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A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

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A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO


DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

Danielly de Paiva Magalhes1* & Aloysio da Silva Ferro Filho1


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Laboratrio de Avaliao e Promoo da Sade Ambiental, Pavilho Lauro Travassos, Instituto Oswaldo Cruz, Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz). Av.
Brasil, 4365 - Manguinhos, CEP: 21040-360. Rio de Janeiro, Brasil.
* E-mail: daniellypaiva@uol.com.br

RESUMO
A Ecotoxicologia Aqutica uma cincia que surgiu para dar suporte no enfrentamento dos problemas
de contaminao dos corpos dgua por compostos txicos. Seus instrumentos de anlise so capazes de
responder preditivamente toxicidade de compostos qumicos, sinalizando os potenciais ecotoxicolgicos
e seus mecanismos de ao em organismos vivos, a partir da obteno de curvas concentrao-efeito e
concentrao-resposta, bem como na deteco de ecotoxicidade em ambientes impactados. A insero dos
ensaios ecotoxicolgicos como ferramenta de avaliao ambiental de fundamental importncia, pois alguns
fatores no so avaliados pelas variveis abiticas, como por exemplo, a biodisponibilidade e a interao entre
os efeitos de poluentes. Portanto, o objetivo desta reviso foi demonstrar a viabilidade de testes ecotoxicolgicos
tradicionais para o biomonitoramento de ambientes aquticos dulccolas, bem como apontar suas vantagens
e limitaes. Dentro deste contexto, foram abordadas as caractersticas dos organismos bioindicadores que
devem ser consideradas para a aplicao em bioensaios e a melhor forma de analisar suas respostas frente a uma
exposio txica. Este trabalho, alm de descrever os mtodos tradicionais, tambm discute uma metodologia
relativamente nova, o Sistema de Biomonitoramento Automtico em Tempo Real, que utiliza organismos
sentinelas na deteco de alteraes comportamentais ou siolgicas durante a exposio ao contaminante
ou fonte de poluio. Essa uma metodologia bastante eciente, pois os organismos so capazes de detectar
concentraes subletais de agentes txicos, funcionando como verdadeiros biosensores da qualidade da gua.
Embora a avaliao ecotoxicolgica seja uma ferramenta de suma importncia para a anlise da sade ambiental
dos ecossistemas aquticos, so poucas as exigncias da legislao brasileira com relao ecotoxicidade de
despejos de fontes poluidoras. Apenas alguns estados brasileiros, como Santa Catarina e Paran, possuem
legislao especca determinando fatores de toxicidade permitidos para cada tipo de despejo. Em suma, a
Ecotoxicologia dispe de ferramentas bastante ecientes que devem ser aplicadas segundo critrios especcos
de qualidade da gua e tipo de contaminao a ser avaliada.
Palavras-chave: Ecotoxicologia, testes ecotoxicolgicos, toxicidade aguda, toxicidade crnica, biomonitoramento automtico.
ABSTRACT
ECOTOXICOLOGY AS A TOOL TO MONITORING AQUATIC ECOSYSTEMS. Aquatic
Ecotoxicology is a science created to solve problems with water contamination by toxic compounds. The analytical
framework employed is capable of predicting biological responses to the toxicity of chemical compounds
through concentration-effect and concentration-response curves, and also enables evaluating the ecotoxicity of
disturbed environments. Employing ecotoxicological assays in environmental evaluations is germane, as some
factors are not assessed through abiotic variables, e.g. the bioavailability and interactions between pollutants
effects. The aim of this review was to demonstrate the suitability of traditional ecotoxicological tests for
biomonitoring freshwater ecosystems, while listing the pros and cons of this approach. This way, we described
desirable characteristics of bioindicators that should be considered for the application in ecotoxicological
bioassays and the best way of analyzing their responses from exposure to toxics. Moreover, the present
review also discusses a recent method known as Real-Time Automated Biomonitoring Systems, which makes
use of sentinel organisms in trying to detect behavior or physiological alterations derived from exposure to
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MAGALHES, D.P. & FERRO FILHO, A.S.

contaminants or pollutants. The method is efcient, because the sentinel organisms enable detecting sublethal
concentrations of the toxic agents, thus working as true biosensors of water quality. Although ecotoxicology
evaluation is of prime importance in analysing the environmental health of aquatic ecosystems, Brazilian
legislation cares little for the ecotoxicity of pollutant discharges. Only in some Brazilian States, like Santa
Catarina and Paran, present specic ofcial rules stating accepted toxicity factors to each kind of discharge.
In summary, ecotoxicology provides efcient analytical tools that should be used following specic criteria
according with the water quality and kind of contamination to be evaluated.
Keywords: Ecotoxicology, ecotoxicological tests, acute toxicity, chronic toxicity, automated biomonitoring.
INTRODUO
Desde a antiguidade, as respostas dos organismos
vivos a diferentes tipos de estresse tm sido utilizadas
para avaliar a qualidade do meio em que vivem. H
relatos de que Aristteles (384-322 a.C.), considerado
o pai da biologia, submeteu peixes de gua doce
gua do mar para estudar suas reaes. O primeiro
teste de toxicidade com organismos aquticos que
se tem notcia foi realizado em 1816 com insetos
aquticos (Buikema & Voshell 1993)
O termo ecotoxicologia foi sugerido pela primeira
vez em junho de 1969, durante uma reunio do
Committee of the International Council of Scientic
Unions (ICSU), em Estocolmo, pelo toxicologista
francs Ren Truhaut (Truhaut 1977). Segundo este
autor, a Ecotoxicologia denida como a cincia
que estuda os efeitos das substncias naturais ou
sintticas sobre os organismos vivos, populaes
e comunidades, animais ou vegetais, terrestres ou
aquticos, que constituem a biosfera, incluindo assim
a interao das substncias com o meio nos quais
os organismos vivem num contexto integrado (Plaa
1982, Cairns & Niederlehner 1995 Apud. Zagatto &
Bertoletti 2006). Ramade (1977) publicou o primeiro
livro de Ecotoxicologia, denindo-a como a cincia
que tem por objetivo estudar as modalidades de
contaminao do ambiente pelos poluentes naturais
ou sintticos, produzidos por atividades humanas,
seus mecanismos de ao e seus efeitos sobre o
conjunto de seres vivos que habitam a biosfera.
Deste modo, a Ecotoxicologia nasceu como ferramenta de monitoramento ambiental, baseada principalmente na resposta de organismos individuais a
estressores qumicos. Portanto, uma cincia com
objetivo prprio de estudo (o fenmeno da intoxicao ambiental em todas as suas nuances e conseqncias), com nalidade (impedir e prevenir determinada intoxicao ou saber como interromp-la,
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revert-la e remedi-la) e com mtodo (Azevedo &


Chasin 2003).
Na dcada de 80, as agncias ambientais no
mundo todo, principalmente nos EUA e na Europa,
comearam a desenvolver protocolos padronizados
de testes de toxicidade utilizando organismos
aquticos (USEPA 1996, 2002, OECD 1984-2004).
O chamado Clean Water Act foi uma espcie de
marco regulatrio que deu a Agncia de Proteo
Ambiental Americana a autoridade para implantar
programas de controle da poluio, incluindo
padres de qualidade de euentes industriais assim
como requerimentos para a xao de padres de
qualidade da gua para todos os contaminantes de
guas superciais. Em 1984, a USEPA estabeleceu
o uso de organismos para ns de monitoramento
da qualidade da gua, o chamado Monitoramento
Biolgico ou, simplesmente, Biomonitoramento
(USEPA 1984). Ao mesmo tempo, a Organizao
para Cooperao Econmica e Desenvolvimento
(OECD), na Europa, lanava uma srie de protocolos
de testes com organismos aquticos como algas,
microcrustceos e peixes (OECD Guidelines 201,
202, 203, respectivamente).
Os testes ecotoxicolgicos, ou bioensaios, para
monitoramento e avaliao da qualidade da gua,
tm se tornado bastante comuns nos ltimos anos no
Brasil. A primeira iniciativa em termos metodolgicos
se deu em 1975, num programa internacional de
padronizao de testes de toxicidade aguda com
peixes, desenvolvido pelo Comit Tcnico de
Qualidade das guas da International Organization
for Standardization (ISO), com participao da
Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental
do Estado de So Paulo (CETESB) a convite
da Associao Brasileira de Normas Tcnicas
(Zagatto & Bertoletti 2006). A partir de 1975, foram
desenvolvidos e adaptados vrios mtodos de ensaios
de toxicidade aguda e crnica, de curta durao,

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utilizando alguns grupos e espcies de organismos,


dentre os quais se destacam as algas (ABNT 1992,
CETESB 1994), microcrustceos (ABNT 1993,
CETESB 1994) e peixes (CETESB 1990, ABNT
2004) de guas continentais e marinhas e testes com
sedimentos (Zagatto & Bertoletti 2006).
Cabe ressaltar que o objetivo principal da
Ecotoxicologia foi sempre a anlise custo-benefcio
no processo de produo de bens de consumo, onde
o problema minimizar os custos da produo tanto
quanto os efeitos da poluio qumica causada por
esta produo nos seres humanos. Para isto, foram
desenvolvidos protocolos padro para avaliar os
efeitos de substncias qumicas e misturas txicas
sobre os organismos. A presso da opinio pblica,
principalmente durante a dcada de 70, foi a mola
propulsora dos avanos na rea da Toxicologia
Ambiental e da Ecotoxicologia. A presso sobre as
indstrias potencialmente poluidoras para resolver
problemas prticos rapidamente norteou, de certo
modo, a pesquisa nesta rea, levando a uma abordagem
mais pragmtica. Atendendo esta demanda das
indstrias em satisfazer a opinio pblica, as agncias
de proteo ambiental, principalmente nos EUA e
Europa, comearam ento a desenvolver os primeiros
protocolos padronizados de testes de toxicidade,
utilizando espcies nativas daqueles pases. Como
veremos adiante, embora a padronizao implique
na vantagem de se tornar os resultados comparveis,
a utilizao destes testes rotineiramente fornece
bons exemplos para ilustrar que a padronizao de
experimentos, sem uma base cientca slida, na
realidade, impede o desenvolvimento desta base.
Portanto, os aspectos aplicados (i.e. avaliao de
risco, anlise de custo), muito mais do os aspectos
cientcos, controlaram a pesquisa experimental e,
consequentemente, os mtodos da Ecotoxicologia
(Kooijman & Bedaux 1996).
Embora o conceito de Ecotoxicologia seja amplo,
abrangendo a totalidade do ecossistema, muito mais
ateno tem sido dada aos efeitos em organismos (i.e.
espcies) individuais e poucos so os estudos com
enfoque sistmico. A viso ecossistmica tem sido
enfatizada ultimamente em uma nova abordagem
que vem sendo denominada de Ecologia do Estresse
(Stress Ecology, Van Straalen 2003). Nesta viso, o
conceito de nicho ecolgico assume grande importncia, medida que os agentes txicos frequente-

