Farm A Cog Nosia

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO
FACULTAD DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
Manual de Prcticas
de Laboratorio de Farmacognosia
Isabel Rivero Cruz Rogelio Pereda Miranda Mario Alberto Figueroa Saldvar Abraham Madariaga Mazn
Mara Isabel Aguilar Laurents Mabel Fragoso Serrano Rachel Mata Essayag
Primera edicin 2014 D.R. Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Ciudad Universitaria, Delegacin Coyoacn, C.P. 04510, Mxico, Distrito Federal.
La publicacin de esta obra fue posible gracias al apoyo de la Coordinacin de Comunicacin,
a travs de los Departamentos de Editorial y de Informacin (Taller de Imprenta).
Diseo de portada: LDCV Vianey Islas Bastida. Diseo de interiores: Maricela Hernndez Casasola.
Responsable editorial: CME Brenda lvarez Carreo.
Hecho en Mxico. Prohibida la reproduccin total o parcial por cualquier medio, sin la
autorizacin escrita del titular de los derechos patrimoniales.
ISBN: 978-607-02-5508-3
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA

ISBN: 978-607-02-5508-3
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
FACULTAD DE QUMICA, UNAM
Autores:
Isabel Rivero Cruz
Rogelio Pereda Miranda
Mario Alberto Figueroa Saldvar
Abraham Madariaga Mazn
Mara Isabel Aguilar Laurents
Mabel Fragoso Serrano
Rachel Mata Essayag
FINANCIADO POR: PROYECTO PAPIME 201511
Publicacin autorizada por el Comit Editorial de la Facultad de Qumica

Julio 2014
Primera edicin 2014 D.R. Universidad Nacional Autnoma de Mxico.

Ciudad Universitaria, Delegacin Coyoacn, C.P. 04510, Mxico, Distrito Federal.
La publicacin de esta obra fue posible gracias al apoyo de la Coordinacin de Comunicacin,
Diseo de portada: LDCV Vianey Islas Bastida. Diseo de interiores: Maricela Hernndez Casasola.
Responsable editorial: CME Brenda lvarez Carreo.
Hecho en Mxico. Prohibida la reproduccin total o parcial por cualquier medio, sin la autorizacin escrita del titular de los
derechos patrimoniales.
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA
Primera edicin: 2014

Fecha de edicin: 11 de abril de 2014
D.R. 2014 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO
Ciudad Universitaria, Delegacin Coyoacn,
C.P. 04510, Mxico, Distrito Federal.
ISBN: 978-607-02-5508-3
Tamao: 27.40 MB
Tipo de impresin: PDF
Tiraje: 300
Prohibida la reproduccin total o parcial por cualquier medio,
sin la autorizacin escrita del titular de los derechos patrimoniales.
Impreso y hecho en Mxico
ndice
Introduccin........................................................................................................................................9
Prctica 1. Obtencin de la pinocembrina a partir de Dysphania graveolens....................................... 10
Prctica 2. Separacin del alcaloide piperina a partir de Piper nigrum................................................ 16
Prctica 3. Aislamiento de la diligustlida a partir de la raz de Ligusticum porteri................................ 22
Prctica 4. Camellia sinensis: obtencin de la cafena del t negro, pruebas de identidad
y composicin del t verde.............................................................................................. 28
Prctica 5. Control de calidad (pruebas de identidad y de composicin) de las hojas de
Psidium guajava....................................................................................................................... 38
Prctica 6. Mtodos para identificar a los compuestos marcadores de la droga
cruda y preparados de Cassia senna...................................................................................... 44
Prctica 7. Pruebas de identidad de Amphiptherygium adstringens........................................................... 52
Prctica 8. Obtencin del crudo alcaloideo a partir de la especie Datura stramonium......................... 58
Prctica 9. Preparacin de los aceites esenciales de Eugenia caryophyllus, Ligusticum porteri,
Lippia graveolens, Poliomintha longiflora y Thymus vulgaris......................................................... 64
Prctica 10. Obtencin de la hesperidina a partir del pericarpio de Citrus sinensis............................ 70
Prctica 11. Mezcla de esteroles de Glycine max.................................................................................... 74
Prctica 12. Obtencin de la cerina a partir de Quercus suber.............................................................. 80
Introduccin
La calidad del proceso de enseanza-aprendizaje prctico de la asignatura de Farmacognosia, del plan

de estudios de la carrera de Qumica Farmacutica Biolgica (QFB), depende de la generacin del
material didctico apropiado, de tal manera que la adecuacin del programa se encuentre en armona
con las necesidades del sector productivo, promovidas por las tendencias en el uso y la regulacin de los
productos herbolarios y de otros agentes teraputicos de origen natural.

En este contexto, el seguimiento de protocolos experimentales del programa de prcticas como
instrumento que facilite el aprendizaje terico-prctico de la Farmacognosia, adems de ser una importante herramienta, ofrecer una mayor eficiencia, una mejor secuencia didctica y una motivacin,
tanto para profesores como para alumnos, durante el complejo proceso de enseanza-aprendizaje.

El programa vigente del curso de Farmacognosia consta de cuatro unidades, dos de las cuales
son terico-prcticas: la correspondiente a la Unidad II Procedimientos generales para la obtencin
de los principios activos de origen vegetal y la Unidad IV Metabolitos secundarios de importancia medicinal. Los doce protocolos experimentales descritos en este Manual versan sobre los procedimientos
especficos utilizados para la obtencin de los productos naturales bioactivos a partir de sus fuentes naturales, incluyendo su identificacin qumica, botnica y biolgica (Prcticas 1, 2, 3, 8, 10, 11 y 12). En
particular, las Prcticas de la 4 a la 7 cubren aspectos relacionados con el control de calidad de materias
primas empleadas en la teraputica aloptica, mismas que gozan de gran prestigio para el alivio de diversos padecimientos. La realizacin de la Prctica 9 abarca el estudio de los aceites esenciales, lo cual
es de gran relevancia, pues un hecho bien documentado es que la mayora de las esencias tienen una
importante demanda en la industria alimenticia, cosmtica y farmacutica.

Con base en lo expuesto, y de forma colegiada, el grupo de los profesores de Farmacognosia,
con el apoyo del Programa de Apoyo a Proyectos para la Innovacin y Mejoramiento de la Enseanza
(PAPIME), a travs de los financiamientos PE 201504 y PE 201511, presenta este Manual de Prcticas de
Laboratorio de Farmacognosia, con el propsito de adecuar el programa de esta asignatura a los requerimientos contemporneos propios de la disciplina, as como a las necesidades inherentes del sector productivo,
para que el alumno desarrolle las habilidades necesarias para su futuro desempeo como un especialista
de alto nivel, en los distintos quehaceres de la profesin farmacutica relacionados con los productos
naturales medicinales.
Los autores
Prctica 1. Obtencin de la pinocembrina a partir

de Dysphania graveolens
1.1 Objetivo general
Proporcionar al alumno el entrenamiento prctico en los procedimientos especficos, utilizados para la
obtencin y la identificacin de la pinocembrina del epazote de zorrillo.
1.2 Objetivos particulares

1.
2.
3.
Preparar el extracto orgnico del epazote de zorrillo mediante la tcnica de reflujo.

Fraccionar el extracto orgnico mediante una cromatografa en columna abierta.
Separar y purificar a la pinocembrina, constituyente mayoritario presente en el extracto,
mediante un proceso de cromatografa en capa delgada.
4. Establecer la identidad del producto aislado mediante la comparacin de sus propiedades
fsicas y cromatogrficas con aquellas de una muestra autntica.
1.3Antecedentes
La especie Dysphania graveolens (Willd.) Mosyakin & Clemants (Amaranthaceae) es una planta erguida y
glandulosa, que mide aproximadamente entre 20 y 80 cm de altura. Sus tallos son ramificados, rojizos
y con rayas. Sus hojas son ovadas u oblongas, miden entre dos y seis cm de largo por uno a tres cm de ancho,
poseen lbulos oblongos o deltoides, sin pelos o con una cubierta pegajosa en el haz, cubiertas de glndulas amarillas en el envs y con peciolo delgado. Sus flores son pediceladas con numerosas cimas axilares y
muy aromticas. Esta especie se conoce popularmente como epazote de zorrillo y se encuentra ampliamente
distribuida en el continente americano, desde el Sur de los Estados Unidos hasta Argentina. En Mxico,
se localiza en el Norte del pas en los estados de Chihuahua y Coahuila, pasando por la zona centro
(Hidalgo, Estado de Mxico, Morelos y Distrito Federal) hasta el Sur (Chiapas).
La planta se utiliza en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones del mundo, por sus propiedades
antihelmnticas, estomquicas y carminativas. Uno de los constituyentes activos del epazote de zorrillo es la pinocembrina, flavanona con actividad fasciolicida, antiprotozoaria y antihelmntica (Camacho et al., 1991).
Figura 1. Dysphania graveolens (Willd.) Mosyakin & Clemants (Amaranthaceae) y estructura de la pinocembrina.
Prctica 1
00
11
1.4 Procedimiento experimental

1.4.1 Preparacin del extracto
Se pesan 50 g de material vegetal en un matraz bola de 500 mL y se adicionan 300 mL de hexano para
someterlo a un proceso de reflujo durante una hora. Transcurrido este tiempo, el extracto de hexano se
filtra en un embudo Bchner y se concentra a presin reducida hasta sequedad. Posteriormente, el material
vegetal se somete a una segunda extraccin por reflujo utilizando acetona durante 60 minutos. Al cabo de
este proceso, el extracto de acetona obtenido se filtra y se concentra a presin reducida hasta obtener un
extracto seco. Finalmente, ambos extractos obtenidos se pesan en una balanza granataria para calcular el
rendimiento.
1.4.2 Fraccionamiento preliminar del extracto orgnico

El extracto de acetona (inciso 1.4.1) se fracciona mediante una cromatografa en columna abierta, de
acuerdo con el procedimiento que se describe a continuacin:
(1) Se pesan 10 g de gel de slice (fase estacionaria) por cada gramo de muestra y se desactiva
con agua al 10% (v/v). Se reserva la octava parte de la fase estacionaria desactivada.
(2) Se disuelve la muestra a cromatografiar en un volumen no mayor de 5 mL de acetona; para
favorecer la disolucin de la muestra se puede calentar en bao Mara. A continuacin se
adsorbe la disolucin anterior en la octava parte de la slice reservada en el punto 1 y se
deja secar a temperatura ambiente durante 15 minutos.
(3) Se suspende la gel de slice restante en una mezcla de hexanoCHCl3 (9:1) y se vierte en
la columna cromatogrfica conteniendo 15 mL de la mezcla de elucin.
(4) Se siembra la columna con la mezcla adsorbente-muestra (punto 2).
(5) Se realiza el proceso de elucin utilizando los gradientes entre hexanoCHCl3 que se
indican en el Cuadro 1 y se recolectan las fracciones cromatogrficas correspondientes.
(6) Por ltimo, las fracciones recolectadas se concentran a presin reducida y se realiza el
anlisis cromatogrfico en capa delgada, empleando como sistema de elucin hexano
CHCl3 (1:1). Para la visualizacin de los constituyentes de cada fraccin, se procede de
acuerdo a la tcnica que se describe en el inciso 1.4.4.
Cuadro 1. Sistemas de elucin utilizados para el desarrollo del proceso

cromatogrfico en columna abierta.
12
Nm. de fraccin
Mezcla de elucin
Volumen (mL)
HexCHCl3 (9:1)
120
HexCHCl3 (8:2)
120
HexCHCl3 (7:3)
120
HexCHCl3 (6:4)
120
HexCHCl3 (1:1)
120
HexCHCl3 (4:6)
120
Prctica 100
1.4.3 Separacin y purificacin de la pinocembrina mediante

un proceso de cromatografa en capa delgada
La separacin y la purificacin de la pinocembrina a partir de la fraccin 4 (inciso 1.4.2) se realiza mediante una cromatografa en capa delgada modalidad preparativa. Para ello, se utilizan placas de vidrio
recubiertas de gel de slice con un espesor de 0.25 mm (gel de slice F254 Merck), de acuerdo al siguiente
procedimiento:
(1) 15 mg de la muestra se disuelven en 0.5 mL de HexCHCl3 (6:4). La aplicacin de la
muestra se realiza con un capilar en forma de banda.
(2) El proceso de elucin se lleva a cabo con una mezcla de CH2Cl2MeOH (95:5). La
fase mvil deber recorrer 18 cm a partir del punto de aplicacin para desarrollar la
cromatoplaca. Concluido el proceso de elucin, se retira la cromatoplaca de la cmara y
se deja secar bajo una corriente de aire.
(3) Examinar la cromatoplaca con luz UV (254 y 365 nm) y marcar las zonas de fluorescencia.
(4) A continuacin, se desprenden las zonas de absorcin de inters de la cromatoplaca
mediante el empleo de una esptula. La slice obtenida se transfiere a un matraz
Erlenmeyer de 50 mL y se adicionan aproximadamente 30 mL de CH2Cl2. La suspensin
anterior se agita constantemente durante un periodo de 20 minutos y al cabo de este
tiempo, la suspensin se filtra y se concentra a presin reducida.
(5) Finalmente, se realiza el anlisis cromatogrfico cualitativo del compuesto obtenido,
como referencia se utiliza a la pinocembrina.
1.4.4 Identificacin de la pinocembrina

