Validación de métodos analíticos en laboratorios clínicos

Validacin de
Mtodos Analticos
Ciclo Internacional de Talleres de Control de Calidad
30 de Mayo del 2008, Santiago de Chile
Chile
Gabriel A Migliarino
Agenda
Introduccin
Calificacin de Instrumentos
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
Intervalos de Referencia
Implementacin del Mtodo
Conclusiones
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
Conclusiones Gabriel A Migliarino
Introduccin
1)-Calificacin de instrumentos
2)-Requerimientos de Calidad
3)-Validacin / Verificacin de Mtodos
4)-Planificacin de Control de Calidad
5)-Control de Calidad Interno
6)-Control de Calidad Externo
Resultados de Pacientes
Introduccin
Calidad de los Resultados

Control
Control
de
deCalidad
Calidad
Validacin
Validacin//Verificacin
Verificacin
de
demtodos
mtodos
Calificacin
Calificacinde
deinstrumentos
instrumentos
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
ISO 15189:2007
Calificacin de Equipos
Mantenimiento de Equipos
Calibracin / Verificacin de Equipos
Documentacin de Equipos
(Historial del Equipo)
Gua sobre la Calificacin de Instrumentos Analticos

Cenam, abril 2004
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
10
Validacin de Mtodos
Introduccin
Validacin de Mtodos
Estudios de evaluacin que se realizan para determinar
si un ensayo cumple con los requerimientos de
calidad del usuario (laboratorio).
Evaluacin de errores.
Empleo de herramientas estadsticas.
(TE) Magnitud del error Utilidad clnica del resultado (TEa)
(TEa
11
Validacin de Mtodos
Introduccin
Claves para la validacin de mtodos
1)- Definir los Requerimientos de Calidad (TEa).
2)- Seleccionar los experimentos apropiados para
detectar los distintos tipos de error.
3)- Juntar los datos experimentales.
4)- Aplicar los operadores estadsticos apropiados.
5)- Comparar el TE (error total) con el TEa (error mximo
tolerable) establecido previamente como
requerimiento de calidad.
6)- Juzgar la aceptabilidad del mtodo considerando su
desempeo.
12
Validacin de Mtodos
Introduccin
Requerimientos de Calidad
Distintos tipos de Error
Experimentos apropiados
Error Total
Aceptabilidad del Mtodo
13
Validacin de Mtodos
Performance Standards
TEa (Error Mximo Tolerable)
14
Validacin de Mtodos
Son especificaciones acerca de la taza de error
que puede ser permitida en un mtodo analtico sin
invalidar la utilidad clnica del resultado.
Definen la calidad necesaria para el producto
bsico del laboratorio: Resultados de Pacientes.
Puede aparecer expresado de tres formas:
1)- Mximo Error Sistemtico Tolerable TSEa (ej.
BIAS).
2)- Mximo Error Aleatorio Tolerable TREa (ej.
Valores diana de SD para la planificacin del
control de calidad Interno).
3)- Mximo Error Tolerable TEa.
15
Validacin de Mtodos
1)- Requerimientos Mdicos.
2)- Variabilidad Biolgica.
3)- Intervalos de Referencia.
4)- Requerimientos Regulatorios (Ej. CLIA 88 ).
5)- Error Alcanzable
- EQAs o PT (resultados por grupo)
- SD del proceso
- CLSi (NCCLS) EP 21
6)- Especificaciones del fabricante para el
mtodo.
16
http://www.dgrhoads.com/db2004/ae2004.php?B8=+All+&find=&start=1&NOLINKS=
17
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Aleatorio
Todos los instrumentos son imperfectos, pero
generalmente funcionan bien con cierta
tolerancia o requerimiento de calidad
A causa de estas imperfecciones existen variaciones
( + y -) en temperaturas, volmenes de muestras y
reactivos, voltajes, etc.
La distribucin aleatoria esperada hace que los datos
se acomoden a uno y otro lado de la media.
Cuando los datos muestran una distribucin
Gaussiana o normal podemos predecir el porcentaje
de datos que se ubicarn a uno y otro lado de la
media.
18
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Aleatorio
Error Aleatorio (Random error, RE o imprecisin).
Error (positivo o negativo) cuya magnitud y direccin no
pueden ser predichas.
Se puede expresar como desvo estndar (SD) o como
porcentaje de la media (CV).
-Dispersin.
Media
Observada
www.westgard.com
www.westgard.com
Error Aleatorio
19
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Aleatorio (Random Error)
Causas ms frecuentes:
-Manejo inadecuado de reactivos.
-Manejo inadecuado de Calibradores.
-Manejo inadecuado del material de control.
-Instrumento: Pipeteo, temperatura y longitud de onda.
-Fluctuaciones en el sistema analtico:
1)- Temperatura
2)- Volumen
3)- Condiciones ambientales
4)- Interferencias elctricas
5)- Diferencia en el manejo de materiales
por distintos operadores
20
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Sistemtico
El error sistemtico es un cambio que
ocurre en una direccin y desva la
media afectando la veracidad del sistema
analtico
21
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Sistemtico
Error Sistemtico (Sistematic Error, SE,
inexactitud).
Error que se produce en una direccin y que
provoca un desplazamiento (BIAS o sesgo) de
la media de una distribucin de su valor real.
9 Distribucin Central.
Valor
Verdadero
9 Proporcional:
(depende de la concentracin)
9 Constante:
(No depende de la conc.)
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Valor
Observado
Bias
22
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Sistemtico
Causas ms frecuentes para los cambios
sistemticos:
9Cambios de lote de reactivo.
9Cambios de lote de calibrador.
9Cambios en la calibracin.
9Cambios consistentes en el proceso
analtico.
9Cambios en el instrumental.
23
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Lnea
de
Acuerdo
Mtodo de campo o en estudio
Error
Aleatorio
Error
Sistemtico
Constante
Error
Sistemtico
Proporcional
Mtodo de referencia o de comparacin
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24
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Total
Error Aleatorio
SD o CV
Error Sistemtico
Bias
Error Total
TE
25
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
TE: Error Total

