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Biotratamientos no destructivos
para la revalorizacin de suero
lcteo
Laca, A., Moure, F. , Garca, L.A. y Daz, M.
Tecnologa de Bioprocesos y Reactores
(www.uniovi.es/TBR)
Dpto. de Ing. Qumica y Tecnol. Medio Ambiente
UNIVERSIDAD DE OVIEDO
TBR
El suero lcteo
El suero lcteo es el subproducto que
proviene de la separacin de la cuajada de
la leche durante la fabricacin de queso
ip
c
e
Pr
n
i
c
a
t
i
Suero cido
TBR
da
i
c
Pr
ec
ipi
ta
ci
n
en
zim
t
ic
Suero dulce
El suero lcteo
Composicin
(% en peso)
TBR
SUERO DULCE
3.0 g/L
-Lactoglobulina
0.7 g/L
-Lactoalbmina
Inmunoglobulinas
0.6 g/L
Seroalbmina bovina
0.3 g/L
El suero lcteo
Produccin de suero lcteo en Asturias
9 Kg de Suero
DBO5 (30000-60000 mg/L)
TBR
50.0
1999
40.0
30.0
20.0
10.0
0.0
1998
450 000 t/ao
Enero
Febrero
Marzo
Abril
Mayo
Junio
Julio
Agosto
Septiembre
Octubre
Noviembre
Diciembre
1 kg
de queso
60.0
Industria Suero
Lctea
Recuperacin
(Suero en polvo, concentrados
de protenas, lactosa...)
BIOTRATAMIENTOS
TBR
(Obtencin de productos
valiosos por fermentacin).
Tratamiento
de aguas
no
todos
Suero
UF
Hidrlisis lactosa
Permeado
FERMENTACIN
TBR
que
Productos
los
Protenas
TBR
Bebida alcohlica
Vinagre
cido lctico
Proteasas
TBR
1. Bebida alcohlica
Mediante una fermentacin alcohlica la lactosa del
suero se puede transformar en etanol
A escala industrial la fermentacin alcohlica se
realiza casi exclusivamente empleando levaduras
1 Hidrlisis de la lactosa
Lactasa
Glucosa
Lactosa
Isomerasa
Galactosa
TBR
Glucosa
Galactosa
1. Bebida alcohlica
2 La glucosa entra en la ruta de Embden-Meyerhof
O
C H
H
HO
OH
O
C O-
OH
4 H2O
CH3
OH
4 ADP +2 Pi 4 ATP 4 NAD+
CH2OH
4 NADH + 4H+
Piruvato
Glucosa
O
C H
4 NAD+
CH3
Acetaldehdo
TBR
4 H+
4 CO2
O
C H
CH3
Acetaldehdo
OH
O
C
CH2OH
4 NADH + H+
CH3
Etanol
1. Bebida alcohlica
Temas clave:
Tipo de sustratos
(suero / suero + suplementos)
Cultivos de alta produccin en continuo
Metabolismo secundario
Valoracin global
TBR
1. Bebida alcohlica
Operacin:
Kluyveromyces fragilis: .
Metaboliza lactosa sin producir toxinas
Ha sido autorizado su uso en alimentos
Fermentaciones
Discontinuo
Continuo
Mtodos analticos
Lactosa: HPLC
Etanol y otros voltiles: GC
TBR
Componentes
% p/v
Lactosa
4.5
Protenas totales
0.45
Materia grasa
Trazas
5.5-6
1. Bebida alcohlica
Cultivo discontinuo: Metabolismo primario
Inculo
5
5%
10%
15%
20%
20
18 C
21 C
15
10
5
3
2
1
0
20
0
0
15
34 C
10
12
18
Agitacin
25 g/l etanol
12
24
36
12
24
36
Tiempo, h
TBR
30
24
Tiempo, h
37 C
Sin agitacin
100 rpm
200 rpm
Temperatura
21 g/l etanol
5
4
3
11 g/l etanol
Temperatura: 30-34C.
Inculo: 10 %.
Tiempo, h
Variaciones del pH inicial entre 3.4 y 6.7 no afectan al sistema
La agitacin incrementa la produccin de etanol respecto a la falta de agitacin.
