Universidad Central de Venezuela

Facultad de Medicina
Escuela Luis Razetti
Ctedra de Bioqumica

FOSFORILACIN OXIDATIVA Y CICLO DE KREBS

Prof. Carlos Gonzlez

Prof. Mara del Rosario Snchez
Febrero, 2006

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Para el momento actual en el mundo cientfico se acepta que las leyes de la Fsica y
la Qumica son aplicables al mundo biolgico. Lo mismo sucede con las leyes de la
Termodinmica, ciencia que estudia los intercambios de energa entre los sistemas, los
cuales son constituidos por una cantidad de materia con lmites definidos mientras que
el entorno incluye a todo el resto del universo (no contenido en el sistema).
La aplicacin de los principios termodinmicos a la materia viviente se denomina
Bioenergtica. Ella se ocupa del estudio de 1os intercambios de energa en la materia
viviente.
Seres auttrofos y hetertrofos
Cuando se considera la fuente de la cual derivan los seres vivientes la energa
necesaria, estos se pueden dividir en dos clases: auttrofos y hetertrofos (Fig. 1). Los
primeros son capaces de utilizar sustancias simples come CO 2 y H2O y por medio de la
energa de la luz solar, sintetizar componentes celulares en un proceso denominado
fotosntesis. Los hetertrofos no pueden utilizar la energa solar y derivan la energa
que necesitan de la combustin de
molculas ms o menos complejas
sintetizadas por los auttrofos. Por lo
tanto, a fin de cuentas, es el sol la
fuente de energa utilizada por los
seres vivos para sintetizar molculas
complejas a partir de otras muy
sencillas. Estas molculas complejas
pueden, a su vez, ser utilizadas como
fuente de energa y vuelven a dar
molculas pequeas (Fig. 2). Este
proceso degradativo se denomina
catabolismo y de all deriva el mundo
biolgico la energa necesaria para
realizar trabajo qumico, mecnico,
etc.
Fig. 1: Fuentes de carbono y energa para el metabolismo.
Cuando un ser vivo muere otros seres vivos utilizan esa materia como fuente de
energa, produciendo molculas pequeas. De tal manera, que la energa de la luz solar
se utiliza para mantener el mundo viviente y al final, cuando los organismos vivos
mueren, es disipada en el entorno.
La clula y los procesos metablicos
La unidad por medio de la cual el mundo biolgico realiza este intercambio de
energa es la clula, la cual contiene molculas de variados tamaos y funciones con un
grado fabuloso de organizacin. Se puede por lo tanto afirmar que la clula es un
estado muy especial de la materia: altamente organizado y sin embargo, sujeto a

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cambios incesantes. La clula esta continuamente intercambiando molculas con su
ambiente y a pesar de ello las molculas en su interior se mantienen dentro de limites
estrechos de concentracin. Este hecho es el resultado de que para una determinada
sustancia, la velocidad con la cual es modificada, degradada o excluida de la clula se
balancea casi exactamente con la velocidad con la cual es introducida en la clula o

Fig. 2: Caractersticas del metabolismo.

sintetizada por ella. De all que se diga que la clula se encuentra en un estado fijo
dinmico. Es evidente, entonces, que en una clula estn sucediendo muchas
reacciones qumicas simultneamente. Estas reacciones qumicas son catalizadas por
enzimas que conforman generalmente vas metablicas, en las cuales la molcula
producto de una reaccin enzimtica es a su vez el sustrato de la prxima enzima de la
va y as sucesivamente. Las vas metablicas se dividen para su estudio en:
a.- Catablicas, que son aquellas en las cuales hay conversin de molculas en
otras ms sencillas y
b.- Anablicas, en las cuales molculas sencillas terminan dando otras molculas
ms complejas o macromolculas como protenas, cidos nucleicos, etc.
Papel del ATP en el intercambio de energa
El continuo recambio de los componentes celulares implica una estrecha relacin
entre la liberacin celular de la energa qumica necesaria y su utilizacin. En forma

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general se puede afirmar que los procesos catablicos generan energa libre, la cual es
utilizada para la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi, mientras que los procesos
anablicos utilizan la energa del ATP y producen ADP y Pi.
Se puede, por lo tanto,
visualizar al ATP como el
eslabn que encadena las
reacciones
catablicas
lieradoras de energa libre y
las reacciones anablicas
consumidoras
de
esa
energa libre.
Es importante destacar
que la clula consume
energa libre (trabajo) en
otros procesos adems de
las reacciones anablicas o
de biosntesis. Tal es el
caso del transporte activo
de iones o de la contraccin muscular.
Fig. 3: Papel del ATP en el metabolismo
Para comprender las relaciones energticas de la sntesis y utilizacin del ATP es
necesario recordar algunas nociones de termodinmica.
ALGUNOS PRINCIPIOS DE TERMODINMICA
Calcular la cantidad de energa contenida en un sistema determinado es un
problema muy difcil, si no imposible. Pero el clculo de la diferencia de energa entre el
estado inicial de un sistema y su estado final al alcanzar el equilibrio, es a menudo
bastante sencillo. Es decir, es posible saber qu cantidad de energa es intercambiada
entre un sistema y su entorno.
La primera ley de la termodinmica establece que la energa se conserva, es decir
no puede ser creada ni destruida. De este postulado se desprende que una forma de
energa puede ser transformada en otra. Por ejemplo la energa qumica de una batera
puede convertirse en energa elctrica y sta a su vez, en la energa mecnica de un
motor. Es importante sealar que, cuando hay transferencia de energa de un sistema a
otro, una parte de la energa se disipa finalmente como calor. Por ejemplo, si se impulsa
una rueda, esta no continua girando indefinidamente, sino que al cabo de cierto tiempo
se detiene debido al roce.
La segunda ley de la termodinmica establece que no es posible transformar
ntegramente el calor en trabajo. Esto puede ser ilustrado con un ejemplo: si un gas
contenido en un recipiente a una determinada presin se pone en contacto, por medio
de un agujero, con otro recipiente al vaco, el gas llena el recipiente vaco hasta que se
igualen las presiones en ambos recipientes. Una vez que se ha llegado a este estado
de equilibrio ya no hay ms modificaciones en la presin, es decir, no es posible que,

