Bact/Alert MB: Tuberculosis SP

BacT/ALERT MB
43-02494
DENOTES REVISED SECTION

Store BacT/ALERT MB culture bottles and MB/BacT Enrichment Fluid
between 15-30C. Protect from direct sunlight.
See symbol glossary at end of insert.
y
5. Manipulation of M. tuberculosis complex organisms grown in culture requires Biosafety Level 3 practices,
containment equipment, and facilities.2
6. Take care to prevent contamination during bottle preparation, collection of the patient sample, and inoculation of
the patient sample into the BacT/ALERT MB culture bottle.
7. MB/BacT Enrichment Fluid contains components which are necessary to ensure optimal growth of mycobacteria
and contains a lytic agent for blood cell lysis. This product must be added to all BacT/ALERT MB culture bottles.
8. MB/BacT Enrichment Fluid may be added up to 24 hours before or after inoculation of the bottle with the blood
specimen. If the Enrichment Fluid is added after inoculation of blood, it must be added using appropriate Biosafety
Level 3 practices.2
9. These culture bottles should be utilized only by trained laboratory personnel.
INTENDED USE
Bottle preparation
BacT/ALERT MB culture bottles with the addition of MB/BacT Enrichment Fluid, when used with the MB/BacT
Mycobacteria Detection System (non-shaking) and the BacT/ALERT Microbial Detection System (shaking), is a nonselective culture medium for the qualitative culture and recovery of mycobacteria from blood specimens.
NOTE: Take care to prevent contamination during both bottle preparation and inoculation of the patient sample.
SUMMARY AND EXPLANATION

BacT/ALERT MB culture bottles in combination with the MB/BacT Enrichment Fluid are designed for the cultivation
of Mycobacterium sp. commonly isolated from blood. The medium will support growth of other aerobic
organisms, including yeast, fungi, and bacteria. This complete system includes a lytic agent (Saponin), Sodium
polyanetholesulfonate (SPS) and other media supplements which eliminate the processing step, prevent clotting
of blood, and enhance the growth of mycobacteria. A 3 ml-5 ml volume of blood can be inoculated directly into
the culture bottle. Inoculated bottles are placed into the instrument where they are incubated (35C-37C) and
continuously monitored for microbial growth.
PRINCIPLE OF THE TEST

The MB/BacT Mycobacteria Detection System and the BacT/ALERT Microbial Detection Systems utilize a colorimetric
sensor and reflected light to monitor the presence and production of carbon dioxide (CO2) dissolved in the culture
medium.1 If microorganisms are present in the test sample, carbon dioxide is produced as the organisms metabolize
the substrates in the culture medium. When growth of the microorganisms produces CO2, the color of the gaspermeable sensor installed in the bottom of each culture bottle changes from blue-green to yellow. The lighter color
results in an increase in reflectance units as monitored by the system. Bottle reflectance is monitored and recorded
by the instrument every 10 minutes.
REAGENTS
For in vitro diagnostic use.
WARNING: To reduce the risks of accidental exposure to infectious agents, additional precautions should
be taken when using the BacT/ALERT MB culture bottle in the BacT/ALERT Microbial Detection System. It
is strongly recommended that the instrument be placed in a laboratory used for the routine culture of M.
tuberculosis. For activities involving the propagation and manipulation of M. tuberculosis or Mycobacterium
sp. grown in culture, Biosafety Level 3 Practices, containment equipment, and facilities are recommended.2
Prior to use, the BacT/ALERT MB culture bottles should be examined for evidence of damage or deterioration
(discoloration). Bottles exhibiting evidence of damage, leakage, or deterioration should be discarded. The media in
undisturbed bottles should be clear. Do not use a bottle which contains media exhibiting turbidity, a yellow sensor,
or excess gas pressure; these are signs of possible contamination. Also inspect all MB/BacT Enrichment Fluid vials for
evidence of damage or contamination. Do not use MB/BacT Enrichment Fluid vials exhibiting turbidity.
1. Label the culture bottle with patient information. The icons on the bottle label ( ,#, ) can be defined by the
user.
2. Remove plastic flip-top from culture bottle and disinfect with an alcohol swab or equivalent. Allow to air dry.
3. Enrichment Fluid is provided separately and must be added to the blood culture bottle for growth of mycobacteria.
This addition can be done within 24 hours of specimen inoculation, or if specimen inoculation is carried out at
bedside, Enrichment Fluid can be added after receiving the inoculated vials in the laboratory.
Remove the plastic flip-top from the Enrichment Fluid vial and disinfect with an alcohol swab or equivalent. Allow
to air dry.
Aseptically add 1 ml of Enrichment Fluid to each BacT/ALERT MB culture bottle.
Employ careful, aseptic technique to avoid contamination of the Enrichment Fluid and medium in the culture
bottle.
NOTE: If the Enrichment Fluid is added following inoculation of the blood specimen, then this step must be
performed in a biological safety cabinet while wearing appropriate protective clothing to comply with safety
standards set forth by CDC/NIH for Biosafety Level 3 guidelines.2 To avoid cross contamination, use a new syringe
for each bottle containing blood.
Direct draw inoculation procedure
CAUTION: Handle specimens and inoculated culture bottles as though capable of transmitting infectious
agents. All inoculated culture bottles, specimen collection needles, and blood-drawing devices should be
decontaminated according to your institutions procedures.3
1. Prior to inoculation, disinfect the BacT/ALERT MB culture bottle top with an alcohol swab or equivalent. Allow
to air dry.
2. Collect the blood using a butterfly set and the BacT/ALERT Blood Collection Adapter Cap and inoculate directly into
the BacT/ALERT MB culture bottle at the patients bedside (3-5 ml per bottle). To prevent overinoculation, monitor
the blood volume intake into the culture bottle, using the 5 ml incremental markings on the bottle label.
3. After inoculation, swab bottle tops with gauze soaked in 2% Amphyl or other mycobacteriocidal agent and
allow to air dry.
4. Transfer the inoculated culture bottle promptly to the testing laboratory.
BacT/ALERT MB
Blood collection tube inoculation procedure
BacT/ALERT MB (color-coded black) BacT/ALERT MB sterile, disposable culture bottles contain 29 ml of media and
an internal sensor that detects carbon dioxide as an indicator of microbial growth. The media formulation consists
of Middlebrook 7H9 Broth (0.47% w/v), Pancreatic Digest of Casein (0.1% w/v), Glycerol (1.0% w/v), Sodium
polyanetholesulfonate (0.025% w/v), in purified water. Bottles contain an atmosphere of CO2 in oxygen and nitrogen
under vacuum. The composition of the media may be adjusted to meet specific performance requirements.
1. Blood may also be collected in a sterile SPS or heparinized tube and inoculated into the BacT/ALERT MB culture
bottle in the laboratory. No prior processing of the specimen is required. Blood collected in EDTA is unacceptable
since EDTA inhibits mycobacterial growth even in trace amounts.
2. Disinfect the blood collection tube top and the BacT/ALERT MB culture bottle top with an alcohol swab or
equivalent. Allow the septa to air dry prior to inoculation of the blood specimen.
3. Using aseptic technique, remove 3-5 mls from the collection tube with a sterile syringe and inoculate into the
culture bottle.
4. After inoculation, swab bottle tops with gauze soaked in 2% Amphyl or other mycobacteriocidal agent and allow
to air dry.
CAUTION: BacT/ALERT MB culture bottles are incubated at 37C which potentially precludes the recovery
of mycobacteria requiring other incubation temperatures (e.g. M. marinum, M. ulcerans, M. haemophilum).
The following isolates were detected as positive in the MB/BacT instrument (non-shaking) and in the BacT/
ALERT instrument (shaking), with the BacT/ALERT MB culture bottle during internal studies; M. tuberculosis,
M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M. gordonae, and
M. simiae.
CAUTION: It is possible that certain rare, fastidious mycobacteria will not grow or may grow slowly in the
BacT/ALERT MB culture bottle growth medium. If rare, fastidious mycobacteria requiring specialized media
and culture conditions are suspected, alternative methods or extended incubation time, should be considered
for recovery.
CAUTION: On rare occasions organisms may be encountered that grow in the BacT/ALERT MB culture bottle
growth medium but do not produce sufcient carbon dioxide to be determined positive. For example, samples
from patients undergoing treatment with antimycobacterial agents may show impaired growth.
MB/BacT Enrichment Fluid

MB/BacT Enrichment Fluid vials contain a total fill volume of 5.5 ml each. MB/BacT Enrichment Fluid consists of
Bovine Serum Albumin (14.5% w/v), Sodium Chloride (2.5% w/v), Oleic Acid (0.174% w/v), Saponin (4.4% w/v),
in purified water.
Additional materials required

MB/BacT Mycobacteria Detection System or BacT/ALERT Microbial Detection System
Middlebrook 7H11 or other mycobacterial agar or egg-base medium
CO2 incubator, 37C 2C
Sterile syringes and needles
Mycobactericidal disinfectant
Blood drawing apparatus
Biological safety cabinet
Sterile, disposable gloves
Disposable gowns
Disposable masks
Appropriate biohazard waste containers for materials potentially contaminated with infectious agents
Quality Control organisms
Materials available from bioMrieux
INCUBATION AND MONITORING

CAUTION: General caution should be taken when subculturing positive culture bottles as they could have been
overlled or contain high gas-producing organisms. Positive culture bottles contents may be under increased
internal pressure. Positive culture bottles should be transiently vented before staining or disposal to release
any gas produced during microbial metabolism.
1. Load inoculated BacT/ALERT MB culture bottles into the MB/BacT Mycobacteria Detection System (non-shaking)
or the BacT/ALERT Microbial Detection System (shaking), following the instructions provided in the User Manual.
2. After BacT/ALERT MB culture bottles are loaded into the instrument, they should remain there for at least 42 days
or until designated positive.
The following procedures require the use of Biosafety Level 3 practices, containment equipment and
facilities.2
3. When the instrument indicates that a particular cell contains a positive bottle, remove the bottle according to
procedures provided in the Users Manual.
4. All bottles designated positive should be smeared and subcultured for acid-fast bacilli. In a biological safety
cabinet, mix bottle contents, disinfect the bottle stopper with an alcohol swab or equivalent, and allow to air dry.
Remove specimen for acid-fast staining and subculture using a syringe and needle. Disinfect bottle stopper with
mycobacteriocidal agent after subculture. If the acid-fast smear is positive, proceed with the Mycobacteria specific
identification procedures employed by your institution. If the smear is negative for acid-fast bacilli, but reveals
the presence of other microorganisms, a Gram stain should be performed. If both the acid-fast smear and the
Gram stain are negative, indicating a possible false positive, the bottle should be reloaded into the instrument
until growth of subculture or redesignation as positive or negative. Cultures which were initially determined false
positive and were redesignated positive should be smeared and subcultured.
5. If non-mycobacterial organisms are seen on the Gram stain, obtain another specimen for culture, if desired. The
possibility of bacterial septicemia should also be considered.
6. Negative cultures may be checked by smear and/or subcultured at some point prior to discarding as negative.
7. Do not reuse BacT/ALERT culture bottles. Dispose of inoculated BacT/ALERT culture bottles according to your
laboratory protocol. Autoclaving and/or incinerating inoculated BacT/ALERT bottles is appropriate.2
MB/BacT Mycobacteria Detection System and BacT/ALERT Microbial Detection Systems
REPORTING RESULTS
Storage instructions
Results
Report
Store BacT/ALERT MB culture bottles and MB/BacT Enrichment Fluid at room temperature (15-30C). Protect from
direct sunlight. An expiration date is printed on each bottle label. Do not use the BacT/ALERT MB culture bottles
or the Enrichment Fluid vials beyond the last day of the month indicated. Bottles must be at room temperature
before use.
Signal +, AFB Smear +

Signal +, AFB Smear , Gram Stain +
AFB positive; identification pending

No report; or specimen contaminated with non-mycobacterial organisms;
unable to determine presence/absence of AFB
No report. Subculture to determine possible false positive
INSTRUMENTS
QUALITY CONTROL
Review the appropriate BacT/ALERT Microbial Detection System User Manual before use.
SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION

Correct specimen collection is extremely important when obtaining blood culture specimens. Refer to Manual
of Clinical Microbiology3 for proper specimen collection and transport procedures. Proper skin disinfection is an
essential requirement to reduce the incidence of contamination.
bioMrieux recommends that inoculated culture bottles be placed into the BacT/ALERT Microbial Detection System
as soon as possible after collection. Inoculated culture bottles delayed in entry should be maintained at room
temperature until they can be loaded into the incubator.
BacT/ALERT MB CULTURE BOTTLE TEST PROCEDURE

Preliminary comments and precautions
1. POTENTIAL INFECTIOUS TEST SPECIMEN. Observe Universal Precautions in handling and disposing of infectious
materials. Handle specimens and inoculated cultures as though capable of transmitting infectious agents.
2. To minimize the potential of leakage during inoculation of specimen into culture bottles, use syringes with fixed
needles.
3. All inoculated culture bottles, specimen collection needles, and blood-drawing devices should be decontaminated
according to your institutions procedures.3
4. Always carry inoculated culture bottles in a rack or basket. In case of a spill or breakage, an aerosol of mycobacteria
(including M. tuberculosis) or other bacteria may be produced. Follow the safety guidelines for your institution and
the CDC/NIH.2 With the emergence of human immunodeficiency virus/acquired immunodeficiency syndrome,
mycobacteremia caused by M. tuberculosis has occurred more frequently and blood is now considered a potential
source of transmission in the laboratory.2
Signal +, AFB Smear , Gram Stain
A Certificate of Conformance is provided with each case of BacT/ALERT MB culture bottles indicating satisfactory
growth performance of M. avium ATCC 25291 and M. intracellulare ATCC 13950. Upon receipt, new lots or shipments
of BacT/ALERT MB culture bottles or reagents may be tested for quality control. Refer to CLSI/NCCLS M22-A3 for
appropriate Quality Control organisms. Follow the Bottle preparation and inoculation procedure:
1. Add 1.0 ml MB/BacT Enrichment Fluid to each BacT/ALERT MB culture bottle required for testing.
2. Inoculate representative bottles with 5.0 ml of the control organisms, diluted to 103 CFU/ml in sterile, defibrinated
sheep blood. Subculture on Middlebrook 7H11 plates to determine viability and count.
3. After obtaining anticipated results, use remaining bottles for testing clinical specimens. If expected results are not
obtained, contact bioMrieux Customer Service.
LIMITATIONS OF THE TEST

Many variables involved in mycobacterial testing cannot be practically controlled to provide total confidence that
results obtained are due solely to proper or improper performance of any culture medium or detection system.
1. Cultures obtained for primary diagnosis after initiation of therapy may produce negative results.
2. Recovery of mycobacteria in the BacT/ALERT MB culture bottles is dependent on the quality of the specimen
collected and the numbers of culturable organisms in the specimen volume. Since media is non-selective and
does not contain antibiotics, any microorganisms present may grow in the media.
3. Infrequently, BacT/ALERT MB culture bottle positives may occur due to a very high number of white blood cells
being present in the blood specimen. This will result in smear and subculture negative samples.
4. Organisms are often few in number. Collection of specimens over three consecutive days is generally
recommended.
5. Colony morphology and pigmentation should only be determined on solid media.

6. BacT/ALERT MB culture bottles with a positive signal may contain one or more species of mycobacteria and/or
other non-mycobacterial species. In mixed mycobacterial cultures in broth, a slow grower may be out-competed
by a fast grower, or the culture may have been discarded early after the rapid grower is detected. Identification of
mycobacteria present requires subculture and additional procedures to identify organisms present. The consistency
of microscopic morphology in the BacT/ALERT culture bottle has not been established.
7. Mycobacteria may vary in acid-fastness depending on strain, age of culture and other variables. All bottles with
a positive signal from the instrument should be subcultured to both mycobacterial selective and non-selective
media. Non-mycobacteria may overgrow mycobacteria present.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS MB/BacT (NON-SHAKING)

In-house seeded studies were performed in an MB/BacT (non-shaking) instrument using the following test
organisms at levels of 10 CFU/bottle and 100 CFU/bottle in human blood from a healthy adult population.
Results of BacT/ALERT MB in MB/BacT Instrument (non-shaking)

Inoculum
(CFU/bottle)
Mycobacterium
Time to Detection (days)1

BacT/ALERT MB
TB Complex
M. tuberculosis (4 strains)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 strains)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13.3 - 27.2
14.3 - 30.02
14.9 - 23.8
16.2 - 25.5
Photochromogens (Runyoun I)
M. kansasii CDC 834,
M. simiae CDC 524
100
10
10.0 - 14.6
13.1 - 39.9
Scotochromogens (Runyoun II)

M. gordonae ATCC 14470,
M. xenopi CDC 725
100
10
14.4 - 30.5
17.2 - 32.62
100
10
100
10
10.4 - 12.5
13.8 - 14.8
9.2 - 13.63
10.93 - 15.7
100
10
8.5 - 12.1
11.0 - 12.9
100
10
2.2 - 2.3
2.6 - 3.2
Nonchromogens (Runyoun III)

M. avium (2 strains)
CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 strains)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
Rapid Growers (Runyoun IV)
M. chelonae, M. fortuitum
1
Each organism was tested in triplicate and averages obtained except when noted. Values given are averages of
the replicates.
2 One of three bottles showed no growth; value given is average of two bottles.
3 One of three bottles contaminated; value given is average of two bottles.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS BacT/ALERT (SHAKING)
In-house seeded studies were performed using the following test organisms at levels of 10 CFU/bottle and 100
CFU/bottle in human blood from a healthy adult population.
Results of BacT/ALERT MB in BacT/ALERT Instrument (Shaking)

Inoculum
(CFU/bottle)
Time to Detection (days)1

BacT/ALERT MB
100
10
100
10
100
10
100
10
14.1 - 16.7
14.6 - 18.4
10.6
13.22
19.8
23.2
19.7
NG4
Photochromogens (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7.9 - 14.42
8.9 - 16.82
Scotochromogens (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17.8 - 37.2
21.3 - 43.23
100
10
100
10
7.5 - 11.5
8.5 - 11.8
8.4
9.32
M. intracellulare (4 strains)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9.0 - 11.6
9.9 - 13.1
Rapid Growers (Runyoun IV)

100
10
2.1
2.3
Mycobacterium
TB Complex
M. tuberculosis (3 strains)
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
M. tuberculosis CDC 18283
M. bovis CDC 423
39807/43-02494.indd 1-4
M. bovis CDC 8131
Nonchromogens (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Each organism was tested in triplicate and averages obtained. Values given are a range of these averages, except M.
bovis, M. tuberculosis CDC 18283, and M. avium CDC 440, where only the average is given.
One of three bottles contaminated; value given is average of two bottles.
3 One of three bottles showed no growth; value given is average of two bottles.
2
NOTE: A list of rare and fastidious organisms recovered with BacT/ALERT culture bottles is available upon request
from bioMrieux.4
REFERENCES
1. Thorpe TC, Wilson ML, Turner JE, et al: BacT/ALERT: an automated colorimetric microbial detection system. J Clin
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
2. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 5th Edition. U.S. Department of Health and
Human Services Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. Fifth Edition. US
Government Printing Office. Washington: Feb 2007.
3. Metchock B, Nolte FS, Wallace Jr RJ: Mycobacterium, in Murrary PR, (ed): Manual of Clinical Microbiology, ed 7.
Washington, DC, American Society for Microbiology, 1999, pp 399-437.
4. Rare Organism Club, bioMrieux, Inc., 2007.
AVAILABILITY
bioMrieux
BacT/ALERT MB
25/case
251011
5 vials/kit
259877
For technical assistance in the U.S.A., contact bioMrieux Customer Service at 1-800-682-2666. Outside the U.S.A.,
contact your local bioMrieux Representative.
bioMrieux, the blue logo, BacT/ALERT, and MB/BacT are used, pending, and/or registered trademarks belonging to
bioMrieux SA or one of its subsidiaries.
Amphyl is a registered trademark of Linden Corporation.
ATCC is a registered trademark of the American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
Durham, North Carolina 27704-0969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
69280 Marcy-lEtoile France
www.biomerieux.com
July 2008
BacT/ALERT MB
DANSK
43-02494
ANGIVER NDRET AFSNIT

Opbevar BacT/ALERT MB dyrkningsflasker og MB/BacT Enrichment Fluid ved 15-30 C. Beskyttes mod direkte
sollys.
Se symboloversigten sidst p indlgssedlen.
TILSIGTET BRUG
BacT/ALERT MB-dyrkningsflasker samt MB/BacT Enrichment Fluid (opformeringsvske), der anvendes sammen med
MB/BacT-systemet til detektion af mycobakterier (ikke-vuggende) og BacT/ALERT Microbial Detection System
(vuggende), er et non-selektivt dyrkningsmedie til kvalitativ dyrkning og genfinding af mycobakterier fra blodprver.
OVERSIGT OG FORKLARING
BacT/ALERT MB dyrkningsflasker sammen med MB/BacT Enrichment Fluid er designet til dyrkning af Mycobacterium
sp., som sdvanligvis isoleres fra blodet. Mediet understtter dyrkning af andre aerobe organismer, herunder gr,
svampe og bakterier. Dette komplette system indeholder et lytisk middel (Saponin), natriumpolyanetholesulfonat
(SPS) og andre supplerende medier, der eliminerer yderligere bearbejdning, forhindrer blodets koagulation og ger
vksten af mycobakterier. Der kan inokuleres en blodmngde p 3-5 ml direkte i dyrkningsflasken. Inokulerede
flasker placeres i instrumentet, hvor de inkuberes (35 C-37 C) og kontinuerligt overvges for tilstedevrelse af de
mikroorganismer.
TESTPRINCIP
MB/BacT-systemet til detektion af mycobakterier og BacT/ALERT mikrobielt detektionssystem udnytter en
kolorimetrisk sensor og reflekteret lys til at overvge tilstedevrelse og produktion af kuldioxid (CO2), som er oplst i
dyrkningsmediet.1 Hvis der er mikroorganismer i prven, produceres der kuldioxid, mens organismerne metaboliserer
substrater i dyrkningsmediet. Nr mikroorganismernes vkst producerer CO2, skifter den gas-permeable sensor i
bunden af hver dyrkningsflaske farve fra bl-grn til gul. Den lysere farve resulterer i en stigning i reflektansenheder,
som overvges af systemet. Flaskereflektans overvges og noteres af instrumentet hvert tiende minut.
REAGENSER
Til in vitro diagnostisk brug.
ADVARSEL: For at nedstte risikoen for eksponering overfor infektise stoffer ved et uheld, br der imidlertid
tages yderligere forholdsregler, nr BacT/ALERT MB-dyrkningsasken anvendes i BacT/ALERT Microbial
Detection System. Det anbefales kraftigt, at instrumentet anbringes i et laboratorium, der anvendes til
rutinedyrkning af M. tuberculosis. For aktiviteter, der omfatter formering og manipulation af M. tuberculosis
eller Mycobacterium-arter, der vokser ved dyrkning, anbefales niveau 3 praksis for biosikkerhed, udstyr og
faciliteter for inddmning.2
FORSIGTIG: Prver og inokulerede dyrkningsasker br hndteres, som var de i stand til at overfre
smittefarlige stoffer. Alle inokulerede asker, prvetagningskanyler og anordninger til blodprvetagning skal
dekontamineres iflge afdelingens procedurer.3
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT MB (sort farvekode) BacT/ALERT MB sterile dyrkningsflasker til engangsbrug indeholder 29 ml
medium samt en intern sensor, som detekterer kuldioxid som en indikator for mikrobiel vkst. Dyrkningsmediet
bestr af: Middlebrook 7H9 bouillon (0,47 % w/v), pancreasfordjet kasein (0,1 % w/v), glycerol (1,0 % w/v),
natriumpolyanetholesulfonat (0,025 % w/v) i renset vand. Flaskerne indeholder en atmosfre af CO2 i oxygen og
nitrogen under vakuum. Mediernes sammenstning kan justeres for at imdekomme specifikke krav til prstation.
FORSIGTIG: BacT/ALERT MB dyrkningsasker inkuberes ved 37 C, hvilket potentielt udelukker gennding af
mycobakterier, som krver andre inkubationstemperaturer (f.eks., M. marinum, M. ulcerans, M. haemophilum).
Flgende isolater er blevet detekteret som positive i MB/BacT instrumentet (ikke-vuggende) og i BacT/ALERT
instrumentet (vuggende) med BacT/ALERT MB dyrkningsasken ved interne studier: M. tuberculosis, M. avium,
M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M. gordonae og M. simiae.
FORSIGTIG: Det kan ske, at visse sjldne, krsne mycobakterier ikke vil vokse eller kun vil vokse langsomt
i BacT/ALERT MB dyrkningsaskemediet. Hvis der er mistanke om tilstedevrelse af sjldne, krsne
mycobakterier, som krver specielle medier eller dyrkningsbetingelser, skal der overvejes anvendelse af
alternative metoder eller forlnget inkubationstid til gennding.
FORSIGTIG: Ved sjldne lejligheder ndes organismer, som vokser i BacT/ALERT MB dyrkningsaskemediet,
men som ikke afgiver tilstrkkeligt kuldioxid til at kunne bestemmes som positiv. Prver fra patienter, som
gennemgr behandling med mycobakteriedrbende midler, kan f.eks udvise svkket vkst.

MB/BacT Enrichment Fluid htteglas med opformeringsmedium har hver en total fyldningsvolumen p 5,5 ml. MB/
BacT Enrichment Fluid bestr af serumalbumin fra kvg (14,5 % w/v), natriumklorid (2,5 % w/v), oleinsyre (0,174
% w/v), saponin (4,4 % w/v) i renset vand.
Andre ndvendige materialer

MB/BacT-systemet til detektion af mikrobakterier eller BacT/ALERT mikrobielt detektionssystem
Middlebrook 7H11 eller anden mycobakteriel agar eller ggebaseret medium
CO2 inkubator, 37 C 2 C
Sterile sprjter og kanyler
Mycobakterie drbende desinfektionsmiddel
Anordning til blodprvetagning
Biologisk sikkerhedskabinet
Sterile engangshandsker
Engangskitler
Engangsmasker
Egnede beholdere til biologisk farligt affald, der kan vre kontamineret med smitsomme stoffer
Kvalitetskontrolorganismer
Materialer, der fs fra bioMrieux

MB/BacT-systemet til detektion af mycobakterier og BacT/ALERT mikrobielt detektionssystem
Opbevaring
Opbevar BacT/ALERT MB dyrkningsflasker og MB/BacT Enrichment Fluid ved stuetemperatur (15-30 C). Beskyt mod
direkte sollys. En udlbsdato er ptrykt hver flaskeetiket. BacT/ALERT MB dyrkningsflaskerne eller Enrichment Fluid
htteglassene br ikke anvendes efter den sidste dag i den angivne mned. Flaskerne skal have stuetemperatur
inden brug.
INSTRUMENTER
Ls brugerhndbogen til BacT/ALERT mikrobielt detektionssystem inden brug.
p
5. Manipulation af komplekse M. tuberculosis-organismer, udviklet ved dyrkning, krver biosikkerhedsniveau 3
praksis, inddmningsudstyr og faciliteter.2
6. Srg for at undg kontaminering under flaskeforberedelse, indsamling af patientprven og inokulation af
patientprven i BacT/ALERT MB dyrkningsflasken.
7. MB/BacT Enrichment Fluid indeholder komponenter, som er ndvendige for at sikre optimal vkst for
mycobakterier, og indeholder et lytisk middel til lysis af blodceller. Dette produkt skal tilsttes i alle BacT/ALERT
MB dyrkningsflasker.
8. MB/BacT Enrichment Fluid kan tilsttes indtil 24 fr inokulationen eller efter inokulation af flasken med
blodprven. Hvis opformeringsvsken tilsttes efter inokulation af blod, skal den tilsttes med brug af
sikkerhedsniveau 3 praksis.2
9. Disse dyrkningsflasker m kun anvendes af uddannet laboratoriepersonale.
Flaskeforberedelse
Bemrk: Srg for at undg kontaminering under flaskeforberedelse og inokulation af patientprven.
Inden anvendelse skal BacT/ALERT MB dyrkningsflasker undersges for tegn p beskadigelse eller forringelse
(misfarvning). Flasker, som udviser tegn p beskadigelse, lkage eller forringelse, skal kasseres. Mediet i uforstyrrede
flasker skal vre klart. Undlad at benytte flasker, som er uklare, har for kraftigt gastryk eller hvis sensor er gul, da dette
er tegn p mulig kontaminering. Undersg ogs alle MB/BacT Enrichment Fluid i htteglas med opformeringsvske
inden anvendelse for tegn p beskadigelse eller kontaminering. Undlad at benytte htteglas med MB/BacT
Enrichment Fluid, der er uklare.
1. Mrk dyrkningsflasken med patientoplysninger. Ikonerne p flaskeetiketten ( ,#, ) kan defineres af brugeren.
2. Tag plastiksnaphtten af dyrkningsflasken, og desinficer med en spritserviet eller lignende. Lad det lufttrre.
3. MB/BacT Enrichment Fluid leveres separat og skal tilsttes bloddyrkningsflasken ved dyrkning af mycobakterier.
Denne kan tilsttes indtil 24 timer efter inokulation af prven, eller hvis prveinokulationen finder sted ved
patienten, kan opformeringsvsken tilsttes, nr de inokulerede flasker er modtaget p laboratoriet.
Tag plastiksnaphtten af htteglasset med opformeringsvske, og desinficer med en spritserviet eller lignende.
Lad det lufttrre.
Tilst p 1 ml opformeringsvske med aseptisk teknik til hver BacT/ALERT MB dyrkningsflaske.
Srg for at vre forsigtig, og benyt aseptisk teknik for at undg kontaminering af opformeringsvsken og mediet
i dyrkningsflasken.
BEMRK: Hvis opformeringsvsken tilsttes efter inokulation af blodprven, skal dette trin udfres i et biologisk
sikkerhedskabinet med brug af passende beskyttende bekldning for at overholde de sikkerhedsstandarder, der
er fastlagt af CDC/NIH for niveau 3 biosikkerhedsretningslinier.2 Brug en ny kanyle til hver enkelt flaske med blod
for at undg krydskontaminering.
Procedure for inokulation ved direkte udtagning

1. Inden inokulationen skal plastik toppen af BacT/ALERT MB dyrkningsflasken desinficeres med en spritserviet eller
lignende. Lad det lufttrre.
2. Opsaml blodet ved brug af et sommerfuglest og BacT/ALERT-blodopsamlingsadapterhtte, og inokuler
direkte i BacT/ALERT MB dyrkningsflasken ved patienten (3-5 ml pr. flaske). For at forhindre overinokulation skal
blodvolumenindtaget i dyrkningsflasken overvges via 5 ml-intervalmrkerne p flaskens etiket.
3. Efter inokulationen, tr flasketoppen af med gaze, som er gennemvdet med 2 % Amphyl eller andet
mycobakteriedrbende middel, og lad den luftrre.
4. Overfr straks den inokulerede dyrkningsflaske til prvelaboratoriet.
Procedure for inokulation ved brug af blodprveglas

1. Blodprvetagning kan ogs ske ved brug af et sterilt SPS eller hepariniseret glas, hvorefter det inokuleres i
BacT/ALERT MB dyrkningsflasken i laboratoriet. Der krves ingen forudgende behandling af prven. Blod, der
opsamles i EDTA, er uacceptabelt, da selv spor af EDTA hmmer den mycobakterielle vkst.
2. Desinficer toppen af blodprveglasset og toppen af BacT/ALERT MB dyrkningsflasken med en spritserviet eller
lignende. Lad septaet trre, fr blodprven inokuleres.
3. Brug en aseptisk teknik til at fjerne 3-5 ml fra prveglasset med en steril kanyle, og inokuler det i
dyrkningsglasset.
4. Efter inokulationen, tr flasketoppen af med gaze, som er gennemvdet med 2 % Amphyl eller andet
mycobakteriedrbende middel, og lad den luftrre.
INKUBATION OG MONITORERING
FORSIGTIG: Der skal udvises generel forsigtighed ved kontroludsning af positive dyrkningsasker, da de kan
vre overfyldte eller indeholde organismer, der producerer store mngder gas. Der kan vre forhjet indre
tryk i positive dyrkningsasker. Flasker med positive dyrkninger skal udluftes kortvarigt inden farvning eller
kassation, s eventuel gas, der er dannet under mikrobiel metabolisme, kan slippe ud.
1. Indst inokulerede BacT/ALERT MB dyrkningsflasker i MB/BacT-systemet til detektion af mycobakterier (ikkevuggende) eller BacT/ALERT-mikrobielt detektionssystem (vuggende), som angivet i vejledningerne i den behrige
brugerhndbog.
2. Efter at BacT/ALERT MB-dyrkningsflaskerne er indsat i instrumentet, skal de forblive dr i mindst 42 dage, eller
indtil de bliver bestemt positive.
Flgende procedurer krver brug af biosikkerhedsniveau 3 praksis, inddmningsudstyr og faciliteter.2
3. Nr instrumentet angiver, at en bestemt celle indeholder en positiv flaske, fjernes flasken i henhold til procedurerne,
der er beskrevet i brugerhndbogen.
4. Alle flasker, der bliver bestemt positive, skal udstryges og kontroludss for syrefaste bakterier. Under anvendelse
af et biologisk sikkerhedskabinet, blandes flaskeindholdet, flaskeproppen desinficeres med en spritsvamp eller
tilsvarende og lufttrrer. Fjern prve til syrefast farvning og kontroludsning ved brug af en sprjte og en kanyle.
Desinficr flaskeproppen med et mycobakteriedrbende middel efter kontroludsning. Hvis den syrefaste
udstrygning er positiv, fortsttes med de specifikke identifikationsprocedurer for mycobakterier, som anvendes af
din institution. Hvis den koncentrerede udstrygning er negativ for syrefaste bakterier, men viser tilstedevrelsen af
andre mikroorganismer, skal en gram-farvning foretages. Hvis bde den syrefaste udstrygning og gram-farvningen
er negative, og dermed indikerer et mulig falsk positivt resultat, skal flasken sttes tilbage i systemet igen, indtil
vkst ses p udsningen, eller flasken igen bestemmes positiv eller negativ. Dyrkninger, som oprindeligt blev
bestemt falskt positive og derefter igen blev bestemt positive, br udstryges og udss.
5. Hvis der observeres ikke-mycobakterielle organismer p gram-farvningen, skal der indhentes en anden prve til
dyrkning, hvis det nskes. Muligheden for bakteriel septikmi skal ogs overvejes.
6. Negative dyrkninger kan kontrolleres ved udstrygning og/eller udses, inden de frasorteres som negative.
7. BacT/ALERT-dyrkningsasker m ikke genbruges. Inokulerede BacT/ALERT-dyrkningsflasker skal bortskaffes i
henhold til laboratoriets protokol. Det er relevant at autoklavere og/eller forbrnde inokulerede BacT/ALERTflasker.2
RAPPORTRESULTATER
Resultater
Rapport
Signal +, AFB udstrygning +

