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27/02/2015

Universidade Federal de Alfenas Unifal-MG

Introduo

Mtodos de identificao de compostos orgnicos

Introduo aos mtodos de


identificao de compostos
orgnicos

Anlise de produtos naturais

Anlise de frmacos - sntese, controle de


qualidade

Profa. Dra. Natalcia de Jesus Antunes

Alfenas
2015

Introduo

Identificao de substncias inditas

Identificao de substncias conhecidas


Anlise fitoqumica
Substncias j descritas

Conhecer os constituintes qumicos de espcies


vegetais ou avaliar a sua presena

Uso de padres

Comparao de dados

Etapas da anlise fitoqumica

Coleta do material

COLETA DO MATERIAL


PREPARAO DO MATERIAL VEGETAL


EXTRAO
ANLISE FITOQUMICA PRELIMINAR
FRACIONAMENTO, ISOLAMENTO E
PURIFICAO DE SUBSTNCIAS
IDENTIFICAO ESTRUTURAL

Preparar uma exsicata para a identificao


botnica

TESTES
BIOLGICOS

MODIFICAO
ESTRUTURAL

Evitar coletar:

Partes afetadas por doenas e parasitas

Materiais estranhos

Registrar o local, a hora e data da coleta

SNTESE
TOXICOLOGIA

27/02/2015

Preparao do material vegetal



-


-

Material fresco
Indispensvel para deteco de componentes especficos
Evita a presena de substncias oriundas do fenecimento
vegetal
Deve ser processado imediatamente ou conservado a
baixas temperaturas

Material seco
Deve-se garantir a estabilidade qumica
Deve-se interromper os processos metablicos
Estabilizao lcool ou pelo calor (acima de 60C)
Secagem
temperatura abaixo de 60C por longo tempo
Moagem

Extrao


Grau de diviso

Meio extrator

Polaridade
Toxicidade
Estabilidade

Metodologia

Extrao a frio
turbolizao,
macerao, percolao
Extrao a quente em sistema
aberto
infuso e decoco
Extrao a quente em sistema
fechado
extrao sob refluxo

Anlise fitoqumica preliminar



-

Reaes de colorao e/ou precipitao


Cumarinas
luz ultravioleta fluorescncia azul
brilhante ou verde
Polifnois
oxidantes (FeCl3) azul ou verde azulado
Alcalides
Dragendorff precipitado
Saponinas
espuma
Extrato bruto
mascaramento do teste - Roteiro de
anlise sistemtica: reaes mais ntidas

Fracionamento, isolamento e
purificao de substncias

Cromatografia
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.

Partio por solventes


ELUENTE

Solventes de polaridade
crescente

mistura de
Princpios ativos

SOLVENTE
SiO2

Partio cido-base

EXTRATO AQUOSO

Substncias

2 3 4

Fraes c/ subst.
puras

27/02/2015

Cromatografia

Cromatografia

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.

CC

Cromatografia

CC

Cromatografia

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.

CC

Cromatografia

CC

Cromatografia

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.
CC

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.
CC

27/02/2015

Cromatografia

Cromatografia

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.

Processo dinmico em que a separao


cromatogrfica obtida a partir de interaes
diferenciais entre os analitos componentes da
mistura, fase estacionria e fase mvel.

CC

CC

Cromatografia em camada delgada (CCD)


Princpio: Adsoro (polaridade)
- Separao pela migrao diferencial sobre uma camada
delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie plana
 Grande gama de compostos pode ser analisada
 Mtodo rpido (20-40 min.)
 Mtodo simples e barato
 F.M. - sistema de solventes
 F.E - Adsorventes
- slica, alumina, poliamida, etc
 Mtodos de deteco:
- fsico-qumicos


D
AMOSTRA

d
10,0 cm

Rf = d/D
1,00

7,3 cm

0,73

3,6 cm

0,36

0,8 cm

0,08

Rf = fator de reteno
D = distncia percorrida pela FM
d = distncia percorrida pela mancha
Origem = ponto de aplicao da amostra

0,00 (ORIGEM)

0 Rf 1

Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) -

High-performance liquid chromatography (HPLC)




Instrumentao do CLAE

Permite a deteco no destrutiva de um grande nmero de


substncias
Deteco por UV, arranjos de fotodiodos (informao espectral),
fluorescncia ou eletroqumico
Alta sensibilidade

27/02/2015

Cromatografia gasosa (CG)


Concentraes muito baixas

Anlise de frmacos volteis e semi-volteis


Compostos no
recuperao

volteis:

Injetor

Instrumentao do CG

derivatizao

baixa

Coluna

Sistema de deteco

Gs de arraste (FM)
- H2, N2, He, Ar
- Funo: transporte da amostra
- Propriedades: inerte, compatvel com o detector, puro

