, leses
escamosas nos membros torcicos e plvicos. Estes sintomas desaparecem algumas semanas aps
a interrupo do tratamento. Os principais efeitos adversos so a fadiga matinal no incio do
tratamento, movimentos involuntrios estereotipados, prejuzos na deglutio e respirao,
contraes involuntrias, arrtmicas e contnuas das extremidades (ROBBERS et al., 2002).
Segundo Stevinson et al. (2002), quando utilizada como monoterapia e nas doses recomendadas,
a kava kava parece ser bem tolerada pela maioria dos usurios, todavia, efeitos adversos tm sido
reportados necessitando de pesquisas adicionais para determinar a freqncia e natureza destes
eventos.
Os medicamentos preparados com P.methysticum tm eficcia ansioltica sem apresentar
os mesmos efeitos adversos dos benzodiazepnicos, como prejuzo das funes cognitivas,
sonolncia e reduo da coordenao motora (TYLER & ROBBERS, 2000).
Este fitoterpico potencializa a ao de outros depressores do SNC, no devendo ser
utilizado concomitante com essas substncias depressoras, nem previamente a procedimentos que
requeiram anestesia geral (RATES et al., 2002). Segundo Ernst (2002b), como a kava kava
prolonga os efeitos da anestesia, deve ser interrompida duas ou trs semanas antes destes
procedimentos. Relatos indicam que a kava kava pode aumentar os efeitos adversos das drogas
que afetem a dopamina, como o haloperidol e a metoclopramida.

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Um outro aspecto que deve ser considerado a interao com outras drogas como, por
exemplo, as analgsicas. Incidncias de hepatotoxicidade e nefrotoxicidade podem ser
aumentadas com o uso de acetaminofeno concomitante com plantas com potencial hepatotxico
como Echinacea e P. methysticum. Alm disso, o uso de analgsicos opiides com suplementos
de plantas sedativas como valeriana, kava kava e camomila podem levar a uma potencializao
da depresso do SNC (ABEBE, 2002).
O P. methysticum administrado por via oral tem rpida absoro gastrintestinal, de modo
que os efeitos so observados quase imediatamente. O pico plasmtico ocorre aproximadamente
1,8 hora aps a ingesto. A eliminao ocorre por excreo renal e pelas fezes.
biotransformado pelo sistema do citocromo P-450 no fgado, podendo ter interaes com outras
plantas ou drogas (MALANI, 2004).
Os distrbios de ansiedade e hiperexcitabilidade, muito vistos em humanos, tm se
tornado rotina na clnica veterinria de pequenos animais. Sendo assim, existe uma busca por
tratamentos alternativos para tratar estes distrbios. Os fitoterpicos, principalmente, a valeriana
e a kava kava tm sido bastante utilizados, como tratamentos alternativos (SCHWARTZ, 2000).
Recentemente casos de hepatotoxicidade foram associados ao uso de fitoterpicos base
de P. methysticum. Stickel et al. (2003), analisaram 36 casos de hepatite relacionados com a
ingesto de kava kava, ocorridos entre 1990 e 2002. Para tanto, utilizaram uma escala diagnstica
clnica estabelecida para reaes adversas hepticas da droga. Obtiveram como resultado, necrose
heptica ou hepatite colesttica, ambas associadas a extratos alcolicos e acetnicos de kava
kava. Nove pacientes desenvolveram falncia heptica fulminante, dos quais, oito pacientes
foram submetidos a um transplante de fgado. Trs pacientes morreram, destes, dois pacientes
aps o transplante de fgado e um que no havia realizado o transplante. Todos os outros
pacientes tiveram uma completa recuperao aps a interrupo do uso da kava kava. Este
estudo enfatiza o potencial hepatotxico severo da kava kava, o qual tem levado, recentemente, a
proibio de preparaes contendo kava pelas autoridades da farmacovigilncia da Alemanha,
Sua e Frana.
Segundo Ernst (2002b), no est esclarecido se os casos de hepatotoxicidade, associados
ao uso da kava kava, esto relacionados a doses elevadas, uso a longo prazo, associao com

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outras drogas ou, at mesmo, a existncia de danos hepticos pr-existentes. Em um estudo


realizado para testar a funo heptica em ratos tratados com extrato aquoso, foram
administrados diariamente extratos de kava kava nas dosagens de 200 ou 500mg de
cavalactonas/kg por duas ou quatro semanas. Foram avaliadas as enzimas alanina
aminotransferase, aspartato aminotransferase, fosfatase alcalina e lactato desidrogenase para
avaliar funo heptica, mas os resultados no apresentaram elevao dos nveis destas enzimas,
ocorrendo em alguns casos uma significativa reduo, sugerindo a falta de efeitos txicos no
fgado.
A kava kava deve ser evitada durante a gestao pois pode afetar a musculatura uterina.
As substncias qumicas contidas nas preparaes de kava kava, podem passar para o leite
materno com efeitos desconhecidos e conseqentemente deve ser evitada durante a gestao e
amamentao (ERNST, 2002b).

2.2 Toxicidade reprodutiva

A toxicidade reprodutiva est relacionada com qualquer interferncia na capacidade


reprodutiva, tanto em machos como fmeas, provocada por um agente que produza toxicidade.
Uma avaliao toxicolgica utilizada para analisar resultados experimentais de uma substncia
qumica com o objetivo de classific-la e ao mesmo tempo fornecer informaes a respeito da
forma correta de seu emprego. Os dados toxicolgicos so informaes obtidas atravs da
experimentao de animais de laboratrio, em ensaios com microorganismos ou atravs de
registro de casos de intoxicao acidental ocorridos em humanos e animais (LARINI, 1997).
Segundo a legislao vigente os testes de teratogenicidade devem ser realizados em duas
espcies animais uma roedora, sendo normalmente utilizada a espcie Rattus norvergicus
(freqentemente a linhagem Wistar) e uma espcie animal no roedora, como por exemplo o
coelho. Os animais devem ser adultos jovens (BRASIL, 2004a).

27

Os ratos machos atingem uma maturidade sexual entre 60 e 75 dias de vida. J as fmeas
encontram-se sexualmente maduras entre 90 e 100 dias de vida. O ciclo estral regular de
natureza polistrica anual, com ciclos estrais de 4 a 5 dias, ao longo do ano. (COBEA, 1996;
CHAHOUD & KWASIGROCH, 1977).
Segundo Chahoud e Kwasigroch (1977) os ciclos estrais so divididos em 4 fases,
normalmente avaliadas mediante exame de citologia vaginal:
I)

Proestro (12h): caracterizado por um grande nmero de clulas nucleadas e


algumas clulas proliferativas do epitlio vaginal;

II)

Estro (14h): caracterizado pela presena de clulas queratinizadas


anucleadas; a ovulao ocorre espontaneamente na metade do ciclo escuro
durante esta fase;

III)

Metaestro (21h): inmeros leuccitos e filamentos de muco;

IV)

Diestro (57h): perodo de repouso, em que a mucosa vaginal apresenta-se


delgada, com poucas clulas nucleadas, poucos leuccitos e muco.

Os ratos, em vrios laboratrios, so acasalados na proporo de trs fmeas para cada


macho, durante todo o perodo de escurido, exceto nos experimentos em que o momento da
cpula deve ser determinado para avaliar a idade gestacional. Aps a confirmao da prenhez,
mediante a presena de espermatozides na citologia vaginal, as fmeas so colocadas em gaiolas
individuais, e este considerado o dia zero de prenhez.
O perodo de desenvolvimento embriolgico e fetal consiste em mudanas e variaes
complexas, sendo dividido em quatro perodos:
1) Perodo de implantao: logo aps a fecundao, marcado pela fuso dos ncleos do
vulo e do espermatozide; aps o ovo atinge o estgio de blstula que se segue pelo
implante do blastocisto no tero. Neste perodo, qualquer interferncia produzida por
um medicamento leva a embrioletalidade, sendo rara a ocorrncia de teratognese.