Signal +, AFB udstrygning , Gram-farvning +
AFB positiv; identifikation afventes

Ingen rapport; eller prven kontamineret med ikke-mycobakterielle
organismer; ude af stand til at bestemme tilstedevrelse/fravr af
AFB
Ingen rapport. Mulig falsk positiv bestemmes ved kontroludsning
PRVEINDSAMLING OG FORBEREDELSE
Korrekt prvetagning er yderst vigtig, nr der tages prver som skal anvendes til bloddyrkning. Se Manual of Clinical
Microbiology3 for de korrekte procedurer for prvetagning og transport. Korrekt desinficering af huden er et vigtigt
krav for at reducere kontamineringsfrekvensen.
bioMrieux anbefaler, at inokulerede flasker placeres i BacT/ALERT mikrobielt detektionssystem hurtigst muligt efter
prvetagningen. Inokulerede dyrkningsflasker, hvis indfring er forsinket, skal opbevares ved stuetemperatur, indtil
de kan sttes i inkubatoren.
TESTPROCEDURE FOR BacT/ALERT MB DYRKNINGSFLASKE

Indledende bemrkninger og forholdsregler
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1. POTENTIEL
SMITTEFARLIG1-4
TESTPRVE. Iagttag almindelige forholdsregler ved hndtering og bortskaffelse
af smittefarlige materialer. Prver og inokulerede dyrkninger br hndteres, som var de i stand til at overfre
smittefarlige stoffer.
2. For at minimere risikoen for lkage under inokulering af prvemateriale til dyrkningsflaskerne, skal der benyttes
kanyler med fastmonterede nle.
3. Alle inokulerede flasker, prvetagningskanyler og anordninger til blodprvetagning skal dekontamineres iflge
afdelingens procedurer.3
4. Inokulerede dyrkningsflasker skal altid bres i et stativ eller en kurv. I tilflde af spild eller brud, kan
der dannes aerosol af mycobakterier (herunder M. tuberculosis) eller andre bakterier. Flg institutionens
sikkerhedsretningslinjer og CDC/NIH.2 P grund af udbredelsen af human immundefekt virus/erhvervet
immundefektsyndrom forekommer mycobakterimi forrsaget af M. tuberculosis hyppigere, og blod betragtes
nu som en potentiel smittekilde i laboratorier.2
Signal +, AFB udstrygning , Gram-farvning
KVALITETSKONTROL
Et Certificate of Conformance (overensstemmelsescertifikat), som angiver at vkstprstationen er tilfredsstillende
for M. avium ATCC 25291 og M. intracellulare 13950, er vedlagt hver kasse BacT/ALERT MB dyrkningsflasker.
Nye partier eller leveringer af BacT/ALERT MB-dyrkningsflasker eller -reagenser kan kvalitetskontrolleres efter
modtagelsen. Se CLSI/NCCLS M22-A3 for oplysninger om relevante kvalitetskontrolorganismer. Flg proceduren for
flaskeforberedelse og inokulation:
1. Tilst 1,0 ml MB/BacT Enrichment Fluid til hver BacT/ALERT MB-dyrkningsflaske, som krves til testning.
2. Inokuler de reprsentative flasker med 5,0 ml kontrolorganismer, der er oplst til 103 CFU/ml i sterilt, defibrineret
freblod. Udfr kontroludsning p Middlebrook 7H11-plader for at bestemme levedygtighed og antal.
3. Efter opnelse af forventede resultater kan de resterende flasker anvendes til testning af kliniske prver. Hvis
forventede resultater ikke opns, kontakt bioMrieux kundeservice.
LITTERATURHENVISNINGER
TESTBEGRNSNINGER
Mange variabler, der er involverede i mycobakteriel testning, kan ikke praktisk kontrolleres, s der kan opns fuld tillid
til, at de opnede resultater udelukkende er opstet pga. korrekt eller ukorrekt funktion af t af dyrkningsmedierne
eller detektionssystemet.
1. Efter pbegyndelsen af behandling kan dyrkninger, som er indhentet med henblik p primr diagnose, give
negative resultater.
2. Genfinding af mycobakterier i BacT/ALERT MB-dyrkningsflaskerne er afhngig af kvaliteten af den indhentede
prve, antallet af dyrkbare organismer i prvevolumen. Da mediet er non-selektivt og ikke indeholder antibiotika,
vil eventuelle tilstedevrende mikroorganismer muligvis vokse i mediet.
3. En sjlden gang kan et positivt resultat i en BacT/ALERT MB-dyrkningsflaske opst pga. et meget hjt antal hvide
blodlegemer i blodprven. Dette vil resultere i negative udstrygningsprparater og udsninger.
4. Antallet af organismer er ofte lavt. Det anbefales generelt at tage prver over tre sammenhngende dage.
5. Kolonimorfologi og pigmentering m ikke kun bestemmes p fast medie.
6. BacT/ALERT MB-dyrkningsflasker, som er blevet tilkendegivet som positiv, kan indeholde n eller flere mycobakterier
og/eller ikke-mycobakterielle arter. I blandede dyrkninger med mycobakteriekulturer i bouillon kan en langsomt
voksende bakterie blive udkonkurreret af en hurtigt voksende bakterie, eller dyrkningen kan vre blevet bortkastet
fr tid, efter at den hurtigt voksende bakterie er blevet detekteret. Identifikation af tilstedevrende mycobakterier
krver udsning og yderligere procedurer for at identificere tilstedevrende organismer. Plideligheden af
mikroskopisk morfologi i BacT/ALERT-dyrkningsflasken er ikke blevet fastslet.
7. Mycobakterier kan varierer i syrefasthed afhngig af stamme, dyrkningens alder og andre variabler. Alle flasker,
som er blevet tilkendegivet som positive af systemet, skal udss p bde mycobakterielt selektive og ikke-selektive
medier. Ikke-mycobakterielle arter kan vokse for strkt i forhold til tilstedevrende mycobakterier.
FUNKTIONSKARAKTERISTIKA MB/BacT (IKKE-VUGGENDE)

In-house undersgelser med udsninger blev udfrt i et MB/BacT-system (ikke-vuggende) ved brug af
flgende testorganismer ved niveauer p 10 CFU/flaske og 100 CFU/flaske med humant blod fra en rask
voksenpopulation.
Resultater for BacT/ALERT MB i MB/BacT-system (ikke-vuggende)

Inokulum
(CFU/aske)
Mycobacterium
Detektionstid (dage)1
BacT/ALERT MB
TB kompleks
M. tuberculosis (4 stammer)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 stammer)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 - 27,2
14,3 - 30,02
14,9 - 23,8
16,2 - 25,5
Fotokromogene (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 - 14,6
13,1 - 39,9
Scotokromogene (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 - 30,5
17,2 - 32,62
100
10
100
10
10,4 - 12,5
13,8 - 14,8
9,2 - 13,63
10,93 - 15,7
100
10
8,5 - 12,1
11,0 - 12,9
100
10
2,2 - 2,3
2,6 - 3,2
Ikke-pigmenterede (Runyoun III)

M. avium (2 stammer)
CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 stammer)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
Hurtigt voksende bakterier (Runyoun IV)
1
Hver organisme blev testet tre gange, og gennemsnittet blev noteret, undtaget hvor angivet. De viste vrdier er
gennemsnitsvrdier for replikaterne.
Den ene af tre flasker viste ingen vkst. Den opgivne vrdi er et gennemsnit af to flasker.
3 Den ene af tre flasker var kontamineret. Den opgivne vrdi er et gennemsnit af to flasker.
2
FUNKTIONSKARAKTERISTIKA BacT/ALERT (VUGGENDE)
In-house undersgelser med udsninger blev udfrt med brug af flgende testorganismer ved niveauer p 10
CFU/flaske og 100 CFU/flaske med humant blod fra en rask voksenpopulation.
Resultater for BacT/ALERT MB i BacT/ALERT-system (vuggende)

Inokulum
(CFU/aske)
Detektionstid (dage)1
BacT/ALERT MB
100
10
100
10
100
10
100
10
14,1 - 16,7
14,6 - 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Fotokromogene (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 - 14,42
8,9 - 16,82
Scotokromogene (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 - 37,2
21,3 - 43,23
100
10
100
10
7,5 - 11,5
8,5 - 11,8
8,4
9,32
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 - 11,6
9,9 - 13,1
Hurtigt voksende bakterier (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
Mycobacterium
TB kompleks
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
M. bovis CDC 423
M. bovis CDC 8131
Ikke pigmenterede (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Hver organisme blev testet tre gange, og gennemsnittet blev noteret. De viste vrdier er gennemsnitsomrder,
undtagen M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283, og M. avium CDC 440, hvor kun gennemsnittet er angivet.
2 Den ene af tre flasker var kontamineret. Den opgivne vrdi er et gennemsnit af to flasker.
3 Den ene af tre flasker viste ingen vkst. Den opgivne vrdi er et gennemsnit af to flasker.
BEMRK: Ved henvendelse til bioMrieux kan der rekvireres en liste over sjldne og krsne organismer, der er
genfundet med BacT/ALERT-dyrkningsflasker.4
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
BESTILLING
bioMrieux
BacT/ALERT MB
25/kasse
251011
5 htteglas/st
259877
For teknisk assistance i USA kontaktes til bioMrieux kundeservice p 1-800-682-2666. Uden for USA kontaktes den
lokale reprsentant fra bioMrieux.
bioMrieux, det bl logo, BacT/ALERT og MB/BacT er anvendte, anmeldte og/eller registrerede varemrker
tilhrende bioMrieux SA eller et af dets datterselskaber.
Amphyl er et registreret varemrke tilhrende Linden Corporation.
ATCC er et registreret varemrke tilhrende American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Juli 2008
BacT/ALERT MB
DEUTSCH
43-02494
KENNZEICHNET BERARBEITETEN ABSCHNITT

BacT/ALERT MB-Kulturflaschen und MB/BacT Enrichment Fluid bei 15 30 C lagern. Vor direkter
Sonneneinstrahlung schtzen.
Siehe Symbolerluterung am Ende dieser Beilage.
VERWENDUNGSZWECK
BacT/ALERT MB-Kulturflaschen werden unter Beigabe von MB/BacT Enrichment Fluid und in Verbindung mit dem
MB/BacT-Mykobakteriennachweissystem (ohne Schtteln) und dem BacT/ALERT-Mikrobennachweissystem (mit
Schtteln) als nichtselektives Kulturmedium fr die qualitative Kultivierung und Bestimmung von Mykobakterien in
Blutproben verwendet.
ZUSAMMENFASSUNG UND ERLUTERUNG

BacT/ALERT MB-Kulturflaschen sind in Verbindung mit dem MB/BacT Enrichment Fluid dafr konzipiert worden,
Mycobacterium-Spezies zu kultivieren, die hufig aus Blut isoliert werden. Das Medium frdert das Wachstum
anderer aerober Organismen wie Hefe, Pilze und Bakterien. Dieses komplette System umfasst ein Lysiermittel
(Saponin), Natriumpolyanetholsulfonat (SPS) sowie weitere Zustze fr Nhrmedien, die eine Aufbereitung
berflssig machen, die Gerinnung verhindern und das Wachstum der Mykobakterien frdern. 3 ml 5 ml Blut
knnen direkt in die Kulturflasche inokuliert werden. Die inokulierten Flaschen werden in das Gert eingesetzt, wo
sie bebrtet (35 C 37 C) und stndig auf mikrobielles Wachstum berwacht werden.
TESTPRINZIP
Das MB/BacT-Mykobakteriennachweissystem und das BacT/ALERT-Mikrobennachweissystem arbeiten mit einem
kolorimetrischen Sensor und reflektiertem Licht, um das Vorhandensein und die Produktion von Kohlendioxid (CO2)
zu prfen, das im Kulturmedium gelst ist.1 Wenn die Testprobe Mikroorganismen enthlt, wird durch die bakterielle
Metabolisierung der Substrate im Kulturmedium CO2 produziert. Wird durch das Wachstum der Mikroorganismen
CO2 produziert, so zeigt der gasdurchlssige Sensor am Boden der betreffenden Kulturflasche einen Farbumschlag
von Blaugrn nach Gelb. Die hellere Farbe fhrt zu einer Erhhung der Reflexionseinheiten, die vom System erfasst
werden. Die Flaschenreflexion wird vom Gert berwacht und alle 10 Minuten protokolliert.
REAGENZIEN
In-vitro-Diagnostikum.
WARNUNG: Zur Verringerung des Risikos eines versehentlichen Kontakts mit infektisem Material sind
zustzliche Vorsichtsmanahmen zu treffen, wenn die BacT/ALERT MB-Kulturasche im BacT/ALERTMikrobennachweissystem verwendet wird. Es wird dringend empfohlen, das Gert in einem Labor aufzustellen,
das sich routinemig mit der Kultivierung von M. tuberculosis befasst. Fr Aktivitten, die die Vermehrung
und Handhabung in Kultur angezchteter Mykobakterienspezies oder M. tuberculosis beinhalten, werden
Rckhaltevorrichtungen und Einrichtungen der Sicherheitsstufe 3 (Biosafety Level 3) empfohlen.2
ACHTUNG: Proben und beimpfte Kulturaschen wie potenziell infektises Material handhaben. Alle beimpften
Kulturaschen und die zur Probengewinnung und Blutentnahme verwendeten Kanlen, Spritzen usw. mssen
gem den Vorschriften Ihrer Einrichtung dekontaminiert werden.3
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT MB (Farbcodierung Schwarz) Die sterilen BacT/ALERT MB-Kulturflaschen fr den Einmalgebrauch
enthalten 29 ml Kulturmedium und einen Kohlendioxidsensor als Indikator fr das Wachstum von Mikroorganismen.
Das Medium besteht aus Middlebrook 7H9-Bouillon (0,47 % Gew./Vol.), pankreatisch abgebautem Casein (0,1 %
Gew./Vol.), Glycerin (1,0 % Gew./Vol.) und Natriumpolyanetholsulfonat (0,025 % Gew./Vol.) in Reinstwasser. Die
Flaschen werden unter Vakuum mit einer CO2-angereicherten Sauerstoff-Stickstoff-Atmosphre prpariert. Die
Zusammensetzung des Kulturmediums kann fr spezielle Anforderungen modifiziert werden.
ACHTUNG: Die BacT/ALERT MB-Kulturaschen werden bei 37 C inkubiert, was einen Nachweis von
Mykobakterien, die andere Inkubationstemperaturen erfordern, mglicherweise verhindert (z. B. M. marinum,
M. ulcerans, M. haemophilum). Fr die folgenden Isolate ergab der Test im Rahmen interner Studien mit den
BacT/ALERT MB-Kulturachen im MB/BacT-Gert (ohne Schtteln) und im BacT/ALERT-Gert (mit Schtteln)
ein positives Ergebnis: M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M.
xenopi, M. bovis, M. gordonae und M. simiae.
ACHTUNG: Es ist mglich, dass bestimmte seltene und besonders anspruchsvolle Mykobakterien gar nicht
oder nur langsam im Nhrmedium der BacT/ALERT MB-Kulturasche wachsen. Wenn der Verdacht auf seltene,
sehr anspruchsvolle Mykobakterien besteht, die spezielle Medien und Kulturbedingungen erfordern, sollten
alternative Methoden oder lngere Inkubationszeiten fr den Nachweis in Betracht gezogen werden.
ACHTUNG: In seltenen Fllen kann es vorkommen, dass Mikroorganismen in der BacT/ALERT MB-Kulturasche
wachsen, jedoch keine fr ein positives Testergebnis ausreichende Menge an Kohlendioxid produzieren.
Beispielsweise kann das Wachstum bei Proben von Patienten, die mit Antimykotika behandelt werden,
geringer ausfallen.

Die Flschchen MB/BacT Enrichment Fluid enthalten jeweils 5,5 ml Anreicherungsflssigkeit. Das MB/BacT
Enrichment Fluid besteht aus Rinderserumalbumin (14,5 % Gew./Vol.), Natriumchlorid (2,5 % Gew./Vol.), lsure
(0,174 % Gew./Vol.) und Saponin (4,4 % Gew./Vol.) in Reinstwasser.
Zustzlich bentigte Materialien

MB/BacT-Mykobakteriennachweissystem oder BacT/ALERT-Mikrobennachweissystem
Middlebrook 7H11- oder anderes Mykobakterienmedium auf Agar- oder Eibasis
CO2-Inkubator, 37 C 2 C
Sterile Spritzen und Kanlen
Mykobakterizides Desinfektionsmittel
Blutentnahmeutensilien
Mikrobiologische Sicherheitswerkbank
Sterile Einmalhandschuhe
Einmalkittel
Einmalmasken
Geeignete Bioabfallbehlter zur Entsorgung von potenziell mit infektisem Material kontaminierten Artikeln
Qualittskontrollkeime
Von bioMrieux erhltliches Material

MB/BacT-Mykobakteriennachweissystem und BacT/ALERT-Mikrobennachweissystem
Aufbewahrung
BacT/ALERT MB-Kulturflaschen und MB/BacT Enrichment Fluid bei Zimmertemperatur (15 30 C) aufbewahren. Vor
direkter Sonneneinstrahlung schtzen. Auf jedem Flaschenetikett ist das Verfallsdatum aufgedruckt. BacT/ALERT MBKulturflaschen und Enrichment Fluid nach dem letzten Tag des angegebenen Monats nicht mehr verwenden. Die
Flaschen mssen vor Gebrauch Zimmertemperatur erreicht haben.
GERTE
Vor Gebrauch das Benutzerhandbuch fr das betreffende BacT/ALERT-Mikrobennachweissystem aufmerksam lesen.
ENTNAHME UND VORBEREITUNG DER PROBEN

Die korrekte Vorgehensweise bei der Gewinnung von Blutkulturproben ist uerst wichtig. Eine Beschreibung der
korrekten Probenentnahme- und -transportverfahren finden Sie im Manual of Clinical Microbiology3. Die ausreichende
Desinfektion der Haut ist eine der unabdingbaren Voraussetzungen fr die Reduzierung des Kontaminationsrisikos.
bioMrieux empfiehlt, die beimpften Kulturflaschen nach der Probenentnahme so schnell wie mglich in das BacT/
ALERT-Mikrobennachweissystem zu geben. Beimpfte Kulturflaschen, die nicht sofort in den Inkubator gegeben
werden knnen, sollten bei Raumtemperatur aufbewahrt werden, bis sie in das Gert geladen werden.
TESTVERFAHREN FR BacT/ALERT MB-KULTURFLASCHEN

Allgemeine Anmerkungen und Vorsichtsmanahmen
1. POTENZIELL INFEKTISES PROBENMATERIAL. Die allgemein geltenden Vorsichtsmanahmen bei der Handhabung
und Entsorgung von infektisem Material beachten. Proben und beimpfte Kulturen wie potenziell infektises
Material handhaben.
2. Um die Gefahr austretender Flssigkeit beim Inokulieren von Probenmaterial in die Kulturflaschen zu minimieren,
Spritzen mit festen Nadeln verwenden.
3. Alle beimpften Kulturflaschen und die zur Probengewinnung und Blutentnahme verwendeten Kanlen, Spritzen
usw. mssen gem den Vorschriften Ihrer Einrichtung dekontaminiert werden.3
4. Beimpfte Kulturflaschen stets in einem Gestell oder Korb tragen. Beim Verschtten des Inhalts oder Zerbrechen
einer Kulturflasche entsteht mglicherweise ein Aerosol aus Mykobakterien (einschlielich M. tuberculosis)
oder anderen Bakterien. Befolgen Sie die Sicherheitsvorschriften Ihrer Einrichtung und die CDC- und NIHRichtlinien (der US-amerikanischen Seuchenschutz- bzw. Gesundheitsbehrde).2 Mit dem Auftreten des Human
Immunodeciency Virus (HIV) und des erworbenen Immundefektsyndroms (AIDS) ist die Zahl der durch M.
tuberculosis verursachten Mykobakterimien gestiegen und Blut wird jetzt als potenzielle bertragungsquelle
im Labor angesehen.2
5. Die Handhabung komplexer, in Kulturen gezchteter M. tuberculosis-Organismen erfordert Rckhaltevorrichtungen
und Einrichtungen der Sicherheitsstufe 3 (Biosafety Level 3).2
6. Beim Vorbereiten der Flasche, Entnehmen der Patientenprobe und Inokulieren der Patientenprobe in die BacT/
ALERT MB-Kulturflasche ist mit uerster Vorsicht vorzugehen, um eine Kontamination zu vermeiden.
7. Das MB/BacT Enrichment Fluid enthlt Komponenten, die das optimale Wachstum der Mykobakterien sicherstellen,
sowie ein Lysiermittel fr die Blutzellenlyse. Dieses Produkt muss allen BacT/ALERT MB-Kulturflaschen zugesetzt
werden.
8. Das MB/BacT Enrichment Fluid kann bis zu 24 Stunden vor oder nach dem Beimpfen der Flasche mit der
Blutprobe hinzugefgt werden. Wird die Anreicherungsflssigkeit nach dem Inokulieren des Bluts zugesetzt,
mssen geeignete Verfahren der Sicherheitsstufe 3 (Biosafety Level 3) verwendet werden.2
9. Diese Kulturflaschen sollten nur von geschultem Laborpersonal verwendet werden.
Vorbereiten der Kulturasche

HINWEIS: Gehen Sie beim Vorbereiten der Flasche und Inokulieren der Patientenprobe mit uerster Vorsicht vor,
um eine Kontamination zu vermeiden.
berprfen Sie die BacT/ALERT MB-Kulturflaschen vor Gebrauch auf Anzeichen von Beschdigung oder Verfall
(Farbverlust). Flaschen, die Anzeichen einer Beschdigung, eines Lecks oder einer sonstigen Beeintrchtigung
aufweisen, mssen entsorgt werden. Das Medium in ruhenden Flaschen sollte klar sein. Bei Anzeichen einer
mglichen Kontamination, d. h. bei Trbung des Mediums, einem gelb gefrbten Sensor oder zu hohem Gasdruck,
die Flasche nicht mehr verwenden. Prfen Sie die Flschchen mit dem MB/BacT Enrichment Fluid auf Beschdigung
oder Kontamination. Verwenden Sie keine Flschchen mit MB/BacT Enrichment Fluid, die eine Trbung zeigen.
1. Beschriften Sie die Kulturflasche mit den Patientendaten. Die Symbole auf dem Flaschenetikett ( ,#, ) knnen
vom Anwender definiert werden.
2. Entfernen Sie den Kunststoff-Flip-Off-Deckel der Flasche, und desinfizieren Sie das Septum mit einem in Alkohol
getrnkten Tupfer oder hnlichem. Lassen Sie es an der Luft trocknen.
3. Die Anreicherungsflssigkeit wird separat geliefert und muss in die Blutkulturflasche gegeben werden,
um das Wachstum der Mykobakterien zu frdern. Die Flssigkeit kann innerhalb von 24 Stunden nach dem
Beimpfen mit der Probe hinzugefgt werden. Wird das Beimpfen am Krankenbett vorgenommen, kann die
Anreicherungsflssigkeit nach Eintreffen der beimpften Flaschen im Labor zugesetzt werden.
Entfernen Sie den Kunststoff-Flip-Off-Deckel vom Flschchen mit der Anreicherungsflssigkeit und desinfizieren
Sie das Septum mit einem in Alkohol getrnkten Tupfer oder hnlichem. Lassen Sie es an der Luft trocknen.
Fgen Sie unter aseptischen Bedingungen jeder BacT/ALERT MB-Kulturflasche 1 ml Anreicherungsflssigkeit
hinzu.
Wenden Sie eine Technik zur Wahrung der Sterilitt an, um die Kontamination der Anreicherungsflssigkeit und
des Mediums in der Kulturflasche zu vermeiden.
HINWEIS: Wird die Anreicherungsflssigkeit nach dem Inokulieren der Blutprobe hinzugegeben, muss dieser Schritt
in einer mikrobiologischen Sicherheitswerkbank durchgefhrt werden. Dabei ist geeignete Schutzkleidung zu tragen,
die den Sicherheitsstandards der CDC-/NIH-Richtlinien fr die Sicherheitsstufe 3 (Biosafety Level 3) entspricht.2
Verwenden Sie fr jede Flasche mit Blut eine neue Spritze, um die Kreuzkontamination der Flaschen zu vermeiden.
Vorgehensweise beim Beimpfen mit direkter Entnahme

1. Desinfizieren Sie vor dem Inokulieren den oberen Rand der BacT/ALERT MB-Kulturflasche mit einem in Alkohol
getrnkten Tupfer oder hnlichem. Lassen Sie ihn an der Luft trocknen.
2. Entnehmen Sie das Blut mit einem Butterfly-Set und der BacT/ALERT-Blutentnahme-Adapterkappe. Inokulieren
Sie es am Bett des Patienten direkt in die BacT/ALERT MB-Kulturflasche (3 5 ml pro Flasche). Um ein Beimpfen
mit einer zu groen Menge Blut zu vermeiden, kontrollieren Sie die Menge des inokulierten Bluts anhand der
Skalierung (bis 5 ml) auf dem Flaschenetikett.
3. Wischen Sie den oberen Rand der Flaschen nach dem Beimpfen mit in Amphyl 2 % oder einem anderen
mykobakteriziden Mittel getrnkter Gaze ab. Lassen Sie ihn danach an der Luft trocknen.
4. bergeben Sie die beimpften Kulturflaschen umgehend an das Testlabor.
Vorgehensweise beim Beimpfen mit einem Blutentnahmerhrchen

1. Das Blut kann auch in einem sterilen SPS-Rhrchen oder heparinisierten Rhrchen gesammelt und im Labor
in die BacT/ALERT MB-Kulturflasche inokuliert werden. Die Blutprobe muss zuvor nicht aufbereitet werden. In
EDTA gewonnenes Blut kann nicht verwendet werden, da EDTA selbst in Spurenmengen das Wachstum von
Mykobakterien hemmt.
2. Desinfizieren Sie den oberen Rand des Blutentnahmerhrchens und der BacT/ALERT MB-Kulturflasche mit einem
in Alkohol getrnkten Tupfer oder hnlichem. Lassen Sie das Gummiseptum vor dem Inokulieren der Blutprobe
an der Luft trocknen.
3. Entnehmen Sie mit einer sterilen Spritze unter aseptischen Bedingungen 3 bis 5 ml Blut aus dem Rhrchen und
inokulieren Sie es in die Kulturflasche.
4. Wischen Sie den oberen Rand der Flaschen nach dem Beimpfen mit in Amphyl 2 % oder einem anderen
mykobakteriziden Mittel getrnkter Gaze ab. Lassen Sie ihn danach an der Luft trocknen.
INKUBATION UND BERWACHUNG

ACHTUNG: Beim Anlegen von Subkulturen positiver Kulturaschen sind allgemeine Vorsichtsmanahmen zu
beachten, da die Flaschen berfllt sein oder Gas produzierende Organismen enthalten knnten. Der Inhalt
positiver Kulturaschen kann unter erhhtem Druck stehen. Alle Kulturaschen mit positivem Testergebnis
vor Frbung oder Entsorgung kurzzeitig belften, damit das Gas entweichen kann, das sich als Produkt der
mikrobiellen Stoffwechselttigkeit in den Flaschen angesammelt hat.
1. Laden Sie die beimpften BacT/ALERT MB-Kulturflaschen in das MB/BacT-Mykobakteriennachweissystem
(ohne Schtteln) oder das BacT/ALERT-Mikrobennachweissystem (mit Schtteln). Gehen Sie dazu nach den
Anweisungen des Benutzerhandbuchs vor.
2. Nachdem die BacT/ALERT MB-Kulturflaschen in das Gert geladen wurden, sollten sie mindestens 42 Tage ober
bis zu einem positiven Testergebnis darin verbleiben.
Die folgenden Verfahren erfordern Rckhaltevorrichtungen und Einrichtungen der Sicherheitsstufe 3 (Biosafety
Level 3).2
3. Wenn das Gert anzeigt, dass eine Zelle eine positiv getestete Flasche enthlt, entnehmen Sie die Flasche gem
den im Benutzerhandbuch beschriebenen Vorgehensweisen.
4. Alle Kulturflaschen mit positivem Testergebnis sollten durch Subkultivierung und Ausstrich auf surefeste Stbchen
untersucht werden. Mischen Sie den Inhalt der Flaschen in einer mikrobiologischen Sicherheitswerkbank,
desinfizieren Sie die Flaschenstopfen mit einem in Alkohol getrnkten Tupfer oder hnlichem, und lassen Sie
ihn an der Luft trocknen. Entnehmen Sie mit einer Spritze und Kanle Blutproben fr die Frbung surefester
Stbchen und das Anlegen von Subkulturen. Desinfizieren Sie den Flaschenstopfen nach der Subkultivierung
mit einem mykobakteriziden Mittel. Wenn der Ausstrich positiv auf surefeste Stbchen getestet wurde, wenden
Sie zur Identifizierung der Mykobakterien die in Ihrer Einrichtung vorgeschriebenen spezifischen Verfahren an.
Ist der Ausstrich negativ, zeigt jedoch das Vorhandensein anderer Mikroorganismen, sollte eine Gramfrbung
vorgenommen werden. Ist sowohl das Ergebnis des Ausstrichs als auch der Gramfrbung negativ, handelt es sich
mglicherweise um ein falsch positives Ergebnis. Laden Sie die Probe in diesem Fall wieder in das Gert, bis in
der Subkultur mikrobielles Wachstum sichtbar ist bzw. ein erneutes positives oder negatives Ergebnis festgestellt
wird. Bei Kulturen, die sich nach Verdacht auf ein falsch positives Ergebnis erneut als positiv herausstellen, ist ein
Ausstrich zu untersuchen und eine Subkultur anzulegen.
5. Zeigt die Gramfrbung nicht mykobakterielle Organismen, entnehmen Sie bei Bedarf eine weitere Probe fr die
Kultivierung. Die Mglichkeit einer bakteriellen Sepsis sollte ebenfalls in Betracht gezogen werden.
6. Negativ getestete Kulturen knnen ggf. vor der endgltigen Entsorgung noch einmal mit Hilfe eines Ausstrichs
und/oder einer Subkultur berprft werden.
7. BacT/ALERT-Kulturaschen nicht wiederverwenden. Entsorgen Sie die beimpften BacT/ALERT-Kulturflaschen
gem den Vorschriften Ihres Labors. BacT/ALERT-Flaschen knnen autoklaviert und/oder verbrannt werden.2
ERGEBNISBEFUNDE
LEISTUNGSMERKMALE BacT/ALERT (MIT SCHTTELN)
Ergebnisse
Befund
Signal +, AFB-Ausstrich +
Signal +, AFB-Ausstrich -, Gramfrbung +
AFB positiv, Identifizierung ausstehend

Kein Befund, oder Probe mit nicht mykobakteriellen Organismen
kontaminiert, Vorhandensein/Nichtvorhandensein von AFB kann
nicht bestimmt werden
Kein Befund. Subkultur anlegen, um mglicherweise falsch positives
Ergebnis zu bestimmen
Signal +, AFB-Ausstrich -, Gramfrbung -
Es wurden interne Beimpfungsstudien durchgefhrt. Dazu wurden die folgenden Testkeime in den Konzentrationen
10 KBE/Flasche und 100 KBE/Flasche in Humanblut gesunder erwachsener Personen inokuliert.
Ergebnisse von BacT/ALERT MB im BacT/ALERT-Gert (mit Schtteln)
Jede Packung BacT/ALERT MB-Kulturflaschen enthlt eine Konformittserklrung, die das zufriedenstellende
Wachstum von M. avium ATCC 25291 und M. intracellulare ATCC 13950 zertifiziert. Nach Erhalt knnen neue
Chargen bzw. Lieferungen von BacT/ALERT MB-Kulturflaschen oder Reagenzien fr die Qualittskontrolle getestet
werden. Informationen ber geeignete Qualittskontrollkeime finden Sie in den CLSI-/NCCLS-Richtlinien M22-A3.
Gehen Sie wie folgt vor, um die Flasche vorzubereiten und zu beimpfen:
Zahlreiche Variablen im Mykobakterien-Testverfahren sind in der Praxis nicht kontrollierbar, so dass keine absolute
Sicherheit besteht, dass die erhaltenen Ergebnisse ausschlielich auf die einwandfreie bzw. verminderte Leistung
des Kulturmediums oder Nachweissystems zurckzufhren sind.
Ergebnisse von BacT/ALERT MB im MB/BacT-Gert (ohne Schtteln)
Mykobakterium
Inokulum
(KBE/Flasche)
Fr den Nachweis
erforderlicher Zeitraum (Tage)1
BacT/ALERT MB
TB-Komplex
M. tuberculosis (4 Stmme)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 Stmme)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 27,2
14,3 30,02
14,9 23,8
16,2 25,5
Photochromogen (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 14,6
13,1 39,9
Scotochromogen (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 30,5
17,2 32,62
Nicht chromogen (Runyoun III)

M. avium (2 Stmme)
CDC 569, CDC 1155
M. avium (2 Stmme)
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 Stmme)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
100
10
10,4 12,5
13,8 14,8
9,2 13,63
10,93 15,7
100
10
8,5 12,1
11,0 12,9
Schnell wachsend (Runyoun IV)

100
10
2,2 2,3
2,6 3,2
Jeder Mikroorganismus wurde dreimal getestet und es wurde ein Durchschnitt gebildet (auer in Fllen, fr die etwas
anderes angegeben ist). Die angegebenen Werte sind Durchschnittswerte der wiederholten Bestimmungen.
Eine von drei Flaschen zeigte kein Wachstum, der angegebene Wert ist der Mittelwert zweier Flaschen.
3 Eine von drei Flaschen ist kontaminiert, der angegebene Wert ist der Mittelwert zweier Flaschen.
2
14,1 16,7
14,6 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Photochromogen (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 14,42
8,9 16,82
Scotochromogen (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 37,2
21,3 43,23
100
10
100
10
7,5 11,5
8,5 11,8
8,4
9,32
M. intracellulare (4 Stmme)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 11,6
9,9 13,1
Schnell wachsend (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
M. bovis CDC 8131
BESCHRNKUNGEN DES TESTVERFAHRENS
Mit einem MB/BacT-Gert (ohne Schtteln) wurden interne Beimpfungsstudien durchgefhrt. Dazu wurden die
folgenden Testkeime in den Konzentrationen 10 KBE/Flasche und 100 KBE/Flasche in Humanblut gesunder
erwachsener Personen inokuliert.
100
10
100
10
100
10
100
10
M. bovis CDC 423
1. Fgen Sie jeder zu testenden BacT/ALERT MB-Kulturflasche 1,0 ml MB/BacT Enrichment Fluid hinzu.
2. Beimpfen Sie die reprsentativen Flaschen mit 5,0 ml der Kontrollkeime, die in sterilem defibriniertem Schafsblut
auf 103 KBE/ml verdnnt wurden. Legen Sie Subkulturen auf Middlebrook 7H11-Platten an, um die Lebensfhigkeit
und die Zahl zu bestimmen.
3. Verwenden Sie nach dem Erhalt der erwarteten Ergebnisse die verbleibenden Flaschen zum Testen der klinischen
Proben. Wenn die erwarteten Ergebnisse nicht erzielt werden, wenden Sie sich an den Kundendienst von
bioMrieux.
LEISTUNGSMERKMALE MB/BacT (OHNE SCHTTELN)
Fr den Nachweis
erforderlicher Zeitraum (Tage)1
BacT/ALERT MB
TB-Komplex
M. tuberculosis (3 Stmme)
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
QUALITTSKONTROLLE
1. Kulturen, die nach Therapiebeginn fr die Primrdiagnose entnommen werden, knnen zu negativen Ergebnissen
fhren.
2. Der Nachweis von Mykobakterien in den BacT/ALERT MB-Kulturflaschen ist von der Qualitt der entnommenen
Probe und der Anzahl kultivierbarer Keime im Probenvolumen abhngig. Da das Nhrmedium nichtselektiv ist und
keine Antibiotika enthlt, knnen vorhandene Mikroorganismen aller Art wachsen.
3. Gelegentlich kann es aufgrund einer sehr hohen Zahl Leukozyten in der Blutprobe zu positiven Testergebnissen der
BacT/ALERT MB-Kulturflaschen kommen. Das fhrt zu negativen Proben beim Ausstrich und der Subkultivierung.
4. Die Zahl der Organismen ist hufig gering. Die Gewinnung von Proben ber einen Zeitraum von drei aufeinander
folgenden Tagen wird allgemein empfohlen.
5. Morphologie und Pigmentierung einer Kolonie sollten ausschlielich auf festen Medien bestimmt werden.
6. BacT/ALERT MB-Kulturflaschen mit einem positiven Signal knnen eine oder mehrere Spezies Mykobakterien
und/oder andere nicht mykobakterielle Spezies enthalten. In gemischten mykobakteriellen Kulturen in Bouillon
setzen sich mglicherweise schnell wachsende Organismen gegenber langsam wachsenden durch, oder die
Kultur wurde gleich als nicht verwertbar eingestuft, nachdem die schnell wachsenden Organismen erkannt worden
waren. Die Identifizierung vorhandener Mykobakterien erfordert die Subkultivierung und weitere Verfahren zur
Identifizierung von Keimen. Die Konsistenz der mikroskopischen Morphologie in den BacT/ALERT-Kulturflaschen
ist nicht definiert.
7. Die Surefestigkeit von Mykobakterien kann je nach Stamm, Alter der Kultur und anderen Variablen unterschiedlich
sein. Von allen Flaschen, fr die das Gert ein positives Signal angezeigt hat, sollten Subkulturen mit mykobakteriell
selektiven und nichtselektiven Medien angelegt werden. Vorhandene Mykobakterien knnen durch andere
Bakterien berdeckt werden.
Inokulum
(KBE/Flasche)
Mykobakterium
Nicht chromogen (Runyoun III)

M. avium (3 Stmme)
CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Jeder Mikroorganismus wurde dreimal getestet und es wurde ein Durchschnitt gebildet. Die angegebenen Werte
sind ein Bereich dieser Mittelwerte, mit Ausnahme von M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 und M. avium CDC
440, fr die lediglich der Mittelwert angegeben wird.
2 Eine von drei Flaschen ist kontaminiert, der angegebene Wert ist der Mittelwert zweier Flaschen.
3 Eine von drei Flaschen zeigte kein Wachstum, der angegebene Wert ist der Mittelwert zweier Flaschen.
HINWEIS: Eine Liste seltener und anspruchsvoller Keime, die mit BacT/ALERT-Kulturflaschen nachgewiesen werden
knnen, kann bei bioMrieux angefordert werden.4
LITERATURHINWEISE
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
BESTELLINFORMATIONEN
bioMrieux
BacT/ALERT MB
Packung 25 Stck
251011
5 Flschchen/Kit
259877
Bei technischen Fragen wenden Sie sich bitte an die Kundendienstvertretung von bioMrieux (auerhalb der USA an
die nchstgelegene Vertretung, innerhalb der USA unter der Rufnummer 1-800-682-2666).
bioMrieux, das blaue Logo, BacT/ALERT und MB/BacT sind aktuell genutzte, angemeldete und/oder registrierte
Marken von bioMrieux SA oder einer ihrer Tochtergesellschaften.
Amphyl ist eine eingetragene Marke der Linden Corporation.
ATCC ist eine eingetragene Marke der American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Juli 2008
BacT/ALERT MB
EHNIKA
43-02494

BacT/ALERT MB MB/BacT Enrichment Fluid
15-30C. .
.

