Diagnstico Serolgico de Sfilis

Tcnicas no treponmicas

T.M. Rodrigo Colina Morales

Laboratorio de Infecciones de
Transmisin Sexual
Seccin Bacteriologa
Mayo 2014

Diagnstico Serolgico de Sfilis

Generalidades:
Sfilis, es una enfermedad infecciosa conocida desde el siglo
XV. No fue hasta 1905 que Fritz Shaudin y Erich Hoffman
descubrieron un microorganismo espiral en una lesin
sifiltica secundaria.
Agente causal bacteria Treponema pallidum
Perteneciente junto con otros treponemas, borrelias y
leptospiras, a la familia Treponemataceae
(Trepo:giro; nema: hebra; hebra que gira)

Diagnstico Serolgico de Sfilis

Espiroqueta delgada, enroscada, de 6 a 12um de longitud y
0,25um de dimetro.
Mvil , reproduccin por fisin binaria
No se colorea (pallidum: plido) ausencia de tincin con
colorantes convencionales
Observable por microscopa de campo oscuro o mediante
tincin con Acs especficos antitreponema marcados con
colorantes fluorescentes.
Estas espiroquetas son incapaces de desarrollarse en
cultivos acelulares.

Diagnstico Serolgico de Sfilis

Historia Diagnstica:
Test de Wasserman. (1906) Extraccin alcohlica de tejidos
sifilticos. Acs. sricos por fijacin de complemento.
Inespecfica, se producan tambin con extractos de otros
tejidos.
Inoculacin de animales
Examen directo:
Microscopa de campo oscuro
Exudado de la lesin
Inmediatez y bajo costo
Gran rendimiento en etapas en que hayan lesiones,
primaria, secundaria, congnita precoz y recada infecciosa

Diagnstico Serolgico de Sfilis

Requerimientos de personal muy capacitado
Inespecificidad ante espiroquetas saprfitos presentes en
muestras de mucosa bucal, anal y genital.
Fluorescencia Directa (DFA-TP)
Tejidos, secreciones y fluidos de lesiones
Muestra fijada + Ac monoclonal conjugado c/ FITC
Cultivo celular: Slo logrado en clulas epiteliales de conejo.
Mtodo costoso y complejo.
Pruebas serolgicas:
Pruebas no treponmicas
Pruebas treponmicas

Diagnstico Serolgico de Sfilis

Diagnstico a travs de serologa.
Generalmente las pruebas serolgicas se hacen positivas a
las 3-4 semanas de la infeccin.
El husped produce anticuerpos:
Contra material lipoidal liberado por las clulas daadas
(reaginas)
Contra material lipoproteico y cardiolipina liberada por los
treponemas (anticuerpos especficos)

Tcnicas no treponmicas
RPR Rapid Plasma Reagin
USR Unheated Serum Reagin
VDRL Venereal Disease Research Laboratory
TRUST Toluidine red Unheated Serum test
(no comercializada)
ELISA Se emplea con suero. Utiliza en la fase slida,
antgenos del tipo VDRL

Tcnicas no treponmicas
Pruebas no Treponmicas:
Pruebas realizadas con antgeno de naturaleza lipoidal
(cardiolipina, lecitina y colesterol).
Detectan anticuerpos tipo IgG e IgM anti material lipidico
liberado por clulas del husped daadas y material
lipoproteico de la bacteria.
La metodologa que usan es la floculacin en lmina o
tarjeta.
Econmicas y fciles de realizar
Nivel aceptable de especificidad y sensibilidad alta

Tcnicas no treponmicas
RPR Rapid Plasma Reagin

Reaccin Antgeno-anticuerpo de floculacin en tarjeta.

Muestras: suero no calentado (no inactivado), plasma.
La suspensin de antgeno contiene partculas de carbn.
Usado mayormente como tcnica de screening.
Tcnica:
Preparacin de antgeno: no requiere
Calibrar:
Rotador: 100 +/- 2 rpm.
Aguja calibre 20 (suero)
Tarjetas de reaccin entregadas en el kit
Lectura macroscpica

Tcnicas no treponmicas
RPR Rapid Plasma Reagin
No existe correspondencia directa entre ttulos de RPR y
VDRL
Los cambios en los ttulos, no han podido ser
relacionados con tratamiento o las reinfecciones

Se recomienda slo determinacin Cualitativa

Tcnicas no treponmicas
USR Unheated Serum Reagin

Reaccin antgeno-anticuerpo de floculacin en lmina.

