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LABORATORIO DE BIOQUMICA Y

BIOLOGA MOLECULAR I

PRCTICA NUMERO 5
MTODOS DE IDENTIFICACIN DE
PROTENAS, DETERMINACIN SRICA DE
PROTENAS TOTALES Y ALBUMINA,
IMPORTANCIA CLNICA.

DRA. SENOBIA ROSALIA CRUZ LUMBRERAS

OBJETIVOS
-Determinar el contenido de protenas totales
-Determinar el contenido de albmina
MATERIALES Y MTODOS.
-Reactivo de protenas totales
-Reactivo de albumina
-Suero patrn
-Solucin estndar de protenas
-solucin estndar de albumina
MATERIAL REQUERIDO
-Espectrofotmetro.
-Micropipetas para medir los volmenes indicados.
-Puntillas para las micropipetas.
-Tubos de ensayo.
- celdillas.

PROCEDIMIENTO

Tomar los 6 tubos de ensayo y rotularlos con marcador en el siguiente orden:


1 tubo protenas y blanco abreviado ser - PT y B
2 tubo protenas y estndar - abreviado ser PT y S
3 tubo protenas y problema abreviado ser PT y P
4 tubo albumina y blanco abreviado ser AL y B
5 tubo albumina y estndar abreviado ser AL y SP
6 tubo albumina y problema abreviado ser AL y P

1.- Tomar un tubo el ensayo de protenasproblema (PTP). Se separa de los


dems tubos para no confundirse, se utiliza la micropipeta y puntilla (amarilla) para
tomar el volumen indicado de la muestra.
Tomamos la muestra de sangre ya centrifugada, y obtenemos el volumen de 50
microlitros de plasma, al obtener la muestra la colocamos con la ayuda de la
micropipeta en el tubo de ensayo ya preparado anteriormente el tubo de PT-P, al
terminar se desecha la puntilla amarilla.

2.- Tomar el segundo tubo de ensayo de protenas estndar (PT-S), con la ayuda
de la micropipeta y una puntilla nueva, se va a hacer lo mismo que en el primer
paso solo que ahora se va a poner la solucin estndar de protenas totales y se
coloca en el tubo de protenas estndar (PT-S), al terminar se desecha la puntilla
amarilla.

3.- El tercer tubo de ensayo que en este caso es el de protenas- blanco (PT-B),

con la ayuda de la micropipeta y una puntilla nueva tomamos la botella que es el


reactivo de las protenas totales, se obtiene la muestra y se coloca al tubo de PTB, al terminar se desecha la puntilla amarilla.

4.- Al terminar con los tres tubos de protenas a cada uno de ellos se coloca
reactivo de protenas totales.

5.- Se agitan suavemente los tres tubos y cambiaran de color. Con ayuda del
espectrofotmetro se medir la absorbancia de la muestra, se utiliza el
espectrofotmetro y se marcan los valores necesarios en la pantalla, se coloca la
muestra y esperamos a que de lectura.

Resultados de la Determinacin cuantitativa de protenas totales:


Nivel de A1: 0.684
Nivel de A2:0.825
Clculos:
(A) Muestra/ (A) Patrn*7(Conc. patrn) = g/dL de protenas totales

Resultados:
0.825/0.684=1.206*7= 8.442
TUBOS DE ENSAYO PARA LA ALBUMINA
6.- Empezaremos con el tubo de albumina- problema (AL-P), utilizaremos la
micropipeta y una puntilla nueva, tomamos la muestra de sangre y retiramos 10
microlitros de plasma para colocarlo en el tubo de AL-P, al terminar se retira la
puntilla.

7.- Se toma el tubo albumina-estndar (AL-S) y con ayuda de la micropipeta se


coloca una solucin estndar de albumina, al tomar la muestra estndar se coloca
en el tubo de AL-S.

8.- Tomamos el ultimo tubo de ensayo albumina blanco (AL-B), se utiliza una la
botella que es el reactivo de albumina, con la ayuda de la micropipeta se obtiene
la muestra y se coloca al tubo de AL-B.

9.- Al terminar se toman los tres tubos de ensayo y se coloca a cada tubo 10
microlitros de reactivo de albumina.

Ahora pondremos los 3 tubos para medir la absorbancia de cada uno, con ayuda
del espectrofotmetro, hacemos los pasos indicados, esperamos a que la pantalla
muestre los resultados.

Resultados de la Determinacin de albumina:


Nivel de A1: 1.320
Nivel de A2: 1.900
Clculos:
(B) Muestra/ (A) Patrn*5(Conc. patrn) = g/dL de albumina en la muestra

Resultados:
1.900/1.320=1.439*5= 7.195