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sin influencia externa, el gas vuelva a llenar un solo recipiente y deje el otro vaco.
Concepto de Entropa
Se preguntar Y esto qu tiene que ver con el calor? Lo que sucede es que en este
ejemplo esta interviniendo otra condicin de la materia y la energa, que se conoce
como entropa y se define en trminos simples como el grado de desorden en un
sistema. En este caso la entropa del sistema ha aumentado, puesto que al aumentar el
volumen para el mismo nmero de molculas el sistema esta ms desordenado.
Por otra parte, la segunda ley establece que los procesos fsicos o qumicos
suceden en el sentido en que la entropa aumenta hasta el punto en que se alcanza el
equilibrio y que estos procesos son irreversibles, ya que la entropa del universo
siempre aumenta. Si en el ejemplo, a temperatura constante, se quisiera volver a la
situacin inicial, con un recipiente con gas y otro vaco, habra que suministrar ms
energa que la absorbida originalmente porque la entropa estara disminuyendo y esto
contradice la segunda ley de la termodinmica. Si en un sistema la entropa disminuye,
en el entorno del sistema la entropa tendra que aumentar algo ms para que se
cumpla el postulado de que la entropa del universo aumenta.
Concepto de energa libre
En los sistemas biolgicos la presin y la temperatura se mantienen constantes. En
estas condiciones, hay una estrecha correlacin entre el cambio de entropa durante un
proceso y el cambio en la energa total del sistema. Esta correlacin puede ser
expresada por medio de una funcin llamada energa libre, la cual puede ser medida y
utilizada para predecir el sentido de una reaccin qumica y su estado de equilibrio.
Cuando un sistema pasa de un estado A, a un estado de equilibrio B, hay una
disminucin de la energa del sistema y una fraccin de ese cambio de energa puede
ser utilizada para realizar trabajo en el entorno.
Esa fraccin es lo que se denomina energa libre. La energa libre de un sistema
siempre tiende a un mnimo, puesto que el sistema siempre tiende al equilibrio y en esta
condicin no puede realizar trabajo.
En el caso de las reacciones qumicas es necesario que la energa libre disminuya
para que la reaccin se produzca, exactamente lo contrario de lo que sucede con la
entropa que siempre aumenta, al tomar en cuenta el cambio en la entropa de la
reaccin junto con el cambio de la entropa del entorno.
Relacin entre la energa libre y la constante de equilibrio de una reaccin
qumica.
Si en una reaccin qumica los reaccionantes A + B dan como producto C + D,
cuando se alcanza el punto de equilibrio la velocidad de conversin de A+ B en C + D

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es exactamente igual a la velocidad de la reaccin inversa. Cuando se tiene esta
situacin se define como constante de equilibrio (Keq) la relacin entre las
concentraciones de los productos y las concentraciones de los reaccionantes
A+B C+D
Keq = _[C] _[D] __
[A] [B]
Para condiciones determinadas de temperatura y presin el valor de Keq es
inmutable, independiente de las concentraciones iniciales de reaccionantes y productos.
Es evidente que si por ejemplo, la reaccin comienza con solamente A y B
presentes, para cuando se alcanza el equilibrio la energa libre del sistema debe haber
variado. La relacin del cambio de energa libre con la constante de equilibrio es la
siguiente:
G = G + RT ln _[C] _[D] __
[A] [B]
pero como al alcanzarse el equilibrio G = 0 se tiene que: G = -RT ln Keq
G es el cambio standard de energa libre, el cual es una constante para cada
reaccin. Esta constante se obtiene por el cambio de energa libre en condiciones de
reaccin determinadas: transformacin de 1 mol de reaccionante en 1 mol de producto
a 25C y pH 7.0, siempre que tanto los reaccionantes como los productos se
mantengan a concentracin 1 molar.
Es importante destacar que G es una constante mientras que el valor de G en la
ecuacin

G = G + RT ln __[productos]___
[reaccionantes]

vara con las concentraciones.

Puede darse el caso de que G sea negativo para una reaccin y sin embargo, al
poner en contacto los reaccionantes no se observe nada, debido a que la relacin de
concentraciones hace que G sea positivo. Por ejemplo en la reaccin A B cuyo
G sea -0.96 Cal.
Si B se encuentra a la concentracin 0.005 M y A en la concentracin 0.001 a 25C
se tendra
G = -0.96 + 1.98 x 2.98 x 2,303 log __0,005__
0,001
no sucede nada a pesar de que G es negativo!.

G = 0

Se puede ahora definir reacciones endergnicas y exergnicas:

Endergnicas son aquellas en las cuales G es positivo y exergnicas aquellas en
las cuales G es negativo. Es decir, cuando se lleva a cabo una reaccin exergnica

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en condiciones standard la energa libre disminuye y se puede realizar trabajo, al
menos tericamente. Por el contrario, en las endergnicas la energa libre aumentara,
y por lo tanto estas reacciones no son termodinmicamente espontneas.
En Bioqumica, generalmente se utilizan los G de las reacciones y no el G ya
que no es muy fcil medir las concentraciones intracelulares de muchas sustancias. Los
G de reacciones con intermediarios comunes, tienen naturaleza aditiva y esto se
puede utilizar en el clculo de G de ciertas reacciones con intermediarios comunes.
El G de la reaccin

ATP + HOH ADP + Pi

es de -7,3 Kcal/mol

Este valor es muy difcil de determinar midiendo las concentraciones de equilibrio,

porque este se desplaza mucho hacia la derecha y la concentracin de ATP es
demasiado pequea para medirla con exactitud. Por lo tanto se utiliza para el clculo de
G, el hecho de que ste tiene naturaleza aditiva en reacciones con intermediarios
comunes.
hexoquinasa
1.- ATP + Glucosa

ADP + Glucosa 6P

Gl= -4.0 Kcal/mol

fosfatasa
2.- Glucosa 6P + H2O

glucosa + Pi

G 2= -3,3 Kcal/mol

La suma de las dos reacciones es:

ATP + H2O ADP + Pi
GATP = G1 + G2
GATP = -4.0 + (-3,3) = -7,3 Kcal/mol
Bases estructurales de la alta energa del ATP
De comienzo es importante aclarar que la estructura del ATP no tiene nada especial
en trminos de los enlaces qumicos que unen a los tomos (Fig. 4).
Se dice que los enlaces que unen el grupo
fosfato terminal al intermedio y ste al proximal
son de alta energa porque, cuando esos
enlaces son hidrolizados hay un cambio
importante en G (-7,3 Kcal). Pero la razn
de ese cambio de energa libre no est en el
enlace, sino en las diferencias que hay entre el
ATP y sus productos de hidrlisis: ADP y Pi:
Fig. 4: Estructura del ATP.
a) En primer lugar los productos tienen mayores posibilidades de estabilizacin por
resonancia y se sabe que los hbridos de resonancia son ms estables, o sea,
tienen menor energa libre. En consecuencia, mientras ms posibilidades de

