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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERtVAlVIBUCO

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Centro de Cincias Biolgicas

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Departamento de Biofsica e Radiobiologia

PRTICA DE FOTOCOLORIMETRIA

Prof. Milton Marcelino Filho

Recife, 2004

SUMRIO

1 - rf,rTRO])UO

2 - FIJNDA"l\1ENTOS TERICOS

.....................................................................................................

3 - O EQUIPAMENTO

3. 1 - FOTOCOLORMETRO

3.1.1-FontedeLuz

3.1.2 - Filtro

3.1.3 - Cubeta

3.1.4 - Fotoclula

3.1.5 - Miliampermetro
3.2 - ESPECTROFOTMETRO

"

4 - Ul~rr.,IZA..O DO FOTOCOLORlVIETRO

4.1 - ASPECTO EXTERNO DO FOTOCOLORMETRO


4.2 - RELAO MATEMTICA ENTRE ABSORBNCIA

2
E TRANSMIT.NCIA

4.3 - CJ>JJBRAAO DO APARELHO


5 --PltOCE][)IMENTO

PRTICO

5.1 - PREPARAO DAS SOLUES

5.2 - CONSTRUO DO ESPECTRO DE ABSORO

5.3 - CONSTRUO DA.CUR VA PADRO

5.4 - UTILIZAO DA. CURVA PADRo

6 - ClllDADOS
7 - DI:sCUSS.~O

A SEREM OBSERVADOS

DURANTE

OS EXPERIMENTOS

~..............................................................................................................

8 - B1JBLIOGRAFIA ...........................................

2
,

,...............................................................................

1 - INTRODUO

A fotocolorimetria um mtodo biofisico dJ anlise de substncias largamente utilizado em


laboratrios de anlises clnicas e em laboratrior de pesquisa, tendo como principal objetivo a
determinao da concentrao de solues.
Este mtodo baseia-se na relao existente entre a absoro de radiaes elet.romagnticas
(luz) e a concentrao da substncia em questo. Sabemos, atravs da nossa experincia cotidiana,
que quanto mais concentrada urna soluo mais escura ela se apresenta, ou seja, maior a quantidade
de luz absorvida pela soluo.

2 - FUNDAMENTOS

TERICOS

Estudos experimentais realizados por Lambert e Beer demonstraram que existe uma relao
direta E) exponencia! entre a concentrao de uma soluo e a luz por ela absorvida, ou seja, tomandose dois recipientes iguais, transparentes, contendo a mesma substncia em soluo, porm com
concentraes
diferentes (C1 e C2), sendo C2 > C1, observa-se que a intensidade deluz emergente do
recipiente 2 (12) menor do que a intensidade de luz que emerge do recipiente 1 O;).

10

intensidade de luz incidente

h e 12 = intensidade de luz emergente


d, = d,
e
C, > c,

C, e C2 = concentrao da soluo
di e d2 = percurso ptico

Fig. 1: Absoro de luz em funo da concentrao da soluo.


Lambert e Beer, tambm demonstraram que dados dois recipientes transparentes contendo a
mesma soluo em concentraes iguais (C3 = C4), sendo o recipiente 4 maior que o recipiente 3, a
intensiclade de luz emergente do recipiente 4 (14) ser menor que a intensidade de luz que emerge do
recipiente 3 (b). Assim, a luz.emergente depende tambm do percurso ptico, ou seja, distncia
percorrida pela luz atravs da soluo.

10

c, =

C.

e
d, >

o,

intensidade de luz incidente


13 e, 14 = intensidade de luz emergente
C3 e C4
concentrao da soluo
d3 e d, = percurso ptico

',< "

Fig. 2: Absoro de luz em funo do percurso ptico.

A partir dos experimentos descritos, os 'pesquisadores chegaram seguinte equao, conhecida


como Lei de Larnbert-Beer:

(eq. 1)

Esta equao relaciona a luz emergente de uma soluo (I) com a intensidade luminosa
incidente (Is), a sua concentrao (C), o percursoptco (d) e uma constante ele absoro (k), que
caracterstica

de cada substncia.

3 - O EQUIPAMIENTO

3.1 - FOTOCOLORMETRO

l ..

A figura 3 apresenta um diagrama em blocos de .um fotocolormetro.


detalhadarnente os seus diversos componentes.

Luz branca
(policromtica)

Luz rnonocrorntica

r==)

I
I

Fonte
de luz

Filtros

Em seguida so descritos

Fotoclula

Cubeta

Fig. 3: Diagrama em blocos de um fotocolormetro.