28

2) Perodo de organognese: abrange a proliferao, diferenciao e migrao celular at


a organognese propriamente dita, que consiste na formao dos rgos rudimentares.
Medicamentos administrados s mes nesta fase, podem levar a teratognese, se a
leso for compatvel com a vida do animal, ou a embrioletalidade, caso no seja.
3) Perodo de desenvolvimento fetal: todos os tecidos j esto formados e os animais
crescem, sendo que alguns sistemas sofrem maturao nesta fase.
4) Perodo neonatal: histognese, alterao funcional, ganho de peso corporal. A
exposio a medicamentos neste perodo pode produzir reduo do peso corporal,
desordens funcionais e carcinognese.
Os testes de toxicidade pr-natal, toxicidade do desenvolvimento ou de teratogenicidade
avaliam a exposio de um mamfero a agentes qumicos durante o perodo de gestao. Neste
perodo, a cintica de uma substncia qumica modificada devido s novas condies
fisiolgicas maternas e s transformaes na nova unidade experimental que se impe unidade
materno/placentria/fetal. Estes testes de toxicidade pr-natal so delineados para avaliar os
efeitos da exposio de animais durante o perodo de gestao e sobre o organismo em
desenvolvimento. Isto inclui a observao dos efeitos maternos e dos efeitos na prole, tais como
morte, alteraes estruturais ou do desenvolvimento embriofetal. Uma das alteraes que podem
ocorrer neste teste so as alteraes funcionais que embora de grande importncia no podem ser
avaliadas neste tipo de teste (LEMNICA, 2001).
Atualmente os termos malformao ou m-formao no significam apenas formao
anormal ou defeituosa de tecidos, mas tambm anormalidades bioqumicas. Estas podem ser
causadas pela ao direta de um agente txico, substncia qumica, radiaes, entre outras, sobre
o produto da concepo ou secundariamente, atravs da ao sobre o organismo materno. As
malformaes induzidas por agentes patolgicos, qumicos ou ambientais durante o perodo de
desenvolvimento dos rgos de um animal, podendo ser de natureza estrutural (morfolgicas)
e/ou funcional (bioqumica),

chamado de teratognese (BERNARDI, 1999). Alteraes

reprodutivas como as anomalias congnitas, podem ocorrer espontaneamente sendo causadas por
fatores endgenos ou por influncia de substncias txicas causando efeitos teratognicos (EPA,
1996a).

29

As plantas medicinais tm seu uso descrito por praticamente todos os povos desde os
tempos mais remotos. Mas muitas plantas contm substncias capazes de exercer ao txica
sobre organismos vivos. Segundo algumas teorias, essas substncias seriam formadas com a
funo de defender a espcie de seus predadores. Por isso, no surpresa que muitas plantas
acumulem substncias de elevada toxicidade, como os glicosdeos cianognicos, presentes na
mandioca-brava; protenas txicas como a ricina, presente na mamona; muitos alcalides como a
coniina, presente na cicuta. Cabe ressaltar que muitas plantas so completamente desconhecidas
quanto ao potencial de causar intoxicaes (MENGUE et al., 2001).
Na utilizao de qualquer medicamento durante a gestao, deve sempre ser considerada a
relao risco-benefcio. Plantas como a Abrus precatorius L. (jequiriti), a Casearia silvestris S.
(ch-de-bugre), Coleus barbatus B. (boldo), Ruta chalepensis L. (arruda), Symphytum officinale
L. (confrei), so apenas algumas, de muitas existentes, conhecidas por causarem aborto ou
suspeita de qualquer outro risco para a gestao (MENGUE et al., 2001). J o Piper methysticum
Forst (kava kava), utilizado como ansioltico, apresenta uma carncia de estudos relacionados
com a gestao.
Para que se pudesse avaliar o efeito amplo de um agente sobre todas as etapas da
reproduo foram propostos trs segmentos que compreendem a observao dos efeitos txicos
de um xenobitico durante os perodos de diferente sensibilidade intra-uterina, sobre o
desempenho reprodutivo e sobre o desenvolvimento ps-natal dos animais expostos
(LEMNICA, 2001). Segundo EPA (1996b), podemos dividir os estudos de toxicologia
reprodutiva em :
a) Segmento I - de toxicidade crnica, avalia os efeitos sobre a fertilidade de machos e
fmeas, sendo os machos tratados antes e durante o perodo de acasalamento e as
fmeas durante a prenhez e lactao;
b) Segmento II - de teratogenicidade, que avalia as possveis alteraes no
desenvolvimento da prognie exposta durante a fase de organognese.
c) Segmento III de toxicidade peri e ps-natal, avalia os efeitos sobre o
desenvolvimento pr e ps-natal de prognies expostas durante as fases de
desenvolvimento fetal e lactao.

30

2.3 Toxicidade heptica

A crescente utilizao de plantas medicinais em todo o mundo, ocorre por ser um produto
natural mas principalmente por uma idia errnea de que os produtos naturais so isentos de
qualquer efeito txico. Sabe-se que muitas plantas contm substncias capazes de exercer ao
txica no organismo (MENGUE et al., 2001).
Muitas plantas so txicas para o fgado. As plantas Lantana camara (Lantana),

Tetradynia glabrata (Rabo de coelho), Tribulus terrestris (Videirinha), so alguns exemplos de


plantas hepatotxicas (PEARSON, 1993). O Piper methysticum uma planta que no est na
lista das plantas hepatotxicas, mas recentemente vem sendo associada a casos de
hepatotoxicidade (SINGH; DEVKOTA, 2003).
O fgado um dos maiores rgos do corpo situado na cavidade abdominal que
desempenha muitas e importantes funes como: metablicas, excretoras e secretoras, de
armazenamento, de proteo, de circulao e de coagulao sangnea. Ele recebe irrigao
atravs da veia porta (70%) e uma poro menor atravs da artria heptica. Pela veia porta chega
ao fgado todo o material absorvido nos intestinos, com exceo de parte dos lipdios. um rgo
que metaboliza e acumula nutrientes, neutraliza e elimina substncias txicas absorvidas. Essa
eliminao se d atravs da bile que tambm auxilia na digesto de lipdios (MOTTA, 2003).
O fgado composto estruturalmente de hepatcitos, um sistema de ductos biliares um rico
suprimento sangneo, tanto venoso quanto arterial. Os parmetros clinicopatolgicos usados
para avaliar o fgado refletem estes componentes estruturais e podem ser divididos em testes de
enzimas sricas e testes funcionais (MEYER et al., 1995).
A doena heptica tem duas conseqncias fisiopatolgicas principais: diminuio do
nmero de hepatcitos ntegros e alterao da microcirculao heptica. Nas hepatopatias agudas
h destruio de hepatcitos, sugerindo que a capacidade metablica heptica diminui como
resultado do menor nmero de hepatcitos funcionantes, e no pela diminuio da funo de cada
hepatcito. Nas hepatopatias crnicas, alm da diminuio do nmero de hepatcitos, ocorre
alterao da microcirculo heptica, dificultando as trocas entre hepatcitos e o sangue
sinusoidal (BORGES, 2001).

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Uma das principais funes do fgado a desintoxicao. O que faz do fgado um local
propcio a sofrer uma agresso txica (MACLACHLAN; CULLEN, 1998). O processo necessita
que toda a droga seja transportada para o fgado e depositada no hepatcito. Essa ao torna o
fgado extremamente susceptvel a danos txicos. Vrias substncias txicas como o tetracloreto
de carbono, toxina de Amanita phalloides, drogas teraputicas como o paracetamol em excesso,
clorpromazina, eritromicina, halotano, causam danos diretos ao fgado e resultam em processos
inflamatrios e necrticos similares ao da hepatite ou colestase (MOTTA, 2003).
O grau de leso heptica, causado por substncias qumicas ou biolgicas varivel,
podendo ocorrer apenas alteraes leves das enzimas hepticas, no apresentando sintomas
clnicos, at casos graves de insuficincia heptica aguda ou crnica (JOHNSON, 1997). Dentre
as toxinas mais comuns podemos citar as qumicas e metais pesados, alm de certas plantas,
especialmente aquelas associadas ao crescimento de fungos e produo de aflatoxina (HARDY,
1992).
Existem vrios fatores que influenciam a toxicidade de uma substncia, como a
composio, a solubilidade, a polaridade, a ionizao e a formulao e interaes qumicas
diretas. Alm desses fatores referentes prpria substncia txica, existe o fator referente ao
animal como sua capacidade de metabolizao, doenas concomitantes, estado nutricional, idade,
sexo, espcie, raa, linhagens e vias de exposio (SAKATE, 2002).
Segundo Pearson (1993), o fgado tem maior propenso a sofrer leses por exposies
crnicas, porque a exposio aguda a dosagens elevadas, freqentemente, leva morte antes que
tenha ocorrido a destruio heptica. O grau de leso heptica mensurado atravs da avaliao
das enzimas hepticas, sinais clnicos inespecficos como anorexia, vmito, perda de peso,
poliria e polidipsia (JOHNSON, 1997). Casos iniciais de molstia heptica geralmente so
detectados apenas pelo aumento dos nveis da atividade de enzima heptica no soro (PEARSON,
1993).
As enzimas sricas usadas rotineiramente no diagnstico clnico de leses hepticas esto
presentes em altas concentraes no fgado. Nas injrias hepatocelular ou colestase do fgado,
essas enzimas hepticas so liberadas no plasma (KANEKO et al., 1997). As enzimas podem ser
liberadas devido necrose celular ou aumento da permeabilidade da membrana celular. Essa

