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GENTICA MOLECULAR
NOTA.- Si fuera necesario, repasar antes el tema anterior de Composicin de los
cidos nucleicos.
DESARROLLO HISTRICO DEL DESCUBRIMIENTO DE LOS CIDOS
NUCLICOS Y SU IMPORTANCIA COMO MOLCULAS PORTADORAS DE
INFORMACIN GENTICA.
1) Fueron descubiertos por Miescher en 1869, a partir de ncleos de
leucocitos del pus y de espermatozoides de salmn, sustancia que al
principio denomin nuclena. Al separar el componente proteico de la
nuclena observ que lo que quedaba tena naturaleza de cido y lo llam
cido nucleico.
2) En los aos treinta se descubri que los cromosomas contenan esta
asociacin de cidos nucleicos con protenas, por lo que la nuclena empez
a llamarse cromatina en vez de nuclena. Se conoca adems, desde
finales del siglo XIX, que los cromosomas eran portadores de informacin
hereditaria, por lo que al principio se asoci la naturaleza de la informacin
hereditaria a las protenas de la cromatina (formadas por ms variedad de
unidades) que a los cidos nucleicos, que se descubri slo formados por un
tipo de azcar, un resto fosfato y cuatro clases de bases nitrogenadas.
Tambin se comprob la existencia de distintos tipos de cidos nucleicos, las
bases que contienen y la forma como se unen a otros componentes.
3) A partir de los aos 40 se descubre la composicin detallada y se
demuestra que en el DNA el nmero de bases de adenina es igual al de
timina y el nmero de bases de guanina es igual al de citosina pudiendo
variar sin embargo el nmero de bases de adenina respecto al de guanina o
de citosina. Adems A+G=T+C, por lo que se estableci que la informacin
hereditaria deba residir en estos cidos en forma de secuenciacin de estas
bases y no en las protenas de la cromatina. Hiptesis cuya validez se
demostrara ms tarde.
4) En 1944, y basndose en las experiencias de Griffith (1928), Avery y
colaboradores lo demuestran experimentalmente: son los cidos nucleicos
los portadores de la informacin (experimentos con bacterias virulentas y no
virulentas de la neumona en ratones). Libro pgina 230.
5) A partir de todos estos estudios anteriores junto al estudio de difraccin de
rayos X sobre fibras de ADN, en 1953 Watson y Crick, descubrieron la
estructura del DNA y formularon la hiptesis sobre su mecanismo de
autoduplicacin.
TRANSCRIPCIN.- Pg 238
El mecanismo semiconservativo de la duplicacin del DNA abri el camino para
la comprensin de la transcripcin, descifrado del cdigo gentico, la sntesis de
protenas en los ribosomas ..etc.
La transcripcin consiste en el mecanismo por el cual los genes activos del
ADN trasladan su informacin a una molcula de RNAm en el mismo ncleo (en
eucariotas se transcribe un solo gen pero en procariotas un solo RNAm puede
contener al mismo tiempo varios genes) . Ese RNAm se sintetiza de forma similar a
la duplicacin del DNA en sentido 5-3 pero catalizado por una RNA polimerasa II y
siguiendo el principio de complementariedad de bases pero sin aparecer la timina,
en su lugar aparece el uracilo.
Pasos de la transcripcin en eucariotas:
a) Todo gen activo contiene una regin promotora a donde se une la RNA
polimerasa II y por donde comienza la sntesis del RNAm utilizando como
molde la hebra 3-5 del DNA en direccin 5-3 copindose primeramente una
regin del gen llamada antilider en forma de regin lider del RNAm
necesaria para unirse a la subunidad pequea del ribosoma.
b) Seguidamente a partir del triplete TAC copia regiones con informacin
llamadas exones y otras sin informacin llamadas intrones hasta el
triplete ACT. El triplete de inicio TAC da lugar al triplete AUG en el RNAm y
el ACT al triplete UGA en el RNAm. Despus del triplete ACT se copia la
regin ltima del gen llamada antitrailer en forma de regin trailer del
RNAm. As se obtiene un RNAm inmaduro o heterogneonuclear que
contiene informacin de intrones y exones.
c) En el siguiente paso el RNA m debe madurar, consistiendo en la
desaparicin de los intrones y en la adicin de unas seales iniciales en el
extremo 5 en forma del nucletido 7 metil guanosina, y terminales en forma
de cola poli A (200 nucletidos).
Caractersticas del RNAm maduro
a) Cadenas cortas y lineales con slo estructura primaria que contiene slo
las cuatro bases principales (slo con adenina, guanina, citosina y uracilo,
no hay timina constituyendo unos 2000-3000 nucletidos).
b) Pasa al citoplama por los poros nucleares y se asocia a los ribosomas
para codificar la sntesis de protenas, formando en eucariotas partculas
ribonucleoproticas o polisomas.
c) Cada ARNm tiene informacin para sintetizar un polipeptido determinado
en el citoplasma.
d) Su vida media es corta.
