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RESUMEN
Se realiz la identificacin de antraquinonas y cromonas presentes en acbar y gel
de Aloe vera en las fincas La Magdalena en Mistrat, Pite tierra en Santuario, La
Esperanza en Beln de Umbra, La Aurora en Marsella y La Palma en Pereira en
el corregimiento de La Florida ubicados en el departamento de Risaralda. Se
implemento un mtodo de secado del gel con el fin de concentrar el contenido total
de antraquinonas y cromonas. La identificacin y cuantificacin se llevo a cabo
mediante la tcnica de Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia (CLAE) en fase
reversa usando detector UV-Vis y para la obtencin de espectros UV se us
detector DAD; el mtodo empleado para el anlisis de las antraquinonas y
cromonas es precisa, exacta, reproducible y adecuada para el anlisis de
muestras de Aloe vera.
Se encontraron diferencias significativas en cuanto al contenido de antraquinonas
y cromonas haciendo uso del software InfoStat mediante el anlisis de varianza
ANOVA y el anlisis de conglomerados. El mayor contenido de estos metabolitos
se encontr en la finca La Palma en La Florida en acbar y gel, las fincas La
Magdalena en Mistrat y La Aurora en Marsella presentaron contenidos similares
e intermedios, mientras que en la finca Pite tierra en Santuario se encontr el
menor contenido de antraquinonas y cromonas, estos resultados aporta a los
productores de Aloe vera en el departamento informacin para darle uso comercial
a sus plantas de acuerdo al contenido de estos metabolitos.
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1. JUSTIFICACIN
Durante los ltimos treinta aos se han emprendido en diferentes partes del
mundo programas dedicados a la investigacin de Aloe vera, debido a sus
propiedades teraputicas, nutricionales y cosmticas. A nivel mundial el mercado
crece continuamente, debido a que el muclago y el acbar extrados de este
vegetal son productos cada vez mas apetecidos por la industria alimenticia,
farmacutica y cosmtica [1].
En Estados Unidos, la mayor parte de Aloe vera es cultivada en el Valle de Ro
Grande al sur de Texas, en Florida y al sur de California. Internacionalmente, el
aloe se puede encontrar en Mxico, en los pases a lo largo del pacfico, la India,
Amrica del sur, Amrica central, el Caribe, frica y Australia. Los mercados ms
atractivos para productos de Aloe vera son los Estados Unidos, Francia, Reino
Unido, Alemania, Italia, Canad, Japn, Espaa, Suecia y Corea [2].
En Latinoamrica la gran produccin de cultivos de Aloe vera se da en Mxico,
seguido por Repblica Dominica y Venezuela. En Colombia los cultivos de Aloe
vera, se encuentran repartidos en diferentes departamentos, siendo de mayor
participacin los departamentos de atlntico y magdalena, El eje cafetero no tiene
una participacin considerable dentro de las estadsticas nacionales ya que sus
cultivos son menores al 5%; esto debido a que la planta se introdujo a la regin en
el 2004 [3].
En la regin cafetera con el nimo de aprovechar las bondades del clima y la
excelente calidad de sus suelos y a su vez como un fin social para dar una nueva
alternativa a los cultivadores se ha implementado el cultivo del Aloe vera en los
departamentos de Risaralda y Quindo [4].
En la planta de Aloe vera se pueden encontrar diversos componentes como agua,
enzimas, vitaminas, minerales, aminocidos, azcares y antraquinonas [5]. Las
antraquinonas son muy estudiadas debido a que otorgan propiedades curativas,
laxantes, entre otras, a las plantas en las que se encuentran presentes. Estos
metabolitos secundarios son de gran importancia debido a que actan en la planta
como mecanismo de defensa; es decir, son una respuesta al medio, el cual incide
en su contenido tanto en el gel como en el acbar.
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14
2. OBJETIVOS
OBJETIVOS ESPECIFICOS
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16
Azcares
COMPONENTES
Vitaminas
Enzimas
Minerales
Polisacridos
Monosacridos
Compuestos fenlicos
Aminocidos
Derivados
hidroxiantracnicos
Derivados
cromnicos
Aloesina, aloeninas A y B,
aloeresina A y B,
8-Cglucosil-7-o-metil-(s)aloesil.