32

ltima situao pode ser transitria e completamente reversvel, com a liberao somente de
enzima citoplasmtica ou ligada membrana celular. A atividade enzimtica no plasma depende
do nmero de clulas envolvidas por unidade de tempo, da concentrao celular da enzima e de
sua localizao subcelular. Alta concentrao nas clulas e uma meia vida longa no plasma
transformam a enzima em um indicador sensvel de dano heptico (DUNN, 2001). Dentre essas
enzimas podemos citar alanina-aminotransferase (ALT); asparatato-aminotransferase (AST);
gama-glutamil-transferase (GGT); fosfatase alcalina (FA); creatino-fosfoquinase (CK); sorbitol
desidrogenase (SD) entre outras (MOTTA, 2003).
A ALT uma enzima de grande importncia nos animais domsticos pois encontrada
em grande quantidade nos hepatcitos do co, gato, rato e coelho, sendo considerada especfica
para leso heptica nestas espcies. Os nveis de sua elevao dependem do grau de durao da
leso. Dentre as principais patologias do fgado que encontramos nveis elevados desta enzima
esto a hepatite infecciosa canina, hepatite txica, processos txico-qumicos, tumores hepticos,
uso de frmacos (corticides e hormnios) entre outros. As concentraes maiores desta enzima
so evidenciadas nas leses agudas (SILVEIRA, 1988). O tempo de meia- vida da ALT varia de
3 horas a 3 dias. O aumento da atividade desta enzima diretamente proporcional ao nmero de
hepatcitos lesados e no ao grau da leso. (BUSH, 1991).
Segundo Loeb (1997), a mensurao da enzima alanina aminotransferase
hepatoespecfica para ratos e camundongos, enquanto para porquinhos da ndia considerada
uma enzima inespecfica para avaliar o sistema heptico. Em ratos a mensurao do sorbitol
desidrogenase tem demonstrado ser mais hepatoespecfica e mais sensvel, para detectar injurias
hepatocelulares, quando comparado com outras enzimas.
Uma outra enzima utilizada para auxlio diagnstico de leses hepticas a FA (fosfatase
alcalina). Esta enzima est presente em vrios tecidos, principalmente no tecido sseo, sistema
hepatobiliar e mucosa gastrintestinal. Esta enzima o indicador mais sensvel de colestase ( fluxo
biliar prejudicado), porque sua atividade aumenta antes de se detectar nveis elevados de
bilirrubina (BUSH, 1991). A elevao da FA depende do grau de obstruo canalicular, atingindo
valores 20 a 30 vezes maior que o normal em uma obstruo total em caninos e felinos

33

(STROMBECK & GUILFORD, 1991). O aumento da FA pode ocorrer nos casos de necrose e
degenerao heptica (BUSH, 1991).
Segundo Borges (2001), o termo leso heptica deve ser usado somente aps estudo
histolgico do fgado; a leso ser ento denominada de acordo com os achados histolgicos.
Esses achados incluem alteraes, encontradas nos hepatcitos, como deposio de gordura,
pigmentao, amiloidose e degeneraes. A tumefao celular uma das primeiras alteraes
microscpicas identificveis aps uma leso de grau leve. Alm disso, pode ocorrer a
degenerao gordurosa, que considerada a manifestao mais importante de doena heptica
txica, fibrose e hiperplasia biliar (MACLACHLAN; CULLEN, 1998).

34

3 OBJETIVOS

Contribuir com os conhecimentos sobre a utilizao de um fitoterpico, existente no


mercado brasileiro, empregado como ansioltico e sedativo, avaliando a toxicidade pr-natal com
o uso de Piper methysticum Forst, Piperaceae (kava kava) em ratas Wistar expostas no perodo
de organognese, avaliando as possveis alteraes no desenvolvimento das prognies.

Avaliar, tambm, possveis alteraes hepticas em ratas Wistar tratadas com Piper

methysticum Forst, Piperaceae (kava kava), durante o perodo da gestao, atravs da


mensurao das enzimas hepticas ALT e FA e da histopatologia do fgado.

35

4.1

MATERIAL E MTODOS

Toxicidade reprodutiva do Piper methysticum Forst, Piperaceae (Kava kava)

4.1.1 Animais
Foram utilizados 96 ratos Wistar (72 fmeas e 24 machos) com idade de 90 dias,
provenientes do Centro de Criao e Experimentao de Animais de Laboratrio (CREAL) da
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Os animais foram adaptados durante 15
dias antes do incio do experimento s condies do Biotrio Setorial do Departamento de
Farmacologia do Instituto de Cincias Bsicas da Sade (ICBS).
Os animais foram mantidos sob condies constantes de umidade, temperatura (21C2) e
obedecendo a um ciclo de 12 horas de luz (das 9 s 21h) e 12 horas no escuro (das 21 s 9h). Eles
receberam rao comercial (Nuvilab CR1-Nuvital) e gua vontade, durante todo o perodo do
experimento.
As fmeas foram mantidas em grupos de cinco em cada gaiola plstica, enquanto os
machos foram colocados isolados em gaiolas at o momento do acasalamento.

4.1.2 Acasalamento
Para o acasalamento introduziu-se trs fmeas virgens na gaiola de cada macho durante
trs horas por dia (das 6h s 9h), correspondendo ao final do perodo escuro. Os animais foram
acasalados at que se obtivesse um mnimo de 10 fmeas prenhes para cada grupo.
O incio da gestao foi confirmado atravs da citologia vaginal (estro) que evidenciava
presena de espermatozides e clulas queratinizadas no esfregao vaginal, o qual foi realizado

36

diariamente e analisado ao microscpio ptico com aumento de dez vezes. Vinte e quatro horas
aps a constatao de espermatozides no esfregao vaginal, foi considerado como primeiro dia
da gestao.
As fmeas prenhas foram colocadas em gaiolas plsticas individuais, com maravalha
limpa, recebendo 200g de rao e 500ml de gua que eram pesados e renovados a cada 3 dias
(para controle de rao e gua at o dia da cesariana).

4.1.3 Preparao fitoterpica testada


Foi utilizada uma formulao fitoterpica contendo Piper methisticum Forst, Piperaceae,
denominada kava kava,

lote 774201, produzido em outubro de 2001, pelo Herbarium

Laboratrio Botnico LTDA. (Av. Santos Dumont, 1111 Colombo PR), com validade at
outubro de 2004. Registrado no Ministrio da Sade sob o nmero 11860023, este fitoterpico
comercializado em forma de p de rizoma de kava kava, em cpsulas de 400mg.

4.1.4 Tratamento dos animais


Para a avaliao da toxicidade da kava kava foi utilizado o segmento II de avaliao de
toxicidade pr-natal conforme normas da Agncia de Proteo Ambiental (Environmental

Protection Agency - EPA) (EPA, 1996b) e recomendaes da Administrao de Drogas e


Alimentos (Food and Drug Administration - FDA) e da Organizao para o Desenvolvimento
e Cooperao Econmica (Organization for Economic Cooperation and Development OECD).
Conforme este segmento as fmeas gestantes foram tratadas do 6 ao 15 dia de gestao,
por via oral com auxlio de sonda oro-gstrica e sempre na parte da manh.

37

Foram constitudos quatro grupos experimentais:


-

O grupo controle que recebeu gua destilada em volume idntico aos dos grupos
DH, DHx7 e DHx10.

O grupo DH que recebeu 5mg.kg-1 , dose indicada para humanos (ERNST, 2002)

O grupo DHx7 que recebeu 35mg.kg-1

O grupo DHx10 que recebeu 50mg.kg-1

O fitoterpico foi diludo em gua destilada, de forma que as diferentes concentraes


pudessem ser administradas em volume de 5ml.kg-1.