Etapas para a determinao estrutural


de um produto

Identificao estrutural
SNTESE

MODIFICAO ESTRUTURAL

Caracterizao preliminar

Determinao de constantes fsicas

Solubilidade

Testes dos grupos funcionais

Anlise elementar

Determinao da Massa Molecular (MM)

Determinao da Frmula Molecular (FM)

Caracterizao preliminar


Cor

Substncias orgnicas com grupos funcionais conjugados


so coloridas e a intensidade da cor depende da extenso
da conjugao.
- Ex: - compostos aromticos nitrosos e -dicetonas
amarelos
- quinonas e azo-compostos amarelos, laranjas ou
vermelhos
- cetonas e alcenos extensamente conjugados vo do
amarelo ao prpura
- substncias saturadas ou com baixo grau de
insaturao brancas ou pouco coloridas.
- impurezas marrom
-

Caracterizao preliminar

-

Odor
O cheiro de muitas substncias orgnicas extremamente
caracterstico, particularmente os de baixo peso molecular.

Cuidado!!!

27/02/2015

Caracterizao preliminar


Chama - Teste de ignio

Inflamabilidade

Natureza da chama:

Caracterizao preliminar

halognios a dificultam ou impedem

- cheiro de dixido de enxofre


- chama amarela fuliginosa

presena de enxofre

alta insaturao ou elevado

nmero de carbonos na molcula


- chama amarela no fuliginosa

Pureza

Ponto de ebulio constante

Faixa de ponto de fuso estreita

CCD, CG, HPLC

Purificao

destilao, recristalizao ou cromatografia

em coluna

hidrocarbonetos alifticos

- grande quantidade inalterada aps a ignio

Pureza da amostra

provavelmente

um sal metlico

Determinao das constantes fsicas




Slido

PF (intervalo menor que 2,0 C) -

Solubilidade

purificao


Lquido

- hidrocarbonetos (alcanos, alquenos ou alquinos), aminas,

PE (intervalo menor que 5,0 C) - purificao

por destilao


Classificao por funes

por recristalizao

Densidade relativa

aldedos, cetonas, cidos carboxlicos, amidas

com exceo para hidrocarbonetos




ndice de refrao

Atividade tica

Viscosidade

Ajuda na escolha do solvente para uso espectroscpico

Testes dos grupos funcionais





Reaes com reagentes apropriados


Orientada por informaes anteriores

chave de

solubilidade

raramente usada nas etapas iniciais,

Anlise elementar


Qualitativa

Quantitativa

Cl, Br, I, S, N
% de C, H, N, S

Frmula emprica

27/02/2015

Determinao da Massa Molecular (MM)

Frmula emprica = Frmula molecular


ou
Frmula emprica Frmula molecular

Possibilita estimar a FM

Mtodos para determinar a MM:

Espectrometria de Massas (EM)

Osmometria

Crioscopia (Mtodo Rast)

mudana na presso de vapor

gua:

Frmula emprica = H2O

H2O

Etano:

Frmula emprica = CH3

Equivalente de neutralizao

peso molecular = 18

Massa molecular determinada = 18




peso molecular = 15

Massa molecular determinada = 30

Determinao da Frmula Molecular (FM)




diminuio da temperatura

de fuso
-

Determinao da Frmula Molecular (FM)

Mtodos fsicos de determinao estrutural:

Espectrometria de massas (EM)

Espectroscopia no ultravioleta e visvel (UV/Vis)

Espectroscopia no infravermelho (IV)

Espectroscopia de ressonncia magntica nuclear (RMN)

Outros dados (degradao qumica, derivatizao,

2 (CH3) ou C2H6

Determinao do ndice de deficincia de


hidrognio (IDH)
Parmetro para saber a quantidade de
duplas ou triplas ligaes ou anis em
uma molcula de acordo com o seu
dficit de hidrognio em comparao
com um composto com mesmo
nmero de tomos de carbono.

atividade tica (ORD), termogravimetria, Raman, difrao


de raios-X)

Hidrocarbonetos saturados

Formao de anis e ligaes duplas

CnH2n+2

-2H

C C

C C

CH4
CH3CH3
CH3CH2CH3
CH3CH2CH2CH3
CH3CH2CH2CH2CH3

CH4

H H

C2H6
C3H8

H H

C4H10

C C

C5H12

H H

CH3 CH3
CH3 CH CH C CH3
CH3

CH3

H2C
C9H20

H2C

-4H

C C

CH2
CH2 H
CH2

CH2 H

-2H

H2C
H2C

CH2
CH2
CH2

CH2

A formao de cada anel ou ligao dupla causa a perda de 2H.