CARACTERISTICAS
Al igual que otros vegetales, el Aloe vera
es rico en vitaminas y tiene un bajo
contenido de grasa y alto en fibra, que
son responsables de sus usos
teraputicos y propiedades funcionales
como antioxidante [37].
La catalasa integra parte del sistema
antioxidante y es importante ya que su
funcin es destruir el H2O2 generado
durante el metabolismo celular [28].
Actan como biocatalizadores que
permiten la transformacin qumica de
sustratos, a partir de los cuales se
producen los diferentes componentes
necesarios para los procesos vitales
[39].
Se ha demostrado que los polisacridos,
contribuyen a la actividad farmacolgica
en la estimulacin de la proliferacin
celular y en actividades biolgicas como
anti
-inflamatorias,
antivirales,
inmunomoduladoras,
anti-ulcerativas,
desinfectante, cicatrizante y como antioxidadante [25, 33, 40, 41]
El Aloe vera proporciona 20 de los 22
aminocidos requeridos por el cuerpo
humano y 7 de los 8 aminocidos
esenciales que el cuerpo no sintetiza [5,
13]
Ejercen una amplia gama de actividades
biolgicas
como:
antifngico,
antimicrobiano,
anticancergeno
y
antioxidante [42]. Funcionan como
analgsicos
y
poseen
potentes
propiedades antibiticas, tanto para
virus como para bacterias [5]
5.1.7. Estudios sobre diferentes aplicaciones del Aloe vera. Debido a la gran
cantidad de metabolitos secundarios que posee la planta y a sus mltiples
aplicaciones se han realizado diversos estudios a nivel nacional e internacional,
algunos de estos estudios se presentan en las tablas 9 y 10.
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Disminucin
de
la
concentracin de aloina
y aloe-emodina por
adsorcin en columna
con carbn activado
Composicin qumica y
aplicaciones del Aloe
vera
Conservacion de fresa
(fragaria x ananassa
duch cv. camarosa)
mediante la aplicacin de
recubrimientos
comestibles de muclago
de Aloe barbadensis
Miller.
Obtener
un
recubrimiento
comestible a partir del
gel de Aloe vera para
prolongar la vida til de
las fresas.
Composicin y
aplicaciones del gel de la
hoja de Aloe vera
Antraquinonas en Aloe
vera barbadensis Miller
de zonas semiridas de
Falcn Venezuela, como
inhibidores de corrosin
Determinar el efecto
citoprotector del gel de
Aloe vera sobre la
mucosa
gstrica
y
compararla con la del
sucralfato en animales
de experimentacin.
Per 2007
Colombia
2011
Turqua
2011
Colombia
2009
OBJETIVO
Sudfrica
2008
ESTUDIO
Venezuel
a 2008
PAS
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ESTUDIO
Gel de Aloe vera (L). N.L.
Burm. y harina de Sag
como soporte slido de
medio de cultivo para
plantas medicinales
Korea
2003
PAS
Cuba 2006
Revisin de la relacin
entre los componentes
del Aloe vera y sus
efectos biolgicos
Estudiar
el
comportamiento del gel
de Aloe vera y harina
de sag, como soporte
solido del medio de
cultivo
de
plantas
medicinales
Establecer la relacin
entre los componentes
del Aloe vera y sus
efectos sobre la base
de
los
informes
publicados
y
otros
hallazgos recientes.
RESULTADOS
Clasificacin
Fenoles simples, benzoquinonas
Acidos fenlicos
Acido feniacetico, acetofenoles
Acido hidroxicinamico, polipropano, cumarina, isocumarina
Naftoquinona
Xantanos
Antraquinona, estilbeno
Flavonoides, isoflavonas
Lignanos, neolignano
Bioflavonoides
Ligninas
Melanoidinas
Taninos
31
10
2
3
4
5
O
32
OH
OH
OH
OH
OH
H
H
OH
H
OH
H
H
HO
OH
H
H
Alona A
OH
Alona B
33
OH
HO
OH
O
Figura 7. Estructura general de las cromonas
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35
muy elevados frente a la extraccin con otras tcnicas lo que implica la necesidad
de concentrar los extractos orgnicos obtenidos [61].