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formar hbridos de resonancia, menor energa libre.
b) El hecho de que al pH intracelular (cercano a 7,0) los grupos fosfato estn casi
totalmente ionizados, hace que las cargas negativas resultantes estn sujetas a
una marcada repulsin electrosttica.
Esto hace que una vez separado un grupo fosfato tenga poca tendencia a unirse de
nuevo al ADP, lo cual hace que la constante de equilibrio [ADP] [Pi] /[ATP]) sea muy
alta, contribuyendo esto a que G sea ms negativa.
Este valor G de hidrlisis del ATP lo coloca en un lugar intermedio entre los
compuestos fosforilados que se encuentran en las clulas:
G hidrlisis

Kcal/mol

Fosfoenolpiruvato
1,3-Difosfoglicerato
Fosfocreatina
ATP
Fructosa 6-P
Glucosa 6-P

-14.80
-11.80
-10.30
-7. 30
-3.80
-3.30

Es importante destacar que estos compuestos fosforados, se ordenan de acuerdo a

su G de hidrlisis, pero que en realidad en las clulas ellos no son simplemente
hidrolizados, sino que transfieren su grupo fosfato a otros compuestos, de tal manera
que parte de la energa libre es conservada en el compuesto que adquiere el grupo
fosfato.
Por ejemplo, en el catabolismo de la glucosa (gliclisis) se produce un intermediario
llamado 1,3-difosfoglicerato. Este puede reaccionar con el ADP y se forma 3fosfoglicerato y ATP. El G de esta reaccin es -4,50 Kcal/mol. Se observar que si
sumamos este valor al G de hidrlisis del ATP obtenemos -11,80 Kcal/mol que es el
G de la hidrlisis del 1,3-difosfoglicerato.
De la misma manera el ATP puede transferir su fosfato terminal a otras sustancias y
as las eleva de nivel energtico para que se puedan hacer reacciones que de otra
manera seran imposibles termodinmicamente a temperatura y presin constantes. El
ADP producto de la prdida del fosfato terminal del ATP es inmediatamente
refosforilado y nuevamente se forma ATP. Por esta razn se dice que el ATP es la
molcula que sirve de eslabn entre los procesos exergnicos del catabolismo y los
procesos endergnicos del anabolismo, transporte, etc.
Fosforilacin Oxidativa
Se ha descrito hasta ahora como puede ser sintetizado el ATP por fosforilacin del
ADP a partir del grupo fosfato de compuestos con G ms negativo que el ATP. Este
no es, sin embargo, el principal mecanismo de sntesis de ATP. La mayor parte (90%)
del ATP es producida en la mitocondria por medio de la llamada fosforilaci6n oxidativa.

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Estructura Mitocondrial
La mitocondria es un organelo subcelular que mide 1,5 a 2 nm en cuya estructura se
describen una membrana externa y una membrana interna, la cual contiene la llamada
matriz mitocondrial. Adems existe el espacio intermembranoso. (Fig. 5)

Fig. 5: Estructura de la mitocondria.

La membrana externa tiene aproximadamente 50% de lpidos y 50% de protenas.
Entre estas se encuentra la enzima monoamino-oxidasa, la cual se utiliza como
marcador de la presencia de esta membrana en preparaciones subcelulares. En el
espacio intermembranoso hay tambin varias enzimas, la ms caracterstica de las
cuales es la adenilatoquinasa. La matriz es una solucin gelatinosa en la cual estn la
mayor parte de las enzimas del ciclo de Krebs, las de -oxidacin de los cidos grasos
y otras.
La membrana interna contiene aproximadamente 20% de lpidos y 80% de
protenas. Entre estas se encuentran la succinato deshidrogenasa (una flavoprotena) y
la carnitina aciltransferasa. Adems, la membrana interna es el sitio donde se encuentra
la cadena oxidativa, cuyos componentes se describen brevemente a continuacin.
La mayora de los componentes de la cadena respiratoria se encuentran asociados
formando cuatro complejos. Todos ellos estn formados por varia protenas, pero slo
nos referiremos aqu a las molculas que intervienen en las reacciones de
oxidorreduccin del transporte electrnico.
En el complejo I se encuentra la NAD deshidrogenasa o
NADH-CoQ
oxidorreductasa. sta contiene FMN como coenzima. En el complejo II se encuentra la
succinato deshidrogenasa, que contiene FAD como coenzima. En el complejo II se
encuentran los citocromos b y c1. Todos los citocromos son protenas que contienen
grupos hemo que son capaces de intervenir en reacciones de oxidorreduccin porque
poseen hierro, que puede interconvertirse en sus estados frrico (Fe +3) y ferroso (Fe+2).

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Al complejo IV, llamado citocromo oxidasa, pertenecen los citocromos a y a3, que son
los que donan finalmente los electrones al oxgeno. Adems de estos complejos, la
cadena de transporte electrnico esta formada por el citocromo c y la coenzima Q o
ubiquinona, que es una molcula pequea y liposoluble, lo que le permite gran
movilidad en la membrana interna mitocondrial. Los citocromos solo pueden aceptar o
donar electrones, en cambio la coenzima Q puede aceptar electrones y protones. En la
tabla 1 se encuentra un resumen de las caractersticas de los componentes de la
cadena de transporte electrnico.
Los componentes de la cadena de transporte electrnico se encuentran orientados
vectorialmente de manera que algunos de ellos quedan en contacto slo con el espacio
intermembranoso (protena FeS, citocromos b, c y c l) mientras que otros se extienden a
travs de toda la membrana (NADH deshidrogenasa, citocromo oxidasa).
Se considera como un quinto complejo al denominado complejo F 1FO. F1 es una
protena globular que se encuentra en una especie de protuberancias que se pueden
observar en la membrana interna con el microscopio electrnico. Esta protena ha sido
aislada y purificada y se ha demostrado que est involucrada en la sntesis de ATP. F O
es una protena hidrofbica que une F 1 a la membrana y que constituye un canal de
protones.
Tabla 1: Resumen de la estructura y funcin de los complejos constituyentes de la
cadena de transporte electrnico.
-

Componente

Acepta e de:

Entrega e- a:

Complejo I

NADH

CoQ

Complejo II

succinato

CoQ

CoQ

Complejos I y II

Complejo III

Complejo III

CoQH2

Citocromo c

Citocromo b
Citocromo c1
Protenas con Fe y S.

Citocromo c

Complejo III

Complejo IV

Citocromo c

Complejo IV

Citocromo c

O2

Citocromo c oxidasa:
~10 protenas diferentes,
citocromos a y a3.

Complejo IV

O2 es el aceptor final de los electrones

Oxgeno
ATP Sintetasa

Constituyentes
NADH deshidrogenasa:
FMN como grupo prosttico,
Protenas con Fe y S.
Succinato deshidrogenasa
FAD como grupo prosttico.
Protenas con Fe y S.