Los errores aleatorios y sistemticos no
siempre ocurren independientemente.
Debemos calcular el TE para reflejar la
variacin total respecto al valor verdadero.
Representa el efecto combinado de los errores
sistemticos y aleatorios.
Puede calcularse en % o en unidades de
concentracin.
26
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
TE: Error Total
Combinacin de errores analticos (aleatorio y
sistemtico) que estima la magnitud de error
que puede ser esperado de una medicin
simple
TE = SE + (nSD * RE) TE % = Bias % + (nSD * CV)
nSD:
- 2 (95 % de confidencia)
- 3 (99,7% de confidencia)
- 4,5 (99,9997% de confidencia)
27
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
Error Total
El TE por s solo no nos
dice si los resultados
cumplen con los
requerimientos de
calidad.
Para lograr esa
informacin debo definir
previamente los
requerimientos de
calidad. (TEa)
Performance Driven Quality Control Zoe C Brooks
28
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
TE < TEa
Presupuesto de Error
29
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
SEa
Error Sistemtico
Mximo Tolerable
REa
Error Aleatorio
Mximo Tolerable
TEa
30
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
SE < SEa
RE < REa
31
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
TEa
25 %
25 %
Peor Caso
No existe espacio para el error
aleatorio.
SE
25 %
25 %
32
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
TEa
Caso Mnimo
1 SD
25 %
1 SD
25 %
SE
50 %
Asignamos un 50 % al SE y el
espacio restante lo dividimos en 2
SD.
(TE = SE + 2 RE)
33
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
TEa
1 SD 25 %
1 SD 25 %
Regla del 25 %
Asignamos un 25 % del TEa
para el SE, y en el 75 % restante
(RE) deben estar incluidos 3 SD.
1 SD 25 %
SE
25 %
(TE = SE + 3 RE)
34
Validacin de Mtodos
Errores Analticos
TEa
1 SD 16,7 %
1 SD 16,7 %
Six Sigma
1 SD 16,7 %
25 % para el SE y en el 75 %
restante (RE) incluimos 4,5 SD
1 SD 16,7 %
0,5 SD
8,3 %
SE
25 %
(TE = SE + 4,5 RE)

35
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
36
Evaluacin de Mtodos
Planificacin
Validacin de Mtodo
Establecer los requerimientos de calidad para la
caracterstica en estudio.
Efectuar el protocolo que corresponda de acuerdo
a la clasificacin del mtodo.
Comparar los resultados obtenidos frente a las
especificaciones del fabricante o los
requerimientos de calidad segn corresponda.
Decidir sobre la aceptabilidad del mtodo en base
a los resultados de la comparacin anterior.
37
Evaluacin de Mtodos
Clasificacin de Mtodos
La CLIA establece una clasificacin de mtodos:
- Baja Complejidad
- Mediana Complejidad
- Alta Complejidad
Para acceder a los criterios de la CLIA de
clasificacin de ensayos se puede acceder a la
siguiente direccin:
http://www.fda.gov/cdrh/CLIA/categorization.html
Para acceder a la informacin acerca de la
clasificacin de un ensayo determinado se puede
acceder a la siguiente direccin:
http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/c
fCLIA/clia.cfm
38
Evaluacin de Mtodos
Clasificacin de Protocolos
Protocolo Propuesto
EP 19-R
A Framework for CLSi Evaluation
Protocols; A Report
39
Evaluacin de Mtodos
Evaluacin
Estudio llevado a cabo a efectos de medir las
caractersticas de desempeo de un mtodo.
Validacin
(Establecer caractersticas de desempeo)
Verificacin
( Verificar caractersticas de desempeo)
Demostracin
(Demostrar caractersticas de desempeo)
40
Evaluacin de Mtodos
Verificacin
o
Validacin
41
Evaluacin de Mtodos
Gua
Ttulo
Propsito
EP5
Evaluation of Precision Performance
Val, Ver
EP6
Evaluation of the linearity of Quantitative