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada utilizando la tcnica de coelucin. Como referencia se emplea una muestra comercial de pinocembrina (Figura 2).
Soporte: Gel de slice F254 Merck.
Fase mvil: CH2Cl2MeOH (95:5).
Preparacin de la muestra: Se disuelve 1 mg del producto aislado en 0.5 mL de CH2Cl2EtOH (8:2).
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de la referencia de pinocembrina en 0.5 mL de
CH2Cl2EtOH (8:2).
Revelador: Solucin cromgena de sulfato crico amoniacal [(NH4)4Ce(SO4)4 2H2O (1.2 g); H2SO4 (2.2 mL);
hielo picado (35 g)].
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa la referencia, la muestra y una mezcla (1:1) de la
muestra y la referencia (coelucin) en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber existir una separacin de
por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase
mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida,
se roca la solucin reveladora hasta cubrir la cromatoplaca y se calienta hasta la aparicin de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a la muestra, a la referencia y a la coelucin (e.g. mezcla de la muestra
y la referencia) deben coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
Prctica 100
13
Figura 2. Cromatograma en capa delgada de la pinocembrina aislada a partir del epazote de zorrillo:
a) referencia de pinocembrina, b) coelucin y c) pinocembrina aislada.
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la pinocembrina con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo a la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B, en donde: A representa el peso (g) de la pinocembrina
y B es el peso (g) del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido en el inciso 1.4.4. Calcule el factor de retencin
(Rf) de la pinocembrina (muestra de referencia y muestra aislada) en el cromatofolio.
1.6Bibliografa
- Camacho, M.R.; Snchez, B.; Quiroz, H.; Contreras, J.L.; Mata, R. J. Ethnopharmacol. 1991, 31, 383389.
1.7 Material y equipo

Nmero de sesiones: 3
Sesin 1
Material
1
matraz bola de 500 mL
1
refrigerante recto con mangueras
1
embudo Bchner
1
matraz kitasato de 500 mL
1
esptula cromo-nquel
1
varilla de vidrio
1
probeta graduada de 500 mL
Reactivos
parrilla de calentamiento
perlas de ebullicin
rotaevaporador
material vegetal (epazote de zorrillo)
hexano (C6H14)
acetona (CH3COCH3)
14
Prctica 100
Sesin 2
Material
3
vasos de precipitados de 250 mL
1
esptula cromo-nquel
1
varilla vidrio
1
1
1
columna cromatogrfica
2
pinzas de tres dedos con nuez
2
matraces bola de 250 mL
2
pipetas Pasteur con bulbo
1
vidrio de reloj
1
embudo de filtracin rpida
6
matraces Erlenmeyer de 250 mL
cmara de elucin
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
balanza granataria
rotaevaporador
capilares
algodn
pliego de papel filtro
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
Reactivos
cloroformo (CHCl3)
hexano (C6H14)
acetona (CH3COCH3)
sulfato crico amoniacal (NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
gel de slice
Sesin 3
Material
1
esptula cromo-nquel
2
2
2
1
1
bomba de aspersin
rotaevaporador
aspersor
cmara de elucin de 20 20 cm
balanza granataria
lmpara de luz UV
algodn
vidrio de 20 20 cm
Reactivos
hexano (C6H14)
metanol anhidro (MeOH)
etanol absoluto (CH3CH2OH)
cloruro de metileno (CH2Cl2)
cloroformo (CHCl3)
Prctica 100
15
Prctica 2. Separacin del alcaloide piperina a partir

de Piper nigrum
Proporcionar al alumno el entrenamiento prctico en los procedimientos especficos, para la obtencin y la
identificacin de alcaloides de tipo amida, como la piperina, a partir de la pimienta negra.

1.
Obtener el extracto orgnico de la pimienta negra mediante la tcnica de extraccin continua

va Soxhlet.
2. Fraccionar mediante mtodos qumicos el extracto orgnico de la pimienta.
3. Purificar a la piperina, constituyente mayoritario presente en el extracto, mediante un
proceso de recristalizacin.
1.3Antecedentes
La pimienta, Piper nigrum L. (Piperaceae, Figura 1), es una planta perenne que emigr de la India hace
ms de 4000 aos. En la era clsica griega y durante el Imperio Romano se utiliz para pagar tributos y
como materia de contrabando. Desde tiempos inmemoriales, los frutos maduros y secos de la especie son
altamente apreciados como condimento, quizs la forma ms difundida de consumo de esta planta.
El fruto de la pimienta contiene un aceite esencial (12.5%) constituido por ms de 273 componentes,
incluyendo al -pineno, al linalol, a la damascenona, el eugenol, al m-cresol, el guayacol, el escatol, el
piperonal, el -cariofileno, el 3-careno, el -felandreno, el -copaeno, el -elemeno, el -humuleno, el
-bisaboleno y el limoneno, principalmente. Otros constituyentes presentes pertenecen a la categora de
los esteroides, los lignanos, los flavonoides, algunos cidos orgnicos, compuestos fenlicos de tipo C6C3 y
ms de 100 alcaloides, que en su mayora son derivados de tipo amida de la piperidina. La pimienta debe
su olor caracterstico al aceite esencial y su sabor picante a los alcaloides. El principal alcaloide de la planta
es la piperina, una amida generada a partir de la condensacin de la piperidina y el cido piprico. Este
alcaloide posee propiedades depresoras del sistema nervioso central, antiinflamatorias y hepatoprotectoras;
tambin se ha utilizado para incrementar la biodisponibilidad de medicamentos, ya que facilita la absorcin intestinal.
La pimienta negra tambin se valora por sus propiedades medicinales. Son muchas las investigaciones
cientficas que han demostrado la eficacia de sus frutos y algunos de sus constituyentes como agentes bactericidas, fungicidas, insecticidas, rubefacientes, antialrgicos y estornutatorios.
2
Prctica 00
17
Figura 1. Piper nigrum L. (Piperaceae) y estructura de la piperina.

1.4.1 Preparacin y fraccionamiento del extracto
Se pesan 30 g del material vegetal seco y molido para someterlo a una extraccin continua con 200 mL
de MeOH en un aparato Soxhlet durante una hora y media. Transcurrido este tiempo, el extracto se filtra
y se concentra a presin reducida hasta obtener un extracto semiseco. El residuo resultante se trata con
30 mL de una solucin en etanol de KOH al 10%. La solucin anterior se deja reposar durante 20 minutos
y al cabo de este tiempo se elimina el slido insoluble que se genera mediante filtracin al vaco.
1.4.2 Separacin y purificacin del alcaloide

La solucin de metanol obtenida (inciso 1.4.1) se mantiene en reposo durante una semana para favorecer
la formacin de cristales amarillos. Posteriormente, los cristales se filtran al vaco, se lavan con 20 mL de
agua destilada y se dejan secar durante 20 minutos. Enseguida, stos se disuelven en la mnima cantidad
de una mezcla de hexanoacetona (2:3) en caliente. La solucin se deja enfriar a temperatura ambiente
durante 15 minutos y, al cabo de este tiempo, se enfra en bao de hielo durante 30 minutos. Finalmente,
los cristales se separan de la solucin por filtracin al vaco y se pesan para obtener el rendimiento.
1.4.3 Identificacin de la piperina

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada utilizando una muestra comercial de piperina
como referencia y las siguientes condiciones de anlisis (Figura 2):
Soporte: gel de slice F254 Merck.
Fase mvil: bencenoAcOEt (2:1).
Preparacin de la muestra: se disuelve 1 mg de la referencia de piperina y 1 mg del producto aislado, por separado, en 0.5 mL de CHCl3.
Revelador: Solucin del reactivo de Dragendorff (yodobismutato de potasio).
18
Prctica 00
2
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa, a un cm de distancia del extremo inferior del
cromatofolio, la muestra y la referencia en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca
la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se
marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora hasta
cubrir la cromatoplaca sin sobresaturarla para permitir la aparicin de color. Las bandas correspondientes
a la muestra y a la referencia deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
Figura 2. Cromatograma en capa delgada de la piperina aislada a partir de la pimienta:

a) referencia de piperina, b) muestra de piperina aislada.
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la piperina con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo a
la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B, en donde: A es el peso (g) de la piperina y B es el peso (g)
del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido en el inciso 1.4.3. Calcule los correspondientes
factores de retencin (Rf) de la muestra y de la referencia.
1.5.3 Elabore un diagrama de flujo que esquematice el proceso experimental de obtencin de la piperina.
1.6Bibliografa
Evans, W. Trease and Evans Pharmacognosy. Edit. W.B. Saunders. 15ta Edicin, Londres, Inglaterra, 2009,
pp 353355.
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press, 2da Edicin, San Diego, California,
1991, pp 233236.
Scott, I.; Puniani, E.; Jensen, H.; Livesey, J.; Poveda, L.; Snchez, P.; Durst, T.; Arnason, J. J. Agric. Food
Chem. 2005, 53, 19071913.
Srinivasan, K. Crit. Rev. Food Sci. 2007, 47, 735748.
Wei, K.; Wei, L.; Koike, K.; Chen, Y.; Nikaido, T.; Nigramides, A. J. Org. Chem. 2005, 70, 11641176.
Prctica 00
2
19

Sesin 1
Material
1
rotaevaporador
1
extractor Soxhlet
1
esptula cromo-nquel
1
embudo Bchner
2
1
pipeta graduada de 10 mL
1
2
1
vidrio de reloj
1
vaso de precipitados de 250 mL
Reactivos
etanol absoluto (EtOH)
hidrxido de potasio (KOH)
papel aluminio
algodn
papel filtro
frascos viales
propipeta
material vegetal (pimienta negra)
Sesin 2
Material
1
esptula cromo-nquel
1
embudo Bchner
1
propipeta
1
1
pipeta Pasteur con bulbo
1
vidrio de reloj
2
placas cromatogrficas de aluminio de 20 20 cm

bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
papel filtro
algodn
Reactivos
acetato de etilo (AcOEt)
benceno (C6H6)
hexano (C6H14)
cloroformo (CHCl3)
acetona (CH3COCH3)
reactivo de Dragendorff
20
Prctica 200
Prctica 3. Aislamiento de la diligustlida a partir de la raz

de Ligusticum porteri
obtencin y la identificacin de los marcadores activos de la raz de chuchupate.

1. Aplicar la tcnica de maceracin para elaborar un extracto orgnico de la raz de chuchupate.
2. Utilizar a la cromatografa en columna abierta para el fraccionamiento preliminar del
extracto orgnico.
3. Separar y purificar a la diligustlida, constituyente mayoritario presente en el extracto,
mediante un proceso de cristalizacin.
1.3Antecedentes
La especie medicinal, Ligusticum porteri Coulter & Rose (Apiaceae) (Figura 1), se conoce popularmente con
los nombres de chuchupate, osha, raz de anglica, raz del cochino, yerba del cochino, entre otros. Los tarahumaras la
designan como wasia. Los preparados de esta planta (infusin, decoccin o esencia) se emplean para aliviar
dolores de estmago y para tratar la tos, insomnio, resfriados, diarrea y otros desrdenes gastrointestinales.
Tambin se ha reportado su uso como agente antisptico, carminativo, antidiabtico y como antdoto contra la picadura de alacrn. La planta se puede utilizar en combinacin con otras plantas medicinales como
Croton niveus, Angelica archangelica, Juliana adstringens y Brickellia cavanillesii, por mencionar algunas.
Esta especie presenta tallos firmes, caulescentes y ramificados que miden entre 50 y 100 cm de altura. Sus
races son fibrosas, axonomrficas, perennes y presentan pocas races de tipo adventicio desde la corona.
Las hojas son ovadas, pecioladas y trenado-pinnadas, miden entre 15 y 28 cm de largo y entre 12 y 20 cm
de ancho, con lbulos obtusos o agudos y dentados. Sus inflorescencias en forma de sombrilla son blancas.
Sus frutos son esquizocrpicos y oblongos, entre 5 y 8 mm de largo y entre 2 y 4 mm de ancho. Sus semillas
son aplanadas dorsalmente en la seccin transversal y acanaladas bajo los tubos.
Desde el punto de vista qumico, la especie L. porteri ha sido objeto de numerosas investigaciones que han
permitido el aislamiento y la caracterizacin de diversos metabolitos secundarios que incluyen: ftlidas,
terpenoides, compuestos de tipo fenlico y cumarinas (Delgado et al., 1988, 1992; Ros et al., 1992; Zschoke
et al., 1998; Hou et al., 2004; Cgiela-Carlioz et al., 2005).
Las ftlidas, Z-ligustlida y diligustlida han sido caracterizadas como los principios mayoritarios con propiedades neuroprotectoras, relajantes de la musculatura lisa, antibacterianas, hipoglucemiantes y antispticas
del extracto ntegro de la planta.
Prctica 00
3
23

