DIAGNSTICO

LABORATORIAL DAS
INFECES BACTERIANAS

Profa. Dra.Tatiana Elias Colombo

2015

Diagnstico laboratorial das doenas bacterianas

Objetivo: fornecer diretrizes para a coleta e o transporte

adequados de diferentes espcimes, alm de informaes
gerais sobre o processamento dos espcimes no
laboratrio.

SANGUE

Hemocultura

Um dos procedimentos mais importantes realizados no laboratrio

de microbiologia clnica

Fator importante que determina o sucesso da hemocultura o

volume de sangue processado

20ml de sangue adulto

volumes menores crianas e neonatos

Hemocultura

Amostra coletada antes da antibioticoterapia!

Sangue

Cuidado com a desinfeco da pele do paciente

muitos pacientes hospitalizados so suscetveis a

infeces por microrganismos que colonizam a

pele

Hemocultura

Coleta realizada em sistema fechado

Reduz a probabiblidade de contaminao da amostra

Sangue
Amostras de sangue - semeadas em frascos contendo

caldos

nutrientes

adequados

para

assegurar

isolamento mximo de microrganismos importantes

Sangue
Bacteremia e fungemia referidas como sepse

Sinais clnicos: febre, calafrios e hipotenso

- Resposta liberao de endotoxinas ou exotoxinas pelos
microrganismos

- Ocorrem pelo menos 1 hora aps a entrada do

microrganismo no sangue
OBS: pouco ou nenhum microrganismo pode estar presente quando o
paciente apresenta-se febril. Por esta razo, recomendado que 2 a 3
amostras de sangue sejam coletadas ao acaso durante um perodo de 24
horas.

Sangue
Frascos de caldo recebidos no laboratrio

incubados

a 37C e examinados em intervalos regulares para a

evidncia do crescimento microbiano.

Estufa automatizada para cultura de sangue

- Hemocultura automatizada baseada na deteco de CO2 produzido

pelos microrganismos durante seu metabolismo
- Os frascos utilizados nesse sistema podem possuir resinas inibidoras
de antibiticos, aumentando significativamente a recuperao de
microrganismos.

Instrumento automatizado para cultura de sangue

1. Crescimento detectado

Instrumento automatizado para cultura de sangue

1. Crescimento detectado

2. Lmina (colorao de Gram)

Instrumento automatizado para cultura de sangue

1. Crescimento detectado

2. Lmina (colorao de Gram)

3. Frascos so subcultivados (incubar 5 7 dias, exceo:

microrganismos

fastidiosos).

posteriormente isolados

Microrganismos

Instrumento automatizado para cultura de sangue

1. Crescimento detectado

2. Lmina (colorao de Gram)

3. Frascos so subcultivados (incubar 5 7 dias, exceo:
microrganismos fastidiosos). Microrganismos posteriormente isolados

4. Identificao bioqumica e testes de sensibilidade

* Testes moleculares

Lquido cefalorraquidiano (LCR)

A coleta somente pode ser realizada por profissional
especializado
1-) Puno lombar (mais usada e causa menos riscos para o
paciente)

2-) Puno suboccipital

3-) Puno ventricular

Contra-indicao para puno lombar: existncia

de infeco no local da puno (piodermite)
Puno lombar

Lquido cefalorraquidiano (LCR) Recomendaes

coleta

No necessrio jejum, orienta-se apenas uma refeio leve

O paciente deve estar acompanhado por um adulto

Apresentar, se houver, exames recentes como Tomografia e
Ressonncia Magntica de Crnio e/ou Coluna

Aps a coleta do material o paciente permanecer em repouso

alguns minutos no laboratrio e dever fazer repouso deitado em
casa por, no mnimo, mais 24 horas.

SETOR HEMATOLOGIA
Tubo refrigerado
Exames citolgicos:
Contagem global e especfica

SETOR MICROBIOLOGIA
Tubo TA
Tubo centrifugado: sedimento
(micro) e sobrenadante (imuno)
Exames:
Bacteriologia e Bacterioscpico

Testes adicionais
Tubo congelado

SETOR BIOQUMICA
Tubo congelado
Exames:
GLICOSE
PROTENA
LACTATO

Trato respiratrio superior - Coleta

swab - utilizado para coletar os espcimes de orofaringe

Solicitar ao paciente que abra bem a boca.