Extraccin por ultrasonido. Es una tcnica sencilla de extraccin slidolquido, en donde la muestra se pone en contacto con un disolvente adecuado y se
somete a los ultrasonidos generados en un bao de agua o por una sonda de
ultrasonidos. De este modo, se produce la agitacin continua de la matriz con el
disolvente orgnico. El efecto mecnico de los ultrasonidos provoca una mayor
penetracin del disolvente en los materiales slidos, facilitando la transferencia de
los analitos de la matriz al disolvente. La eleccin del disolvente es esencial para
que el mtodo permita obtener elevadas recuperaciones de los analitos de inters
[61].
5.3. TCNICA DE ANLISIS
Para la cuantificacin de antraquinonas se han utilizado diferentes mtodos
instrumentales, entre ellos el espectrofotomtrico, esta es una tcnica que permite
cuantificar las antraquinonas totales presentes en la matriz a analizar. Los
mtodos cromatogrficos permiten una identificacin ms especfica de estos
analitos, como por ejemplo los ismeros A y B de la Alona, en esta tcnica no se
requiere la preparacin de derivados como en la espectrofotomtrica, permitiendo
as la lectura de los compuestos en la regin ultravioleta (UV) [42].
Existen otros mtodos que han sido reportados para la identificacin y
cuantificacin de derivados de antraquinonas en extractos de plantas como
cromatografa en contracorriente de alta velocidad (HSCCC), cromatografa
electrocintica micelar (MEC), electroforesis capilar de zona, cromatografa en
capa fina de alto rendimiento (HPTLC) [62].
5.3.1. Cromatografa. La cromatografa es un procedimiento de separacin de
los constituyentes de una mezcla. Se ha convertido en un mtodo analtico de
primer orden para identificar y cuantificar los compuestos de una fase liquida o
gaseosa homognea. Se fundamenta en los equilibrios de concentracin de los
compuestos presentes entre dos fases no miscibles de la que una llamada
estacionaria, esta inmovilizada en una columna o fija sobre un soporte y la otra,
llamada mvil, se desplaza al contacto de la primera. La elucin a velocidades
diferentes de los compuestos presentes conduce a su separacin [63].
5.3.2. Clasificacin de las tcnicas cromatogrficas. Las tcnicas
cromatogrficas pueden clasificarse segn la naturaleza fsica de las fases, el
36
37
Cromatografa
Capa delgada
Cromatografa
Plana
Cromatografa
de papel
Gas-Slido
Clasificacin
tcnicas
cormatogficas
Cromatografa
de Gases
F.M: Gaseosa
Gas-Lquida
Cromatografa
en Columna
Lquida-Slida
Lquida-Lquida
Cromatografa
Lquida
F.M: Lquida
Cromatografa
lquida de alta
eficiencia
Intercambio
Inico
Exclusin
Molecular
38
ndice de
polaridad
9.0
6.6
6.2
4.3
4.2
Fuerza
dispersiva
0.03
0.04
-0.10
-0.15
Donador de
protones
0.40
0.51
0.33
0.28
0.41
Aceptor de
protones
0.34
0.19
0.26
0.39
0.19
Momento
dipolar
0.26
0.30
0.41
0.33
0.40
39
Par inico
Complejacin con
iones metlicos
RP en medio no
acuoso
De reparto
Descripcin
Los solutos ionizables dan picos con baja retencin y fuerte
asimetra; en fase reversa solo se retendr favorablemente la
especie no inica. As, los factores que modifican ese equilibrio,
ya sean pH o fuerza inica, modificaran la retencin [69].
En esta cromatografa la fase mvil contiene un par-in, es decir,
una especie qumica de carga opuesta al analito; estos forman un
complejo neutro que se transporta dentro de la
columna, particionndose entre la fase mvil y la fase
estacionaria. Se trata de mantener el analito en su forma inica
[69].
Esta modalidad se conoca como cromatografa de intercambio
de ligandos, por el intercambio del soluto (ligando) con iones
metlicos inmovilizados en la fase estacionaria [69].