Componente

Acepta H+ de

Accin

Constituyentes

Espacio
intermembrana.

convierte
ADP + Pi a
ATP + H2O

F1: a3b3g3de

"Complejo V"

Concepto de Oxidorreduccin

F0: (SHP)n

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Equivalentes de oxidorreduccin: En las reacciones de oxidorreduccin de las clulas a
veces se transfieren electrones y otras veces tomos de hidrgeno completos (recuerde
que un tomo de hidrgeno tiene dos electrones y dos protones), por esta razn
hablaremos de equivalentes de oxidorreduccin al referirnos a la oxidacin y reduccin
de molculas.
Se recordar que en las reacciones de oxido-reduccin una sustancia reductora le
cede equivalentes reductores (electrones o tomos de hidrgeno) a una sustancia
oxidante. Al ceder los electrones el reductor queda oxidado y el oxidante queda
reducido al recibirlos. Por ello se dice que los agentes reductores funcionan como
parejas redox acopladas. Por ejemplo, un in Ferroso (Fe ++) cede un electrn a un
oxidante y es oxidado a in frrico (Fe +++). En este caso la pareja redox acoplada es Fe +
++
/Fe++.
Coenzimas de oxidorreduccin
Frecuentemente en la clula las reacciones de oxidorreduccin estn catalizadas
por enzimas que utilizan las coenzimas NAD+, NADP+ y FAD.
La coenzima NAD+ (nicotinamida-adenina dinucletido) contienen nicotinamida,
que es sintetizada en el organismo a partir de la vitamina niacina. El NAD + se une muy
laxamente a las enzimas que lo utilizan como coenzima, puede disociarse fcilmente de
ellas tanto en estado oxidado como en estado reducido. Como puede observarse en la
figura 6, el anillo de nicotinamida, el cual es la parte de la molcula que cede o acepta
equivalentes
reductores,
posee una carga positiva
neta y por eso la forma
oxidada se escribe NAD+.
Cuando las enzimas que
contienen NAD+ participan en
reacciones
de
oxidorreduccin,
se
transfieren dos tomos de
hidrgeno, de los cuales solo
pueden unirse al NAD+ los
dos electrones y uno de los
protones, como se observa
en la fig. 6. Esta es la razn
por la cual el NAD + reducido
se escribe frecuentemente
NADH + H+.

FIg. 6: Estructura del NAD+

El FAD (flavin dinucletido) y el FMN (flavin mononucletido) se forman en el

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organismo a partir de la vitamina riboflavina. Se unen fuertemente a las enzimas que los
utilizan como coenzimas, las cuales son enzimas que se encuentran como protenas
integrales de membranas. Por ejemplo, la NAD deshidrogenasa (deshidrogena al NAD
reducido), que contiene FMN forma parte del complejo I de la cadena de transporte de
electrones; la succinato deshidrogenasa, que contiene FAD, una enzima del ciclo de
Krebs, tambin se encuentra unida a la membrana interna mitocondrial. La parte de
estas coenzimas que acepta y cede equivalentes reductores es el anillo de
isoaloxazina, que se encuentra remarcado en la fig. 7. Como se nota en la misma fig.
los nucletidos de flavina intercambian dos protones y dos electrones cuando
intervienen en reacciones de oxidorreduccin.

Fig. 7: Estructura del FAD

El potencial redox Standard
Se puede determinar por medio de la ecuacin
E = E0 + __2303 RT__ log __[oxidante]___
nF

[reductor]

en la cual E es el potencial observado E0 es el potencial redox Standard, n es el

nmero de electrones transferidos y F es el faraday (23,062 Cal/V) Se vera que cuando
las concentraciones de oxidantes y reductor son iguales la ecuacin se transforma en
E = E 0
Esta es la manera de medir el potencial redox Standard. Una sustancia reduce a
otra cuando su potencial redox es menor. Por ejemplo, el citocromo c reduce al oxigeno,
ya que el potencial redox Standard de la pareja cit. c +++/cit. c++ es de +0,25 y el de la
pareja H2O/O2 es de +0,816 V.

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Se ha encontrado que en la membrana interna
mitocondrial las protenas de la cadena oxidativa
se disponen de tal manera que quedan ordenadas
de acuerdo a su potencial redox (Fig. 8).

Fig. 8: Ordenamiento de los componentes de la

cadena de transporte electrnico de acuerdo a su
potencial redox.

Funcionamiento de la cadena oxidativa

Los procesos que se realizan en la matriz mitocondrial generan equivalentes
reductores al oxidar diversas sustancias. En el ciclo de Krebs se oxida Acetil-CoA y se
producen CO2 y equivalentes reductores (NADH y FADH 2). La beta oxidacin de los
cidos grasos tambin genera NADH y FADH 2. Estas coenzimas reducidas son
oxidadas paso a paso por la cadena respiratoria, de manera tal que en el primer paso

queda la coenzima oxidada y la deshidrogenasa reducida. En segundo paso la

deshidrogenasa es a su vez oxidada al ceder electrones a una protena frrica (sin
grupo hemo). En este paso los iones Fe +++ de la protena quedan reducidos a iones Fe +
+
, pero por cada FMNH2 quedan 2H+ libres.
Actualmente se acepta que la membrana interna funciona vectorialmente, de tal
manera que los protones generados salen hacia el espacio intermembranoso. Tambin
se postula que la membrana interna es impermeable a los H + y, por lo tanto, al ser
expulsados los protones se crea un gradiente de concentracin (Fig. 9)
Se postula que la coenzima Q por ser bastante hidrofbica tiene mucha movilidad
dentro de la membrana. Adems, se sabe que hay una proporcin 6:1 entre la
concentracin molar de CoQ y la de cualquiera de los citocromos. Se dice que CoQ
sirve de transportador de los electrones entre la protena frrica y el citocromo b y toma
2H+ de la matriz mitocondrial. Cuando el citocromo b es oxidado por el c 1, salen otros
dos protones al medio intermembranoso.
El citocromo cl es oxidado por el cit c y este a su vez por la citocromo oxidasa (cit. a
+ a3) la cual finalmente cede los electrones al O 2. Cada molcula de O2 capta 4e- y 4H+

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y se transforma en 2H2O.
Se puede decir que los electrones fluyen por la cadena respiratoria como el agua
por el cauce de un ro y cada vez que se acercan al espacio intermembrana salen H +
(Fig. 9). Va a encontrar diferentes versiones de lo que se acaba de describir, no tienen
que aprenderse ninguna con detalle. Slo es importante que comprenda que el paso de
los electrones por los diferentes componentes, genera un gradiente de protones entre el
espacio intermembrana y la matriz mitocondrial. Mitchell propuso que la formacin de
este gradiente es la fuerza que impulsa la sntesis de ATP por el complejo FoF1 ATP
sintetasa. Es imprescindible que la membrana interna mitocondrial sea impermeable a
los protones para que pueda formarse el gradiente.

