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ARS VETERINARIA, Jaboticabal, SP, Vol. 21, n 1, 091-095, 2005.

ISSN 0102-6380

EFEITO INIBITRIO DA ACUPUNTURA SOBRE A MIGRAO DE


NEUTRFILOS PARA A CAVIDADE PERITONEAL DE RATOS
(EFFECT OF ACUPUNCTURE ON THE MIGRATION OF NEUTROPHILS
TO THE PERITONEAL CAVITY)
(EFECTO INHIBITRIO DE LA ACUPUNTURA SOBRE LA MIGRACIN DE
NEUTRFILOS PARA LA CAVIDAD PERITONEAL DE RATONES)
M. V. R. SCOGNAMILLO-SZAB1*, G. H. BECHARA2, F. Q. CUNHA3
RESUMO
A acupuntura um mtodo teraputico milenar reconhecido por sua eficcia no tratamento da dor, porm seu efeito
sobre processos inflamatrios ainda pouco conhecido e maiores estudos so necessrios. Neste trabalho, investigado
o efeito da acupuntura manual sobre a migrao de neutrfilos para a cavidade peritoneal induzida por carragenina, em
ratos. Os resultados indicam que a acupuntura exerce efeito antiinflamatrio aps injeo intraperitoneal de carragenina.
Entretanto, essa ao no depende dos hormnios corticides. Mais pesquisas podero elucidar os mecanismos envolvidos
na ao antiinflamatria da acupuntura.
PALAVRAS-CHAVE: Acupuntura. Inflamao. Neutrfilos. Ratos. Carragenina.

SUMMARY
Acupuncture is an ancient and empirical therapeutic method known by its efficacy in the treatment of pain.
However, the role acupuncture plays on inflammatory process is still poorly understood. Additional research is needed. In
this work, we investigated the effect of manual acupuncture on the migration of neutrophils to the peritoneal cavity
induced by carrageenam stimuli in rats. Our results indicated that acupuncture presents an anti-inflammatory effect in
carrageenam-induced neutophil migration. Such action does not depend on endogenous corticoids. Further investigation
is needed to elucidate the mechanisms involved in the anti-inflammatory action of acupuncture.
KEY -WORDS: Acupuncture. Inflammation. Neutrophils. Rats. Carrageenam.
RESUMEN
La acupuntura es un mtodo teraputico milenaria reconocido por su eficacia en el tratamiento del dolor, sin
embargo su efecto sobre los procesos inflamatorios aun es poco conocido y ms estudios son necesarios. En este trabajo
es investigado el efecto de la acupuntura manual sobre la migracin de neutrfilos para la cavidad peritoneal inducida por
la carragenina en ratones. Los resultados indican que la acupuntura ejerce efecto antiinflamatorio despus de la inyeccin
intraperitoneal de carragenina. Sin embargo, esa accin no depende de las hormonas corticoides. Investigaciones adicionales
podrn aclarar los mecanismos envueltos en la accin antiinflamatoria de la acupuntura.
PALABRAS-CLAVE: Acupuntura. Inflamacin. Neutrfilos. Ratones. Carragenina.
1

Professora do Mestrado em Cincias Veterinrias, FAMEV - UFV, CEP 38400-902, Uberlndia - MG. szabo@asbyte.com.br
Professor Titular do Departamento de Patologia Veterinria, FCAV - Unesp - Campus de Jaboticabal - SP.
3
Professor Titular do Departamento de Farmacologia, FMRP - USP, Ribeiro Preto - SP.
2