4.1.5 Variveis avaliadas

4.1.5.1 Ratas
Todas as fmeas foram avaliadas a partir do primeiro dia de gestao, quanto ao
desenvolvimento ponderal (ganho de massa corporal), consumo a cada 3 dias de gua e rao;
mortalidade; sinais de toxicidade sistmica como perda de peso progressiva e reduo da ingesto
de gua e rao.
A massa corporal das ratas prenhes foi mensurada diariamente e relacionada massa
corporal do dia zero de prenhez, considerada 100%, utilizando-se a frmula:
massa corporal diria (g)
Massa corporal relativa= -------------------------------------------- x 100
massa corporal do dia zero (g)

Os consumos de gua e rao foram medidos a cada trs dias e relacionados massa
corporal mdia do mesmo perodo, conforme as frmulas:
consumo de gua (ml)/3
Consumo relativo de gua = -------------------------------------------------- x 100
massa corporal mdia dos 3 dias (g)

38

consumo de rao (g)/3


Consumo relativo de rao = ---------------------------------------------------x 100
massa corporal mdia dos 3 dias (g)

4.1.5.2 Avaliao dos fetos e rgos das ratas


No 21 dia de gestao, as ratas foram pesadas e anestesiadas com tiopental sdico na
dose de 50mg.kg -1, por via intraperitoneal. Foi realizada uma inciso abdominal mediana ventral
para realizao de coleta de sangue da veia cava caudal, retirada do tero gravdico, mensurao
da massa uterina e da massa corporal da rata sem o tero. Logo aps a abertura da cavidade
abdominal, imediatamente antes da retirada dos rgos, era efetuada a abertura do trax para
realizao da eutansia.
Nos ovrios, foi contado o nmero de corpos lteos e, no tero, o nmero de stios de
implantao. rgos, como o fgado, o bao, os rins, o corao e pulmes tambm foram
inspecionados macroscopicamente, pesados e colocados em soluo de formol tamponado a 10%.
O fgado foi o encaminhado para anlise histopatolgica na Universidade de Passo Fundo.
As massas dos rgos foram relacionas massa corporal de cada rata sem tero, conforme
a seguinte frmula:

massa do rgo (g)


Massa relativa do rgo =---------------------------------------------x 100
massa corporal sem tero (g)

Para avaliao dos fetos foi realizada uma inciso longitudinal no tero, os fetos foram
removidos e avaliados macroscopicamente quanto a malformaes macroscpicas externas,
vitalidade, sexo e peso de cada um. Aps os fetos foram fixados, em soluo de formol
tamponado a 10%, por um perodo mnimo de sete dias para posterior diafanizao, conforme a

39

tcnica modificada de Taylor e VanDyke (1985), e

posterior avaliao das anomalias

esquelticas.

4.1.5.3 Mtodo de diafanizao e colorao


Removidos do formol tamponado, os fetos foram imersos em lcool etlico 70GL por
24h e posteriormente em lcool etlico 90GL, por mais 24h, para promover a desidratao. Aps
as vsceras foram removidas por uma inciso na regio abdominal e os fetos foram imersos em
uma soluo tampo de borato de sdio a 30% por 24h . Posterior a essas 24h utilizou-se uma
nova soluo de borato de sdio a 30% acrescida de 1g/litro de tripsina para promover a digesto
de tecidos moles. Os fetos eram mantidos nesta soluo temperatura aproximada de 37 C, at
que ficassem transparentes pela completa dissoluo da musculatura. Quando os fetos estavam
transparentes eram colocados imersos em uma soluo de hidrxido de potssio a 1,5%, com a
adio do corante de alizarina por 24 48h. Por fim os fetos passaram por uma seqncia de
imerses em solues de glicerina a 40%, 70% com hidrxido de potssio a 1,5% por 48h cada
uma e posteriormente mantidos em glicerina 100%.
Os fetos diafanizados foram observados quanto presena de alteraes no esqueleto por
meio de microscpio esterioscpico com aumento de 0,7 a 4 vezes. As anormalidades
esquelticas foram avaliadas de acordo com o Atlas de anormalidades esquelticas e externas
em ratos (Atlas of external and skeletal anomalies in rats) (CHAHOUD, 1997) e denominadas
conforme a terminologia da Federao Internacional da Sociedade de Teratologia (International

Federation of Teratology Societies) (WISE et al., 1997).

40

4.1.6 Avaliao dos ndices reprodutivos


Para avaliao dos ndices reprodutivos levou-se em considerao o nmero de fetos por
rata, as perdas pr-implantao e as perdas ps-implantao. As perdas pr e ps-implantao
eram calculadas conforme as frmulas a seguir (LEMNICA et al., 1996):

n de corpos lteos n de stios de implantao


Perdas pr-implantao = ------------------------------------------------------------x 100
n de corpos lteos
n de stios de implantao - n de fetos
Perdas ps-implantao = ------------------------------------------------------------x 100
n de stios de implantao

4.1.7 Avaliao dos ndices fetais


Para avaliao dos ndices fetais como a taxa (Tx) de natalidade, proporo de sexo,
malformaes macroscpicas externas e anormalidades esquelticas foram utilizadas as frmulas
a seguir (EPA, 1996b):
n de fetos vivos
Tx de natalidade = ------------------------------------------x 100
n total de fetos
n de fetos machos
Proporo de machos = ---------------------------------------x 100
n total de fetos
n de fetos fmeas
Proporo de fmeas = ----------------------------------------x 100
n total de fetos

41

n total de fetos malformados


Tx de malformaes externas = ----------------------------------------------------------x 100
n total de fetos
n total de fetos com anormalidades esquelticas
Tx de anormalidades esquelticas =----------------------------------------------------------x 100
n total de fetos

4.1.8 Dosagem de enzimas hepticas e histopatologia do fgado


Aps a anestesia das ratas e abertura da cavidade abdominal, coletou-se em torno de 3ml
de sangue da veia cava caudal, para anlise bioqumica. O sangue foi armazenado em frascos sem
anticoagulante e encaminhado para o laboratrio de anlises clnicas da Universidade Luterana
do Brasil. Para anlise dos nveis sricos das enzimas ALT e FA foi utilizado o Kit comercial
Labtest Diagnstica e posteriormente efetuou-se a leitura em aparelho de espectrofotometria.
Aps o sacrifcio das ratas, o fgado foi removido e acondicionado em formol tamponado
e encaminhado para avaliao histopatolgica, a qual foi realizada no laboratrio de
histopatologia da Universidade de Passo Fundo.

4.1.9 Anlise estatstica


Os dados foram avaliados estatisticamente utilizando o teste de anlise de varincia de
uma via (ANOVA). Foi utilizado o programa SPSS para Windows 8.0 e o EXCEL 2000. As
variveis quantitativas como o desenvolvimento ponderal das ratas e o consumo de gua e rao
foram avaliados atravs de anlise de varincia de uma via, bem como a massa relativa dos
rgos das ratas, o nmero de corpos lteos, stios de implantao e o nmero de fetos. Quando
necessrio efetuou-se o ps-teste de Kruskal-Wallis ou Scheff para identificao dos grupos
estatisticamente diferentes.

42

As variveis qualitativas, como perdas pr e ps- implantao, proporo de sexo, taxas


de viabilidade, taxas de malformaes externas e alteraes esquelticas, foram avaliadas atravs
do teste qui-quadrado. As diferenas foram consideradas significativas sempre que p<0,05.

43

5. RESULTADOS

5.1 Toxicidade reprodutiva do Piper methysticum Forst, Piperaceae (kava kava)

A toxicidade sistmica foi inferida pela modificao do desenvolvimento ponderal,


consumo de gua e rao e outros sinais como atividade geral, vitalidade, resposta ao toque,
tnus postural, fora de agarrar, reflexo auricular e corneal, tremores, convulses, hipnose,
anestesia mico, piloereo, respirao ruidosa. A toxicidade reprodutiva foi inferida pela
avaliao dos ndices reprodutivos e alteraes esquelticas.

5.1.1 Desenvolvimento ponderal das ratas durante a prenhez


A Figura 4 mostra o ganho relativo de massa corporal (dia 1 = 100%), do 1 ao 21 dia de
gestao, calculado a partir da mensurao diria da massa corporal (g) das ratas descritas no
item 4.1.5.1.
O P. methysticum no alterou o desenvolvimento ponderal normal das ratas prenhes.
Houve um aumento significativo de massa corporal relativa para todos os grupos, mas no houve
diferena estatisticamente significativa entre os grupos. A mdia e o erro padro da mdia podem
ser observados na Tabela 1.