Methods
Val, Ver,
Demo
EP7
Interference Testing
Val, Ver
EP9
Method Comparasion and Bias

Estimation Using Patient Samples
Val, Ver
EP10
Preliminary Evaluation of Quantitative

Clinical Laboratory Methods
Demo
EP12
Evaluation of Qualitative Assays
Val, Ver,
demo
EP14
Evaluation of Matrix Effects
Val, Ver
EP15
A2
User Demostration of Performance for

Precision and Accuracy
Ver,Demo
EP18
Unit-Use
Testing
N/A 42
Evaluacin de Mtodos
Mtodos
Protocolos
Baja Complejidad
- nicamente requieren seguir las
especificaciones del fabricante.
- No requieren estudios de validacin
y/o verificacin.
43
Evaluacin de Mtodos
Mtodos
Protocolos
Mediana Complejidad no Modificados
- Se aplican protocolos de verificacin y/o validacin.
- Se verifican las especificaciones de desempeos para los
siguientes parmetros:
Veracidad
Precisin
Rango Reportable (*)
- Esto implica la realizacin de 5 protocolos:
1) Comparacin de Mtodos (Veracidad).
2) Protocolos de Replicacin (Precisin).
3) Linealidad (Rango Reportable).
4) Lmite de deteccin o Lmite de cuantificacin (Rango
reportable).
5) Verificacin del intervalo de referencia.
- Pueden emplearse protocolos de demostracin en una etapa
inicial.
44
Evaluacin de Mtodos
Mtodos
Protocolos
Alta Complejidad
- Dentro de este grupo estn los ensayos de Mediana
Complejidad que han sido modificados y los mtodos
desarrollados por el propio laboratorio.
- Se aplican protocolos de Validacin.
- El laboratorio debe establecer las caractersticas de
desempeo para los siguientes parmetros:
Veracidad.
Precisin.
Sensibilidad Analtica.
Especificidad Analtica.
Rango Reportable.
Establecer intervalos de referencia.
Alguna otra caracterstica de desempeo requerida para un
ensayo particular.
45
Evaluacin de Mtodos
Mtodos
Protocolos
Alta Complejidad
- Esto implica la realizacin de 8 protocolos:
1) Comparacin de Mtodos (Veracidad).
2) Protocolos de Replicacin (Precisin).
3) Lmite de Deteccin (Interferencias constantes).
4) Interferencia (Especificidad y potenciales
interferentes).
5) Recuperacin (Especificidad y potenciales
interferentes).
6) Linealidad (Rango reportable).
7) Lmite de Cuantificacin (Rango reportable).
8) Establecer Intervalos de Referencia o
Verificacin.
46
Evaluacin de Mtodos
Mtodos
Protocolos
La norma ISO 15189:2007 indica que los mtodos analticos
deben ser validados.
No nos dice que caractersticas de desempeo debemos validar
o verificar.
No nos dice como debemos realizar las validaciones o
verificaciones.
Generalmente los organismos de acreditacin en sus criterios
de acreditacin establecen las reglas del juego.
A mi criterio una verificacin analtica de mtodos deber incluir
por lo menos:
- Verificacin de precisin intra corrida y total.
- Verificacin de veracidad.
- Verificacin de linealidad.
- Lmite de cuantificacin cuando el ensayo lo requiera.
Verificacin de intervalosGabriel
de referencia.
A Migliarino
47
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
48
Protocolos
Precisin Simple
Se realiza este ensayo para determinar el error aleatorio del
mtodo analtico.
En el protocolo de precisin simple se determina el SD y el CV
intra ensayo.
Generalmente se emplean:
- Estndares o soluciones control.
- Sueros Control.
- Pool de pacientes.
- Muestra individual de pacientes.
Cantidad de muestras corridas: de 20 a 40.
Cantidad de Materiales: 2 o 3 dependiendo de los niveles de
decisin mdica a evaluar para el ensayo en cuestin.
Antes de efectuar los clculos deben excluirse los outliers.
- Para una serie de 40 datos se excluye aqul dato que exceda el
siguiente lmite: Media + 3.5 SD de la serie en cuestin.
49
Protocolos
Precisin Simple
Criterios de Aceptacin
Sabs (intra ensayo)< 0.25 * TEa
El SD y CV (intra ensayo) obtenidos pueden ser
verificados contra las especificaciones del inserto
aportadas por el fabricante (intra ensayo) si se trabaja
con materiales adecuados.
50
Protocolos
Precisin Simple
Ejemplo: Colesterol
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
51
Protocolos
Precisin Simple
Verificacin
Comparo los resultados frente a las
especificaciones
del inserto del fabricante (Sd intra ensayo)
52
Protocolos
Precisin Compleja
Este protocolo aplica:
- Fabricante: Estudios de validacin de sus ensayos.
- Usuario:
1- Verificacin de los distintos componentes de
precisin del ensayo (estudios de verificacin).
2- Establecer los componentes de precisin de un
ensayo casero o modificado (estudios de validacin).
3- El usuario desea trabajar con el protocolo EP 5A.
- Fundamento: Anlisis de varianzas (ANOVA).