BacT/ALERT MB MB/BacT,
MB/BacT ( )
BacT/ALERT ( ),
.

BacT/ALERT MB MB/BacT
Mycobacterium .
, , .
(), sodium polyanetholesulfonate
(SPS) ,
. 3 ml-5 ml
. (35C-37C)
.

MB/BacT BacT/ALERT

(CO2) .1
,
. CO2,
-
. ,
.
10 .
in vitro .
: ,
BacT/ALERT
MB BacT/ALERT.
M. tuberculosis.
M. tuberculosis Mycobacterium
, , 3.2
:
. ,

.3
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT MB ( ) , BacT/ALERT
MB 29 ml
. Middlebrook 7H9 (0,47% w/v),
(0,1% w/v), (1,0% w/v) sodium polyanetholesulfonate (0,025% w/v)
. CO2 .
, .
: BacT/ALERT MB 37C
(..
M. marinum, M. ulcerans, M. haemophilum).
MB/BacT ( ) BacT/ALERT ( )
BacT/ALERT MB M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M.
chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M. gordonae M. simiae.
: ,
BacT/ALERT MB.
,
,
.
: ,
BacT/ALERT MB,
, . ,

.

MB/BacT Enrichment Fluid 5,5 ml. MB/BacT
(14,5% w/v), (2,5% w/v), (0,174% w/v),
(4,4% w/v) .

MB/BacT BacT/ALERT
Middlebrook 7H11
CO2, 37C 2C

bioMrieux
MB/BacT BacT/ALERT

BacT/ALERT MB MB/BacT
(15-30C). . .
BacT/ALERT MB
. .
BacT/ALERT
.

.
Manual of Clinical Microbiology3
.
.
bioMrieux
BacT/ALERT .

.
BacT/ALERT MB

1. .
.
.
2. ,
.
3. ,
.3
4. .
, ( M. tuberculosis)
. CDC/NIH.2
/ ,
M. tuberculosis
.2
5. M. tuberculosis, ,
, 3.2
6. ,
BacT/ALERT MB.
7. MB/BacT
.
BacT/ALERT MB.
8. MB/BacT 24
. ,
3.2
9. .

:
.
, BacT/ALERT MB
(). ,
. .
,
. . ,
MB/BacT . MB/
BacT .
1. .
( ,#, ) .
2.
. .
3.
. 24
, ,
.

. .
, 1 ml BacT/ALERT MB.
,
.
: ,

CDC/NIH
3.2 ,
.

1. , BacT/ALERT MB
. .
2. BacT/ALERT
BacT/ALERT MB (3-5 ml
). ,
5 ml .
3. , 2%
Amphyl .
4. .

1. SPS
BacT/ALERT MB .
. EDTA EDTA
.
2.
BacT/ALERT MB .
.
3. , 3-5 mls
.
4. , 2%
Amphyl .

:
,
.
.

.
1. BacT/ALERT MB
MB/BacT ( ) BacT/ALERT ( ),
.
2. BacT/ALERT MB , 42
.
,
3.2
3. ,
.
4. ,
. ,
,
. .
.
,
. ,
, Gram.
Gram , ,

.
, .
5. Gram, ,
. .
6. /
.
7. BacT/ALERT.
BacT/ALERT .
/ BacT/ALERT.2
BacT/ALERT ( )
+, AFB +
+, AFB , Gram +
AFB ,

,
/ AFB
.

+, AFB , Gram

10 CFU/ 100 CFU/ .
BacT/ALERT MB BacT/ALERT ( )
BacT/ALERT MB
M. avium ATCC 25291 M. intracellulare ATCC 13950.
, BacT/ALERT MB
. CLSI/NCCLS M22-A3
. :
(CFU/)

()1
BacT/ALERT MB
TB
M. tuberculosis (4 )
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 )
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 - 27,2
14,3 - 30,02
14,9 - 23,8
16,2 - 25,5
(Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 - 14,6
13,1 - 39,9
(Runyoun II)
M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 - 30,5
17,2 - 32,62
(Runyoun III)
M. avium (2 )
CDC 569, CDC 1155
M. avium (2 )
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 )
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
100
10
10,4 - 12,5
13,8 - 14,8
9,2 - 13,63
10,93 - 15,7
100
10
8,5 - 12,1
11,0 - 12,9
(Runyoun IV)
100
10
2,2 - 2,3
2,6 - 3,2
.
.
2 . .
3 . .
(Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 - 14,42
8,9 - 16,82
(Runyoun II)
M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 - 37,2
21,3 - 43,23
100
10
100
10
7,5 - 11,5
8,5 - 11,8
8,4
9,32
M. intracellulare (4 )
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 - 11,6
9,9 - 13,1
(Runyoun IV)
100
10
2,1
2,3
(Runyoun III)
M. avium (3 )
CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
BacT/ALERT MB MB/BacT ( )
14,1 - 16,7
14,6 - 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
M. bovis CDC 8131
MB/BacT ( )
10 CFU/ 100 CFU/
.
100
10
100
10
100
10
100
10
M. bovis CDC 423
1. 1,0 ml MB/BacT BacT/ALERT MB

.
2. 5,0 ml , 103 CFU/ml
, . Middlebrook 7H11
.
3. ,
. ,
bioMrieux.
MB/BacT ( )

()1
BacT/ALERT MB
TB
M. tuberculosis (3 )
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
1.
.
2. BacT/ALERT MB
.
, ,
.
3. , BacT/ALERT MB
.
.
4. . .
5. .
6. BacT/ALERT MB
/ . ,
,
.
,
. BacT/ALERT
.
7. ,
.
.
.
(CFU/)
.
, M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 M. avium CDC 440,
.
2 . .
3 . .
: BacT/ALERT
bioMrieux.4

Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
Government Printing Ofce. Washington: Feb 2007.
bioMrieux
BacT/ALERT MB
25/
251011
5 /
259877
..., bioMrieux
1-800-682-2666. ..., bioMrieux.
bioMrieux, BacT/ALERT MB/BacT
, / bioMrieux SA
.
Amphyl Linden Corporation.
ATCC , /
American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
2008
BacT/ALERT MB
ESPAOL
43-02494
INDICA SECCIN MODIFICADA

Conservar los frascos de cultivo BacT/ALERT MB y el lquido de enriquecimiento MB/BacT Enrichment Fluid entre
15-30 C. Proteger de la luz directa del sol.
Vase al final del prospecto el glosario de smbolos.
USO PREVISTO
Los frascos de cultivo BacT/ALERT MB con la adicin del lquido de enriquecimiento MB/BacT, cuando se utilizan con
el sistema de deteccin de micobacterias MB/BacT (sin agitacin) y el sistema de deteccin de microorganismos
BacT/ALERT (con agitacin), son un medio de cultivo no selectivo para el cultivo cualitativo y la recuperacin de
micobacterias en muestras de sangre.
RESUMEN Y EXPLICACIN
Los frascos de cultivo BacT/ALERT MB en combinacin con el lquido de enriquecimiento MB/BacT estn diseados
para el cultivo de especies de Mycobacterium aisladas habitualmente en la sangre. El medio facilitar el crecimiento
de otros microorganismos aerobios, tales como levaduras, hongos y bacterias. Este sistema completo incluye
un agente hemoltico (saponina), polianetolsulfonato de sodio (SPS) y otros suplementos de medios de cultivo
que eliminan la etapa de procesamiento, impiden la coagulacin de la sangre y favorecen el crecimiento de
micobacterias. Puede inocularse un volumen de 3-5 ml de sangre directamente en el frasco de cultivo. Los frascos
inoculados se colocan en el instrumento, donde se incuban (35-37 C) y se vigilan continuamente para comprobar
si se produce crecimiento microbiano.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
El sistema de deteccin de micobacterias MB/BacT y los sistemas de deteccin de microorganismos BacT/ALERT
utilizan un sensor colorimtrico y la luz reflejada para controlar la presencia y la produccin de dixido de carbono
(CO2) disuelto en el medio de cultivo1. Si hay microorganismos en la muestra de estudio se generar dixido de
carbono, ya que los microorganismos metabolizan los sustratos del medio de cultivo. Cuando el crecimiento de los
microorganismos produce CO2, el color del sensor permeable al gas instalado en el fondo de cada frasco de cultivo
cambia de color azul-verdoso a amarillo. Este color ms claro provoca un aumento de las unidades de reflectancia
controladas por el sistema. El instrumento controla y registra la reflectancia del frasco cada 10 minutos.
REACTIVOS
Para uso diagnstico in vitro.
ADVERTENCIA: Para reducir los riesgos de exposicin accidental a agentes infecciosos, deben tomarse
precauciones adicionales cuando se utilicen los frascos de cultivo BacT/ALERT MB en el sistema de deteccin
de microorganismos BacT/ALERT. Es muy recomendable instalar el instrumento en un laboratorio que se
utilice para el cultivo sistemtico de M. tuberculosis. Para las actividades que requieran la propagacin y
manipulacin de M. tuberculosis o especies de Mycobacterium crecidas en cultivo, se recomienda el uso de
prcticas, equipo de contencin e instalaciones de nivel 3 de seguridad biolgica2.
PRECAUCIN: Manipular las muestras y los frascos de cultivo inoculados como si fueran capaces de transmitir
agentes infecciosos. Todos los frascos de cultivo inoculados, las agujas para toma de muestras y los dispositivos
de extraccin de sangre deben ser descontaminados de acuerdo con los procedimientos del centro3.
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT
MB (color negro): los frascos de cultivo desechables estriles BacT/ALERT MB contienen 29 ml de

medio de cultivo y un sensor interno que detecta el dixido de carbono como indicador del crecimiento microbiano.
La formulacin del medio de cultivo est compuesta de caldo de Middlebrook 7H9 (0,47% p/v), digerido pancretico
de casena (0,1% p/v), glicerol (1,0% p/v) y polianetolsulfonato de sodio (0,025% p/v) en agua purificada. Los
frascos contienen una atmsfera de CO2 en oxgeno y nitrgeno al vaco. Es posible ajustar la composicin del medio
para que cumpla requisitos de rendimiento especficos.
PRECAUCIN: Los frascos de cultivo BacT/ALERT MB se incuban a 37 C, lo cual podra impedir la recuperacin
de micobacterias que requieran otras temperaturas de incubacin (p. ej., M. marinum, M. ulcerans y M.
haemophilum). Las siguientes cepas aisladas se detectaron como positivas en los instrumentos MB/BacT (sin
agitacin) y BacT/ALERT (con agitacin) con el frasco de cultivo BacT/ALERT MB durante estudios internos:
M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M.
gordonae y M. simiae.
PRECAUCIN: Es posible que determinadas micobacterias exigentes raras no crezcan o crezcan lentamente en
el medio de crecimiento del frasco de cultivo BacT/ALERT MB. Si se sospecha la presencia de micobacterias
exigentes raras que requieren medios y condiciones de cultivo especiales, debe considerarse la posibilidad de
utilizar mtodos alternativos o tiempos de incubacin ampliados para su recuperacin.
PRECAUCIN: En raras ocasiones pueden encontrarse microorganismos que crezcan en el medio de
crecimiento de los frascos de cultivo BacT/ALERT MB, pero sin que produzcan suciente dixido de carbono
para dar un resultado positivo. Por ejemplo, las muestras de pacientes que estn recibiendo tratamiento con
frmacos antimicobacterianos pueden mostrar un crecimiento deciente.

Los viales de lquido de enriquecimiento MB/BacT Enrichment Fluid contienen un volumen total de llenado de
5,5 ml cada uno. El lquido de enriquecimiento MB/BacT est constituido de seroalbmina bovina (14,5% p/v),
cloruro sdico (2,5% p/v), cido oleico (0,174% p/v) y saponina (4,4% p/v) en agua purificada.
Materiales adicionales requeridos

Sistema de deteccin de micobacterias MB/BacT o sistema de deteccin de microorganismos BacT/ALERT
Caldo de Middlebrook 7H11 u otro agar micobacteriano o medio de cultivo a base de huevo
Incubadora de CO2, 37 C 2 C
Jeringas y agujas estriles
Desinfectante micobactericida
Aparato para la extraccin de sangre
Cabina de seguridad biolgica
Guantes estriles desechables
Batas desechables
Mascarillas desechables
Recipientes apropiados para desechos de riesgo biolgico de materiales potencialmente contaminados con agentes
infecciosos
Microorganismos de control de calidad
Materiales disponibles en bioMrieux

Sistema de deteccin de micobacterias MB/BacT y sistemas de deteccin de microorganismos BacT/ALERT
Instrucciones de conservacin
Conservar los frascos de cultivo BacT/ALERT MB y el lquido de enriquecimiento MB/BacT a temperatura ambiente
(15-30 C). Proteger de la luz directa del sol. En la etiqueta de cada frasco viene impresa la fecha de caducidad. No
utilizar los frascos de cultivo BacT/ALERT MB ni los viales de lquido de enriquecimiento despus del ltimo da del
mes indicado. Los frascos deben estar a temperatura ambiente antes de su uso.
INSTRUMENTOS
Consultar el manual del usuario del sistema de deteccin de microorganismos BacT/ALERT correspondiente antes
de utilizarlo.
RECOGIDA Y PREPARACIN DE MUESTRAS

Al obtener muestras de sangre para cultivo es muy importante recoger la muestra de manera correcta. Consultar
el Manual de microbiologa clnica3 para ver los procedimientos adecuados para la recogida y el transporte de
muestras. Es esencial desinfectar adecuadamente la piel para reducir la incidencia de contaminacin.
bioMrieux recomienda colocar los frascos de cultivo inoculados en el sistema de deteccin de microorganismos
BacT/ALERT lo antes posible despus de su recogida. Los frascos de cultivo inoculados cuya introduccin se difiera
deben mantenerse a temperatura ambiente hasta que puedan colocarse en la incubadora.
PROCEDIMIENTO DE ANLISIS DE LOS FRASCOS DE CULTIVO BacT/ALERT MB

Precauciones y comentarios preliminares
1. MUESTRA DE ESTUDIO POTENCIALMENTE INFECCIOSA. Observar las precauciones universales al manipular y
desechar materiales infecciosos. Manipular las muestras y los cultivos inoculados como si fueran capaces de
transmitir agentes infecciosos.
2. Para reducir al mnimo la posibilidad de fugas durante la inoculacin de muestras en frascos de cultivo deben
utilizarse jeringas y agujas fijas.
3. Todos los frascos de cultivo inoculados, las agujas para toma de muestras y los dispositivos de extraccin de
sangre deben ser descontaminados de acuerdo con los procedimientos del centro3.
4. Transportar siempre los frascos de cultivo inoculados en una gradilla o cesta. En caso de derramamiento o rotura
podra producirse un aerosol de micobacterias (incluida M. tuberculosis) u otras bacterias. Deben seguirse las
directrices de seguridad del centro y de los CDC/NIH2. Con la aparicin del virus de la inmunodeficiencia humana
y del sndrome de inmunodeficiencia adquirida ha aumentado la incidencia de micobacteriemia causada por M.
tuberculosis, y actualmente se considera que la sangre es una posible fuente de transmisin en el laboratorio2.
5. La manipulacin de microorganismos del complejo M. tuberculosis crecidos en cultivo requiere prcticas, equipo
de contencin e instalaciones de nivel 3 de seguridad biolgica2.
6. Debe procurarse evitar la contaminacin durante la preparacin de los frascos, la recogida de la muestra del
paciente y la inoculacin de la muestra del paciente en el frasco de cultivo BacT/ALERT MB.
7. El lquido de enriquecimiento MB/BacT contiene componentes necesarios para garantizar el crecimiento ptimo
de micobacterias y un agente hemoltico para la destruccin de las clulas sanguneas. Este producto debe
aadirse a todos los frascos de cultivo BacT/ALERT MB.
8. El lquido de enriquecimiento MB/BacT puede aadirse hasta 24 horas antes o despus de la inoculacin del
frasco con la muestra de sangre. Si el lquido de enriquecimiento se aade despus de la inoculacin de la sangre,
debe aadirse utilizando las prcticas de nivel 3 de seguridad biolgica adecuadas2.
9. Estos frascos de cultivo deben ser utilizados exclusivamente por personal de laboratorio con la formacin
adecuada.
Preparacin de los frascos

NOTA: Debe procurarse evitar la contaminacin durante la preparacin del frasco y la inoculacin de la muestra
del paciente.
Antes de su uso, deben examinarse los frascos de cultivo BacT/ALERT MB en busca de signos de daos o deterioro
(cambio de coloracin). Los frascos que muestren signos de daos, fuga o deterioro deben desecharse. Los medios
de cultivo contenidos en frascos no alterados deben estar transparentes. No utilizar frascos en los que el medio de
cultivo est turbio, el sensor est de color amarillo o la presin de gas sea excesiva, ya que todos ellos son signos
de posible contaminacin. Examinar tambin todos los viales de lquido de enriquecimiento MB/BacT en busca de
signos de daos o contaminacin. No utilizar los viales de lquido de enriquecimiento MB/BacT cuyo contenido
est turbio.
1. Etiquetar el frasco de cultivo con la informacin del paciente. El usuario puede definir los iconos de la etiqueta
que aparecen en la etiqueta del frasco ( ,#, ).
2. Retirar la tapa levadiza de plstico del frasco de cultivo y desinfectar con una gasa impregnada en alcohol o su
equivalente. Dejar secar al aire.
3. El lquido de enriquecimiento se suministra por separado y debe aadirse al frasco de hemocultivo para el
crecimiento de micobacterias. Esta adicin puede realizarse en las 24 horas siguientes a la inoculacin de la
muestra; si la inoculacin de la muestra se realiza a la cabecera del paciente, el lquido de enriquecimiento puede
aadirse despus de recibir los viales inoculados en el laboratorio.
Retirar la tapa levadiza de plstico del vial de lquido de enriquecimiento y desinfectar con una gasa impregnada
en alcohol o su equivalente. Dejar secar al aire.
Aadir mediante una tcnica asptica 1 ml de lquido de enriquecimiento a cada frasco de cultivo BacT/
ALERT MB.
Debe utilizarse una tcnica asptica meticulosa para evitar la contaminacin del lquido de enriquecimiento y del
medio del frasco de cultivo.
NOTA: Si el lquido de enriquecimiento se aade despus de la inoculacin de la muestra de sangre, este paso debe
llevarse a cabo en una cabina de seguridad biolgica usando ropa de proteccin adecuada conforme a las normas
de seguridad establecidas por los CDC/NIH para las directrices de nivel 3 de seguridad biolgica2. Utilizar una jeringa
nueva para cada frasco que contenga sangre para evitar una contaminacin cruzada.
Procedimiento de inoculacin directa

1. Antes de la inoculacin, desinfectar el frasco de cultivo BacT/ALERT MB con una gasa impregnada en alcohol o
su equivalente. Dejar secar al aire.
2. Recoger la sangre utilizando un equipo de mariposa y la tapa adaptadora para recogida de sangre BacT/ALERT e
inocular directamente en el frasco de cultivo BacT/ALERT MB a la cabecera del paciente (3-5 ml por frasco). Para
evitar una inoculacin excesiva, vigilar el volumen de sangre que entra en el frasco de cultivo utilizando las marcas
incrementales de 5 ml de la etiqueta del frasco.
3. Despus de la inoculacin, limpiar los tapones de los frascos con una gasa impregnada en Amphyl al 2% u otro
agente micobactericida y dejar secar al aire.
4. Transferir rpidamente el frasco de cultivo inoculado al laboratorio de anlisis.
Procedimiento de inoculacin con un tubo de recogida de sangre

1. La sangre tambin puede recogerse en un tubo estril con SPS o heparina e inocularse en el frasco de cultivo
BacT/ALERT MB en el laboratorio. No se requiere un procesamiento previo de la muestra. La sangre recogida en
EDTA es inaceptable, ya que inhibe el crecimiento micobacteriano incluso en cantidades mnimas.
2. Desinfectar la tapa del tubo de recogida de sangre y la tapa del frasco de cultivo BacT/ALERT MB con una gasa
impregnada en alcohol o su equivalente. Dejar secar al aire los tapones de goma antes de inocular la muestra
de sangre.
3. Utilizando una tcnica asptica, extraer 3-5 ml del tubo de recogida con una jeringa estril e inocular en el frasco
de cultivo.
4. Despus de la inoculacin, limpiar las tapas de los frascos con una gasa impregnada en Amphyl al 2% u otro
agente micobactericida y dejar secar al aire.
INCUBACIN Y CONTROL
PRECAUCIN: Deben tomarse precauciones generales al subcultivar los frascos de cultivo positivos, ya que
podran haberse llenado excesivamente o contener microorganismos productores de cantidades grandes de
gas. El contenido de los frascos de cultivo positivos podra encontrarse a una presin interna mayor. Es preciso
ventilar momentneamente los frascos de cultivo positivos antes de teirlos o desecharlos a n de liberar el
gas que pueda haberse generado durante el metabolismo microbiano.
1. Cargar los frascos de cultivo BacT/ALERT MB inoculados en el sistema de deteccin de micobacterias MB/BacT
(sin agitacin) o en el sistema de deteccin de microorganismos BacT/ALERT (con agitacin) conforme a las
instrucciones provistas en el manual del usuario.
2. Una vez cargados en el instrumento, los frascos de cultivo BacT/ALERT MB deben permanecer en l durante al
menos 42 das o hasta que se los designe como positivos.
Los siguientes procedimientos requieren el uso de prcticas, equipo de contencin e instalaciones de nivel 3
de seguridad biolgica2.
3. Cuando el instrumento indique que una celda concreta contiene un frasco positivo, retirar el frasco conforme a
los procedimientos indicados en el manual del usuario.
4. Deben efectuarse baciloscopia y subcultivos para bacilos acidorresistentes de todos los frascos designados como
positivos. En una cabina de seguridad biolgica, mezclar el contenido del frasco, desinfectar el tapn del frasco
con una gasa impregnada en alcohol o su equivalente y dejar secar al aire. Extraer la muestra para tincin
acidorresistente y subcultivo utilizando una jeringa y una aguja. Desinfectar el tapn del frasco con un agente
micobactericida despus del subcultivo. Si la tincin acidorresistente es positiva, realizar los procedimientos
de identificacin especfica de micobacterias que utilice el centro. Si la baciloscopia es negativa para bacilos
acidorresistentes pero revela la presencia de otros microorganismos, debe realizarse una tincin de Gram. Si la
baciloscopia para bacilos acidorresistentes y la tincin de Gram son negativas, lo cual indica un posible resultado
falsamente positivo, debe volver a colocarse el frasco en el instrumento hasta que se detecte crecimiento del
subcultivo o hasta que sea redesignado como positivo o negativo. Los cultivos que inicialmente produjeron
resultados falsamente positivos y que fueron redesignados como positivos deben someterse a baciloscopia y
subcultivo.
5. Si se observan microorganismos no micobacterianos en la tincin de Gram, puede obtenerse otra muestra para
cultivo si se desea. Tambin debe considerarse la posibilidad de una septicemia bacteriana.
6. Los cultivos negativos se pueden comprobar mediante baciloscopia y/o subcultivo en algn momento antes de
desecharlos como negativos.
7. No reutilizar los frascos de cultivo BacT/ALERT. Desechar los frascos de cultivo BacT/ALERT inoculados conforme
al protocolo del laboratorio. Los frascos BacT/ALERT inoculados pueden procesarse en autoclave o incinerarse2.
RESULTADOS COMUNICADOS
Resultados
Seal +, baciloscopia para BAAR +
Seal +, baciloscopia para BAAR ,
tincin de Gram +
Seal +, baciloscopia para BAAR ,
tincin de Gram
Informe
BAAR positivo; pendiente de identificacin
Sin informe; o muestra contaminada con microorganismos no
micobacterianos; no se puede determinar la presencia/ausencia de BAAR
Sin informe. Subcultivar para determinar un posible resultado falsamente
positivo.
CONTROL DE CALIDAD
Con cada caja de frascos de cultivo BacT/ALERT MB se proporciona un certificado de conformidad en el que se
indica el rendimiento del crecimiento satisfactorio de M. avium ATCC 25291 y M. intracellulare ATCC 13950. Tras
su recepcin, puede realizarse un anlisis de control de calidad de los lotes o envos nuevos de reactivos o frascos
de cultivo BacT/ALERT MB. En la norma CLSI/NCCLS M22-A3 se indican los microorganismos de control de calidad
adecuados. Debe seguirse el procedimiento de preparacin e inoculacin del frasco:
1. Aadir 1,0 ml de lquido de enriquecimiento MB/BacT a cada frasco de cultivo BacT/ALERT MB necesario para
el anlisis.
2. Inocular frascos representativos con 5,0 ml de microorganismos de control, diluidos a 103 UFC/ml en sangre de
carnero desfibrinada estril. Subcultivar en placas de Middlebrook 7H11 para determinar la viabilidad y el recuento.
3. Si se obtienen los resultados previstos, utilizar los frascos restantes para el anlisis de muestras clnicas. Si no se
obtienen los resultados previstos, contactar con el servicio de atencin al cliente de bioMrieux.
LIMITACIONES DE LA PRUEBA
Existen muchas variables implicadas en el anlisis micobacteriano que no pueden controlarse en la prctica para
proporcionar una confianza total de que los resultados obtenidos se deban exclusivamente a un rendimiento
apropiado o inapropiado de un sistema de deteccin o de un medio de cultivo concreto.
1. Los cultivos obtenidos para diagnstico primario despus del inicio del tratamiento pueden producir resultados
negativos.
2. La recuperacin de micobacterias en los frascos de cultivo BacT/ALERT MB depende de la calidad de la muestra
recogida y del nmero de microorganismos cultivables presentes en el volumen de la muestra. Dado que el
medio de cultivo no es selectivo y que no contiene antibiticos, cualquier microorganismo presente podra crecer
en el medio de cultivo.
3. En raras ocasiones pueden producirse resultados positivos en los frascos de cultivo BacT/ALERT MB debido a la
presencia de un nmero muy alto de leucocitos en la muestra de sangre. Esta situacin dar lugar a muestras de
baciloscopia y de subcultivo negativas.
4. Los microorganismos a menudo estn presentes en un nmero bajo. Generalmente se recomienda la recogida
de muestras durante tres das consecutivos.
5. La morfologa y la pigmentacin de las colonias slo debe determinarse en medios de cultivo slidos.
6. Los frascos de cultivo BacT/ALERT MB con una seal positiva pueden contener una o ms especies de micobacterias
y otras especies no micobacterianas. En los cultivos micobacterianos mixtos en caldos, un microorganismo de
crecimiento lento puede ser superado competitivamente por un microorganismo de crecimiento rpido, o puede
haberse desechado el cultivo poco despus de la deteccin del microorganismo de crecimiento rpido. La
identificacin de las micobacterias presentes requiere un subcultivo y procedimientos adicionales para identificar
los microorganismos presentes. No se ha determinado la uniformidad de la morfologa microscpica en los
frascos de cultivo BacT/ALERT.
7. La acidorresistencia de las micobacterias puede variar dependiendo de la cepa, la antigedad del cultivo y otras
variables. Todos los frascos con una seal positiva del instrumento deben subcultivarse en medios de cultivo
micobacterianos selectivos y no selectivos. Puede producirse el sobrecrecimiento de microorganismos no
micobacterianos sobre las micobacterias presentes.
CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO: MB/BacT (SIN AGITACIN)

Se realizaron estudios internos de siembra en un instrumento MB/BacT (sin agitacin) utilizando los siguientes
microorganismos de estudio a niveles de 10 UFC/frasco y 100 UFC/frasco en sangre humana de una poblacin
adulta sana.
Resultados de los frascos de cultivo BacT/ALERT MB en el instrumento MB/BacT (sin agitacin)

Micobacteria
Inculo
(UFC/frasco)
Tiempo de deteccin (das)1

BacT/ALERT MB
Complejo TB
M. tuberculosis (4 cepas)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 cepas)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3-27,2
14,3-30,02
14,9-23,8
16,2-25,5
Fotocromgenas (Runyon I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0-14,6
13,1-39,9
Escotocromgenas (Runyon II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4-30,5
17,2-32,62
No cromgenas (Runyon III)

M. avium (2 cepas)
CDC 569, CDC 1155
M. avium (2 cepas)
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 cepas)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
100
10
10,4-12,5
13,8-14,8
9,2-13,63
10,93-15,7
100
10
8,5-12,1
11,0-12,9
Micobacterias de crecimiento rpido (Runyon IV)

100
10
2,2-2,3
2,6-3,2
Se analiz cada microorganismo por triplicado y se obtuvieron las medias salvo que se indique lo contrario. Los
valores mostrados son las medias de las series.
Uno de tres frascos no mostr crecimiento; el valor mostrado es la media de dos frascos.
3 Uno de tres frascos estaba contaminado; el valor mostrado es la media de dos frascos.
2
CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO: BacT/ALERT (CON AGITACIN)

Se realizaron estudios internos de siembra utilizando los siguientes microorganismos de estudio a niveles de
10 UFC/frasco y 100 UFC/frasco en sangre humana de una poblacin adulta sana.
Resultados de los frascos de cultivo BacT/ALERT MB en el instrumento BacT/ALERT (con agitacin)

Inculo
(UFC/frasco)
Tiempo de deteccin (das)1

BacT/ALERT MB
100
10
100
10
100
10
100
10
14,1-16,7
14,6-18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Fotocromgenas (Runyon I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9-14,42
8,9-16,82
Escotocromgenas (Runyon II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8-37,2
21,3-43,23
100
10
100
10
7,5-11,5
8,5-11,8
8,4
9,32
M. intracellulare (4 cepas)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0-11,6
9,9-13,1
Micobacterias de crecimiento rpido (Runyon IV)

100
10
2,1
2,3
Micobacteria
Complejo TB
M. tuberculosis (3 cepas)
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
M. bovis CDC 423
M. bovis CDC 8131
No cromgenas (Runyon III)

M. avium (3 cepas)
CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Se analiz cada microorganismo por triplicado y se obtuvieron las medias. Los valores mostrados son un intervalo
de estas medias, salvo en los casos de M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 y M. avium CDC 440, para los que
slo se muestra la media.
2 Uno de tres frascos estaba contaminado; el valor mostrado es la media de dos frascos.
3 Uno de tres frascos no mostr crecimiento; el valor mostrado es la media de dos frascos.
NOTA: Puede solicitarse a bioMrieux una lista de microorganismos raros y exigentes recuperados con los frascos
de cultivo BacT/ALERT4.
BIBLIOGRAFA
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
DISPONIBILIDAD
bioMrieux
BacT/ALERT MB
25/caja
251011
5 viales/caja
259877
Para obtener asistencia tcnica en Estados Unidos, pngase en contacto con el Servicio tcnico de bioMrieux en
el nmero de telfono 1-800-682-2666. Fuera de Estados Unidos, pngase en contacto con el representante local
de bioMrieux.
bioMrieux, el logotipo azul, BacT/ALERT y MB/BacT son marcas comerciales utilizadas, en trmite y/o registradas
de bioMrieux SA o de una de sus filiales.
Amphyl es una marca registrada de Linden Corporation.
ATCC es una marca registrada de la American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Julio de 2008
BacT/ALERT MB
FRANAIS
43-02494
SECTION MISE JOUR