44

150,0%

Peso relativo ao dia 0 (%)

140,0%

130,0%

120,0%

Controle
DH

110,0%

DHx7
DHx10

100,0%

90,0%
0

10

15

20

25

Perodo de prenhez (dias)

FIGURA 4. Desenvolvimento ponderal relativo (1 dia = 100%) das ratas do grupo controle
(0mg.kg-1); e tratadas com P. methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e
DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao. Dados expressos pela mdia .

45

TABELA 1. Massa corporal mdia (x) em gramas e erro padro da mdia (epm) das ratas do
grupo controle (0mg.kg-1); e tratadas com P.methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7
(35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao.
Dias
Dia 01
Dia 02
Dia 03
Dia 04
Dia 05
Dia 06
Dia 07
Dia 08
Dia 09
Dia 10
Dia 11
Dia 12
Dia 13
Dia 14
Dia 15
Dia 16
Dia 17
Dia 18
Dia 19
Dia 20
Dia 21

Controle (n=11)
epm
x
222,50
7,87
227,10
8,03
229,25
8,38
230,70
8,75
234,68
8,08
238,68
8,79
238,64
8,52
240,73
9,14
240,41
8,64
245,82
9,58
248,86
9,29
253,64
8,82
255,91
8,96
258,77
9,27
264,18
9,73
264,18
8,95
273,41
9,05
284,50
9,33
291,00
9,27
304,82
10,28
310,18
10,03

DH (n=10)
epm
x
237,15
7,88
240,52
8,08
246,30
8,55
249,00
9,25
249,60
9,23
255,70
9,00
253,30
8,50
258,45
8,99
258,30
9,09
260,40
9,50
266,35
8,92
269,10
9,68
274,85
9,57
275,25
10,22
282,00
9,58
285,85
10,62
292,60
10,73
304,30
11,24
313,20
11,63
324,00
12,75
332,65
13,60

DHx7 (n=10)
epm
x
229,20
7,46
230,42
7,28
234,20
9,12
237,55
8,14
241,50
8,52
243,50
8,27
244,30
9,30
245,55
8,66
244,90
8,93
250,85
9,24
251,85
10,05
256,90
9,72
256,85
9,51
261,60
9,76
267,35
9,35
269,90
9,98
275,60
10,27
282,35
10,58
289,40
11,45
299,10
12,83
303,50
13,73

DHx10 (n= 11)


epm
x
216,59
6,90
220,85
6,59
227,00
6,63
228,77
6,16
228,73
6,10
233,00
7,13
231,77
6,68
233,86
7,20
234,55
7,46
236,59
7,80
241,00
7,63
242,64
7,26
250,55
8,53
252,09
7,96
255,86
8,43
260,32
8,35
267,64
8,54
278,36
9,10
286,50
9,22
297,77
9,35
304,95
9,99

5.1.2 Consumos relativos de gua durante a prenhez

O P. methysticum no interferiu no consumo mdio de gua (Figura 5) em relao a massa


corporal (%) durante a prenhez. Verificou-se que, tanto as ratas do grupo controle como as ratas
tratadas com Piper methysticum apresentaram um consumo relativo de gua semelhante durante
toda prenhez. Entretanto, houve diferena significativa (p = 0,026) ao nvel de 5%, entre o grupo
controle e o grupo DHx7 (teste de Scheff) no 15 dia de prenhez.

46

25,0%

Consumo relativo de gua (%)

20,0%

15,0%

Controle
DH

10,0%

DHx7
DHx10

5,0%

0,0%
Dia 3

Dia 6

Dia 9

Dia 12

Dia 15

Dia 18

Dia 21

Perodo de prenhez (dias)

Diferena significativa ao nvel de 5% em relao ao grupo controle.


De acordo com o teste de Scheff, o controle se diferencia significativamente do grupo DHx7.
FIGURA 5. Consumo relativo de gua das ratas do grupo controle (0mg.kg-1); e tratadas com P.
methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o
15 dia de gestao. Dados expressos pela mdia.

A mdia e erro padro da mdia dos grupos controle, DH, DHx7 e DHx10 podem ser
observados na Tabela 2.

47

TABELA 2.

Mdia (x ) e erro padro da mdia (epm) do consumo de gua (ml), medida a


cada 3 dias nos grupos controle (0mg.kg-1) e tratadas com P. methysticum DH
(5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de
gestao.
Controle (n=11)

Dias
Dia 03
Dia 06
Dia 09
Dia 12
Dia 15
Dia 18
Dia 21

x
107,50
114,00
104,55
117,27
116,36
144,55
135,91

epm
6,48
11,45
7,12
5,70
8,06
8,10
10,33

DH (n=10)

x
112,50
125,50
129,50
135,50
157,50
168,00
170,00

epm
11,38
8,08
8,99
9,87
12,89
8,10
26,42

DHx7 (n=10)

x
111,00
123,00
124,50
135,00
155,00
162,00
161,00

epm
12,69
8,24
8,51
10,65
8,47
10,39
9,39

DHx10 (n=11)

x
120,45
119,55
118,18
125,45
134,55
153,18
135,45

epm
6,69
6,27
8,80
10,67
9,71
11,62
10,28

5.1.3 Consumos relativos de rao durante a prenhez

O P. methysticum no interferiu no consumo mdio de rao (Figura 6) em relao


massa corporal (%) durante a prenhez. Verificou-se que, tanto as ratas do grupo controle como as
ratas tratadas com P. methysticum apresentaram um consumo relativo de rao semelhante
durante toda prenhez. A mdia e erro padro da mdia dos grupos controle, DH, DHx7 e DHx10
so apresentados na Tabela 3.
TABELA 3. Mdia (x ) e erro padro da mdia (epm) do consumo de rao (g), medida a cada 3
dias nos grupos controle (0mg.kg-1) e tratadas com P. methysticum DH (5mg.kg-1);
DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao.
Controle (n=11)

Dias
Dia 03
Dia 06
Dia 09
Dia 12
Dia 15
Dia 18
Dia 21

epm

44,98
60,11
60,59
65,65
67,23
81,55
74,32

2,82
2,80
2,49
3,09
3,08
3,81
4,03

DH (n=10)

epm

48,94
69,64
73,60
72,80
80,85
84,60
80,30

3,33
4,42
4,49
4,25
5,36
4,65
5,58

DHx7 (n=10)

DHx10 (n=11)

epm

epm

44,71
62,54
66,25
63,85
70,45
74,65
72,25

4,32
3,86
3,52
4,72
3,25
4,25
3,30

41,84
59,38
61,36
62,73
72,68
75,00
69,95

2,43
2,59
2,79
3,85
4,02
4,59
3,76

48

12,0%

Consumo relativo de rao (%)

10,0%

8,0%

Controle

6,0%
DH
DHx7
DHx10

4,0%

2,0%

0,0%
Dia 3

Dia 6

Dia 9

Dia 12

Dia 15

Dia 18

Dia 21

Perodo de prenhez (dias)

FIGURA 6. Consumo relativo de rao (g) das ratas do grupo controle (0mg.kg-1); e tratadas com
P.methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e
o 15 dia de gestao. Dados expressos pela mdia.

5.1.4 ndices reprodutivos


O Piper methysticum administrado, por via oral, do 6 ao 15 dia de prenhez, nas
dosagens 5mg.kg-1, 35 mg.kg-1, 50mg.kg-1, no alterou significativamente o nmero de fetos por
fmeas, as perdas pr e ps- implantao das ratas (Tabela 4).

49

TABELA 4. ndices reprodutivos das ratas do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com P.
methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e
o 15 dia de gestao. Dados expressos pela mdia (x) e desvio padro (s).
Variveis
N filhotes
Corpos Lteos
Stios de implantao
Perda pr-implantao
Perdas ps-implantao

Controle
s
x
8,55
2,77
13,18
3,82
9,45
2,94
26,8%
20,5%
9,8%
9,1%

DH
DHx7
s
s
x
x
10,30
4,50
7,10
5,43
13,20
3,85 12,10
1,85
11,10
4,07
9,00
4,67
19,5% 21,5% 26,9%
34,4%
16,8% 31,5% 37,7%
39,9%

DHx10
s
x
9,82
1.66
12,82
1,40
10,45
1,97
18,1%
15,0%
5,6%
5,6%

Valor de p
0,134a
0,820
0,530
0,660a
0,162a

Devido alta variabilidade demonstrada por elevados desvios-padro, realizou-se o teste no-paramtrico de Kruskal-Wallis. A
opo pela tcnica no-paramtrica deve-se a rejeio da hiptese de homogeneidade de varincia pelo teste de Levene.