Fig. 9: Formacin del gradiente de protones que permite la sntesis de ATP.

La fosforilacin
El resultado final del transporte de un par de equivalentes reductores desde el
NADH hasta el O2 es la salida de 3 pares de H+ (va a encontrar diferentes relaciones
estequiomtricas en diferentes libros) con lo cual se crea un gradiente de concentracin
de H+ entre el espacio intermembrana y la matriz, a travs de la membrana interna
mitocondrial. Pero adems, se obtiene una diferencia de potencial entre el espacio
intermembranoso (positivo) y la matriz (negativo), y una diferencia de pH. En este
gradiente electroqumico se conserva una fraccin de la energa liberada por la
oxidacin que es utilizable para que se realice la reaccin
ADP+ Pi ATP

G +7,3 Kcal.

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Esta reaccin es catalizada por la protena F 1 de la membrana interna, componente
del complejo FoF1 ATP sintetasa (fig. 10). Se postula que los protones entran de nuevo
a la matriz mitocondrial a travs de la protena F O y esto determinara un cambio
conformacional de la protena F 1, que permite la fosforilacin de F 1 para formar F1P. sta
cedera el fosfato al ADP para formar ATP y regresara a la conformacin original, para
repetir el ciclo cuando pasa otro par de protones a travs de F O. Por lo tanto, se
considera que 3 pares de H + aportan suficiente energa para la sntesis de 3 ATP, 2
pares de H+ para 2 ATP y un par de H+ para un ATP.
Es importante tener en mente que el
proceso descrito sucede continuamente en
las clulas: el transporte de electrones es
muy rpido y los componentes de la cadena
respiratoria son reducidos y reoxidados a
gran velocidad. El gradiente de protones
puede ser medido experimentalmente, pero
"in
vivo"
probablemente
sea
casi
imperceptible porque continuamente se
utiliza para la sntesis de ATP.

Fig. 10: Estructura del Complejo FoF1 ATP sintetasa.

El transportador de ATP
El ATP formado por F1 debe salir de la mitocondria para ser utilizado en el citosol. Se
ha demostrado que existe una protena que realiza la traslocacin de ATP y ADP a
travs de la membrana interna: por cada molcula de ATP que sale de la mitocondria
entra una de ADP. Es interesante que esta molcula transportadora de ATP es la
protena ms abundante de la membrana interna mitocondrial y representa
aproximadamente el 12% de la protena total de las mitocondrias. Esta constituida por
dos subunidades y se ha encontrado que entre las dos conforman el sitio de unin de
los sustratos. El ATP solamente se une por la cara interna de la membrana, mientras
que el ATP slo lo hace por la cara externa. Se postula que esto se debe a que la
protena tiene dos conformaciones diferentes: cuando se une al ATP hay un cambio
conformacional que hace salir el ATP y permite la unin del ADP en la cara externa.
Esto determina el cambio a la conformacin original, el ADP es introducido a la
mitocondria y nuevamente puede unirse un ATP para salir (Fig. 11).
Este sistema de traslocacin puede ser inhibido por un producto vegetal
diterpenoide llamado atractilsido.
Se ha demostrado que la protena transportadora slo tiene afinidad por el
atractilsido cuando hay ADP en el lado externo de la membrana; este inhibidor no se

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une a la protena por el lado interno, haya o no ADP en el medio.

Fig. 11: Transportador de ATP/ADP (translocasa)

Produccin de equivalentes reductores para alimentar la cadena respiratoria
La cadena respiratoria oxida a las coenzimas reducidas que son el producto de la
oxidacin de molculas pequeas producidas por las diversas rutas metablicas.
Ya se ha dicho que las macromolculas de la clula pueden ser degradadas a
aminocidos, el glucgeno a glucosa 6-P, etc. Estas molculas mas pequeas todava
contienen mucha energa y para aprovecharla la clula las degrada por diferentes vas
metablicas a acetil-CoA (acetato activado). Este es el alimentador del denominado
Ciclo de Krebs.
Ciclo de Krebs
Este ciclo consiste en una cadena de reacciones mediante las cuales el acetato de
la acetil-CoA es oxidado a CO 2, con la produccin concomitante de equivalentes
reductores, los cuales pasan a lo largo de la cadena respiratoria para finalmente reducir
al O2 y formar H2O. A continuacin se enumeran las reacciones del ciclo de Krebs:
1) Reaccin de la Piruvato deshidrogenasa:
Aunque la reaccin catalizada por la piruvato deshidrogenasa no es
estrictamente una de las enzimas del ciclo de Krebs, en ciertos tejidos y en ciertas
situaciones (que no mencionaremos aqu) es la reaccin que aporta la mayor parte del
acetil-CoA que se oxida en el ciclo. Por esta razn en la mayora de los libros de texto,
la descripcin del ciclo de Krebs comienza con la de la reaccin catalizada por la
piruvato deshidrogenasa.
La piruvato deshidrogenasa es un complejo multienzimtico, formada por un
conjunto de varias protenas que coordinadamente y por pasos catalizan la
descarboxilacin oxidativa del piruvato.

17

Fig. 12: Reaccin catalizada por la piruvato deshidrogenasa

En la fig. 12 est remarcado el grupo acetato, que es la unidad de dos carbonos que
va a oxidarse en el ciclo de Krebs. Note que la mayor parte del acetil-CoA est formada
por la coenzima A, la cual se deriva del cido pantotnico, una vitamina.

2) Condensacin de Acetil-CoA y
Oxalacetato: El catalizador de la reaccin es
la citrato sintasa.

3) Conversin del citrato en isocitrato: Esta

reaccin es catalizada por la enzima aconitasa, la
cual cataliza una deshidratacin y rehidratacin
del citrato para formar isocitrato.

4) Conversin del isocitrato en cetoglutarato reaccin catalizada por la

isocitrato deshidrogenasa.
Esta es una reaccin interesante:
En primer lugar se desprende CO 2 con
lo cual se reduce de 6 a 5 el nmero de
tomos de carbono en los intermediarios
del ciclo. En segundo trmino se generan
equivalentes reductores bajo la forma de NADH. Y en tercer lugar as una reaccin
estimulada por el ADP. En ausencia de este procede muy lentamente.