1.4.1 Preparacin del extracto orgnico
Se pesan 50 g de material vegetal seco y molido en un matraz bola de un litro y se adicionan 200 mL de una
mezcla de CH2Cl2-MeOH (1:1) durante una semana a temperatura ambiente. Transcurrido este tiempo,
el macerado se filtra y se concentra a presin reducida hasta obtener un extracto seco. Se pesa el extracto
en una balanza granataria para calcular el rendimiento.
Figura 1. Ligusticum porteri Coulter & Rose (Apiaceae) y estructuras de la Z-ligustlida y la diligustlida.
1.4.2 Fraccionamiento preliminar del extracto orgnico

El extracto orgnico (inciso 1.4.1) se fracciona mediante una cromatografa en columna abierta, de
acuerdo con el procedimiento que se describe a continuacin:
(1) Se pesan 10 g de gel de slice (fase estacionaria) por cada gramo de muestra y se desactiva
con agua al 10% (v/v). Se reserva la octava parte de la fase estacionaria desactivada.
(2) Se disuelve la muestra a cromatografiar en un volumen no mayor de 5 mL de CH2Cl2MeOH (1:1); para favorecer la disolucin de la muestra se puede calentar en bao Mara.
A continuacin, se adsorbe la disolucin anterior en la octava parte de la slice reservada
en el punto 1 y se deja secar a temperatura ambiente durante 15 minutos.
(3) Se suspende la gel de slice restante en una mezcla de hexanoCH2Cl2 (9:1) y se vierte en
la columna cromatogrfica conteniendo 15 mL de la mezcla de elucin.
(4) Se siembra la columna con la mezcla adsorbente-muestra (punto 2).
(5) Se realiza el proceso de elucin utilizando los gradientes entre hexanoCH2Cl2 que se
indican en el Cuadro 1 y se recolectan las fracciones cromatogrficas correspondientes.
(6) Por ltimo, las fracciones recolectadas se concentran a presin reducida y se realiza el
anlisis cromatogrfico en capa delgada empleando como sistema de elucin CH2Cl2.
Para la visualizacin de los constituyentes de cada fraccin, se procede de acuerdo a la
tcnica que se describe en el inciso 1.4.3.
24
Prctica 300
Cuadro 1. Sistemas de elucin para el desarrollo del proceso cromatogrfico

en columna abierta.
Nm. de fraccin
Mezcla de elucin
Volumen (mL)
HexCH2Cl2 (9:1)
120
HexCH2Cl2 (8:2)
120
HexCH2Cl2 (7:3)
120
HexCH2Cl2 (6:4)
120
HexCH2Cl2 (1:1)
120
HexCH2Cl2 (4:6)
120
1.4.3 Anlisis cromatogrfico

El extracto orgnico, las fracciones primarias y/o los compuestos puros se analizan mediante una cromatografa en capa delgada utilizando las siguientes condiciones de anlisis (Figura 2):
Fase mvil: CH2Cl2.
Preparacin de las muestras: se disuelve 1 mg del extracto orgnico, de las fracciones primarias y/o de los compuestos puros, por separado, en 0.5 mL de hexanoCH2Cl2 (1:1).
Revelador: solucin cromgena de sulfato crico amoniacal.
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa las muestras en forma de puntos con la ayuda de
un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio.
Deber existir una separacin de por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de
elucin cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente
de aire y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las
zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora hasta cubrir la cromatoplaca y se calienta hasta la aparicin de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a los productos mayoritarios
presentes en cada muestra deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
Figura 2. Cromatograma en capa delgada del: a) extracto orgnico de la droga cruda

de chuchupate y b) referencia (diligustlida).
Prctica 300
25
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la diligustlida con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo
a la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B, en donde: A es el peso (g) de la diligustlida y B es el peso
(g) del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados de los cromatogramas obtenidos. Calcule los correspondientes factores de
retencin (Rf) de las muestras y de las referencias utilizadas.
1.5.3 Compare las constantes fsicas y cromatogrficas generadas experimentalmente con las descritas
previamente en la literatura especializada.
1.6Bibliografa
Cgiela-Carlioz, P.; Bessiere, J.M.; David, B.; Mariotte, A.M.; Gibbons, S.; Dijoux-Franca, M.G. J.
Flavour Fragr. 2005, 20, 671-675.
Martnez, M. Las plantas medicinales de Mxico. Edit. Botas, 6ta Edicin, Mxico, 1989.
Delgado, G.; Reza-Garduo, R.G.; Toscano, R.A.; Bye, R.; Linares, E. Heterocycles, 1988, 27,
1305-1312.
Delgado, G.; Reza-Garduo, R.G.; Ros, M.Y.; Del Ro, F. Planta Med. 1992, 58, 570-571.
Hou, Y.Z.; Zhao, G.R.; Yang, J.; Yuan, Y.J.; Zhu, G.G.; Hiltunen, R. Life Sci. 2004, 75, 17751786.
Zschoke, S.; Liu, J.H.; Stuppner, H.; Bauer, R. Phytochem. Anal. 1998, 9, 283290.

Sesin 1
Material
1 matraz Erlenmeyer de 1000 mL
1 varilla de vidrio
material vegetal (raz de chuchupate)
Reactivos
1
1
esptula cromo-nquel
26
Prctica 300
Sesin 2
Material
3
cmara de elucin
1
esptula cromo-nquel
bomba de aspersin
1
varilla de vidrio
aspersor
1
lmpara de luz UV
1
balanza granataria
1
columna cromatogrfica
rotaevaporador
2
pinzas de tres dedos con nuez
capilares
2
algodn
2
1
vidrio de reloj
1
6
matraces Erlenmeyer de 250 mL
Reactivos
hexano (C6H14)
gel de slice
Prctica 300
27
Prctica 4. Camellia sinensis: obtencin de la cafena del t negro,

pruebas de identidad y composicin del t verde
1.1 Objetivos generales
obtencin de la cafena a partir del t negro (Camellia sinensis).
Introducir al alumno en la realizacin de pruebas de identidad y de composicin sencillas, para establecer
un control de calidad adecuado de las drogas crudas.

1.
2.
3.
4.
5.
Aplicar la tcnica de decoccin para la obtencin del extracto acuoso del t negro.
Separar y purificar a la cafena presente en el extracto acuoso, mediante la combinacin de
mtodos qumicos y procesos de reparto.
Establecer la identidad de la cafena presente en la muestra analizada mediante la reaccin
de la murxida y por comparacin de sus propiedades fsicas y cromatogrficas con aquellas
de una muestra autntica.
Obtener una mezcla de flavan-3-oles a partir de la infusin del t verde, mediante un proceso
de reparto.
Establecer la identidad de los derivados de flavan-3-oles presentes en las muestras analizadas,
mediante la comparacin de sus propiedades cromatogrficas con aquellas de una muestra
autntica y la determinacin del contenido de derivados de catequinas utilizando el mtodo
de Folin-Ciocalteu.
1.3Antecedentes
El t, Camellia sinensis (L.) Kuntze (Theaceae), es un arbusto originario de las regiones tropicales y subtropicales
de Asia. La especie es un rbol de hoja perenne y elptica, con flores blancas y frutos capsulares con tres semillas negras (Figura 1). En estado silvestre el rbol puede alcanzar hasta 10 m de altura, aunque las plantas
cultivadas se podan constantemente para limitar su altura a 1.5 m del suelo, circunstancia que favorece la
formacin de hojas ms grandes y as se facilita su cosecha. Existen cuatro tipos principales de t (blanco,
verde, rojo y negro) que dan origen a ms de 3000 variedades en todo el mundo. El t verde est constituido
por las hojas jvenes desecadas de la especie C. sinensis. Los constituyentes activos en hojas son las metilxantinas [cafena, teofilina y teobromina], los derivados de catequinas [(-)-epi-galocatequina, (+)-catequina,
(-)-epi-catequina, (-)-galato de epi-galocatequina y (-)-galato de epi-catequina]; los flavonoles (apigenina y
3-vincenina) y la amida teanina (Figura 2).
Se ha demostrado que el t verde contiene una gran cantidad de compuestos antioxidantes (flavan-3-oles),
que ayudan a disminuir los efectos de los radicales libres. En consecuencia, el t es un agente que ayuda a
prevenir enfermedades que involucran el estrs oxidativo y reduce los efectos propios del envejecimiento.
Prctica 00
4
29
Figura 1. Camellia sinensis (L.) Kuntze (Theaceae).
Figura 2. Estructuras de los principales metabolitos presentes en las hojas de Camellia sinensis.
30
4
Prctica 00

1.4.1 Obtencin de la cafena
En un vaso de precipitado de 250 mL, se colocan 20 g de t negro, 5 g de carbonato de sodio y 100 mL
de agua destilada. La mezcla se calienta durante 20 minutos utilizando una parrilla de calentamiento. Si
es necesario se adiciona agua para mantener constante el volumen inicial de la solucin. Transcurrido el
tiempo de extraccin, la solucin se filtra en caliente mediante filtracin rpida. Posteriormente, el filtrado
se neutraliza cuidadosamente, mediante la adicin gota a gota de cido sulfrico concentrado en condiciones de agitacin. Enseguida, esta solucin se somete a un proceso de reparto utilizando CH2Cl2
(3 50 mL). Las fases orgnicas se combinan y se evapora el disolvente utilizando un rotaevaporador.
Finalmente, se pesa la cafena obtenida en una balanza granataria, para calcular el rendimiento con base
en el peso de la droga cruda utilizada.
1.4.2 Ensayos de identidad

1.4.2.1 Identificacin cromatogrfica de la cafena
Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada utilizando la tcnica de coelucin. Como referencia se emplea una muestra comercial de cafena (Figura 2).
Fase mvil: CH2Cl2-MeOH (95:5).
Preparacin de la muestra: se disuelve 1 mg de la cafena aislada en 0.5 mL de CH2Cl2.
Preparacin de la muestra de referencia: se disuelve 1 mg de la referencia de cafena en 0.5 mL de CH2Cl2.
Revelador: como agente cromgeno se utiliza una solucin de yodo en HCl (Solucin A: mezclar 1 g de yoduro de potasio y 2 g de yodo en 10 mL de etanol absoluto. Solucin B: mezclar 50 mL de HCl y 50 mL
de etanol absoluto).
muestra y la referencia (coelucin) en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber existir una separacin
de por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la
fase mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina bajo una
lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora A sobre la cromatoplaca hasta saturacin, posteriormente se roca
la solucin reveladora B y se calienta hasta la aparicin de manchas coloridas. La cafena desarrolla una
coloracin marrn caracterstica. Las bandas correspondientes a la muestra, a la referencia y a la coelucin
deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
Prctica 00
4
31
Figura 2. Cromatograma en capa delgada de la cafena aislada a partir del t negro:

a) referencia de cafena, b) coelucin, c) cafena aislada.
1.4.2.2 Prueba de la murxida

En una cpsula de porcelana, se coloca una pequea cantidad de cafena (~10 mg) y se adicionan tres
gotas de HNO3 concentrado. Esta solucin cida se evapora a sequedad en una parrilla de calentamiento.
Posteriormente, se adicionan dos gotas de NH4OH concentrado. Si la muestra analizada corresponde a la
cafena, se observar un residuo morado en el fondo de la cpsula de porcelana.
1.4.3 Identificacin y cuantificacin de los fenoles totales presentes en el t verde

1.4.3.1 Preparacin del extracto
Se colocan 5 g de t verde en un matraz Erlenmeyer de 250 mL y se adicionan 100 mL de agua en ebullicin. La solucin anterior se deja en reposo durante 30 minutos y se filtra a travs de papel filtro. Enseguida, el filtrado se somete a un proceso de reparto empleando AcOEt (3 75 mL). Las fases orgnicas se
combinan, se secan sobre sulfato de sodio anhidro y se evapora el disolvente a presin reducida sin dejar a
sequedad. Este mismo procedimiento se repite utilizando el extracto estandarizado de las hojas de t verde.
1.4.3.2 Anlisis cromatogrfico