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Protocolos
Precisin Compleja
Diseo
- Cantidad de materiales de control : mnimo 1, ideal 2 o 3.
- Por cada material de control se aplica el siguiente
esquema:
1 mtra. del material de control por duplicado dos veces al
da durante 20 das.
- Este esquema nos da un total de 80 resultados por nivel
de control ensayado.
- De esta forma se calcula:
Precisin intra ensayo

Precisin entre corridas
Precisin entre das
Precisin Total
54
Protocolos
Precisin Compleja
Esquema de Trabajo
in
t ra
se
ri e
in
te r
in
t ra
se
ri e
in
t ra
se
ri e
in
t ra
se
ri e
in
te r
se
ri e
se
ri e
interda + interserie + intraserie = Total
SERIE 1
SERIE 2
SERIE 1
SERIE 2
DIA 1
DIA 2
55
Protocolos
Precisin Compleja
Validacin
- En el caso de los estudios de Validacin se
establecen los distintos componentes de precisin y
se enfrentan a los requerimientos de calidad.
Verificacin
- En el caso de los estudios de Verificacin se
comparan los distintos componentes obtenidos con
las especificaciones volcadas por el fabricante en el
inserto del ensayo siempre que las concentraciones
de los materiales de control hayan sido
correctamente seleccionadas.
56
Protocolos
Precisin Compleja
Ejemplo: Glucosa (Validacin)
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
57
Protocolos
Precisin Compleja
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
58
Protocolos
Precisin Compleja
Ejemplo: Glucosa (Verificacin)
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
59
Protocolos
Precisin Compleja
Ejemplo: Glucosa (Verificacin)
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
60
Protocolos
Precisin: EP 15 A2
Trabaja de acuerdo a los lineamientos de la EP 5.

Asume que el fabricante ha establecido sus especificaciones con el
EP 5.
El laboratorio demuestra que la precisin del ensayo en el
laboratorio es consistente con la especificada en el inserto,
que fue obtenida a partir del EP 5.
Si el protocolo es exitoso el laboratorio acepta el mtodo en base a
las especificaciones del fabricante.
61
Protocolos
Precisin: EP 15 A2
5 das de trabajo.
Mnimo 2 materiales de control por triplicado durante 5
das.
Durante los 5 das se corren los controles normalmente
para asegurase que el mtodo funciona correctamente.
Clculo de Sd intra y Sd total por anlisis de varianzas
como en la EP 5.
62
Protocolos
Precisin: EP 15 A2
Opcin 1
SD observado < Especificacin
Mtodo aceptado
Opcin 2
SD observado > Especificacin
Aplicar Test de Significancia
Pasa
Mtodo aceptado
Test de Significancia
No Pasa
Mtodo rechazado
63
64
Protocolos
Comparacin de Mtodos
Los estudios de comparacin de mtodos se llevan a
cabo a efectos de determinar el error sistemtico del
ensayo que est siendo evaluado.
Se realizan analizando muestras con el nuevo mtodo y
un mtodo de comparacin.
Sobre la base de las diferencias observadas entre los dos
mtodos se calcula el error sistemtico.
Las diferencias observadas se analizan en los distintos
niveles de decisin mdica del analito en cuestin, para
juzgar sobre la aceptabilidad del mtodo.
Brindan informacin importante sobre la naturaleza del
error (sistemtico o constante).
65
Protocolos
Factores a Considerar
1)- Mtodo de Comparacin
- Cuando sea posible deben emplearse mtodos de referencia de
trazabilidad conocida y documentada a mtodos definitivos y/o
materiales de referencia estndar.
-En este caso las diferencias obtenidas son atribuidas al mtodo en
estudio.
- Cuando se emplea un mtodo de rutina como mtodo de
comparacin las diferencias entre ambos mtodos deben ser
correctamente interpretadas.
- Si en este caso no existen diferencias se dice que los mtodos son
estadsticamente comparables.
- Si existen diferencias (inaceptables segn criterios de decisin
mdica) debe encontrase cul de los mtodos tiene el error.
- A tales efectos sirven los estudios de interferencia y recuperacin.
66
Protocolos
2)-Nmero de muestras a analizar
- Se recomienda un mnimo de 40 muestras.
- Es de suma importancia la calidad de las muestras.
Las concentraciones de las muestras ensayadas deben
cubrir el rango analtico del ensayo en estudio
- Con 20 muestras bien seleccionadas se puede arribar a
resultados de buena calidad.
- Cuando los mtodos comparados tienen un principio
distinto se aconseja evaluar una mayor cantidad de
muestras a efectos de revelar problemas de especificidad.
67
Protocolos
3)- Corrida Simple Vs. Duplicados
- Las corridas por duplicado permiten asegurar la validez de las
mediciones (identificacin de discrepancias) y permiten la deteccin
de errores de procedimiento que pueden sesgar el estudio.
- Aumentan los costos y cantidad de trabajo.
- Si no se realizan duplicados los datos deben ser revisados en el
momento, en busca de posibles discrepancias.
4)- Duracin del estudio
- Mnimo de 5 das.
- Ideal 20 das (acompaando al protocolo de precisin compleja)
analizando de 2 a 5 pacientes por da.
5)-Estabilidad de las muestras
- Salvo analitos particulares (Ej. Amonio, cido lctico) las muestras
deben ser analizadas por ambos mtodos en un perodo no mayor a
las dos horas.
68
Protocolos
Interpretacin de resultados
El propsito fundamental de los estudios de
comparacin de mtodos es determinar si dos
mtodos son estadsticamente comparables
- Para que esto sea cierto se deben dar tres condiciones:
1- La pendiente no debe ser significativamente
diferente de 1.
2- La interseccin no debe ser significativamente
diferente de 0.
3- No debe existir diferencia significativa en los
niveles de decisin mdica.
69
Protocolos
Interpretacin de resultados
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70
Protocolos
Anlisis Grfico Asociado
Grafico de Comparacin
Permite identificar outliers
Mtodo en estudio o de campo
Verificar la calidad de las muestras