18
5) Descarboxilacin del -cetoglutarato a succinil-CoA

Esta reaccin es catalizada por una enzima compleja llamada -cetoglutarato

deshidrogenasa. La reaccin es semejante a la descarboxilacin del piruvato para dar
origen al acetil-CoA.
En este paso se libera CO2 con lo cual se llega a 4 tomos de carbono en el
esqueleto de los intermediarios del ciclo. Adems, se produce NADH. El producto de la
reaccin, succinil-CoA, es una molcula de "alta energa", debido a que como
consecuencia de la oxidacin se obtiene un tioster del cido succnico, cuya hidrlisis
es una reaccin fuertemente exergnica.
Este compuesto, succinil-CoA, no es hidrolizado directamente, sino que primero se
forma un intermediario succinil-P, el cual transfiere el grupo fosfato primero a la enzima
y luego al GDP y se forma GTP.
Pi + succinil-CoA succinil-P + CoA
Succinil-P + -------- En-P + succinato

E-P + GDP ---- GTP

Esta reaccin es un ejemplo de lo que se denomina fosforilacin a nivel de

sustrato, la cual se define como la formacin de compuestos fosfatados de "alta
energa" sin intervencin de la cadena respiratoria, ni del mecanismo ya descrito para la
formacin de ATP en la mitocondria.
Regeneracin del oxaloacetato
El ciclo contina con las siguientes reacciones:

19

6)
Catalizada
deshidrogenasa.

por

la

succinato

7) Catalizada por la fumarasa

8)
Catalizada
deshidrogenasa.

por

la

malato

En la deshidrogenacin del succinato hay un aspecto interesante; la coenzima es el

FAD y est unida covalentemente a la enzima. La coenzima reducida FADH 2 cede sus
equivalentes reductores a la cadena respiratoria en un punto ms prximo al oxgeno
que el NADH, probablemente la CoQ. (Fig. 9). Esto significa que el paso de esos
equivalentes por la cadena oxidativa slo causa la expulsin de 2 pares de H + y por lo
tanto slo provee energa para la sntesis de 2 ATP por la protena F 1.
En la fig. 13 se presenta un esquema todas las reacciones del ciclo de Krebs.
Regulacin del ciclo de Krebs
Como todas las reacciones qumicas, la velocidad de las reacciones del ciclo de
Krebs, dependen, en parte, de las concentraciones relativas de reactantes y productos.
Por ejemplo, si consideramos la siguiente reaccin:
Isocitrato + NAD+
-cetoglutarato + NADH + H+
Si aumenta la concentracin de NAD +, aumentar la velocidad de conversin de
isocitrato en -cetoglutarato. Esto tendr una repercusin sobre la velocidad del ciclo de
Krebs, ya que el aumento de la formacin de -cetoglutarato aumenta la concentracin
de uno de los sustratos de la reaccin:
-cetoglutarato + CoA + NAD+
Succinil-CoA + CO2 + NADH + H+
lo cual aumentar la velocidad del ciclo.

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Acetyl-CoA

Oxalacetato

Citrato

Malato

Isocitrato

Fumarato

-cetoglutarato

Succinato
Fig. 13: Reacciones del ciclo de Krebs.

Succinil-CoA

21

Todas las reacciones del CK donde intervienen coenzimas de xido-reduccin,

dependen de la concentracin relativa de sus formas reducidas y oxidadas. La
concentracin de NAD+, independientemente de su estado de xido-reduccin es fija en
el interior mitocondrial (y tambin en el citosol, ya que ellas no atraviesan la membrana
interna mitocondrial). Esto quiere decir que si aumenta la concentracin de su forma
reducida, es porque disminuy la de su forma oxidada, y viceversa. As, si decimos
que hay una disminucin de NAD+, decimos implcitamente que hay un aumento de
NADH. Es por esta razn que al querer referirnos a la concentracin de alguna de las
formas de xido-reduccin del NAD, hablamos de una relacin: NAD +/NADH
Hay que tener en cuenta, entonces, que si decimos que hay un aumento de la
relacin NAD+/NADH, quiere decir que aument la concentracin de NAD + (aumenta la
relacin si el numerador es mayor que el denominador); y si decimos que la relacin
disminuye, quiere decir que aument la concentracin de NADH.
Algo parecido puede decirse de la concentracin de nucletidos de adenina. Su
concentracin dentro de la mitocondria es constante, pero vara su estado de
fosforilacin. En el caso de los nucletidos de adenina no se debe a que no puedan
atravesar la membrana interna mitocondrial, sino a que el transporte de ellos a nivel de
esta membrana es un antiportador equimolecular: solo funciona si intercambia una
molcula de ATP por una de ADP. Esto hace que se mantenga constante la
concentracin intramitocondrial de estos nucletidos. As, si aumenta la concentracin
de ATP es porque la de ADP disminuy. Por esta razn frecuentemente tambin
habamos de la relacin ATP/ADP1 para referirnos a la concentracin de alguno de ellos.
A continuacin detallaremos la regulacin de cada una de las enzimas que limitan la
velocidad del CK.
Regulacin de la piruvato deshidrogenasa: El complejo de la piruvato deshidrogenasa
est sujeto a formas mltiples de regulacin. Depende, como todas las
deshidrogenadas que utilizan NAD + como coenzima, de la relacin NAD +/NADH.
Adems,
es
regulada
por
modificacin
covalente
reversible
por
fosforilacin/desfosforilacin. Cuando la enzima est fosforilada es inactiva y es activa
cuando est desfosforilada. Como puede notarse en la fig. la quinasa que fosforila e
inactiva a la piruvato deshidrogenasa, es un enzima que es regulada alostricamente
por varios metabolitos. Por ejemplo, el aumento del NADH y del ATP la activan, lo cual
quiere decir que fosforila a la piruvato deshidrogenasa inactivndola; es decir que tanto
un aumento del NADH como del ATP tienen el efecto neto de inhibir a la piruvato
deshidrogenasa. La regulacin de esta enzima es muy compleja y tambin depende del
efecto de algunas hormonas, pero este punto se tratar ms extensamente en el tema
de Integracin y Regulacin del Metabolismo.
Regulacin de la citrato sintasa: Es inhibida alostricamente por el ATP y activada por el
ADP. El NADH tambin inhibe alostricamente a la enzima. Cuando aumenta la
concentracin de citrato, la se hace mas lenta la liberacin del mismo del complejo EP,
por lo que la reaccin global se hace mas lenta, el efecto neto ser que el aumento de
En realidad habra que incluir en la ecuacin las concentraciones de AMP y Pi (fosfato
inorgnico), pero para los fines de esta gua los omitiremos.
1

22
la concentracin de citrato, inhibe a la enzima porque permanece por mas tiempo unido
al centro activo de ella, donde se ha formado.
El succinil-CoA compite por al enzima y la inhibe, porque el succinil CoA se parece a
uno de los sustratos de la enzima (acetil-CoA). Todos los factores que inhiben la
actividad de la enzima, disminuirn la velocidad del ciclo de Krebs.

