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TCNICAS DE SEPARACIN
TCNICAS DE SEPARACIN
COMPONENTES
Disolventes
Bomba
Sistema de Introduccin de la Muestra
Columna
Detector
Adquisicin de Datos
a 20 C
Viscosidad
2
CH3OH
n-Propanol
Perfiles de Presin con Gradientes Concentracin
~ 1.3
1
CH3CN
~ 0.6
1 Etanol
Presin CH3OH / H2O
Metanol
Acetonitrilo
20
40
60
% Orgnico [w/w]
100%
80
70/30 org. /agua
Perfil de Concentracin
El grfico de viscosidad vs % orgnico es til para poder calcular relaciones aproximadas de viscosidad entre
distintas composiciones de eluyentes y poder calcular presiones equivalentes:
p.e. 100 bars con ACN/H20 70/30 equivalen a 100 x (1.3/0.6) = 217 bars con CH3OH/H20 70/30
BOMBA CUATERNARIA
BOMBA BINARIA
COMPONENTES: SISTEMA DE
INTRODUCCIN DE LA MUESTRA
Disolver la muestra en la fase
mvil o en un disolvente miscible
Disolver la muestra en la mnima
cantidad posible de disolvente
COMPONENTES: COLUMNA
Tipo de Fase Estacionaria
Dimesiones
Tamao de partcula:
Prdidas de
eficiencia con
incrementos de
flujo
0.0040
0.0035
HETP (cm/plate)
0.0030
Mayor Velocidad
0.0025
5.0 m
0.0020
0.0015
Inyecciones en columnas
mas cortas con menores
tamaos de partcula a
mayores velocidades
3.5 m
0.0010
0.0005
Ganancias en velocidad:
5-10x
1.8 m
0.0000
2mL/min
-0.0005
Eficiencias 0.0
comparables
en zona de bajo
flujo
0.2
0.4
5.0 mL/min
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
Particula
Hmin
5.0 m
3.5 m
1.8 m
9.3 m
6.0 m
3.8 m
Ganancia Terica en
Sensibilidad UV
Baja
Temperatura
Optimizacin
Mtodo
Trabajar a temperaturas ms altas
permitir reducir considerablemente los
tiempos de anlisis y en ocasiones
cambiar la selectividad de la separacin.
Alta
Temperatura
Acorta a 1/3 el
tiempo anlisis
min.
-55%
-65%
COMPONENTES: DETECTORES
Caractersticas del detector ideal:
Sensible
Selectivo
Lineal
Informacin cuantitativa
Fiable
Facil de usar
Universal
COMPONENTES: DETECTORES
Detectores de UV-Vis:
50 puntos
S/N= 7.5
RSD% requerido
1%
2%
5%
10%
ACOPLAMIENTO DE DETECTORES DE
ESPECTROMETRIA DE MASAS
PERO QU DETECTOR?
.
MUESTRA
CUANTITATIVO
CUALITATIVO
MATRIZ SUCIA?
Sabemos lo que
Buscamos?
SI
Necesitamos
masa exacta
No
TOF
No
No
Menor de 5 pg
En columna?
SI
>1 ng en columna
QQQ
SI
No
SI
Necesitamos
SI
Qualifiers
Ions/Spectrum?
No
o Multi ion SIM
Aceptable
%RSD: >8%
No
No
SI
Si-spectrum
or MS/MS qualifiers
SI
Trampa
CONCENTRACIN?
Q
QQQ Trampa
TOF
SI
Necesitamos MS/MS?
Bbaja concentracin
$$$>
QQQ
$$>
No
TOF
video
Modos de trabajo.
Cuadrupolo Simple: Trabajo en SIM
La mejor sensibilidad para cuantificacin
Buena selectividad
La cromatografa puede mejorar la especificidad
No proporciona informacin estructural
Detector
API
Fuente
Fuentes en LCMS
APIElectrospray
Peso Molecular
100,000
10,000
APPI
APCI:
1000
APCI
GC/MS
no polar
FAB
Thermospray
Particle
Beam
muy polar
APPI:
Vlida para compuestos de muy baja a alta polaridad;
no requiere que estn ionizados en solucin.
Requiere compuestos con una cierta volatilidad.
Posibilita el anlisis de compuestos apolares.
Limpieza de la Fuente
Operacin robusta
Identificacin y confirmacin
Sensibilidad y Especificidad
Facilidad de Uso
Tecnologa asequible
LCMS 6150
1973
LCMS6120
GRACIAS!