EXTRAO ANLISE FITOQUMICA PRELIMINAR FRACIONAMENTO, ISOLAMENTO E PURIFICAO DE SUBSTNCIAS IDENTIFICAO ESTRUTURAL
Preparar uma exsicata para a identificao
botnica
TESTES BIOLGICOS
MODIFICAO ESTRUTURAL
Evitar coletar:
Partes afetadas por doenas e parasitas
Materiais estranhos
Registrar o local, a hora e data da coleta
SNTESE TOXICOLOGIA
27/02/2015
Preparao do material vegetal
-
-
Material fresco Indispensvel para deteco de componentes especficos Evita a presena de substncias oriundas do fenecimento vegetal Deve ser processado imediatamente ou conservado a baixas temperaturas
Material seco Deve-se garantir a estabilidade qumica Deve-se interromper os processos metablicos Estabilizao lcool ou pelo calor (acima de 60C) Secagem temperatura abaixo de 60C por longo tempo Moagem
Extrao
Grau de diviso
Meio extrator
Polaridade Toxicidade Estabilidade
Metodologia
Extrao a frio turbolizao, macerao, percolao Extrao a quente em sistema aberto infuso e decoco Extrao a quente em sistema fechado extrao sob refluxo
Anlise fitoqumica preliminar
-
Reaes de colorao e/ou precipitao
Cumarinas luz ultravioleta fluorescncia azul brilhante ou verde Polifnois oxidantes (FeCl3) azul ou verde azulado Alcalides Dragendorff precipitado Saponinas espuma Extrato bruto mascaramento do teste - Roteiro de anlise sistemtica: reaes mais ntidas
Fracionamento, isolamento e purificao de substncias
Cromatografia Processo dinmico em que a separao cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel.
Partio por solventes
ELUENTE
Solventes de polaridade crescente
mistura de Princpios ativos
SOLVENTE SiO2
Partio cido-base
EXTRATO AQUOSO
Substncias
2 3 4
Fraes c/ subst. puras
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Cromatografia
Cromatografia
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel.
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel.
CC
Cromatografia
CC
Cromatografia
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel.
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel.
CC
Cromatografia
CC
Cromatografia
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel. CC
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel. CC
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Cromatografia
Cromatografia
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel.
Processo dinmico em que a separao
cromatogrfica obtida a partir de interaes diferenciais entre os analitos componentes da mistura, fase estacionria e fase mvel.
CC
CC
Cromatografia em camada delgada (CCD)
Princpio: Adsoro (polaridade) - Separao pela migrao diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie plana Grande gama de compostos pode ser analisada Mtodo rpido (20-40 min.) Mtodo simples e barato F.M. - sistema de solventes F.E - Adsorventes - slica, alumina, poliamida, etc Mtodos de deteco: - fsico-qumicos
D AMOSTRA
d 10,0 cm
Rf = d/D 1,00
7,3 cm
0,73
3,6 cm
0,36
0,8 cm
0,08
Rf = fator de reteno D = distncia percorrida pela FM d = distncia percorrida pela mancha Origem = ponto de aplicao da amostra
0,00 (ORIGEM)
0 Rf 1
Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) -
High-performance liquid chromatography (HPLC)
Instrumentao do CLAE
Permite a deteco no destrutiva de um grande nmero de
substncias Deteco por UV, arranjos de fotodiodos (informao espectral), fluorescncia ou eletroqumico Alta sensibilidade
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Cromatografia gasosa (CG)
Concentraes muito baixas
Anlise de frmacos volteis e semi-volteis
Compostos no recuperao
volteis:
Injetor
Instrumentao do CG
derivatizao
baixa
Coluna
Sistema de deteco
Gs de arraste (FM) - H2, N2, He, Ar - Funo: transporte da amostra - Propriedades: inerte, compatvel com o detector, puro
Etapas para a determinao estrutural
de um produto
Identificao estrutural SNTESE
MODIFICAO ESTRUTURAL
Caracterizao preliminar
Determinao de constantes fsicas
Solubilidade
Testes dos grupos funcionais
Anlise elementar
Determinao da Massa Molecular (MM)
Determinao da Frmula Molecular (FM)
Caracterizao preliminar
Cor
Substncias orgnicas com grupos funcionais conjugados
so coloridas e a intensidade da cor depende da extenso da conjugao. - Ex: - compostos aromticos nitrosos e -dicetonas amarelos - quinonas e azo-compostos amarelos, laranjas ou vermelhos - cetonas e alcenos extensamente conjugados vo do amarelo ao prpura - substncias saturadas ou com baixo grau de insaturao brancas ou pouco coloridas. - impurezas marrom -
Caracterizao preliminar
-
Odor O cheiro de muitas substncias orgnicas extremamente caracterstico, particularmente os de baixo peso molecular.
Cuidado!!!