Las fracciones orgnicas de acetato de etilo y la referencia de catequina se analizan mediante una cromatografa en capa delgada utilizando las siguientes condiciones de anlisis (Figura 3):
Fase mvil: tolueno-acetona-cido frmico (9:9:2).
Preparacin de la muestra: se disuelven 5 mg de las fracciones orgnicas de acetato de etilo en 1 mL de metanol,
por separado.
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de la referencia de catequina en 0.5 mL de metanol.
Revelador: Solucin de vanillina sulfrica al 5%.
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa la referencia, las muestras y una mezcla (1:1) de la
muestra y la referencia (coelucin) en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. (2) Se realiza el proceso de elucin
cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire
32
Prctica 00
4
y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de
fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora sobre la cromatoplaca y se calienta hasta la
aparicin de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a las muestras, a la referencia y a la coelucin desarrollan una coloracin roja intensa y deben de coincidir en su posicin (Rf).
Figura 3. Cromatograma en capa delgada de los preparados del t verde:

a) fraccin de AcOEt de la droga cruda, b) coelucin, c) referencia de
catequina y d) fraccin de AcOEt del preparado estandarizado.
1.4.3.3 Determinacin del contenido de fenoles totales presentes en el t verde

Transferir 1 mL de la fraccin de acetato de etilo obtenido en el inciso 1.4.3.1 a un tubo de ensayo. Enseguida, se adicionan 5 mL de agua destilada, 0.5 mL del reactivo de Folin-Ciocalteu y 2 mL de una solucin
de Na2CO3 (20%, p/v), en ese orden, y se lleva a un volumen final de 10 mL con agua destilada. Por otra
parte, se prepara el blanco de reaccin, utilizando 1 mL de metanol y los reactivos empleados en la preparacin de la muestra en el mismo orden de adicin. Ambas mezclas se dejan en reposo durante dos horas a
temperatura ambiente y protegidas de la luz. Al trmino de este tiempo, se determina la absorbancia de la
muestra a 760 nm, ajustando el equipo con el blanco de reaccin. Calcular el contenido de fenoles totales
utilizando la curva de calibracin del cido glico indicada en la Figura 4. Los resultados se expresan
como equivalentes de cido glico (EAG) por microgramo de muestra. Este mismo procedimiento se repite
utilizando la muestra del preparado estandarizado de las hojas de t verde.
Figura 4. Curva de calibracin para la cuantificacin de fenoles totales presentes en el t verde.
4
Prctica 00
33
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados en los distintos anlisis cromatogrficos realizados a lo largo del procedimiento
experimental. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los constituyentes mayoritarios
presentes en las muestras analizadas.
1.5.2 Elabore un diagrama de flujo que sintetice el proceso de obtencin de la cafena y de los derivados de
catequina a partir del t negro y del t verde, respectivamente. En particular, analice el uso del carbonato
de sodio durante el proceso de extraccin de la cafena.
1.5.3 Indique, mediante reacciones qumicas, el fundamento de la prueba de identidad de la murxida.
1.5.4 Explique el fundamento del ensayo de Folin-Ciocalteu utilizado para la realizacin de la prueba de
composicin del t verde.
1.5.5 Determine y analice el contenido de fenoles totales presentes en las muestras analizadas. Exprese los
resultados en equivalentes de cido glico por microgramo de muestra.
1.6Bibliografa
British Pharmacopoeia. Her Majestys Stationery Office, London, 2002, pp 2441-2443.
Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoqumica, Plantas Medicinales. Edit. Acribia, 2da Edicin, Zaragoza, 2001,
pp 422-425.
Cheng, Z.; Moore, J.; Yu, L. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 7429-7436.
Heinrich, M.; Barnes, J.; Gibbons, S.; Williamson, E. Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy,
2nd Edition. Churchill Livingstone, Londres, 2012, pp 340.
Kozuca, H.; Koyama, M.; Okitsu, T. Chem. Pharm. Bull. 1982, 20, 941-945.
Sharangi, A.B. Food Res. Int. 2009, 42, 529-535.
WHO, Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. World Health Organization, Gneva, 1999,
pp 250-258.
34
4
Prctica 00

Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
3 pipetas graduadas de 1 mL
1 matraz bola de 250 mL
2 vasos de precipitados de 250 mL
1 probeta graduada de 100 mL
1 esptula cromo-nquel
1 propipeta
2 embudos de filtracin rpida
material vegetal (t negro)
Reactivos
1 cpsula de porcelana
1 embudo de separacin de 500 mL
balanza granataria
bomba de aspersin
lmpara de luz UV
papel filtro

yoduro de potasio (KI)
carbonato de sodio (Na2CO3)
cido sulfrico (H2SO4)
cido clorhdrico (HCl)
cido ntrico (HNO3)
hidrxido de amonio (NH4OH)
Sesin 2
Material
1 rotaevaporador
1 propipeta
4
Prctica 00
material vegetal (t verde)

tubos de ensayo
balanza granataria
bomba de aspersin
lmpara de luz UV
papel filtro
celdas para espectrofotmetro
35
Reactivos
tolueno (C6H5CH3)
acetona (CH3COCH3)
cido frmico (HCOOH)
reactivo de Folin-Ciocalteu
cido glico (C6H2(OH)3)COOH
vanillina (C8H8O3)
36
Prctica 00
4
Prctica 5. Control de calidad (pruebas de identidad y de

composicin) de las hojas de Psidium guajava
Proporcionar al alumno el entrenamiento prctico para realizar las pruebas de control de calidad de las
hojas del guayabo.

1. Aplicar la tcnica de extraccin continua por Soxhlet para la obtencin de los extractos
alcohlicos a partir de las hojas del guayabo y preparados herbolarios.
2. Establecer la identidad de los flavonoides presentes en las muestras analizadas mediante
la comparacin de sus propiedades cromatogrficas con aquellas de muestras autnticas y la
determinacin del contenido de fenoles totales utilizando el mtodo de Folin-Ciocalteu.
1.3Antecedentes
El guayabo, Psidium guajava L. (Myrtaceae), es un rbol o arbusto pequeo que mide entre 4 y 10 m de
altura, con extensas ramas, su corteza es caf, lisa y delgada. Las hojas perennes son duras, ms anchas
en su punta que en el centro, con envs velloso y de nervadura realzada. Las flores son solitarias, blancas o
cremosas y olorosas, con numerosos estambres. Sus frutos son globosos de aroma caracterstico con
numerosas semillas y pulpa amarilla o rosada (Figura 1; Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional
Mexicana, 2009).
Psidium guajava se encuentra ampliamente distribuida en Centro y Sudamrica, Europa, frica y Asia.
Crece en reas tropicales y subtropicales, y se adapta a diferentes condiciones climticas, pero prefiere los
climas secos. Sus usos medicinales para el tratamiento de la diarrea, enfermedades infecciosas de la piel y
de la cavidad bucal, paludismo, tos, cncer, enfermedades antiinflamatorias, diabetes, hipertensin, dolor
y fiebre, entre otros, se encuentran bien documentados (Prez-Gutirrez et al., 2008).
Las hojas del guayabo contienen un aceite esencial rico en mono- y sesquiterpenos [-pineno, -pineno,
limoneno, mentol, acetato de terpenilo, alcohol isoproplico, -cariofileno, -bisaboleno, cineol, xido de
cariofileno, -copaneno, farneseno, humuleno, curcumeno y nerolidol]. Tambin se ha demostrado que las
hojas contienen compuestos de tipo flavonoides, saponinas, esteroles, cidos triterpnicos, taninos, fenilpropanoides y otros compuestos aromticos simples de tipo C6-C1, por mencionar a los ms importantes. Los
flavonoides activos y mayoritarios presentes en la planta son la miricetina, la quercetina, el 3--galactsido
de quercetina, la luteolina, la luecocianidina, la guaijaverina y el campferol (Figura 2).
En Mxico, las hojas del guayabo se comercializan para el tratamiento de la colitis y otros padecimientos
estomacales. El producto ms conocido elaborado con hojas del guayabo, comercializado bajo la forma de
cpsulas, es el QG-5, un extracto acuoso estandarizado que contiene 1 mg de quercetina por cada 500 mg
de extracto seco, cuya eficacia ha sido comprobada cientficamente (Astudillo et al., 2009).
5
Prctica 00
39
Figura 1. Psidium guajava L. (Myrtaceae).
Figura 2. Estructuras de los principales flavonoides presentes en las hojas del guayabo.

1.4.1 Obtencin del extracto de metanol a partir de las hojas secas del guayabo
Se pesan 20 g del material vegetal seco y molido y se someten a una extraccin continua con 200 mL de
MeOH en un aparato de Soxhlet durante una hora. Transcurrido este tiempo, el extracto se filtra y se
concentra a presin reducida hasta obtener un extracto seco.
40
Prctica 500
1.4.2 Obtencin del extracto orgnico a partir de un preparado

fitofarmacutico
Se pesan cinco tabletas del preparado fitofarmacutico y se trituran en un mortero para someterlo a una
extraccin por maceracin, utilizando 15 mL de una mezcla CH2Cl2-MeOH (1:1) durante una hora.
Transcurrido este tiempo, el extracto resultante se filtra y se concentra a presin reducida hasta sequedad.
1.4.3 Ensayos de identidad

Los extractos de metanol obtenidos a partir de las hojas del guayabo se analizan mediante una cromatografa en capa delgada utilizando las siguientes condiciones de anlisis (Figura 3):
Preparacin de la muestra: se disuelve 1 mg de los extractos orgnicos en 0.5 mL de metanol.
Preparacin de las muestras de referencia: se disuelve 1 mg de la quercetina y 1 mg de avicularina, por separado,
en 0.5 mL de etanol.
Reveladores: como agentes cromgenos se utilizarn una solucin de aldehdo ansico (1%, v/v; en cido
actico glacial y 1 mL de cido sulfrico concentrado).
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa las muestras de los extractos de metanol obtenidos y
de las referencias de quercetina y de avicularina en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles
independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber existir una separacin de por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica
con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina
bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia.
(3) Enseguida, se roca la solucin reveladora hasta cubrir la cromatoplaca y se calienta hasta la aparicin
de manchas coloridas. Los flavonoides desarrollan una coloracin amarilla intensa y deben de coincidir en
su posicin (Rf).
Figura 3. Cromatograma en capa delgada del extracto orgnico obtenido a partir de las hojas
del guayabo: a) extracto de MeOH de la droga cruda, b) extracto de MeOH del preparado
fitofarmacutico, c) referencia de avicularina, d) referencia de quercetina.
Prctica 00
5
41
1.4.4 Identificacin y cuantificacin de los fenoles totales presentes

en las hojas del guayabo
Transferir 1 mL del extracto de metanol obtenido en el inciso 1.4.1 a un tubo de ensayo, enseguida,
se adicionan 5 mL de agua destilada, 0.5 mL del reactivo de Folin-Ciolcateu y 2 mL de una solucin de
Na2CO3 (20%, p/v), en ese orden, y se lleva a un volumen final de 10 mL con agua destilada. Por otra
parte, se prepara el blanco de reaccin, utilizando 1 mL de metanol y los reactivos empleados en la preparacin de la muestra en el mismo orden de adicin. Ambas mezclas se dejan en reposo durante dos horas
a temperatura ambiente y protegidas de la luz. Al trmino de este tiempo, se determina la absorbancia de
la muestra a 760 nm ajustando el equipo con el blanco de reaccin. Calcular el contenido de fenoles totales
utilizando la curva de calibracin del cido glico indicada en la Figura 4. Los resultados se expresan
como equivalentes de cido glico (EAG) por microgramo de extracto. Este mismo procedimiento se repite
utilizando el extracto del preparado fitofarmacutico de las hojas del guayabo, obtenido en el inciso 1.4.2.
Figura 4. Curva de calibracin para la cuantificacin de fenoles totales presentes en las hojas del guayabo.
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados en los distintos anlisis cromatogrficos realizados a lo largo del procedimiento
experimental. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los constituyentes mayoritarios
presentes en las muestras analizadas. Compare los valores observados para las muestras de referencia e
indicar si los preparados comerciales analizados contienen en su formulacin hojas de guayabo como ingrediente activo.
1.5.2 Explique el fundamento del ensayo de Folin-Ciocalteu utilizado para la realizacin de la prueba de
composicin de las hojas del guayabo.
1.5.3 Determine y analice el contenido de fenoles totales presentes en las muestras analizadas. Exprese los
resultados en equivalentes de cido glico por microgramo de extracto orgnico analizado.
42
Prctica 00
5
1.6Bibliografa
Astudillo, A.; Mata, R.; Navarrete, A. Rev. Latinoam. Quim. 2009, 37, 7-43.
Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana (2009), disponible en
http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx.
Cheng, Z.; Moore, J.; Yu, L. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 7429-7436.
Prez-Gutirrez, R.; Mitchell, S.; Vargas, B. J. Ethnopharmacol. 2008, 117, 127.