3.1.1

- Fonte de Luz

A fonte de luz deve apresentar como principais caractersticas a estabilidade na intensidade


emitida e um espectro de emisso adequado.
utilizada uma lmpada de filamento de tungstnio alimentada por uma tenso proveniente de
um circuito regulador de voltagem. Este circuito fornece uma voltagem constante independentemente
de variaes na tenso de alimentao do equipamento (oscilaes na rede de distribuio de energia
eltrica) e independentemente da temperatura ambiente. A utilizao deste circuito necessria pois a
lurninosidade emitida pelas lmpadas de filamento depende da tenso a que elas esto submetidas.
Em relao ao espectro de emisso necessrio que a lmpada emita luz branca, ou seja,
todos os comprimentos de onda do espectro de luz visvel, figura 4.

.'1,
<

3.1.2 - Filtro

Atravs de filtros pticos possvel retirar (separar) desta luz branca as diferentes cores (luz
monocromtica) que a constituem. Sendo que cada cor corresponde a uma faixa de comprimento de
onda () do espectro de radiaes eletrornaqnticas.
A banda passante tpica de um filtro de vidro de 50 nm, o que significa dizer que no
possvel selecionar faixas do espectro da luz visvel com largura inferior a 50 nm.

Luz visvel

s
Raios

Raios X
I

1 pm

1i! ~
~-1====~~==~i-~~;:~~~~~~~~~
UV

1 nm

IV

400 nm

Fig. 4: Espectro de radiao eletromagntica


(), pm
10-12 m, nm
10-9 m; ~m

Q)

"E

750 nm

Microondas

25 11m

Ondas de rdio

1 mm

em ordem crescente de seus comprimentos


6
m; mm
10-3 m.

= 10-

de onda
;.....

espectro de radiao eletromagntica inclui os raios gama, os raios x, o ultravioleta, a Iuz


visvel, o infravermelho, as microondas e as ondas de rdio. Esses nomes indicam reas do espectro,
divididas com fins didticos e prticos, entretanto o espectro contnuo e no h diferenas marcantes
entre as diversas regies. Exceto pelas diferenas nos comprimentos de ondas, que esto associadas a
diferentes nveis de energia da radiao, conforme equao 2.

h .c
(eq.2)

Onde

a energia da onda eletromagntica,

e o comprimento

a constante de Plank,

a velocidade da luz

de onda da radiao.

Estes diferentes nveis de energia acarretam diferentes caractersticas,


como o poder de
penetrao dos raios X ou o aquecimento do infravermelho. No mais apresentam propriedades que Ihes
so comuns como, por exemplo, propagao pelo espao com a mesma velocidade (300 mil km/s),
conhecida como "velocidade da luz", sofrem reflexo, refrao, difrao e interferncia.

3.1.3 - Cubeta

O recipiente onde se coloca a soluo a ser analisada, chama-se "cubeta". No caso do


fotocoiorimetro utilizado na aula prtica a cubeta de medio tem a forma de um tubo de ensaio, tendo
as cirnenss.s compatveis com o porta-cubetas (receptculo que aloja a cubeta) e confeccionada com
um vidro especial.
Como a luz que se transmite atravs da cubeta no uniformemente absorvida, ou seja, o vidro
no perfeitamente homogneo, o fabricante marca a cubeta com um risco na parte superior da cubeta
com o objetivo de padronizar a luz absorvida pelo vidro da cubeta e eliminar possveis variaes das

leituras de amostras, colocadas em diferentes cubetas. Este risco existente na cubeta deve coincidir
com a marca no porta-cubetas.

Fig. 5: Cubeta e porta-cubetas ressaltando a posio de colocao.


A forma e as dimenses da cubeta variam com a marca e o modelo do equipamento, podendo
ser quadradas, retangulares ou cilndricas. Alm do vidro tambm utilizam-se cubetas descartveis de
polistireno e acrlico. Cubetas de quartzo so utilizadas nos espectrofotrnetros (descrito no sub-itern
3.2, pg. 5), que operam na regio do ultravioleta. A figura 6 mostra alguns exemplos de cubetas ..

r-.

I ibJ
~__j~
___~_

~,Jt4
~-~~-i,-L--l_4_)__ ~

Fig. 6: Diferentes tipos de cubetas.