Respuesta lineal en el rango analtico
Acuerdo entre los mtodos
Mtodo de Referencia o de
comparacin
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Protocolos
Diferentes modelos de regresin:
- Regresin lineal
- Regresin de Deming
- Passing-Bablok
72
Protocolos
T Test
- Bias: Diferencia entre pares de datos.(Yi Xi ) o
(Ymedia- Xmedia).
- SDD (SDdiff): Es el SD de las diferencias de los
distintos pares de datos.
Es un estimado del error aleatorio entre los mtodos.
- T-test Value: Indica si suficientes datos han sido
obtenidos para saber si el Bias es real o estadsticamente
significativo.
73
Protocolos
Anlisis Grfico
- Es inicialmente til para detectar outliers.
- Para los mtodos que supuestamente tienen un grado de
acuerdo importante se utiliza el Difference plot.
Permite identificar outliers
Grfico de diferencias
Diferencia (ensayo-comparacin)
Permite visualizar errores

Lnea de
cero
Mtodo de Referencia o de
comparacin
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Protocolos
Coeficiente de correlacin (r)
Describe el ancho relativo de la elipse que engloba
los puntos de la serie de datos.
- Es sensible al error aleatorio, al rango de datos y al
signo de la pendiente.
- Mide el grado de asociacin entre dos variables.
75
Protocolos
Protocolos Propuestos
EP 9 CLSI
Mtodo de Comparacin
Alternativo
76
Protocolos
EP 9 CLSI
Procedimiento:
- Seleccionar las muestras (mnimo 40).
- Ensayar las muestras por duplicado.
- Realizar un esquema que contemple aproximadamente
8 muestras por da.
- Ensayar las muestras con no ms de 2 horas de
diferencia.
- Definir el TEa.
- Ingresar los datos y efectuar los clculos
correspondientes.
77
Protocolos
Ejemplo EP 9
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
78
Protocolos
Ejemplo: EP 9
EP
EPEvalutor
EvalutorRelease
Release77
79
Protocolos
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
80
Protocolos
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
81
Protocolos
Mtodo Alternativo de Comparacin
- Semejante al modelo anterior.
- Requiere menor cantidad de muestras.
- Las corridas son simples (no por duplicado)
- Incorpora el Passing Bablock.
- Incluye ms clculos estadsticos.
- Incluye T-Test.
82
Protocolos
Ejemplo
AMC
GLucosa
EP
7
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release
83 7
Protocolos
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
84
Protocolos
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
85
Protocolos
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
86
Protocolos
Verificacin de Veracidad
87
Protocolos
El EP 15 A2 propone 2 modelos
distintos para la estimacin del
Bias.
1) Semejante al EP9 de la CLSi.
2) Empleando material de referencia.
88
Protocolos
Opcin 1:
- Semejante al EP 9.
- Se debe emplear el mismo mtodo de comparacin
usado por el fabricante.
- Si se supone que no existe buen acuerdo entre los
mtodos a comparar emplear EP 9.
- Ensayar 20 muestras bien seleccionadas en paralelo
con el experimento de precisin.
- Calcular Bias.
- Graficar el Bias.
89
Protocolos
90
Protocolos
Opcin 1
Bias observado < Especificacin
Opcin 2
Bias observado > Especificacin
Mtodo aceptado
Aplicar Test de
Significancia
Pasa
Mtodo aceptado
Test de Significancia
No Pasa
Mtodo rechazado
91
Protocolos
Opcin 2:
- Emplear materiales de referencia:
Nist; Control Externo; Control Interno; material de control
de programas inter-laboratorio.
- La incertidumbre asociada a la asignacin del valor del
material empleado debe ser provista por el fabricante o
establecida por el laboratorio.
- Trabajar por lo menos con 2 niveles de distinta
concentracin.
- Ensayar los materiales por duplicado durante 5 das.
- Comparar estadsticamente los valores obtenidos con
los valores declarados.
92
93
Protocolos
Linealidad
Es importante conocer y verificar el rango