Sesin 1
Material
1
extractor Soxhlet
3
pipetas graduadas de 5 mL
3
1
1
2
1
1
esptula cromo-nquel
1
propipeta
1
1
rotaevaporador
Reactivos
tubos de ensayo
balanza granataria
bomba de aspersin
lmpara de luz UV
papel filtro
material vegetal (hojas de guayabo)

cido actico glacial (CH3COOH)
aldehdo ansico (C8H8O2)
reactivo de Folin-Ciocalteu
cido glico (C6H2(OH)3)COOH
Prctica 00
5
43
Prctica 6. Mtodos para identificar a los compuestos marcadores

de la droga cruda y preparados de Cassia senna
Proporcionar al alumno el entrenamiento prctico para realizar las pruebas de control de calidad (pruebas
de identidad y de composicin), descritas en la Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos (FHEUM),
para la identificacin de los compuestos marcadores presentes en las hojas de sen.

1.
Aplicar la tcnica de reflujo para la obtencin de los extractos acuosos a partir de las hojas
de sen y preparados herbolarios.
2. Establecer la identidad qumica de las antraquinonas presentes en los extractos de sen
mediante la prueba de Bortrnger y por cromatografa en capa delgada.
3. Cuantificar a los sensidos presentes en la droga cruda utilizando un mtodo espectrofotocolorimtrico.
1.3Antecedentes
El sen, Cassia senna L. (sinnimo Cassia angustifolia) (Leguminosae) (Figura 1), es un arbusto originario de
las regiones tropicales de frica y la India. Sus hojas estn compuestas por cuatro u ocho pares de foliolos
oblongos o lanceolados con fuerte nervadura en el envs verde amarillento. Sus flores son amarillas reunidas en racimos terminales largamente peciolados. Sus frutos son vainas o legumbres, oblongas, planas y
membranosas, marrn griscea que miden aproximadamente 1.5 cm de ancho por un centmetro de largo.
Las hojas de sen contienen alrededor del 2 al 5% de derivados de antraquinonas; siendo los componentes
ms importantes los sensidos A-D (Figura 1). Estos productos, o los extractos estandarizados de las hojas,
se utilizan en la teraputica como agentes laxantes y purgantes.
Prctica 600
45
Figura 1. Cassia senna L. (Leguminosae) y estructuras de los compuestos marcadores presentes en las hojas de sen.

1.4.1 Preparacin de los extractos orgnicos
Se pesan 50 g de material vegetal en un matraz bola de 500 mL y se adicionan 250 mL de agua para someterlo a un proceso de reflujo durante 15 minutos. Al trmino de la extraccin, el extracto acuoso resultante se
deja enfriar, se filtra y se le adiciona 1 mL de HCl 1 N. Enseguida, esta solucin cida se somete a un proceso de reparto utilizando hexano (3 100 mL). Las fases orgnicas se combinan y se alcalinizan adicionando un
gramo de NaHCO3, la solucin anterior se agita suavemente durante tres minutos y se evapora el disolvente a
sequedad. Este mismo procedimiento se sigue para los preparados herbolarios objeto de anlisis.
46
6
Prctica 00
1.4.2 Ensayo de identidad

1.4.2.1 Prueba de Bortrnger
En una cpsula de porcelana, se pesan 500 mg del material vegetal y se tratan con 10 mL de una solucin
en etanol de KOH (10%, p/v) durante dos minutos calentando a ebullicin. Al cabo de este tiempo, se adicionan 10 mL de agua y la mezcla se filtra a travs de papel filtro. El filtrado se acidifica mediante la adicin
gota a gota de HCl concentrado hasta obtener un valor de pH~2. Esta solucin acuosa cida, se somete
a un proceso de reparto con ter etlico (3 20 mL). Al trmino del proceso de reparto, las soluciones
orgnicas se renen y se tratan con 5 mL de NH4OH 6 N durante cinco minutos agitando suavemente.
El desarrollo de una coloracin naranja o rosa azulado es indicativo de una prueba positiva para la presencia
de antraquinonas.

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada de los extractos orgnicos obtenidos en el inciso
1.4.1 y las referencias de los sensidos A y B.
Fase mvil: CH3COOH-H2O-AcOEt-propanol (1:30:40:40).
Preparacin de la muestra: 500 mg de material vegetal se someten a ebullicin durante cinco minutos utilizando una mezcla de EtOH-H2O (1:1). Al cabo del proceso de extraccin, la mezcla resultante se filtra para
realizar el anlisis por cromatografa en capa delgada.
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de las referencias de los sensidos A y B en 0.5 mL de
CHCl3, por separado.
Revelador: Como agente cromgeno se utiliza una solucin de cido ntrico y de KOH en etanol (Solucin A:
preparar una solucin de HNO3 (20%, v/v). Solucin B mezclar 0.25 g de KOH en 50 mL de etanol absoluto al 50%).
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa las muestras a analizar y las referencias de sensidos
A y B en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un
cm del extremo inferior del cromatofolio. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase
se roca la solucin reveladora A y se calienta hasta la aparicin de manchas coloridas. Posteriormente, se
roca la cromatoplaca con la solucin reveladora B hasta la aparicin de color.
1.4.3 Determinacin del contenido de sensidos

Se pesan 150 mg de la droga cruda en un matraz bola de 100 mL y se adicionan 30 mL de agua. Se toma el
peso del contenido de este matraz y enseguida se calienta a reflujo durante 15 min. Una vez transcurrido
el tiempo de extraccin, se deja enfriar la solucin y se filtra a travs de papel filtro. Posteriormente, 20 mL
de este filtrado se transfieren a un embudo de separacin de 50 mL y se le adicionan 0.1 mL de HCl 1 N
y se somete a un proceso de reparto con cloroformo (3 20 mL). Al trmino de este proceso, la fase acuosa
se trata con 100 mg de NaHCO3 y se agita suavemente durante 3 min.
Prctica 00
6
47
La solucin acuosa tratada se filtra y se trasfieren 10 mL de sta a un matraz bola de 100 mL y se tratan
con 20 mL de FeCl3 calentando a reflujo durante 20 min. Al cabo de este tratamiento, se enfra la solucin,
se adiciona 1 mL de HCl 1 N y se calienta durante otros 20 min agitando suavemente para evitar la formacin de un precipitado. La solucin as tratada se enfra y se somete a un proceso de reparto con ter etlico
(3 30 mL). Las fases orgnicas combinadas, finalmente se lavan con agua (3 60 mL) y se trasfieren a un
matraz volumtrico de 100 mL y se afora a este volumen. Las capas etreas se combinan y se lavan con dos
porciones de agua (2 60 mL). Se transfieren 10 mL de la solucin etrea a una cpsula de porcelana y se
evaporan a sequedad. El residuo obtenido se suspende en 10 mL de Mg(CH3COO)2 (5 mg/mL en metanol) y
enseguida se determina la absorbancia a una longitud de onda de 515 nm, utilizando metanol como blanco.
El contenido de los derivados de hidroxiantraceno, expresados como sensido B, se calcula mediante la
siguiente expresin matemtica: 1.25 A/m en donde: A es la absorbancia a 515 nm y m la masa en gramos
del material examinado.
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados obtenidos en los distintos cromatogramas. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los constituyentes mayoritarios presentes en las muestras analizadas. Compare
los valores observados para las muestras de referencia e indicar si los preparados comerciales analizados
contienen en su formulacin hojas de sen como ingrediente activo.
1.5.2 Determine el contenido de sensidos en las muestras analizadas.
1.6Bibliografa
Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos (FHEUM). 2da Edicin. Secretara de Salud, Comisin Permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2013.
WHO, Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. World Health Organization Gneva, 1999,
pp 250-258.
British Pharmacopoeia. London, Her Majestys Stationery Office, 2002, pp 2441-2443.
Shao-Wen, S.; Hsiu-Ting, S. J. Pharm. Biomed. Anal. 2002, 29, 881-894.
48
Prctica 00
6

Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
2 matraces bola de 100 mL
2 refrigerantes rectos con mangueras
Reactivos
hexano (C6H14)
material vegetal (hojas de sen)

preparados fitofarmacuticos
bomba de aspersin
balanza granataria
lmpara de luz UV
perlas de ebullicin
papel filtro
pipeta Pasteur

propanol (CH3CH2CH2OH)
bicarbonato de sodio (NaHCO3)
cido actico (CH3CO2H)
acido ntrico (HNO3)
Prctica 00
6
49
Sesin 2
Material
3
material vegetal (hojas de sen)
preparados fitofarmacuticos
embudos de separacin de 50 mL
tubos de ensayo
balanza granataria
refrigerantes rectos con mangueras
bomba de aspersin
lmpara de luz UV
papel filtro
esptula cromo-nquel
propipeta
embudos de filtracin rpida
matraz Erlenmeyer de 500 mL
perlas de ebullicin
matraces aforados de 100 mL
cpsula de porcelana
Reactivos
cloroformo (CHCl3)
ter etlico (CH3CH2)2O
cloruro frrico (FeCl3)
acetato de magnesio Mg(CH3COO)2
50
Prctica 600
Prctica 7. Pruebas de identidad de Amphiptherygium adstringens

Proporcionar al alumno el conocimiento prctico para la identificacin de los principios bioactivos y/o
compuestos marcadores de la droga cruda y preparados herbolarios obtenidos a partir de una planta de
amplio uso en la medicina popular de Mxico.
1.2 Objetivo particular

1.
Establecer la identidad de los compuestos mayoritarios (cidos masticadiennico y 3-hidroxi

masticadiennico) presentes en los extractos obtenidos por reflujo de la droga cruda y preparados
herbolarios, mediante la comparacin de sus propiedades cromatogrficas con aquellas de muestras
autnticas.
1.3Antecedentes
El cuachalalate, Amphiptherygium adstringens Schiede ex Schlech. (Julianaceae), es un rbol de aproximadamente
seis metros de altura; su corteza es gris marrn. Sus hojas estn compuestas por cinco hojuelas ssiles, aserradas, con dientecillos redondeados, abovedadas, verde opaco en el anverso y verde grisceo en el reverso. Sus
frutos son nueces alongadas, abultadas, aladas de 2.5 a 5 cm de largo y verde plido (Figura 1). La especie es
originaria de la selva baja caducifolia de los estados de Michoacn, Guerrero, Puebla y Oaxaca y es utilizado
ampliamente en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones del mundo, como desintoxicante
sanguneo por sus propiedades astringentes. La infusin de la corteza se utiliza como enjuague bucal para el
tratamiento de lceras bucales, dolor de muelas y estomatitis, y junto con el rnica y otras hierbas, es utilizada
para curar la inflamacin del estmago, gastritis crnica y lcera gstrica. Finalmente, es bien conocido el uso
de la corteza como agente antiinflamatorio, cicatrizante, analgsico e hipoglucemiante.
La corteza de cuachalalate est constituida principalmente por triterpenoides de tipo tirucalano; los ms
abundantes son el cido masticadiennico y el cido 3-hidroxi masticadiennico. Estudios farmacolgicos realizados in vivo han permitido establecer la actividad hipocolesterolemiante, antitumoral, inhibitoria
de las secreciones gstricas y antiinflamatoria del extracto de la planta y sus productos mayoritarios (Navarrete et al., 1998; Olivera et al., 1999).
Prctica 700
53
Figura 1. Amphiptherygium adstringens Schiede ex Schlech. (Julianaceae) y estructuras

de los principales triterpenoides presentes en el cuachalalate.

1.4.1 Ensayo de identidad
Se pesan 50 g de material vegetal en un matraz bola de 500 mL y se adicionan 250 mL de hexano para
someterlo a un proceso de reflujo durante 90 minutos. Al trmino de la extraccin, el extracto resultante se
deja enfriar, se filtra y se concentra a presin reducida hasta sequedad. Este mismo procedimiento se sigue
para la preparacin de los extractos orgnicos a partir de los preparados herbolarios objeto de anlisis.