5.1.5 Massa relativa dos rgos


O Piper methysticum no alterou de forma significativa a massa relativa dos rgos (%)
das ratas, por via oral, do 6 ao 15 dia de prenhez, nas dosagens 5mg.kg-1, 35 mg.kg-1,
50mg.kg-1, em comparao ao grupo controle (Tabela 5).

5.1.6 ndices dos fetos


O Piper methysticum no alterou de forma significativa os ndices dos fetos de ratas
tratadas, em comparao ao grupo controle (Tabela 6). Para avaliao da vitalidade, alteraes
macroscpicas externas e relao de machos e fmeas foi utilizado o qui-quadrado, enquanto o
nmero de fetos e a massa corporal ao nascimento atravs da ANOVA. Ambos no apresentaram
diferenas significativas entre os grupos.

50

TABELA 5. Massa relativa dos rgos (g) das ratas do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com
P. methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6
e o 15 dia de gestao. Dados expressos pela mdia (x) e desvio padro (s).
x
4,917
5,083
4,884
4,857
0,334
0,339
0,329
0,326
0,327
0,327

S
0,512
0,491
0,579
0,473
0,022
0,028
0,024
0,022
0,025
0,020

DHx7
10
0,320
DHx10
11
0,318
Adrenal Direita
Controle
11
0,014
DH
10
0,015
DHx7
10
0,017
DHx10
11
0,016
Adrenal Esquerda
Controle
11
0,016
DH
10
0,018
DHx7
10
0,016
DHx10
11
0,018
Corao
Controle
11
0,318
DH
10
0,314
DHx7
10
0,309
DHx10
11
0,329
Pulmes
Controle
11
0,524
DH
10
0,545
DHx7
10
0,506
DHx10
11
0,566
Bao
Controle
11
0,358
DH
10
0,334
DHx7
10
0,356
DHx10
11
0,339
Sem diferenas significativas entre os grupos (p> 0,05; ANOVA)

0,029
0,035
0,002
0,006
0,006
0,004
0,003
0,005
0,004
0,004
0,030
0,023
0,019
0,028
0,050
0,080
0,063
0,087
0,073
0,062
0,035
0,046

Fgado

Rim Direito

Rim Esquerdo

Controle
DH
DHx7
DHx10
Controle
DH
DHx7
DHx10
Controle
DH

N
11
10
10
11
11
10
10
11
11
10

Valor de p
0,750

0,660

0,829

0,541

0,671

0,326

0,263

0,708

51

TABELA 6. ndices dos fetos das ratas do grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com Piper
methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e
o 15 dia de gestao

Grupo
Variveis
N ratas
N filhotes
Vitalidade
Massa corporal (g)
Alteraes macroscpicas
Proporo (macho, fmea)

Controle
11
94
100,0%
4,96 + 0,08
0
54%, 46%

DH
10
103
100,0%
4,97 + 0,10
0
46%, 54%

DHx7
10
71
92,9%
4,83 + 0,13
0
43%, 57%

DHx10
11
108
100,0%
5,00 + 0,18
0
47%, 53%

Sem diferenas significativas entre os grupos (p> 0,05; ANOVA)

5.1.7 Anormalidades esquelticas dos fetos


As anormalidades dos fetos foram avaliadas quanto s variaes esquelticas (Tabela 7) e
quanto s malformaes esquelticas (Tabela 8). O tratamento das ratas com Piper methysticum
administrado, por via oral, do 6 ao 15 dia de prenhez, nas dosagens 5mg.kg-1, 35 mg.kg-1 no
aumentou a prevalncia de variaes esquelticas nos fetos em comparao com as observadas,
no grupo controle. Entretanto, no grupo tratado com 50mg.kg-1 de Piper methysticum foi
encontrado um aumento significativo (p= 0,016 e p= 0,001, teste qui-quadrado, respectivamente)
de ossificao incompleta das esternebras em relao ao grupo controle e fontanela aumentada,
em comparao com o grupo DH e DHx7 (Figura 7). Com relao s malformaes foi
observado um aumento significativo (p= 0,020, teste qui-quadrado) na presena de costelas
onduladas do grupo DHx10 em relao aos grupos DH e DHx7 (Figura 8).
Em todos os grupos, tratados e controle, as principais anormalidades observadas foram:
ossificao incompleta do crnio (Figura 9), ossificao incompleta das esternebras (Figura 10),
no ossificao das falanges dos membros anteriores (MAs) e membros posteriores (MPs) e
metatarsos.

52

TABELA 7. Prevalncia das anormalidades esquelticas (variaes) dos fetos das ratas do grupo
controle (0mg.kg-1) e tratadas com P. methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1)
e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao. Dados expressos em nmero
e percentual de fetos acometidos.

Ossificao incompleta
Crnio
Escpula
Supra-occipital
Esternebras

No ossificao
Falanges dos MAs
Falanges dos MPs
Fontanela aumentada
Metatarso
Esternebras
Metacarpo
N ratas (fetos)

Controle
3
3,2%
1
1,1%
2
2,1%
0
0,0%

53
56,4%
6
6,4%
5
5,3%
34
36,2%
0
0,0%
4
4,3%
11(94)

Grupo
DH
DHx7
1
6
1,0%
8,5%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
6
2
5,8%
2,8%

57
55,3%
9
8,7%
0
0,0%
41
39,8%
0
0,0%
0
0,0%
10(103)

MAs= Membros anteriores e MPs= membros posteriores


* Diferena significativa ao nvel de 5%
** Diferena significativa ao nvel de 1%

36
50,7%
8
11,3%
0
0,0%
24
33,8%
0
0,0%
2
2,8%
10(71)

DHx10
7
6,5%
0
0,0%
1
0,9%
10
9,3%

Qui-quadrado
0,075

49
45,4%
10
9,3%
14
13,0%
37
34,3%
1
0,9%
2
1,9%
11(108)

0,372

0,390
0,318
0,016*

0,740
0,001**
0,817
0,477
0,214

53

TABELA 8. Prevalncia das anormalidades esquelticas (malformaes) dos fetos das ratas do
grupo controle (0mg.kg-1) e tratadas com Piper methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7
(35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg-1) entre o 6 e o 15 dia de gestao. Dados
expressos em nmeros e percentual de fetos acometidos.

Mal formaes
Costela supranumerria
Costelas onduladas
Esternebras ausentes
Esternebras bipartidas
Esternebras fusionadas
Esternebras disformes
Tuberosidade deltide disforme
Clavcula irregular
mero disforme
Radio/ulna curta
Radio/ulna disforme
Fmur curto
Metacarpo disforme
Esternbra ossificao extra
Ossificao extra parietal
Atlas disforme
N ratas (fetos)

Controle
8
8,5%
2
2,1%
0
0,0%
0
0,0%
1
1,1%
2
2,1%
1
1,1%
1
1,1%
1
1,1%
1
1,1%
1
1,1%
1
1,1%
1
1,1%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
11 (94)

* Diferena significativa ao nvel de 5%

Grupo
DH
DHx7
2
7
1,9%
9,9%
0
0
0,0%
0,0%
1
1
1,0%
1,4%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
0
2
0,0%
2,8%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
0
0
0,0%
0,0%
2
0
1,9%
0,0%
0
1
0,0%
1,4%
0
1
0,0%
1,4%
10 (103)
10 (71)

DHx10
12
11,1%
6
5,6%*
1
0,9%
1
0,9%
0
0,0%
2
1,9%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
11(108)

Qui-quadrado
0,068
0,020*
0,765
0,477
0,390
0,465
0,390
0,390
0,390
0,390
0,390
0,390
0,390
0,149
0,230
0,230

54

FIGURA 7. Fetos diafazinados de progenitoras do grupo controle e tratados com P.methysticum.


Figura A: feto do grupo controle demonstrando fontanela normal. Figura B: feto do
grupo DHx10 demonstrando fontanela aumentada.

55

FIGURA 8. Fetos diafazinados de progenitoras do grupo controle e tratados com P.methysticum.


Figura A: Feto do grupo controle apresentando costelas de formato normal. Figura
B: Costelas normais em detalhe. Figura C: Feto do grupo DHx10 apresentando
costelas onduladas. Figura D: Costelas onduladas em detalhe.

56

FIGURA 9. Feto diafanizado do grupo tratado com P. methysticum DHx10 apresentando


ossificao incompleta do crnio.