2
1
0
12
18
24
30
1. Bebida alcohlica
Cultivo discontinuo: Metabolismo secundario
Temperatura
37 C
34 C
21 C
18 C
20
10
0
0
12
24
36
48
Tiempo, h
1-propanol, 2-metil-1-propanol
2-metil-1-butanol, 3-metil-1-butanol
TBR
30
250
200
150
100
50
0
120
Agitacin
Total
100
80
2-metil-1-propanol
2-metil-1-butanol
3-metil-1-butanol
1-propanol
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220
Agitacin, rpm
Los niveles alcanzados de alcoholes secundarios son del mismo orden de magnitud
que los registrados en otras bebidas alcohlicas de baja graduacin
1. Bebida alcohlica
J
Q
Etanol,g/l
g/l
Etanol,
20
Productividad etanol
Productividad biomasa x 10
15
10
0
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
-1
Velocidaddededilucin,
dilucin, hh-1
Velocidad
0.3
12
10
8
6
4
2
0
Alcoholes secundarios
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20
2-metil-1-propanol
2-metil-1-butanol
3-metil-1-butanol
1-propanol
D, h-1
0.05
0.09
0.11
0.15
Acetaldehido
mg/l
YP/X, x 103
38
31
29
24
10.2
10.3
11.2
13.4
Acetato de etilo
mg/l
YP/X, x 103
8
5
4
3
2.2
1.6
1.5
1.6
El proceso es viable
TBR
Productividad,g/L
g/lhh
Productividad,
Etanol
25
Productividad, mg/L h
Cultivo continuo
2. Vinagre
El cido actico es el principal componente del vinagre,
empleado en aderezos y como conservante de alimentos
En la UE la produccin est entre 4.5 y 5 millones de
hL, de los cuales 1/3 es de vino
Para producir cido actico con fines alimentarios se
realizan dos fermentaciones sucesivas:
1. AZCAR ETANOL
2. ETANOL
CIDO ACTICO
TBR
2. Vinagre
Temas clave:
Mtodo de produccin de actico vlido
para su uso en alimentacin
Seleccin de una bacteria cido actica
Caractersticas del producto
Valoracin global
TBR
2. Vinagre
Operacin:
TBR
2. Vinagre
TBR
Concentracin de voltiles
cido actico
4
3
2
Etanol
1
0
0
12
24
36
48
60
72
84
96
108
Acetato de
etilo
13 mg/L
2-metil-1propanol
34 mg/L
2-metil-1butanol
9 mg/L
3-metil-141 mg/L
butanol
*Acetaldehdo no detectado
Tiempo, h
3. cido lctico
bacterias cido lcticas
Lactosa
OH
CH2OH
cido lctico
COOH
O
OH
OH
CH2OH
OH
OH
OH
OH
CH3
3. cido lctico
Condiciones de Fermentacin
L. casei
L. plantarum
L. helvticus
t (h)
TBR
T = 37-42C
pH inicial = 5-7
Anaerobio/microaerfilo
Suero lcteo
(7% de suero
deshidratado)
pH inicial = 6
T = 37C
3. cido lctico
Desalinizacin del fermentado de lactosuero por II
El cido lctico con calidad alimentaria requiere desalinizacin
Se realizaron ensayos con resinas catinicas y aninicas
TBR
4. Proteasas
Las proteasas son enzimas que catalizan la ruptura
de los enlaces peptdicos de las protenas
Cuentan con una gran aplicabilidad a nivel industrial
constituyendo aproximadamente el 60% del total de
enzimas comercializadas (detergentes, alimentacin,
tratamiento de pieles, industria farmactica...),
La bacteria Serratia marcescens es una gran
productora de proteasas cuando se cultiva en
medios proteicos como es el lactosuero
TBR
4. Proteasas
Temas clave:
Cultivos de alta produccin
Tipo de sustratos
(suero / suero + suplementos)
Posibilidad de trabajar en continuo
Grado de eliminacin de la carga contaminante
Valoracin global
TBR
4. Proteasas
Operacin:
TBR
4. Proteasas
Optimizacin de parmetros
8000
6000
2
4000
1
Proteasa (UE/ml)
10000
a) 5%
2000
0
10
15
20
25
8000
6000
2
4000
1
2000
0
0
30
10
8000
6000
2
4000
1
2000
0
5
10
15
20
tiempo (h)
TBR
25
30
Proteasa (UE/ml)
10000
c) 30%
Biomasa,Protenas (g/l)
15
20
25
30
tiempo (h)
tiempo (h)
10000
d) 50%
8000
6000
2
4000
1
Proteasa (UE/ml)
10000
b) 10%
0
0
Proteasa (UE/ml)
Biomasa,Protena (g/l)
Biomasa,Protenas (g/l)
Oxgeno disuelto
Parmetros ensayados:
Temperatura: 26-37C.