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mente interagem com fatores de estresse naturais,


como temperatura, pH, presso osmtica e nutrio,
principalmente quando os organismos esto nas
bordas de sua amplitude ecolgica que a faixa
de condies ambientais na qual o organismo pode
sobreviver e reproduzir e os efeitos dos toxicantes
tornam-se mais severos. Uma situao de estresse
surge quando algum fator ambiental muda ou quando
um organismo encontra-se fora de seu nicho ecolgico. Por denio, um organismo no pode crescer
e reproduzir fora de seu nicho, mas pode sobreviver
temporariamente. Portanto, a Ecologia do Estresse
traz uma proposta inovadora na Ecotoxicologia, analisando o organismo num contexto mais amplo e mais
prximo da realidade do ambiente natural. Segundo
Van Straalen (2003), para que haja um avano na rea
de Ecotoxicologia, h que se fazer um esforo para
diminuir o enfoque de testagem (testing approach) e
trazer a Ecotoxicologia mais prxima da Ecologia.
A Figura 1 ilustra as faixas de tolerncia e os
nveis requeridos para manter as atividades biolgicas. Pode-se deduzir que, medida que o organismo exposto a algum estresse ambiental, seja uma
condio extrema ou um agente txico, que o leva
para fora de sua faixa tima, algum processo biolgico comprometido. Alm disso, a sensibilidade
dos organismos a determinados agentes pode mudar
em funo das condies ambientais, como por
exemplo a temperatura (Lewis & Horning 1991), o
pH (Belanger & Cherry 1990, Havens 1992) e o nvel
alimentar (Koivisto et al. 1992). Deste modo, quanto
mais estreita a faixa de tolerncia a condies ambientais, maior o nvel requerido pelo organismo para
sobreviver, crescer e reproduzir-se. Portanto, testes
que abranjam estes principais processos biolgicos,
realizados em condies diferenciadas de exposio
(i.e. pH, temperatura, dureza, etc.), so importantes
na determinao dos efeitos de poluentes e contaminantes ambientais. Dentro desta abordagem, portanto,
a padronizao dos testes de toxicidade torna-se
inconveniente.
Ainda dentro da abordagem ecossistmica, muitas
tentativas tm sido feitas no sentido de tornar mais
realistas os testes de toxicidade, como a realizao de
ensaios multi-espcies (i.e. comunidades, mesocosmos
e testes in situ, Chapman et al. 1992, Burton et al.
2005) e o uso de end points funcionais (i.e. produo
primria, decomposio, etc), em adio aos testes
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tradicionais que avaliam somente a sobrevivncia,


crescimento e reproduo de uma nica espcie.
Uma abordagem mais reducionista, mas no menos
importante, a que estuda os efeitos comportamentais
de agentes estressores em organismos individuais.
Marcucella & Abramson (1978) deniram
Toxicologia Comportamental como as mudanas
do comportamento de um organismo, induzida pelo
estresse, que excede o limite normal de variabilidade.
Dentro da hierarquia da organizao biolgica o
comportamento uma resposta toxicolgica que
reete o efeito de todos os nveis do organismo e
representa a interao de processos siolgicos com
estmulos ambientais (Grue et al. 2002). A escolha de
habitat, captura de presas e fuga de predadores so
classes de comportamento que afetam as variveis
demogrcas fundamentais como nascimento e
morte e, consequentemente, os padres da dinmica
de populaes e a estrutura das comunidades (Anholt
1997). Portanto, a Toxicologia Comportamental
pode ajudar a predizer quais os possveis efeitos dos
agentes txicos no tness das espcies testadas e as
conseqncias no nvel de populaes.
O objetivo deste trabalho fazer uma reviso dos
principais mtodos ecotoxicolgicos empregados na
avaliao da qualidade da gua e no biomonitoramento
da contaminao ambiental, limitando-se s respostas
ao nvel de organismo. De fato, o nvel de organismo
situa-se no meio da escala hierrquica de resposta a

estressores, integrando os nveis bioqumico, celular


e siolgico (Figura 2). Portanto, antes que os
efeitos possam se expressar no nvel de populaes,
comunidades e ecossistemas, a resposta de organismos
individuais fornece uma boa avaliao do risco
de extino local de alguns grupos de organismos
susceptveis. Dentro desse alcance de organizao,
sero abordados os mtodos tradicionais, como
testes de toxicidade aguda e crnica, assim como os
mtodos mais modernos, como o biomonitoramento
automtico em tempo real para anlise do efeito de
substncias txicas na atividade motora de organismos
aquticos. Ser feita tambm uma anlise crtica de
todos estes mtodos, procurando-se destacar suas
vantagens e limitaes.
ENSAIOS ECOTOXICOLGICOS
Os resultados das anlises qumicas por si s
no retratam o impacto ambiental causado pelos
poluentes porque no demonstram os efeitos sobre
o ecossistema. Somente os sistemas biolgicos
(organismos ou partes deles) podem detectar os efeitos
txicos das substncias. A aplicao dos testes de
toxicidade na anlise ambiental bastante abrangente
e sua importncia aumenta na proporo que cresce a
complexidade das transformaes qumicas no meio
ambiente. A determinao de substncias isoladas
atravs de anlises qumicas tradicionais, alm de

Figura 1. Faixas de tolerncia e nveis de atividade biolgica requeridos para manter as funes vitais (sobrevivncia, crescimento e reproduo)
dos organismos sob um gradiente de condies ambientais (e.g. pH, temperatura, oxignio dissolvido, substncias txicas). Modicado de Ricklefs
(2001).
Figure 1. Tolerance limits and amount of biological activity necessary to sustain vital functions (survival, growth and reproduction) of organisms over
a range of environmental conditions (e.g. pH, temperature, dissolved oxygen, toxic substances). Adapted from Ricklefs (2001).

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Figura 2. Nveis de organizao biolgica e resposta aos efeitos de poluentes.


Figure 2. Levels of biological organization and responses to pollutant effects.

no detectarem os efeitos nos organismos, no do


resposta sobre que tipo de agente qumico est sendo
responsvel pela toxicidade e informaes sobre
as possveis interaes entre substncias (aditivas,
antagnicas ou sinergsticas), como tambm da
biodisponibilidade das mesmas. Uma abordagem
promissora neste sentido a Avaliao e Identicao
da Toxicidade, AIT (Toxicity Identication Evaluation
TIE). A AIT associa tcnicas de fracionamento
de amostras e testes de toxicidade (Fase I), anlises
qumicas (Fase II) e conrmao da toxicidade
(Fase III), fornecendo uma idia mais precisa de que
tipo de composto (e.g. metais, nions inorgnicos,
compostos orgnicos polares e no polares, volteis,
oxidantes, etc.) est envolvido na toxicidade para
a biota aqutica. Entretanto, no do escopo desta
reviso, aprofundar-se nesta abordagem (consultar
Botta et al. 2006).
Os testes de ecotoxicidade permitem avaliar a
contaminao ambiental por diversas fontes poluidoras, tais como: euentes agrcolas, industriais e
domsticos, sedimentos, medicamentos e produtos
qumicos em geral, assim como, avaliar a resultante
de seus efeitos sinrgicos e antagnicos (Marschner
1999, Lombardi 2004). Tem como vantagem, abranger
uma grande variedade de substncias biologicamente
disponveis em uma amostra ambiental atravs de um

nico ensaio, possibilitando a deteco de efeitos de


substncias txicas novas que possam surgir no ecossistema aqutico (Branco 1989). Este instrumento
torna-se de suma importncia na busca de generalizaes sobre o grau de toxicidade em vrios tipos
de corpos hdricos e para determinao da inuncia
direta de elementos vindos das atividades antrpicas
e/ou naturais (Zagatto & Gherardi-Goldstein 1991).
Detectam a capacidade inerente de um agente txico
ou uma mistura em produzir efeitos deletrios nos
organismos vivos, permitindo avaliar em que medida
as substncias so nocivas, como e onde se manifestam os efeitos. Em suma, os procedimentos ecotoxicolgicos tradicionais tm maior preocupao em
caracterizar os efeitos adversos causados por uma
amostra txica sem a preocupao de identicar os
agentes txicos isoladamente.
Os testes ecotoxicolgicos so realizados com
organismos indicadores, que devido s suas caractersticas de pequeno limite de tolerncia ecolgica,
a determinadas substncias qumicas, apresentam
alguma alterao, seja ela siolgica, morfolgica
ou comportamental, quando expostos a determinados
poluentes. As exposies so feitas em diferentes
concentraes de substncias e compostos qumicos,
amostras de euentes ou gua bruta, por um determinado perodo de tempo. A exposio a um agente
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txico pode ser aguda, quando a concentrao letal do


agente txico liberada em um nico evento e rapidamente absorvida, ou crnica, quando o agente txico
liberado em eventos periodicamente repetidos, em
concentraes subletais, durante um longo perodo de
tempo (Schvartsman 1991).
Estes testes apresentam uma srie de normas e
procedimentos padronizados que devem ser seguidos
para que as respostas sejam consideradas vlidas
(Tabela I). Assim, temos as sries de diluio, o controle
negativo e o controle positivo. As sries de diluio
so utilizadas para se medir em que concentrao o
material a ser testado apresenta efeitos ou no sobre
aquela determinada populao, fornecendo sempre
informaes sobre a relao concentrao/efeito,
permitindo assim uma estimativa da proximidade dos
limites de tolerncia e de um ranking de Toxicidade.
O controle negativo uma populao exatamente
igual que se encontra em testes, mas sem a adio do
contaminante, isto ajuda a determinar at que ponto os
efeitos podem ter acontecido por outro fator qualquer.
No controle positivo, utiliza-se um agente txico de
efeito conhecido (i.e. uma substncia qumica de
referncia) para assegurar que o organismo responde
apropriadamente.

Para deteco de despejos txicos no ambiente, as


amostras devem ser coletadas ou os organismos devem
ser expostos em vrios pontos localizados montante
do ponto de despejo, preferencialmente alm da rea
de mistura e jusante do ponto de descarte. Cuidados
devem ser tomados para incluir uma rea controle e
uma rea de recuperao, assim como vrias estaes
intermedirias respeitando o gradiente de poluio
(De Zwart 1995).
Uma situao onde h muitas fontes de poluio
aquela onde h mais do que um despejo de euente
dentro do curso de gua de forma que seus efeitos
podem sobrepor-se. Essa a situao mais comum
de ser encontrada. A avaliao toxicolgica particularmente til para determinar se a combinao de
euentes causar algum efeito, pois estes efeitos so
medidos em combinao (De Zwart 1995). Neste caso,
tambm importante que os estudos sejam direcionados para aquelas fontes que contribuem mais para
os efeitos adversos, fazendo uma correlao entre o
euente e a sua toxicidade no ambiente (Eagleson et
al. 1990, Dickson et al. 1992, Khan et al. 1994).
Uma vez carreados para dentro dos corpos de gua,
os compostos txicos podem interagir diretamente
com a biota por ingesto e contato, ou se depositar nos

Tabela I. Normas brasileiras para padronizao de testes ecotoxicolgicos.


Table I. Brazilian guidelines for standardization of ecotoxicological tests.

Normas

Normas da CETESB

Normas da ABNT

Identicao

L5.018

Teste de toxicidade aguda com Daphnia similis Claus, 1879 (Cladocera, Crustacea).

L5.019

Teste de toxicidade aguda com peixes. Parte I - Sistema Esttico. Parte II - Sistema
Semi-Esttico. Parte III - Sistema de Fluxo Contnuo.

L5.020

Teste de toxicidade com Chlorella vulgaris (Chlorophyceae).

L5.022

Avaliao de toxicidade crnica, utilizando Ceriodaphnia dubia Richard, 1894


(Cladocera, Crustacea).