Conserver les flacons de culture BacT/ALERT MB et la solution denrichissement MB/BacT Enrichment Fluid entre
15 et 30 C. Protger de la lumire directe du soleil.
Se reporter au glossaire des symboles en fin de notice.
APPLICATION
Les flacons de culture BacT/ALERT MB, auxquels est ajoute la solution denrichissement MB/BacT, sont un milieu
de culture non-slectif pour la culture qualitative et lisolement des mycobactries dans les chantillons sanguins
lorsquils sont utiliss avec le systme de dtection des mycobactries MB/BacT (sans agitation) et le systme de
dtection des mycobactries BacT/ALERT (avec agitation).
RSUM ET EXPLICATION
Les flacons de culture BacT/ALERT MB combins la solution denrichissement MB/BacT sont conus pour la culture
de Mycobacterium sp. habituellement isole partir du sang. Le milieu prend en charge la croissance dautres
organismes arobies tels que la levure, les champignons et les bactries. Ce systme complet inclut un agent lytique
(saponine), du polyanthol-sulfonate de sodium (SPS) et dautres supplments de milieux qui liminent ltape de
traitement, empchent la coagulation du sang et favorisent la croissance des mycobactries. Un volume sanguin de 3
ml 5 ml peut tre inocul directement dans le flacon de culture. Les flacons inoculs sont placs dans linstrument
o ils sont incubs (35 C 37 C) et suivis en continu pour la croissance microbienne.
PRINCIPE DU TEST
Le systme de dtection des mycobactries MB/BacT et les systmes de dtection microbienne BacT/ALERT reposent
sur un dtecteur colorimtrique et sur la lumire rflchie pour valuer la prsence et la quantit de dioxyde de
carbone (CO2) dissous dans le milieu de culture.1 Si des microorganismes sont prsents dans lchantillon test,
du dioxyde de carbone est produit au fur et mesure que les organismes mtabolisent les substrats dans le milieu
de culture. Lorsque la croissance des microorganismes produit du CO2, la couleur du dtecteur permable aux
gaz install au fond de chaque flacon de culture passe du bleu-vert au jaune. La couleur plus claire entrane une
augmentation des units de rflectance suivies par le systme. La rflectance des flacons est suivie et enregistre
par linstrument toutes les 10 minutes.
RACTIFS
Pour usage diagnostique in vitro.
AVERTISSEMENT : Pour rduire les risques dexposition accidentelle aux agents infectieux, des prcautions
supplmentaires doivent tre prises en utilisant le acon de culture BacT/ALERT MB dans le systme de
dtection microbienne BacT/ALERT. Il est vivement recommand de placer linstrument dans un laboratoire
servant pour la culture systmatique de M. tuberculosis. Pour les activits impliquant la multiplication
et la manipulation de M. tuberculosis ou despces du genre Mycobacterium en culture, le recours des
pratiques de niveau 3 en matire de scurit biologique, du matriel et des installations de connement
est prconis.2
PRCAUTION : Manipuler les chantillons et les acons de culture inoculs comme sils taient susceptibles
de transmettre des agents infectieux. Tous les acons de culture inoculs, les aiguilles de prlvement
dchantillons et les systmes de prlvement du sang doivent tre dcontamins conformment aux
procdures en vigueur dans ltablissement.3
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT MB (code de couleur noir) Les flacons de culture striles usage unique BacT/ALERT MB contiennent
29 ml de milieu et un dtecteur de dioxyde de carbone interne qui sert dindicateur de la croissance microbienne.
La formulation du milieu est la suivante : milieu liquide Middlebrook 7H9 (0,47 % m/v), hydrolysat pancratique
de casine (0,1 % m/v), de glycrol (1,0 % m/v), de polyanthol-sulfonate de sodium (0,025 % m/v) dans de leau
purifie. Les flacons abritent une atmosphre de CO2 dans loxygne et lazote, sous vide. La composition des milieux
peut tre ajuste pour rpondre des exigences de performances spcifiques.
PRCAUTION : Les acons de culture BacT/ALERT MB sont incubs 37 C ce qui empche potentiellement
lisolement des mycobactries exigeant dautres tempratures dincubation (p. ex. M. marinum, M. ulcerans,
M. haemophilum). Les isolats suivants ont t dtects positifs dans linstrument MB/BacT (sans agitation) et
dans linstrument BacT/ALERT (avec agitation), avec le acon de culture BacT/ALERT MB pendant des tudes
internes ; M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M.
bovis, M. gordonae et M. simiae.
PRCAUTION : Il est possible que certaines mycobactries rares et exigeantes ne se dveloppent pas ou se
dveloppent lentement dans le milieu du acon de culture BacT/ALERT MB. Si des mycobactries rares et
exigeantes ncessitant des conditions de culture et des milieux spcialiss sont suspectes, il faut envisager
dautres mthodes disolement ou prolonger la dure dincubation.
PRCAUTION : Plus rarement, il est possible que des organismes se dveloppent dans le milieu du acon de
culture BacT/ALERT MB, mais ne produisent pas sufsamment de dioxyde de carbone pour que la raction soit
dtermine positive. Par exemple, les chantillons provenant de patients sous traitement antimycobactrien
peuvent prsenter une croissance altre.
MB/BacT
Enrichment Fluid
Les flacons de solution MB/BacT Enrichment Fluid contiennent un volume total de 5,5 ml chacun. La solution
denrichissement MB/BacT contient de lalbumine srique bovine (14,5 % m/v), du chlorure de sodium (2,5 %
m/v), de lacide olique (0,174 % m/v), de la saponine (4,4 % m/v) dans de leau purifie.
Autre matriel ncessaire

Systme de dtection des mycobactries MB/BacT ou systme de dtection microbienne BacT/ALERT
Middlebrook 7H11 ou autre milieu de culture de mycobactries ou milieu luf
Incubateur CO2, 37 C 2 C
Aiguilles et seringues striles
Dsinfectant mycobactricide
Dispositif de prlvement sanguin
Local de scurit biologique
Gants striles usage unique
Blouses usage unique
Masques usage unique
Rcipients pour dchets risque biologique, adapts aux matriaux potentiellement contamins par des agents
infectieux
Organismes de contrle de qualit
Matriel disponible auprs de bioMrieux

Systme de dtection des mycobactries MB/BacT et systmes de dtection microbienne BacT/ALERT
Conservation
Conserver les flacons de culture BacT/ALERT MB et de solution denrichissement MB/BacT temprature ambiante
(15 30 C). Protger de la lumire directe du soleil. Une date de premption figure sur ltiquette de chaque flacon.
Ne pas utiliser les flacons de culture BacT/ALERT MB ou les flacons de solution denrichissement au-del du dernier
jour du mois indiqu. Porter les flacons temprature ambiante avant utilisation.
APPAREILS
Avant lemploi, consulter le manuel dutilisation du systme de dtection microbienne BacT/ALERT appropri.
PRLVEMENT ET PRPARATION DES CHANTILLONS

La mthode de prlvement est extrmement importante pour les chantillons destins lhmoculture. Les
procdures de transport et de prlvement appropries pour les chantillons sont dcrites dans le manuel de
microbiologie clinique.3 Il est indispensable de bien dsinfecter la peau pour rduire le risque de contamination.
bioMrieux recommande de placer les flacons de culture inoculs dans le systme de dtection microbienne BacT/
ALERT ds que possible aprs le prlvement. Les flacons de culture inoculs dont lentre est diffre doivent tre
maintenus temprature ambiante jusqu leur chargement dans lincubateur.
PROCDURE DE TEST AVEC UN FLACON DE CULTURE BacT/ALERT MB

Remarques prliminaires et prcautions
1. CHANTILLONS CLINIQUES POTENTIELLEMENT INFECTIEUX. Respecter les prcautions universelles lors de
la manipulation et de llimination de produits infectieux. Manipuler les chantillons et les cultures inocules
comme sils taient susceptibles de transmettre des agents infectieux.
2. Pour rduire le risques de fuite lors de linoculation de lchantillon dans les flacons de culture, utiliser des
seringues munies daiguilles fixes.
3. Tous les flacons de culture inoculs, les aiguilles de prlvement dchantillons et les systmes de prlvement du
sang doivent tre dcontamins conformment aux procdures en vigueur dans ltablissement.3
4. Toujours transporter les flacons de culture inoculs dans un bloc ou dans un panier. En cas dcoulement ou
de bris des flacons, un arosol de mycobactries (y compris M. tuberculosis) ou dautres bactries risque de se
produire. Respecter les directives de scurit de ltablissement et du CDC/NIH.2 Depuis lapparition du syndrome
dimmunodficience acquise/virus de limmunodficience humaine, les mycobactrmies provoques par M.
tuberculosis se produisent plus frquemment et le sang est dsormais une source de transmission potentielle
en laboratoire.2
5. La manipulation du complexe M. tuberculosis en culture ncessite le recours des pratiques de niveau 3 en
matire de scurit biologique, un matriel et des installations de confinement.2
6. Veiller viter toute contamination pendant la prparation du flacon, le prlvement et linoculation de
lchantillon patient dans le flacon de culture BacT/ALERT MB.
7. La solution denrichissement MB/BacT contient des composants ncessaires pour assurer une croissance optimale
des mycobactries et un agent lytique destin la lyse des cellules sanguines. Ce produit doit tre ajout tous
les flacons de culture BacT/ALERT MB.
8. La solution denrichissement MB/BacT peut tre ajoute jusqu 24 heures avant ou aprs linoculation du flacon
avec lchantillon sanguin. Respecter les pratiques de niveau 3 en matire de scurit biologique si la solution
denrichissement est ajoute aprs linoculation du sang.2
9. Ces flacons de culture doivent tre utiliss uniquement par des techniciens de laboratoire spcialement forms.
Prparation du acon
REMARQUE : Prendre soin de ne pas contaminer lchantillon patient lors de la prparation et de linoculation des
flacons.
Avant lemploi, vrifier labsence de dgts ou de signes de dtrioration des flacons de culture BacT/ALERT MB
(dcoloration). Les flacons montrant des traces de dommage, de fuite ou de dtrioration doivent tre mis au rebut.
Les milieux dans les flacons non perturbs doivent tre transparents. Ne pas utiliser de flacon contenant un milieu
prsentant un trouble, un dtecteur jaune ou une pression gazeuse excessive, car cela tmoigne dune possible
contamination. Inspecter galement tous les flacons de solution denrichissement MB/BacT pour vrifier labsence
de dommage ou de contamination. Ne pas utiliser les flacons de solution denrichissement MB/BacT montrant un
trouble.
1. tiqueter le flacon de culture en indiquant les informations patient. Les icnes de ltiquette du flacon ( ,#, )
peuvent tre dfinies par lutilisateur.
2. Retirer la capsule en plastique du flacon de culture et dsinfecter avec un couvillon imprgn dalcool ou
quivalent. Laisser scher lair libre.
3. La solution denrichissement est fournie sparment et doit tre ajoute au flacon dhmoculture pour la croissance
des mycobactries. La solution denrichissement peut tre ajoute dans les 24 heures suivant linoculation de
lchantillon ou, si linoculation de lchantillon est effectue au chevet du patient, la solution peut tre ajoute
aprs la rception des flacons inoculs en laboratoire.
Retirer la capsule en plastique du flacon de solution denrichissement et dsinfecter avec un couvillon imprgn
dalcool ou quivalent. Laisser scher lair libre.
Ajouter strilement 1 ml de solution denrichissement chaque flacon de culture BacT/ALERT MB.
Employer une technique aseptique judicieuse pour viter la contamination de la solution denrichissement et du
milieu dans le flacon de culture.
REMARQUE : Si la solution denrichissement est ajoute aprs linoculation de lchantillon sanguin, loprateur
doit effectuer cette tape dans un local de scurit biologique en portant les vtements de protection appropris
conformment aux normes de scurit dfinies par le CDC/NIH quant aux directives de niveau 3 en matire
de scurit biologique.2 Pour viter une contamination croise, utiliser une seringue neuve avec chaque flacon
contenant du sang.
Procdure dinoculation par prlvement direct

1. Avant linoculation, dsinfecter le capuchon du flacon de culture BacT/ALERT MB laide dun couvillon imprgn
dalcool ou quivalent. Laisser scher lair libre.
2. Prlever le sang en utilisant un jeu daiguilles ailettes et ladaptateur pour prlvement de sang BacT/ALERT et
inoculer directement dans le flacon de culture BacT/ALERT MB au chevet du patient (3 5 ml par flacon). Pour
viter une surinoculation, surveiller le volume sanguin admis dans le flacon de culture en saidant des repres
incrments de 5 ml sur ltiquette du flacon.
3. Aprs linoculation, tamponner les capuchons des flacons avec de la gaze imprgne dAmphyl 2 % ou dun
autre agent mycobactriocide et laisser scher lair libre.
4. Transfrer immdiatement les flacons de culture inoculs au laboratoire microbiologique.
Procdure dinoculation des tubes de prlvement sanguin

1. Le sang peut galement prlev dans un tube hparin ou SPS strile et inocul dans le flacon de culture BacT/
ALERT MB en laboratoire. Aucun traitement pralable de lchantillon nest requis. Le sang prlev dans lEDTA est
inacceptable car lEDTA inhibe la croissance mycobactrienne mme en quantits infinitsimales.
2. Dsinfecter le capuchon du tube de prlvement sanguin et du flacon de culture BacT/ALERT MB laide dun
couvillon imprgn dalcool ou quivalent. Laisser le septum scher lair libre avant linoculation de lchantillon
sanguin.
3. En utilisant une technique aseptique, retirer 3 5 ml du tube de prlvement laide dune seringue strile et
inoculer dans le flacon de culture.
4. Aprs linoculation, tamponner les capuchons des flacons avec de la gaze imprgne dAmphyl 2 % ou dun
autre agent mycobactriocide et laisser scher lair libre.
INCUBATION ET SUIVI
PRCAUTION : Des prcautions simposent lors du repiquage des acons de culture positifs car ceux-ci peuvent
prsenter un trop-plein ou contenir des organismes dgageant une quantit importante de gaz. Le contenu
des acons de culture positifs peut tre soumis une pression interne accrue. Ventiler temporairement les
acons de culture positifs avant la coloration ou llimination pour librer le gaz produit par le mtabolisme
microbien.
1. Charger les flacons de culture inoculs BacT/ALERT MB dans le systme de dtection de mycobactries MB/BacT
(sans agitation) ou dans le systme de dtection des mycobactries BacT/ALERT (avec agitation) en respectant
les instructions du manuel dutilisation.
2. Une fois chargs dans linstrument, les flacons de culture BacT/ALERT MB doivent y rester pendant au moins 42
jours ou ds quils ont t dtermins positifs.
Les procdures suivantes exigent dappliquer les pratiques de niveau 3 en matire de scurit biologique et
dutiliser le matriel et les installations de connement.2
3. Lorsque linstrument indique quune cellule contient un flacon positif, retirer le flacon conformment aux
procdures fournies dans le manuel dutilisation.
4. taler et repiquer tous les flacons dtermins positifs pour la dtection de bacilles acido-alcoolo-rsistants.
Dans un local de scurit biologique, mlanger le contenu du flacon, dsinfecter le bouchon du flacon laide
dun couvillon imprgn dalcool ou quivalent, et laisser scher lair libre. Prlever lchantillon destin la
coloration acido-alcoolo-rsistante et au repiquage en utilisant une seringue et une aiguille. Dsinfecter le bouchon
du flacon laide dun agent mycobactriocide aprs le repiquage. Si ltalement acido-alcoolo-rsistant se rvle
positif, passer aux procdures spcifiques didentification des mycobactries mises en uvre par le laboratoire. Si
ltalement est ngatif pour le bacille acido-alcoolo-rsistant mais rvle la prsence dautres microorganismes,
une coloration de Gram doit tre effectue. Si ltalement acido-alcoolo-rsistant et la coloration de Gram sont
tous deux ngatifs, ce qui indique la possibilit dun faux positif, recharger le flacon dans linstrument jusqu
lobtention dune croissance du repiquage ou dun reclassement en tant que positif ou ngatif. taler et repiquer
les cultures initialement dtermines fausses positives puis reclasses positives.
5. Si les organismes non-mycobactriens sont observs sur la coloration de Gram, un autre chantillon de culture
peut tre obtenu le cas chant. La possibilit dune septicmie bactrienne doit galement tre envisage.
6. Les cultures ngatives peuvent tre vrifies par talement et/ou repiquage avant leur limination en tant que
cultures ngatives.
7. Ne pas rutiliser les acons de culture BacT/ALERT. liminer les flacons de culture BacT/ALERT inoculs
conformment au protocole du laboratoire. Lautoclavage et/ou lincinration des flacons BacT/ALERT inoculs
est adquat.2
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CARACTRISTIQUES DE PERFORMANCE BacT/ALERT (AVEC AGITATION)
RAPPORTS DES RSULTATS

Rsultats
Rapport
Signal +, talement AFB +

Signal +, talement AFB ,
coloration de Gram +
Signal +, talement AFB ,
coloration de Gram
AFB positif ; en instance didentification

Pas de rapport ; ou chantillon contamin par des organismes nonmycobactriens ; impossible de dterminer la prsence/absence dAFB
Pas de rapport. Repiquer pour dterminer les faux positifs ventuels
Des tudes internes densemencement ont t effectues en utilisant les organismes tests suivants des
concentrations 100 UFC/flacon et 10 UFC/flacon en utilisant du sang humain prlev chez des donneurs adultes
sains.
Rsultats de BacT/ALERT MB dans linstrument BacT/ALERT (avec agitation)
Un Certificat de conformit est fourni avec chaque carton de flacons de culture BacT/ALERT MB indiquant une
croissance satisfaisante de M. avium ATCC 25291 et de M. intracellulare ATCC 13950. Ds rception, un contrle
de qualit des nouveaux lots de ractifs ou de flacons de culture BacT/ALERT MB peut tre effectu. Se reporter
au document M22-A3 du CLSI/NCCLS pour connatre les organismes de contrle de qualit appropris. Suivre la
procdure dinoculation et de prparation des flacons :
14,1 - 16,7
14,6 - 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Photochromognes (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 - 14,42
8,9 - 16,82
Scotochromognes (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 - 37,2
21,3 - 43,23
100
10
100
10
7,5 - 11,5
8,5 - 11,8
8,4
9,32
M. intracellulare (4 souches)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 - 11,6
9,9 - 13,1
Bactries croissance rapide (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
M. bovis CDC 8131
LIMITES DU TEST
En pratique, les nombreux paramtres intervenant dans le dpistage des mycobactries ne permettent pas daffirmer
avec certitude que les rsultats obtenus sont dus uniquement aux qualits propres dun milieu de culture ou dun
systme de dtection.
1. Les cultures obtenues dans le cadre dun diagnostic primaire faisant suite un traitement rcemment dbut
peuvent produire des rsultats ngatifs.
2. Lisolement des mycobactries dans les flacons de culture BacT/ALERT MB est fonction de la qualit de lchantillon
prlev et du nombre dorganismes cultivables prsents dans le volume dchantillon. Comme le milieu nest
pas slectif et ne contient pas dantibiotiques, il est susceptible de favoriser la croissance des microorganismes
prsents.
3. Plus rarement, la prsence de leucocytes en trs grand nombre dans lchantillon sanguin peut entraner des
rsultats positifs avec le flacon de culture BacT/ALERT MB. Ces chantillons seront dtermins ngatifs par
repiquage ou talement.
4. Les organismes sont souvent trs peu nombreux. Il est gnralement recommand de prlever des chantillons
sur une priode de trois jours conscutifs.
5. La morphologie et la pigmentation des colonies ne doivent tre dtermines que sur milieu solide.
6. Les flacons de culture BacT/ALERT MB signals positifs peuvent contenir une ou plusieurs espces de mycobactries
et/ou dautres espces non-mycobactriennes. Dans les cultures mycobactriennes mixtes en milieu liquide,
un microorganisme croissance lente peut tre devanc par un microorganisme croissance rapide, ou la
culture peut tre mise au rebut ds que le microorganisme croissance rapide est dtect. Lidentification des
mycobactries prsentes ncessite un repiquage ainsi que la mise en uvre de procdures supplmentaires
didentification des organismes prsents. La constance de la morphologie microscopique dans le flacon de culture
BacT/ALERT na pas t tablie.
7. Les mycobactries peuvent avoir une acido-alcoolo-rsistance diffrente selon la souche, lge de la culture et
dautres paramtres. Tous les flacons avec un signal positif de linstrument doivent tre repiqus sur les milieux
mycobactriens slectifs et non-slectifs. Les non-mycobactries peuvent se multiplier plus rapidement que les
mycobactries prsentes.
CARACTRISTIQUES DE PERFORMANCE MB/BacT (SANS AGITATION)

Des tudes internes densemencement ont t effectues dans un instrument MB/BacT (sans agitation) en utilisant
les organismes tests suivants des concentrations 10 UFC/flacon et 100 UFC/flacon en utilisant du sang
humain prlev chez des donneurs adultes sains.
Rsultats de BacT/ALERT MB dans linstrument MB/BacT (sans agitation)

Inoculum
(UFC/ acon)
Temps de dtection (en jours)1

BacT/ALERT MB
Complexe TB
M. tuberculosis (4 souches)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 souches)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 - 27,2
14,3 - 30,02
14,9 - 23,8
16,2 - 25,5
Photochromognes (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 - 14,6
13,1 - 39,9
Scotochromognes (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 - 30,5
17,2 - 32,62
100
10
100
10
10,4 - 12,5
13,8 - 14,8
9,2 - 13,63
10,93 - 15,7
100
10
8,5 - 12,1
11,0 - 12,9
100
10
2,2 - 2,3
2,6 - 3,2
Bactries croissance rapide (Runyoun IV)

100
10
100
10
100
10
100
10
M. bovis CDC 423
1. Ajouter 1,0 ml de solution denrichissement MB/BacT chaque flacon de culture BacT/ALERT MB ncessaire
pour le test.
2. Inoculer dans les flacons reprsentatifs de 5,0 ml des organismes de contrle dilus dans 103 UFC/ml de sang
de mouton strile et dfibrin. Repiquer sur des botes Middlebrook 7H11 pour dterminer la viabilit et la
numration.
3. Si les rsultats obtenus correspondent aux rsultats attendus, utiliser les flacons restants pour tester les chantillons
cliniques. Si les rsultats obtenus diffrent des rsultats attendus, contacter le service client de bioMrieux.
Nonchromognes (Runyoun III)

M. avium (2 souches)
CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 souches)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
Temps de dtection (en jours)1

BacT/ALERT MB
Complexe TB
M. tuberculosis (3 souches)
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
CONTRLE DE QUALIT
Mycobactrie
Inoculum
(UFC/ acon)
Mycobactrie
Nonchromognes (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Chaque organisme a t test en triple et les moyennes ont t calcules. Les valeurs indiques correspondent
une plage de ces moyennes, sauf M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 et M. avium CDC 440, o seule la moyenne
est donne.
2 Lun des trois flacons est contamin ; la valeur indique est la moyenne des valeurs des deux autres flacons.
3 Lun des trois flacons na prsent aucune croissance ; la valeur indique est la moyenne des valeurs des deux
autres flacons.
REMARQUE : La liste des organismes rares et exigeants isols avec les flacons de culture BacT/ALERT est disponible
sur demande auprs de bioMrieux.4
RFRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
CONDITIONNEMENT
bioMrieux
BacT/ALERT MB
25 par bote
251011
5 flacons par coffret
259877
Pour toute assistance technique aux tats-Unis, contacter le service clientle de bioMrieux au +1 800 682 2666.
Pour les autres pays, contacter un reprsentant local de bioMrieux.
bioMrieux, le logo bleu, BacT/ALERT et MB/BacT sont des marques de commerce utilises, en attente dhomologation
et/ou dposes de bioMrieux SA ou de lune de ses filiales.
Amphyl est une marque dpose de Linden Corporation.
ATCC est une marque dpose de American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Juillet 2008
1Chaque
organisme a t test en triple et les moyennes ont t calcules sauf mention contraire. Les valeurs
obtenues sont les moyennes des rplicats.
2Lun des trois flacons na prsent aucune croissance ; la valeur indique est la moyenne des valeurs des deux
autres flacons.
3Lun des trois flacons est contamin ; la valeur indique est la moyenne des valeurs des deux autres flacons.
7/9/08 4:14:53 PM
BacT/ALERT MB
ITALIANO
43-02494
INDICA SEZIONE RIVISTA

Conservare i flaconi BacT/ALERT MB e MB/BacT Enrichment Fluid ad una temperatura di 15-30C. Proteggere
dalla luce diretta del sole.
Consultare il glossario dei simboli alla fine della scheda tecnica.
USO PREVISTO
I flaconi di coltura BacT/ALERT MB con laggiunta del fluido di arricchimento MB/BacT, se utilizzati con il sistema
di rilevazione micobatterica MB/BacT (senza agitazione) e il sistema di rilevazione batterica BacT/ALERT (con
agitazione), un terreno di coltura non selettivo per la coltura qualitativa e il recupero di micobatteri dai campioni
di sangue.
RIASSUNTO E SPIEGAZIONE
I flaconi di coltura BacT/ALERT MB in combinazione con il fluido di arricchimento MB/BacT sono progettati per la
coltura del Mycobacterium sp. comunemente isolato dal sangue. Il terreno supporta la crescita di altri organismi
aerobi, inclusi lieviti, funghi e batteri. Il sistema completo include un agente litico (Saponina), polianetolsulfonato
di sodio (SPS) e altri supplementi per il terreno che eliminano la fase di processazione, evitando la coagulazione
del sangue e potenziando la crescita dei micobatteri. possibile inoculare un volume di sangue pari a 3-5 ml
direttamente nel flacone di coltura. I flaconi inoculati sono posizionati nello strumento per lincubazione a 35-37C
e la crescita microbica continuamente monitorata.
PRINCIPIO DEL TEST

Il sistema di rilevazione micobatterica MB/BacT e i sistemi di rilevazione microbica BacT/ALERT utilizzano un sensore
colorimetrico e la luce riflessa per rilevare la presenza e produzione di anidride carbonica (CO2) dissolta nel terreno
di coltura.1 Se nel campione di sangue sono presenti microrganismi, viene prodotta anidride carbonica a seguito
della metabolizzazione dei substrati del terreno di coltura. La produzione di CO2 determinata dalla crescita dei
microrganismi fa s che il sensore gaspermeabile verde-azzurro presente sul fondo di ogni flacone di coltura assuma
una colorazione gialla. La colorazione pi chiara determina un aumento delle unit di riflettanza monitorate dal
sistema. La riflettanza del flacone viene monitorata e registrata dallo strumento ogni 10 minuti.
REAGENTI
Per uso diagnostico in vitro.
AVVERTENZA: per ridurre il rischio di esposizione accidentale agli agenti infettivi, adottare precauzioni
aggiuntive durante lutilizzo del acone BacT/ALERT MB con il sistema di rilevazione microbica BacT/ALERT.
Si consiglia vivamente di posizionare lo strumento in un laboratorio usato per la coltura di routine di M.
tuberculosis. Per attivit che comprendono la manipolazione ed il rischio di diffusione dei M. tuberculosis
o Mycobacterium sp. cresciuti in coltura, sono necessarie infrastrutture, apparecchiature di contenimento e
procedure di biosicurezza livello 3.2
ATTENZIONE: trattare i campioni e i aconi di coltura inoculati come potenzialmente infetti. Tutti i aconi di
coltura inoculati, gli aghi per il prelievo dei campioni e i dispositivi per il prelievo del sangue devono essere
decontaminati in conformit alle procedure interne del laboratorio.3
BacT/ALERT
MB
BacT/ALERT MB (codice colore: nero) - I flaconi di coltura monouso sterili BacT/ALERT MB contengono 29 ml di
terreno ed un sensore interno che rileva lanidride carbonica come indicatore di crescita microbica. La formulazione
del terreno consiste in brodo Middlebrook 7H9 (0,47% p/v), digerito pancreatico di caseina (0,1% p/v), glicerolo
(1,0% p/v), polianetolsulfonato di sodio (0,025% p/v) in acqua purificata. I flaconi contengono unatmosfera di CO2
in ossigeno e azoto sotto vuoto. La composizione del terreno pu essere corretta ed adeguata alle performance
specifiche richieste.
ATTENZIONE: i aconi BacT/ALERT MB sono incubati a 37C il che potenzialmente preclude il recupero
di micobatteri che richiedono temperature di incubazione diverse (es. M. marinum, M. ulcerans e M.
haemophilum). I seguenti isolati sono stati rilevati positivi nello strumento MB/BacT (senza agitazione) e
nello strumento BacT/ALERT (con agitazione), con il acone di coltura BacT/ALERT MB durante studi interni;
M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M.
gordonae e M. simiae.
ATTENZIONE: possibile che alcuni rari micobatteri con particolari esigenze non crescano o crescano
lentamente nel acone BacT/ALERT MB. Qualora si sospetti la presenza di questi microrganismi che richiedono
condizioni e terreni specici, necessario considerare luso di metodi alternativi di recupero o un tempo di
incubazione pi lungo.
ATTENZIONE: raramente, possibile riscontrare microrganismi che crescono nei aconi BacT/ALERT MB, senza
produrre una quantit di anidride carbonica sufciente a determinare una positivit. Per esempio, i campioni
di pazienti trattati con agenti antimicobatterici possono evidenziare una crescita minore.
MB/BacT
Enrichment Fluid
Ciascun flacone di MB/BacT Enrichment Fluid ha un volume massimo di riempimento di 5,5 ml. Il fluido di
arricchimento MB/BacT contiene sieroalbumina bovina (4,4% p/v), cloruro di sodio (2,5% p/v), acido oleico
(0,174% p/v), saponina (4,4% p/v) in acqua purificata.
Altri materiali necessari

Sistema di rilevazione micobatterica MB/BacT o sistema di rilevazione microbica BacT/ALERT
Brodo Middlebrook 7H11 o un altro terreno a base duovo o agar per micobatteri
Termostato CO2, 37C 2C
Siringhe e aghi sterili
Disinfettante micobattericida
Dispositivo per il prelievo del sangue
Cappa di sicurezza biologica
Guanti sterili monouso
Camici monouso
Maschere monouso
Contenitori per rifiuti a rischio biologico adatti a materiali potenzialmente contaminati con agenti infettivi
Ceppi per Controllo di Qualit
Materiali acquistabili da bioMrieux

Sistema di rilevazione micobatterica MB/BacT e sistema di rilevazione microbica BacT/ALERT
Istruzioni per la conservazione

Conservare i flaconi BacT/ALERT MB e il fluido di arricchimento MB/BacT a temperatura ambiente (15-30C). Tenere
al riparo dalla luce diretta del sole. Sulletichetta di ogni flacone stampata la data di scadenza. Non usare i flaconi
BacT/ALERT MB o di fluido di arricchimento oltre lultimo giorno del mese indicato. Prima delluso, attendere che i
flaconi siano a temperatura ambiente.
STRUMENTI
Prima delluso, leggere attentamente il manuale duso del sistema di rilevazione microbica BacT/ALERT utilizzato.
PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI

La corretta raccolta dei campioni estremamente importante quando si prelevano campioni di sangue per
coltura. Consultare il Manual of Clinical Microbiology3 per informazioni relative alla corretta raccolta dei campioni
e alle procedure di trasporto. imperativo eseguire una corretta disinfezione della pelle per ridurre il rischio di
contaminazione.
bioMrieux consiglia di collocare i flaconi di coltura inoculati nel sistema di rilevamento microbico BacT/ALERT il pi
presto possibile dopo il prelievo. Nel caso si ritardasse linserimento dei flaconi di coltura inoculati, conservare gli
stessi a temperatura ambiente fino allinserimento nello strumento.
PROCEDURA OPERATIVA CON FLACONI BacT/ALERT MB

Commenti preliminari e precauzioni
1. CAMPIONE POTENZIALMENTE INFETTIVO. Osservare le precauzioni universalmente adottate per la manipolazione
e leliminazione di materiali infettivi. Trattare i campioni e le colture inoculate come potenzialmente infetti.
2. Per minimizzare eventuali perdite durante linoculo dei campioni nei flaconi di coltura, utilizzare siringhe con
aghi non staccabili.
3. Tutti i flaconi di coltura inoculati, gli aghi per il prelievo dei campioni e i dispositivi per il prelievo del sangue
devono essere decontaminati in conformit alle procedure interne del laboratorio.3
4. Trasportare sempre i flaconi di coltura inoculati in un apposito rack o cestello. Eventuali perdite o rotture possono
dare luogo ad un aerosol di micobatteri (incluso M. tuberculosis) o altri batteri. Seguire le linee guida di sicurezza
del laboratorio e del CDC/NIH.2 Con laumento della diffusione del virus dellimmunodeficienza umana/AIDS i casi
di micobatteremia causata da M. tuberculosis sono maggiormente frequenti ed il sangue viene ora considerato
una potenziale fonte di trasmissione in laboratorio.2
5. Per la manipolazione di microrganismi del complesso M. tuberculosis cresciuti in coltura, il laboratorio deve essere
conforme alle norme del livello di biosicurezza 3 e disporre di infrastrutture e sistemi di contenimento appropriati.2
6. Prestare attenzione a impedire la contaminazione durante la preparazione del flacone, il prelievo del campione
dal paziente e linoculo del campione del paziente nel flacone BacT/ALERT MB.
7. Il fluido di arricchimento MB/BacT contiene i componenti necessari a garantire la crescita ottimale dei micobatteri
e un agente litico per la lisi dei globuli rossi. necessario aggiungere il prodotto a tutti i flaconi BacT/ALERT MB.
8. possibile aggiungere il fluido di arricchimento MB/BacT fino a 24 ore prima o dopo linoculo del campione di
sangue nel flacone. Se il fluido di arricchimento viene aggiunto dopo linoculo del sangue, seguire le norme di
sicurezza conformi al livello di biosicurezza 3.2
9. Questi flaconi di coltura devono essere utilizzati esclusivamente da personale di laboratorio addestrato.
Preparazione dei aconi

NOTA: evitare la contaminazione durante la preparazione del flacone e linoculo del campione.
Prima delluso, verificare se i flaconi BacT/ALERT MB presentano segni di danni o deterioramento (alterazione del
colore). Scartare i flaconi che presentano segni di danneggiamento, perdite o deterioramento. Il terreno nei flaconi
dovrebbe essere chiaro. Non usare i flaconi nel caso in cui presentino terreni torbidi, eccessiva pressione di gas o
un sensore di colore giallo, in quanto questi sono segni di eventuale contaminazione. Controllare visivamente se
i flaconi del fluido di arricchimento MB/BacT sono danneggiati o contaminati. Non utilizzare i flaconi di fluido di
arricchimento MB/BacT che presentano un aspetto torbido.
1. Apporre al flacone di coltura letichetta recante i dati del paziente. Le icone sulletichetta del flacone ( ,#, )
possono essere definite dallutente.
2. Rimuovere la chiusura di plastica dal flacone di coltura e disinfettare con un tampone imbevuto dalcool o
disinfettante equivalente. Lasciare asciugare.
3. Il fluido di arricchimento fornito separatamente e deve essere aggiunto al flacone di coltura del sangue per la
crescita dei micobatteri. possibile aggiungerlo entro 24 ore dallinoculo del campione oppure, se linoculo
eseguito al momento del prelievo, possibile aggiungere il fluido di arricchimento in laboratorio, alla ricezione
dei flaconi inoculati.
Rimuovere la chiusura di plastica dal flacone di fluido di arricchimento e disinfettare con un tampone imbevuto
dalcool o disinfettante equivalente. Lasciare asciugare.
Aggiungere asetticamente 1 ml di fluido di arricchimento a ciascun flacone BacT/ALERT MB.
Impiegare una tecnica asettica per evitare la contaminazione del fluido di arricchimento e del terreno nel flacone
di coltura.
NOTA: se il fluido di arricchimento viene aggiunto dopo linoculo del campione di sangue, eseguire loperazione
sotto cappa di sicurezza biologica indossando labbigliamento protettivo adeguato in conformit agli standard
stabiliti da da CDC/NIH per le linee guida di biosicurezza livello 3.2 Per evitare contaminazioni incrociate utilizzare
una siringa nuova per ciascun flacone contenente sangue.
Procedura di inoculo con prelievo diretto