Fig. 15: Regulacin de

piruvato deshidrogenasa.

la

Regulacin de la isocitrato deshidrogenasa: Como todas las enzimas deshidrogenadas

depende de la relacin NAD +/NADH. El aumento de la concentracin de NADH,
desplaza el equilibrio de la reaccin:
Isocitrato + NAD+
-cetoglutarato + NADH + H+
hacia la formacin de isocitrato, siendo el efecto neto una disminucin de la velocidad
de formacin de -cetoglutarato y, por supuesto una reduccin de la velocidad del CK.
Lo contrario ocurrir si hay un aumento de la concentracin de NAD. Recuerde
que un aumento de la concentracin de NAD + implica una disminucin de NADH, por lo
cual podemos decir entonces que un aumento de la relacin NAD +/NADH aumenta la
actividad de la enzima isocitrato deshidrogenasa y viceversa.
La isocitrato deshidrogenasa tambin es inhibida alostricamente por el ATP y
activada por el ADP.
Regulacin de la -cetoglutarato deshidrogenasa: Est sujeta a la regulacin de la
relacin NAD+/NADH al igual que otras deshidrogenadas dependientes del NAD +.
Adems, su regulacin es muy parecida a la de la piruvato deshidrogenasa, aunque no
es regulada por fosforilacin desfosforilacin.
Regulacin de la malato deshidrogenasa: Como todas las enzimas deshidrogenadas
depende de la relacin NAD+/NADH. El aumento de la concentracin de NAD +,

23
desplaza el equilibrio de la reaccin:
Malato + NAD+
oxalacetato + NADH + H+
hacia la formacin de oxalacetato, o sea que aumentar la velocidad del CK.
Regulacin coordinada del ciclo de Krebs y de la fosforilacin oxidativa:
La regulacin de las enzimas del CK por la concentracin relativa de
reaccionantes y productos est interrelacionada con la regulacin alostrica de las
enzimas. Por ejemplo, un aumento de la concentracin de citrato slo aumenta la
velocidad del ciclo de Krebs si concomitantemente las enzimas sujetas a regulacin
alostrica estn tambin activas.
Los factores que tienden a aumentar la velocidad del ciclo de Krebs, aumentarn
la formacin de coenzimas reducidas que son el sustrato para la cadena de transporte
electrnico, por lo que aumentar tambin la velocidad de dicho transporte y, por
consecuencia, la sntesis de ATP. Podemos decir entonces que el aumento de la
velocidad del ciclo de Krebs, aumenta la sntesis de ATP y el consumo de oxgeno
(recuerde que al ser el oxgeno un gas, su concentracin se expresa como presin
parcial), ya que siendo ste el ltimo aceptor de los electrones en la cadena respiratoria
se consumir ms si aumenta la velocidad del transporte electrnico. El consumo de
oxgeno, de hecho, se utiliza experimentalmente para medir la velocidad del transporte
de electrones, as como para medir la tasa de sntesis de ATP, se mide la cantidad de
fosfato consumido. Recuerde que el ATP se forma a partir de ADP y Pi (fosfato
inorgnico).
Igualmente, la velocidad de la fosforilacin oxidativa afectar la velocidad del
ciclo de Krebs. Por ejemplo, una disminucin de la sntesis de ATP, aumentar la
concentracin de ADP lo que traer como consecuencia que se activen las enzimas
alostricas citrato sintasa e isocitrato deshidrogenasa, lo cual aumentar la velocidad
del CK, es decir que aumentar la produccin de coenzimas reducidas que aportan
sustrato a la cadena de transporte electrnico, aumentando as la sntesis de ATP.
Intuitivamente, podemos darnos cuenta que esta interdependencia entre ambos
procesos tiende a conservar el estado homeosttico de la clula.
Papel anfiblico del ciclo de Krebs
Hasta este punto se ha descrito el papel del ciclo de Krebs como va degradativa, en
la cual como balance neto se tiene que el acetato de la acetil-CoA es convertido en 2
CO2. Esa oxidacin produce 3 NADH y 1 FADH 2, alimentadores de la cadena
respiratoria para la sntesis de 11 ATP. Adems, se produce un GTP (equivalente a 1
ATP) por fosforilacin a nivel del sustrato.
Pero el ciclo de Krebs tambin puede aportar precursores para la sntesis de
metabolitos, es decir, puede jugar un papel como ruta anablica. Por ejemplo, el citrato
puede salir de la mitocondria y dar origen en el citosol a Acetil-CoA, precursora de los
cidos grasos. Asimismo, el oxaloacetato puede originar fosfoenolpiruvato y a partir de
este puede ser sintetizada la glucosa en el hgado.
Por ello se dice que el ciclo de Krebs es una va anfiblica: puede ser catablica o
anablica segn las condiciones imperantes en la clula.
Concepto de reacciones anaplerticas: Las reacciones anaplerticas son aquellas que

24
aportan intermediarios al ciclo de Krebs. Por ejemplo la reaccin catalizada por la
piruvato carboxilasa, una enzima mitocondrial que nos encontraremos nuevamente en
el metabolismo de los carbohidratos, puede aportar oxalacetato al ciclo de Krebs:
Piruvato + ATP + CO2
Oxalacetato + ADP + Pi
Igualmente, la reaccin catalizada por la glutamato deshidrogenasa, otra que tambin
retomaremos mas tarde, puede aportar -cetoglutarato al ciclo:
Glutamato + NAD(P)+
-cetoglutarato + NADH(P) + H+
Hay muchas otras reacciones anaplerticas, pero por ahora solo nos interesa que se
comprenda el concepto.
El papel del ATP en la regulacin del metabolismo
La posicin clave del ATP como eslabn entre los procesos catablicos y anablicos
hace que la concentracin de ATP sea determinante en la activacin o inhibicin de las
vas metablicas. En realidad, ms que la concentracin de ATP es la relacin ATP/ADP
el factor importante, ya que al ser utilizado el ATP aumenta la concentracin de ADP, ya
que se ha determinado que (ATP)(ADP) = K (constante)
Por ejemplo, al considerar la situacin metablica del msculo en reposo se
encuentra lo siguiente:
- la concentracin de ATP es elevada, mientras que la de ADP es baja.
- la reaccin
Fosfocreatina + ADP ATP + creatina
G= -3,0 Kcal/mol.
se desplaza hacia la izquierda (en el sentido endergnico) debido al efecto de la
concentracin de ATP sobre Keq.
En las mitocondrias el consumo de O2 es bajo porque, entra otros factores:
a.- La concentracin de ADP en la matriz mitocondrial es baja y por lo tanto hay
poco sustrato para la reaccin catalizada por F1:
ADP + Pi ATP.
b.- El flujo de electrones a travs de la cadena respiratoria disminuye debido a que:
i) El gradiente de H+ no es utilizado totalmente por la sntesis de ATP, lo cual hace
que el bombeo de protones hacia el espacio intermembranoso disminuya.
ii) La concentracin de coenzimas reducidas (NADH y FADH 2) aumenta y por tanto
la concentracin de coenzimas oxidadas disminuye. La baja concentracin de NAD +
disminuye la velocidad de las reacciones en que intervienen las deshidrogenasas que
requieren esa coenzima.
c.- La isocitrato deshidrogenasa disminuye su actividad debido a que su activador
(ADP) est en baja concentracin.
d.- El transportador de ATP-ADP a travs de la membrana mitocondrial disminuye su
actividad, ya que hay baja concentracin de ADP para ser intercambiado por el ATP
intramitocondrial.