pH: 7-8
Concentracin inicial de
protenas: 4-8 g/L
Oxgeno disuelto: 5-50%
S proteasa
z biomasa
prote
protena
2000
0
0
10
15
20
25
30
tiempo (h)
TBR
6000
5000
4000
3
3000
2000
1000
b) Pasteurisation
7000
6000
5000
4000
3
3000
2000
1000
Protease (EU/mL)
Proteasas
(UE/mL)
c) Tindalisation
7000
6000
5000
4000
3
3000
2000
1000
0
0
10
15
20
time (h)
Tiempo
(h)
25
30
35
14000
10
12000
10000
8000
6000
4000
2000
Protease (EU/ml)
Proteasas
(UE/mL)
7000
Protease(EU/mL)
Proteasas
(UE/mL)
8000
a) Microfiltration
Biomass/Protein (g/l)
Biomasa/Protenas
(g/L)
Microfiltracin (33 m)
Protease (EU/mL)
Proteasas
(UE/mL)
Biomasa/Protenas
(g/L)
Biomass/Proteins (g/l)
Biomass/Proteins (g/l)
Biomasa/Protenas (g/L)
Biomass/Proteins (g/L)
Biomasa/Protenas (g/L)
4. Proteasas
0
0
10
20
30
40
50
4. Proteasas
Fermentaciones con clulas inmovilizadas en alginato
Se ha empleado el sistema S. marcescens-suero lcteo como
modelo para realizar un anlisis del comportamiento de
sistemas con clulas inmovilizadas
Microscopa ptica
t=0h
t=7h
t = 25 h
4. Proteasas
Fermentaciones con clulas inmovilizadas en alginato
MO
TEM
SEM
Crecimiento preferencial en la superficie
debido a limitaciones difusionales
Escape celular por rotura de los soportes
TBR
4. Proteasas
Fermentaciones con clulas inmovilizadas en alginato
Theoretical Results
Resultados
tericos
exterior
r/R
Ci
1 2 Ci
=
r
+
r Di
i
Dentro del soporte: t
r
r 2 r
Modelo homogneo
TBR
En el reactor:
UTSIDE
t (h)t (h)
0.99
25
19
19
13
70
0.97
OUTSIDE
0.99
0.97
0.95
0.93
r/R
0.91
0.8
0.6
0.4
0.2
20
0.95
20
40
0.93
40
60
0.91
60
80
0.8
80
100
0.6
100
120
0.4
120
140
0.2
140
160
BIOMASS
(mg/ml)
Biomasa
(g/l)
160
BIOMASS
Biomasa(mg/ml)
(g/l)
Experimental
Results
Resultados
experimentales
25
19
19
13
70
t (h)t (h)
exterior
d Cbi
3 (1 L ) Ci
=
Di
+ r
r r=R i
dt
R L
4. Proteasas
Mdulo de Thiele para el
sustrato y la biomasa:
2
< rs >
R
2
s = 3 D < C >
s
s
2
< rx >
R
2
x = 3 D < C >
x
x
TBR
4. Proteasas
Cultivos combinados
El principal responsable de la alta DQO
del suero es su alto contenido en lactosa
S. marcescens presenta escasa capacidad
para degradar la lactosa
Opcin:
TBR
S. marcescens
+
K. fragilis
DQO en el
caldo final
4. Proteasas
1000
0
7
0
6000
K.
fragilis
b) K.fragilis
3000
2000
5
4
3
2
1
1000
0
7
0
6000
0
7
5000
c)S.marcescens
S.
marcescens-K.fragilis
+ K. fragilis
6
5
4000
3000
2000
2
1
1000
0
0
10
20
30
40
tiempo (h)
50
60
70
K.K.fragilis
fragilis
6
Protenas (g/l)
2
0
7
5000
4000
S. marcescens
+ K.- K.fragilis
fragilis
S.marcescens
5
4
3
2
1
0
10
20
30
40
tiempo (h)
50
60
70
Lactosa (g/l)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
80
70
60
50
40
30
20
10
0
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Lactosa (g/l)
2000
Protena (g/l)
S. marcescens
S.marcescens
Protenas (g/l)
Biomasa (g/l)
3000
Biomasa (g/l)
5000
4000
TBR
Proteasa (UE/ml)
Biomasa (g/l)
6000
Proteasas (UE/ml)
a) S.
marcescens
S.
marcescens
Proteasas (UE/ml)
Lactosa (g/l)
Cultivos combinados
La presencia
de la levadura
no afecta a la
produccin
enzimtica
La mayor
reduccin en
la DQO se
consigui
empleando
cultivos
combinados
(76% de
eliminacin)
Consideraciones finales
Los biotratamientos no destructivos presentan un atractivo
indudable frente a los destructivos existiendo distintas
propuestas y posibilidades disponibles en la bibliografa
Resulta clave la bsqueda de nuevos productos y mercados
para materias primas residuales disponibles en altas
cantidades (evitar saturaciones de mercado)
Los nuevos procesos y en particular en el caso alimentario,
compiten en un mercado econmico complejo, cambiante y de
mucha competencia
TBR
www.uniovi.es/TBR