FIGURA 10. Fetos diafazinados de progenitoras do grupo controle e tratados com P.methysticum.
Figura A: Feto do grupo controle apresentando ossificao completa das
esternebras. Figura B: Feto do grupo DHx10 apresentando ossificao incompleta
das esternebras.

57

5.2 Toxicidade heptica


O Piper methysticum na dosagem de 0mg.kg-1, 5mg.kg-1, 35mg.kg-1 e 50mg.kg-1, no
provocou um aumento estatisticamente significativo na atividade da FA (p = 0,62) e ALT (p =
0,51) (Tabela 9).
TABELA 9. Nveis sricos da atividade da FA e ALT das ratas grupo controle (0mg.kg-1) e
tratadas com P.methysticum DH (5mg.kg-1); DHx7 (35mg.kg-1) e DHx10 (50mg.kg1
) entre o 6 e o 15 dia de gestao. Dados expressos em mdia e desvio padro.

FA (U/l)

ALT (U/l)

ns

Grupo
Controle
DH
DHx7
DHx10
Controle
DH
DHx7
DHx10

N
11
10
10
11
11
10
10
11

x
41,32
42,10
35,77
45,97
30,31
27,67
26,10
30,87

s
17,17
11,80
13,48
18,02
13,29
3,88
3,67
11,71

Valor de p
0,518ns

0,625ns

Diferena no-significativa entre os grupos (P> 0,05, ANOVA).

O Piper methysticum na dosagem de 0mg.kg-1, 5mg.kg-1, 35mg.kg-1 e 50mg.kg-1, no


provocou alteraes histopatolgicas no fgado. Apresentando apenas reas com discreta
tumefao celular e, em raros casos, uma leve dissociao dos hepatcitos. No fgado de dois
animais, um do grupo DHx7 e outro DHx10, havia necrose coagulativa centrolobular multifocal,
mas estas alteraes no foram significativas estatisticamente e no obtiveram correlao com os
valores enzimticos.

58

6 DISCUSSO

As plantas medicinais tm seu uso descrito por praticamente todos os povos desde os
tempos mais remotos. Entre o uso primitivo e mgico das plantas pelos curandeiros, at o
conhecimento atual, existem diferenas difceis de serem mensuradas. Entretanto, a partir do
momento em que as plantas passam a ser utilizadas fora do seu contexto original, tornou-se
necessrio avaliao de sua eficcia e segurana (MENGUE et al., 2001).
O surgimento do conceito de natural, em muito contribuiu para o aumento do uso das
plantas medicinais nas ltimas dcadas. Para muitas pessoas esse conceito significa a ausncia
de substncias qumicas, que so aquelas que podem causar algum dano ou, de outra forma,
representam perigo. Assim, produtos naturais passaram a ser sinnimo de produtos saudveis,
seguros e benficos. Esse conceito extremamente equivocado, j que muitas plantas contm
substncias capazes de exercer ao txica sobre organismos vivos. Algumas plantas so fontes
freqentes de intoxicao, como a comigo-ningum-pode, coroa-de-cristo. Algumas plantas
apresentam um potencial abortivo como a Ruta graveolens L. (arruda),

Luffa operculata

L.(bucha), Symphytum officinale L. (confrei), outras apresentam pouca informao quanto


segurana para o uso durante a gestao como o caso do Peumus boldus Mol. (boldo-do-chile),

Piper methysticum (kava kava), entre outras (MENGUE et al., 2001).


O P. methysticum um dos fitoterpicos mais utilizado no pas para o alvio dos sintomas
da ansiedade e insnia (ANVISA, 2002b). Mundialmente, a kava kava utilizada para tratamento
de ansiedade, insnia, alteraes comportamentais, depresso, obesidade, entre outros, tanto em
humanos como em animais. Na dosagem de 5mg.kg 1 dose indicada para humanos (ROBBERS,
2000), e menor dose indicada para pequenos animais; 35mg.kg

-1

, sete vezes a dose indicada

59

para humanos e 50mg.kg

, que dez vezes a dose indicada para humanos, o P. methysticum

administrado por via oral do 6 ao 15 dia de gestao, no causou toxicidade sistmica.


A toxicidade sistmica manifestada atravs de alteraes no desenvolvimento ponderal
dos animais, reduo dos consumos de gua e rao, alteraes comportamentais como
prostrao, apatia e presena de plos arrepiados (MELLO et al., 1997). O fitoterpico testado
neste trabalho no interferiu significativamente no desenvolvimento ponderal e no consumo de
rao das ratas tratadas em relao ao grupo controle. Houve apenas um aumento significativo da
massa corporal de todos os grupos, como j esperado durante o perodo da gestao.
Em relao ao consumo de gua observou-se que do 6 ao 15 dia de gestao os grupos
tratados com P. methysticum apresentaram um consumo superior ao grupo controle, mas este no
foi estatisticamente significativo durante todo o perodo avaliado. Apenas no 15 dia de gestao
houve diferena significativa entre o grupo DHx7 (35mg.kg1) e o grupo controle. A
possibilidade de ocorrer um aumento da ingesta de gua por influncia do P. methysticum no
pode ser descartada.
A maior dosagem de P. methysticum (50mg.kg

) utilizado no apresentou efeitos

adversos como dermopatias (escamao, pele seca, ictercia), perda de plos, diminuio de
apetite e reduo de peso. Estes efeitos adversos, geralmente so observados quando so
utilizadas altas doses de P. methysticum por perodos superiores a sessenta dias (ERNST, 2002a).
Doses de 300 a 800mg por dia da cavalactona di-hidromethisticina, tem causado erupes
cutneas em pessoas (Piper..., 1998).
As ratas tratadas com P. methysticum no apresentaram diferenas significativas, nos
ndices fetais, em relao ao grupo controle, mas o grupo DHx7 (35mg.kg1) apresentou o menor
nmero de filhotes e foi o nico grupo que no apresentou 100% de vitalidade (92,9%). Uma das
possibilidades para tentar explicar esta diminuio da vitalidade porque uma das ratas deste
grupo apresentou uma ninhada de 16 fetos e destes, cinco estavam mortos. Conforme Harkness e
Wagner (1993), as ratas apresentam ninhadas que variam de 6 a 12 filhotes. Sendo assim, um
nmero elevado de filhotes pode ter comprometido a vitalidade dos mesmos. Hapke et al. (1971)

60

no descartou a possibilidade de doses altas (200mg.kg1) de cavaina, dihidrocavaina e iangonina


testados em coelhos causarem uma reduo do nmero de fetos vivos por ninhada.
Em relao a massa corporal, tanto os filhotes do grupo controle como os dos grupos
tratados com P. methysticum apresentaram peso ao nascer dentro dos parmetros fisiolgicos e
sem diferena significativa entre os grupos. Conforme Hapke et al. (1971), a administrao de
uma mistura de princpios ativos isolados de cavana (40%), dihidrocavaina (40%) e iangonina
(20%) em suspenso a 5% em leo vegetal, administrados por via oral em ratos Wistar, nas
dosagens de 100 ou 500 mg.kg 1 , do 6 ao 15 dia de gestao, determinou uma diminuio na
mdia do peso fetal dos animais tratados em relao ao grupo controle, entretanto esta diminuio
permanecia dentro dos limites fisiolgicos. As diferenas entre os resultados podem ter sido
causadas pelas diferentes dosagens empregadas.
Os resultados obtidos no presente trabalho no revelaram aumento da prevalncia de
variaes esquelticas nos fetos das ratas tratadas com P. methysticum em comparao com o
grupo controle. Porm houve um aumento significativo de ossificao incompleta das esternebras
e fontanela aumentada do grupo DHx10 em relao aos grupos DH e DHx7. Hapke et al. (1971),
no observou nenhum tipo de anormalidade esqueltica ou visceral nos grupos testados com uma
mistura de princpios ativos isolados de cavana, dihidrocavaina e iangonina em doses de at
500mg.kg1 em ratos Wistar e 200mg.kg1 em coelhos. Segundo este autor, doses equivalentes a
dose teraputica humana, no provocaram efeitos teratognicos ou embriotxicos em ratos
Wistar.
Conforme Lork (1977) as alteraes esquelticas podem ser variaes do normal, retardos
do desenvolvimento do esqueleto e malformaes. As variaes individuais consistem na
ausncia dos centros de ossificao esperados no momento da cesariana. Os retardos do
desenvolvimento sseo esto relacionados com a ausncia dos centros de ossificao em
estruturas bilaterais ou na presena de forma e/ou tamanho claramente sugestivos de um estgio
precoce de desenvolvimento. Incluem-se nesta classificao as ossificaes incompletas dos
ossos do crnio e fontanelas aumentadas. J as malformaes do esqueleto esto relacionadas

