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Introduo
No dia 9 de Agosto, inicimos um estgio no Instituto de Histologia e
Embriologia Abel Salazar, da Faculdade de Medicina na Univerisade do Porto, orientado
pela Dr Sandra Rebelo no mbito do Programa Cincia Viva, denominado Ocupao dos
Jovens no Vero.
A arte em Movimento: a clula o ttulo do estgio em que participmos, no
entanto, como este tema muito vasto e abstracto, especificmo-nos nas reas da Biologia
Molecular e Histologia. Os nossos objectivos ao participarmos neste estgio eram
profundar os nossos conhecimentos, realizar novas experincias, ambientarmo-nos com o
local de trabalho dos cientistas e, o mais importante, constatarmos se o nosso futuro
profissional passa pela rea da cincia.
Neste relatrio, apresentaremos de forma sucinta as experincias mais
relevantes que realizmos durante o perodo do estgio.
Msculo Esqueltico
Vasos Sanguneos
Epitlio
fig. 2 lngua de co
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Fig.4 - Traqueia
Fig. 5 - Corao
Plasma
Hemcias
Leuccito neutrfilo
Leuccito neutrfilo
Leuccito linfcito
Fig. 6 Sangue
Imunohistoqumica
A imunohistoqumica um mtodo histolgico para a determinao histoqumica de
protenas especficas, mediante os anticorpos marcados. Os anticorpos podem estar ligados
a enzimas, a fluorescncia, entre outros.
Os mtodos histoqumicos baseiam-se na utilizao de anticorpos especficos,
marcados mediante um enlace qumico com uma substncia que se torna visvel, sem afectar
a capacidade do anticorpo para formar um complexo com o antignio.
A realizao desta tcnica veio a propsito do artigo The Paired Homeodomain
Protein DRG11 is required for the Projection of Cutaneous Sensory Affernt Fibers to the
Dorsal Spinal Cord, do qual iremos falar mais adiante.
O objectivo desta experincia foi verificar se num embrio de 18.5 dias, haveria um
terceira vaga de neurognese, ao nvel dos neurnios das lminas superficiais da medula
espinhal. Como controlo usaram-se lminas de medula espinhal e DRG de ratinhos com uma
semana de idade ps-natal, uma vez que nesta fase os neurnios daquelas regies esto
perfeitamente diferenciados. Deste modo, os anticorpos utilizados foram o DRG11
(marcao verde), que marca os neurnios nociceptivos existentes na poro dorsal da
medula espinhal e os neurnios sensitivos do DRG, e o Neu-N (marcao encarnada) que
marca todos os neurnios ps-mitticos (j formados).
Fig. 8 Gnglio raquidiano de um ratinho com 7 dias (P7) marcado duplamente com
Neu-N e DRG11
Cortes em Criostto
Fig.9 Criostto
Terceiro ventrculo
Aqueduto cerebral
Sulcus limitans
Telencfalo
vescula
Hiptalamo
Futuro cortex
cerebral
Neste caso, usou-se a parafina como matriz de incluso. Esta tcnica embora
mais longa e complexa que a anterior, permite cortes com uma morfologia muito melhor.
Antes da incluso da pea em parafina, necessrio passa-la por uma
concentrao crescente de alcois (70, 90, 100) para a remoo da gua que se encontra
nos tecidos. Isto porque a parafina imiscvel com a gua e ento, se no se tivesse
retirado toda a gua, a parafina no iria preencher os espaos que continham gua e
consequentemente os cortes ficariam deformados. Termina-se com uma passagem de meia
hora em benzol. Posteriormente a pea colocada numa soluo 1:1 benzol:parafina antes
de ser includa em parafina lquida (60C). A pea fica definitivamente includa em parafina,
quando em molde apropriado e temperatura ambiente, se deixa solidificar a parafina que
rodeia a pea. Agora j se pode cortar em micrtomo de parafina.
Medula espinhal
Discos
intervertebrais
Canal central
Electroforese de ADN
Denomina-se electroforese ao transporte de partculas num campo elctrico. A
electroforese de ADN feita normalmente em gel de agarose. O gel feito dilundo a
agarose numa soluo tampo, com o auxlio de calor; de seguida, adiciona-se brometo de
etdio que se vai incorporar entre as bases do ADN, permitindo a sua futura visualizao. A
soluo colocada num molde prprio de acordo com o tamanho do gel que se pretende
fazer, colocam-se os pentes que marcam os poos e deixa-se arrefecer. O gel colocado
numa tina de electroforese que contm a soluo de tampo, adicionam-se em cada poo a
respectiva amostras (previamente coradas com um marcador que possibilita a vizualizao
da frente de migrao durante a electroforese) e ligam-se os elctrodos corrente
elctrica. Neste caso, como o ADN tem carga negativa a pH neutro, as amostras migram do
plo negativo para o plo positivo, ao longo do gel. As amostras so identificadas por bandas
que se formam e que se tornam visveis quando colocados em luz ultravioleta. Isto
possvel, devido presena de brometo de etdio, proporcionando s bandas, quando
expostas luz ultravioleta, emitirem uma fluorescncia visvel alaranjada.
ADN fingerprinting
O ADN figerprinting uma tcnica bsica de biologia molecular que nos d a
impresso digital do ADN. Este tcnica usada em testes de paternidade, na identificao
de indivduos em incidentes, etc.
Nesta experincia, o objectivo era encontrar um criminoso para um determinado
crime. Para isso, recolhida a amostra de ADN da cena do crime, procedemos recolha de
ADN de 5 suspeitos. Posteriormente, cortmos o ADN com enzimas de restrio
apropriadas, que vo cortar em locais especficos de acordo com a sua capacidade para
reconhecer pequenas sequncias nucletidas ao longo do ADN; e de seguida, fizmos a
electroforese em gel de agarose. Depois, de realizada a electroforese comparmos o
padro de bandas presentes no gel.
Resultado ADN fingerprinting
Legenda:
1 Amostra do Crime
2 Suspeito Joo
3 Suspeito Patrcia
4 Suspeito X
5 Suspeito Y
6 Suspeito Sandra
10
4
Legenda:
1- Joo
2- Patrcia
3- X
4- Y
+/-
-/-
+/-
+/+
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Concluso
No incio do estgio, foi um pouco complicado porque os nossos conhecimentos
eram limitados e bsicos. Contudo, a nossa integrao no grupo de trabalho fez-nos no
desistir de aprofundar os nossos conhecimentos.
Ao longo do estgio, tivemos a oportunidade de visualizar algumas experincias
que estavam a decorrer, nomeadamente a disseco de um rato, e participar numa
investigao a decorrer no instituto, acerca da presena de neurnios pr-mitticos na
medula espinhal.
No final deste estgio, estmos contentes por termos tido a oportunidade de
trabalhar num ambiente cientfico, onde aprendemos novidades ao nvel da biologia
molecular e celular e da histologia.
Com este estgio constatmos que a nossa escolha realmente pode passar pela
rea da investigao.
Por tudo isto, agradecemos o acolhimento, a pacincia, a oportunidade e os
conhecimentos que nos foram oferecidos durante a nossa participao nesta aventura.
Ainda, agradecemos ao Programa Cincia Viva por encorajarem e dar oportunidades aos
jovens de trabalhar com verdadeiros cientistas. Por fim, queremos agradecer Dr Sandra
Rebelo por nos ter aturado.
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