El lugar exacto para colocarse en el ARNm lo hace gracias a tres bases, a cuyo
conjunto se llaman anticodn (las complementarias en el ARNm se llaman
codn).
Para la activacin de un RNAt especfico hace falta una aminoacil RNAt sintetasa
especfica que une el extremo CCA 3 OH del RNAt con el grupo COOH de
determinado aminocido formndose un aminoacil-RNAt especfico. El proceso
necesita ATP y se forma un enlace ster entre el aa y el RNAt.
2.- Fase de iniciacin de la sntesis.La molcula de RNAm maduro se une en el citoplasma a la subunidad pequea de
un ribosoma gracias a la seal de inicio que tiene en su extremo 5 (7 metil GTP y
la regin lider) y exponiendo su primer codn AUG (seal de iniciacin que
codifica Met). A continuacin se acopla un aminoacil- ARNt que contiene Met cuyo
anticodn (UAC) se acopla complementariamente al codn AUG. La metionina es
siempre el primer aminocido que se forma en la cadena polipeptdica. Luego se
ensambla la subununidad grande del ribosoma con la subunidad pequea y por
medio de una cavidad donde se inserta el RNAm.
Las dos subunidades estn normalmente separadas y se unen entre s con un
filamento de ARN mensajero cuando empiezan a funcionar activamente en la
sntesis de protenas. Los ribosomas se van desplazando a lo largo del RNAm y
sintetizando a su vez la protena mientras avanzan a razn de 20 aminocidos por
segundo, es decir, una protena de unos 300 aminocidos puede ser sintetizada en
15 segundos.
3.- Fase de elongacin o alargamiento.Siempre se localiza en el surco de unin ribosoma-RNAm, un locus peptidlico
donde se localiza un peptidil RNAt, (con la cadena polipeptdica en crecimiento
ORIGEN DE LAS MUTACIONES.Mutaciones espontneas: las menos numerosas. Por un error en la duplicacin
del DNA o por errores en el comportamiento de los cromosomas durante la divisin
celular.
Mutaciones inducidas por agentes mutagnicos, las ms numerosas. Los
principales agentes mutagnicos son:
Radiaciones: de alta energa como los rayos catdicos, X, alfa, beta,
gamma, csmicos ..etc. Unas veces tienen efectos ionizantes produciendo el
cambio de una base por otra en el DNA, y otras veces, (las de muy alta energa), llegan a romper molculas de DNA o cromosomas.
Agentes qumicos: cido nitroso, perxido de hidrgeno, metil etano
sulfonato, gas mostaza, concentraciones altas de dixido de carbono,
acridinas, bases anlogas al DNA (5-bromo uracilo, 2-amino purina, ).
La mayora de estos agentes qumicos producen cambios en las bases
nitrogenadas del DNA provocando emparejamientos errneos con otras
bases durante la duplicacin del DNA, producindose el cambio en la
siguiente duplicacin de la molcula de DNA (cido nitroso, hidroxilamina).
Las acridinas actan intercalndose entre dos bases y produciendo una
GNICAS, CRO -
1) Mutaciones gnicas espontneas.Se producen al azar tautomerizaciones de las bases nitrogenadas que pueden cambiar
sus radicales y emparejarse durante la duplicacin del DNA una base prica con otra pirimidnica distinta a la habitual(transicin de bases):
BASE NORMAL
Adenina,radical NH2
Guanina,radical -C=O
Citosina,radical-NH2
Timina,radical -C=O
Otras veces las tautomerizaciones de las bases hacen que se empareje una base
prica con otra prica o una pirimidnica con otra pirimidnica (transversin de
bases).
Tanto si se ha producido una transicin como si ha tenido lugar una transversin de
bases, se produce el cambio en la siguiente duplicacin del DNA de una base por
otra, produciendo un triplete de bases que puede dar lugar a la codificacin de un
aminocido distinto en la protena correspondiente que queda por lo tanto mutada:
molcula DNA inicial con una forma tautmera de la Adenina:
5------ G C G T A* T-3
3-------C G C A T A--5
secuencia que codifica: -Ala-Tyrmolculas hijas despus de la duplicacin semiconservativa:
5------ G C G T A* T- 3
3-------C G C A C A---5
(emparejamiento anmalo A-C)
5------ G C G T A T----3
3-------C G C A T A---5
(emparejamiento normal A-T)
molculas hijas despus de la duplicacin de la molcula de DNA con el emparejamiento anmalo:
5------ G C G T A T----3 (la adenina recupera forma normal)
3-------C G C A T A----5 secuencia que codifica: -Ala-Tyr5------ G C G T G T----3 secuencia que codifica: -Ala-Cys3-------C G C A C A----5
(nueva)
Vemos que el cambio de la adenina por la guanina (transicin de bases), hace que
el triplete con la mutacin codifique ahora el aminocido cisteina en lugar de la
tirosina, como antes codificaba. Esto puede hacer que cambie la actividad
biolgica de la protena mutante correspondiente.