3.1.4 - Fotoclula

A fotoclula (ou clula fotoeltrica) um dispositivo opto-eletrnico que tem a propriedade de


converter luz em corrente eltrica. Fotoclula um termo genrico que inclui diferentes. tipos de
componentes como o fotoresistor, fotodiodo, clula fotovoitica etc., cada um deles baseado em um .
princpio fsico diferente.
As fotoclulas so dispositivos largamente utilizados em diferentes situaes do nosso cotidiano;
como exemplos podemos citar: abertura de portas automticas, acendimento automtico de iluminao
ao escurecer, controle remoto de aparelhos de TV/vdeo/ar condicionado, foco de mquinas
Iotcqrflcas, etc.
.

3.1.5 - Miliampermetro

o dispositivo que mede a corrente eltrica gerada pela fotoclula. O elemento principal deste
dispositivo um galvanmetro, o qual basicamente constitudo de um m permanente em forma de
ferradura e de uma bobina enrolada em torno de um ncleo cilndrico de ferro, chamada de bobina
mvel (figura 7). A bobiba mvel est localizada entre os plos do m e fixada axialmente, podendo
portanto, girar em torno de seu eixo.

A corrente eltrica a ser medida ( I )passa atravs da bobina criando um campo magntico, que
se ope ao campo

magntico

do m,

fazendo-a

girar at uma determinada

posio,

a qual

proporcional intensidade da corrente que circula pela bobina mvel.


Desta forma a intensidade da luz que se transmitiu pela soluo, contida na cubeta de medio,
quantificada em uma escala construda no painel do miliampermetro.
A corrente eltrica gerada pela fotoclula tambm pode ser medida por ampermetros
Neste caso, os valores so apresentados
do sistema escala/ponteiro

digitais.

por nmeros (dgitos) em um mostrador digital, difer~ntemente

do medidor analgico descrito.

ESCALA GRADUADA
PONTEIRO

IM PERMANENTE

BOBiNA MVEL

. Fig. 7: Galvanmetro

do tipo bobina mvel.

3.2 - ESPECTROFOTMETRO
Os espectrofotmetros
das radiaes

eletromagnticas

so equipamentos

aos fotocolormetros,

que utilizam alm

na regio da luz visvel, radiaes na regio do infravermelho

ultravioleta (UV). No espectrototmetro


por urn dispositivo

semelhantes

ptico chamado

a separao dos diferentes

comprimentos

de onda realizada

de grade de difrao, o qual permite a seleode

estreitas do espectro de radiaes eletromagnticas

(IV) e do

faixas bastante

(1nrn, 2nm ou 5nm) e neste caso ao invs de se

incidir, por exemplo, um feixe de luz azul atravs de uma soluo, se utilizar uma das tonalidades
azul.
A grade de difrao construda inscrevendo-se
prximas

umas das outras (500 linhas/mm),

um grande nmero de linhas paralelas,

na superfcie

de onda na grade de difrao

de uma placa de vidro. A separao

diferentes

comprimentos

baseia-se

curvam-se

em torno de cantos agudos, sendo o grau de curvatura

no princpio
funo

muito
dos

de que raios de luz

do comprimento

de onda.

Assim, em cada linha inscrita no vidro ocorre a refrao da luz e a gerao de um espectro,
um fenmeno de canceiamento

do

havendo

e somao ao longo do vidro, figura 8.

Um anteparo com uma fenda, que se desloca em frente grade, utilizado para separar a faixa
de comprimento

de onda desejada. Com as grades de difrao possvel separar faixas do espectro

com larquras de at 0,5 nm e a sua faixa de operao


regio do ultravioleta e do infravermelho.