- Usando abaixador de lngua e swab estril,
fazer esfregaos sobre as amgdalas e faringe
posterior, evitando tocar na lngua e na mucosa
bucal.
- Procurar o material nas reas com hiperemia
prximas aos pontos de supurao ou remover o

pus ou a placa, colhendo o material abaixo da

mucosa.

Trato respiratrio inferior - Coleta

Uma variedade de mtodos pode ser usada para coletar

espcimes do trato respiratrio inferior expectorao,
broncoscopia, aspirao por puno direta atravs da

parede torcica.

Cuidado com a contaminao do escarro

por bactrias do trato resp. superior
presena de clulas epiteliais indica que o
espcime foi contaminado com saliva

URINA

Urina

Espcime mais frequentemente submetido cultura

Pelo fato das bactrias patognicas colonizarem a uretra
coletar o jato mdio

Primeira urina do dia???

Urina
Os patgenos do trato urinrio podem crescer na urina,
assim NO deve haver demora no transporte do

espcime para o laboratrio

Caso

espcime

no

puder

ser

cultivado

imediatamente (~20 minutos), ele deve ser refrigerado

e semeado no mximo em 24 horas

Exame direto do sedimento urinrio

- 1 a 10l do espcime - semeado em meio de cultura (no-seletivo e seletivo)

- Colocar em lmina, deixar secar, fixar e corar pelo Gram

 CLED (Cistina Lactose Eletrlito Deficiente)

-Neste meio cresce tanto microrganismos gram positivo, quanto

gram negativo.
-Cor: Verde/azul

- Para o crescimento de colnias necessrio a utilizao de alas

calibradas (1, 10, 100 microlitros)
-Feita a inoculao, deixar a 37C de 18 a 24 horas e fazer leitura.
- Leitura
- Pode ser um fermentador de lactose: Lactose positivo: cor
amarela; Lactose negativo: sem alterao de cor

 Mac Conkey

- Um meio seletivo para microrganismos

gram-negativos
- Indica fermentao de lactose. Cor: Rosa
- Isolar colnias, usar temperatura de 37C de 18 a 24 horas.
- Se houve crescimento: Bacterioscopia ps cultura + gram =
inocular em provas bioqumicas.
-Crescimento de colnias incolor ou marrom = no fermentador de
lactose.
- Crescimento de colnias rosa = fermentador de lactose

Semeadura em placa
- Ala calibrada
1l = 1microlitro = 0.001ml = 1/1000ml

10l = 10 microlitros = 0.01ml = 1/100ml

Semeadura em estrias

Mtodo de esteira

Contagem do nmero de colnias

- Ala calibrada 1l = 1microlitro = 0.001ml = 1/1000ml
N = nmero de colnias x 1l
N = nmero de colnias x 1000

- Ala calibrada 10l = 10 microlitros = 0.01ml = 1/100ml

N = nmero de colnias x 10l
N = nmero de colnias x 100

Ala calibrada 1l
N = nmero de colnias x 1000

N = 100 X 1000 = 100.000 UFC/mL

Critrios interpretativos
At 9.000 UFC/mL = Sem significado clnico
10.000 a 90.000 UFC/mL = Suspeita de Infeco

Acima de 100.000 UFC/mL= Indcio de infeco

Identificao microbiolgica

Agentes etiolgicos da ITU: Escherichia coli, Enterococcus

spp.,

Proteus

spp.,

Staphylococcus

saprophyticus

Pseudomonas spp.

Bacilos Gram negativos

ESPCIME GENITAL

Espcime genital
URINA Primeiro jato da mico espontnea utilizado

Espcime genital
Variedade de bactrias associadas a DST
Meio seletivo
Identificao demorada (crescimento lento)
Biologia molecular (PCR)

Neisseria gonorrhoeae

C. trachomatis

Espcime genital

Treponema pallidum
- Bactria Gram-negativa
- Grupo espiroqueta
- Agente etiolgico da sfilis
- Microrganismo no cultivado em laboratrio
- Diagnstico: microscopia e sorologia (VDRL)

ESPCIME FECAL

Espcime fecal

Grande variedade de bactrias pode causar infeces

gastrointestinais

(evitar alteraes cidas nas fezes metabolismo microbiano. Txicas para

microrganismos como Shigella)

Espcime fecal Diagnstico laboratorial