reportable de un mtodo.
Los fabricantes de reactivos generalmente
brindan informacin en los insertos sobre el
lmite superior e inferior del rango
reportable.
Se supone que el ensayo produce
resultados con respuesta lineal en el
intervalo comprendido por el lmite inferior y
superior del rango reportable.
Para los ensayos de mediana y alta
complejidad el rango reportable debe ser
verificado.
94
Protocolos
Linealidad
En los protocolos de linealidad los laboratorios
ensayan un serie de muestras de concentracin
conocida, o una serie de muestras diluidas.
Generalmente se analizan 5 muestras de
concentracin diferente.
Cada una de las muestras se analizan idealmente por
triplicado.
Posteriormente se realiza un grfico:
y: los valores obtenidos
x: los valores conocidos
A continuacin se traza la mejor lnea recta a travs
de los puntos obtenidos.
95
Protocolos
Linealidad
Diferentes tipos de Evaluacin
- Evaluacin tradicional
- Evaluacin visual y residuales.
- CAP y EP 6 CLSi
- Es un clculo complejo que realiza bsicamente
una regresin lineal para ecuaciones con 2, 3 y 4
coeficientes.
96
Protocolos
Linealidad
97
Protocolos
Linealidad
- Linealidad Clnica
Consta de tres pasos:
1- Definicin del TEa.
2- Se calculan las lneas verticales de error para
cada muestra considerando el TEa definido.
3- Mediante algoritmos se traza la recta a travs de
las barras de error.
error
98
Protocolos
Linealidad
Linealidad Clnica: Creatinina
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
99
Protocolos
Linealidad
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
100
Protocolos
Linealidad
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
101
102
103
Protocolos
Lmite de Deteccin
Ejemplo: Calcio
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
104
105
Protocolos
Lmite de Cuantificacin
(Sensibilidad Funcional)
Es la menor concentracin de analito que puede
determinarse con un nivel de incertidumbre aceptable
( Ej. CV 20 %).
Siempre existe una zona gris entre el lmite de
deteccin y el lmite de cuantificacin.
Este concepto es importante cuando es til
determinar la concentracin ms baja reportable de
un analito (Ej TSH).
Se trabaja con curvas denominadas perfil de
precisin en las cuales se grafica CV en funcin de
concentracin para un analito determinado.
Un sinnimo de este trmino es la Sensibilidad
Funcional.
CV: Coeficiente de variacin 106
Protocolos
Procedimiento
- Se preparan varias muestras para cubrir el rango de
concentraciones en el cual, se supone, debera hallarse el lmite
de cuantificacin.
-Se recomienda preparar no menos de 6 muestras diferentes.
- Las muestras se preparan efectuando diluciones en una escala
logartmica de una muestra de concentracin conocida.
- Ejemplo: 1,2, 5, 10, 20 y 40.
- Una vez preparadas las muestras se alicuotan (se fraccionan
alrededor de 20 alcuotas) y se congelan.
- Se toma una alcuota de cada muestra por da y se procesa.
- Se registran los resultados y al final del ciclo se calculan los
coeficientes de variacin y la media para cada una de las
muestras.
- Se grafican los CV obtenidos en funcin de las medias de cada
una de las muestras.
- Se obtiene grficamente el lmite de cuantificacin.
107
Protocolos
Ejemplo: TSH
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
108
Protocolos
Ejemplo: TSH
Se puede establecer como lmite de cuantificacin estos

dos valores:
1- Menos conservador: 0.0048
2- Ms conservador: 0.010
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
109
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
110
Desempeo del Mtodo

El desempeo de un mtodo es considerado aceptable
cuando la magnitud de los errores obtenidos en el
estudio de validacin es menor a los errores
mximos tolerables segn los requerimientos de
calidad establecidos.
Error (TE)
<
TEa
Aceptable
Error (TE)
>
TEa
Rechazado
TE: Error Total