1. Prima di inoculare, disinfettare il flacone BacT/ALERT MB con un tampone imbevuto di alcool o disinfettante
equivalente. Lasciare asciugare.
2. Prelevare il sangue utilizzando una linea di prelievo a farfalla e ladattatore per prelievo ematico BacT/ALERT;
inoculare direttamente allinterno del flacone BacT/ALERT MB presso il paziente (3-5 ml per flacone). Per evitare
di inoculare una quantit eccessiva di sangue, sorvegliare il volume di sangue introdotto nel flacone per mezzo
delle linee di riferimento da 5 ml riportate sul flacone stesso.
3. Dopo linoculo, tamponare la parte superiore del flacone con garza imbevuta di Amphyl al 2% o altri agenti
micobattericidi e lasciare asciugare.
4. Trasferire rapidamente il flacone di coltura inoculato al laboratorio di analisi.
Procedura di inoculo della provetta di prelievo sangue

1. possibile prelevare il sangue in una provetta sterile con SPS o eparina e inocularlo nel flacone BacT/ALERT MB
in laboratorio. Il campione non necessita di alcun trattamento preventivo. Il sangue prelevato con EDTA non
accettabile, poich lEDTA inibisce la crescita micobatterica persino se presente in tracce.
2. Disinfettare la provetta di prelievo e la sommit del flacone BacT/ALERT MB con un tampone imbevuto di alcool o
disinfettante equivalente. Lasciare asciugare il tappo prima di inoculare il campione di sangue.
3. Utilizzando una tecnica asettica, aspirare 3-5 ml dalla provetta di prelievo con una siringa sterile e inoculare nel
flacone di coltura.
4. Dopo linoculo, tamponare la parte superiore del flacone con garza imbevuta di Amphyl 2% o altri agenti
micobattericidi a lasciare asciugare.
INCUBAZIONE E SORVEGLIANZA
ATTENZIONE: necessario prestare attenzione durante la subcoltura di aconi positivi poich possibile che
gli stessi siano stati riempiti in maniera eccessiva o contengano microrganismi con unalta produzione di gas.
I aconi di coltura positivi possono presentare un aumento interno di pressione. I aconi di coltura positivi
devono essere aerati prima di procedere alla colorazione o allo smaltimento per eliminare i gas eventualmente
prodotti durante il metabolismo microbico.
1. Caricare i flaconi BacT/ALERT MB inoculati nel sistema di rilevamento micobatterico MB/BacT (senza agitazione) o nel
sistema di rilevazione micobatterica BacT/ALERT (con agitazione) seguendo le istruzioni fornite nel manuale duso.
2. Una volta caricati i flaconi BacT/ALERT MB nello strumento, lasciarveli per almeno 42 giorni o finch non siano
determinati positivi.
Le seguenti procedure richiedono pratiche, infrastrutture e strumenti di contenimento di livello di biosicurezza 3.2
3. Quando lo strumento indica che una determinata cella contiene un flacone positivo, rimuoverlo seguendo le
procedure illustrate nel manuale duso.
4. Tutti i flaconi determinati positivi devono essere sottoposti a esami microscopici e posti in subcoltura per i test dei
bacilli acido-resistenti (AFB). Sotto la cappa di sicurezza biologica, miscelare il contenuto del flacone, disinfettare
il tappo con un tampone imbevuto di alcool o equivalente e lasciare asciugare. Rimuovere il campione per la
colorazione acido resistente e la subcoltura utilizzando siringa e ago. Dopo la subcoltura, disinfettare il tappo
del flacone con un agente micobattericida. Se lo striscio positivo alla colorazione per bacilli acido-resistenti,
eseguire le procedure specifiche per lidentificazione dei micobatteri adottate nel laboratorio. Se lo striscio
negativo per bacilli acido-resistenti ma rivela la presenza di altri microrganismi, eseguire una colorazione di Gram.
Se la colorazione per bacilli acido-resistenti e quella di Gram sono entrambe negative, possibile che si tratti di
un risultato falsamente positivo; ricaricare quindi il flacone nello strumento fino alla crescita della subcoltura o
alla rideterminazione di positivit o negativit. Le colture inizialmente determinate falsamente positive e giudicate
successivamente positive, devono essere sottoposte a striscio e subcoltura.
5. Se la colorazione di Gram rivela organismi non micobatterici, prelevare un altro campione per eseguirne la coltura.
Considerare anche leventualit di una setticemia batterica.
6. Le colture negative possono essere controllate mediante esame microscopico e/o subcoltura prima di essere
eliminate come negative.
7. Non riutilizzare i aconi BacT/ALERT. Smaltire i flaconi BacT/ALERT inoculati in conformit ai protocolli del
laboratorio. Lautoclavaggio e/o lincenerimento dei flaconi BacT/ALERT inoculati procedura corretta.2
REFERTAZIONE DEI RISULTATI

Risultati
Referto
Segnale +, Esame microscopico AFB +

Segnale +, Esame microscopico AFB -,
colorazione di Gram +
Segnale +, Esame microscopico AFB -,
colorazione di Gram -
Positivo per AFB; in attesa di identificazione

Nessun referto; oppure campioni contaminati con microrganismi diversi
dai micobatteri; impossibile determinare presenza/assenza di AFB.
Nessun referto. Eseguire subcoltura per determinare un eventuale falso
positivo.
CONTROLLO DI QUALIT
Ogni confezione di flaconi BacT/ALERT MB viene fornito di Certificato di Conformit attestante la crescita soddisfacente
di M. avium ATCC 25291 e M. intracellulare ATCC 13950. Dopo il ricevimento possibile eseguire il Controllo
Qualit di nuovi lotti o spedizioni di flaconi BacT/ALERT MB. Consultare CLSI/NCCLS M22-A3 per informazioni sugli
appropriati ceppi di Controllo Qualit. Seguire la procedura di preparazione e inoculo del flacone:
1. Versare 1,0 ml di fluido di arricchimento MB/BacT in ogni flacone BacT/ALERT MB di coltura da testare.
2. Inoculare i flaconi campione con 0,5 ml dei microrganismi di controllo, diluiti a 103 UFC/ml con sangue di montone
defibrinato sterile. Eseguire una subcoltura in piastre con Middlebrook 7H11 per determinarne vitalit e conteggio.
3. Una volta ottenuti i risultati attesi, usare i flaconi rimanenti per testare i campioni clinici. Se non si ottengono i
risultati attesi, rivolgersi allassistenza clienti bioMrieux.
LIMITAZIONI DEL TEST
DISPONIBILIT
In pratica, non possibile controllare le numerose variabili implicate nei test per la ricerca dei micobatteri e avere
cos la certezza assoluta che i risultati ottenuti siano unicamente imputabili a performance corrette o inappropriate
di un terreno di coltura o del sistema di rilevazione.
bioMrieux
1. Le colture ottenute per la diagnosi primaria dopo linizio di una terapia possono produrre risultati negativi.
2. Il recupero di micobatteri nei flaconi BacT/ALERT MB dipende dalla qualit del campione prelevato e dal numero
di microrganismi presenti nel volume del campione. Poich il terreno non selettivo e non contiene antibiotici,
sullo stesso pu crescere qualsiasi microrganismo presente.
3. Raramente, possibile avere flaconi BacT/ALERT MB positivi a causa di unelevata concentrazione dei globuli bianchi
presenti nel campione di sangue. In questo caso, i risultati dello striscio e della subcoltura saranno negativi.
4. I microrganismi sono spesso presenti in quantit esigue. Si raccomanda di prelevare i campioni per tre giorni
consecutivi.
5. La morfologia e la pigmentazione delle colonie dovrebbero essere determinate su terreno solido.
6. I flaconi BacT/ALERT MB con un segnale positivo possono contenere una o pi specie di micobatteri e/o altre
specie diverse dai micobatteri. Nelle colture in brodo di pi di una specie di micobatteri, possibile che una
specie a crescita lenta sia mascherata da una specie a crescita rapida oppure che la coltura sia gettata poco dopo
la rilevazione della specie a crescita rapida. Lidentificazione dei micobatteri presenti richiede una subcoltura e
procedure supplementari volte a identificare i microrganismi presenti. La coerenza della morfologia microscopica
nei flaconi BacT/ALERT non stata stabilita.
7. La acido-resistenza dei micobatteri pu variare in relazione al ceppo, allet della coltura e ad altri fattori. Tutti
i flaconi con un segnale positivo devono essere posti in subcoltura con terreni per micobatteri selettivi e non
selettivi. La crescita delle specie diverse dai micobatteri pu mascherare quella dei micobatteri presenti.
CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI MB/BacT (SENZA AGITAZIONE)

Sono stati condotti studi interni sullo strumento MB/BacT (senza agitazione) con i seguenti microrganismi di test a
concentrazioni 10 CFU/flacone e 100 CFU/flacone usando sangue umano prelevato da una popolazione adulta sana.
Risultati di BacT/ALERT MB con lo strumento MB/BacT (senza agitazione)

Inoculo
(UCF/acone)
Micobatterio
Tempo di rilevazione (giorni)1

BacT/ALERT MB
Complesso TB
M. tuberculosis (4 ceppi)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 ceppi)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 27,2
14,3 30,02
14,9 23,8
16,2 25,5
Fotocromogeni (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 14,6
13,1 39,9
Scotocromogeni (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 30,5
17,2 32,62
Non cromogeni (Runyoun III)

M. avium (2 ceppi)
CDC 569, CDC 1155
M. avium (2 ceppi)
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 ceppi)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
100
10
10,4 12,5
13,8 14,8
9,2 13,63
10,93 15,7
100
10
8,5 12,1
11,0 12,9
Microrganismi a crescita rapida (Runyoun IV)

100
10
2,2 2,3
2,6 3,2
Ogni microrganismo stato testato in triplo e sono state ricavate le medie, salvo altrimenti specificato. I valori
forniti sono le medie dei replicati.
Uno dei tre flaconi non ha evidenziato alcuna crescita; il valore fornito la media di due flaconi.
3 Uno dei tre flaconi contaminato; il valore fornito la media di due flaconi.
2
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5-8
CARATTERISTICHE
DELLE PRESTAZIONI BacT/ALERT (CON AGITAZIONE)
Sono stati condotti studi interni utilizzando i seguenti microrganismi a concentrazioni 10 CFU/flacone e 100
CFU/flacone usando sangue umano prelevato da una popolazione adulta sana.
Risultati di BacT/ALERT MB con lo strumento BacT/ALERT (con agitazione)

Inoculo
(UCF/acone)
Tempo di rilevazione (giorni)1

BacT/ALERT MB
100
10
100
10
100
10
100
10
14,1 - 16,7
14,6 - 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Fotocromogeni (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 - 14,42
8,9 - 16,82
Scotocromogeni (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 - 37,2
21,3 - 43,23
100
10
100
10
7,5 - 11,5
8,5 - 11,8
8,4
9,32
M. intracellulare (4 ceppi)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 - 11,6
9,9 - 13,1
Microrganismi a crescita rapida (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
Micobatterio
Complesso TB
M. tuberculosis (3 ceppi)
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
M. bovis CDC 423
M. bovis CDC 8131
Non cromogeni (Runyoun III)

M. avium (3 ceppi)
CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Ogni microrganismo stato testato in triplo e sono state ricavate le medie. I valori forniti rappresentano un
intervallo di tali medie, salvo M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 e M. avium CDC 440 di cui viene data solo la
media.
2 Uno dei tre flaconi contaminato; il valore fornito la media di due flaconi.
3 Uno dei tre flaconi non ha evidenziato alcuna crescita; il valore fornito la media di due flaconi.
NOTA: un elenco dei microrganismi rari ed esigenti ritrovati con i flaconi BacT/ALERT pu essere richiesto a
bioMeriux.4
BIBLIOGRAFIA
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
BacT/ALERT MB
25/confezione
251011
Kit da 5 flaconcini
259877
Per lassistenza tecnica negli USA, contattare lassistenza clienti bioMrieux al numero verde +1-800-682-2666. Al di
fuori degli USA, contattare il rappresentante locale bioMrieux.
bioMrieux, il logo blu, BacT/ALERT e MB/BacT sono marchi utilizzati, in attesa di registrazione e/o registrati di
propriet di bioMrieux SA o di una delle sue filiali.
Amphyl un marchio depositato di Linden Corporation.
ATCC un marchio depositato di American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Luglio 2008
BacT/ALERT MB
NORSK
43-02494
BETEGNER REVIDERT DEL

Oppbevar BacT/ALERT MB kulturflasker og MB/BacT Enrichment Fluid mellom 15-30 C. Beskytt mot direkte
sollys.
Se symbolordliste p slutten av vedlegget.
ANVENDELSE
BacT/ALERT MB kulturflasker med tilsetningen av MB/BacT anrikningsvske, nr brukt med MB/BacT
Mykobakteriedeteksjonssystem (ikke-risting) og BacT/ALERT Mikrobielt Deteksjonssystem (risting), er et ikkeselektivt kulturmedium for den kvalitative dyrkingen og gjenvinningen av mykobakterier fra blodprver.
OPPSUMMERING OG FORKLARING
BacT/ALERT MB kulturflasker i kombinasjon med MB/BacT anrikningsvske er beregnet p dyrkingen av
Mycobacterium sp. som vanligvis isoleres fra blod. Mediet vil fremme vekst av andre aerobe organismer,
inkludert gjrsopp, sopp og bakterier. Dette fullstendige systemet inkluderer en lytisk agent (saponin), SPS
(natriumpolyanetolsulfonat) og andre mediesupplementer som eliminerer behandlingstrinnet, forhindrer levring
av blod og fremmer veksten av mykobakterier. Et blodvolum p 3-5 ml kan inokuleres direkte inn i kulturflasken.
Inokulerte flasker settes inn i instrumentet, der de inkuberes (35-37 C) og overvkes kontinuerlig for mikrobiell
vekst.
TESTENS PRINSIPP
MB/BacT Mykobakteriedeteksjonssystem og BacT/ALERT Mikrobielle Deteksjonssystemer benytter en kolorimetrisk
sensor og reflektert lys for mle forekomsten og produksjonen av karbondioksid (CO2) opplst i kulturmediet.1
Hvis det finnes mikroorganismer i testprven, vil det produseres karbondioksid nr organismene metaboliserer
substratene i kulturmediet. Nr vekst av mikroorganismene produserer CO2, vil fargen p den gassgjennomtrengbare
sensoren som er installert i bunnen av hver kulturflaske endres fra bl-grnn til gul. Den lysere fargen resulterer
i en kning av reflektansenhetene som overvkes av systemet. Flaskereflektansen overvkes og registreres av
instrumentet hvert tiende minutt.
REAGENSER
Til in vitro diagnostisk bruk.
ADVARSEL: For redusere risikoene for utilsiktet eksponering for smittestoffer, m ytterligere forholdsregler
flges ved bruk av BacT/ALERT MB kulturaske i BacT/ALERT Mikrobielt Deteksjonssystem. Det anbefales
sterkt at instrumentet plasseres i et laboratorium som benyttes til rutinedyrking av M. tuberculosis. For
aktiviteter som omfatter utbredelse og manipulering av M. tuberculosis eller Mycobacterium sp. dyrket i
kultur, anbefales biosikkerhetsrutiner p niv 3, beholderutstyr og fasiliteter.2
FORSIKTIG: Hndter prver og inokulerte kulturasker som potensielt smittefarlig materiale. Alle inokulerte
kulturasker, prvetakingskanyler og blodprvetakingsutstyr skal dekontamineres i henhold til din institusjons
prosedyrer.3
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT
MB (med svart fargekode) BacT/ALERT MB sterile kulturflasker til engangsbruk inneholder

29 ml medium samt en indre sensor som pviser karbondioksid som en indikator for mikrobiell vekst.
Mediesammensetningen bestr av Middlebrook 7H9 buljong (0,47 % w/v), pankreaskonsentrert kasein (0,1 %
w/v), glyserol (1,0 % w/v), SPS (natriumpolyanetolsulfonat) (0,025 % w/v), i renset vann. Flaskene inneholder en
atmosfre av CO2 i oksygen og nitrogen under vakuum. Mediekomposisjonen kan tilpasses for oppfylle spesifikke
krav til ytelse.
FORSIKTIG: BacT/ALERT MB kulturasker inkuberes ved 37 C, hvilket muligens utelukker gjenvinningen
av mykobakterier som krever andre inkuberingstemperaturer (f.eks., M. marinum, M. ulcerans og
M. haemophilum). Flgende isolater ble pvist positive i MB/BacT-instrumentet (ikke-risting) og i BacT/ALERTinstrumentet (risting) med BacT/ALERT MB-kulturasken under interne studier; M. tuberculosis, M. avium, M.
intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M. gordonae og M. simiae.
FORSIKTIG: Det er mulig at enkelte sjeldne, kravfulle mykobakterier ikke vil vokse eller kan vokse langsomt i
BacT/ALERT MB kulturaskens vekstmedium. Dersom det er mistanke om at sjeldne, kravfulle mykobakterier
som krever spesialiserte media og kulturatmosfrer er tilstede, br alternative gjenvinningsmetoder eller
forlenget inkuberingstid vurderes.
FORSIKTIG: I sjeldne tilfeller kan man stte p organismer som vokser i BacT/ALERT MB kulturaskens
vekstmedium, men som ikke produserer tilstrekkelig karbondioksid til fastls som positive. For eksempel
kan prver fra pasienter som gjennomgr behandling med antimykobakterielle midler vise nedsatt vekst.

Ampuller med MB/BacT Enrichment Fluid inneholder et totalvolum p 5,5 ml hver. MB/BacT anrikningsvske bestr
av bovint serumalbumin (14,5 % w/v), natriumklorid (2,5 % w/v), oleinsyre (0,174 % w/v), saponin (4,4 % w/v),
i renset vann.
Ndvendig tilleggsmateriell
MB/BacT Mykobakteriedeteksjonssystem eller BacT/ALERT Mikrobielt Deteksjonssystem
Middlebrook 7H11 eller annen mykobakteriell agar eller egg-basert medium
CO2 inkubator, 37 C 2 C
Sterile spryter og kanyler
Mykobaktericid desinfeksjonsmiddel
Blodprvetakingsutstyr
Biologisk sikkerhetskabinett
Sterile engangshansker
Engangsfrakker
Engangsmasker
Egnede beholdere for biologisk farlig avfall, potensielt kontaminert av smittefarlige stoffer
Kvalitetskontrollorganismer
Materialer tilgjengelig fra bioMrieux

MB/BacT Mykobakteriedeteksjonssystem og BacT/ALERT Mikrobielle Deteksjonssystemer
Oppbevaring
Oppbevar BacT/ALERT MB kulturflasker og MB/BacT anrikningsvske ved romtemperatur (15-30 C). Beskyttes
mot direkte sollys. En utlpsdato er trykket p hver flaskeetikett. Ikke bruk BacT/ALERT MB kulturflasker eller
anrikningsvske etter den siste dagen i den angitte mneden. Flaskene m ha romtemperatur fr bruk.
INSTRUMENTER
G gjennom den relevante brukerhndboken for BacT/ALERT Mikrobielt Deteksjonssystem fr bruk.
PRVETAKING OG FORBEREDELSE
Korrekt prvetaking er svrt viktig nr det tas blodkulturprver. Se Manual of Clinical Microbiology3 for riktige
prvetakings- og transportprosedyrer. Grundig desinfisering av huden er et ndvendig krav for redusere forekomst
av kontaminasjon.
bioMrieux anbefaler at inokulerte kulturflasker plasseres inn i BacT/ALERT Mikrobielt Deteksjonssystem s snart
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som
mulig etter innsamling.5-8
Inokulerte kulturflasker som fr forsinket innlasting skal oppbevares ved romtemperatur
inntil de kan lastes inn i inkubatoren.
TESTPROSEDYRE FOR BacT/ALERT MB KULTURFLASKE

Innledende kommentarer og forholdsregler
1. POTENSIELT SMITTEFARLIGE TESTPRVER. Alminnelige forholdsregler for hndtering og avhending av smittefarlig
materiell skal overholdes. Hndter prver og inokulerte kulturer som potensielt smittefarlig materiale.
2. For redusere muligheten for lekkasje nr prven inokuleres inn i kulturflaskene, bruk spryter med pfestede
kanyler.
3. Alle inokulerte kulturflasker, prvetakingskanyler og blodprvetakingsutstyr skal dekontamineres i henhold til din
institusjons prosedyrer.3
4. Br alltid inokulerte kulturflasker i et stativ eller en kurv. Ved sl eller beskadigelse, kan en aerosol av mykobakterier
(inkludert M. tuberculosis) eller andre bakterier produseres. Flg sikkerhetsretningslinjene for institusjonen
din og CDC/NIH.2 P grunn av fremkomsten av humant immunsviktvirus/ervervet immunsviktsyndrom, har
mykobakteremi som flge av M. tuberculosis oppsttt oftere, og blod anses n som en mulig smittekilde i
laboratoriet.2
5. For hndtere komplekse M. tuberculosis-organismer dyrket i kultur, kreves det biosikkerhetsrutiner p niv 3,
beholderutstyr og fasiliteter.2
6. Vr nye med unng kontaminering under klargjring av flasken, innhenting av pasientprven og inokulering
av pasientprven inn i BacT/ALERT MB kulturflasken.
7. MB/BacT anrikningsvske inneholder komponenter som er ndvendige for sikre optimal vekst av mykobakterier,
og inneholder en lytisk agent for lysis av blodceller. Dette produktet m tilsettes alle BacT/ALERT MB
kulturflasker.
8. MB/BacT anrikningsvske kan tilsettes inntil 24 timer fr eller etter inokulering av flasken med blodprven. Hvis
anrikningsvsken tilsettes etter inokulering av blod, m den tilsettes ved bruk av biosikkerhetsrutiner niv 3.2
9. Disse kulturflaskene br kun brukes av opplrt laboratoriepersonell.
Flaskeklargjring
MERK: Vr nye med unng kontaminering under bde klargjring og inokulering av flaske med pasientprven.
Fr bruk br BacT/ALERT MB kulturflaskene inspiseres for tegn p skade eller forringing (misfarging). Flasker som
utviser tegn p skade, lekkasje eller forringelse skal kastes. Mediet i urrte flasker skal vre gjennomsiktig. Ikke bruk
en flaske som inneholder medium som viser turbiditet, en gul sensor eller for hyt gasstrykk, dette er tegn p mulig
kontaminasjon. Se ogs over alle ampuller med MB/BacT anrikningsvske for tegn p skade eller kontaminering.
Bruk ikke MB/BacT anrikningsvske-ampuller som viser turbiditet.
1. Merk kulturflasken med pasientinformasjon. Ikonene p flaskeetiketten ( ,#, ) kan defineres av brukeren.
2. Fjern flipdekselet av plast fra kulturflasken og desinfiser septumet med en alkoholfuktet bomullspinne eller
lignende. La den lufttrke.
3. Anrikningsvske leveres separat og m tilsettes blodkulturflasken for vekst av mykobakterier. Denne tilsetningen
kan utfres innenfor 24 timer av prveinokulering, eller hvis prveinokulering utfres ved sengekanten, kan
anrikningsvsken tilsettes etter at de inokulerte flaskene er mottatt i laboratoriet.
Fjern flipdekselet av plast fra ampullen med anrikningsvsken og desinfiser septumet med en alkoholfuktet
bomullspinne eller lignende. La den lufttrke.
Tilsett 1 ml anrikningsvske aseptisk til hver BacT/ALERT MB kulturflaske.
Benytt en varsom, aseptisk teknikk for unng at anrikningsvsken og mediet i kulturflasken kontamineres.
MERK: Hvis anrikningsvsken tilsettes etter inokulering av blodprven, m dette trinnet utfres i et biologisk
sikkerhetskabinett med bruk av egnede verneklr for overholde sikkerhetsstandarder etablert av CDC/NIH for
biosikkerhetsrutiner p niv 3.2 For unng krysskontaminering, bruk en ny spryte for hver flaske med blod.
Inokuleringsprosedyre med direkte blodprvetaking

1. Fr inokulering, desinfiser toppen av BacT/ALERT MB kulturflasken med en alkoholfuktet bomullspinne eller
lignende. La den lufttrke.
2. Ta blodet ved hjelp av et butterfly-nlsett og BacT/ALERT blodsamlingsadapterhette og inokuler direkte inn i
BacT/ALERT MB kulturflasken ved pasientens sengekant (3-5 ml pr. flaske). For unng overinokulering, overvk
inntaket av blodvolum inn i kulturflasken ved hjelp av merkene for hver 5 ml p flaskeetiketten.
3. Etter inokulering, trk av flasketoppene med et gasbind fuktet med 2 % Amphyl eller annet mykobakteriedrepende
middel og la dem lufttrke.
4. Transporter omgende de inokulerte kulturflaskene til testlaboratoriet.
Inokuleringsprosedyre med blodprvetakingsglass

1. Blod kan ogs innhentes i et sterilt SPS- eller heparinisert glass og inokuleres inn i BacT/ALERT MB kulturflasken i
laboratoriet. Det er ikke ndvendig forhndsbehandle prven. Blod innhentet i EDTA er uakseptabelt, siden EDTA
hemmer mykobakteriell vekst selv i spormengder.
2. Desinfiser toppen av blodprvetakingsglasset og toppen av BacT/ALERT MB kulturflasken med en alkoholfuktet
bomullspinne eller lignende. La septene lufttrke fr blodprven inokuleres.
3. Ved hjelp av aseptisk teknikk, fjern 3-5 ml fra prvetakingsglasset med en steril spryte og inokuler inn i
kulturflasken.
4. Etter inokulering, trk av flasketoppene med et gasbind fuktet med 2 % Amphyl eller annet mykobakteriedrepende
middel og la dem lufttrke.
INKUBERING OG OVERVKING
ADVARSEL: Det m tas generelle forholdsregler ved subkultivering av positive kulturasker, da de kan ha blitt
overfylt eller inneholde hyt gassproduserende organismer. Positive kulturaskers innhold kan vre under
kt indre trykk. Positive kulturasker br ventileres s vidt fr farging av utstryk eller kassering for slippe ut
eventuell gass produsert i lpet av den mikrobielle metabolismen.
1. Last de inokulerte BacT/ALERT MB kulturflaskene inn i MB/BacT Mykobakteriedeteksjonssystem (ikke-risting) eller
BacT/ALERT Mikrobielt Deteksjonssystem (risting) i samsvar med instruksjonene som gis i brukerhndboken.
2. Etter at BacT/ALERT MB kulturflaskene er lastet inn i instrumentet, skal de forbli der i 42 dager eller til de flagges
ut positive.
Flgende prosedyrer forutsetter bruk av biosikkerhetsrutiner p niv 3, beholderutstyr og fasiliteter.2
3. Nr instrumentet indikerer at en bestemt celle inneholder en positiv flaske, skal flasken fjernes i henhold til
prosedyrene oppgitt i brukerhndboken.
4. Utfr mikroskopering og subkultiver for syrefaste staver i alle flasker som er fastsltt vre positive. I et biologisk
sikkerhetskabinett, bland flaskeinnholdet, desinfiser flaskeproppen med en alkoholfuktet bomullspinne eller
lignende og la den lufttrke. Fjern prven for syrefast farging og subkultiver ved hjelp av en spryte og kanyle.
Desinfiser flaskeproppen med et mykobakteriedrepende middel etter subkultivering. Dersom mikroskopering
med hensyn p syrefaste staver er positiv, fortsett med de spesifikke identifikasjonsprosedyrer for mykobakterier
som brukes av din institusjon. Dersom utstryket er negativt for syrefaste staver, men avdekker forekomst av andre
mikroorganismer, br en gram-farging utfres. Hvis bde det syrefaste utstryket og gram-fargingen er negative og
indikerer en mulig falsk positiv, skal flasken lastes tilbake inn i instrumentet til vekst av subkulturen er tydelig eller
til flasken igjen flagger ut positiv eller negativ. Kulturer som innledningsvis ble fastsltt vre falsk positive og
senere ble fastsltt vre positive, skal mikroskoperes og subkultiveres
5. Hvis ikke-mykobakterielle organismer observeres p gram-fargingen, kan du om nskelig innhente en annen
prve til kulturen. Muligheten for bakteriell septikemi skal ogs vurderes.
6. Negative kulturer kan kontrolleres ved mikroskopering og/eller subkultiveres fr de kasseres som negative.
7. Ikke bruk BacT/ALERT kulturasker p nytt. Kast inokulerte BacT/ALERT kulturflasker i henhold til
laboratorieprotokollen. Autoklavering og/eller forbrenning av inokulerte BacT/ALERT-flasker er hensiktsmessig.2
RAPPORTERING AV RESULTATER
Resultater
Rapport
Signal+, AFB-utstryk +
Signal+, AFB-utstryk , gram-farging +
AFB positiv; identifisering avventes

Ingen rapport; eller prve kontaminert med ikke-mykobakterielle
organismer; ikke i stand til bestemme nrvr eller fravr av AFB
Ingen rapport. Subkultiver for fastsl mulige falsk positiv
Signal+, AFB-utstryk , gram-farging
KVALITETSKONTROLL
Et samsvarssertifikat medflger hver eske med BacT/ALERT MB kulturflasker. Dette angir tilfredsstillende vekst av M.
avium ATCC 25291 og M. intracellulare ATCC 13950. Ved mottak kan nye partier eller forsendelser av BacT/ALERT MB
kulturflasker eller reagenser kvalitetskontrolltestes. Se CLSI/NCCLS M22-A3 for passende kvalitetskontrollorganismer.
Flg prosedyren for flaskeklargjring og inokulering:
1. Tilsett 1,0 ml MB/BacT anrikningsvske til hver BacT/ALERT MB kulturflaske som kreves for testing.
2. Inokuler representative flasker med 5,0 ml av kontrollorganismene, fortynnet til 103 CFU/ml i sterilt, defibrinert
saueblod. Subkultiver p Middlebrook 7H11-plater for fastsl levedyktighet og antall.
3. Etter at forventede resultater er oppndd, bruk s de resterende flaskene til teste kliniske prver. Dersom
forventede resultater ikke oppns, ta kontakt med bioMrieux kundeservice.
TESTBEGRENSNINGER
TILGJENGELIGHET
Mange variabler involvert i mykobakterietesting kan i praksis ikke kontrolleres for angi total visshet om at oppndde
resultater utelukkende skyldes korrekt eller ukorrekt ytelse av et av kulturmediene eller deteksjonssystemet.
bioMrieux
BacT/ALERT MB
25/eske
251011
1. Kulturer tatt for primr diagnose etter at behandling er pbegynt, kan fre til negative resultater.
2. Gjenvinning av mykobakterier i BacT/ALERT MB kulturflasker avhenger av kvaliteten p den innhentede prven
og antallet dyrkbare organismer i prvevolumet. Siden mediet er ikke-selektivt og ikke inneholder antibiotika, kan
alle mikroorganismer som er tilstede vokse i mediet.
3. En sjelden gang kan positive prver oppst i BacT/ALERT MB kulturflasker som flge av at svrt mange hvite
blodlegemer er tilstede i blodprven. Dette vil fre til negative utstryk og subkulturer.
4. Antall organismer er ofte lavt. Det anbefales derfor normalt at prver tas over tre sammenhengende dager.
5. Kolonimorfologi og pigmentering skal kun bestemmes p faste medier.
6. BacT/ALERT MB kulturflasker med et positivt signal kan inneholde n eller flere mykobakteriearter og/eller andre
ikke-mykobakteriearter. I blandede mykobakteriekulturer i buljong kan en organisme som vokser langsomt
utkonkurreres av en som vokser raskt, eller kulturen kan ha blitt kassert tidlig etter at den hurtigvoksende
organismen er pvist. Identifikasjon av tilstedevrende mykobakterier krever subkultivering og tilleggsprosedyrer
for identifisere organismer som er tilstede. Overensstemmelsen av mikroskopisk morfologi i BacT/ALERT
kulturflasker er ikke fastsltt.
7. Mykobakterier kan variere mht. syrefasthet, avhengig av stamme, kulturens alder og andre variabler. Alle flasker
med et positivt signal fra instrumentet skal subkultiveres i bde mykobakterieselektive og ikke-selektive medier.
Ikke-mykobakterier kan vokse over og dekke tilstedevrende mykobakterier.
5 ampuller/pk
259877
YTELSESEGENSKAPER MB/BacT (IKKE-RISTING)

Interne dyrkningsstudier ble utfrt i et MB/BacT-instrument (ikke-risting) ved bruk av flgende testorganismer med
niv p 10 CFU/flaske og 100 CFU/flaske i humant blod fra en frisk voksen populasjon.
Resultater av BacT/ALERT MB i MB/BacT instrument (ikke-risting)

Inokulat
(CFU/aske)
Mykobakterie
Deteksjonstid (antall dager)1

BacT/ALERT MB
TB kompleks
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 stammer)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 27,2
14,3 30,02
14,9 23,8
16,2 25,5
Fotokromogener (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 14,6
13,1 39,9
Scotokromogener (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 30,5
17,2 32,62
100
10
100
10
10,4 12,5
13,8 14,8
9,2 13,63
10,93 15,7
100
10
8,5 12,1
11,0 12,9
100
10
2,2 2,3
2,6 3,2
Ikke-kromogener (Runyoun III)

CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
Hurtigvoksende bakterier (Runyoun IV)
1
Hver organisme ble testet tre ganger og gjennomsnittsverdier ble bestemt, bortsett fra de som er merket. Oppgitte
verdier er gjennomsnitt av replikaene.
n av tre flasker viste ingen tegn p vekst. Oppgitt verdi er gjennomsnittet av to flasker.
3 n av tre flasker var kontaminert. Oppgitt verdi er gjennomsnittet av to flasker.
2
YTELSESEGENSKAPER BacT/ALERT (RISTING)
Interne dyrkningsstudier ble utfrt ved bruk av flgende testorganismer med niv p 10 CFU/flaske og 100 CFU/
flaske i humant blod fra en frisk voksen populasjon.
Resultater av BacT/ALERT MB i BacT/ALERT instrument (risting)