vai de 200 a 1000 nm, incluindo

portanto, a

~~~

->-\1'-

.Fenda

---4- .

Fo~e
de luz

'--,

Espelho
cncavo

Feixe
m onocrom

tico

. Fig. 8: Grade de difrao.

espectrofotmetro
alm de ser utilizado para determinao da concentrao de solues,
tambm utilizado para identificao de substncias em soluo e para determinao do seu grau de
pureza. Arribas aplicaes baseadas no Espectro de Absoro da substncia, grfico que mostra como
a refenida substncia absorve cada um dos comprimentos de onda. A figura 9 apresenta trs exemplos;,
deste orfico.
OXIHEMOGLOBINA

DESOXIHEMOGLOBINA

ca

AZUL DE METILENO

'"'"

'"-e'"

'"e
c:

'ca

c
.o

,ca

ca

o
tn
.c

C/J

Ul

.o

.o

<{

11

IL-+--+- ~
o

'"

'"

8
....

Comprimento

ao

'"

'"

de Onda

Comprimento

ao

'"

o
-e

de Onda

o'

'"

co

o
o
o

. Comprimento de Onda

Fig. 9: Exemplos de Espectros de Absoro.

4 - UTILlZJ\O DO FOTOCOLORMETRO
4.1 - ASPECTO EXTERNO DO FOTOCOLORMETRO

o painel

frontal do fotocolormetro

a ser utilizado na aula prtica est apresentado

na figura 10,

a seguir so descritos os seus diversos elementos:


SELETOR

DE F!L TRO: serve para a escolha

do comprimento

de onda do feixe de luz que

incidir sobre a cubeta, girando este controle troca-se o filtro que interposto
cubeta. O filtro selecionado

indicado atravs de urna sinalizao luminosa ao lado do comprimento

onda correspondente. O aparelho apresentado


nrn, 58U nm, (360 nm.
cubetas possui um dispositivo

de

dotado de cinco filtros. So eles: 410 nrn, 480 nm, 520.

i=>ORT,A.-CUBETAS:local onde se coloca a cubeta com a substncia


retirada.

entre a fonte de luz e a

a ser analisada.

O porta-

mecnico interno que bloqueia o feixe de luz sempre que a cubeta for.

PORTA - CUBETAS

T%. ~

.-..
o

100 %

grosso

~
100

0%

410 nm

8 480 nm

o
o

520 nm

660 nm

+ SELETOR

DE FILTRO

580 nm

fino

Fig. 10: Painel frontal do fotocolormetro.


BOT()ES

DE CALlBRAO:

o aparelho possui trs botes de calibrao

em seu painel. So

eles: aiuste de 100% grosso, 100% fino e ajuste do 0%.


MOSTRADOR
DE LE!TURA: duas grandezas
podem ser medidas no totocolormetro:
Transrnitncia (T%) e Absorbncia (A).
A transmitncia expressa a quantidade de luz que se transmite atravs de uma soluo e
definida matematicamente como sendo a relao percentual entre o feixe de luz emergente (1) e o feixe
de luz incidente (10):

T% =

i.100%

(eq. 3)

10

A absorbncia expressa a capacidade que tem uma soluo de absorver uma certa quantidade
de enarqia do feixe de luz incidente e definida matematicamente como o logaritmo da relao entre o
feixe de luz incidente (10) e o feixe de luz emergente (1):

10

log 1

(eq.4)

Baseado nas definies matemticas constatamos que a Transmitncia uma grandeza linear e
varia ele O %, a 100 %. O que significa dizer que 50% est localizado no meio da escala e que se
dividirmos a escala em dez partes iguais cada uma delas representar 10%, conforme figura 11.

T%

Fig. 11: Mostrador de leituras do fotocolormetro, ressaltando


entre os valores de transmitncia e de absorbncia.

a correspondncia

I.,

J a escala de Absorbncia logartmica e varia de O (zero) a 00 (infinito), segundo os valores da


funo logaritmo. A representao do intervalo O a 2 corresponde praticamente a toda a escala. O que
significa que valores acima de 2 no p.odem ser lidos com a acurcia desejvel. Deve-se dar
preferncia s medies realizadas no intervalo de O a 1, assim, quando a soluo a ser analisada
apresentar uma concentrao, tal que a 'absorbncia corresponda a valores acima de 1, ela deve ser
diluda por um fator conhecido, de modo que os valores de absorbncia a serem medidos permaneam
no intervalo de medies mais acuradas.

4.2

RELAO MATEMTICA

ENTRE ABSORBNCIA

E TRANSMITNCIA

Partindo-se das definies matemticas de Absorbncia . e de Transmitncia,


aplicando-se
propriedades da funo logaritmo e substituindo-se os valores de uma equao na outra, possvel
obter-se o valor de T% a partir de A:

10

A - log"-

T%

log l , - log I

~"100