25

e.- La velocidad de conversin de la glucosa en piruvato y acetil-CoA disminuye

porque la elevada concentracin de ATP inhibe a la enzima fosfofructoquinasa, que es
la determinante de la velocidad total de la gliclisis (transformacin de glucosa en
piruvato). Si el msculo pasa de la condicin de reposo a la contraccin, el consumo de
O2 aumenta violentamente, debido a que los factores mencionados se encuentran
ahora en la situacin inversa. En condiciones fisiolgicas la situacin es ms compleja
todava porque intervienen factores hormonales (adrenalina) y otros. Sin embargo, en
forma muy sucinta se puede decir que al aumentar la demanda de O 2 por las
mitocondrias musculares se ponen en juego mecanismos fisiolgicos para aumentar el
aporte de O2 a los msculos: aumenta la velocidad y frecuencia de la respiracin,
aumenta la frecuencia cardiaca, etc.
Todo ello hace que ms O2 sea tomado del aire y transportado por la hemoglobina
desde los pulmones a los msculos, o ms propiamente a las mitocondrias musculares.
Inhibidores y desacoplantes de la fosforilacin oxidativa:
El estudio experimental de los mecanismos de sntesis de ATP se ha apoyado
con el uso de sustancias que pueden inhibir el proceso. Igualmente, es importante
conocer cmo actan estas sustancias, ya que en la prctica clnica se encontraran
pacientes afectados por algunas de ellas. Finalmente, algunas molculas que
normalmente estn en el organismo, como la termogenina, ejercen su accin
fisiolgica porque afectan el proceso de fosforilacin oxidativa.
Inhibidores de la cadena del transporte electrnico: el cianuro, el monxido de carbono,
el amital sdico, entre otros, son sustancias que se unen irreversiblemente a algunos de
los componentes de los complejos que forman parte de la cadena de transporte
electrnico, impidiendo su accin. Cuando esto ocurre, los electrones no pueden fluir
libremente hasta el oxgeno y todos los componentes de la cadena que estn antes del
complejo bloqueado, permanecen reducidos (porque no pueden soltar sus electrones)
y todos los que estn despus, permanecen oxidados. Al no haber transporte de
electrones (no hay consumo de oxgeno), no se forma el gradiente electroqumico de
protones, por lo cual no hay paso de ellos por el complejo FoF1 ATP sintetasa y no
habr sntesis de ATP. Entonces, los inhibidores de la cadena de transporte electrnico
inhiben la sntesis de ATP y el consumo de oxgeno.
- Prediga cmo se encontrar la relacin NAD +/NADH y la ATP/ADP.
- Cul ser el efecto sobre la velocidad del ciclo de Krebs.
Desacoplantes: stas son sustancias que pueden transportar protones a travs de la
membrana interna mitocondrial a favor de su gradiente de concentracin. El ejemplo
clsico, el 2,4 dinitrofenol, es una molcula liposoluble que al instalarse en la membrana
interna mitocondrial, puede unirse reversiblemente a protones, pasndolos desde el
espacio intermembrana hacia la matriz mitocondrial. El efecto neto de esto es parecido
a que se abriera un hueco en la membrana que deja escapar a los protones. Como no
est interrumpido el flujo de electrones, ste continua por lo que se sigue consumiendo
oxgeno; pero como no puede formarse el gradiente de protones, porque los que son
bombeados al espacio intermembrana son retornados a la matriz por el 2,4 dinitrofenol

26
y no pasan por el complejo FoF1 ATP sintetasa, no habr sntesis de ATP.
- Prediga cmo se encontrar la relacin NAD +/NADH y la ATP/ADP.
- Cul ser el efecto sobre la velocidad del ciclo de Krebs.
- Por qu uno de los efectos de los desacoplantes es el aumento de la liberacin
de calor?
Inhibidores de la FoF1 ATP sintetasa: La oligomicina puede unirse al componente Fo
(de hecho de aqu toma su nombre, ya que es o y no cero) inhibiendo su accin. Esto
impide que los protones pasen a travs de l y por lo tanto, no se puede sintetizar ATP.
Los protones se acumulan en el espacio intermembrana, lo que hace que la energa de
oxidacin de los componentes de la cadena respiratoria, que es la utilizada para el
bombeo de protones, llegue un momento en que ser insuficiente debido a la magnitud
del gradiente que se ha formado. Esto trae como consecuencia que tambin se inhiba
el transporte electrnico y, en consecuencia, el consumo de oxgeno.
- Prediga cmo se encontrar la relacin NAD +/NADH y la ATP/ADP.
- Cul ser el efecto sobre la velocidad del ciclo de Krebs.
Muchos de los estudios experimentales que se hacen sobre el funcionamiento de la
cadena de transporte de electrones, se realizan en lo que se llama preparaciones
mitocondriales, que no son otra cosa, grosso modo, que el resultado de romper clulas
en un buffer adecuado y someterlas a un proceso de centrifugacin que permite obtener
diferentes fracciones que contienen, tambin, diferentes organelos. En el pasillo de la
Ctedra se puede ver un pster que ilustra este proceso.
Por ejemplo, se puede medir el consumo de oxgeno de una preparacin
mitocondrial, como resultado de varias manipulaciones experimentales. Recuerde que
el consumo de oxgeno es una medida del funcionamiento de la cadena de transporte
de electrones. La medicin del consumo de O 2 se puede realizar con un electrodo de
hidrgeno, que detecta la diferencia de potencial que se genera en las reacciones de
oxidorreduccin. En la fig.16 se observa el grfico que puede obtenerse si se mide el
consumo de oxgeno de una preparacin mitocondrial a la cual se aade ADP. El ADP,
adems de ser un activador alostrico de varias enzimas del ciclo de Krebs, es uno de
los sustratos para la sntesis del ATP, por lo que aumentar el consumo de oxgeno. Se
puede ver en el grfico que desde una presin parcial de oxgeno mayor, se pasa a una
menor a medida que transcurre el tiempo, ya que parte del oxgeno se consumi para
formar agua en la cadena del
transporte electrnico.
Fig. 16: Aumento del consumo de
oxgeno en presencia de ADP en
una preparacin mitocondrial.

27

B I B L I OG R A F A

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