El soluto puede ser insoluble en AcCN, MeOH o THF, y sus
mezclas con agua. Estas muestras altamente lipoflicas pueden
ser resueltas en fase normal; pero la fase reversa con fase mvil
de baja polaridad, sin agua agregada tiene muchas veces la
suficiente selectividad y poder de retencin para permitir su
resolucin[69]
Para este tipo de cromatografa se emplea como fase mvil una
mezcla de agua y un modificador orgnico MeOH, AcCN o THF,
en mezclas binarias, terciarias y en casos complejos, an
cuaternarias [69].
40
41
42
43
44
46
6. METODOLOGA
6.1. INSTRUMENTACIN Y REACTIVOS
Los equipos utilizados para este anlisis fueron: estufa BINDER, ultrasonido
marca BRANSON 3510, cromatgrafos HITACHI LaChrom y Jasco; y microjeringa HAMILTON de 100L. Los reactivos fueron acetonitrilo grado CLAE,
metanol grado CLAE, agua destilada y desionizada, alona A de pureza >97% de
hojas de Aloe barbadensis Miller, y estndar de Aloe curaao.
6.2. LUGAR DE ANLISIS
El anlisis se llevo a cabo en el laboratorio de Oleoqumica de la Universidad
Tecnolgica de Pereira ubicada a una latitud norte 04 48 N, longitud oeste de 75
41 O, altitud de 1411 msnm con una temperatura promedio de 22 C y una
precipitacin de 2700 mm/ao.
6.3. MUESTRAS DE ANLISIS
Para el anlisis se utilizaron hojas adultas no menores a 3 aos recolectadas de la
parte baja de la planta de Aloe vera; frescas y de aspecto sano, cultivadas en
cinco fincas del departamento de Risaralda las cuales se mencionan en la tabla
14.
Tabla 14. Lugares de recoleccin de las hojas de Aloe vera
MUNICIPIO
Marsella
Mistrat
Beln de Umbra
Santuario
Pereira - Corregimiento de La Florida
FINCA
La Aurora
La Magdalena
La Esperanza
Pite Tierra
La Palma
47
6.3.2.1. Obtencin del acbar. Se realiz una incisin sobre el extremo inferior de
la hoja empleando un cuchillo plstico, para obtener el acbar por gravedad y
recolectarlo en un vaso de precipitados protegido de la luz (ver figura 10). Este
procedimiento se realizo con dos hojas de cada zona, y cada hoja se analizo por
triplicado.
(a)
(b)
Figura 11. Obtencin del muclago de la hoja de Aloe vera en base hmeda
(a) y en base seca (b)
48
49
Cromatgrafo
Columna
Fase mvil
Condiciones de anlisis
HITACHI LaChrom
L 2130
Bomba
L 2300
Horno
L 2420
Detector
Jasco*
PU 2089
CO 2065
MD 2015
Symmetry C18, 100, 5 m, 4,6 x 250 mm
Agua (A) : Acetonitrilo (B)
Gradiente
Despus de cada
corrida se realizaba
una re-equilibracin
de 15 minutos.
Tiempo
0 min
12 min
37 min
50 min
60 min
Proporcin
84% A
84% A
67% A
40% A
100% B
Detector
Longitud de onda
Flujo
Temperatura
Volumen de
Inyeccin
Software
UV
DAD
296 nm
1 mL/min
45 C
20 L
50
Concentracin
20 ppm
40 ppm
60 ppm
80 ppm
100 ppm
Concentracin
10 ppm
20 ppm
40 ppm
60 ppm
80 ppm
100 ppm
200 ppm
312 ppm
Absorbancia
0,000
0,003
0,005
0,006
0,0091
0,011
0,021
0,034
51
52
rea
5000000
4000000
3000000
2000000
y = 66893,864x + 4.590,00
R = 0,99996
1000000
0
0
20
40
60
Concentracin (mg/L)
97
80
100
Absorbancia
0,035
0,03
0,025
0,02
0,015
0,01
y = 0,000106x + 0,000407
R2 = 0,9978
0,005
0
0
50
100
150
200
Concentracin (mg/L)
100
250
300
350