L5.227

Bioensaio de toxicidade aguda com Photobacterium phosphoreum (Sistema


Microtox).

L5.228

Teste de toxicidade aguda utilizando Spirillum volutans.

L5.250

gua do Mar - Teste de Toxicidade Crnica de Curta Durao com Lytechinus


ariegatus Lamarck, 1816 (Echinodermata, Echinoidea).

L5.251

gua do Mar - Teste de Toxicidade Aguda com Mysidopsis juniae Silva, 1979
(Mysidacea, Crustacea).

NBR 12713

gua - Ensaio de Toxicidade Aguda com Daphnia similis Claus, 1876 (Cladocera ,
Crustacea).

NBR 12714

gua - Ensaio de toxicidade aguda com peixes - Parte I - Sistema esttico.

NBR 12715

gua - Ensaio de toxicidade aguda com peixes - Parte II - Sistema semi-esttico

NBR 12716

gua - Ensaio de toxicidade aguda com peixes - Parte III - Sistema de uxo contnuo.

NBR 12648

Ensaio de toxicidade com Chlorella vulgaris (Chlorophyceae).

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sedimentos. Este compartimento funciona, portanto,


como um sumidouro temporrio de poluentes os
quais, sob determinadas condies ambientais, podem
ser liberados para a coluna de gua afetando assim
no s a fauna bentnica quanto nectnica tambm.
Por isso, no monitoramento ecotoxicolgico de
ecossistemas aquticos importante, alm de analisar
a gua, avaliar a toxicidade do sedimento.
TESTE DE TOXICIDADE AGUDA
Os testes de toxicidade aguda avaliam uma resposta
severa e rpida dos organismos aquticos a um estmulo que se manifesta, em geral, num intervalo de 0
a 96 horas. (Rand & Petrocelli 1985). Normalmente o
efeito observado a letalidade ou outra manifestao
do organismo que a anteceda, como o estado de imobilidade em invertebrados. Estes testes tm por objetivo
determinar a Concentrao Letal Mdia (CL50) ou a
Concentrao Efetiva Mdia (CE50), isto , a concentrao do agente txico que causa mortalidade ou
imobilidade, respectivamente, a 50% dos organismosteste depois de um determinado tempo de exposio.
A avaliao ecotoxicolgica aguda de corpos de
gua, com organismos aquticos, constitui-se uma
abordagem exploratria para evidenciar um problema
de qualidade de corpos hdricos que recebem despejos
domsticos e industriais (Bertoletti & Zagato 2006). Tem
como objetivo identicar a variabilidade das respostas
ao agente entre as diferentes espcies, indicar a toxicidade comparativa e detectar contaminaes agudas. No
Brasil, os testes de toxicidade aguda vm sendo empregados no monitoramento de euentes industriais com
o intuito de minimizar o impacto ambiental, avaliar a
ecincia de estaes de tratamento, bem como requisito para a obteno e manuteno de licenas junto aos
rgos ambientais de alguns Estados.
Em seu estudo, Baptista et al. (2000) avaliaram a
ecincia de uma estao de tratamento de euentes
de uma indstria txtil, para isso, utilizaram trs
organismos bioindicadores, o crustceo Daphnia
magna, o peixe Poecilia reticulata e a bactria Vibrio
scheri, representativos de diferentes nveis trcos.
Os teste de toxicidade aguda revelaram que o tratamento empregado pela indstria foi eciente quanto
remoo de toxicidade aguda para os organismos D.
magna e P. reticulata, para estes organismos o euente
tratado no causou nenhum efeito agudo, porm no

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teste com V. scheri o euente tratado causou toxicidade aguda. Este estudo revela a importncia de se
avaliar ecotoxicologicamente a ecincia de estaes
de tratamento de euentes, e de se utilizar espcies
representativas de diferentes nveis trcos.
Para Ravera (1998) e Cairns (2002), a associao
do monitoramento qumico com o monitoramento
biolgico permite uma melhor avaliao das causas
dos efeitos nos organismos, atravs da identicao
de substncias que podem estar inuenciando na
toxicidade das amostras. Novelli (2005), avaliando a
toxicidade de amostras de gua e sedimento no rio
Monjolinho (So Paulo) utilizando Daphnia similis
e Ceriodaphnia dubia, vericou toxicidade aguda
das amostras de gua em todos os pontos amostrados
em julho de 2003, para D. similis. Estes resultados
apresentaram correlao com as concentraes de
metais e concentraes de matria orgnica detectados
no sistema em estudo.
Entretanto, muitas vezes, euentes que esto
dentro dos padres (tanto fsico-qumico quanto
ecotoxicolgico) estabelecidos pela legislao para
lanamentos em corpo de gua podem causar distrbios no ecossistema. Apesar da regulao de descargas
de compostos txicos no ambiente, o ecossistema
aqutico pode apresentar condies inadequadas para
manuteno da vida mesmo quando as caractersticas
fsico-qumicas da gua conferirem com a estabelecida pelo critrio de qualidade. Isto pode ser causado
pela interao entre componentes do euente, interaes entre mltiplas descargas ou fontes de poluio
no pontuais, e interaes com o corpo de gua
receptor (Bervoets et al. 1996).
Zagatto et al. (1987) observaram que a maioria
das amostras coletadas a jusante dos lanamentos de
euentes industriais da bacia do Rio Cubato causou
efeito txico agudo em D. similis e Chlorella vulgaris,
sendo que tal efeito nem sempre foi associado aos
agentes qumicos presentes. De modo semelhante,
Bertoletti et al. (1989) tambm demonstraram que
50% das amostras da gua dos rios da regio da
Grande So Paulo submetidas ao ensaio com D.
similis apresentaram efeito txico agudo. Estes autores
evidenciaram a inexistncia de correlao entre os
resultados dos ensaios ecotoxicolgicos e as anlises
fsicas e qumicas e, por isso, recomendaram a utilizao
destes testes para complementar a caracterizao das
guas destinadas proteo da vida aqutica.
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importante atentar para o fato de que o monitoramento de ecossistemas aquticos no deve estar
limitado apenas s anlises do componente gua,
mas tambm deve incluir o sedimento, uma vez que
o ambiente sedimentar pode alterar a qualidade das
guas quando substncias naturais e de origem antropognica introduzidas no sistema so liberadas para
coluna d gua devido a mudanas das condies
ambientais (Adams et al. 1992).
No Brasil, os primeiros trabalhos para avaliar
a toxicidade de sedimentos foram realizados em
1980, com material proveniente da represa Billings
e do rio Cubato, como parte de projetos mais
amplos para controle de poluio e recuperao
ambiental desenvolvidos pela Companhia de
Tecnologia e Saneamento Ambiental do Estado de
So Paulo (CETESB 1983 a,b). Os ensaios agudos
foram realizados com extrato aquoso do sedimento,
utilizando como organismo teste D. similis. Os
resultados obtidos com o rio Cubato foram
comparados com os dados de anlises qumicas e da
estrutura da comunidade bentnica, o que resultou em
indicaes seguras quanto deteco dos problemas
de contaminao por metais e compostos orgnicos,
contribuindo para o diagnstico ambiental da regio.
Os testes de toxicidade aguda tambm podem ser
aplicados para avaliar a sensibilidade relativa de organismos aquticos para um determinado agente txico
isolado e as concentraes seguras de agentes qumicos
para preservao da vida aqutica e do ambiente, como
no estudo de Resgalla Jr. et al. (2002) que avaliaram
a toxicidade aguda de alguns agroqumicos utilizados
em arroz irrigado, visando estabelecer as concentraes de risco bem como os possveis efeitos que tais
produtos possam apresentar sobre organismos noalvo. Empregaram como espcie indicadora a carpacomum em funo da sua utilizao em consrcios
de arroz com peixe. Foram testados individualmente
os herbicidas Metsulfuron, Clomazone, Oxiuorfen,
Oxadiazon e Pirazosulfuron e o inseticida Carbofuran. Os resultados indicaram grande variao entre
os produtos quanto toxicidade para a espcie testada.
A partir desse estudo, os autores estimaram o ndice de
segurana, atravs da relao entre a CL50 e a concentrao provvel utilizada na lavoura.
No ambiente aqutico, entretanto, os poluentes
acabam sofrendo uma srie de transformaes (diluio, fotodegradao, biodegradao etc.), estando
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

geralmente disponveis em concentraes crnicas.


Somente em rios que recebem muito aporte de euentes industriais e domsticos possvel identicar efeitos agudos. De forma geral, estes testes so baratos,
conveis e simples de desenvolver, porm existem
algumas limitaes como:
No h como avaliar de que maneira a mortalidade
aumentar aps a exposio, uma vez que estes
testes so de curta durao (0-96h). Em certos
casos, aps uma exposio a curto ou mdio
prazo, o efeito adverso s aparece depois de
um perodo de latncia, e os curtos perodos de
exposio empregados nos testes agudos podem
no abranger este perodo;
Geralmente realizado com uma nica espcie. Em
um contexto de multiespcies, o agente txico pode
ser transferido pela cadeia alimentar, ocorrendo a
biomagnicao, onde, os nveis de exposio por
ingesto podem resultar em nveis maiores do que
os que causam mortalidade a partir de uma dada
concentrao na gua. Alm disso, competio,
predao e outras interaes interespeccas pode
aumentar o estresse dos organismos, resultando no
aumento da sensibilidade.
Apenas um estgio de vida testado. A sensibilidade
das espcies nos estgios juvenil, larvar e ovos
frequentemente diferente, geralmente maior, do
que no estgio adulto.
A sensibilidade de um organismo a um poluente
pode variar. Um nvel seguro para uma espcie de
peixe A pode no ser para espcie B que faz
parte da mesma comunidade biolgica. Vitozzi
& De Angelis (1991), avaliando 200 compostos
txicos a diferentes espcies de peixes (Poecilia
reticulata, Danio rerio, Pimephales promelas,
Cyprinus Carpio, Oryza latipes, Salmo gairdnerii
e Leuciscus idus), vericaram o que se denomina
de toxicidade aguda a espcie seletiva, ou seja,
cada espcie apresenta uma sensibilidade uma
determinada substncia.
No sensvel a efeitos subletais que podem levar a
morte por exposio prolongada. As concentraes
subletais de produtos txicos no ambiente aqutico
podem causar uma srie de efeitos que no causam
a morte imediata dos organismos, mas que representam perturbaes importantes, consideradas
como morte ecolgica, as quais impedem que
o organismo realize suas funes no ecossistema,