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada de los extractos de hexano obtenidos en el inciso
1.4.1. Como referencia se emplean los cidos masticadiennico y 3-hidroxi masticadiennico (Figura 2).
Fase mvil: CHCl3MeOH (9:1).
Preparacin de la muestra: Se disuelve 1 mg de la muestra en 0.5 mL de hexano.
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de los cidos masticadiennico y 3-hidroxi masticadiennico por separado, en 0.5 mL de CHCl3.
Revelador: Solucin cromgena de sulfato crico amoniacal.
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa las muestras a analizar y referencias de los cidos masticadiennico y 3-hidroxi masticadiennico en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en
carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber existir
una separacin de por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se
examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la cromatoplaca con la solucin reveladora y se calienta hasta la aparicin
54
Prctica 700
de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a las muestras y referencias deben de coincidir en su
posicin (Rf) y coloracin.
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados del cromatograma obtenido a lo largo del procedimiento experimental. Calcule los factores de retencin (Rf) de los cidos masticadiennico y 3-hidroxi masticadiennico. Compare
los valores observados para las muestras de referencia e indicar si los preparados comerciales analizados
contienen en su formulacin corteza de cuachalalate como ingrediente activo.
Figura 2. Cromatograma en capa delgada de los extractos de hexano

de la droga cruda y de los preparados herbolarios del cuachachalate:
a) referencia del cido masticadiennico; b) referencia del cido 3-hidroxi
masticadiennico; c) extracto de hexano de la corteza; d) extracto de hexano
del preparado herbolario.
1.6Bibliografa
Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos (FHEUM). 2da Edicin, Secretara de Salud, Comisin
Permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2013.
Argueta, A. Atlas de las Plantas de la Medicina Tradicional Mexicana I. 1ra Edicin, Instituto Nacional Indigenista, Mxico D.F., 1994, pp 542543.
Navarrete, A.; Martnez, U.; Reyes, B. Phytother. Res. 1998, 12, 14.
Olivera, G.; Soto, M.; Martnez, M. J. Ethnopharmacol. 1999, 68, 109113.
Prctica 700
55

Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
2 refrigerantes rectos con mangueras
1 parrilla de calentamiento
2 anillos metlicos
4 pinzas de tres dedos con nuez
1 vidrio de reloj
3 pipetas Pasteur con bulbo
Reactivos
cloroformo (CHCl3)
hexano (C6H14)
sulfato crico amoniacal
(NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
56
1 embudo de filtracin rpida

bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
capilares
algodn
papel aluminio
piedras de ebullicin
material vegetal (corteza cuachalalate)
preparados fitofarmacuticos (corteza cuachalalate)
Prctica 00
7
Prctica 8. Obtencin del crudo alcaloideo a partir de la especie

Datura stramonium
Proporcionar al alumno el conocimiento prctico en los procedimientos generales utilizados para la obtencin e identificacin de fitoalcaloides de carcter bsico de amplio uso en la teraputica.

1.
Aplicar la tcnica de maceracin alcalina para elaborar un extracto orgnico de las partes
areas (frutos, semillas, hojas y tallos) del toloache.
2. Obtener el crudo de alcaloides a partir del extracto orgnico del toloache mediante la
aplicacin de un proceso de reparto cido-base.
3. Establecer la identidad de los componentes mayoritarios presentes en el crudo de alcaloides
(atropina y escopolamina) mediante la prueba de Vitali Morin y por la comparacin de sus
propiedades cromatogrficas con aquellas de muestras autnticas.
1.3Antecedentes
El toloache, Datura stramonium L. (Solanaceae), es una especie vegetal de origen americano que se ha utilizado con un sinfn de propsitos desde antes de la llegada de los espaoles al nuevo mundo. D. stramonium es
una planta herbcea de 50 cm a 1 m de altura; presenta un tallo verde-morado y de olor fuerte; las hojas
son alargadas y con bordes divididos; las flores son solitarias y nacen en la horqueta del tronco, su color
oscila del blanco al azuloso. El fruto de forma esfrica est cubierto de prolongaciones espinosas (Figura 1).
El toloache contiene del 0.2 al 0.45% de alcaloides; siendo la hiosciamina y la escopolamina los componentes mayoritarios. Ambos alcaloides son de tipo tropnico y se biosintetizan a partir del aminocido
ornitina, la ruta de los polictidos y la del cido siqumico. La escopolamina es un agente anticolinrgico
y es el alcaloide ms utilizado en la teraputica por sus propiedades narcticas, antiespasmdicas y en la
prevencin de ataques de asma.
Aunque el toloache posee propiedades narcticas y txicas, se le da un importante uso medicinal en gran
parte del pas donde se emplea para calmar diversos problemas como dolores musculares, de cabeza, de
cintura, de espalda y de muelas. Tambin se usa para tratar padecimientos reumticos, erisipela y comezn, paperas, resfriado, gota, almorranas, para lavar heridas, y como agente antihelmntico y tranquilizante para conciliar el sueo. Tambin, se emplea en curas psicolgicas como sustos y enamoramientos.

1.4.1 Ensayo de identidad (Reaccin de Vitali Morin)
Se pesa 1 g del material vegetal y se trata con 10 mL de H2SO4 0.1 N durante 2 min en agitacin constante.
Al cabo de este tiempo, la mezcla se filtra a travs de papel filtro. El filtrado se trata con 1 mL de NH4OH
(concentrado) y 5 mL de agua. A la solucin anterior, se le adicionan 15 mL de ter etlico y se agita suavemente durante 10 min. Al trmino de la extraccin, se separa la fase etrea y se evapora a sequedad en una
Prctica 00
8
59
cpsula de porcelana utilizando una parrilla de calentamiento. Al residuo obtenido se le adicionan 0.5 mL
de HNO3 fumante y se evapora a sequedad en una parrilla de calentamiento. Posteriormente, se adicionan
10 mL de acetona y, gota a gota, una solucin en etanol de KOH (3%, p/v). El desarrollo de una coloracin
violeta es indicativo de una prueba positiva para la identificacin de alcaloides tipo atropina.
escopolamina
atropina
Figura 1. Datura stramonium L. (Solanaceae) y estructuras de los principales alcaloides presentes en el toloache.
1.4.2 Preparacin y fraccionamiento del extracto orgnico

Se pesan 200 g del material vegetal seco y fragmentado y se someten a un proceso de alcalinizacin con
100 mL de una solucin acuosa de KOH (10%, p/v). El material se macera con 500 mL de CH2Cl2
durante un periodo de siete das. Al trmino de la maceracin, el extracto resultante se concentra a presin
reducida. Posteriormente, el extracto se suspende en 30 mL de CH2Cl2 y se somete a un fraccionamiento
preliminar mediante un proceso de reparto cido-base con HCl 1 N (3 30 mL). La solucin acuosa cida
se alcaliniza mediante la adicin cuidadosa de NH4OH concentrado hasta obtener un valor de pH~10.
Esta solucin se somete a un segundo proceso de reparto con CH2Cl2 (3 100 mL). Las soluciones orgnicas se secan sobre Na2SO4 anhidro y se concentran a presin reducida hasta sequedad.
1.4.3 Anlisis cromatogrfico del crudo alcaloideo

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada del crudo de alcaloides y las referencias de atropina y de escopolamina (Figura 2).
Fase mvil: CHCl3-MeOH-NH4OH (9:1:1).
Preparacin de la muestra: Se disuelven 5 mg del crudo de alcaloides en 1 mL de CH2Cl2.
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de las referencias de atropina y de escopolamina, por
separado, en 0.5 mL de MeOH.
Revelador: Solucin del reactivo de Dragendorff (yodobismutato de potasio).
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa las muestras a analizar y las referencias de atropina
y de escopolamina en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber existir una separacin de por lo menos
15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase mvil indicada.
Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina bajo una lmpara de luz UV a
60
Prctica 00
8
254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca con la solucin reveladora la cromatoplaca hasta la aparicin de color. Las bandas correspondientes a las muestras
y referencias deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
1.5Resultados
1.5.1 Indique mediante una serie de reacciones qumicas el fundamento de la prueba de Vitali Morin,
prueba farmacopica ampliamente utilizada como ensayo de identidad de las drogas crudas utilizadas para
la obtencin de atropina y de escopolamina.
1.5.2 Analice el resultado del cromatograma obtenido. Calcule los correspondientes factores de retencin
(Rf) de los alcaloides mayoritarios presentes en el toloache y de las referencias utilizadas.
1.5.3 Elabore un diagrama de flujo que esquematice el proceso de obtencin del crudo de alcaloides a
partir del toloache. Analice el fundamento del mtodo de fraccionamiento utilizado.
1.5.4 Indique el fundamento de la reactividad de los alcaloides frente al reactivo de Dragendorff.
Figura 2. Cromatograma en capa delgada del crudo de alcaloides obtenido

a partir del toloache: a) referencia de escopolamina; b) crudo de alcaloides;
c) referencia de atropina.
1.6 Bibliografa
Evans, W. Trease and Evans. Pharmacognosy. Edit. W.B. Saunders, 15ta Edicin, Londres, 2002.
Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos (FHEUM). 2da Edicin, Secretara de Salud,
Comisin Permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2013.
Prctica 8
00
61

Sesin 1
Material
1 varilla de vidrio
material vegetal (toloache)
Reactivos
Sesin 2
Material
1 rotaevaporador
1 cpsula de porcelana
1 pipeta graduada de 10 mL
1 propipeta
1 embudo de extraccin de 1000 mL
3 vasos de precipitado de 250 mL
1 vidrio de reloj
placas cromatogrficas de aluminio

de 20 20 cm
capilares
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
papel filtro
papel pH
pipeta Pasteur con bulbo
anillo metlico
material vegetal (toloache)
Reactivos
cloroformo (CHCl3)
ter etlico (C4H10O)
metanol anhidro (CH3OH)
acetona (CH3COCH3)
sulfato de sodio anhidro (Na2SO4)
acido ntrico (HNO3)
reactivo de Dragendorff
62
Prctica 00
8
Prctica 9. Preparacin de los aceites esenciales de Eugenia

caryophyllus, Ligusticum porteri, Lippia graveolens,

Poliomintha longiflora y Thymus vulgaris
Proporcionar al alumno el entrenamiento prctico para la preparacin de diferentes tipos de esencias de
uso medicinal.

1.
2.
Obtener el aceite esencial de las especies Eugenia caryophyllus, Ligusticum porteri, Lippia graveolens,
Poliomintha longiflora y/o Thymus vulgaris mediante una hidrodestilacin simple.
Determinar la presencia del principio activo mayoritario en cada una de las esencias mediante
una cromatografa en capa delgada.
1.3Antecedentes
La especie, Eugenia caryophyllus (Sprengel) Bullock & Harr. (sinnimo: Syzygium aromaticum; Figura 1) es un
rbol aromtico de hasta 15 m de altura que pertenece a la familia de las mirtceas y se cultiva principalmente en Indonesia, Madagascar, Tanzania, Sri Lanka, Malasia y la Isla de Granada. El clavo posee
un aroma fuerte y agradable, con sabor acre y picante. Sus hojas son parecidas al laurel y sus flores son
amarillas formadas por cinco ptalos. La esencia de la planta contiene un aceite esencial rico en eugenol
(80%), el cual es el constituyente mayoritario, es utilizada en la teraputica como agente antisptico local y
como analgsico suave y adicionalmente se emplea con frecuencia para aliviar el dolor de muelas. Otros
componentes importantes presentes son el acetileugenol y el -cariofileno.
El clavo es una especie muy apreciada con fines medicinales y se utiliza principalmente en Mxico y en
otras partes del mundo, como agente carminativo y estimulante digestivo para aliviar sntomas como el
vmito, las flatulencias y las nuseas. Debido a sus propiedades digestivas, el clavo es una de las especias
ms utilizadas en la culinaria, principalmente en la elaboracin de postres.
En Mxico, un nmero importante de hierbas aromticas se designan con el nombre comn de organos;
estas plantas pertenecen a varios gneros de las familias Lamiaceae (Calamintha, Hedeoma, Hyptis, Mesosphaerum,
Monarda, Origanum, Plectranthus y Poliomintha) y Verbenaceae (Lantana y Lippia), as como algunas especies de las
familias Asteraceae (Brickellia) y Fabaceae (Dalea). De todas stas, las ms importantes desde el punto de vista
comercial son las especies de Origanum vulgare, O. majorana, Poliomintha longiflora y Lippia graveolens.
P. longiflora y L. graveolens son los organos mexicanos mas importantes por su frecuencia de uso; la primera
especie arbustiva, es pequea de hasta 1 m de altura, bisexual y perenne que habita en climas ridos o
semisecos. Sus hojas son ovaladas o rmbicas, miden entre 6 y 9 mm de largo por 45 mm de ancho, con
base atenuada, aguda en el pice, verde oscuro, pecolos delgados de hasta 1 mm, de venacin inconspicua.
Las flores solitarias miden 3 mm de largo y entre uno y cuatro mm de ancho y son rosadas con cliz amrficos, con pedicelos delgados de 3 mm de largo, con tallos ramosos, glabrosos y tomentosos (Figura 1).
P. longiflora es el organo ms comercializado en el norte de Mxico (Alans Flores et al., 2008). L. graveolens,
Prctica 00
9
65
especie dominante del complejo organo, es un arbusto delgado restringido a zonas ridas del CentroNorte de Mxico. Los usos medicinales y en la culinaria de esta especie datan desde el siglo XVIII.
Las hojas y las inflorescencias de la planta se utilizan como condimento para la elaboracin de una gran
variedad de platillos mexicanos; se exportan alrededor del mundo como saborizantes de pizzas y salchichas. Las aplicaciones medicinales ms comunes de L. graveolens incluyen el tratamiento de enfermedades
de las vas respiratorias y digestivas (Rivero-Cruz et al., 2011).
Desde el punto de vista farmacolgico, las especies P. longiflora y L. graveolens han sido estudiadas para establecer su potencial antibacteriano, antinociceptivo, espasmoltico y antidiabtico (Rivero-Cruz et al., 2011).
El carvacrol y el timol son los principios activos mayoritarios en P. longiflora y L. graveolens, respectivamente
(Figura 1). Otros compuestos de inters identificados en ambas especies son el -terpineno, el limoneno,
el p-cimeno, el eucaliptol, el -terpineno y el acetato de carvacrilo.
Thymus vulgaris (Lamiaceae) es un arbusto perenne, aromtico, de aproximadamente 30 cm de alto y con
tallos rgidos. Sus hojas son estrechas y lanceoladas. Las flores tienen corolas bilabiadas con coloraciones
distintas, del blanco hasta prpura; se agrupan en espiguillas o racimos terminales densos (Figura 1). Esta
especie es originaria de la cuenca mediterrnea occidental y se encuentra en forma silvestre en las laderas
secas y soleadas de las montaas del Continente Euroasitico, desde el norte de China hasta la pennsula
arbiga, alcanzando zonas de frica oriental como Etiopa. Tambin, se cultiva exitosamente en el Continente Americano.
Al igual que otras especies de la familia Lamiaceae, el tomillo se utiliza ampliamente en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones del mundo para aliviar la tos, trastornos digestivos (e. g. la flatulencia y las digestiones pesadas) y la inapetencia. Es un remedio eficaz contra la diarrea leve, el mal aliento
y los parsitos intestinales. Por va externa, esta planta es un buen desinfectante. Debido a sus propiedades
aromticas, el tomillo es una de las hierbas ms utilizadas como condimento en la culinaria.
El aceite esencial del tomillo (1.5-2.5%) es rico en compuestos aromticos y terpenoides. Los constituyentes
principales son el timol y el carvacrol. Los antecedentes correspondientes a la especie L. porteri se proporcionan en el protocolo experimental correspondiente a la Prctica 3.