(eq. 6)

10

Aplicando-se

a funo log aos dois membros da equao 6, temos:

log T% = log

lIo

'\
-100 )

( 1)

=logllo

+logl00

+2

= logl -loglo
= -

(log 10 - log 1) + 2

=-A+2

Assim,

(eq. 5)

2 -logT%

ou

para T%

100

A=O

para T%

10

para T%

e no limite quando T% tende a O

ou seja, uma transmitncia

=>

=2

=>

nula corresponde

a uma absorbncia

infinita.

(eq. 7)

10
4.3 - CAUBRAO

DO APARELHO

fotocolormetro deve ser calibrado sempre que for ligado, devido a instabilidade dos
componentes pticos e eletrnicos, e durante o uso sempre que o seletor de filtro for acionado, devido

s diferenas de absoro de luz apresentadas pelos diferentes filtros.


A calibrao do fotocolormetro se faz nos dois pontos extremos da escala de transmitncia: 0%
e 100%. Este ajuste feito atuando-se nos trs Botes de Calibrao, apresentados no sub-item 4. 'I.
Apesar dos ajustes se referirem escala de transrrutncia, uma vez calibrado, podem ser realizadas
tanto medidas de transrnitncia como de absorbncia.
O ajuste do 100% deve ser feito de forma que o fotocolormetro desconsidere a luz absorvida
pela cubeta e pelo solvente da soluo, para tal utiliza-se o que ns chamamos de "branco"..O "branco"
constitudo por uma cubeta contendo o solvente e tudo o mais presente na soluo, exceto o soluto
cuja concentrao
deseja-se determinar. Em nossa experincia o "branco" ser constitudo por uma
cubeta contendo gua destilada.
Assim, uma vez ajustado o 100% de transmitncia com o "branco", ao colocarmos a cubeta
contendo a soluo a ser analisada, a luz absorvida devida somente ao soluto presente na soluo.
A calibrao de 0% de transmitncia feita retirando-se a cubeta do porta-cubetas e atuando-se
no boto de ajuste do 0% at que o ponteiro do galvanmetro coincida com o 0% da escala de
transrnitncia. Como dito no sub-item 4.1, ao retirar-se a cubeta nenhuma luz atinge a fotoclula, o que
deve corresponder a 0% de transmitncia.
ROTEIRO PARA CALlBRAO DO FOTOCOLORMETRO:
1) Ligar o equipamento;
2) Selecionar o comprimento de onda a ser utilizado;
3) Ajustar o 0%;
4) Colocar o "branco" no porta-cubetas do fotocolormetro;
.
5) Atuar no ajuste 100% grosso e em seguida no ajuste 100% fino, de forma que o ponteiro coincida
com a marca de 100% da escala de transmitncia;
6) Retirar a cubeta e verificar se o ponteiro retorna para a posio 0%, caso o ponteiro no fique
exatamente sobre o 0%, repetir os passos 3, 4, 5 e 6.

5 - PF~OCEDIMENTO PRTICO
O objetivo desta aula prtica a determinao da concentrao de uma soluo de anilina
utilizando o mtodo fotocolorimtrico, para tal devem ser seguidos o? passos abaixo descritos.

5.1 - PREPARAO

DAS SOLUES

Cinco solues de anilina vermelha, com diferentes concentraes devem ser preparadas a
partir de uma soluo me de concentrao 0,04% (g/100ml).
Sugere-se que seja feita uma diluio seriada com razo dois, seguindo-se o procedimento
abaixo
1) Separar cinco tubos de ensaio;
2) Colocar 5 ml de gua destilada em cada um dos cinco tubos;
3) Colocar 5 ml da soluo de anilina (0,04%) no primeiro tubo obtendo-se uma soluo com volume
final de 10 ml e concentrao 0,02%;

,....

11

4) Retirar 5 ml do primeiro tubo (0,2%) e colocar no segundo;


5) Repetir o procedimento 4 para os tubos 2, 3 e 4, no tubo 5 teremos

10ml da soluo com

concentrao de 0,00125%.

5ml
Diluio seriada

Soluo
me
0.04%

Fig. 12: Preparao das solues a partir da soluo me.

;'

0.02%

0.01 %

0.005%

0.0025% 0.00125 %

Fig. 13: Tubos de ensaio contendo as solues preparadas.

5.2 - CONSTRUO

DO ESPECTRO DE ABSORO

Neste item sero obtidos os dados para a construo do grfico Espectro de Absoro
(Absorbncia x Comprimento de Onda). Para isso escolhe-se uma das cinco solues de anilina,
anteriormente preparadas, e mede-se a absorbncia em cada um dos cinco comprimentos de onda
disponveis no fotocolormetro. Deve-se dar preferncia a uma das trs solues intermedirias, pois a
soluo mais diluda e a mais concentrada tendem a apresentar, respectivamente, valores muito baixo e