TEa: Requerimiento de Calidad
111
Desempeo del Mtodo

Los errores calculados son:
- Error Aleatorio: A partir de los protocolos de
Precisin.
SD y CV
- Error Sistemtico: A partir del protocolo de
Comparacin de Mtodos.
Y = Pendiente .X + Interseccin
De la combinacin de conceptos y errores surge la
decisin acerca de la aceptabilidad del mtodo en
estudio.
Existen varios modelos para esta combinacin.
Los ms apropiados son:
1-Method Desicion Chart
2-Six Sigma
112
Desempeo del Mtodo
El grfico supone
un TEa de 10%
Punto
Operativo
CV: 1,5%
Bias: 3,0%
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Desempeo Excelente
113
Desempeo del Mtodo

Six Sigma
Est dirigida al mejoramiento de procesos
- El nombre de Six Sigma deriva de un goal standard
de calidad que apunta a lograr que, entre los lmites de
tolerancia de un proceso dado, puedan alojarse seis
unidades de desvo estndar.
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www.westgard.com
114
Desempeo del Mtodo

Six Sigma
- Si reemplazamos en la definicin anterior el
trmino tolerancia del proceso por el de
requerimientos de calidad hemos logrado
trasladar el concepto Six Sigma a la evaluacin
de desmpeo de los mtodos analticos.
Six Sigma=(TEa-Bias)/CV
Six Sigma=(TEa-Bias)/SD
115
Desempeo del Mtodo

Clculo de la Mtrica Six Sigma
- Definir los requerimientos de Calidad
Ejemplo 12%
- Eje Y: de o a TEa (Bias %)
Ejemplo de o a 12%
- Eje X: de 0 a 0.5 TEa (CV %)
- Dibujar las lneas para 2,3,4,5 y 6
- Todas las lneas parten del eje Y en el TEa, en el
ejemplo desde el 12%.
2 : Intercepta x en TEa/2 (Ej.6%)
5 : Intercepta x en TEa/5 (Ej.2.4%)
6 : Intercepta x en TEa/6 (Ej.2 %)
116
Desempeo del Mtodo

El grfico supone
un TEa de 12%
Punto Operativo
Grfica
CV: 1,5%
Bias: 3,0%
6 Sigma
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117
Desempeo del Mtodo

Interpretacin (del desempeo):
Por debajo de 2 : Inaceptable
Entre 2 y 3 :
Marginal no vlido para
procesos de rutina
Entre 3 y 4 :
Pobre
Entre 4 y 5 :
Bueno
Entre 5 y 6 :
Muy Bueno
Por encima de 6 : Gold Estandard
118
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
119
Intervalo de Referencia
Definicin (1): Rango de resultados que definen una
condicin de salud.
Es la ltima caracterstica a ser evaluada en un
estudio de validacin de mtodos.
- No tiene relacin directa sobre la evaluacin del
mtodo.
- No se realiza si la evaluacin del mtodo resulta
inaceptable.
Una vez que el desempeo del mtodo es
considerado aceptable se procede a la evaluacin del
intervalo de referencia.
La evaluacin del intervalo de referencia es
importante para la interpretacin de los resultados de
los pacientes.
120
Verificacin del Intervalo de Referencia

Existen distintas aproximaciones para
transferir un intervalo de referencia
establecido a un laboratorio individual.
Criterio terico
Verificacin con 20 muestras
Clculo a partir de la comparacin de
mtodos
121

- Se seleccionan, segn los criterios que correspondan al
caso en estudio, 20 pacientes considerados como sanos.
- Se comparan los datos obtenidos con el intervalo de
referencia establecido por el fabricante.
- Si 2 o menos resultados (10 %) caen por fuera del
intervalo del fabricante ste se considera verificado.
- Si ms de 2 resultados caen por fuera del intervalo
propuesto se seleccionan nuevamente 20 pacientes y se
repite el estudio.
- Si nuevamente ms de 2 resultados caen por fuera del
intervalo propuesto, se debe establecer un nuevo
122
intervalo.

Ejemplo: Glucosa (Modelo 20 muestras)
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
123

Ejemplo: Glucosa
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
124

- Se seleccionan, segn los criterios que correspondan al
caso en estudio, 60 pacientes considerados como sanos.
- Se estudia estadsticamente la poblacin y se
comparan los estadsticos ( media y desvo estndar ) de
ambas poblaciones.
Ventajas:
- Mayor poder estadstico.
Desventajas:
- Difcil de reunir los datos ( no se puede trabajar con
menos de 40 individuos).
- Clculos estadsticos complicados.
125

Clculo a partir de la comparacin de
mtodos
- Emplea los datos estadsticos obtenidos en el estudio
de comparacin de mtodos, para obtener el intervalo
de referencia del mtodo que est siendo evaluado.
Y(bajo) = a + bX (bajo)
Y(alto) = a + bX (alto)
b: pendiente
a: interseccin
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126
Los intervalos de referencia deben
determinarse cuando:
- No son provistos por el fabricante.
- El intervalo de referencia provisto no es
satisfactorio.
- No existen estudios previos.
- El rango debe calcularse para una
subpoblacin (rangos peditricos).
- Se trata de un mtodo de desarrollo casero.
127
Seleccionar los individuos de referencia.