A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

inclusive podendo progredir para a morte. Entre


estes efeitos esto: a diculdade na localizao de
presas, problemas na percepo qumica e motora,
inibio da desova, aborto, deformao de rgos
reprodutores, perda de membros, alteraes respiratrias, alteraes na taxa de fotossntese, desenvolvimento de carcinomas, etc. Muitos efeitos
indiretos e subletais podem ocorrer a mdio/longo
prazo, em diferentes intensidades, podendo causar
a reduo das populaes das espcies atingidas.
Fraccio et al. (2000) tambm perceberam a
limitao dos testes de toxicidade aguda em seu estudo
realizado no Rio Monjolinho. Este rio recebe esgoto
in-natura da cidade, alm de euentes industriais e
agrcolas (principalmente resduos de pesticida para
cultivo de cana). O estudo avaliou a toxicidade aguda
do rio Monjolinho em maio de 1998 com organismos
de diferentes nveis trcos e, no entanto, vericaram
que para um curto perodo de tempo houve toxicidade
para algas e microcrustceos somente em alguns
pontos mais urbanizados do rio. Os autores concluram
que seria necessria a avaliao mais cautelosa da
toxicidade tanto espacial quanto temporalmente,
com nfase em testes crnicos e in situ, e com fases
mais sensveis (larvas) de espcies representativas do
sistema para realmente conhecer o potencial txico
deste rio frente s atividades do seu entorno.
Devido diluio progressiva e saneamento, amostras de muitas localidades no produzem ou produzem
apenas efeitos marginais em testes de toxicidade aguda,
no revelando assim a relao fundamental entre a
concentrao e o efeito que crucial para a avaliao
da toxicidade. No entanto, as condies locais podem
muito bem atribuir certos aspectos de instabilidade em
longo prazo ao ecossistema. Prolongar consideravelmente a exposio de organismos aos contaminantes
ou aumentar a concentrao txica so as principais
solues para detectar o risco de perturbaes sutis do
ecossistema atravs de testes de toxicidade, porm,
isto muitas vezes no exeqvel.
TESTES DE TOXICIDADE CRNICA
Os testes de toxicidade crnica dependem diretamente dos resultados dos testes de toxicidade aguda,
uma vez que as concentraes subletais so calculadas a partir da CL50. Comparado com os testes

363

agudos, estes testes so mais sensveis diluio


esperada em amostras ambientais. Avalia a ao dos
poluentes cujo efeito traduz-se pela resposta a um
estmulo que continua por longo tempo, geralmente
por um perodo que vai de 1/10 do ciclo vital at a
totalidade da vida do organismo (Rand & Petroceli
1985). De modo geral, porm, no exclusivo, estes
efeitos so subletais e observados em situaes em
que as concentraes do agente txico, s quais cam
expostos os organismos, permitem sua sobrevivncia,
mas afetam uma ou vrias de suas funes biolgicas,
interferindo, por exemplo, na reproduo, desenvolvimento de ovos, no crescimento, etc.
A intoxicao crnica pode ocorrer por dois
motivos (Chasin & Azevedo 2003):
1) pela acumulao do xenobitico no organismo,
que ocorre quando a quantidade de xenobitico
eliminada inferior quantidade absorvida. A
concentrao do agente txico no organismo aumenta
progressivamente at obteno de nveis sucientes
para gerar efeitos adversos.
2) Pela adio dos efeitos causados por exposies
repetidas, sem que o txico se acumule no organismo.
Em ambientes aquticos a ocorrncia dos efeitos
crnicos mais freqente, devido: diluio pontual
dos xenobiticos oriunda das guas de contribuio,
s relaes antagonistas entre as substncias, rpida
associao que ocorre entre a maioria das partculas
e a matria hmica e sedimentao de slidos em
suspenso. Dessa forma, os organismos se expem
a baixas concentraes de determinados poluentes
durante longo perodos de tempo (Stephan & Mount
1973), ocasionando efeitos crnicos a nveis subletais
e at mesmo letais ao longo do tempo.
Os testes de toxicidade crnica so tambm
utilizados sempre que os testes de toxicidade aguda
no forem sucientes para caracterizar um efeito
txico mensurvel, isto , para detectar indcios de
toxicidade aguda. A seguir, so dados alguns exemplos
da aplicao de testes crnicos quando os testes
agudos falham em fornecer respostas mensurveis.
Barbosa et al. (2000) realizaram teste de toxicidade
aguda com o euente (lodo) de uma estao de
tratamento de gua utilizando como bioindicadores, o
crustceo Daphnia similis, larva de inseto Chironomus
xantus e o peixe Hyphessobrycon egues. Como os
testes agudos no indicaram toxicidade, foi conduzido
um teste crnico com D. similis, que resultou em efeitos
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

364

MAGALHES, D.P. & FERRO FILHO, A.S.

na reproduo. Concluindo, nem sempre a toxicidade


aguda reete o potencial deletrio de um euente
complexo, sendo imprescindvel a realizao de testes
de toxicidade crnica para complementar a avaliao ou
monitoramento ambiental, do ponto de vista biolgico.
No estudo de Bervoets et al. (1996), foi observado
efeito na reproduo de Daphnia magna na concentrao de 0,5% de um euente industrial contendo
altos nveis de clcio, cdmio, cloreto de chumbo
e sulfatos. Em uma concentrao ambiental de 4%,
todos os componentes do euente esto de acordo
com os limites estabelecidos pela regulao europia
(European Communities 1978); entretanto, um efeito
signicante na reproduo da D. magna foi detectado
at mesmo em concentraes oito vezes menores.
Em um trabalho recente, Ferro-Filho et al. (no
prelo) demonstraram que a gua de um reservatrio
eutrco (Reservatrio do Funil, RJ) apresentou efeitos
crnicos para duas espcies nativas de microcrustceos
zooplanctnicos (Daphnia gessneri e Moina micrura)
e que estes efeitos foram correlacionados com a
presena de toxinas de cianobactrias na gua. Dentro
do perodo testado, entretanto, houve pouca evidncia
de letalidade (Teste agudo de 48 h), o que demonstra a
importncia dos testes crnicos na avaliao do efeito
de toxinas de cianobactrias em espcies nativas.
ESCOLHA DO ORGANISMO-TESTE
Vrias espcies vm sendo empregadas internacionalmente em testes de toxicidade, gerando subsdios importantssimos para uma melhor avaliao
e caracterizao dos efeitos agudos e crnicos de
diversos agentes txicos e em corpos receptores.
Dentre os principais grupos de organismos, utilizados
em ensaios laboratoriais, destacam-se: microalgas,
microcrustceos, equinides, poliquetas, oligoquetas,
peixes e bactrias, representando os mais diversos
ecossistemas e nveis trcos.
A sensibilidade de um organismo frente qualidade
do seu ambiente, usada no biomonitoramento, pode
ser a nvel bioqumico, siolgico, morfolgico,
comportamental, etc. Toda essa sensibilidade depende
no somente do fator a ser monitorado, mas tambm
do nvel nutricional, idade do organismo, sexo,
fase de desenvolvimento, caractersticas genticas,
competio entre indivduos ou espcies, etc.; alm de
fatores ambientais como luminosidade e temperatura.
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

O mesmo deve ser considerado ao se estudar o acmulo


de certa substncia. A padronizao dos organismos
bioindicadores por isso um fator de fundamental
importncia em programas de monitoramento.
Para a escolha do organismo-teste geralmente
usam-se os seguintes critrios de seleo de
espcies: abundncia e disponibilidade; signicativa
representao ecolgica dentro das biocenoses;
cosmopolitismo da espcie; conhecimento da sua
biologia, siologia e hbitos alimentares; estabilidade
gentica e uniformidade de suas populaes; baixo
ndice de sazonalidade; sensibilidade constante e
apurada; importncia comercial; facilidade de cultivo
em laboratrio e, se possvel, a espcie deve ser nativa
para a melhor representatividade dos ecossistemas
(Rand & Petrocelli 1995).
Considerando-se a diculdade em encontrar uma
espcie com todas estas caractersticas, existem muitas
espcies padronizadas que podem ser utilizadas, sendo
extremamente importante a realizao de bioensaios
com espcies representativas do ambiente de estudo,
pois respondem melhor as condies encontradas nos
ambientes naturais onde vivem.
No entanto, no existe uma nica espcie de organismo que represente integralmente os efeitos causados
em um determinado ecossistema. Por este motivo,
recomenda-se empregar no mnimo trs espcies que
representem diferentes nveis na cadeia trca, a m
de se obter resultados mais precisos e detectar um
efeito txico especco, aumentando a probabilidade
de se obter uma resposta txica com organismos de
diferentes sensibilidades (Baun et al. 1999).
Com objetivo de identicar as diferenas na
sensibilidade a compostos txicos entre as espcies
Daphnia magna (Crustacea, Cladocera) e Danio rerio
(peixe), usados como organismos padro para teste
ecotoxicolgicos aquticos, Martins et al. (2007)
avaliou um banco de dados de testes de toxicidade
aguda contendo mais de 500 valores para D. magna e
70 para D. rerio. Para a maioria das substncias, como:
Malathion, Parathion, Metil-parathion, Cdmio,
Cloreto, 3, 4-Dicloroanilina, Aldicarb, Anilina,
Etileno Glicol, Dietanolamina e Trietanolamina e
Cloreto de Mercrio, D. magna foi mais sensvel que
D. rerio. Por outro lado, as substncias Acrolena,
Sulfato de Cobre, Lindane e Di-n-butylphthalato e
o-Cresol foram mais txicas em testes agudos com D.
rerio comparado a D. magna. Neste estudo, o autor

A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

conclui que a sensibilidade destes organismos ir


depender da substncia txica avaliada, salientando
para o fato de que no h um organismo extramente
sensvel a todas as substncias.
Testes de toxicidade aguda com peixes e danideos continuam sendo o mtodo principal de testes
de controle ambiental (Sandbacka et al. 2000). Dessa
forma, D. magna e D. rerio podem ser usados conjuntamente como um sistema de alerta no caso de contaminao aguda como despejos acidentais, despejos
de euentes industriais, contaminao aguda de pesticida, contaminao acidental ou intermitente de gua.
No Brasil, os testes ecotoxicolgicos com microcrustceos foram padronizados inicialmente com espcies exticas como Daphnia similis (ABNT 1993)
e Ceriodaphnia dbia (ABNT 2003), mas, recentemente, um protocolo de teste de toxicidade crnica
foi desenvolvido para a espcie nativa C. silvestre
(ABNT 2003). necessrio, portanto, desenvolver
mais estudos no sentido de investigar o potencial de
uso de outras espcies nativas no biomonitoramento
ecotoxicolgico.
RELAO DOSE-RESPOSTA
Os ensaios ecotoxicolgicos tm por objetivo
estabelecer as relaes dose-efeito e dose-resposta
que fundamentam todas as consideraes necessrias
para avaliao do risco. Para uma melhor compre-

365

enso da diferena entre os dois tipos de relaes,


torna-se necessrio conceituar dose, efeito e resposta.
A expresso dose se emprega para especicar a
quantidade de uma substncia qumica administrada,
a qual pode no ser idntica dose absorvida. Nas
exposies ambientais pode-se estimar a dose com
base na medio das concentraes ambientais em
funo do tempo. E a dose nos rgos e tecidos que
interessam, pode-se estimar com base na quantidade
administrada ou ingerida, ou na medida da concentrao em amostras biolgicas.
Os termos efeito e resposta, muitas vezes
podem ser usados como sinnimos para denominar
uma alterao biolgica, em um organismo ou em uma
populao em relao a uma exposio. Contudo, em
Ecotoxicologia estes termos se diferenciam, utilizando-se o termo efeito para denominar uma alterao
biolgica e o termo resposta para indicar a proporo
de uma populao que manifesta um efeito denido.
A curva dose-efeito demonstra a relao entre
a dose e a magnitude de um efeito graduado, em
um indivduo ou em uma populao. Estas curvas
podem adotar distintas formas, lineares ou no. A
curva dose-resposta representa a relao entre a dose
(ou concentrao) e a proporo da populao que
responde com um efeito mensurvel. Em geral estas
curvas so sigmides (Figura 3).
Uma forma de explicar a congurao das curvas
dose-resposta dizer que cada indivduo de uma

Figura 3. Curva dose-resposta hipottica para um euente qualquer. A concentrao de euente dada pela percentagem de diluio de amostra do
euente na soluo-teste. A linha contnua representa a resposta nas primeiras 24 horas e a linha pontilhada aps 48 horas de exposio. Os valores de
CL50(24h) e CL50(48h) podem ser estimados por simples interpolao grca.
Figure 3. Hypothetical dose-response curve for any given efuent. Concentration of the efuent results of the dilution (%) of the efuent sample in the
test solution. The continuous line illustrates response over the rst 24h and the dotted line illustrates response after 48h of exposition. CL50(24h) and
CL50(48h) can be estimated by direct graphic interpolation.

Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

366

MAGALHES, D.P. & FERRO FILHO, A.S.

populao tem uma tolerncia prpria e requer uma


determinada dose antes de responder com um efeito.
Deste modo, pode-se reconhecer uma regio inicial
em que o efeito txico ainda no se apresenta, uma
regio intermediria em que o efeito se desenvolve
rapidamente, e uma regio nal em que o efeito
diminui assintoticamente. Portanto, existe tanto uma
dose baixa qual ningum responder, quanto uma
dose alta qual todos respondero. A razo disto
deve-se variabilidade biolgica, isto , diferente
sensibilidade dos indivduos (ou animais) ao de
determinada substncia qumica.
Ao trmino de um teste de toxicidade, so obtidos
diferentes nveis de um efeito txico pr-determinado
(e.g. mortalidade para testes de toxicidade aguda),
os quais esto em funo das diferentes diluies
do agente qumico, empregadas no experimento. No
entanto, necessrio dispor de mtodos estatsticos
para determinar um nico valor, que represente o
conjunto dos dados gerados. Dessa forma, a curva
dose-resposta permite avaliar a resposta da populao
estudada a partir das concentraes, s quais 10%,
50%, 90% ou qualquer outra porcentagem da
populao reage a um determinado efeito.
Normalmente, o valor obtido num teste de toxicidade aguda a CE50 ou a CL50, que a concentrao
que causar uma resposta em 50% dos indivduos
de uma populao que foi exposta a uma substncia
qumica. O motivo da determinao da concentrao
efetiva ou letal a 50% dos organismos deve-se
menor variabilidade na estimativa deste parmetro,
caracterstico da populao estudada. Assim sendo,
aps a exposio de organismos a essa concentrao
do agente txico, espera-se que pelo menos a metade
da populao de indivduos expostos responda de
maneira quantitativamente idntica.
Nos testes de toxicidade crnica determina-se
a Concentrao de Efeito No Observado (CENO)
e a Concentrao de Efeito Observado (CEO).
Pode-se determinar tambm o Valor Crnico (VC),
que a mdia geomtrica da CENO e da CEO e a
Concentrao Percentual de Inibio (ICp), que a
concentrao que causa um percentual de inibio na
reproduo ou no desenvolvimento embrionrio e/ou
larval em um tempo especco de exposio. A CENO
seria, portanto, uma concentrao considerada segura
do agente txico ou euente txico a ser lanado
num corpo dgua, enquanto que a CL50 e a CE50 so
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

parmetros que indicam a toxicidade da substncia ou


amostra testada; quanto menor a CL50/CE50, maior a
toxicidade da substncia ou amostra.
A utilidade destes parmetros, entretanto, vem
sendo questionada por alguns autores (Kooijman 1996,
Pry et al. 2002, Jager et al. 2004, 2006). Quanto ao
conceito de CL50/CE50, os seguintes problemas podem
ser mencionados: 1) no incorporam todos os dados
do teste, somente os resultados nais (e.g. 48 ou
96h); 2) variam com o tempo de exposio, ou seja,
os valores de CL50/CE50 decrescem com o tempo
de exposio; problema que no completamente
resolvido pela padronizao do teste com um tempo
xo de exposio; 3) requer vrias concentraes
com efeitos parciais, o que torna o teste complicado
na prtica; 4) resulta geralmente de um modelo de
regresso puramente descritivo, log-logistico ou logprobabilstico (e.g. Logit ou Probit) utilizado somente
para interpolao, representando a distribuio de
sensibilidade na populao testada; a escolha destes
modelos, entretanto, arbitrria e pressupe que os
dados se ajustem bem a curva (i.e. goodness-of-t).
No existem, entretanto, justicativas biolgicas ou
toxicolgicas para a escolha deste ou daquele modelo.
Vrios exemplos podem ilustrar as limitaes dos
testes padronizados e dos mtodos estatsticos para
analisar os dados obtidos com estes protocolos. Por
exemplo, o teste agudo com Daphnia similis dura 48
h (ABNT 2004a) e com o peixe Danio rerio dura 96
h (ABNT 2004b), independentemente da substncia
ou composto utilizado. Entretanto, a CL50 geralmente
decresce com o tempo, porque leva algum tempo para
o qumico se acumular nos tecidos do organismo at
atingir uma concentrao limiar, a partir da qual o efeito
se apresenta. A toxicocintica, ou seja, a velocidade
com que a substncia absorvida, distribuda nos
tecidos e eliminada do organismo, depende tanto das
propriedades do organismo (especialmente da razo
rea de superfcie/volume) quanto das propriedades
do composto qumico (e.g. hidrofobicidade). Portanto,
faz pouco sentido xar arbitrariamente um tempo de
exposio.
Para algumas substncias, a durao do teste
padro pode ser suciente para fornecer a CL50; para
outras, entretanto, pode no ser, e isto impe severas
restries comparao de diferentes qumicos
(Jager et al. 2006). Surfactantes, por exemplo,
reagem rapidamente, mas se nenhum efeito aparecer

A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

aps algumas horas de exposio, pouco provvel


que aparecer naquela concentrao. Com o cdmio
ocorre o contrrio, a CL50 continua a cair mesmo
aps trs semanas de exposio (Kooijman 1996).
Substncias volteis, como os hidrocarbonetos
derivados do petrleo, tm um mecanismo totalmente
diferente, agem rapidamente aps poucos minutos de
exposio, devido ao efeito de narcose, porm, muitos
organismos se recuperam e, aparentemente, adquirem
resistncia aps 24 horas de exposio (Lima 2006).
Uma alternativa ao uso da CL50/CE50 seria o
uso do Tempo Letal Mdio (TL50), que seria o
tempo necessrio para matar ou imobilizar 50%
dos organismos expostos. Embora de uso restrito,
til na comparao entre toxicantes com diferentes
mecanismos de ao, dando uma idia da velocidade
de absoro da substncia e do seu efeito. Alguns
autores tm utilizado este parmetro na comparao
entre diferentes toxinas de cianobactrias (FerroFilho et al. 2000, Guo & Xie 2006), e de dinoagelados
(Wang et al. 2005), que tem efeito rpido ou retardado,
dependendo da espcie-teste, da microalga e do
mecanismo de ao de suas toxinas (Ferro-Filho et
al. 2000, Ferro-Filho et al 2008).
Com relao CENO, um problema inerente a essa
estatstica que a hiptese nula atesta que no h
efeito na concentrao aplicada; em outras palavras,
a concentrao segura. A CENO nada mais do
que um parmetro estatstico derivado de teste de
hipteses, ou seja, da comparao entre as respostas
dos tratamentos com as do controle. No entanto, um
efeito no estatisticamente signicativo no quer dizer
que no exista efeito. Variaes nos procedimentos
experimentais podem resultar em valores elevados
da CENO, o que torna o uso da CENO inapropriado
em legislao. De fato, a variabilidade nos valores da
CENO da ordem de 10-34% e, em casos extremos
aproxima-se de 100% (Crane & Newman 2000).
Apesar da OECD no recomendar o uso da CENO,
este parmetro frequentemente utilizado em
avaliao de risco.
Um alternativa CENO o uso de fatores de
segurana, que geralmente consiste em se dividir
a CL50/CE50 por mltiplos de 10 (Chapman et al.
1998), para derivar a Concentrao Prevista de Efeito
no Observado (CPENO), ou seja a concentrao
abaixo da qual um efeito indesejado provavelmente
no ocorrer (EC 2003). Na realidade, esses fatores

367

de segurana reetem a nossa ignorncia a respeito


da traduo dos resultados de testes de laboratrio
(curta durao, alta exposio, uma espcie-teste e
condies controladas) para o ambiente natural (longa
durao, baixa exposio, vrias espcies e ambiente
varivel).
Muito mais importante do que se xar fatores de
segurana arbitrrios entender a curva dose-resposta.
A forma desta curva determinada pela sensibilidade
mdia da populao exposta e pela variao na
sensibilidade dentro desta populao, sendo que a
inclinao desta curva fornece uma estimativa desta
sensibilidade (Smit et al. 2001). Portanto, o uso da
variao especca de sensibilidade dentro de uma
populao-teste pode contribuir muito mais para a
derivao de fatores de segurana, os quais permitem
a extrapolao de estimativas de toxicidade aguda
para efeitos crnicos, do que o uso de parmetros
como a CL50/CE50 e a CENO (Smit et al. 2001).
Outra alternativa aos modelos descritivos so
os modelos mecansticos desenvolvidos dentro da
Teoria do Balano Dinmico de Energia (Dynamic
Energy Budget DEB; Kooijman 2000, 2001). A
teoria DEB descreve como os organismos adquirem e
usam a energia baseados numa srie de regras simples
de organizao metablica. Dentro desta abordagem,
os organismos so tratados como sistemas dinmicos,
com balanos de massa e energia. Baseado nesta
teoria, foram desenvolvidos modelos aplicados a
ecotoxicologia (DEBtox, Kooijman & Bedaux 1996)
como alternativa ao uso da estatstica descritiva.
A teoria DEBtox integra dados de concentrao
interna do agente txico, tempo de exposio e a
biologia dos organismos, incluindo processos como
alimentao (assimilao), manuteno, crescimento
e reproduo. O pressuposto bsico da teoria DEBtox
que os toxicantes devem ser absorvidos pelo
organismo at alcanarem a concentrao (interna)
crtica para que exera um efeito.
A Concentrao de No-Efeito (No-Effect
Concentration NEC) um parmetro do modelo
DEBtox que representa a concentrao do toxicante
que no causa efeito aps uma exposio prolongada.
Aps ultrapassar a NEC o efeito comea a aparecer.
A CEx (Concentrao Efetiva a x% dos organismos)
tambm pode ser estimada por este modelo, o que
o torna bastante atraente e aplicvel aos testes de
toxicidade tradicionais.
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

368

MAGALHES, D.P. & FERRO FILHO, A.S.