muito elevado na escala de absrbncia.
Levantados os valores, estes devem ser colocados em uma tabela e depois utilizados para
construo do grfico, em papel milimetrado, conforme modelo abaixo (figura 14).
A

(nm)

410
480
520
580
660

Fig. 14: Tabela e grfico para Espectro de Absoro.

..

12

objetivo da construo deste grfic a obteno do comprimento de onda correspondente


ao fotopico {valor de absorbncia mais elevado do Espectro de Absoro de uma substncia). Este
comprimento de onda deve ser utilizado na obteno dos dados para construo da Curva Padro.

5.3 - CONSTRUO

DA CURVA PADRO

Neste item sero obtidos os dados para construo da Curva Padro ou Curva de Calibrao,
grfico que relaciona valores de absorbncia com os respectivos valores de concentrao da soluo.
Para isso, fixa-se o comprimento de onda que apresentou maior absorbncia no Espectro de Absoro
(fotopico) e mede-se as absorbncias das cinco solues preparadas anteriormente. Levantados os
valores, estes devem ser colocados na tabela abaixo e depois serem usados para traar o grfico em
papel milirnetrado.

C (g/ 100ml)

0,00125
0,0025
0,005
0,01
0,02

L
c
Fig. 15: Tabela e grfico para Curva Padro.

A utilizao do fotopico para a construo da Curva Padro proporciona

na determinao
discusso.

de concentraes

5.4 - UTILIZAO

desconhecidas

uma maior sensibilidade


por este mtodo, como ser explicado na aula de

DA CURVA PADRO

objetivo final desta prtica a determinao da concentrao de uma soluo de anilina


vermelha (Cx), utilizando o fotoclormetro e a Curva Padro, construda anteriormente.
Para tal deve-se medir a absorbncia da soluo de concentrao desconhecida (Ax) e ler no
grfico da Curva Padro a concentrao Cx correspondente.
Alm do mtodo grfico, a determinao de concentraes desconhecidas pode tambm ser
realizada matematicamente, atravs do Fator de Calibrao, que calculado a partir da Curva Padro
(Curva de Calibrao) e corresponde ao inverso do coeficiente angular da reta de calibrao. Neste
caso, mede-se a absorbncia Ax e multiplica-se pelo Fator de Calibrao (F), obtendo-se assim a
concentrao Cx desconhecida, conforme equao 8.

(eq. 8)

..
6 - CUIDJ\DOS
1)
2)
3)
4)
5)

A SEREM OBSE~VADOS

DURANTE

13

OS EXPERIMENTOS

Calibrar o aparelho ao lig-Ia e sempre que for alterado seu filtro;


Transferir as solues para a cubeta antes de coloc-Ias no fotoclormetro;
Lembrar de enxugar a cubeta antes de introduzi-Ia no fotocolormetro;
No encostar nenhum tipo de objeto no mostrador de leituras do instrumento;
Posicionar-se adequadamente
em relao ao mostrador de leituras a fim de evitar o erro .de
paralaxe. Este erro deve-se a um desvio entre o ponteiro e a escala de medio e ocorre sempre que
o mostrador de leituras esteja esquerda ou direita do campo de viso do observador. Alguns
equipamentos
possuem um espelho associado escala de medio para ajudar no correto
posicionarnento do operador. Quando posicionado corretamente o operador no deve ver a imagem
do ponteiro projetada no espelho.

7 - DISCUSSO
Na aula de discusso sero abordados os seguintes tpicos:
1) Construo dos grficos em papel milimetrado.
2) Relao linear entre absorbncia e concentrao: A = kCd.
3) Efeito da concentrao da soluo no Espectro de Absoro.
4) Efeito da utilizao do fotopico na Curva Padro.
5) Rewesso linear.
6) Obteno do Fator de Caiibrao.

8 - BIBLIOGRAFIA
- Campbell,J.M. e Campbell J.B., Matemtica de Laboratrio, 3a ed., Livraria Roca, So Paulo, 1986.
. Carneiro Leo, M.A., Prticas de Biofsica, 2a ed., Editora Guanabara Dois, Rio de Janeiro, 1911,
- Hargreaves, A.B., Mtodos Fsicos de Anlises - Fotocolorimetria e pHmetria - Livraria Atheneu, Rio de
Janeiro, 1D79.
- Heneine, I.F., Biofsica Bsica, Livraria Atheneu, 1993.
- Lehninger, Princpios de Bioqumica, Editora Sarvier, 1995.

Agradecimentos:
Agradecemos
a colaborao, na elaborao desta apostila, das monitoras do Departamento
Biofsica e Radiobiologia: Bianca Samson Reis e Silva e Thayse Neves Santos Silva,

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