2) Mutaciones gnicas inducidas.Entre los agentes mutagnicos que producen mutaciones inducidas se encuentran:
a) "Bases anlogas al DNA": 5-bromo uracilo o la 2-amino purina. El 5-bromo
uracilo es parecido a la Timina y por tanto se empareja con la Adenina, pero a
veces puede adoptar una forma tautmera que hace que se empareja con la
Guanina dando lugar en la duplicacin del DNA a transicin de bases. (cambio
de la Adenina por la Guanina)
b) El cido nitroso, que desamina la Adenina y la Citosina convirtindolas en
Hipoxantina y Uracilo respectivamente. En la duplicacin del DNA se producirn
los correspondientes cambios de una base por otra (transiciones de bases).
c) La hidroxilamina aade a las bases grupos hidroxilo, haciendo que en la duplicacin stas emparejen con bases distintas. Igual pasa con el gas mostaza o
el etilmetanosulfonato que aaden grupos etilo o metilo a las bases
nitrogenadas haciendo que emparejen en la duplicacin, con otras bases
distintas a las habituales (tranversin de bases en el caso del
etilmetanosulfonato).
d) El naranja de acridina pueden intercalarse entre dos bases de una de las
cadenas cuando el ADN se replica, lo que puede dar lugar a la deleccin o
adicin de bases, con el consiguiente cambio en la secuencia de nucletidos.
e) Las radiaciones.- Las de alta energa (rayos catdicos, X, alfa, beta, gamma,
csmicos ..etc.) producen mutaciones puesto que pueden en unos casos
romper la molcula de DNA, los cromosomas o si no influir sobre las bases haciendo que desprendan electrones, con lo cual las bases se vuelven iones reactivos que pueden formar radicales distintos en su molcula y emparejar con
otras bases distintas a las habituales durante la duplicacin del DNA.
Actualmente tambin se piensa que las radiaciones producen en el protoplasma
celular una escisin de molculas de agua en sus iones OH(-) y H3O(+) que
favorece a su vez la formacin de perxidos. Los perxidos son molculas muy
reactivas que pueden producir cambios en las bases nitrogenadas y posteriores
emparejamientos anmalos.
FENOTIPO
NORMAL
S.DOWN
S.DOWN
NORMAL
NORMAL-portador
S.DOWN
NO-VIABLE
NO-VIABLE
NORMAL-portador
Aunque este tipo de mutacin no es letal para el individuo portador, si puede tener
efectos en los gametos si se produjeran sobrecruzamientos dentro de la inversin,
pues dara lugar a gametos con cromosomas con ausencia de informacin en unos
puntos y en otros con informacin duplicada. Se puede decir que estas asas evitan
precisamente el sobrecruzamiento en estas zonas siendo un posible mecanismo
evolutivo para evitar que determinados bloques de genes se recombinen y que se
hereden siempre juntos en un mismo segmento cromosmico.
C.MUTACIONES GENMICAS.Afectan al cariotipo o nmero de cromosomas de la clula. Existen dos tipos:
Euploida: la que afecta a juegos de cromosomas completos.
Aneuploida: la que afecta a determinados cromosomas en su nmero.
EUPLOIDIAS.El nmero de cromosomas resultante de la mutacin es un nmero mltiplo del
nmero bsico N o nmero de cromosomas distintos que tiene la especie. Pueden
ser de los siguientes tipos:
Monoploida: es el caso de los hongos, algunos artrpodos (arcnidos y algunos
insectos como los machos de abejas) y todos los gametos de los organismos
superiores. Todos tiene la dotacin haploide N.
Diploida: Dotacin diploide 2N. Es lo normal en las clulas somticas de los organismos superiores.
Triploida: Dotacin 3N, con tres juegos de cromosomas. Suelen ser estriles,
pues producen gametos desbalanceados con distintas combinaciones de gametos portando desde N hasta 2N cromosomas. No son viables en el mundo
animal y s en el vegetal; en este caso produce vegetales que slo se reproducen
por va asexual.
Tetraploida: Frecuente en el mundo vegetal y de origen muy diverso. Presentan 4
juegos iguales de cromosomas. A veces tienen su origen en dos gametos
anmalos 2N. En el reino vegetal suele ser frecuente dando lugar a individuos con
hojas o frutos de mayor tamao del normal. Debido a ello, a veces se provocan
estas mutaciones con productor qumicos como la colchicina, que evitan la
formacin del huso acromtico en la gametognesis y por tanto la formacin de
dos clulas hijas.
La poliploida es frecuente en los vegetales superiores y ms adaptados, pero
presenta la desventaja de producir poca diversidad biolgica en la meiosis. En
animales los organismos poliploides suelen morir. Se han encontrado embriones
humanos abortados con 69 cromosomas, triploides 3N. En los animales lo normal
es la diploida 2N, con dos guarniciones cromosmicas, aunque existen excepciones.