Inokulat
(CFU/aske)
Deteksjonstid (antall dager)1

BacT/ALERT MB
100
10
100
10
100
10
100
10
14,1 16,7
14,6 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Fotokromogener (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 14,42
8,9 16,82
Scotokromogener (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 37,2
21,3 43,23
100
10
100
10
7,5 11,5
8,5 11,8
8,4
9,32
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 11,6
9,9 13,1
Hurtigvoksende bakterier (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
Mykobakterie
TB kompleks
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
M. bovis CDC 423
M. bovis CDC 8131
Ikke-kromogener (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Hver organisme ble testet tre ganger og et gjennomsnitt ble bestemt. Oppgitte verdier er et spekter av disse
gjennomsnittene, med unntak av M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 og M. avium CDC 440, der kun
gjennomsnittet oppgis.
2 n av tre flasker var kontaminert. Oppgitt verdi er gjennomsnittet av to flasker.
3 n av tre flasker viste ingen tegn p vekst. Oppgitt verdi er gjennomsnittet av to flasker.
MERK: En liste over sjeldne og kravfulle organismer funnet med BacT/ALERT kulturflasker er tilgjengelig p
foresprsel fra bioMrieux.4
REFERANSELISTE
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
For teknisk sttte i USA, ta kontakt med bioMrieux kundeservice, tlf: 1-800-682-2666. Utenfor USA, ta kontakt med
din lokale bioMrieux-representant.
bioMrieux, den bl logo, BacT/ALERT og MB/BacT er varemerker som enten er i bruk, under behandling og/eller
registrert og som tilhrer bioMrieux SA eller et av datterselskapene.
Amphyl er et registrert varemerke som tilhrer Linden Corporation.
ATCC er et registrert varemerke som tilhrer American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Juli 2008
BacT/ALERT MB
POLSKI
43-02494
OZNACZA CZ Z POPRAWKAMI
Butelki hodowlane BacT/ALERT MB oraz pyn wzbogacajcy MB/BacT Enrichment Fluid naley przechowywa w
temp. 1530C. Chroni przed bezporednim dziaaniem wiata sonecznego.
Zob. sownik symboli na kocu ulotki.
ZASTOSOWANIE
Butelki hodowlane BacT/ALERT MB z dodatkiem pynu wzbogacajcego MB/BacT Enrichment Fluid, kiedy s
stosowane z systemem wykrywania mykobakterii MB/BacT (bez wytrzsania) i z systemem detekcji drobnoustrojw
BacT/ALERT (z wytrzsaniem), s nieselektywnym podoem hodowlanym do jakociowej hodowli i namnaania
mykobakterii z prbek krwi.
PODSUMOWANIE I OBJANIENIA
Butelki hodowlane BacT/ALERT MB w poczeniu z pynem wzbogacajcym MB/BacT Enrichment Fluid s
przeznaczone do hodowli gatunkw Mycobacterium najczciej izolowanych z krwi. Podoe zapewnia wzrost innych
tlenowych mikroorganizmw, w tym drody, grzybw i bakterii. Cay system zawiera czynnik lityczny (saponin),
polianetosulfonian sodu (SPS) i inne elementy wzbogacajce poywk, ktre eliminuj etap przetwarzania,
zabezpieczaj przed wykrzepianiem krwi i stymuluj wzrost mykobakterii. Do butelki hodowlanej mona posia
bezporednio 3 do 5 ml krwi. Inokulowane butelki s umieszczane w urzdzeniu, gdzie podlegaj inkubacji (35
37C) oraz cigemu monitorowaniu pod ktem wzrostu drobnoustrojw.
ZASADA BADANIA
System wykrywania mykobakterii MB/BacT i systemy wykrywania drobnoustrojw BacT/ALERT wykorzystuj
czujnik kolorymetryczny i wiato odbite, w celu monitorowania obecnoci i produkcji dwutlenku wgla (CO2)
rozpuszczonego w podou hodowlanym 1. Jeeli w prbce badanej obecne s drobnoustroje, w wyniku metabolizmu
substratw zawartych w podou wytwarzany jest dwutlenek wgla. Gdy w wyniku wzrostu drobnoustrojw powstaje
CO2, kolor przepuszczalnego dla gazu czujnika umieszczonego na dnie kadej butelki hodowlanej zmienia si z
niebieskozielonego na ty. Janiejszy kolor zwiksza odbicie wiata, co jest monitorowane przez system. Poziom
wiata odbitego przez butelki podlega monitorowaniu i jest rejestrowany przez urzdzenie co 10 minut.
ODCZYNNIKI
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
OSTRZEENIE: Podczas uywania butelki hodowlanej BacT/ALERT MB w systemie wykrywania drobnoustrojw
BacT/ALERT naley przedsiwzi dodatkowe rodki ostronoci, aby zmniejszy ryzyko przypadkowej
ekspozycji na czynniki zakane. Zaleca si zdecydowanie, aby urzdzenie znajdowao si w laboratorium
rutynowo zajmujcym si hodowl M. tuberculosis. Do czynnoci zwizanych z namnaaniem i opracowywaniem
gatunkw M. tuberculosis lub Mycobacterium sp. hodowanych na podoach, wymagany jest sprzt ochronny
oraz urzdzenia speniajce warunki ochrony biologicznej poziomu 3 (Biosafety Level 3) 2.
UWAGA: Z prbkami oraz posianymi butelkami hodowlanymi naley obchodzi si jak z materiaem
potencjalnie zakanym. Wszystkie posiane butelki, igy do pobierania prbek i zestawy do pobierania krwi
naley odkaa zgodnie z procedurami obowizujcymi w danej instytucji 3.
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT MB (oznaczone kolorem czarnym) sterylne butelki do jednorazowego uytku BacT/ALERT MB zawieraj
29 ml podoa oraz wewntrzny czujnik wykrywajcy dwutlenek wgla jako wskanik wzrostu drobnoustrojw.
Poywka ma nastpujcy skad: bulion Middlebrook 7H9 (0,47% wag./obj.), kazeina trawiona pankreatyn (0,1%
wag./obj.), glicerol (1,0% wag./obj.), polianetosulfonian sodu (0,025 wag./obj.) w wodzie oczyszczonej. Butelki s
przygotowywane w atmosferze CO2 w tlenie i azocie pod pomp prniow. Skad poywki mona dostosowywa
w zalenoci od jej przeznaczenia.
PRZESTROGA: Butelki hodowlane BacT/ALERT MB inkubowane s w temp. 37C, co potencjalnie wycza
wzrost mykobakterii wymagajcych do wzrostu innych temperatur inkubacji (np. M. marinum, M. ulcerans, M.
haemophilum). Nastpujce izolaty byy wykrywane w urzdzeniu MB/BacT (bez wytrzsania) i w urzdzeniu
BacT/ALERT (z wytrzsaniem), z butelk hodowlan BacT/ALERT MB w trakcie bada wewntrznych; M.
tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M.
gordonae i M. simiae.
PRZESTROGA: Jest moliwe, e niektre rzadkie i trudne w hodowli mykobakterie nie bd rosy lub bd
rosy powoli na podou butelek hodowlanych BacT/ALERT MB. W przypadku podejrzenia obecnoci rzadko
spotykanych, trudnych w hodowli mykobakterii, wymagajcych specjalistycznych poywek oraz warunkw
hodowli, naley rozway zastosowanie alternatywnych metod namnaania lub duszego czasu inkubacji.
PRZESTROGA: W rzadkich przypadkach moe si zdarzy, e mikroorganizmy rosnce na podou butelek BacT/
ALERT MB nie bd produkowa wystarczajcych iloci dwutlenku wgla dla uzyskania dodatniego wyniku
testu. Przykadowo, prbki uzyskane od pacjentw leczonych lekami przeciwgruliczymi mog wykazywa
sabszy wzrost.

Kada z olek z pynem wzbogacajcym MB/BacT Enrichment Fluid posiada cakowit objto 5,5 ml. Pyn
wzbogacajcy MB/BacT Enrichment Fluid skada si z albuminy surowicy woowej (14,5% wag./obj.), chlorku sodu
(2,5% wag./obj.), kwasu oleinowego (0,174% wag./obj.), saponiny (4,4% wag./obj.) w wodzie oczyszczonej.
Wymagane dodatkowe materiay

System wykrywania mykobakterii MB/BacT lub system wykrywania drobnoustrojw BacT/ALERT
Bulion Middlebrook 7H11 lub inne podoe do hodowli mykobakterii na bazie agaru lub jaj
Inkubator CO2, 37C 2C
Sterylne strzykawki i igy
rodek do dezynfekcji aktywny w stosunku do mykobakterii
Systemy zamknite do pobierania krwi
Komora bezpieczestwa dla materiaw biologicznych
Jaowe rkawiczki jednorazowego uytku
Jednorazowe fartuchy
Jednorazowe maski
Odpowiednie pojemniki na odpady biologicznie niebezpieczne, przeznaczone do materiaw potencjalnie skaonych
czynnikami zakanymi
Mikroorganizmy do kontroli jakoci
Materiay dostpne w bioMrieux

System wykrywania mykobakterii MB/BacT i systemy wykrywania drobnoustrojw BacT/ALERT
Sposb przechowywania
Butelki hodowlane BacT/ALERT MB oraz pyn wzbogacajcy MB/BacT Enrichment Fluid naley przechowywa
w temp. pokojowej (1530C). Chroni przed bezporednim dziaaniem wiata sonecznego. Na etykiecie kadej
butelki wydrukowana jest data wanoci. Butelek hodowlanych BacT/ALERT MB lub olek z pynem wzbogacajcym
nie naley uywa po upywie ostatniego dnia wskazanego miesica. Przed uyciem butelki musz osign
temperatur pokojow.
URZDZENIA
Przed uyciem naley zapozna si z odpowiedni instrukcj obsugi systemu detekcji drobnoustrojw BacT/ALERT.
POBIERANIE I PRZYGOTOWYWANIE PRBEK

Waciwe pobieranie prbek jest niezwykle istotne w przypadku prbek do posieww krwi. Waciwa procedura
pobierania i transportowania prbek opisana jest w podrczniku mikrobiologii klinicznej 3. Waciwa dezynfekcja
skry stanowi podstawowy warunek ograniczenia czstoci wystpowania skae.
Firma bioMrieux zaleca, aby umieci posiane butelki hodowlane w systemie detekcji drobnoustrojw BacT/ALERT
w jak najkrtszym czasie od pobrania materiau. Posiane butelki hodowlane, ktre nie s natychmiast umieszczane
w systemie, naley przechowywa do czasu zaadowania do inkubatora w temperaturze pokojowej.
PROCEDURA TESTOWA DLA BUTELKI BacT/ALERT MB

Wstpne uwagi i ostrzeenia
1. PRBKA TESTOWA POTENCJALNIE ZAKANA. Podczas przygotowania oraz przy usuwaniu materiaw zakanych
naley zachowa uniwersalne rodki ostronoci. Z prbkami i zawierajcymi posiewy hodowlami naley
obchodzi si jak z materiaem potencjalnie zakanym.
2. Aby zminimalizowa moliwo wycieku w trakcie zaszczepiania prbki do butelek hodowlanych, naley uywa
strzykawek z przymocowanymi igami.
3. Wszystkie posiane butelki, igy do pobierania prbek i zestawy do pobierania krwi naley odkaa zgodnie
z procedurami obowizujcymi w danej instytucji 3.
4. Zawsze przenosi posiane butelki hodowlane w stelau lub w koszu. W przypadku wylania lub stuczenia moe
powsta aerozol mykobakterii (w tym M. tuberculosis) lub innych bakterii. Naley przestrzega zalece dotyczcych
bezpieczestwa dla swojej instytucji oraz zalece CDC/NIH 2. Wraz z rozprzestrzenieniem si ludzkiego wirusa
niedoboru odpornoci/nabytego zespou niedoboru odpornoci, mykobakteriemia wywoana przez M. tuberculosis
wystpuje czciej i krew jest aktualnie uwaana za moliwe rdo transmisji w laboratorium 2.
5. Praca z mikroorganizmami kompleksu M. tuberculosis wymaga zachowania zasad bezpieczestwa biologicznego
stopnia 3, wyposaenia oraz pomieszcze umoliwiajcych izolacj 2.
6. Podczas przygotowywania butelki, pobierania prbki od pacjenta oraz posiewania materiau do butelki hodowlanej
BacT/ALERT MB, naley zachowa ostrono, aby zapobiec skaeniu prbki.
7. Pyn wzbogacajcy MB/BacT Enrichment Fluid zawiera skadniki niezbdne do zapewnienia optymalnego wzrostu
mykobakterii oraz czynnik lityczny czerwonych krwinek. Ten produkt musi zosta dodany do wszystkich butelek
hodowlanych BacT/ALERT MB.
8. Pyn wzbogacajcy MB/BacT Enrichment Fluid moe by dodany do 24 godzin przed lub po posianiu butelki prbk
krwi. Jeli pyn wzbogacajcy zostanie dodany po posianiu krwi, musi zosta dodany przy uyciu odpowiednich
procedur ochrony biologicznej poziomu 3 (Biosafety Level 3) 2.
9. Te butelki hodowlane powinny podlega utylizacji wycznie przez wykwalikowany personel laboratoryjny.
Przygotowanie butelek
UWAGA: W celu uniknicia skaenia naley zachowa ostrono, zarwno podczas przygotowywania butelek, jak i
przy inokulacji prbki materiau.
Przed uyciem butelki hodowlane BacT/ALERT MB naley podda kontroli pod ktem uszkodze lub wad
(odbarwienia). Butelki wykazujce objawy uszkodzenia, nieszczelnoci lub pogorszenia jakoci naley wyrzuci.
Podoe w nienaruszonych butelkach powinno by klarowne. Nie uywa butelki, w ktrej podoe wykazuje
zmtnienie, czujnik ma kolor ty lub jest nadmierne cinienie gazu; s to oznaki moliwego skaenia. Naley take
zbada wzrokowo wszystkie olki z pynem wzbogacajcym MB/BacT Enrichment Fluid na obecno ladw
uszkodze lub skaenia. Nie uywa olek z pynem wzbogacajcym MB/BacT Enrichment Fluid wykazujcych
zmtnienie.
1. Oznaczy butelk hodowlan danymi pacjenta. Ikony na etykiecie butelki ( ,#, ) mog by deniowane przez
uytkownika.
2. Usun plastikow zatyczk z butelki hodowlanej i zdezynfekowa przy pomocy wacika nasczonego alkoholem
lub innego rodka odkaajcego. Pozostawi do wyschnicia.
3. Pyn wzbogacajcy jest dostarczany oddzielnie i musi zosta dodany do butelki do hodowli krwi, celem
zapewnienia wzrostu mykobakterii. Dodanie moe zosta wykonane w cigu 24 godzin od posiania prbki, lub
jeli posiew jest przeprowadzany przy ku pacjenta, pyn wzbogacajcy moe zosta dodany po dostarczeniu
posianych butelek do laboratorium.
Usun plastikow zatyczk z olki z pynem wzbogacajcym i zdezynfekowa przy pomocy wacika nasczonego
alkoholem lub innego rodka odkaajcego. Pozostawi do wyschnicia.
Przy zachowaniu jaowoci doda 1 ml pynu wzbogacajcego do wszystkich butelek hodowlanych BacT/ALERT
MB.
Naley postpowa w sposb ostrony i zachowa jaowo, aby unikn skaenia pynu wzbogacajcego
i podoa w butelce hodowlanej.
UWAGA: Jeli pyn wzbogacajcy jest dodawany po pobraniu prbki krwi, etap ten naley wykonywa w komorze
bezpieczestwa dla materiaw biologicznych, uywajc odpowiedniej odziey ochronnej, zgodnie ze standardami
bezpieczestwa ustalonymi przez CDC/NIH dla wytycznych bezpieczestwa biologicznego stopnia 3 2. Aby unikn
krzyowego skaenia, naley uywa nowej strzykawki dla kadej butelki zawierajcej krew.
Procedura bezporedniego pobierania i posiewu

1. Przed posiewem, zdezynfekowa gr butelki hodowlanej BacT/ALERT MB przy pomocy wacika nasczonego
alkoholem lub innego rodka odkaajcego. Pozostawi do wyschnicia.
2. Pobra krew uywajc zestawu motylkowego i nasadki cznika do pobierania krwi BacT/ALERT bezporednio do
butelki hodowlanej BacT/ALERT MB przy ku pacjenta (35 ml na butelk). Aby zapobiec pobraniu zbyt duej
iloci krwi, naley monitorowa ilo krwi dodanej do butelki, uywajc skali na etykiecie butelki (co 5 ml).
3. Po pobraniu przetrze grne czci butelek gazikiem nasczonym roztworem 2% Amphyl lub innego rodka
prtkobjczego, a nastpnie pozostawi do wyschnicia.
4. Posian butelk hodowlan naley natychmiast przenie do laboratorium diagnostycznego.
Procedura posiewu poprzez pobieranie krwi do probwek

1. Krew moe by take pobierana do jaowych probwek z SPS lub heparyn i posiewana do butelek
hodowlanych BacT/ALERT MB w laboratorium. Nie jest wymagane adne wczeniejsze przetwarzanie prbek.
Nie jest dopuszczalne pobieranie krwi na EDTA, poniewa EDTA hamuje wzrost mykobakterii nawet w ladowych
ilociach.
2. Zdezynfekowa gr probwki oraz gr butelki hodowlanej BacT/ALERT MB przy pomocy wacika nasczonego
alkoholem lub innego rodka odkaajcego. Pozostawi korki do wyschnicia przed posianiem prbk krwi.
3. Stosujc zasady aseptyki, pobra 35 ml z probwki do pobierania krwi za pomoc jaowej igy i posia krew do
butelki hodowlanej.
4. Po posiewie przetrze grne czci butelek gazikiem nasczonym roztworem 2% Amphyl lub innego rodka
prtkobjczego, a nastpnie pozostawi do wyschnicia.
INKUBACJA I MONITOROWANIE
PRZESTROGA: Podczas zakadania hodowli wtrnych z butelek o dodatnim wyniku hodowli naley zachowa
ostrono, poniewa mogy one zosta przepenione lub mog zawiera mikroorganizmy produkujce due
iloci gazw. Zawarto dodatnich butelek do posieww moe by pod zwikszonym cinieniem. Butelki
hodowlane z wynikiem dodatnim przed barwieniem lub utylizacj naley na krtko przewentylowa, aby
odprowadzi gazy powstae w wyniku metabolizmu bakterii.
1. Posiane butelki hodowlane BacT/ALERT MB woy do systemu wykrywania mykobakterii MB/BacT (bez
wytrzsania) lub do systemu wykrywania drobnoustrojw BacT/ALERT (z wytrzsaniem), stosujc si do instrukcji
zamieszczonej w Podrczniku uytkownika.
2. Po woeniu butelek BacT/ALERT MB do urzdzenia powinny one pozosta w nim przez co najmniej 42 dni lub
do momentu oznaczenia ich jako dodatnich.
Nastpujce procedury wymagaj zachowania zasad bezpieczestwa biologicznego stopnia 3, wyposaenia
oraz pomieszcze umoliwiajcych izolacj 2.
3. Gdy urzdzenie wskazuje, e dana komora zawiera butelk z wynikiem dodatnim, naley wyj butelk zgodnie z
procedur opisan w podrczniku uytkownika.
4. Ze wszystkich butelek oznaczonych jako dodatnie naley wykona preparaty oraz dodatkowe przesiewy na
obecno paeczek kwasoopornych. W komorze bezpieczestwa dla materiaw biologicznych zmiesza
zawarto butelki, odkazi korek gazikiem nasczonym alkoholem lub innym rodkiem odkaajcym
i pozostawi do wyschnicia. Pobiera prbk do barwienia na bakterie kwasooporne i do tworzenia hodowli
wtrnych przy uyciu strzykawki i igy. Po wykonaniu przesiewu odkazi korek butelki rodkiem prtkobjczym.
Jeli wynik preparatu w kierunku bakterii kwasoopornych jest dodatni, wykona specjalne procedury identykacji
mykobakterii uywane w Pastwa instytucji. Jeli preparat jest ujemny dla paeczek kwasoopornych, ale wykazuje
obecno innych mikroorganizmw, naley wykona barwienie metod Grama. Jeli zarwno preparat w kierunku
bakterii kwasoopornych, jak i barwiony metod Grama s ujemne, co wskazuje na moliwy wynik faszywie
dodatni, butelk naley woy ponownie do urzdzenia do chwili uzyskania wzrostu przesianego materiau bd
ponownego oznaczenia jako wynik dodatni lub ujemny. Z materiau z hodowli z pocztkowym wynikiem faszywie
dodatnim, ponownie oznaczonego jako dodatni, naley wykona preparat oraz posiew wtrny.
5. Jeli w barwieniu metod Grama widoczne s mikroorganizmy inne ni mykobakterie, naley uzyska drug prbk
do hodowli, jeli jest to wymagane. Naley rozway take moliwo wystpowania u pacjenta bakteriemii.
6. Hodowle z wynikiem ujemnym mona przed odrzuceniem dodatkowo skontrolowa wykonujc preparat oraz/lub
posiew wtrny.
7. Nie naley ponownie uywa butelek hodowlanych BacT/ALERT. Naley utylizowa posiane butelki hodowlane
BacT/ALERT zgodnie z protokoem postpowania danego laboratorium. Stosowne jest poddawanie posianych
butelek BacT/ALERT dziaaniu autoklawu lub spaleniu 2.
RAPORTY Z WYNIKAMI
Wyniki
Raport
Sygna +, Preparat w kierunku AFB

(paeczek kwasoopornych) +
(paeczek kwasoopornych) ,
Barwienie metod Grama +
(paeczek kwasoopornych) ,
Barwienie metod Grama
Wzrost
CHARAKTERYSTYKA SKUTECZNOCI BacT/ALERT (Z WYTRZSANIEM)

dodatni
paeczek
kwasoopornych;
identykacja
toku
Wewntrzzakadowe badania z posiewem przeprowadzono z wykorzystaniem nastpujcych organizmw testowych

w iloci 10 CFU/butelk oraz 100 CFU/butelk przy uyciu ludzkiej krwi pobranej w populacji zdrowych dorosych.
Wyniki butelek hodowlanych BacT/ALERT MB w urzdzeniu BacT/ALERT (z wytrzsaniem)

Brak raportu; lub prbka zanieczyszczona mikroorganizmami innymi
ni mykobakterie; niemoliwe oznaczenie obecnoci / nieobecnoci
paeczek kwasoopornych (AFB)
Brak raportu. Wykona posiew wtrny w celu rozstrzygnicia moliwego
wynikw faszywie dodatniego
Kade opakowanie butelek hodowlanych BacT/ALERT MB zawiera wiadectwo Zgodnoci wskazujce na

odpowiedni wzrost M. avium ATCC 25291 i M. intracellulare ATCC 13950. Przy odbiorze nowych serii lub dostaw
butelek hodowlanych BacT/ALERT MB oraz odczynnikw, mona dokona oceny jakoci. Odpowiednie organizmy
do przeprowadzenia kontroli jakoci opisane s w dokumencie CLSI/NCCLS M22-A3. Naley postpowa zgodnie z
procedur przygotowania i posiewu butelek:
Wyniki butelek hodowlanych BacT/ALERT MB w urzdzeniu MB/BacT (bez wytrzsania)

Czas do wykrycia (dni) 1
BacT/ALERT MB
Kompleks TB
M. tuberculosis (4 szczepy)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 szczepy)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,327,2
14,330,02
14,923,8
16,225,5
Fotochromogenne (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,014,6
13,139,9
Skotochromogenne (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,430,5
17,232,62
100
10
100
10
10,412,5
13,814,8
9,213,63
10,9315,7
100
10
8,512,1
11,012,9
100
10
2,22,3
2,63,2
Niechromogenne (Runyoun III)

M. avium (2 szczepy)
CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 szczepy)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
Szybkorosnce (Runyoun IV)
1
Posiew
(CFU/butelk)
Dla kadego mikroorganizmu przeprowadzano trzykrotnie prb i obliczano wartoci rednie, z wyjtkiem
zaznaczonych inaczej. Podane wartoci s rednimi powtrze.
Jedna z trzech butelek wykazywaa brak wzrostu; warto podana jest redni dla dwch butelek.
3 Jedna z trzech butelek bya zanieczyszczona; warto podana jest redni dla dwch butelek.
2
Fotochromogenne (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,914,42
8,916,82
Skotochromogenne (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,837,2
21,343,23
100
10
100
10
7,511,5
8,511,8
8,4
9,32
M. intracellulare (4 szczepy)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,011,6
9,913,1
Szybkorosnce (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
Niechromogenne (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Wielu zmiennych zwizanych z badaniem posieww w kierunku mykobakterii nie mona w praktyce kontrolowa
tak, aby mie cakowit pewno, e otrzymane wyniki zale wycznie od prawidowego lub nieprawidowego
dziaania danego podoa hodowlanego albo systemu detekcji.
Mycobacterium
14,116,7
14,618,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
M. bovis CDC 8131
OGRANICZENIA TESTU
Wewntrzzakadowe badania z posiewem przeprowadzono w urzdzeniu MB/BacT (bez wytrzsania)

z wykorzystaniem nastpujcych organizmw testowych w iloci 10 CFU/butelk oraz 100 CFU/butelk przy
uyciu ludzkiej krwi pobranej w populacji zdrowych dorosych.
100
10
100
10
100
10
100
10
M. bovis CDC 423
1. Doda 1,0 ml pynu wzbogacajcego MB/BacT Enrichment Fluid do kadej z butelek hodowlanych BacT/ALERT
MB przeznaczonych do przetestowania.
2. Do wybranych butelek posia po 5,0 ml szczepw kontrolnych wymienionych poniej, rozcieczonych do 103
CFU/ml w jaowej, pozbawionej wknika krwi owczej. Przenie na pytki Middlebrook 7H11, aby okreli
ywotno i liczb bakterii.
3. Po uzyskaniu oczekiwanych wynikw uywa pozostaych butelek do badania prbek klinicznych. W przypadku
nieuzyskania spodziewanych wynikw, skontaktowa si z Dziaem Obsugi Klienta bioMrieux.
CHARAKTERYSTYKA SKUTECZNOCI MB/BacT (BEZ WYTRZSANIA)
Czas do wykrycia (dni) 1

BacT/ALERT MB
Kompleks TB
M. tuberculosis (3 szczepy)
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
KONTROLA JAKOCI
1. Hodowle zakadane dla uzyskania pierwotnego rozpoznania, po wczeniu leczenia, mog dawa wyniki ujemne.
2. Wzrost mykobakterii w butelkach hodowlanych BacT/ALERT MB zaley od jakoci pobranej prbki oraz liczby
hodowanych mikroorganizmw w objtoci prbki. Poniewa podoe jest nieselektywne i nie zawiera
antybiotykw, inne obecne mikroorganizmy mog wykazywa w tym medium wzrost.
3. W rzadkich przypadkach wyniki dodatnie dla butelek hodowlanych BacT/ALERT MB mog by skutkiem obecnoci
w prbce krwi wysokiego poziomu biaych krwinek. W takim przypadku preparat oraz posiew materiau z prbek
bd miay wynik ujemny.
4. Liczba mikroorganizmw jest czsto niewielka. Zwykle zaleca si pobieranie prbek przez trzy kolejne dni.
5. Ocena morfologii i zabarwienia kolonii powinna by przeprowadzana wycznie na podoach staych.
6. Butelki hodowlane BacT/ALERT MB z wynikiem dodatnim mog zawiera jeden lub wicej gatunkw mykobakterii
oraz/lub gatunkw innych ni mykobakterie. W mieszanych hodowlach bulionowych mykobakterii mikroorganizm o
wolniejszym tempie wzrostu moe zosta wyparty z hodowli na skutek konkurencji ze strony mikroorganizmu szybciej
rosncego lub hodowla moe zosta wyrzucona po wykryciu mikroorganizmu rosncego szybciej. Identykacja
obecnoci mykobakterii wymaga wykonania przesiewu oraz dodatkowych procedur identykacji mikroorganizmw.
Nie ustalono dotd zgodnoci morfologii mikroskopowej w butelkach hodowlanych BacT/ALERT.
7. Mykobakterie mog rni si kwasoopornoci w zalenoci od szczepu, wieku hodowli oraz innych zmiennych.
Ze wszystkich butelek z dodatnim sygnaem z urzdzenia naley wykona posiewy, zarwno na podoa wybircze
dla mykobakterii, jak i niewybircze. Gatunki inne ni mykobakterie mog stumi wzrost prtkw.
Posiew
(CFU/butelk)
Mycobacterium
Dla kadego mikroorganizmu przeprowadzano trzykrotnie prb i obliczano wartoci rednie. Podane wartoci
stanowi przedziay tych rednich, za wyjtkiem M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 i M. avium CDC 440, gdzie
podana jest tylko warto rednia.
2 Jedna z trzech butelek bya zanieczyszczona; warto podana jest redni dla dwch butelek.
3 Jedna z trzech butelek wykazywaa brak wzrostu; warto podana jest redni dla dwch butelek.
UWAGA: Lista mikroorganizmw rzadkich i trudnych w hodowli, ktre namnaaj si w butelkach hodowlanych
BacT/ALERT dostpna jest w rmie bioMrieux 4.
PIMIENNICTWO
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
Government Printing Ofce. Washington: Feb 2007.
ASORTYMENT
bioMrieux
BacT/ALERT MB
Opakowanie po 25 sztuk
251011
5 olek/zestaw
259877
W celu uzyskania pomocy technicznej w USA, naley kontaktowa si z biurem obsugi klienta bioMrieux pod
numerem 1-800-682-2666. Poza USA kontaktowa si z lokalnym przedstawicielstwem bioMrieux.
bioMrieux, niebieskie logo BacT/ALERT i MB/BacT s uywanymi, zgoszonymi i/lub zarejestrowanymi znakami
towarowymi nalecymi do rmy bioMrieux SA lub jednej z jej lii.
Amphyl jest zastrzeonym znakiem towarowym rmy Linden Corporation.
ATCC jest zastrzeonym znakiem towarowym American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Lipiec 2008
BacT/ALERT MB
PORTUGUS
43-02494
INDICAO DE SECO REVISTA

Armazenar os frascos de cultura BacT/ALERT MB e o MB/BacT Enrichment Fluid entre 15 e 30 C. Proteger da
luz solar directa.
Consulte o glossrio de smbolos no final do folheto.
APLICAO
Os frascos de cultura BacT/ALERT MB com adio do Lquido de Enriquecimento MB/BacT, quando utilizados com
o Sistema de Deteco Microbiana MB/BacT (sem agitao) e o Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT
(com agitao), so um meio de cultura no selectivo para a cultura e isolamento qualitativos de micobactrias em
amostras de sangue.
RESUMO E EXPLICAO
Os frascos de cultura BacT/ALERT MB em combinao com o Lquido de Enriquecimento MB/BacT foram concebidos
para o cultivo de Mycobacterium sp. normalmente isoladas a partir de sangue. O meio suporta o crescimento de
outros microrganismos aerbios, incluindo leveduras, fungos e bactrias. Este sistema completo inclui um agente
ltico (saponina), polienatolsulfonato de sdio (SPS) e outros suplementos de meio que eliminam a etapa de
processamento, impedem a coagulao do sangue e melhoram o crescimento de micobactrias. possvel inocular
um volume de 3 ml a 5 ml de sangue directamente para dentro do frasco de cultura. Os frascos inoculados so
colocados no aparelho onde so incubados (35 - 37 C) e continuamente monitorizados quanto ao crescimento
microbiano.
PRINCPIO DO TESTE
O Sistema de Deteco Microbiana MB/BacT e os Sistemas de Deteco Microbiana BacT/ALERT utilizam um sensor
colorimtrico e a reflexo da luz para monitorizar a presena e a produo de dixido de carbono (CO2) dissolvido
no meio de cultura.1 Se houver presena de microrganismos na amostra de teste, haver produo de dixido
de carbono, medida que os microrganismos forem metabolizando os substratos no meio de cultura. Quando o
crescimento de microrganismos produz CO2, a cor do sensor permevel a gs, instalado no fundo de cada frasco
de cultura, muda de verde-azulado para amarelo. As cores mais claras resultam num aumento das unidades de
reflectncia de acordo com a monitorizao do sistema. A reflectncia do frasco monitorizada e registada pelo
aparelho de 10 em 10 minutos.
REAGENTES
Para diagnstico in vitro.
AVISO: para reduzir os riscos de exposio acidental a agentes infecciosos, devem ser tomadas precaues
adicionais ao utilizar o frasco de cultura BacT/ALERT MB no Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT.
Recomenda-se vivamente que o aparelho seja colocado num laboratrio utilizado para a rotina de cultura
de M. tuberculosis. Em relao s actividades que envolvem a propagao e manipulao de M. tuberculosis
ou de Mycobacterium sp. que tenham crescido em cultura, recomenda-se que estas sejam manipuladas
utilizando tcnicas, equipamento de conteno e instalaes de segurana biolgica de nvel 3, no interior de
cmaras de segurana biolgica.2
PRECAUO: manipular as amostras e os frascos de cultura inoculados como produtos potencialmente
infecciosos. Todos os frascos de cultura inoculados, agulhas de colheita e dispositivos de colheita de sangue
devem ser descontaminados de acordo com os procedimentos da instituio.3
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT MB (codificado com a cor preta) Os frascos de cultura BacT/ALERT MB descartveis esterilizados
contm 29 ml de meio de cultura e um sensor interno para deteco de dixido de carbono, o qual utilizado como
indicador do crescimento microbiano. A formulao do meio consiste em meio lquido Middlebrook 7H9 (0,47%
p/v), casena de digesto pancretica (0,1% p/v), glicerol (1,0% p/v), polienatolsulfonato de sdio (0,025% p/v) em
gua purificada. Os frascos contm uma atmosfera de CO2 em oxignio e nitrognio sob vcuo. A composio do
meio pode ser ajustada para satisfazer requisitos especficos de comportamento funcional.
PRECAUO: os frascos de cultura BacT/ALERT MB so incubados a 37 C, o que exclui potencialmente o
isolamento das micobactrias que exigem outras temperaturas de incubao (por exemplo, M. marinum, M.
ulcerans, M. haemophilum). Durante estudos internos com o frasco de cultura BacT/ALERT MB, os seguintes
isolados foram detectados como sendo positivos no aparelho MB/BacT (sem agitao) e no aparelho BacT/
ALERT (com agitao): M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M.
xenopi, M. bovis, M. gordonae e M. simiae.
PRECAUO: possvel que algumas micobactrias raras e de crescimento lento no cresam ou cresam
lentamente no meio de crescimento do frasco de cultura BacT/ALERT MB. Se suspeitar da existncia de
micobactrias raras e de crescimento lento, que precisem de condies de meios e de cultura especcas, deve
considerar mtodos alternativos ou um tempo de incubao prolongado como meio de recuperao.
PROCEDIMENTO DE TESTE PARA FRASCOS DE CULTURA BacT/ALERT MB