Tomar las muestras.
Analizar las muestras.
Mnimo 120 muestras.
Ordenar los datos y graficarlos para ver la distribucin
(Ordenar los resultados por valor, el rango se obtiene
entre los muestras nmero 3 y 118)
Considerar si es necesario efectuar particiones por sexo y
edad.
Si se efectan particiones son necesarios ms datos.
Aproximacin estadstica (Paramtrico vs No Pramtrico).
Calcular los intervalos de confidencia.
128
Ejemplo: T4
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
129
Ejemplo: T4
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
130
Ejemplo: T4
EP
EPEvaluator
EvaluatorRelease
Release77
131
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
132

La implementacin del ensayo comprende las
siguientes etapas:
- Redactar los procedimientos y procesos relacionados con el
ensayo e incorporarlos al sistema de gestin de calidad.
- Preparar material de entrenamiento para el personal que realizar
el ensayo y efectuar la capacitacin correspondiente.
- Planificar los procedimientos de control de calidad en base a los
datos de desempeo obtenidos durante la validacin del ensayo.
- Implementar los procedimientos de control de calidad.
- Monitorear cuidadosamente el desempeo del ensayo durante los
primeros meses para identificar posibles errores.
- Una vez descubiertos los errores, aplicar medidas correctivas.
133
Agenda
Introduccin
Validacin de Mtodos
Evaluacin de Mtodos
Protocolos
Desempeo del Mtodo
134
Conclusiones
Control de
Calidad
Qu voy a controlar?
Estabilidad del sistema analtico

Para poder controlar algo, primero debo conocerlo!!!!
Cmo puedo conocer el desempeo del mtodo en
condiciones estables?
Validacin
analtica de
mtodos
135
Conclusiones
Validaciones
Analticas
Conocer el desempeo del

mtodo en condiciones
estables
Control de Calidad
Asegurarnos que el mtodo

se desempea en
condiciones estables
Advertirnos sobre cambios en
el desempeo estable del
mtodo
136
Conclusiones
Calificacin de instrumentos
Validacin Analtica
(Parmetros de Desempeo)
Control de Calidad Interno
(Planificacin)
Control de Calidad Externo
137
Conclusiones
Resultados de Pacientes
La validacin de mtodos es el punto de partida para
lograr resultados de alta calidad
Las validaciones analticas deben llevarse a cabo
sobre instrumentos calificados
La validacin de mtodos analticos forma parte del
proceso de planificacin de la calidad que da
comienzo al circuito de gerenciamiento de la calidad
138
Muchas Gracias!
139

Validación de métodos analíticos en laboratorios clínicos

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Validación de métodos analíticos en laboratorios clínicos

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Validacin de

Calidad de los Resultados

Gua sobre la Calificacin de Instrumentos Analticos

Mtodo de campo o en estudio

Mtodo de referencia o de comparacin

TE: Error Total

(TE = SE + 4,5 RE)

Evaluation of Precision Performance

Evaluation of the linearity of Quantitative

Method Comparasion and Bias

Preliminary Evaluation of Quantitative

Evaluation of Qualitative Assays

Evaluation of Matrix Effects

User Demostration of Performance for

- Fundamento: Anlisis de varianzas (ANOVA).

Precisin intra ensayo

interda + interserie + intraserie = Total

Ejemplo: Glucosa (Validacin)

Trabaja de acuerdo a los lineamientos de la EP 5.

Aplicar Test de Significancia

Permite identificar outliers

Mtodo en estudio o de campo

Verificar la calidad de las muestras

Permite visualizar errores

Linealidad Clnica: Creatinina

CV: Coeficiente de variacin 106

Se puede establecer como lmite de cuantificacin estos

Desempeo del Mtodo

TE: Error Total

Desempeo del Mtodo

Desempeo del Mtodo

Desempeo del Mtodo

Desempeo del Mtodo

Desempeo del Mtodo

Desempeo del Mtodo

Desempeo del Mtodo

Verificacin del Intervalo de Referencia

Verificacin del Intervalo de Referencia

Verificacin del Intervalo de Referencia

Verificacin del Intervalo de Referencia

Verificacin del Intervalo de Referencia

Verificacin del Intervalo de Referencia

Seleccionar los individuos de referencia.

Implementacin del Mtodo

Estabilidad del sistema analtico

Conocer el desempeo del

Asegurarnos que el mtodo

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