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INTRODUO
Acupuntura a estimulao de pontos
especficos do corpo com objetivo de atingir um efeito
teraputico ou homeosttico (SCHOEN, 1993). Trata-se
de uma terapia reflexa, em que o estmulo de uma rea age
sobre outras. Para este fim, utiliza, principalmente, o
estmulo nociceptivo.
O termo acupuntura deriva dos radicais latinos
acus e pungere, que significam agulha e puncionar,
respectivamente. Faz parte de um conjunto de
conhecimentos terico-empricos, a Medicina Tradicional
Chinesa (MTC), e visa terapia e cura das enfermidades
pela aplicao de estmulos atravs da pele, com a insero
de agulhas em pontos especficos (WEN, 1989; JAGGAR,
1992).
Estudos abordando a ao da acupuntura sobre
molstias inflamatrias so escassos na literatura,
tornando importante a investigao da interferncia da
acupuntura sobre o processo inflamatrio, visto que esse
est presente no desenvolvimento de inmeros distrbios.
De modo geral, a reao do organismo a dano tecidual,
iniciado por trauma mecnico, qumico ou invaso de
microorganismos, resulta em respostas celulares e
humorais rpidas, altamente controladas e complexas
levando ativao de sistemas como o do complemento,
o fibrinoltico, o das cininas e a cascata de coagulao do
sangue. De grande importncia para reao a liberao
de variados mediadores inflamatrios. Este processo
considerado benigno se a resposta inflamatria for
regulada adequadamente, para manter clulas e
mediadores qumicos somente no local da injria tissular.
O tratamento com acupuntura reduz a resposta
inflamatria, diminuindo o volume de exsudato e a
migrao de leuccitos no modelo de injeo de
terebentina no pavilho auricular de coelhos (KENDALL,
1989b e QINGLAN, 1991b), assim como a temperatura da
pele e o permetro da articulao na artrite experimental
em ratos (ZHAO e ZHU, 1990). Corroborando com esses
dados, testes clnicos controlados comprovam a eficcia
da acupuntura no tratamento de processos inflamatrios
como artrites (TOWNSEND et al., 1999; TUMACHI, 1999).
SIN et al. (1984) suprimiram a pleurisia aguda induzida por
carragenina em ratos com estimulao eltrica do ponto
(eletroacupuntura) e observaram que diferentes formatos
de onda podem produzir efeitos diversos neste modelo. A
supresso do processo inflamatrio agudo pde ser
obtida com o uso de onda descontnua (15 e 25 ciclos/
min), onda denso-dispersa (15 ciclos/min), pulso peridico
de onda dispersa (8 Hz) e densa (50Hz). Porm o uso da
onda denso-dispersa (25 ciclos/min) e de ondas riple e
sawtooth induziu aumento do processo (SIN, 1986). Em
mulheres, o uso de acupuntura durante o trabalho de parto
leva reduo na liberao perifrica de substncia P (SP)
(ZHAO e ZHU, 1992; MA, 1992).
92

O modelo de injeo intraperitoneal de carragenina em


ratos amplamente utilizado para o estudo da inflamao
no imune, visto ser a carragenina uma substncia com
potente ao quimiottica.
Este trabalho teve como objetivo avaliar a ao da
acupuntura mediante estmulo inflamatrio intraperitoneal
em ratos.

MATERIAL E MTODOS
Animais: Cinqenta e trs ratos Wistar machos,
com peso variando entre 180 a 200g provenientes do
Biotrio Central da Faculdade de Medicina de Ribeiro
Preto (FMRP, USP) e mantidos sob condies de
temperatura (23-25oC) e ciclo claro/escuro (12:12h)
controlados, com livre acesso rao e gua. Os ratos
foram divididos nos seguintes grupos:
Para avaliao do efeito da acupuntura sobre a
migrao de neutrfilos para cavidade peritoneal:
Controle negativo: cinco ratos recebendo veculo (soluo
salina) intraperitonealmente;
Controle positivo: doze ratos recebendo irritante
(carragenina) intraperitonealmente;
Falso tratado: nove ratos recebendo irritante (carragenina)
intraperitonealmente e tratados com falsa-acupuntura;
Tratado: quatorze ratos recebendo irritante (carragenina)
intraperitonealmente e tratados com acupuntura;
Para avaliao do efeito da acupuntura sobre o
rolamento, adeso e migrao de leuccitos em vnulas
do mesentrio:
Controle positivo: trs ratos recebendo irritante
(carragenina) intraperitonealmente;
Tratado: seis ratos recebendo irritante (carragenina)
intraperitonealmente e tratados com acupuntura;
Para avaliao da interferncia dos hormnios do
crtex da adrenal sobre o efeito antiinflamatrio da
acupuntura:
Controle negativo: quatro ratos recebendo veculo
(soluo salina) por via oral e irritante (carragenina)
intraperitonealmente;
Controle positivo: quatro ratos recebendo veculo
(soluo salina) por via oral, irritante (carragenina)
intraperitonealmente e tratados com acupuntura;
Controle tratado: quatro ratos recebendo RU 486 por via
oral e irritante (carragenina) intraperitonealmente;
Tratado: quatro ratos recebendo RU 486 por via oral,
irritante (carragenina) intraperitonealmente e tratados com
acupuntura.
Induo da Peritonite: Aps anti-sepsia da pele, foi
efetuada a injeo intraperitoneal de soluo salina estril
(1mL/cav) ou carragenina (30g/mL/cav). Todos
experimentos foram realizados no perodo matutino,
compreendido entre as 8h e 11h, para evitar interferncias
circadianas na aplicao da tcnica de acupuntura (CHEN

e HE, 1989; STORCH, 2002).