No modelo DEBtox, a exposio a um agente


txico pode ser entendida como uma mudana nos
parmetros energticos, como aumento dos custos de
manuteno, diminuio da assimilao de energia,
aumento do custo energtico de produo de novos
tecidos (crescimento), aumento do custo de produo
de prole (reproduo) ou mesmo um efeito direto como
aumento do risco ao desenvolvimento do embrio (ver
Kooijman & Bedaux 1996 para uma descrio mais
detalhada). Com este modelo possvel inclusive a
anlise simultnea de endpoints como sobrevivncia,
crescimento e reproduo, utilizando um nico
experimento (Jager et al. 2004, Jager et al. 2006).
EXPERIMENTOS EM LABORATRIO VS IN
SITU
Os testes realizados in situ tendem a ser mais
realsticos do que os realizados em laboratrio, pois
avaliam em tempo real os processos dinmicos,
como sinergismo ou antagonismo, que ocorrem nos
ecossistemas aquticos, reetindo na maior ou menor
toxicidade para os diferentes organismos. Este tipo
de testes tem como vantagem a coleta contnua de
dados em uma srie de variveis fsico-qumicas
(por exemplo, oxignio dissolvido, temperatura, pH,
turbidez, etc.) que podem causar efeitos txicos no
imputveis ao agente txico, ou que podem afetar a
expresso da toxicidade.
Nesses experimentos, os organismos-teste so
expostos em gaiolas s condies do corpo de gua
receptor. Este tipo de avaliao de toxicidade tambm
conhecido como biomonitoramento ativo. A resposta
toxicolgica pode ser avaliada atravs dos efeitos
observados em intervalos regulares, ou por sistemas
(semi) automticos de medio contnua. A primeira
opo normalmente associada com critrios como
a mortalidade, crescimento e reproduo, enquanto
os dispositivos automticos so mais adequados para
avaliar uma resposta siolgica ou comportamental.
Mais adiante, falaremos destes sistemas de biomonitoramento automtico.
Estudos in situ podem ser realizados utilizando uma
nica espcie ou vrias espcies (testes multiespcies),
avaliando as interaes entre os organismos. Os
testes multiespcies tambm podem ser realizados
em laboratrio, em sistemas de microcosmos que
so constitudos de amostras do ecossistema natural
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

(gua, sedimento, plantas, invertebrados, peixes etc.)


em pequena escala (Arago & Arajo 2006).
Segundo Mount (1985) os testes com vrias
espcies seriam mais teis para assegurar a proteo
dos ecossistemas e menos teis para o manejo de lagos
e rios. O autor tambm conclui que, embora os testes de
toxicidade com uma nica espcie possam apresentar
falhas, eles continuaro sendo utilizados para ns
legais, pois fornecem informaes conclusivas e
decisivas, fato nem sempre possvel em estudos com
multiespcies, que poder ser inuenciado por uma
srie de fatores ambientais.
Os testes em campo so indicados para avaliar o
impacto de compostos novos no ambiente natural,
por exemplo, quando se trata de compostos utilizados
na agricultura, como agrotxicos (Rand 1980). Este
tipo de teste requerido principalmente quando a
avaliao de risco, feita com dados de laboratrio,
indica algum efeito adverso.
No ambiente natural, devido reduo na persistncia e biodisponibilidade, os efeitos da maioria das
substncias qumicas so menos danosos do que em
laboratrio, porm algumas se mostram realmente
mais txicas em campo do que em condies laboratoriais (Arago & Arajo 2006). Um exemplo o
antraceno, que em laboratrio no acarreta toxicidade aguda para plantas ou animais em concentraes menores que sua solubilidade em gua, mas no
ambiente, com a ao de luz ultravioleta, o antraceno
se torna 50.000 vezes mais txicos (Graney et al.
1995)
Em outros estudos, Boyle et al. (1985) e Finger
et al. (1985) compararam a sensibilidade de vrias
espcies de organismos ao uoreno, utilizando testes
em laboratrio e em campo. Cada espcie respondeu
de forma diferente ao poluente. O toplncton, o
zooplncton e a comunidade de insetos aquticos
foram mais sensveis em testes laboratoriais do que
em campo. J as espcies de peixe testadas foram
mais sensveis aos testes realizados em campo.
Tonissi (1999) estudando o reservatrio de
Salto Grande comparou resultados de mortalidade
obtidos em testes de toxicidade com amostras de
gua e sedimento em laboratrio e in situ, utilizando
como organismo-teste D. rerio. O autor observou
que em laboratrio no ocorreram mortalidades,
mas em campo, as mortalidades indicaram indcios
de toxicidade. Segundo o autor, os resultados em

A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

laboratrio indicaram claramente uma subestimao


dos reais efeitos adversos causados pelos poluentes.
Uma das hipteses para explicar a ausncia de
toxicidade em alguns ensaios em laboratrio reside nas
implicaes das manipulaes das amostras durante os
experimentos laboratoriais, no controle de variveis
como luminosidade e a aerao constante, que tornam
as reaes qumicas diferentes do ambiente natural,
e tambm pelo fato de que as amostras de guas
coletadas no campo se constituem em uma referncia
pontual do sistema, uma vez que vrias informaes
no esto sendo avaliadas (Fraccio, 2006).
Tucker & Burton (1999) armaram que os testes
laboratoriais no so apropriados para avaliao de
impactos gerados por fontes no pontuais na escala
de tempo. Neste sentido, Meletti (1997) atentou para
o fato de que as amostragens pontuais de gua no
necessariamente representam a real qualidade do
ambiente, ainda mais se o ambiente for um rio, onde
a variabilidade espacial e temporal muito intensa.
Em contrapartida, em ambientes naturais, embora os
organismos possam auxiliar na deteco dos distrbios
em longo prazo, muito difcil estabelecer a relao
causa-efeito em decorrncia das alteraes qualitativas
e quantitativas que ocorrem nos ecossistemas. Assim,
a maioria dos padres de qualidade para a proteo
da vida aqutica foi e ainda so estabelecidos com
base em estudos laboratoriais, os quais simulam o
que pode ocorrer nos ecossistemas aquticos com
razovel aproximao (Bertoletti 2000).
BIOMONITORAMENTO AUTOMTICO EM
TEMPO REAL
A avaliao da qualidade das guas permite
geralmente a obteno de resultados pontuais, que
representam apenas a situao do momento da
tomada das amostras. Para que se obtenham dados
representativos da variao temporal da qualidade
das guas em ambientes como rios, mares e lagos,
necessria uma grande quantidade de amostras,
tomadas a intervalos regulares. Isto requer implicaes
de custo e esforo logstico altos.
Como foi dito anteriormente, muitos efeitos
indiretos e subletais podem ocorrer a mdio ou longo
prazo, em diferentes intensidades, podendo causar a
reduo das populaes das espcies atingidas (Jensen
& Bro-Ramussen 1992, Cabrera et al. 1998). Os

369

testes de toxicidade crnica so bons na determinao


destes efeitos subletais, porm tem longa durao e
custos mais elevados. Estudos recentes indicam
que a avaliao rpida e de tima relao custobenefcio pode ser realizada utilizando mtodos de
biomonitoramento automtico em tempo real atravs
de respostas comportamentais de invertebrados e
peixes (Little & Finger 1990, Sheed et al. 2001,
Untersteiner et al. 2003).
Dentro da hierarquia da organizao biolgica,
o comportamento uma resposta toxicolgica que
reete o efeito de todos os nveis do organismo e representa a interao de processos siolgicos com estmulos ambientais (Grue et al. 2002). Dessa forma, o
comportamento tem sido explorado em vrios sistemas
biosensores para a deteco de alteraes ambientais
atravs da anlise de imagem em tempo real (Charoy
et al.1995, Dodson et al. 1995, Sorensen et al. 1995,
Tahedl & Hder 1999, Tahedl & Hder 2001).
A alterao no comportamento um alerta para o
tipo de dano ou estresse causado por uma substncia,
e este estresse causar a reduo ou aumento do metabolismo. Segundo Olla et al. (1980) e Schreck et al.
(1997), quando um animal exposto a uma perturbao, a primeira resposta de defesa comportamental, na maioria das vezes um comportamento de
fuga, desenvolvido para diminuir a probabilidade de
morte ou economia do gasto metablico para manter
a homeostasia siolgica.
O biomonitoramento automtico faz uso de organismos aquticos para fornecer um aviso adiantado
da presena de substncias txicas na gua. Este
conceito tem sido aplicado no monitoramento de
euentes industriais, para detectar processos de tratamento incompletos em Estaes de Tratamento de
Euentes, no auxlio a agravos ambientais devido
a derramamento txico acidental/intencional ou no
monitoramento de fontes de gua potvel utilizadas
para o abastecimento pblico de gua.
Os sistemas de advertncia utilizados tm as
seguintes caractersticas bsicas (BBE 2004):
Os organismos so mantidos em laboratrio ou em
campo, sob circunstncias controladas, e expostos,
em uma base freqente ou contnua do uxo, ao
euente ou gua que est sendo avaliada.
Parmetros siolgicos ou comportamentais
do organismo so monitorados por dispositivos
que armazenam e comparam a uma faixa de
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

370

MAGALHES, D.P. & FERRO FILHO, A.S.

comportamento normal do biosensor (espcie


sentinela que gera respostas associadas a parmetros
externos), passando a responder s circunstncias
anormais indicadas pelo organismo.
A funo do organismo biosensor , primeiramente,
detectar mudanas na toxicidade, a curto prazo, da
fonte a qual ele est sendo exposto.
Vrios grupos de organismos tm sido utilizados
como espcies sentinelas ou biosensoras em sistemas
de biomonitoramento automtico em tempo real,
como por exemplo: algas, cladceros, bivalves, peixes
e microorganismos.
Microalgas: As mudanas na composio algal, a
estrutura da populao e a distribuio so usadas por
muitos anos para extrair concluses sobre a sade de
um corpo da gua, e no que diz respeito ecologia. As
populaes de toplncton so estimadas tipicamente
medindo-se a concentrao de clorola. As medidas
so feitas com uormetros e podem ser intermitentes
ou contnuas. Esta tecnologia tem sido estendida
recentemente para avaliar substncias txicas.
A empresa alem BBE Moldaenke (Biological
Biophysical Engineering) desenvolveu um sistema, o
Algae Toximeter (mede a atividade fotossinttica
da alga), para sinalizar substncias txicas na gua
em tempo real. Nesse sistema, as algas, que so
cultivadas automaticamente e independentemente,
so adicionadas a uma amostra de gua e a
concentrao ativa de clorola medida. Se as algas
forem danicadas, por exemplo, por um herbicida
que reduza a atividade fotossinttica das algas, um
alarme induzido.
Cladceros: O comportamento da natao dos
dandeos pode ser usado para avaliar a presena
de substncias txicas na gua. O comportamento
dos indivduos observado atravs de sistemas de
cmera de vdeo. As imagens so analisadas em
linha por um computador para detectar modicao
do comportamento de natao. Um alarme soado
quando ocorrem modicaes estatisticamente
signicativas do comportamento de natao (Wolf et
al. 1998, Dodson et al. 1995, Lechelt et al. 2000).
Bivalves: A base conceitual para o sistema encontra-se no mecanismo comportamental de defesa
dos bivalves. Sob condies normais as valvas dos
bivalves permanecem abertas para permitir a respiOecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

rao e a alimentao. Sob condies adversas do


ambiente, as valvas se fecham para evitar irritao. O
comportamento de abertura e fechamento das valvas
usado como parmetro biolgico para se medir o
efeito de substncias txicas ou condies adversas.
Organismos individuais so monitorados continuamente por sensores eletromagnticos de alta freqncia
de induo ou por sensores de proximidade ligados a
um sistema de levantamento de dados para analisar
os sinais. O comportamento atual do movimento
das valvas comparado com os dados histricos do
mesmo indivduo. Se as mudanas signicativas no
comportamento forem detectadas, o sistema soar um
alarme. Alguns sistemas so programados a ativarem
a coleta automtica de uma amostra da gua, para
posterior anlise fsico-qumica (Kramer et al. 1989,
Borcherding & Jantaz 1997).
Peixes: Os sistemas utilizam parmetros comportamentais, como velocidade mdia, movimento opercular, nmero de giros etc., que so monitorados por
cmeras (Kato et al. 2004), ou parmetros eletrosiolgicos, onde os peixes so monitorados por eletrodos
(van Der Schalie et al. 2004). Ambos os sistemas
podem disparar alarme e fazer coleta automtica de
amostras de gua para a anlise qumica quando um
evento txico ocorrer. As descargas eltricas de rgos
de peixes eltricos tropicais so tambm usadas como
um sistema de advertncia adiantado para monitoramento da qualidade da gua (Pimentel-Souza &
Siqueira 1992). O sistema baseado na caracterizao do tempo do sinal eltrico emissor pelos peixes
que podem variar com a qualidade fsico-qumica da
gua. Os sinais eltricos de peixes individualmente
connados so registrados em intervalos regulares de
tempo, amplicados, e processados para detectar o
comportamento eltrico incomum.
Microorganismos: Um dos microorganismos utilizados para este tipo de biomonitoramento Euglena
gracilis, no sistema denominado ECOTOX, desenvolvido por Hader & Lebert (1985). Esses autores observaram que parmetros siolgicos como a preciso
de orientao gravitacional, mobilidade, velocidade e
formato da clula so bastante sensveis a substncias
txicas e radiao UV, tornando E. gracilis um timo
biosensor. O sistema de biomonitoramento ECOTOX
baseado em mudanas no comportamento de movimento de uma nica clula de Euglena gracilis induzidas por txicos. Este tipo de sistema compara mobi-