Observaes e precaues prvias
1. AMOSTRAS DE TESTE POTENCIALMENTE INFECCIOSAS. Ter em ateno as Precaues Universais quando

manipular e eliminar materiais infecciosos. Manipular as amostras e as culturas inoculadas como produtos
potencialmente infecciosos.
2. Para minimizar o potencial de disperso durante a inoculao de amostras para os frascos de cultura, utilizar
seringas com agulhas fixas.
3. Todos os frascos de cultura inoculados, agulhas de colheita e dispositivos de colheita de sangue devem ser
descontaminados de acordo com os procedimentos da instituio.3
4. Transportar sempre os frascos de cultura inoculados num suporte ou cesto. Em caso de disperso ou quebra,
possvel que seja produzido um aerossol de micobactrias (incluindo a M. tuberculosis) ou de outras bactrias.
Siga as instrues de orientao de segurana da sua instituio e do CDC/NIH.2 Com o aparecimento do vrus
da imunodeficincia humana/sndrome da imunodeficincia adquirida, a micobacteriemia causada pelo M.
tuberculosis ocorreu com maior frequncia, sendo actualmente o sangue considerado uma potencial fonte de
transmisso no laboratrio.2
5. A manipulao de microrganismos do complexo M. tuberculosis que tenham crescido em cultura exige a
utilizao de tcnicas, equipamento de conteno e instalaes de segurana biolgica de nvel 3.2
6. Tenha cuidado para evitar a contaminao durante a preparao do frasco, durante a colheita da amostra do
doente e durante a inoculao da amostra do doente no frasco de cultura BacT/ALERT MB.
7. O Lquido de Enriquecimento MB/BacT contm os componentes necessrios para assegurar um crescimento
ptimo das micobactrias e contm um agente ltico para a lise das clulas sanguneas. Este produto tem de ser
adicionado a todos os frascos de cultura BacT/ALERT MB.
8. O Lquido de Enriquecimento MB/BacT pode ser adicionado at 24 horas antes ou aps a inoculao do frasco
com a amostra de sangue. Se o Lquido de Enriquecimento for adicionado aps a inoculao do sangue, tem de
ser adicionado utilizando tcnicas de segurana biolgica de nvel 3.2
9. Estes frascos de cultura devem ser utilizados apenas por tcnicos de laboratrio experientes.
Preparao do frasco
NOTA: ter cuidado para evitar a contaminao durante a preparao e inoculao dos frascos com a amostra do
doente.
Antes de utilizar, os frascos de cultura BacT/ALERT MB devem ser inspeccionados visualmente quanto existncia
de vestgios de danos ou deteriorao (descolorao). Os frascos que apresentem sinais de danos, disperso ou
deteriorao devem ser eliminados. O meio em frascos em repouso deve estar transparente. No utilize um frasco
cujo meio apresente turvao, um sensor amarelo ou excesso de presso gasosa, pois tais caractersticas so
indcios de possvel contaminao. Inspeccionar todos os frascos de Lquido de Enriquecimento MB/BacT quanto
existncia de vestgios de danos ou contaminao. No utilizar frascos de Lquido de Enriquecimento MB/BacT
que apresentem turvao.
1. Rotular o frasco de cultura com as informaes do doente. Os cones na etiqueta do frasco ( ,#, ) podem ser
definidos pelo utilizador.
2. Retire a tampa de plstico do frasco de cultura e desinfecte, utilizando uma zaragatoa com lcool ou um produto
equivalente. Deixe secar ao ar.
3. O Lquido de Enriquecimento fornecido em separado e tem de ser adicionado ao frasco de hemocultura
para promover o crescimento de micobactrias. possvel proceder a esta adio num perodo de 24 horas da
inoculao da amostra ou, se a inoculao da amostra for realizada junto da cabeceira, possvel adicionar o
Lquido de Enriquecimento aps a recepo dos frascos inoculados no laboratrio.
Retire a tampa de plstico do frasco de Lquido de Enriquecimento e desinfecte com uma zaragatoa com lcool
ou um produto equivalente. Deixe secar ao ar.
Adicione assepticamente 1 ml de Lquido de Enriquecimento a cada um dos frascos de cultura BacT/ALERT MB.
Com cuidado, utilize uma tcnica assptica para evitar a contaminao do Lquido de Enriquecimento e do meio
do frasco de cultura.
NOTA: se o Lquido de Enriquecimento for adicionado aps a inoculao da amostra de sangue, ento esta etapa deve
ser efectuada numa cmara de segurana biolgica e utilizando vesturio de proteco adequado em conformidade
com as normas de segurana definidas pelo CDC/NIH referentes s precaues de Segurana Biolgica de Nvel 3.2
Utilize uma seringa nova para cada frasco contendo sangue, para evitar uma contaminao cruzada.
Procedimento de inoculao na colheita directa

1. Antes da inoculao, desinfecte a parte de cima do frasco de cultura BacT/ALERT MB utilizando uma zaragatoa
com lcool ou um produto equivalente. Deixe secar ao ar.
2. Efectue a colheita de sangue utilizando um conjunto suturante e a Tampa do Acessrio para Colheita de Sangue
BacT/ALERT, e proceda inoculao directamente no frasco de cultura BacT/ALERT MB, junto da cabeceira do
doente (3 - 5 ml por frasco). Para evitar a inoculao excessiva, monitorize a admisso de volume de sangue para
o frasco de cultura, utilizando as marcaes com incrementos de 5 ml, na etiqueta do frasco.
3. Aps a inoculao, limpar a parte de cima dos frascos com uma gaze embebida em 2% de Amphyl ou outro
agente micobactericida e deixar secar ao ar.
4. Transfira o frasco de cultura inoculado o mais rapidamente possvel para o laboratrio de anlise.
Procedimento de inoculao com o tubo de colheita de sangue
Os frascos de MB/BacT Enrichment Fluid contm um volume de enchimento total de 5,5 ml cada. O Lquido de
Enriquecimento MB/BacT consiste em albumina de soro de bovino (14,5% p/v), cloreto de sdio (2,5% p/v), cido
oleico (0,174% p/v) e saponina (4,4% p/v) em gua purificada.
1. A colheita de sangue pode ainda ser efectuada num tubo estril de SPS ou num tubo heparinizado e inoculado
no frasco de cultura BacT/ALERT MB no laboratrio. No necessrio um processamento prvio da amostra. O
sangue colhido em EDTA inaceitvel, uma vez que o EDTA inibe o crescimento micobacteriano, mesmo apenas
na presena de vestgios de EDTA.
2. Desinfecte a parte de cima do tubo e do frasco de cultura BacT/ALERT MB com uma zaragatoa com lcool ou um
produto equivalente. Deixar o septo secar ao ar antes da inoculao da amostra de sangue.
3. Utilizando uma tcnica assptica, retire 3 - 5 ml do tubo de colheita com uma seringa estril e proceda
inoculao para o frasco de cultura.
4. Aps a inoculao, limpar a parte de cima dos frascos com uma gaze embebida em 2% de Amphyl ou outro
agente micobactericida e deixar secar ao ar.
Materiais adicionais necessrios
INCUBAO E MONITORIZAO
PRECAUO: em ocasies raras podem encontrar-se microrganismos que crescem no meio de crescimento
do frasco de cultura BacT/ALERT MB, mas no produzem dixido de carbono suciente para ser
determinado positivo. Por exemplo, as amostras de doentes que se encontram em tratamento com agentes
antimicobacterianos podem apresentar o crescimento comprometido.
Sistema de Deteco de Micobactrias MB/BacT ou Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT

Middlebrook 7H11 ou outro meio de gelose micobacteriano ou base de ovo
Incubadora de CO2, 37 C 2 C
Seringas e agulhas estreis
Desinfectante micobactericida
Dispositivo para colheita de sangue
Cmara de segurana biolgica
Luvas estreis, descartveis
Batas descartveis
Mscaras descartveis
Recipientes adequados para eliminao de resduos biolgicos perigosos, potencialmente contaminados com
agentes infecciosos
Organismos para Controlo de Qualidade
Materiais disponveis junto da bioMrieux

Sistema de Deteco de Micobactrias MB/BacT e Sistemas de Deteco Microbiana BacT/ALERT
Instrues de armazenamento
Armazenar os frascos de cultura BacT/ALERT MB e o Lquido de Enriquecimento MB/BacT temperatura ambiente
(15 a 30 C). Proteger da luz solar directa. Nas etiquetas dos frascos est impresso o prazo de validade. No utilizar
os frascos de cultura BacT/ALERT MB ou do Lquido de Enriquecimento para alm do ltimo dia do ms indicado na
etiqueta. Antes de serem utilizados, os frascos devero encontrar-se temperatura ambiente.
APARELHOS
Antes de utilizar o sistema de deteco microbiana BacT/ALERT, leia o respectivo Manual do Utilizador.
COLHEITA E PREPARAO DAS AMOSTRAS

Para obter amostras de sangue, extremamente importante efectuar correctamente a colheita. Consulte o Manual
of Clinical Microbiology3 para obter informaes sobre o procedimento de colheita e transporte. imprescindvel
proceder a uma adequada desinfeco da pele para reduzir a possibilidade de contaminao.
A bioMrieux recomenda que os frascos de cultura inoculados sejam colocados no Sistema de Deteco Microbiana
BacT/ALERT o mais rapidamente possvel aps a colheita. Os frascos de cultura inoculados que sofrem um tipo de
atraso ao serem colocados no incubador, devem ser mantidos temperatura ambiente at poderem ser colocados
no referido incubador.
PRECAUO: durante a repicagem de frascos de cultura positiva, dever tomar precaues gerais, uma vez
que estes podem estar demasiado cheios ou conter organismos produtores de gs. O contedo dos frascos de
cultura positiva pode estar sob presso interna elevada. Os frascos de cultura positiva devem ser rapidamente
arejados antes de se proceder colorao ou eliminao, para eliminar o gs eventualmente produzido
durante o metabolismo microbiano.
1. Coloque os frascos de cultura inoculados BacT/ALERT MB no Sistema de Deteco de Micobactrias MB/BacT
(sem agitao) ou no Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT (com agitao), seguindo as instrues
fornecidas no Manual do Utilizador.
2. Depois de os frascos de cultura BacT/ALERT MB serem introduzidos no aparelho, devem permanecer a durante,
pelo menos, 42 dias ou at serem designados como positivos.
Os seguintes procedimentos requerem a utilizao de tcnicas, equipamento de conteno e instalaes de
nvel 3 de segurana biolgica.2
3. Quando o aparelho indicar que uma determinada clula contm um frasco positivo, retirar o frasco de acordo com
os procedimentos indicados no Manual do Utilizador.
4. Deve ser efectuado um esfregao e uma repicagem para bacilos cido-lcool-resistentes de todos os frascos
designados como positivos. Numa cmara de segurana biolgica, misturar o contedo do frasco, desinfectar a
tampa do frasco com zaragatoa com lcool ou um produto equivalente e deixar secar ao ar. Retirar as amostras
para colorao cido-resistente e para repicagem utilizando uma agulha e uma seringa. Desinfectar a tampa do
frasco com um agente micobactericida aps a repicagem. Se o resultado do esfregao cido-lcool-resistente
for positivo, continuar com os procedimentos de identificao de micobactrias especficas empregues pela sua
instituio. Se o esfregao for negativo para bacilos cido-lcool-resistentes, mas revelar a presena de outros
microrganismos, deve realizar-se uma colorao de Gram. Se tanto o esfregao cido-resistente como a colorao
de Gram forem negativos, indicando um possvel falso positivo, o frasco deve ser recarregado no aparelho at ao
crescimento da repicagem ou sua redesignao como positivo ou negativo. Deve ser efectuado um esfregao
e uma repicagem das culturas que foram inicialmente determinadas como falsas positivas e posteriormente
designadas como positivas.
5. Se forem detectados microrganismos no micobacterianos na colorao de Gram, obtenha outra amostra para
cultura, se assim o desejar. Deve tambm ser considerada a possibilidade de septicemia bacteriana.
6. Os resultados de culturas negativas devem ser confirmados por meio de esfregao e/ou subcultura, antes de tais
culturas serem consideradas negativas.
7. No reutilize frascos de cultura BacT/ALERT. Elimine frascos de cultura BacT/ALERT inoculados de acordo com
o protocolo utilizado no seu laboratrio. apropriado proceder autoclavagem e/ou incinerao dos frascos
BacT/ALERT inoculados.2
CARACTERSTICAS DO COMPORTAMENTO BacT/ALERT (COM AGITAO)
APRESENTAO DO RELATRIO DOS RESULTADOS

Resultados
Sinal +, esfregao BAAR +
Sinal +, esfregao BAAR ,
colorao de Gram +
Sinal +, esfregao BAAR ,
colorao de Gram
Relatrio
Positivo para BAAR; identificao pendente
Sem relatrio; ou a amostra est contaminada com microrganismos no
micobacterianos; impossvel determinar a presena/ausncia de BAAR
Sem relatrio. Subcultura para determinar um possvel falso positivo
A nvel interno, foram realizados estudos com culturas inoculadas com os seguintes microrganismos de teste em
nveis 10 UFC/frasco e 100 UFC/frasco, utilizando sangue humano obtido a partir de uma populao saudvel.
Resultados de BacT/ALERT MB no Aparelho BacT/ALERT (com agitao)
Cada caixa de frascos de cultura BacT/ALERT MB inclui um Certificado de Conformidade indicando um desempenho
de crescimento satisfatrio de M. avium ATCC 25291 e M. intracellulare ATCC 13950. Aps a recepo, os novos
lotes ou carregamentos de frascos de cultura de BacT/ALERT MB ou reagentes podem ser testados para controlo de
qualidade. Consulte o procedimento M22-A3 do CLSI/NCCLS quanto aos microrganismos de controlo de qualidade
apropriados. Seguir o procedimento de preparao e inoculao do frasco:
Muitas variveis envolvidas em testes micobacterianos no podem, sob o ponto de vista prtico, ser controladas de
forma a fornecer uma total confiana de que os resultados obtidos se devam apenas ao comportamento funcional
correcto ou incorrecto de qualquer meio de cultura ou sistema de deteco.
Resultados de BacT/ALERT MB no Aparelho MB/BacT (sem agitao)

Inculo
(UFC/frasco)
Tempo at deteco (dias)1

BacT/ALERT MB
Complexo TB
M. tuberculosis (4 estirpes)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 estirpes)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 - 27,2
14,3 - 30,02
14,9 - 23,8
16,2 - 25,5
Fotocromogneos (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 - 14,6
13,1 - 39,9
Escotocromogneos (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 - 30,5
17,2 - 32,62
100
10
100
10
10,4 - 12,5
13,8 - 14,8
9,2 - 13,63
10,93 - 15,7
100
10
8,5 - 12,1
11,0 - 12,9
100
10
2,2 - 2,3
2,6 - 3,2
Micobactria
No-cromogneos (Runyoun III)

M. avium (2 estirpes)
CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 estirpes)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
De crescimento rpido (Runyoun IV)
1
Fotocromogneos (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 - 14,42
8,9 - 16,82
Escotocromogneos (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 - 37,2
21,3 - 43,23
100
10
100
10
7,5 - 11,5
8,5 - 11,8
8,4
9,32
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 - 11,6
9,9 - 13,1
De crescimento rpido (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
No-cromogneos (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Cada microrganismo foi testado trs vezes, tendo-se calculado as mdias. Os valores apresentados constituem
um intervalo dessas mdias, excepto o M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 e M. avium CDC 440, para os quais
apenas apresentada a mdia.
2 Um de trs frascos contaminou; o valor fornecido a mdia de dois frascos.
3 Um de trs frascos no apresentou qualquer crescimento; o valor fornecido a mdia de dois frascos.
NOTA: pode solicitar uma lista de microrganismos raros e de crescimento lento, isolados com os frascos de cultura
BacT/ALERT bioMrieux.4
BIBLIOGRAFIA
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
APRESENTAO
bioMrieux
Cada microrganismo foi testado trs vezes, tendo-se calculado as mdias, excepto quando assinalado. Os valores
apresentados constituem uma mdia dos duplicados.
Um de trs frascos no apresentou qualquer crescimento; o valor fornecido a mdia de dois frascos.
3 Um de trs frascos contaminou; o valor fornecido a mdia de dois frascos.
2
14,1 - 16,7
14,6 - 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
M. bovis CDC 8131
LIMITAES DO TESTE
A nvel interno, foram realizados estudos com culturas inoculadas num aparelho MB/BacT (sem agitao) com os
seguintes microrganismos de teste em nveis 10 UFC/frasco e 100 UFC/frasco, utilizando sangue humano obtido
a partir de uma populao saudvel.
100
10
100
10
100
10
100
10
M. bovis CDC 423
1. Adicionar 1,0 ml de Lquido de Enriquecimento MB/BacT a cada frasco de cultura BacT/ALERT MB necessrio
para o teste.
2. Inocular os frascos representativos com 5,0 ml dos microrganismos de controlo, diludos at 103 UFC/ml, em
sangue de carneiro estril, desfibrinado. Subcultura em placas de Middlebrook 7H11 para determinar a viabilidade
e a contagem.
3. Depois de obter os resultados antecipados, utilizar os restantes frascos para testar as amostras clnicas. Se no
forem obtidos os resultados esperados, contactar a Assistncia a Clientes da bioMrieux.
CARACTERSTICAS DO COMPORTAMENTO MB/BacT (SEM AGITAO)
Tempo at deteco (dias)1

BacT/ALERT MB
Complexo TB
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
CONTROLO DE QUALIDADE
1. As culturas obtidas para um diagnstico primrio aps a iniciao da terapia podem produzir resultados negativos.
2. A recuperao das micobactrias nos frascos BacT/ALERT MB depende da qualidade da amostra recolhida, do
nmero de microrganismos passveis de crescer em cultura existentes no volume da amostra. Uma vez que o
meio no selectivo e no contm antibiticos, quaisquer microrganismos presentes podem crescer no meio.
3. Embora seja uma situao pouco frequente, o frasco de cultura BacT/ALERT MB poder apresentar resultados
positivos devido presena de um nmero muito elevado de leuccitos na amostra de sangue. Isto resultar em
amostras com resultados negativos na subcultura e no esfregao.
4. Os microrganismos so, muitas vezes, em nmero reduzido. geralmente recomendada a colheita de amostras
durante trs dias consecutivos.
5. A morfologia e a pigmentao da colnia devem apenas ser determinadas em meios slidos.
6. Os frascos de cultura BacT/ALERT MB com um sinal positivo podem conter uma ou mais espcies de
micobactrias e/ou outras espcies no micobacterianas. Nas culturas micobacterianas mistas em meio lquido, as
micobactrias de crescimento mais lento podem ser ultrapassadas pelas de crescimento mais rpido ou a cultura
pode ser eliminada mais cedo, aps ser descoberta a micobactria de crescimento mais rpido. A identificao
das micobactrias presentes exige a realizao de uma repicagem e de outros procedimentos adicionais para
identificao dos microrganismos presentes. A consistncia da morfologia microscpica no frasco de cultura
BacT/ALERT ainda no foi estabelecida.
7. As micobactrias podem variar na cido-lcool-resistncia dependendo da estirpe, tempo da cultura e de outras
variveis. Todos os frascos com um sinal positivo devem ser repicados para meios micobacterianos selectivos e
no selectivos. As espcies no micobacterianas podem ultrapassar as micobactrias presentes.
Inculo
(UFC/frasco)
Micobactria
BacT/ALERT MB
25/caixa
251011
5 frascos/kit
259877
Para obter assistncia tcnica nos EUA, contacte o Servio de Atendimento ao Cliente da bioMrieux, atravs do
telefone 1-800-682-2666. Fora dos EUA, contacte o representante local da bioMrieux.
bioMrieux, o logotipo azul, BacT/ALERT e MB/BacT so marcas comerciais utilizadas, pendentes e/ou registadas
pertencentes bioMrieux SA ou a uma das suas filiais.
Amphyl uma marca comercial registada da Linden Corporation.
ATCC uma marca comercial registada da American Type Culture Collection.
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2004, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Julho de 2008
BacT/ALERT MB
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Armazene os frascos de cultura BacT/ALERT MB e o MB/BacT Enrichment Fluid entre 15-30C. Proteja da luz
solar direta.
Consulte o glossrio de smbolos no final do documento.
USO INDICADO
Os frascos de cultura BacT/ALERT MB com a adio do MB/BacT Enrichment Fluid, quando usados com o Sistema de
Deteco de Micobactria MB/BacT (no agitvel) e o Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT (agitvel), um
meio de cultura no seletivo para cultura qualitativa e recuperao de micobactria a partir de amostras sanguneas.
RESUMO E EXPLICAO
Os frascos de cultura BacT/ALERT MB em combinao com o MB/BacT Enrichment Fluid foram projetados para o
cultivo de Mycobacterium sp. comumente isolada no sangue. O meio permitir o crescimento de outros organismos
aerbios, incluindo leveduras, fungos e bactrias. O sistema completo inclui um agente ltico (Saponina),
polianetolsulfonato de sdio (SPS) e outros meios suplementares que eliminam a etapa de processamento, evitam
a coagulao do sangue e estimulam o crescimento de micobactrias. Um volume de sangue de 3 ml a 5 ml
pode ser inoculado diretamente no frasco de cultura. Os frascos inoculados so colocados no aparelho, onde so
incubados (35C-37C) e continuamente monitorados para verificao do crescimento microbiano.
PRINCPIO DO TESTE
O Sistema de Deteco de Micobactria MB/BacT e os Sistemas de Deteco Microbiana BacT/ALERT utilizam
um sensor colorimtrico e luz refletida para monitorar a presena e a produo de dixido de carbono (CO2)
dissolvido no meio de cultura.1 Se houver microrganismos presentes na amostra de teste, o dixido de carbono
produzido medida que os organismos metabolizam os substratos no meio de cultura. Quando o crescimento de
microrganismos produz CO2, a cor do sensor permevel a gs instalado no fundo de cada frasco de cultura muda
de azul esverdeado para amarelo. As cores mais claras resultam em um aumento nas unidades de refletncia
monitoradas pelo sistema. A cada 10 minutos, o aparelho monitora e registra a refletncia do frasco.
REAGENTES
Para uso em diagnstico in vitro.
ADVERTNCIA: Para reduzir os riscos de exposio acidental a agentes infecciosos, devem-se tomar
precaues adicionais ao usar o frasco de cultura BacT/ALERT MB no Sistema de Deteco Microbiana BacT/
ALERT. altamente recomendvel que o aparelho seja colocado em um laboratrio utilizado para a cultura
rotineira de M. tuberculosis. Para atividades que envolvam a propagao e a manipulao de M. tuberculosis
ou o crescimento de Mycobacterium sp. na cultura, recomendamos prticas, equipamentos de conteno e
instalaes com nvel de biossegurana 3.2
CUIDADO: Manipule as amostras e os frascos de cultura inoculados como produtos potencialmente infecciosos.
Todos os frascos de cultura inoculados, agulhas de coleta de amostras e dispositivos de retirada de sangue
devem ser descontaminados de acordo com os procedimentos da sua instituio.3
BacT/ALERT
MB
BacT/ALERT MB (cdigo de cor preto) os frascos de cultura descartveis e estreis BacT/ALERT MB contm 29
ml de meio e um sensor interno que detecta o dixido de carbono como indicador de crescimento microbiano.
A frmula do meio consiste em caldo Middlebrook 7H9 (0,47% p/v), digerido pancretico de casena (0,1% p/v),
Glicerol (1,0% p/v), polianetolsulfonato de sdio (0,025% p/v) em gua destilada. Os frascos contm uma atmosfera
de CO2 em oxignio e nitrognio a vcuo. A composio do meio pode ser ajustada para atender aos critrios
especficos de desempenho.
CUIDADO: Os frascos de cultura BacT/ALERT MB so incubados a 37C, o que potencialmente impede
a recuperao de micobactrias que requeiram outras temperaturas de incubao (p.ex., M. marinum, M.
ulcerans, M. haemophilum). Os seguintes isolados foram positivamente detectados no aparelho MB/BacT
(no agitvel) e no aparelho BacT/ALERT (agitvel) com o frasco de cultura BacT/ALERT MB durante estudos
internos: M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M.
bovis, M. gordonae e M. simiae.
CUIDADO: possvel que certas micobactrias raras e exigentes no cresam ou cresam lentamente no meio
de cultura dos frascos BacT/ALERT MB. Se houver suspeita de micobactrias raras e exigentes, que requeiram
meio de cultura e condies especiais, deve-se recorrer a mtodos alternativos ou aumentar o tempo de
incubao para a recuperao.
CUIDADO: Em algumas ocasies raras, possvel encontrar organismos que crescem nos meios de cultura
dos frascos BacT/ALERT MB mas no produzem uma quantidade suciente de dixido de carbono para serem
determinados como positivos. Por exemplo, as amostras de pacientes que estejam sendo submetidos a
tratamento com agentes antimicobacterianos podem apresentar um crescimento deciente.

Cada ampola de MB/BacT Enrichment Fluid contm um volume total de 5,5 ml. O MB/BacT Enrichment Fluid
composto de albumina srica bovina (14,5% p/v), cloreto de sdio (2,5% p/v), cido olico (0,174% p/v), Saponina
(4,4% p/v), em gua destilada.
Materiais adicionais necessrios

Sistema de Deteco de Micobactria MB/BacT ou Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT
Caldo Middlebrook 7H11 ou outro gar para micobactrias ou meio de cultura com ovo
Incubadora de CO2, 37C 2C
Seringas e agulhas estreis
Desinfetante micobactericida
Aparelhagem para coleta de sangue
Cabine de segurana biolgica
Luvas descartveis estreis
Jalecos descartveis
Mscaras descartveis
Recipientes adequados para o descarte de materiais biolgicos perigosos, potencialmente contaminados com
agentes infecciosos
Organismos de Controle de Qualidade
4. Sempre transporte os frascos de cultura inoculados em um rack ou cesta. Em caso de derramamento ou quebra,
pode-se formar um aerossol de micobactrias (incluindo M. tuberculosis) ou de outras bactrias. Siga as diretrizes
de segurana da sua instituio e do CDC/NIH.2 Com o aparecimento do vrus da imunodeficincia humana/
sndrome da imunodeficincia adquirida, micobacteremia causada por M. tuberculosis tem ocorrido com mais
freqncia e o sangue agora considerado uma fonte potencial de transmisso no laboratrio.2
5. A manipulao de organismos complexos de M. tuberculosis desenvolvidos em cultura exige prticas,
equipamentos de conteno e instalaes com nvel de biossegurana 3.2
6. Tome cuidado para evitar contaminao durante a preparao do frasco, a coleta da amostra do paciente e a
inoculao da amostra do paciente no frasco de cultura BacT/ALERT MB.
7. O MB/BacT Enrichment Fluid contm componentes que so necessrios para assegurar um crescimento ideal de
micobactrias, alm de um agente ltico para lise das clulas sanguneas. Este produto deve ser adicionado a todos
os frascos de cultura BacT/ALERT MB.
8. O MB/BacT Enrichment Fluid pode ser adicionado at 24 horas antes ou depois da inoculao do frasco com a
amostra de sangue. Se a adio ocorrer depois da inoculao do sangue, o Enrichment Fluid deve ser adicionado
usando as prticas com nvel de biossegurana 3 apropriadas.2
9. Os frascos de cultura devem ser utilizados apenas por tcnicos de laboratrio treinados.
Preparao dos frascos

NOTA: Tome cuidado para evitar contaminao durante o preparo do frasco e durante a inoculao da amostra do
paciente.
Antes de serem usados, os frascos de cultura BacT/ALERT MB devem ser examinados para assegurar que no h sinais
de dano ou deteriorao (descolorao). Frascos que apresentem evidncias de danos, vazamento ou deteriorao
devem ser descartados. O meio em frascos no movimentados deve ser claro. No use frascos com meio turvo,
excesso de presso gasosa ou sensor amarelo; essas caractersticas so indcios de possvel contaminao. Tambm
inspecione todas as ampolas de MB/BacT Enrichment Fluid para verificar se houve dano ou contaminao. No use
ampolas de MB/BacT Enrichment Fluid que apresentem turbidez.
1. Rotule o frasco de cultura com as informaes do paciente. Os cones no rtulo do frasco ( ,#, ) podem ser
definidos pelo usurio.
2. Retire a tampa plstica do frasco de cultura e desinfete com algodo com lcool ou equivalente. Deixe secar.
3. O Enrichment Fluid fornecido separadamente e deve ser adicionado aos frascos de cultura sangunea para o
crescimento de micobactrias. Essa adio pode ser feita em at 24 horas da inoculao da amostra ou, se a
inoculao da amostra for realizada na cama, aps o recebimento das ampolas inoculadas no laboratrio.
Retire a tampa plstica da ampola de Enrichment Fluid e desinfete com algodo com lcool ou equivalente.
Deixe secar.
Adicione assepticamente 1 ml de Enrichment Fluid a cada frasco de cultura BacT/ALERT MB.
Empregue tcnicas asspticas detalhadas para evitar a contaminao do Enrichment Fluid e do meio no frasco
de cultura.
NOTA: Se o Enrichment Fluid for adicionado depois da inoculao da amostra de sangue, esta etapa deve ser
realizada em uma cabine de segurana biolgica e usando roupas de proteo apropriadas para atender aos
padres de segurana estabelecidos pelo CDC/NIH para as diretrizes de nvel de biossegurana 3.2 Para evitar
contaminao cruzada, use uma seringa nova para cada frasco contendo sangue.
Procedimento de inoculao direta

1. Antes da inoculao, desinfete a tampa do frasco de cultura BacT/ALERT MB com algodo com lcool ou
equivalente. Deixe secar.
2. Colha o sangue usando um conjunto em formato borboleta e uma Tampa do Adaptador BacT/ALERT para Coleta
de Sangue e inocule diretamente no frasco de cultura BacT/ALERT MB na cama do paciente (3-5 ml por frasco).
Para impedir inoculao em excesso, monitore o volume de sangue colocado no frasco de cultura, usando as
marcas incrementais de 5 ml no rtulo do frasco.
3. Aps a inoculao, limpe as tampas dos frascos com gaze embebida em 2% de Amphyl ou outro agente
micobactericida e deixe secar.
4. Leve o frasco de cultura inoculado para o laboratrio de testes imediatamente.
Procedimento de inoculao em tubo de coleta de sangue

1. O sangue tambm pode ser colhido em um tubo estril com SPS ou heparinizado e inoculado no frasco de cultura
BacT/ALERT MB no laboratrio. No necessrio processamento prvio da amostra. Sangue colhido em EDTA no
aceito porque o EDTA, mesmo em quantidades muito pequenas, inibe o crescimento de micobactrias.
2. Desinfete a tampa do tubo de coleta de sangue e a tampa do frasco de cultura BacT/ALERT MB com algodo com
lcool ou equivalente. Deixe as divisrias secarem antes da inoculao da amostra de sangue.
3. Usando tcnicas asspticas, retire 3-5 ml do tubo de coleta com uma seringa estril e inocule no frasco de cultura.
4. Aps a inoculao, limpe a tampa do frasco com gaze embebida em 2% de Amphyl ou outro agente
micobactericida e deixe secar.
INCUBAO E MONITORAMENTO
CUIDADO: preciso precauo ao fazer subcultura de frascos de cultura positivos, pois eles podem estar
cheios demais ou conter organismos que produzem grande quantidade de gases. O contedo dos frascos
de cultura positivos pode estar sob presso interna elevada. Os frascos de cultura positivos devem ser
temporariamente ventilados antes da colorao ou do descarte, para eliminar o gs produzido durante o
metabolismo microbiano.
1. Coloque os frascos de cultura BacT/ALERT MB inoculados no Sistema de Deteco de Micobactria MB/BacT
(no agitvel) ou no Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT (agitvel), seguindo as instrues fornecidas
no Manual do Usurio.
2. Uma vez colocados, os frascos de cultura BacT/ALERT MB devem permanecer no aparelho por, no mnimo, 42 dias
ou at que haja comprovao de resultado positivo.
Os procedimentos a seguir requerem o uso de prticas, equipamentos de conteno e instalaes com nvel
de biossegurana 3.2
Leia o Manual do Usurio antes de usar o Sistema de Deteco Microbiana BacT/ALERT.
3. Quando o aparelho indicar que uma clula especfica contm um frasco positivo, retire o frasco de acordo com os
procedimentos fornecidos no Manual do Usurio.
4. Devem-se fazer esfregao e subcultura de todos os frascos determinados como positivos para a deteco de
bacilos cido-resistentes. Em uma cabine de segurana biolgica, misture os contedos dos frascos, desinfete a
tampa com algodo com lcool ou equivalente e deixe secar. Retire a amostra para colorao cido-resistente
e subcultura usando uma seringa e agulha. Desinfete a tampa do frasco com um agente micobactericida aps a
subcultura. Se o esfregao para bactrias cido-resistentes for positivo, realize os procedimentos de identificao
de micobactria especficos empregados por sua instituio. Se o esfregao der negativo para bacilos cidoresistentes, mas revelar a presena de outros microrganismos, deve-se realizar uma colorao de Gram. Se o
esfregao cido-resistente e a colorao de Gram derem negativos, indicando um possvel falso positivo, o frasco
deve ser colocado de volta no aparelho at ocorrer o crescimento da subcultura ou at ser identificado como
positivo ou negativo. Deve-se fazer esfregao e subcultura das culturas que inicialmente apresentarem resultados
falso positivos e em seguida positivos.
5. Se outros organismos diferentes de micobactrias forem vistos na colorao de Gram, obtenha outra amostra para
cultura, se desejar. A possibilidade de septicemia bacteriana deve ser levada em considerao.
6. As culturas negativas podem ser verificadas com esfregao e/ou subcultura antes de serem descartadas como
negativas.
7. No reutilize os frascos de cultura BacT/ALERT. Descarte os frascos de cultura BacT/ALERT inoculados de
acordo com o protocolo do seu laboratrio. conveniente usar autoclave e/ou incinerar os frascos BacT/ALERT
inoculados.2
COLETA E PREPARAO DE AMOSTRAS
RELATRIO DOS RESULTADOS
Materiais disponveis da bioMrieux

Sistema de Deteco de Micobactria MB/BacT ou Sistemas de Deteco Microbiana BacT/ALERT
Instrues de armazenamento
Armazene os frascos de cultura BacT/ALERT MB e o MB/BacT Enrichment Fluid temperatura ambiente
(15-30C). Proteja da luz solar direta. O prazo de validade est impresso na etiqueta de cada frasco. No use os
frascos de cultura BacT/ALERT MB ou as ampolas de Enrichment Fluid aps o ltimo dia do ms indicado. Antes de
serem utilizados, os frascos devem estar temperatura ambiente.
APARELHOS
extremamente importante colher as amostras corretas para a cultura sangunea. Consulte o Manual de
Microbiologia Clnica3 para obter informaes sobre os procedimentos apropriados para coleta e transporte de
amostras. Desinfetar a pele adequadamente um requisito essencial para reduzir a incidncia de contaminao.
A bioMrieux recomenda que, aps a coleta, os frascos de cultura inoculados sejam colocados no Sistema de
Deteco Microbiana BacT/ALERT o mais rpido possvel. Os frascos de cultura inoculados que ficarem do lado de
fora devem ser mantidos temperatura ambiente at poderem ser colocados na incubadora.
PROCEDIMENTO DE TESTE PARA FRASCO DE CULTURA BacT/ALERT MB

Observaes e precaues preliminares
1. AMOSTRA DE TESTE POTENCIALMENTE INFECTANTE. Observe as precaues universais ao manusear e descartar
materiais infectantes. Manipule as amostras e os frascos de cultura inoculados como produtos potencialmente
infecciosos.
2. Para minimizar o potencial de vazamento durante a inoculao das amostras nos frascos de cultura, use seringas
com agulhas fixas.
3. Todos os frascos de cultura inoculados, agulhas de coleta de amostras e dispositivos de retirada de sangue devem
ser descontaminados de acordo com os procedimentos da sua instituio.3
Resultados
Relatrio
Sinal +, Esfregao AFB +

Sinal +, Esfregao AFB ,
Colorao Gram +
Sinal +, Esfregao AFB ,
Colorao Gram
AFB positivo; identificao pendente