27/02/2015

Consideraes iniciais:

Regras bsicas para determinar o IDH:

1- Em compostos acclicos, saturados que contm elementos do grupo V


(N, P, As, Sb, Bi), um hidrognio deve ser adicionado para cada elemento
do grupo V
C2H6

C2H7N

C2H8N2

C2H9N3

2- Em compostos acclicos, saturados que contm elementos do grupo VI


(O, S, Se, Te), no muda o nmero de hidrognios
C2H6

C2H6O

C2H6O2

C2H5F

C2H4F2

C2H3F3

2- Corrigir esta frmula com os elementos no carbnicos.


Adicionar um H para cada tomo de elemento do grupo V e
subtrair um H para cada elemento do grupo VII

- O, S, Se, Te

no modificar o clculo de H na frmula

+0

C-H

- N, P, As, Sb, Bi

C-O-H +O

- Cicloalcanos e alquenos  CnH2n


- Alquinos e Cicloalquenos  CnH2n-2

3- Comparar esta frmula com a frmula do composto


desconhecido. Determinar a diferena de Hs
4- Dividir por 2. Este valor igual ao nmero de ligaes pi
e/ou anis da frmula estrutural da substncia
desconhecida.

adicionar 1 H frmula calculada


C-H

+1
- F, Cl, Br, I

- Alcanos  CnH2n+2

C2H6O3

3- Em compostos acclicos, saturados que contm elementos do grupo


VII (F, Cl, Br, I), um hidrognio deve ser subtrado para cada elemento do
grupo VII
C2H6

1- Determinar a frmula do hidrocarboneto saturado e


acclico contendo o mesmo nmero de carbonos da
substncia desconhecida

C-NH2 +N,+H

subtrair um H da frmula calculada

-1

C-H

C-X -H,+X

C5H8

C5H12
C5H8
H4

= ( CnH2n+2 )

ndice = 4/2 = 2

C4H5N

C4H10 = ( CnH2n+2 )
C4H11N Adicione 1 H para N
C4H5 N
H6

ndice = 6/2 = 3

Duas insaturaes
Existe uma dupla ligao e um anel neste exemplo

Duas duplas ligaes e um anel

27/02/2015

Exemplos:

O ndice d o nmero de:


duplas ligaes ou
triplas ligaes ou
anis na molcula

1) C7H14O2

Um anel e o equivalente s 3
duplas ligaes tem como
ndice 4

Benzeno

2) C10H14N2 (nicotina)
3) C2H3Cl3O2 (hidrato de cloral)

Se o ndice = 4, ou mais,
espera-se um anel benzeno

Possveis respostas para o ex. 1:


O

1)

H3C

H3C

CH3
O

H3C

CH3

CH3

H3 C
7)

CH3

Espectrometria
de massas
(MS)

CH3

CH3
CH3

CH3

6)

CH3

3) H3C

5)

2) H3C

Mtodos espectromtricos de anlise


orgnica

O
CH3

CH3

Espectroscopia
no ultravioleta
(UV)

Espectroscopia
no
infravermelho
(IV)

grupos
cromforos

grupos
funcionais

Espectroscopia
de ressonncia
magntica
nuclear (RMN)

O
4)

H3 C

CH3

H3 C

CH3

8)

massa
molecular e
padres de
fragmentao

CH3

OH
9)
H3C

OH
O
10)

OH

O
12)

11)

H3C

CH3

CH3

Identificao

OH

Espectrometria de massas (MS)


m/z 43

43

n e tipo de 1H e
13C em funo
da localizao e
do
desdobramento
de sinais

Espectroscopia no infravermelho (IV)

m/z 59
m/z 73

m/z 87

m/z 87

m/z 71
m/z 43

55
m/z 57

M+ .

C-H (alif.)

C=O

C(=O)-O

Massa/carga do pico on-molecular = 130


Que corresponde frmula C7H14O2

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Espectroscopia de ressonncia magntica


nuclear do 1H (1H-RMN)

Espectroscopia de ressonncia magntica


nuclear do 13C (13C-RMN)

4
6

q
1

2H

3H

1H 2H

6H

55

Bibliografia


G. M. Lampman, D. L. Pavia, G. S. Kriz. Introduo a


espectroscopia. Editora Cengage Learning, 4 ed.,
Bellingham, 2010.
R. M. Silverstein, G. C. Bassler, T. C. Morrill.
Identificao Espectromtrica de Compostos
Orgnicos, Editora Guanabara-Koogan, Rio de Janeiro,
7a edio, 2010.
C. H. Collins, G. L. Braga, P. S. Bonato
(coordenadores). Fundamentos em cromatografia
Campinas: Editora Unicamp, 2006.
C. M. O. Simes (organizador) et al. Farmacognosia:
da Planta ao Medicamento 6 ed.- Porto
Alegre/Florianpolis: Ed. Universitria/UFRGS/Ed. da
UFSC, 2010.

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