No requiere inactivacin de las muestras de suero
La suspensin de antgeno es estabilizada con EDTA
Permite anlisis cualitativo y cuantitativo.
Tcnica:
Preparacin de antgeno: No requiere
Calibrar:
Rotador: 180+- 2 rpm.
Aguja calibre 18 (suero)

Tcnicas no treponmicas
USR Unheated Serum Test
Materiales:
Lminas de vidrio 2x3 pulgadas con 12 anillos de parafina o
cermica. De 14 mm de dimetro.
De fcil uso, econmica
Lectura microscpica

No requiere inactivacin del suero

No estandarizado su uso en LCR
Presenta 1 a 2 ttulos de diferencia con VDRL
Marca Wiener
Control de tratamiento

Tcnicas no treponmicas
VDRL Venereal Disease Research Laboratory
Reaccin antgeno-anticuerpo de floculacin en lmina.
Muestras: suero calentado o LCR.
El antgeno es una solucin alcohlica incolora que contiene
cardiolipina, colesterol y lecitina purificada para producir
una reactividad estndar.
La solucin salina amortiguada contiene formaldehido
neutro, fosfato disdico, fosfato monopotsico y cloruro de
sodio.
Permite anlisis cualitativo y cuantitativo.

Tcnicas no treponmicas
VDRL Venereal Disease Research Laboratory
Tcnica:
Preparacin de antgeno: Laboratorio
Calibrar:
Rotador: 180+- 2 rpm.
Aguja calibre 18 (suero)
Aguja calibre 21 (LCR)
Bao termorregulado a 56C
Temperatura ambiente de 23 a 29C
Materiales:
Lminas de vidrio 2x3 pulgadas con 12 anillos de parafina o
cermica. De 14 mm de dimetro.
Frascos de vidrio fondo plano de 35 mm de dimetro.

Tcnicas no treponmicas
VDRL Venereal Disease Research Laboratory
Econmica
Requiere de personal muy capacitado en la preparacin del
antgeno y lectura de los resultados
Lectura macroscpica
Puede presentar en la cuantificacin de las muestras, el
fenmeno de prozona
Requiere inactivacin del suero
Estandarizada y de eleccin para LCR
Tcnica normada para el control de embarazadas
Control de tratamiento

Tcnicas no treponmicas
VDRL Venereal Disease Research Laboratory

Tcnicas no treponmicas
RPR

USR

VDRL

APLICACIN

Screening

Screening
Screening
Control de tratamiento Control de tratamiento

REACCION

Floculacin

Floculacin

Floculacin

EXAMEN

Cualitativo

Cuali y Cuantitativo

Cuali y Cuantitativo

OBSERVACION

Macroscpica

Microscpica

Microscpica

MUESTRA

Suero o plasma

Suero

Suero y LCR

ANTIGENO

Listo para usar

Listo para usar

Se prepara

ESTABILIDAD DEL
ANTGENO

Fecha de
expiracin

Fecha de expiracin

12 horas

PREPARACION DE
LAS MUESTRAS

No requiere

No requiere

Calentar suero a 56 C
por 30 minutos

Tcnicas no treponmicas

Resultado Reactivo
Resultado
Reactivo

Resultado No Reactivo

Infeccin:
Presente
Pasada
Falso positivo

Tratada o no
adecuadamente

Ausencia de Infeccin
Infeccin Tratada
Falso Negativo
No descarta sfilis en Incubacin.

Tcnicas no treponmicas

Tcnicas no treponmicas
CAUSAS DE FALSOS POSITIVOS EN LAS PRUEBAS SEROLGICAS
NO TREPONEMICAS PARA LA SIFILIS
Agudas
Inmunizaciones
Neumona viral
Varicela
Paludismo
Sarampin
Embarazo
Herpes genital
Mononucleosis
Consumo de drogas por va parenteral

Tcnicas no treponmicas
HIV
Leptospirosis
Borreliosis
Cronicas
Envejecimiento
Trastornos autoinmunitarios
Lupus eritematoso sistmico
Lepra
Artritis reumatoide
Consumo de drogas por va parenteral
Neoplasias
La manifestacin de la falsa reactividad, generalmente no
supera el ttulo de 1:4 o 1:8

Tcnicas no treponmicas
CONCLUSIONES
Puesto que no miden anticuerpos especficos frente a T.
pallidum su positividad no asegura enfermedad sifiltica.

Una de las grandes ventajas de estas tcnicas es que son

fundamentales para monitorear la eficacia de los
tratamientos mediante el descenso de los ttulos sricos en
el tiempo pudiendo hasta negativizarse.
Slo la prueba VDRL est validada para la deteccin de
anticuerpos no- treponmicos en LCR y, en consecuencia, es
el nico til para el diagnstico de neurosfilis, (junto a una
treponmica en suero).

Tcnicas no treponmicas

La evaluacin del tratamiento se debe realizar con la

misma tcnica, dada la diferencia de ttulos entre ellas.
Las ventajas de estas tcnicas estn asociadas a la mediana
complejidad de su realizacin y de su bajo costo.
Las desventajas van asociadas a la inespecificidad que
presenta en algunos casos, otorgando falsos positivos.
En el caso del VDRL, la mayor desventaja va asociada a la
escasa disposicin en el mercado, de material de trabajo
(lminas, frascos de antgenos). Lo que se contrapone con
las normativa diagnstica vigente y la importancia de sta
tcnica.

Muchas gracias

T.M. Rodrigo Colina M.

Encargado Laboratorio ITS
e-mail: rcolina@ispch.cl
Fono: 25755434 - 255434