A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

lidade, velocidade, orientao e forma das clulas dos


organismos-teste em uma suspenso controle com
o comportamento dos mesmos organismos aps a
adio da amostra-teste de gua. Essas medies so
feitas automaticamente usando um sistema analizador
de imagem em tempo real provido de uma cmera
CCD de alta resoluo.
Na Frana, Inglaterra, Alemanha e Pases Baixos,
grande esforo foi feito na concepo e validao
de sistemas de biomonitoramento automtico de
alerta. Em Maio de 1993, estes esforos culminaram
em uma demonstrao dos resultados em uma
conferncia na Alemanha, organizada pelo Escritrio
Federal Alemo de Sade (Bundes Gesundheitsamt
- Institut fr Wasser-Boden-und Lufthygiene),
conjuntamente ao Ministrio Federal para Pesquisa
e Tecnologia (Bundesministerium fr Forschung und
Technologie) e a SETAC (Society of Environmental
Toxicology and Chemistry). Durante esta conferncia
foram apresentados os resultados obtidos com
um grande nmero de dispositivos de sistemas de
Biomonitoramento automtico em tempo real (muitos
dos quais esto comercialmente disponveis no
momento). As principais concluses de quatro anos de
estudos comparativos sobre a aplicabilidade de cerca
de 20 dispositivos de biomonitoramento automtico
em tempo real, que uma bateria de testes, com
base em diferentes espcies e respostas siolgicas,
deve ser operado simultaneamente, a m de detectar
nveis ambientais de uma vasta gama de substncias
txicas. Sistemas com base nos seguintes princpios
foram sugeridos a serem instalados em estaes para
biomonitoramento da qualidade da gua:
comportamento de natao de dandeos;
produtividade de alga;
reduo de luz em bactrias luminescentes.
A Alemanha detm os sistemas mais sosticados
e mantm uma extensa rede de estaes de biomonitoramento em tempo-real. Para monitorar a qualidade
das guas superciais foram instaladas 32 estaes de
biomonitoramento automtico na bacia do rio Reno,
acomodadas em contineres xados prximos a
margens de rios, utilizando como biosensores peixes,
algas, moluscos e microcrustceos (NWQMC 2002).
No Reino Unido, o monitoramento contnuo
baseado em respostas eletrosiolgicas de trutas em
cativeiro, onde os peixes so mantidos conectados

371

permanentemente a eletrodos. Este dispositivo


patenteado e comercializado na Europa, sendo denominado de MARK III (Gruber & Diamond 1993).
Atualmente a Marinha americana (EUA) vem
desenvolvendo e aperfeioando no U.S. Army
Center for Environmental Health Research equipamentos para biomonitoramento em tempo-real,
operando uma estao automatizada utilizando
peixes como organismos sensores para avaliar a
ecincia de uma estao de tratamento criada com
o objetivo de monitorar o processo de despoluio
de lenis freticos contaminados por resduos da
produo e armazenamento inadequado de produtos
para fabricao de armamentos em uma base Naval
(Sheed et al. 2001). Possui ainda uma verso porttil,
IABS - AC 1090 Intelligent Aquatic BioMonitoring
System (USACEHR 2004), para ser particularmente
usada em estaes de tratamento de euentes e reservatrios de abastecimento de gua. Tem sido usado
com sucesso em um dos reservatrios de gua que
abastece a cidade de Nova York.
Vrias universidades americanas tambm tm
investido na aplicao do biomonitoramento automtico em tempo real. Podemos citar a parceria entre a
Marinha Americana (U. S. Army Center for Health
Promotion and Preventive Medicine) e a Universidade de Maryland (Aquatic Pathobiology Center),
com a implantao de um sistema denominado
Sistema de Proteo Ambiental em Tempo-Real,
para monitoramento de rios na Baia de Chesapeake,
atravs do programa Environmental Monitoring for
Public Access and Communioty Tracking (EMPACT
2006). Este programa vem, inclusive, monitorando
a toxicidade causada por oraes de algas nocivas
na Baia de Chesapeake, utilizando a resposta ventilatria de peixes (van Der Schalie et al. 2001).
A Universidade do Norte do Texas desenvolve um
projeto denominado CLAM, sistema baseado no
comportamento de abertura das valvas em moluscos
bivalves (UNT 2005). Investimentos semelhantes
tm sido desenvolvidos em empresas privadas
(Biosensor), para avaliao de toxicidade em rios
ou outras perturbaes provocadas por euentes
industriais (Gruber & Diamond 1988).
O desenvolvimento de programas computacionais,
em conjunto com a evoluo dos equipamentos de
captura e registro de imagem, tanto analgica quanto
digital, possibilitou a abertura de uma nova perspectiva
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

372

MAGALHES, D.P. & FERRO FILHO, A.S.

metodolgica para a avaliao ecotoxicolgica em


tempo real. No entanto, a maioria dos mtodos de
biomonitoramento automtico empregados nas duas
ltimas dcadas permanece no estgio de laboratrio.
Apenas uns poucos foram testados em condies
de campo e realmente alguns esto disponveis
comercialmente.
No Brasil, at o momento s existem dois trabalhos
nessa rea, o estudo sobre biomonitoramento em
tempo real realizados na dcada de 80 pelo Laboratrio
de Neurobiologia do Instituto de Cincias Biolgicas
da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
juntamente com pesquisadores do Instituto Nacional
de Pesquisas Amaznicas (INPA) e um mais recente,
desenvolvido pelo Laboratrio de Avaliao e
Promoo da Sade Ambiental (LAPSA) da Fundao
Oswaldo Cruz (FIOCRUZ).
O primeiro estudo tinha como objetivo
desenvolver um sistema de controle de poluio
de gua doce por substncias especcas (metais
pesados particularmente pelo seu efeito altamente
txico), atravs do uso do peixe Gymnotiformes
sulamericanos (Pimentel-Souza & Siqueira 1992).
Devido diculdade em obter nanciamento, a
equipe desagregou-se. Em 1996, pesquisadores da
Universidade de Nancy, Frana, sem tradio nesta
pesquisa cientca, haviam solicitado patente do
processo (Thomas et al. 1996). Aps este perodo, os
pesquisadores brasileiros conseguiram nanciamento
que resultou em trabalhos para literatura cientca,
no alcanando ns comerciais.
O segundo estudo utiliza a atividade natatria
do peixe Danio rerio como resposta ao estresse
txico, atravs de um sistema analisador de imagem
(Videomex-V, Columbus Instruments, USA). Este
estudo encontra-se em fase avanada, com atividades
voltadas para laboratrio. Em 2007, Magalhes
et al. publicaram um estudo relatando o efeito do
hipoclorito de sdio na velocidade mdia de natao,
conseguindo detectar concentraes abaixo de
50% da CL50(24h) em 2 horas de exposio. Outro
estudo recente demonstrou a aplicabilidade deste
sistema de biomonitoramento na deteco de toxinas
de cianobactrias, utilizando D. rerio e Daphnia
pulex (Ferro-Filho et al. 2007). As pesquisas
continuam em andamento com o peixe D. rerio
para diferentes agentes txicos, alm de estudos
utilizando outros organismos biosensores, como
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

para deteco de alteraes comportamentais em


peixes Poecilia vivipara parasitados pelo trematdeo
Acanthocollaritrema umbilicatum e com Daphnia,
submetidas cianobactrias txicas.
Vrios estudos demonstraram a ecincia na
deteco de compostos qumicos por peixes atravs
do comportamento, salientando a velocidade de
resposta a exposies subletais. Oncorhynchus mykiss
respondeu a vrios poluentes em 40 min para 10-25%
da CL50 (Baldwin et al. 1994), em 1h para compostos
orgnicos e para concentraes menores que 50% da
CL50(96h) (Kaiser et al. 1995). Carassius auratus
respondeu com aumento da atividade natatria em
4h de exposio a carbofuranos (Saglio et al. 1996) e
Apteronoutus albitrons detectou concentraes de 44
e 69,6g/L de cianeto de potssio em 17 e 6 minutos,
respectivamente (Thomas et al. 1996).
Estes estudos evidenciam a importncia do desenvolvimento de biomonitores para melhor avaliar o
potencial efeito de contaminantes no ambiente, pois a
informao gerada rapidamente comparada a outros
testes de sensibilidade toxicolgica, tais como: a) os
agudos, que s iro determinar concentraes letais
entre 24 a 96h de exposio; b) os crnicos, que s do
respostas em longo prazo (ex. crescimento e reproduo); c) o uso de biomarcadores, que s possvel
aps um perodo relativamente longo de exposio,
entre outros. Em contraste com as anlises fsico-qumicas, os biomonitores facilitam uma indicao inespecca dos poluentes, incluindo efeitos sinrgicos e
antagnicos, no monitoramento da gua.
Os sistemas de biomonitoramento em tempo real
so uma alternativa eciente para avaliao toxicolgica, pois so capazes de detectar alteraes comportamentais induzidas por concentraes que no
causam mortalidade, mas que possam ter implicaes
ecolgicas para as populaes aquticas. um mtodo
no-invasivo, prtico, bastante sensvel, apropriado
para pesquisas ecotoxicolgicas e para uma gama de
aplicaes, tendo a vantagem de: a) ter sensibilidade
elevada comparvel com outros testes toxicolgicos;
b) ter a capacidade de monitorar de forma automtica sem causar perturbao ao organismo-teste; c)
os organismos respondem com mudanas comportamentais dentro de curtos perodos de tempo.
Contudo, de acordo com outros indicadores toxicolgicos, a extrapolao das respostas comportamentais para efeitos que podem ocorrer em popula-