Sem relato; ou amostra contaminada com organismos no micobacterianos;
impossvel determinar presena/ausncia de AFB
Sem relato. Subcultura para determinar possvel falso positivo
CONTROLE DE QUALIDADE
Um Certificado de Conformidade acompanha cada caixa de frascos de cultura BacT/ALERT MB, indicando
desempenho de crescimento de M. avium ATCC 25291 e M. intracellulare ATCC 13950 satisfatrio. Aps o
recebimento, novos lotes ou remessas de frascos de cultura BacT/ALERT MB ou reagentes podem ser testados para
controle de qualidade. Consulte o CLSI/NCCLS M22-A3 para obter informaes sobre os organismos de Controle de
Qualidade apropriados. Siga o procedimento de preparo e inoculao do frasco:
1. Adicione 1,0 ml de MB/BacT Enrichment Fluid a cada frasco de cultura BacT/ALERT MB necessrio para o teste.
2. Inocule frascos representativos com 5,0 ml de organismos de controle, diludos em 103 CFU/ml de sangue de ovelha
desfribrinado. Faa a subcultura em placas com Middlebrook 7H11 para determinar a viabilidade e a contagem.
3. Aps a obteno dos resultados esperados, use os frascos restantes para testar amostras clnicas. Se no obtiver
os resultados esperados, entre em contato com o Servio de Atendimento ao Cliente da bioMrieux.
BIBLIOGRAFIA
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
DISPONIBILIDADE
bioMrieux
LIMITAES DO TESTE
BacT/ALERT MB
25/caixa
251011
Na prtica, muitas das variveis envolvidas no teste micobacteriano no podem ser controladas para garantir que
os resultados obtidos sejam devidos exclusivamente ao desempenho adequado ou inadequado de qualquer meio
de cultura ou sistema de deteco.
5 ampolas/kit
259877
1. Culturas obtidas para diagnstico primrio aps o incio da terapia podem produzir resultados negativos.
2. A recuperao de micobactrias em frascos de cultura BacT/ALERT MB depende da qualidade da amostra colhida
e do nmero de organismos culturveis por volume de amostra. Como o meio no seletivo e no contm
antibiticos, qualquer microrganismo presente pode crescer ali.
3. Com pouca freqncia, podem ocorrer frascos de cultura BacT/ALERT MB positivos devido ao nmero muito alto de
glbulos brancos presentes na amostra de sangue. Isso resulta em amostras de esfregao e subcultura negativas.
4. O nmero de organismos normalmente pequeno. Geralmente, recomenda-se a coleta de amostras por trs
dias consecutivos.
5. A morfologia e a pigmentao das colnias devem ser determinadas apenas em meio slido.
6. Os frascos de cultura BacT/ALERT MB com sinal positivo podem conter uma ou mais espcies de micobactria e/ou
outras espcies no micobacterianas. Em culturas de micobactrias mistas em caldo, uma cultura de crescimento
rpido pode excluir por competio uma cultura de crescimento lento, ou a cultura pode ser descartada
prematuramente aps a deteco de organismos de crescimento rpido. A identificao da micobactria presente
requer a execuo de subcultura e procedimentos adicionais para identificar os organismos presentes. No se
estabeleceu a uniformidade da morfologia microscpica em frascos de cultura BacT/ALERT MB.
7. Dependendo da estirpe, da idade da cultura e de outras variveis, o grau de resistncia a cido das micobactrias
pode variar. Todos os frascos com sinal positivo devem ser subculturados em meio seletivo e em meio no seletivo
para micobactrias. As no-micobactrias podem crescer mais do que as micobactrias presentes.
bioMrieux, o logotipo azul, BacT/ALERT e MB/BacT so marcas comerciais utilizadas, pendentes e/ou registradas
da bioMrieux SA ou de uma de suas subsidirias.
CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO MB/BacT (NO AGITVEL)

Foram realizados estudos de inoculao internos em um aparelho MB/BacT (no agitvel) usando os seguintes
organismos de teste em nveis 10 UFC/frasco e 100 UFC/frasco em sangue humano de uma populao de
adultos saudveis.
Resultados de BacT/ALERT MB em aparelho MB/BacT (no agitvel)

Inculo
(UFC/frasco)
Micobactria
Intervalo de tempo
at a deteco (dias)1
BacT/ALERT MB
Complexo TB
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 estirpes)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,3 27,2
14,3 30,02
14,9 23,8
16,2 25,5
Fotocromgenos (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,0 14,6
13,1 39,9
Escotocromgenos (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,4 30,5
17,2 32,62
No-cromgenos (Runyoun III)

CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
100
10
10,4 12,5
13,8 14,8
9,2 13,63
10,93 15,7
100
10
8,5 12,1
11,0 12,9
Crescimento rpido (Runyoun IV)

100
10
2,2 2,3
2,6 3,2
Cada organismo foi testado em triplicata e as mdias foram obtidas, exceto quando mencionado. Os valores dados
so mdias das rplicas.
Um dos trs frascos no mostrou crescimento; o valor a mdia de dois frascos.
3 Um dos trs frascos est contaminado; o valor a mdia de dois frascos.
2
CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO BacT/ALERT (AGITVEL)
Foram realizados estudos de inoculao internos usando os seguintes organismos de teste em nveis 10 UFC/
frasco e 100 UFC/frasco em sangue humano de uma populao de adultos saudveis.
Resultados de BacT/ALERT MB em aparelho MB/BacT (Agitvel)

Inculo
(UFC/frasco)
Intervalo de tempo
at a deteco (dias)1
BacT/ALERT MB
100
10
100
10
100
10
100
10
14,1 16,7
14,6 18,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Fotocromgenos (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,9 14,42
8,9 16,82
Escotocromgenos (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,8 37,2
21,3 43,23
100
10
100
10
7,5 11,5
8,5 11,8
8,4
9,32
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,0 11,6
9,9 13,1
Crescimento rpido (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
Micobactria
Complexo TB
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
M. bovis CDC 423
M. bovis CDC 8131
No-cromgenos (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Cada organismo foi testado em triplicata e foram calculadas as mdias. Os valores so um conjunto dessas mdias,
exceto para M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 e M. avium CDC 440, para os quais apenas a mdia dada.
2 Um dos trs frascos est contaminado; o valor a mdia de dois frascos.
3 Um dos trs frascos no mostrou crescimento; o valor a mdia de dois frascos.
NOTA: Uma lista de organismos raros e exigentes recuperados com frascos de cultura BacT/ALERT est disponvel
na bioMrieux4 mediante solicitao.
Para obter assistncia tcnica nos EUA, entre em contato com o Servio de Atendimento ao Cliente da bioMrieux,
no nmero 1-800-682-2666. Em outros pases, entre em contato com um representante regional da bioMrieux.
Amphyl uma marca registrada da Linden Corporation.

ATCC uma marca registrada da American Type Culture Collection.
Atendimento ao Consumidor Tel. 0800-26 48 48
Fabricado por: bioMrieux, Inc., Durham, North Carolina, EUA
Distribuido por bioMrieux Brasil S/A
Estrada do Mapu, 491 Jacarepagu
CEP 22710-261 Rio de Janeiro RJ
CNPJ: 33.040.635/0001-71
bioMrieux, Inc.
Box 15969
BIOMRIEUX 2000, 2003, 2007, 2008
bioMrieux, S.A.
www.biomerieux.com
Julho de 2008
BacT/ALERT MB
SVENSKA
43-02494
BETECKNAR ETT REVIDERAT AVSNITT

Frvara BacT/ALERT MB-odlingsflaskor och MB/BacT Enrichment Fluid vid 1530 C. Skydda mot direkt solljus.
Se symbollistan sist i bipacksedeln.
AVSEDD ANVNDNING
Nr BacT/ALERT MB-odlingsflaskor anvnds med tillsats av MB/BacT Enrichment Fluid i MB/BacT system fr
detektering av mykobakterier (icke-skakande) och BacT/ALERT system fr detektering av mikrober (skakande) r
det ett icke-selektivt odlingsmedium fr kvalitativ odling och pvisning av mykobakterier i blodprover.
SAMMANFATTNING OCH FRKLARING

BacT/ALERT MB-odlingsflaskor i kombination med MB/BacT Enrichment Fluid r avsedda fr odling av
Mycobacterium sp. vanligtvis isolerat frn blod. Mediet frmjar vxt av andra aeroba organismer, inklusive jst,
svampar och bakterier. Detta kompletta system inkluderar ett lytiskt mne (saponin), natriumpolyanetolsulfonat
(SPS) och andra mediatillsatser som eliminerar beartbetningssteget, frhindrar koagulering av blod och befrmjar
tillvxt av mykobakterier. En volym om 3 ml till 5 ml blod kan inokuleras direkt i odlingsflaskan. Inokulerade flaskor
placeras i instrumentet, dr de inkuberas (35 till 37 C) och kontinuerligt vervakas fr mikrobiell vxt.
ANALYSPRINCIP
MB/BacT system fr detektering av mykobakterier och BacT/ALERT system fr detektering av mikrober anvnder
en kolorimetrisk sensor och reflekterat ljus fr att vervaka frekomsten och produktion av koldioxid (CO2) som
lsts i odlingsmediet.1 Vid frekomst av mikroorganismer i provet, produceras koldioxid i takt med att organismerna
metaboliserar substraten i odlingsmediet. Nr tillvxande mikroorganismer producerar CO2, ndras frgen p den
gaspermeabla sensorn som finns i botten av varje odlingsflaska frn blgrnt till gult. Den ljusare frgen resulterar
i en kning av de reflektansenheter som registreras av systemet. Flaskans reflektans kontrolleras och registreras av
instrumentet var tionde minut.
REAGENSER
Fr in vitro-diagnostik.
VARNING: Fr att minska riskerna fr oavsiktlig exponering fr smittmnen ska ytterligare frsiktighetstgrder
vidtagas nr BacT/ALERT MB-odlingsaska anvnds i BacT/ALERT system fr detektering av mikrober. Det
rekommenderas starkt att instrumentet placeras p ett laboratorium som anvnds fr rutinodling av M.
tuberculosis. Fr aktiviteter som innefattar frkning och hantering av M. tuberculosis eller Mycobacterium
sp. som odlas p medium rekommenderas frfarande enligt bioskerhetsniv 3, spridningsskyddande
utrustning och anlggningar.2
FRSIKTIGHET: Prover och inokulerade odlingsaskor ska hanteras som potentiellt infektisa. Alla inokulerade
odlingsaskor, provtagningsnlar och anordningar fr blodprovstagning ska dekontamineras enligt rutinerna
vid din institution.3
BacT/ALERT MB
BacT/ALERT MB (svart frgkod) BacT/ALERT MB sterila odlingsflaskor fr engngsbruk innehller 29 ml
odlingsmedium samt en intern sensor fr detektering av koldioxid som en indikator p mikrobiell vxt. Odlingsmediets
sammansttning utgrs av Middlebrook 7H9-buljong (0,47 % vikt/volym), kasein nedbrutet med pankreasenzymer
(0,1 % vikt/volym), glycerol (1,0 % vikt/volym), natriumpolyanetolsulfonat (0,025 % vikt/volym), i renat vatten.
Flaskorna innehller en gasblandning av CO2 i syrgas och kvvgas i vakuum. Mediets sammansttning kan justeras
fr att uppfylla specifika funktionskrav.
FRSIKTIGHET: BacT/ALERT MB-odlingsaskor inkuberas vid 37 C vilket potentiellt utesluter pvisning av
mykobakterier som krver andra inkuberingstemperaturer (t.ex. M. marinum, M. ulcerans, M. haemophilum).
Fljande isolat detekterades som positiva i MB/BacT-instrumenten (icke-skakande) och i BacT/ALERTinstrumentet (skakande), med BacT/ALERT MB-odlingsaska vid interna studier; M. tuberculosis, M. avium,
M. intracellulare, M. chelonae, M. fortuitum, M. kansasii, M. xenopi, M. bovis, M. gordonae och M. simiae.
FRSIKTIGHET: Det r mjligt att vissa sllsynta och krvande mykobakterier inte vxer eller vxer lngsamt
i odlingsmediet i BacT/ALERT MB-odlingsaskorna. Vid misstanke om frekomst av sllsynta, krvande
mykobakterier som fordrar speciella medier och odlingsfrhllanden br alternativa metoder eller frlngd
inkubationstid fr pvisning vervgas.
FRSIKTIGHET: I enstaka fall kan organismer ptrffas, vilka vxer i odlingsmediet i BacT/ALERT MBodlingsaskorna, men som inte producerar tillrckligt med koldioxid fr att kunna klassas som positiva.
Prover frn patienter som behandlas med tuberkuloslkemedel kan till exempel uppvisa nedsatt vxt.

MB/BacT Enrichment Fluid-ampullerna innehller en total fyllnadsvolym p 5,5 ml vardera. MB/BacT Enrichment
Fluid bestr av bovint serumalbumin (14,5 % vikt/volym), natriumklorid (2,5 % vikt/volym), oleinsyra (0,174 %
vikt/volym), saponin (4,4 % vikt/volym), i renat vatten.
Ytterligare material som behvs

MB/BacT system fr detektering av mykobakterier eller BacT/ALERT system fr detektering av mikrober
Middlebrook 7H11 eller annat agar- eller ggbaserat medium fr odling av mykobakterier
CO2-inkubator, 37 C 2 C
Sterila sprutor och kanyler
Mykobakterieddande desinfektionsmedel
Apparatur fr blodprovstagning
Biologisk skerhetsbnk
Sterila engngshandskar
Engngsklder
Engngsmasker
Lmpliga riskavfallsbehllare fr material som kan vara kontaminerade med smittmnen
Kvalitetskontrollorganismer
Material som kan bestllas frn bioMrieux

MB/BacT system fr detektering av mykobakterier och BacT/ALERT system fr detektering av mikrober
6. Vidta frsiktighetstgrder fr att frhindra kontaminering vid beredning av flaskan, nr patientprovet tas och vid
inokulering av patientprovet i BacT/ALERT MB-odlingsflaska.
7. MB/BacT Enrichment Fluid innehller komponenter som r ndvndiga fr att skerstlla optimal vxt av
mykobakterier samt ett lytiskt mne fr lysering av blodkroppar. Denna produkt mste tillsttas till alla BacT/ALERT
MB odlingsflaskor.
8. MB/BacT Enrichment Fluid kan tillsttas upp till 24 timmar fre eller efter inokulation av flaskan med blodprovet.
Om Enrichment Fluid tillstts efter inokulation av blodet, mste det ske med frfaranden enligt bioskerhetsniv 3.2
9. Dessa odlingsflaskor fr endast anvndas av utbildad laboratoriepersonal.
Beredning av aska
OBS! Vidta frsiktighetstgrder fr att frhindra kontaminering bde vid beredning av flaskan och vid inokulering
av patientprovet.
Fre anvndning ska BacT/ALERT MB-odlingsflaskor inspekteras fr tecken p skador eller annan frsmring
(missfrgning). Flaskor som uppvisar tecken p skador, lckage eller annan frsmring ska kasseras. Mediet i orrda
flaskor ska vara klart. Flaskor med grumligt medium, hgt gastryck eller en gul sensor ska ej anvndas; dessa fynd kan
vara tecken p kontaminering. Inspektera ven alla MB/BacT Enrichment Fluid-ampuller fr tecken p skador eller
kontaminering. Anvnd inte MB/BacT Enrichment Fluid-ampuller som visar tecken p grumlighet.
1. Mrk odlingsflaskan med patientinformation. Symbolerna p flasketiketten ( ,#, ) kan definieras av anvndaren.
2. Ta av plastlocket frn odlingsflaskan och desinficera med en alkoholtork eller liknande. Lt lufttorka.
3. Enrichment Fluid tillhandahlls separat och mste tillsttas i blododlingsflaskan fr att vxt av mykobakterier
ska kunna ske. Tillsatsen kan ske inom 24 timmar frn inokulation av provet. Om inokulation av provet grs vid
patientens sng kan Enrichment Fluid tillsttas nr de inokulerade ampullerna anlnder till laboratoriet.
Ta av plastlocket frn Enrichment Fluid-ampullen och desinficera med en alkoholtork eller liknande. Lt lufttorka.
Tillstt med aseptisk teknik 1 ml Enrichment Fluid i varje BacT/ALERT MB-odlingsflaska.
Anvnd omsorgsfull aseptisk teknik fr att undvika kontaminering av Enrichment Fluid och medium i
odlingsflaskan.
OBS! Om Enrichment Fluid tillstts efter inokulation av blodprovet mste det hr steget utfras vid en biologisk
skerhetsbnk och lmpliga skyddsklder mste anvndas fr att uppfylla de skerhetsstandarder som utfrdats av CDC/
NIH fr bioskerhetsniv 3.2 Undvik korskontaminering genom att anvnda en ny spruta fr varje flaska med blod.
Inokulationsprocedur vid direktdragning

1. Desinficera fre inokulering BacT/ALERT MB-odlingsflaskans topp med en alkoholtork eller liknande. Lt lufttorka.
2. Samla upp blodet med hjlp av en butterfly-kanyl och BacT/ALERT adapterhylsa fr blodprovstagning och inokulera
direkt i BacT/ALERT MB-odlingsflaska vid patientens sng (3-5 ml per flaska). Frhindra verinokulering genom att
vervaka blodvolymen i odlingsflaskan med hjlp av 5 ml-mrkena p flasketiketten.
3. Efter inokulationen torkar du av flaskornas lock med en kompress indrnkt med 2 % Amphyl eller annat
mykobakterieddande medel och lt lufttorka.
4. Transportera den inokulerade odlingsflaskan direkt till testlaboratoriet.
Inokulationsprocedur med blodprovsrr

1. Blodprov kan ven tas i ett sterilt SPS-rr eller ett hepariniserat rr och inokuleras i BacT/ALERT MB-odlingsflaskan
p laboratoriet. Ingen frbehandling av provet krvs. Blodprov tagna i EDTA-rr fr inte anvndas eftersom EDTA
hmmar vxt av mykobakterier till och med i sm mngder.
2. Desinficera blodprovsrrets topp och BacT/ALERT MB-odlingsflaskans topp med en alkoholtork eller liknande. Lt
septa lufttorka fre inokulering av blodprovet.
3. Dra med aseptisk teknik upp 35 ml frn provrret med en steril spruta och inokulera i odlingsflaskan.
4. Efter inokulationen torkar du av flaskornas lock med en kompress indrnkt med 2 % Amphyl eller annat
mykobakterieddande medel och lt lufttorka.
INKUBATION OCH MONITORERING

FRSIKTIGHET: Vid utodling av positiva odlingsaskor br allmnna frsiktighetsttgrder vidtas d de kan
vara verfulla eller innehlla kraftigt gasproducerande organismer. kat internt tryck kan uppst i positiva
odlingsaskor. Positiva odlingsaskor br luftas under en kort period fre frgning eller kassering s att de
gaser som bildats vid den mikrobiella metabolismen frigrs.
1. Stt in de inokulerade BacT/ALERT MB-odlingsflaskorna i MB/BacT system fr detektering av mykobakterier
(icke-skakande) eller BacT/ALERT system fr detektering av mikrober (skakande) enligt instruktionerna i
anvndarhandboken.
2. Nr BacT/ALERT MB-odlingsflaskorna har satts in i instrumentet ska de st kvar i minst 42 dagar eller tills de
betecknas som positiva.
Fljande procedurer krver frfarande enligt bioskerhetsniv 3, spridningsskyddande utrustning och
anlggningar.2
3. Nr instrumentet anger att en specifik cell innehller en positiv flaska ska flaskan tas ut i enlighet med de
procedurer som finns i anvndarhandboken.
4. Frn alla flaskor som betecknas som positiva br prov tas fr fortsatt underskning av utstryk och fr utodling av
syrafasta stavar. Blanda flaskinnehllet i en biologisk skerhetsbnk, desinficera flaskproppen med en alkoholtork
eller liknande och lt lufttorka. Avlgsna prov fr syrafast frgning och odla ut med en spruta och kanyl. Desinficera
flaskproppen med mykobakterieddande medel efter utodling. G vidare med de specifika frfaranden fr
identifiering av mykobakterier som anvnds vid din institution om det syrafasta utstryket r positivt. Om utstryket
r negativt fr syrafasta stavar, men visar frekomst av andra mikroorganismer, utfr du en Gramfrgning. Om
bde det syrafasta utstryket och Gramfrgningen r negativa, vilket tyder p ett falskt positivt resultat, ska flaskan
sttas tillbaka i instrumentet och lmnas kvar dr tills vxt uppstr i utodlingen eller flaskan omklassificeras som
positiv eller negativ. Odlingar som initialt bedmts ssom falskt positiva och drefter omklassificerats som positiva
ska underskas vidare med utstryk och odlas ut.
5. Om icke-mykobakteriella organismer visas i Gramfrgningen tar du ett nytt prov fr odling om s nskas. Bakteriell
septikemi br ocks vervgas som en mjlighet.
6. Negativa odlingar kan kontrolleras via utstryk och/eller fortsatt odling innan de kasseras ssom negativa.
7. teranvnd inte BacT/ALERT odlingsaskor. Kassera inokulerade BacT/ALERT odlingsflaskor i enlighet med
laboratoriets rutiner. Autoklavering och/eller frbrnning av inokulerade BacT/ALERT-flaskor r lmpligt.2
RAPPORTERING AV RESULTAT
Resultat
Rapportering
Signal +, AFB-utstryk +
Signal +, AFB-utstryk , Gramfrgning +
Positiv fr syrafasta stavar; identifiering pgr

Ingen rapportering, eller provet r kontaminerat med andra organismer
n mykobakterier, nrvaro/frnvaro av syrafasta stavar kan inte bedmas
Ingen rapportering. Odla ut fr att faststlla mjliga falska positiva
Frvaringsanvisningar
Signal +, AFB-utstryk , Gramfrgning
Frvara BacT/ALERT MB-odlingsflaskor och MB/BacT Enrichment Fluid vid rumstemperatur (1530 C). Skydda mot
direkt solljus. Utgngsdatum r tryckt p varje flasketikett. Anvnd inte BacT/ALERT MB odlingsflaskor eller Enrichment
Fluid-ampuller efter sista dagen i angiven mnad. Flaskorna mste ha rumstemperatur innan de tas i bruk.
KVALITETSKONTROLL
INSTRUMENT
Ls igenom anvndarhandboken till BacT/ALERT system fr detektering av mikrober fre anvndning.
PROVTAGNING OCH BEREDNING AV PROVER

Det r mycket viktigt att provtagningen grs p rtt stt nr man tar prover fr blododling. Se Manual of Clinical
Microbiology3 fr instruktioner fr provtagning och transport. En frutsttning r att huden desinficeras noggrant fr
att frhindra kontaminering.
bioMrieux rekommenderar att inokulerade odlingsflaskor stts in i BacT/ALERT system fr detektering av
mikrober s snart som mjligt efter provtagning. Inokulerade odlingsflaskor som inte stts in direkt ska frvaras i
rumstemperatur tills de kan placeras i inkubatorn.
ANALYSFRFARANDE FR BacT/ALERT MB-ODLINGSFLASKOR

Inledande kommentarer och frsiktighetstgrder
1. POTENTIELLT INFEKTIST PROV. Iakttag generella frsiktighetstgrder vid hantering och kassering av infektist
material. Prover och inokulerade odlingar ska hanteras som potentiellt infektisa.
2. Minimera risken fr lckage vid inokulation av prov i odlingsflaskor genom att anvnda sprutor med fasta kanyler.
3. Alla inokulerade odlingsflaskor, provtagningsnlar och anordningar fr blodprovstagning ska dekontamineras
enligt rutinerna vid din institution.3
4. Inokulerade odlingsflaskor ska alltid bras i stll eller korg. Om du rkar spilla eller om flaskan gr snder kan en
aerosol med mykobakterier (inklusive M. tuberculosis) eller andra bakterier genereras. Flj de skerhetsfreskrifter
som utfrdats vid din institution och av CDC/NIH.2 I och med spridningen av humant immunbristvirus/frvrvat
immunbristsyndrom frekommer mykobakteriemi orsakat av M. tuberculosis allt oftare och blod klassas nu som
en potentiell verfringsklla p laboratorier.2
5. Vid hantering av M. tuberculosis-komplexorganismer som odlas p medium krvs frfarande enligt bioskerhetsniv
3, spridningsskyddande utrustning och anlggningar.2
Ett intyg om uppfyllande av gllande krav medfljer varje frpackning med BacT/ALERT MB-odlingsflaskor
och indikerar fullgod prestanda avseende vxt av M. avium ATCC 25291 och M. intracellulare ATCC 13950. Efter
mottagandet kan nya partier eller leveranser av BacT/ALERT MB-odlingsflaskor eller reagenser kvalitetskontrolltestas.
Se CLSI/NCCLS M22-A3 fr relevanta organismer fr kvalitetskontroll. Flj proceduren Beredning och inokulering
av flaskor:
1. Tillstt 1,0 ml MB/BacT Enrichment Fluid till varje BacT/ALERT MB-odlingsflaska som ska anvndas fr testning.
2. Inokulera representativa flaskor med 0,5 ml av kontrollorganismerna, utspdda till 103 CFU/ml i sterilt defibrinerat
frblod. Odla ut p Middlebrook 7H11-plattor fr att faststlla viabilitet och antal.
3. Efter att frvntade resultat erhllits kan resterande flaskor anvndas fr analys av kliniska prover. Om frvntade
resultat inte erhllits kontaktar du bioMrieux Customer Service.
BESTLLNINGSINFORMATION
ANALYSENS BEGRNSNINGAR
Det r mnga variabler vid test fr mykobakterier som inte praktiskt kan kontrolleras fr att totalt skerstlla att erhllna
resultat uteslutande beror p korrekt respektive felaktig funktion i ett odlingsmedium eller detektionssystem.
bioMrieux
BacT/ALERT MB
25/lda
251011
1. Odlingar som tagits fr primrdiagnos efter insatt behandling kan ge negativa resultat.
2. Pvisning av mykobakterier i BacT/ALERT MB-odlingsflaskorna r beroende av kvaliteten p det tagna provet och
antalet odlingsbara organismer i provvolymen. Eftersom odlingsmedierna r icke-selektiva och inte innehller
antibiotika kan alla typer av frekommande mikroorganismer vxa p odlingsmedierna.
3. Det kan i enstaka fall frekomma positiva BacT/ALERT MB-odlingsflaskor beroende p att det finns ett mycket stort
antal vita blodkroppar i blodprovet. Dessa prover ger negativa resultat vid utstryk och utodling.
4. Det r ofta endast f organismer i provet. I allmnhet rekommenderas att prover tas under tre dagar i fljd.
5. Kolonimorfologi och pigmentering ska endast faststllas p fasta medier.
6. BacT/ALERT MB-odlingsflaskor som signaleras som positiva kan innehlla en eller flera mykobakteriearter och/
eller andra icke-mykobakteriearter. Vid blandade mykobakterieodlingar i buljong kan en lngsamt vxande
art utkonkurreras av en snabbt vxande, eller s kan odlingen ha kasserats s snart den snabbvxande arten
detekterades. Fr identifiering av frekommande mykobakterier krvs utodling och ytterligare frfaranden fr
att identifiera nrvarande organismer. verensstmmelse vad gller mikroskopisk morfologi i BacT/ALERT
odlingsflaskor har ej faststllts.
7. Mykobakteriernas syrafasthet kan variera med stam, odlingens lder och andra variabler. Alla flaskor med en
positiv signal frn instrumentet ska utodlas p fr mykobakterier bde selektiva och icke-selektiva medier. Ickemykobakterier kan ge vervxt ver de mykobakterier som finns nrvarande.
5 ampuller/kit
259877
PRESTANDAKARAKTRISTIK MB/BacT (ICKE-SKAKANDE)

Interna inokulationsstudier har utfrts i ett MB/BacT-instrument (icke-skakande) med fljande testorganismer med
niver p 10 CFU/flaska och 100 CFU/flaska med humant blod frn en frisk vuxenpopulation.
Resultat av BacT/ALERT MB i MB/BacT-instrumentet (icke-skakande)

Inokulat
(CFU/aska)
Mycobacterium
Detektionstid (dagar)1
BacT/ALERT MB
TB-komplex
M. tuberculosis (4 stammar)
CDC 18293, CDC 18280
CDC 18283, CDC 18286
M. bovis (2 stammar)
CDC 423, CDC 8131
100
10
100
10
13,327,2
14,330,02
14,923,8
16,225,5
Fotokromogena (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
10,014,6
13,139,9
Scotokromogena (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
14,430,5
17,232,62
100
10
100
10
10,412,5
13,814,8
9,213,63
10,9315,7
100
10
8,512,1
11,012,9
100
10
2,22,3
2,63,2
Icke-kromogena (Runyoun III)

M. avium (2 stammar)
CDC 569, CDC 1155
CDC 440, CDC 768
M. intracellulare (4 stammar)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
Snabbvxande (Runyoun IV)
1
Varje organism analyserades i triplikat, varefter medelvrden berknades utom dr s anges. Angivna vrden r
medelvrden fr replikaten.
En av tre flaskor uppvisade ingen vxt; det angivna vrdet r medelvrdet av tv flaskor.
3 En av tre flaskor kontaminerade; det angivna vrdet r medelvrdet av tv flaskor.
2
PRESTANDAKARAKTRISTIK BacT/ALERT (SKAKANDE)
Interna inokulationsstudier har utfrts med fljande testorganismer med niver p 10 CFU/flaska och 100 CFU/
flaska med humant blod frn en frisk vuxenpopulation.
Resultat av BacT/ALERT MB i BacT/ALERT-instrumentet (skakande)

Inokulat
(CFU/aska)
Detektionstid (dagar)1
BacT/ALERT MB
100
10
100
10
100
10
100
10
14,116,7
14,618,4
10,6
13,22
19,8
23,2
19,7
NG4
Fotokromogena (Runyoun I)
M. simiae CDC 524
100
10
7,914,42
8,916,82
Scotokromogena (Runyoun II)

M. xenopi CDC 725
100
10
17,837,2
21,343,23
100
10
100
10
7,511,5
8,511,8
8,4
9,32
M. intracellulare (4 stammar)
CDC 403, VA 5,
CDC 644, CDC 1406
100
10
9,011,6
9,913,1
Snabbvxande (Runyoun IV)

100
10
2,1
2,3
Mycobacterium
TB-komplex
M. tuberculosis (3 stammar)
CDC 18292, CDC 18280,
CDC 18286
M. bovis CDC 423
M. bovis CDC 8131
Icke-kromogena (Runyoun III)

CDC 569, CDC 768,
CDC 1155
M. avium CDC 440
Varje organism analyserades i triplikat, varefter medelvrden berknades. Angivna vrden utgr intervall av
dessa medelvrden med undantag fr M. bovis, M. tuberculosis CDC 18283 och M. avium CDC 440, dr endast
medelvrdet r angivet.
2 En av tre flaskor kontaminerade; det angivna vrdet r medelvrdet av tv flaskor.
3 En av tre flaskor uppvisade ingen vxt; det angivna vrdet r medelvrdet av tv flaskor.
OBS! En lista ver sllsynta och krvande organismer som pvisas med BacT/ALERT odlingsflaskor kan fs p
begran frn bioMrieux.4
REFERENSER
Micro 1990; 28(7), 1608-1612.
Fr teknisk assistans i USA, kontakta bioMrieux Customer Service p 1-800-682-2666. Utanfr USA, kontakta lokal
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No reutilizar
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Fragile, handle with care

Forsigtig, kan g i stykker
Zerbrechlich, mit Sorgfalt behandeln
,
Frgil, manipular con precaucin
Fragile, manipuler avec prcaution
Fragile, maneggiare con cura
Lettknuselig, m behandles med forsiktighet
Ostronie, kruche
Frgil, manusear com cuidado
Frgil, manusear com cuidado
mtligt, hantera med frsiktighet
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Authorized representative in the European Community

Reprsentant i det Europiske Fllesskab
Bevollmchtigter in der Europischen Gemeinschaft

Representante autorizado en la Comunidad Europea
Mandataire dans la Communaut europenne
Mandatario nella Comunit Europea
Autorisert representant i Europeiske Felleskap
Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej
Representante Autorizado na Comunidade Europeia
Representante autorizado na Comunidade Europia
Auktoriserad representant inom Europeiska gemenskapen
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Forsigtig, se brugsanvisning
Achtung: Begleitdokumente beachten
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Atencin, consultar documentos adjuntos
Attention, voir notice dinstructions
Attenzione: vedere le istruzioni per luso
Advarsel, les vedlagt dokumentasjon
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Ateno, consultar a documentao includa
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04-2008

Bact/Alert MB: Tuberculosis SP

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BacT/ALERT MB

DENOTES REVISED SECTION

SUMMARY AND EXPLANATION

PRINCIPLE OF THE TEST

Direct draw inoculation procedure

Blood collection tube inoculation procedure

MB/BacT Enrichment Fluid

Additional materials required

Materials available from bioMrieux

INCUBATION AND MONITORING

MB/BacT Mycobacteria Detection System and BacT/ALERT Microbial Detection Systems

Signal +, AFB Smear +

AFB positive; identification pending

SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION

BacT/ALERT MB CULTURE BOTTLE TEST PROCEDURE

Signal +, AFB Smear , Gram Stain

LIMITATIONS OF THE TEST

5. Colony morphology and pigmentation should only be determined on solid media.

PERFORMANCE CHARACTERISTICS MB/BacT (NON-SHAKING)

Results of BacT/ALERT MB in MB/BacT Instrument (non-shaking)

Time to Detection (days)1

Scotochromogens (Runyoun II)

Nonchromogens (Runyoun III)

PERFORMANCE CHARACTERISTICS BacT/ALERT (SHAKING)

Results of BacT/ALERT MB in BacT/ALERT Instrument (Shaking)

Time to Detection (days)1

Scotochromogens (Runyoun II)

Rapid Growers (Runyoun IV)

Nonchromogens (Runyoun III)

MB/BacT Enrichment Fluid

ANGIVER NDRET AFSNIT

MB/BacT Enrichment Fluid

Andre ndvendige materialer

Materialer, der fs fra bioMrieux

Procedure for inokulation ved direkte udtagning

Procedure for inokulation ved brug af blodprveglas

Signal +, AFB udstrygning +

AFB positiv; identifikation afventes

TESTPROCEDURE FOR BacT/ALERT MB DYRKNINGSFLASKE

Signal +, AFB udstrygning , Gram-farvning

FUNKTIONSKARAKTERISTIKA MB/BacT (IKKE-VUGGENDE)

Resultater for BacT/ALERT MB i MB/BacT-system (ikke-vuggende)

Scotokromogene (Runyoun II)

Ikke-pigmenterede (Runyoun III)

FUNKTIONSKARAKTERISTIKA BacT/ALERT (VUGGENDE)

Resultater for BacT/ALERT MB i BacT/ALERT-system (vuggende)

Scotokromogene (Runyoun II)

Hurtigt voksende bakterier (Runyoun IV)

Ikke pigmenterede (Runyoun III)

MB/BacT Enrichment Fluid

KENNZEICHNET BERARBEITETEN ABSCHNITT

ZUSAMMENFASSUNG UND ERLUTERUNG

MB/BacT Enrichment Fluid

Zustzlich bentigte Materialien

Von bioMrieux erhltliches Material

ENTNAHME UND VORBEREITUNG DER PROBEN

TESTVERFAHREN FR BacT/ALERT MB-KULTURFLASCHEN

Vorbereiten der Kulturasche

Vorgehensweise beim Beimpfen mit direkter Entnahme

Vorgehensweise beim Beimpfen mit einem Blutentnahmerhrchen

INKUBATION UND BERWACHUNG

LEISTUNGSMERKMALE BacT/ALERT (MIT SCHTTELN)

AFB positiv, Identifizierung ausstehend