1.4.1 Obtencin del aceite esencial
Se pesan 50 g del material vegetal seco y se fragmenta mediante el empleo de tijeras para someterlo a una
destilacin simple (Figura 2) con 500 mL de agua destilada durante 90 minutos.
1.4.2 Separacin del aceite esencial

El hidrodestilado obtenido en el inciso 1.4.1 se coloca en un embudo de separacin y se somete un proceso
de reparto con CH2Cl2. Este procedimiento se repite tres veces (3 100 mL). Las fracciones orgnicas resultantes se juntan y se concentran a presin reducida. Si es necesario, se adiciona sulfato de sodio anhidro
para eliminar la humedad remanente.
66
Prctica 00
9

El aceite esencial se analiza mediante una cromatografa en capa delgada utilizando las siguientes condiciones de anlisis. Como referencias se emplearn muestras autnticas de los componentes mayoritarios
presentes en cada una de las diferentes esencias analizadas.
Fase mvil: hexanoCH2Cl2 (25:75).
Preparacin de la muestra: Se disuelven 2.5 mg de la esencia a analizar en 0.5 mL de CH2Cl2.
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de la referencia correspondiente proporcionada por el
profesor en 0.5 mL de CH2Cl2.
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa la esencia objeto de estudio y la referencia correspondiente al producto mayoritario presente en la misma en forma de puntos con la ayuda de un capilar,
en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber
existir una separacin de por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin
cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire
y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de
fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora hasta cubrir la cromatoplaca y se calienta hasta
la aparicin de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a la muestra y referencia deben coincidir
en su posicin (Rf) y coloracin.
Figura 1. a) E. caryophyllus, b) P. longiflora, c) L. graveolens y

d) T. vulgaris y estructura de los compuestos activos
y mayoritarios presentes en las esencias de estas especies.
Prctica 00
9
67
Figura 2. Equipo para la obtencin de aceites esenciales mediante hidrodestilacin simple.
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento del aceite esencial con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo
a la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B en donde: A representa el peso (g) de la esencia y B es el
peso (g) del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los componentes mayoritarios presentes en las esencias analizadas y de las referencias utilizadas.
1.6Bibliografa
Alans Flores, G.; Alans Fuentes, I.; Caldern Vargas, E. Los organos de Nuevo Len, Mxico. Planta, 2008, 6,
1617.
Caigueral, S.; Vila, R.; Wichtl, M. Plantas Medicinales y Drogas Vegetales para infusin y tisana. Un manual
de base cientfica para Farmacuticos y Mdicos. OEMF Internacional, Miln, 1998, pp 133-135, 521-524.
Rivero-Cruz, I.; Duarte, G.; Navarrete, A.; Bye, R.; Linares, E.; Mata, R. J. Food Sci. 2011, 76,
309317 y referencias all citadas.
68
Prctica 9
00

Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
1 refrigerante con mangueras
2 anillos metlicos
1 conexin de tubo de vidrio
2 tapones de hule
3 matraces Erlenmeyer de 50 mL
1 vidrio de reloj
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
algodn
papel aluminio
capilares
agitador
piedras de ebullicin
material vegetal (clavo, tomillo, organo)
Reactivos
hexano (C6H14)
Prctica 00
9
69
Prctica 10. Obtencin de la hesperidina a partir del pericarpio

de Citrus sinensis
Proporcionar al alumno el entrenamiento prctico en los procedimientos generales utilizados para la obtencin y la identificacin de flavonoides de inters teraputico mediante el aislamiento de la hesperidina a
partir de la cscara del naranjo dulce.

1.
2.
Obtener el extracto orgnico del naranjo dulce mediante el mtodo de reflujo.

Separar y purificar a la hesperidina, constituyente mayoritario, presente en el extracto
orgnico del pericarpio de la naranja, mediante un proceso de cristalizacin.
3. Establecer la identidad de la hesperidina mediante la comparacin de sus propiedades
cromatogrficas con aquellas de una muestra autntica.
1.3Antecedentes
El naranjo dulce, Citrus sinensis (L.) Osbeck. (Rutaceae), es un rbol pequeo que mide aproximadamente hasta
cinco metros de altura. Sus hojas son perennes, elpticas alargadas, con el borde entero y el pecolo claramente
alado en la parte superior. Sus flores son perfumadas, blancas, con simetra radiada, compuestas por cinco ptalos punteados (cavidades secretoras con esencia) y numerosos estambres, cuyos filamentos estn soldados en la
base formando anchos haces. Sus frutos son una baya plurilocular, llamado hesperidio (Figura 1).
El naranjo dulce es ampliamente cultivado en Europa Meridional y en zonas de clima subtropical. La decoccin
de las hojas de la especie es utilizada ampliamente en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones
del mundo, como tnico para la prdida del apetito y como agente tranquilizante, antiespasmdico y febrfugo.
El pericarpio del naranjo dulce contiene un aceite esencial (0.2-0.5%) constituido principalmente por el
antranilato de metilo. Tambin est constituido por flavonoides de tipo flavanona, siendo la hesperidina
el principio activo y componente mayoritario. Estudios farmacolgicos han permitido establecer el potencial
antibacteriano y su uso en el tratamiento de la fragilidad capilar de la hesperidina presente en la especie.
Figura 1. Citrus sinensis (L.) Osbeck. (Rutaceae) y estructura de la hesperidina.
Prctica 10
00
71

1.4.1 Obtencin y aislamiento de la hesperidina
Se pesan 50 g de material vegetal en un matraz bola de un litro y se adicionan 300 mL de hexano para someterlo a un proceso de reflujo durante 60 minutos. Al trmino de la extraccin, el extracto de hexano se deja
enfriar y se filtra a travs de un embudo Bchner y el slido obtenido se seca a temperatura ambiente. Posteriormente, el slido se coloca en un matraz bola de un litro y se adicionan 300 mL de metanol para someterlo
a una segunda extraccin por reflujo durante 60 minutos. El extracto de metanol resultante se filtra en caliente y se concentra a presin reducida hasta obtener un extracto seco. Posteriormente, el extracto obtenido se
reconstituye en una solucin de cido actico (10%, v/v) en caliente y se deja enfriar a temperatura ambiente.
Finalmente, el precipitado formado se separa de la solucin cida mediante filtracin al vaco.
1.4.2 Identificacin de la hesperidina

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada utilizando la tcnica de coelucin. Como referencia se emplea una muestra comercial de hesperidina (Figura 2).
Preparacin de la muestra: Se disuelve 1 mg de la hesperidina aislada en 0.25 mL de MeOH y 10 L de NaOH (1 N).
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de la referencia de hesperidina en 0.25 mL de MeOH
y 10 L de NaOH (1 N).
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa, la muestra y una mezcla (1:1) de la muestra y la
referencia (coelucin) en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber existir una separacin de por lo menos
15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina bajo una lmpara de luz
UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la
solucin reveladora hasta cubrir la cromatoplaca y se calienta hasta la aparicin de manchas coloridas. Las
bandas correspondientes a la muestra y a la referencia de hesperidina deben coincidir en su posicin (Rf) y
desarrollar una coloracin caf intensa.
Figura 2. Cromatograma en capa delgada de la hesperidina aislada a partir

del naranjo dulce: a) referencia de hesperidina; b) hesperidina aislada.
72
Prctica 10
00
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados obtenidos en el anlisis cromatogrfico realizado a lo largo del procedimiento
experimental. Calcule el factor de retencin (Rf) de la hesperidina (muestra de referencia y muestra aislada)
en el cromatograma.
1.5.2 Elabore un diagrama de flujo que sintetice el proceso de obtencin de la hesperidina.
1.6Bibliografa
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press. 2da Edicin, San Diego, California,
1991, pp 912.
Caigueral, S.; Vila, R.; Wichtl, M. Plantas Medicinales y Drogas Vegetales para infusin y tisana. Un manual de
base cientfica para Farmacuticos y Mdicos. OEMF Internacional, Miln, 1998, pp 9192.

Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
1 matraz bola de 1 L
1 refrigerante recto con mangueras
2 anillos metlicos
1 vidrio de reloj
Reactivos
hexano (C6H14)
hidrxido de sodio (NaOH)
cido actico (CH3COOH)

1 embudo Bchner
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
capilares
material vegetal (cscara de naranja)
sulfato crico amoniacal

(NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
Prctica 10
00
73
Prctica 11. Mezcla de esteroles de Glycine max

Proporcionar al alumno el conocimiento prctico en las tcnicas de aislamiento generales para la obtencin
y la identificacin de fitoesteroles de importancia en la industria farmacutica.

1.
Obtener el crudo de esteroles a partir del aceite de soya mediante un reflujo en condiciones
bsicas.
2. Establecer la presencia de esteroides en el crudo mediante la prueba de LiebermannBurchard.
3. Identificar a los esteroides mayoritarios a partir de un crudo de esteroles bajo la forma de
derivados acetilados mediante tcnicas cromatogrficas.
1.3Antecedentes
La soya es una planta perenne que pertenece a la familia de las leguminosas, es de origen asitico y cuenta
con ms de 300 variedades cultivadas principalmente en pases como China, India, Estados Unidos y Mxico. Sus tallos son ramificados y pubescentes, las hojas son alternas y compuestas por tres folios. Las flores
son blancas, amarillas o violceas dependiendo de la variedad (Figura 1).
Las semillas contienen alrededor del 15 al 22% de aceites y del 0.2 al 0.5% de esteroles. Los aceites poseen
una gran importancia en la industria alimenticia debido a su elevado valor nutricional. En la industria
cosmtica se utilizan ampliamente en la elaboracin de glicerina, pinturas, jabn y lubricantes. Los esteroles presentes, en forma libre (40%) y en forma de glucsidos o steres de cidos grasos, se emplean como
materia prima en la semisntesis de esteroides con aplicacin teraputica, siendo los mayoritarios el estigmasterol, el -sitosterol y el campesterol.
El aceite de soya se utiliza popularmente en Mxico y otras partes del mundo, principalmente como agente
hipocolesterolemiante, para aliviar los sntomas de la arteriosclerosis y prevenir algunas enfermedades del
corazn, la hiperplasia prosttica y el desarrollo de las neoplasias de mama, endometrio y colon, entre otras.
Prctica 00
11
75
Figura 1. Glycine max L. (Leguminosae) y estructuras de los principales esteroles presentes en el aceite de soya.