A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

es naturais difcil de interpretar. Embora sejam de


difcil avaliao, estes estudos demonstram melhor a
realidade do ambiente do que os testes de exposio
aguda. Alm disso, o comportamento pode ser usado
como um indicador de toxicidade subletal vlido e
consistente, podendo ser facilmente incorporado em
protocolos para avaliar a sensibilidade dos testes de
toxicidade padro (Little & Finger 1990).
LEGISLAO BRASILEIRA REFERENTE A
ENSAIOS ECOTOXICOLGICOS
A ecotoxicologia uma rea ainda pouco explorada
no Brasil e, alm disso, nossas leis ambientais com
relao a anlises ecotoxicolgicas na avaliao de
poluio esto em estgio de construo. A Resoluo
CONAMA n 357/2005 alm de estabelecer a
classicao dos corpos de gua e diretrizes
ambientais para o seu enquadramento, tambm
regulamenta as condies e padres de lanamento de
euentes, proibindo o lanamento em nveis nocivos
ou perigosos para os seres humanos e outras formas
de vida, ou seja, os euentes lquidos industriais e
domsticos devem atender aos Padres de Emisso,
atendendo aos Padres de Qualidade, em situaes
crticas de vazo.
Esta resoluo limita uma srie de potenciais
contaminantes no ambiente e acrescenta, em seu
artigo 7, 4, que as possveis interaes entre
as substncias e a presena de contaminantes no
listados, passveis de causar danos aos seres vivos,
devero ser investigadas utilizando-se ensaios
ecotoxicolgicos, toxicolgicos, ou outros mtodos
cienticamente reconhecidos. Acrescenta ainda que
no caso de lanamento de euentes lquidos industriais
provenientes de indstrias qumicas, petroqumicas
e siderrgicas, podero ser estabelecidas exigncias
adicionais para cada caso especco, em termos de
toxicidade crnica.
A resoluo CONAMA 357/2005 uma legislao
federal e por isso permite a formulao de leis
mais restritas de acordo com a necessidade de cada
estado brasileiro, cando livres para estabelecerem
seus prprios limites de toxicidade. Muitos so os
laboratrios de instituies ociais que realizam
testes de toxicidade. Cada vez mais esta ferramenta
tem sido reconhecida como um forte instrumento de
avaliao de impacto ambiental. No Brasil o Instituto

373

Brasileiro do Meio Ambiente (IBAMA), Companhia


Estadual de Tecnologia Ambiental (CETESB-SP),
Fundao de Meio Ambiente de Santa Catarina
(FATMA-SC), Fundao Estadual de Engenharia e
Meio Ambiente (FEEMA-RJ), Fundao Estadual
de Proteo Ambiental (FEPAMRS), Instituto
Ambiental do Paran (IAPPR) e a Companhia
Pernambucana de Meio Ambiente (CPRH-PE),
recomendam a utilizao da anlise de toxicidade
atravs de testes com organismos-padronizados
internacionalmente como um forte instrumento para
avaliao do potencial de impacto das substncias
qumicas ou euentes lanados no ambiente.
Em So Paulo, os parmetros e limites a serem
obedecidos, tanto para Padro de Emisso (euentes
lquidos) como para Padro de Qualidade (corpos
hdricos receptores), constam no regulamento da Lei
997, de 31.05.76, do Estado de So Paulo, aprovado
pelo Decreto 8.468, de 08.09.76. Esta lei institui o
Sistema de Preveno e Controle da Poluio do
Meio Ambiente e probe o lanamento ou liberao de
poluentes nas guas, no ar ou no solo que os tornem,
ou possam tornar, imprprios, nocivos ou ofensivos
sade; inconvenientes ao bem estar pblico; danosos
aos materiais, fauna e ora e prejudiciais segurana, ao uso e gozo da propriedade e s atividades
normais da comunidade. A Resoluo SMA-3, de
22.02.2000, acrescenta a Lei n. 997/76, determinando
que os euentes lanados no devero causar ou
possuir potencial para causar efeitos txicos aos organismos aquticos no corpo receptor, de acordo com
as normas que xam a toxicidade permissvel. Alm
disso, os limites de toxicidade so estabelecidos para
cada euente, podendo ser reavaliados pela CETESB,
desde que a entidade responsvel pela emisso apresente estudos sobre: a toxicidade do euente a pelo
menos trs espcies de organismos aquticos, a
variabilidade da toxicidade ao longo do tempo e, a
disperso do euente no corpo receptor.
No estado do Rio de Janeiro, a Fundao Estadual
de Engenharia e Meio Ambiente (FEEMA-RJ), atravs
da norma tcnica NT-213/1990, estabelece critrios
e padres para controle da toxicidade em euentes
lquidos industriais, utilizando testes de toxicidade
com organismos aquticos vivos, de modo a proteger
os corpos dgua da ocorrncia de toxicidade aguda
ou crnica de acordo com a NT-202/1986 e DZ209/1990, como parte integrante do Sistema de
Oecol. Bras., 12 (3): 355-381, 2008

374

MAGALHES, D.P. & FERRO FILHO, A.S.

Licenciamento de Atividades Poluidoras SLAP.


O controle de euentes lquidos industriais feito
atravs do estabelecimento de padres de toxicidade
para o euente como um todo, no sendo permitido
o lanamento de euentes lquidos industriais, em
qualquer corpo receptor, com um nmero de unidades
de toxicidade superior a 8 (oito), obtido em testes de
toxicidade aguda realizados com peixes D. rerio.
O IAP-PR e a FATMA vem estudando desde o ano
de 1992 a implementao dos mtodos de testes de
toxicidade para avaliao ecotoxicolgica de euentes
com objetivo de elaborar uma proposta de lei, onde
h limites de lanamento de toxicidade para euentes
industriais. Essa proposta de limites de toxicidade
para euentes industriais teve como base a anlise dos
dados obtidos pelos rgos ambientais dos estados de
Santa Catarina (FATMA) e do Paran (IAP). A partir
disso, foi criada a Portaria n 017/02 FATMA de
18.04.2002, que estabelece os limites mximos de
toxidade aguda para euentes de diferentes origens

(Tabela II). Esses limites so estabelecidos atravs do


fator de toxicidade que representa o menor fator de
diluio que causa at 10% de efeito nos organismos.
Esta lei determina que as substncias existentes no
euente no podero causar ou possuir potencial
causador de efeitos txicos capazes de provocar alteraes no comportamento e siologia dos organismos
aquticos presentes no corpo receptor.
Enquanto ainda no se denem quais sero os
valores adotados pelos rgos de scalizao para
a toxicidade mxima permitida nos lanamentos de
euentes das indstrias no Brasil, o uso dos biotestes
pelas empresas com euente potencialmente poluidor
permite as empresas comunicar comunidade e
aos seus clientes, que a gua que est saindo de
seu processo de tratamento no apenas atende aos
parmetros de lanamento da legislao ambiental
em vigor, mas tambm no apresenta efeitos nocivos
para os corpos hdricos receptores, o que, certamente
tem efeito muito positivo de marketing ambiental.

Tabela II. Limites Mximos de Toxidade Aguda para os microcrustceos - Daphnia magna e para a bactria bioluminescente - Vibrio sheri, dos
euentes de diferentes categorias segundo a portaria 017/02 FATMA. FDd - Fator de Diluio para D. magna; FDbl - Fator de Diluio para V. sheri;
FD = 1 amostra bruta no txica.
Table II. Maximal limits for acute toxicity for the microcrustacean Daphnia magna and for the bioluminiscent bacterium Vibrio sheri in efuents of
different types according with the PORTARIA 017/02 FATMA. FDd dilution factor to D. magna; FDbl dilution factor to V. sheri; FD = 1 gross
non-toxic sample.

Origem dos Euentes


FDd

FDbl

Siderurgia

Metalurgia

Galvanoplastia
Frigorcos, Abatedouros, Laticnios,
Cerealistas, Bebidas, Fecularias,
Alimentos

16

16

Papel e Celulose

Couros, peles e produtos


similares

Categoria da atividade

Subcategoria da atividade

Metal mecnica

Alimentcia
Esgotos domsticos e/ou
hospitalares
Resduos urbanos

Qumica
Txtil

Euentes de Aterros Sanitrios

Agroqumica, Petroqumica, Produtos


qumicos no especicados ou no
classicados
Beneciamento de bras naturais e
sintticas, confeco e tinturaria

Farmacutica

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A ECOTOXICOLOGIA COMO FERRAMENTA NO BIOMONITORAMENTO DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS

CONSIDERAES FINAIS
As anlises qumicas so imprescindveis na
identicao e na quanticao de compostos
qumicos especcos no ambiente, mas aqueles no
cobertos pela tcnica analtica so negligenciados
(Fent 2003). Alm disso, a caracterizao qumica de
uma amostra ambiental, no indica o potencial txico
de uma mistura complexa aos organismos aquticos,
assim como a ausncia ou presena de toxicidade nos
despejos tratados (Zagatto et al. 1992).
No Brasil, estudos sobre a reduo de toxicidade
em estaes de tratamento de euentes lquidos,
domsticos e industriais, esto sendo iniciados e
poucas informaes esto disponveis. Embora
existam dados fsico-qumicos que avaliam a
ecincia das estaes de tratamento existentes,
nada se sabe sobre os efeitos potenciais que a carga
poluente remanescente pode causar ao corpo receptor,
em termos ecotoxicolgicos.
O controle da toxicidade de resduos lanados
no ambiente aqutico de suma importncia para
a sade do ecossistema e do homem. Os testes de
ecotoxicidade podem ser utilizados para demonstrar a
probabilidade de toxicidade de uma fonte de poluio
para a biota dentro de um corpo de gua receptor.
Baseando-se no pressuposto de que se um agente
txico para uma ou mais espcies em um sistema
de teste, provvel de ser txico para importantes
componentes do ecossistema e, portanto, capaz de
causar impacto ambiental negativo.
Uma alternativa ao uso de testes de toxicidade
com respostas como mortalidade, crescimento e
reproduo, para avaliar o impacto ambiental,
utilizar alteraes comportamentais ou siolgicas
atravs de sistemas de biomonitoramento automtico.
Atravs das anlises de indicadores comportamentais
sensveis e apropriados, no futuro, as substncias
lanadas no ambiente podero ser reduzidas a nveis
que protejam a viabilidade dos seres vivos, no
apenas seu envolvimento com a mortalidade, mas
tambm prevenindo alteraes no comportamento e
garantindo a estrutura das comunidades aquticas.
A Ecotoxicologia , portanto, uma ferramenta
que pode ser utilizada antes ou aps um evento de
poluio ter ocorrido. Antes, para investigar os efeitos
relativos da introduo de uma substncia qumica
isolada ou uma mistura de substncias. Nestes estudos

375

preliminares, diferentes tipos de testes devem ser


realizados para avaliar a toxicidade do agente txico
e garantir que este no ir causar danos biota. Aps,
para avaliar o efeito adverso produzido no ambiente
pela introduo de uma substncia isolada ou uma
mistura, considerando as interaes qumicas, fsicas
e biolgicas com os fatores abiticos do ambiente.
Os resultados provenientes dos estudos ecotoxicolgicos podem ser empregados como instrumento de
vigilncia no acompanhamento contnuo das condies dos ecossistemas de maneira a detectar impactos
acidentais ou decorrentes da implantao de empreendimentos produtivos, sendo utilizadas como prova
cienticamente aceita das alteraes ambientais
provocadas por aes criminosas. Podem servir ainda
como instrumento regulador, proibindo ou liberando
o uso de novos produtos qumicos.
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Submetido em 15/03/2008.
Aceito em 22/07/2008.

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