Tratamentos: Os animais foram tratados com acupuntura
manual (ou falsa acupuntura) em dois tempos distintos:
10 min e 2h aps a injeo do estmulo. A descrio
detalhada dos protocolos de tratamento encontra-se no
Quadro 1.
Colheita e processamento do exsudato peritoneal: A
colheita do material foi efetuada 4h aps o estmulo
inflamatrio. O exsudato peritoneal foi colhido por lavagem
da cavidade peritoneal com 10mL de soluo PBS/EDTA.
Para a contagem global de clulas inflamatrias, foi
utilizado um contador automtico de clulas3 e o resultado
expresso como nmero de clulas x 106/cavidade. A
contagem diferencial foi feita de esfregaos preparados
em citocentrfuga4 e corados pelo mtodo May-GrnwaldGiemsa (Rosenfeld). As lminas foram examinadas em
microscpio ptico com objetiva de imerso (1000X).
Foram contadas 100 a 200 clulas, diferenciando-as em
trs tipos: neutrfilos, eosinfilos e mononucleares.
Microscopia Vital: ratos que receberam carragenina
intraperitoneal e tratados ou no com acupuntura, foram
submetidos microscopia vital 2h aps o estmulo
inflamatrio. Sob anestesia com tribromoetanol i.p. 2,5%
(10L/g ou 250mg/Kg), foi efetuada a abertura da cavidade
peritoneal, com exposio do mesentrio para observao
da microcirculao (vnulas ps-capilares) in situ. Os
animais foram mantidos sobre placa aquecida (370C)
dotada de rea transparente sobre a qual o tecido foi fixado
com auxlio de algodo. A preparao foi feita sobre o
charriot do microscpio5 e mantida mida e aquecida
com soluo salina a 370C. Foram avaliados o nmero de
leuccitos em rolamento e aderidos ao endotlio, alm do
nmero de leuccitos emigrados para o tecido perivascular
correspondente a 1000m2.
Avaliao da interferncia dos hormnios do crtex da
adrenal sobre o efeito antiinflamatrio da acupuntura:
Duas horas antes da induo da peritonite, os animais
receberam 20mg/Kg de mifepristona6 (ou RU-486, um
antagonista de receptores de corticides) diludo em metilcelulose 0,1% por via oral. Para tal, foram mantidos em
jejum nas 18 horas que precederam o experimento. A
induo da peritonite e o tratamento foram efetuados como
descrito.

RESULTADOS
No modelo de peritonite induzida por carragenina,
a acupuntura demonstrou efeito antiinflamatrio,
reduzindo significativamente a migrao de neutrfilos
ao fim da quarta hora ps-estmulo. O grupo tratado com
falsa-acupuntura no diferiu do grupo controle notratado (Figura 1).
Os resultados da anlise microscpica vital
mostraram que, duas horas aps o estmulo inflamatrio,

o rolamento e a adeso de leuccitos ao endotlio de


vnulas do mesentrio foram similares nos grupos tratado
com acupuntura e controle no-tratado. A avaliao da
emigrao de leuccitos para o tecido perivascular mostrou
uma tendncia de a acupuntura em aument-la (Figura 2).
A inibio da ao dos hormnios corticides, obtida com
a administrao prvia de mifepristone (RU-486), no
interferiu na inibio da migrao de leuccitos decorrente
do tratamento com acupuntura em ratos que receberam
carragenina intraperitoneal. Entretanto, o pr-tratamento
com RU-486 levou reduo na migrao de leuccitos
nos animais que no receberam ps-tratamento.