61

com a ausncia parcial ou total de ossos importantes, encurtamentos, arqueamentos, assimetrias,


fuses, fendas ou duplicidade.
Mller (2003), em ensaios de toxicidade sistmica e reprodutiva do antiparasitrio base
de ivermectina, encontrou uma menor prevalncia de fontanelas aumentadas na prognie das
ratas tratadas com ivermectina (18%) em relao ao grupo controle (44%) e atribuiu este achado
ao fato de poder haver uma pequena diferena na durao da prenhez (horas), que possam ser
significativas para a calcificao terminal das fontanelas. No presente trabalho houve um
aumento significativo de fontanelas aumentadas no grupo DHx10 (50mg.kg1) em relao ao
grupo controle, porm no houve uma relao de dose-dependncia, pois os grupos DH e DHx7
no apresentaram estes retardos de desenvolvimento sseo. No h uma explicao satisfatria
relacionada com a presena de fontanela aumentada, pois a possibilidade de diferenas no
perodo da gestao fica reduzido, visto que o acasalamento foi realizado nas trs horas finais do
perodo escuro.
Houve um grande percentual de no ossificao das falanges tanto nos membros
anteriores como posteriores. Segundo Lork (1977) as falanges terminais dos ratos normalmente
esto ausentes na hora da cesariana, devido ausncia dos centros de ossificao.
A prevalncia de malformaes esquelticas nos fetos foi muito baixa neste trabalho e no
apresentou uma relao de dose-dependncia. A identificao de costelas onduladas no grupo
DHx10 foi nica malformao esqueltica estatisticamente significativa em relao ao grupo
controle. Dallegrave (2003) em um ensaio de toxicidade reprodutiva do herbicida GlifosatoRoundup, encontrou um aumento da ocorrncia de vrias alteraes esquelticas como
ossificao incompleta dos ossos do crnio, fontanelas aumentadas apresentando uma relao de
dose-dependncia. As malformaes incluram bipartio dos ossos interparietais, supraoccipital
e esternebras, ausncia de vrtebras caudais, costelas onduladas e no ossificao dos metatarsos
e das falanges dos membros posteriores. Este conjunto de resultados demonstrou um aumento
significativo no risco potencial ao sistema esqueltico de ratos expostos a este herbicida durante a
fase de organognese fetal.

62

O P. methysticum Forst, no provocou alteraes das enzimas hepticas ALT e FA nem


apresentou alteraes histopatolgicas relevantes nos fgados das ratas tratadas. Alm disso, no
houve alteraes no desenvolvimento geral das fmeas tratadas nem alterao do peso relativo de
seus rgos. Estes dados deixam evidente que o P. methysticum no provocou agresso heptica
nas doses utilizadas. Mello (2001) em um trabalho com Lantana camara, uma planta
hepatotxica observou leses hepticas na histologia do fgado sem haver alteraes no
desenvolvimento geral dos animais.
Em casos de intoxicao por agentes hepatotxicos, comumente, h o encontro de intensa
vacuolizao dos hepatcitos, hiperplasia dos ductos biliares, necrose multifocal coagulativa
centrolobular e infiltrao periportal de clulas inflamatrias, podendo ser encontrado apenas
uma ou vrias alteraes dependendo da dose do agente. O exame histopatolgico do fgado das
ratas que foram tratadas com P.methysticum, na dosagem de 0mg.kg-1, 5mg.kg-1, 35mg.kg-1 e
50mg.kg-1, apresentou apenas reas com discreta tumefao celular e, em raros casos, uma leve
dissociao dos hepatcitos. No fgado de duas ratas, uma do grupo DHx7 e outra DHx10, havia
necrose coagulativa centrolobular multifocal, mas estas alteraes no foram significativas e no
obtiveram correlao com os valores enzimticos.
Um estudo, utilizando dosagens de 200 e 500mg de infuso aquosa cavalactonas/kg/dia,
por duas ou quatro semanas com o objetivo de avaliar o nvel de toxicidade induzido pela kava
kava na funo heptica em ratos jovens por mensurao de enzimas hepticas (alanina
aminotransferase,

aspartato aminotransferase, fosfatase alcalina e lactato desidrogenase) e

formao de malondialdedo, um subproduto da peroxidao lipdica que pode induzir a dano


heptico. Um aumento significativo destas enzimas ou do malondialdedo considerado um
indicador de toxicidade heptica. Como resultado, nenhuma destas enzimas apresentou elevao,
apresentando inclusive uma significativa reduo, no grupo testado por duas semanas
apresentaram significativa reduo, sugerindo falta de efeitos txicos da kava kava no fgado
(SING; DEVKOTA, 2003). Entretanto Stickel et al. (2003) analizaram 29 casos de danos
hepticos associados ao consumo de extratos alcolico e acetnico de kava kava, e concluram
que estes extratos apresentam um potencial hepatotxico. Os pacientes apresentaram necrose
heptica ou hepatite colesttica, sendo que, nove pacientes necessitaram de transplante de fgado.

63

Clough et al. (2003) em um estudo realizado em uma comunidade indgena na Austrlia,


avaliaram a funo heptica de pessoas acima de quinze anos, que utilizavam doses mdias de
118g/semana de extrato aquoso de kava kava. Como resultado eles obtiveram um aumento
significativo das enzimas GGT e FA dos grupos que haviam tomado o extrato aquoso nas ltimas
24 horas e do grupo que havia tomado o extrato h mais de uma ou duas semanas. No foi
observado aumento da ALT em nenhum dos grupos. Este resultado confirma que o extrato
aquoso de kava kava pode causar elevao das enzimas GGT e FA, mas estas alteraes parecem
ser reversveis. A maioria dos usurios da kava kava tiveram um retorno dos nveis normais da
FA um a dois meses de abstinncia.
No presente estudo as amostras de sangue, para a realizao dos testes das enzimas
hepticas, foram coletadas no dia do sacrifcio das ratas (21 dia), ou seja, seis dias aps o ltimo
tratamento com o P. methysticum Forst. Este fato pode ter colaborado para os valores das
enzimas testadas estarem dentro dos parmetros da normalidade. Alm disso, uma outra hiptese
para ausncia de leso heptica, e alteraes das enzimas hepticas pode ser atribudo ao
fitoterpico ter sido testado por um curto perodo (dez dias), j que, na literatura os casos de
hepatotoxicidade associados a kava kava foram associados a doses elevadas e um perodo de
mais de trs meses de uso e a solues aquosas.
O fato da preparao fitoterpica P. methysticum Forst (Kava kava), utilizada neste
experimento no ter causado teratognese em ratas Wistar tratadas com doses equivalentes a sete
vezes a dose teraputica humana (35mg.kg-1), no descarta a necessidade de maiores estudos,
utilizando outras doses, talvez, extratos padronizados e outras espcies animais para aumentar a
segurana deste produto em relao a teratognese. Deve-se levar em considerao, tambm, que
fatores como tipo de solo, regio onde plantada, poca da colheita e armazenamento, podem
interferir nas concentraes dos princpios ativos e conseqentemente, na toxicidade das plantas.

64

7 CONCLUSES

A preparao fitoterpica contendo P. methysticum Forst, Piperaceae (kava kava),


administrada por via ora, do 6 ao 15 dia de gestao, nas dosagens de 5mg.kg 1 o que equivale
dosagem utilizada para humanos, 35mg.kg

-1

e 50mg.kg

-1

em ratas Wistar, no interfere no

desenvolvimento ponderal, consumo relativo de gua e rao. As variveis reprodutivas no so


afetadas com as doses testadas. Entretanto as alteraes morfolgicas observadas com as
dosagens mais elevadas (50mg.kg

-1

), devem ser consideradas. Sendo assim, a preparao

fitoterpica kava kava pode ser considerada segura quando administrada, na dose at
35mg.kg-1, durante o perodo da organognese em ratas.

Na avaliao heptica da preparao fitoterpica P. methysticum Forst, Piperaceae (kava


kava), nas dosagens de 5mg.kg -1, 35mg.kg-1 e 50mg.kg

-1

em ratas Wistar, por via oral, do 6

ao 15 dia de gestao, no foram observadas alteraes nas concentraes das enzimas ALT e
FA. Assim como, no foram encontradas alteraes significativas no histopatolgico do fgado
das referidas ratas, evidenciando no haver toxicidade heptica no perodo e doses utilizadas.

65

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