1.4.1Preparacin del crudo de esteroles
Se colocan 5 g del aceite de soya, 50 mL de etanol absoluto y 15 g de KOH disueltos en un mnimo volumen de agua, en un matraz bola de 250 mL para someterlo a un proceso de reflujo durante 90 min.
Al trmino de la extraccin, la solucin resultante se deja enfriar, se reconstituye en 50 mL de agua y se
somete a un proceso de reparto con AcOEt (3 100 mL). Al trmino del proceso de reparto, las soluciones
orgnicas se renen y se concentran a presin reducida hasta sequedad. El residuo resultante se reconstituye en ter de petrleo y se deja reposar durante siete das. Al cabo de este tiempo, el slido que se genera
se filtra al vaco, se pesa para obtener su rendimiento y se determina su punto de fusin (literatura: p.f.
138-140C).
1.4.2Ensayo de identidad
1.4.2.1 Reaccin de Liebermann-Burchard
Se mezcla 1 mL de anhdrido actico y 1 mL de cloroformo. Esta solucin se enfra a 0C y se adiciona
una gota de cido sulfrico concentrado. Posteriormente, se adicionan 5 mg del crudo de esteroles (inciso
1.4.1) y se agita suavemente. El desarrollo de una coloracin azul o verde, al cabo de 30 min, es indicativo
de una prueba positiva para la identificacin de esteroles.
76
11
Prctica 00
1.4.2.2Reaccin de acetilacin
Se pesan 50 mg del crudo de esteroles (inciso 1.4.1) en un matraz bola de 250 mL y se adicionan 1 mL
de anhdrido actico y 1 mL de piridina. La mezcla de reaccin se somete a un proceso de reflujo por 1 h.
Al trmino de la reaccin, la mezcla obtenida se reconstituye en 15 mL de agua y se somete a un proceso
de reparto con 15 mL de AcOEt (3 15 mL). Posteriormente, la solucin orgnica resultante se lava consecutivamente con HCl 1 N (3 45 mL), con una solucin de NaHCO3 (10%, p/v) (3 45 mL) y finalmente
con agua destilada. Al trmino de este proceso, los restos de humedad en la fase orgnica se eliminan mediante un tratamiento con Na2SO4 anhidro y la solucin resultante se concentra a presin reducida hasta
sequedad.
1.4.3 Identificacin del estigmasterol y b-sitosterol

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada del crudo de esteroles. Como referencias se emplean muestras comerciales de estigmasterol y de b-sitosterol.
Fase mvil: HexAcOEt (7:3).
Preparacin de la muestra: Se disuelven 5 mg del crudo de esteroles acetilado en 1 mL de AcOEt.
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de estigmasterol y de b-sitosterol por separado, en
0.5 mL de CH2Cl2.
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa el crudo de esteroles acetilado y las referencias en
forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del
extremo inferior del cromatofolio. Deber existir una separacin de por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca
la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se
marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora hasta
cubrir la cromatoplaca y se calienta hasta la aparicin de manchas coloridas. Las bandas correspondientes
a la muestra y referencias deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
1.5Resultados
1.5.1 Elabore un diagrama de flujo que sintetice el proceso de obtencin del crudo de esteroles a partir del
aceite de soya. Analizar el uso del KOH en etanol al inicio del proceso de extraccin.
(Rf) del estigmasterol y del b-sitosterol en el cromatofolio.
1.5.3 Explique brevemente mediante reacciones qumicas el fundamento de la prueba de LiebermannBurchard, reaccin ampliamente utilizada como ensayo de identidad de las drogas crudas que contienen
esteroles.
Prctica 00
11
77
1.6Bibliografa
Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoqumica, Plantas Medicinales. Edit. Acribia. 2a Edicin, Zaragoza, Espaa,
2001, pp 679680.
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press. 2a Edicin, San Diego, California,
1991, pp 136139.
Piironen, V.; Lindsay, D.G.; Miettinen, T.A.; Toivo, J.; Lampi, A.M. J Sci. Food Agric. 2000, 80,
939966.

Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
1 agitador magntico
1 pinza de tres dedos con nuez
1 anillo metlico
1 embudo Bchner
Reactivos
etanol (CH3CH2OH)
ter de petrleo
78
1
1

esptula cromo-nquel
propipeta
parrilla de agitacin y calentamiento
papel filtro
aceite de soya
11
Prctica 00
Sesin 2
Material
1 pinza de tres dedos con nuez
2 tubos de ensayo
1 propipeta
1 parrilla de agitacin y calentamiento
1 rotaevaporador
Reactivos
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
papel filtro
papel aluminio
algodn
capilares
equipo de medicin de punto de fusin

anhdrido actico (CH3CO)2O
piridina (C5H5N)
hexano (C6H14)
cloroformo (CHCl3)
11
Prctica 00
79
Prctica 12. Obtencin de la cerina a partir de Quercus suber

Proporcionar al alumno el conocimiento prctico en las tcnicas de aislamiento generales para la obtencin
y la identificacin de terpenoides selectos de importancia en la industria farmacutica.

1. Aplicar los mtodos de extraccin continua y de recristalizacin para la obtencin de la
cerina a partir del corcho.
1.3Antecedentes
Quercus suber L. (Fagaceae) es un rbol mediano, de hoja perenne, nativo de Europa y del norte de frica
que vive entre 150 y 250 aos. Sus hojas miden de 4 a 7 cm de longitud, pueden ser lobuladas o aserradas,
verde oscuro en el haz y ms claras por el envs. Su fruto es una bellota de 2 a 3 cm de longitud. Tiene una
corteza gruesa y rugosa de la que se obtiene el corcho. La recoleccin del corcho no daa en absoluto al
rbol, ya que puede volver a producir una nueva capa, haciendo el recurso totalmente renovable. El rbol
se cultiva ampliamente en Espaa, Portugal, Argelia, Marruecos, Francia, Italia y Tnez. La industria europea del corcho produce 340,000 toneladas al ao, por un valor de 2.5 millones de euros.
El desarrollo del corcho parece ser fruto de la evolucin de la especie para la proteccin contra el fuego,
frecuente en climas de veranos muy secos. Una parte importante de la industria de corcho reside en Espaa, en donde se obtiene alrededor del 30% de la produccin mundial.
El corcho es altamente apreciado por su corteza suberificada, la cual se utiliza en la industria de tapones,
artculos de pesca, aislantes sonoros y trmicos; la industria del calzado, etc. La corteza es rica en taninos y
goza de mucho prestigio para curtir cueros. El corcho es un material muy complejo formado por suberina
(45%), polifenoles como la lignina y taninos (33%), celulosa (12%), ceras (5%) y otros compuestos de tipo
triterpenoide como la cerina y la friedelina con propiedades antimicrobianas importantes.
HO
O
cerina
Figura 1. Quercus suber L. (Fagaceae) y estructura de la cerina presente en el corcho.
Prctica 12
00
81

1.4.1 Preparacin y fraccionamiento del extracto
Se pesan 75 g del material vegetal seco y molido y se adicionan 500 mL de hexano para someterlo a una
extraccin continua utilizando un aparato de Soxhlet durante 60 min. El extracto resultante se filtra y
concentra a sequedad.
1.4.2 Purificacin de la cerina

El extracto obtenido en el inciso 1.4.1 se reconstituye en el volumen mnimo de CHCl3 caliente y se almacena durante 24 horas. El slido resultante se recristaliza utilizando hexano caliente y se deja reposar
por 20 minutos. Al cabo de este tiempo, los cristales formados se filtran al vaco, se pesan para obtener su
rendimiento y se determina su punto de fusin (literatura: p.f. 255-256C).
1.4.3 Identificacin de la cerina

Se realiza un anlisis por cromatografa en capa delgada utilizando la tcnica de coelucin. Como referencia se emplea una muestra comercial de cerina.
Fase mvil: CH2Cl2HexAcOEt (8:1:1).
Preparacin de la muestra: Se disuelve 1 mg de la cerina aislada en 0.5 mL de CHCl3.
Preparacin de la muestra de referencia: Se disuelve 1 mg de la referencia de cerina en 0.5 mL de CHCl3.
Revelador: Solucin cromgena de aldehdo ansico en cido sulfrico.
muestra y la referencia (coelucin) en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes y aproximadamente a un cm del extremo inferior del cromatofolio. Deber existir una separacin de
por lo menos 15 mm entre cada aplicacin. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase
se roca la solucin reveladora hasta cubrir la cromatoplaca y se calienta hasta la aparicin de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a la muestra, a la referencia y a la coelucin (e. g. mezcla de la muestra
y la referencia) deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la cerina con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo a la
siguiente expresin matemtica: (A 100)/B en donde: A representa el peso (g) de la cerina y B es el peso
(g) del material vegetal seco.
(Rf) de la cerina (muestra de referencia y muestra aislada) en el cromatofolio.
82
Prctica 12
00
1.6Bibliografa
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press. 2da Edicin, San Diego, California,
1991, pp 217220.
Castola, V.; Bighelli, A.; Rezzi, S.; Melloni, G.; Gladiali, S.; Desjobert, J.M.; Casanova, J. Ind. Crops Prod.
2002, 15, 1522.
Ghosh, P.; Mandal, A.; Chakrabortya, M.; Saha, A. J. Chem. Pharm. Res. 2010, 2, 714721.
Coquet, C.; Ferr, E.; Peyronel, D.; Dal Farra, C.; Farnet. A.M. C. R. Biologies, 2008, 331, 853858.

Sesin 1
Material
1
rotaevaporador
1
extractor Soxhlet
1
esptula cromo-nquel
1
embudo Bchner
2
1
pipeta graduada de 10 mL
1
2
1
vidrio de reloj
1
vaso de precipitado de 250 mL
Reactivos
hexano (C6H14)
cloroformo (CHCl3)
anisaldehdo (C8H8O2)
Prctica 12
00
papel aluminio
algodn
papel filtro
frascos viales
propipeta
material vegetal (corcho)
83
Manual de Prcticas de Laboratorio de Farmacognosia

es una obra editada por la Facultad de Qumica.
Se utilizaron en la composicin los tipos
Avalon y Times New Roman puntaje 9 y 11 pts
Tipo de impresin PDF
La publicacin de esta obra fue posible gracias al apoyo de la Coordinacin de Comunicacin
El cuidado de la edicin estuvo a cargo de
CME Brenda lvarez Carreo.
Diseo de interiores: Maricela Hernndez Casasola
Diseo de portada: LDCV Vianey Islas Bastida
Publicacin autorizada por el Comit Editorial de la Facultad de Qumica.
Julio de 2014

Farm A Cog Nosia

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA

FINANCIADO POR: PROYECTO PAPIME 201511

Publicacin autorizada por el Comit Editorial de la Facultad de Qumica

Primera edicin 2014 D.R. Universidad Nacional Autnoma de Mxico.

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA

Primera edicin: 2014

La calidad del proceso de enseanza-aprendizaje prctico de la asignatura de Farmacognosia, del plan

Prctica 1. Obtencin de la pinocembrina a partir

1.2 Objetivos particulares

Preparar el extracto orgnico del epazote de zorrillo mediante la tcnica de reflujo.

1.4 Procedimiento experimental

1.4.2 Fraccionamiento preliminar del extracto orgnico

Cuadro 1. Sistemas de elucin utilizados para el desarrollo del proceso

1.4.3 Separacin y purificacin de la pinocembrina mediante

1.4.4 Identificacin de la pinocembrina

1.7 Material y equipo

Prctica 2. Separacin del alcaloide piperina a partir

1.2 Objetivos particulares

Obtener el extracto orgnico de la pimienta negra mediante la tcnica de extraccin continua

Figura 1. Piper nigrum L. (Piperaceae) y estructura de la piperina.

1.4 Procedimiento experimental

1.4.2 Separacin y purificacin del alcaloide

1.4.3 Identificacin de la piperina

Figura 2. Cromatograma en capa delgada de la piperina aislada a partir de la pimienta:

1.7 Material y equipo

placas cromatogrficas de aluminio de 20 20 cm

Prctica 3. Aislamiento de la diligustlida a partir de la raz

1.2 Objetivos particulares

1.4 Procedimiento experimental

1.4.2 Fraccionamiento preliminar del extracto orgnico

Cuadro 1. Sistemas de elucin para el desarrollo del proceso cromatogrfico

1.4.3 Anlisis cromatogrfico

Figura 2. Cromatograma en capa delgada del: a) extracto orgnico de la droga cruda

1.7 Material y equipo

cloruro de metileno (CH2Cl2)

Prctica 4. Camellia sinensis: obtencin de la cafena del t negro,

1.2 Objetivos particulares

Figura 1. Camellia sinensis (L.) Kuntze (Theaceae).

1.4 Procedimiento experimental

1.4.2 Ensayos de identidad

Figura 2. Cromatograma en capa delgada de la cafena aislada a partir del t negro:

1.4.2.2 Prueba de la murxida

1.4.3 Identificacin y cuantificacin de los fenoles totales presentes en el t verde

1.4.3.2 Anlisis cromatogrfico

Figura 3. Cromatograma en capa delgada de los preparados del t verde:

1.4.3.3 Determinacin del contenido de fenoles totales presentes en el t verde

Figura 4. Curva de calibracin para la cuantificacin de fenoles totales presentes en el t verde.

1.7 Material y equipo

metanol anhidro (MeOH)

material vegetal (t verde)

Prctica 5. Control de calidad (pruebas de identidad y de

1.2 Objetivos particulares

Figura 1. Psidium guajava L. (Myrtaceae).

1.4 Procedimiento experimental

1.4.2 Obtencin del extracto orgnico a partir de un preparado

1.4.3 Ensayos de identidad

1.4.4 Identificacin y cuantificacin de los fenoles totales presentes

1.7 Material y equipo

etanol absoluto (CH3CH2OH)

Prctica 6. Mtodos para identificar a los compuestos marcadores

1.2 Objetivos particulares

1.4 Procedimiento experimental