DISCUSSO
Testes clnicos controlados comprovam a eficcia
da acupuntura no tratamento de processos inflamatrios
como artrites (TOWNSEND et al., 1999; TUMACHI, 1999).
Porm, estudos experimentais sobre a ao da acupuntura
em processos inflamatrios so raros (SIN et al. 1984;
KENDALL, 1989b; ZHAO e ZHU, 1990 e QINGLAN, 1991b;
ZHAO e ZHU, 1992; MA, 1992). Dentre os modelos
utilizados em estudos experimentais, a induo na
migrao de neutrfilos com uso de carragenina por via
intraperitoneal modelo consagrado na investigao do
processo inflamatrio agudo, por utilizar uma substncia
com intensa ao quimiottica. Apesar de sua importncia,
no h registros na literatura cientfica da utilizao desse
modelo para a investigao da ao antiinflamatria da
acupuntura.
Os resultados obtidos em nosso estudo
demonstram uma clara ao antiinflamatria da acupuntura
sobre a migrao induzida por carragenina na cavidade
peritonal de ratos. Entretanto, sob microscopia intravital
realizada 2h aps o estmulo inflamatrio, o rolamento, a
adeso e a migrao de leuccitos em vnulas do
mesentrio no se mostrou diferente entre os grupos. Tal
resultado, aparentemente controverso, pode-se dever ao
time-course da carragenina, a qual no confere
rolamento/adeso to intensos quanto o LPS (dados no
expostos) neste mesmo perodo, ou seja, duas horas aps
o estmulo.
A partir desse dado, seguimos para investigar a
interferncia do estresse por conteno (induzido no
momento da insero da agulhas de acupuntura) sobre
essa ao antiinflamatria. sabido que o estresse capaz
de liberar corticides, hormnios capazes de reduzir a
resposta inflamatria (PEREIRA, 2002). Alm disso, o
agulhamento, um estmulo nociceptivo inespecfico
capaz, por si prprio, de desencadear a liberao de
____________________________________________________________________________
1

Coulter AcT
Cytospin 3; Shandon
3
Nikon Evlipse TE 200
4
Sigma Chemical Co.
2

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Quadro 1 - Descrio dos protocolos de tratamento com acupuntura e falsa acupuntura em ratos submetidos injeo
intraperitoneal de carragenina.

opides endgenos, neurotransmissores com ao


antilgica e, em algumas situaes, antiinflamatria.
Ademais, o fenmeno de obteno de efeito com um
estmulo inespecfico (no caso, o agulhamento) j foi
observado com uso da acupuntura em outros modelos
(ALVARENGA et al., 1998) e em testes clnicos (FILSHIE e
CUMMUNGS, 1999). Neste contexto, optamos pela
adoo de um grupo de tratamento com falsa acupuntura.
Os resultados demonstram que no h diferena
significativa na migrao de neutrfilos para cavidade
peritoneal entre os grupos tratados com falsa-acupuntura
e controle no tratado, sugerindo no haver o
envolvimento de corticides na ao antiinflamatria da
acupuntura. Para testar tal hiptese, pr-tratamos os ratos
com um antagonista para receptores de hormnios
corticoesterides (RU-486). O bloqueio da ao dos
hormnios corticoesterides no interferiu no tratamento
com acupuntura, demonstrando o no envolvimento
desses hormnios no mecanismo antiinflamatrio da
acupuntura, em nosso modelo experimental.
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No conjunto, os dados apresentados no presente


trabalho demonstram uma interferncia mensurvel e
significativa da acupuntura sobre o processo inflamatrio.
Foi demonstrada a ao antiinflamatria da acupuntura e
que seu efeito no devido ao estmulo inespecfico do
agulhamento da derme, mas sim resposta desencadeada
pela puno do ponto de acupuntura, conforme mapeado
pelos antigos chineses.
De forma geral, a pesquisa da acupuntura revestese de grande interesse, na medida em que poder traduzir
conceitos milenares e contribuir para sua incorporao na
prtica mdica. Ao mesmo tempo, a investigao sobre o
uso da acupuntura no processo inflamatrio
experimentalmente induzido abre novas perspectivas para
investigaes na rea, inclusive acerca dos mecanismos
de ao dessa tcnica.
Estudos pormenorizados sero necessrios para
entendermos o nvel da interferncia da acupuntura em
diversos tecidos e tambm para elucidar seus mecanismos
de ao. Os resultados aqui apresentados descrevem

experimentos pilotos que serviro como base para estas


investigaes futuras.
Finalmente, diante do exposto, deve-se considerar
o potencial teraputico da acupuntura em desordens
inflamatrias.
ARTIGO RECEBIDO: Janeiro/03
APROVADO: Julho/2004

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