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Caracterizao preliminar
Chama - Teste de ignio
Inflamabilidade
Natureza da chama:
Caracterizao preliminar
halognios a dificultam ou impedem
- cheiro de dixido de enxofre
- chama amarela fuliginosa
presena de enxofre
alta insaturao ou elevado
nmero de carbonos na molcula
- chama amarela no fuliginosa
Pureza
Ponto de ebulio constante
Faixa de ponto de fuso estreita
CCD, CG, HPLC
Purificao
destilao, recristalizao ou cromatografia
em coluna
hidrocarbonetos alifticos
- grande quantidade inalterada aps a ignio
Pureza da amostra
provavelmente
um sal metlico
Determinao das constantes fsicas
Slido
PF (intervalo menor que 2,0 C) -
Solubilidade
purificao
Lquido
- hidrocarbonetos (alcanos, alquenos ou alquinos), aminas,
PE (intervalo menor que 5,0 C) - purificao
por destilao
Classificao por funes
por recristalizao
Densidade relativa
aldedos, cetonas, cidos carboxlicos, amidas
com exceo para hidrocarbonetos
ndice de refrao
Atividade tica
Viscosidade
Ajuda na escolha do solvente para uso espectroscpico
Testes dos grupos funcionais
Reaes com reagentes apropriados
Orientada por informaes anteriores
chave de
solubilidade
raramente usada nas etapas iniciais,
Anlise elementar
Qualitativa
Quantitativa
Cl, Br, I, S, N % de C, H, N, S
Frmula emprica
27/02/2015
Determinao da Massa Molecular (MM)
Frmula emprica = Frmula molecular
ou Frmula emprica Frmula molecular
Possibilita estimar a FM
Mtodos para determinar a MM:
Espectrometria de Massas (EM)
Osmometria
Crioscopia (Mtodo Rast)
mudana na presso de vapor
gua:
Frmula emprica = H2O
H2O
Etano:
Frmula emprica = CH3
Equivalente de neutralizao
peso molecular = 18
Massa molecular determinada = 18
peso molecular = 15
Massa molecular determinada = 30
Determinao da Frmula Molecular (FM)
diminuio da temperatura
de fuso -
Determinao da Frmula Molecular (FM)
Mtodos fsicos de determinao estrutural:
Espectrometria de massas (EM)
Espectroscopia no ultravioleta e visvel (UV/Vis)
Espectroscopia no infravermelho (IV)
Espectroscopia de ressonncia magntica nuclear (RMN)
Outros dados (degradao qumica, derivatizao,
2 (CH3) ou C2H6
Determinao do ndice de deficincia de
hidrognio (IDH) Parmetro para saber a quantidade de duplas ou triplas ligaes ou anis em uma molcula de acordo com o seu dficit de hidrognio em comparao com um composto com mesmo nmero de tomos de carbono.
A formao de cada anel ou ligao dupla causa a perda de 2H.
27/02/2015
Consideraes iniciais:
Regras bsicas para determinar o IDH:
1- Em compostos acclicos, saturados que contm elementos do grupo V
(N, P, As, Sb, Bi), um hidrognio deve ser adicionado para cada elemento do grupo V C2H6
C2H7N
C2H8N2
C2H9N3
2- Em compostos acclicos, saturados que contm elementos do grupo VI
(O, S, Se, Te), no muda o nmero de hidrognios C2H6
C2H6O
C2H6O2
C2H5F
C2H4F2
C2H3F3
2- Corrigir esta frmula com os elementos no carbnicos.
Adicionar um H para cada tomo de elemento do grupo V e subtrair um H para cada elemento do grupo VII
- O, S, Se, Te
no modificar o clculo de H na frmula
+0
C-H
- N, P, As, Sb, Bi
C-O-H +O
- Cicloalcanos e alquenos CnH2n
- Alquinos e Cicloalquenos CnH2n-2
3- Comparar esta frmula com a frmula do composto
desconhecido. Determinar a diferena de Hs 4- Dividir por 2. Este valor igual ao nmero de ligaes pi e/ou anis da frmula estrutural da substncia desconhecida.
adicionar 1 H frmula calculada
C-H
+1 - F, Cl, Br, I
- Alcanos CnH2n+2
C2H6O3
3- Em compostos acclicos, saturados que contm elementos do grupo
VII (F, Cl, Br, I), um hidrognio deve ser subtrado para cada elemento do grupo VII C2H6
1- Determinar a frmula do hidrocarboneto saturado e
acclico contendo o mesmo nmero de carbonos da substncia desconhecida
C-NH2 +N,+H
subtrair um H da frmula calculada
-1
C-H
C-X -H,+X
C5H8
C5H12 C5H8 H4
= ( CnH2n+2 )
ndice = 4/2 = 2
C4H5N
C4H10 = ( CnH2n+2 ) C4H11N Adicione 1 H para N C4H5 N H6
ndice = 6/2 = 3
Duas insaturaes Existe uma dupla ligao e um anel neste exemplo
Duas duplas ligaes e um anel
27/02/2015
Exemplos:
O ndice d o nmero de:
duplas ligaes ou triplas ligaes ou anis na molcula
1) C7H14O2
Um anel e o equivalente s 3 duplas ligaes tem como ndice 4
Benzeno
2) C10H14N2 (nicotina) 3) C2H3Cl3O2 (hidrato de cloral)
Se o ndice = 4, ou mais, espera-se um anel benzeno
Possveis respostas para o ex. 1:
O
1)
H3C
H3C
CH3 O
H3C
CH3
CH3
H3 C 7)
CH3
Espectrometria de massas (MS)
CH3
CH3 CH3
CH3
6)
CH3
3) H3C
5)
2) H3C
Mtodos espectromtricos de anlise
orgnica
O CH3
CH3
Espectroscopia no ultravioleta (UV)
Espectroscopia no infravermelho (IV)
grupos cromforos
grupos funcionais
Espectroscopia de ressonncia magntica nuclear (RMN)
O 4)
H3 C
CH3
H3 C
CH3
8)
massa molecular e padres de fragmentao
CH3
OH 9) H3C
OH O 10)
OH
O 12)
11)
H3C
CH3
CH3
Identificao
OH
Espectrometria de massas (MS)
m/z 43
43
n e tipo de 1H e 13C em funo da localizao e do desdobramento de sinais
Espectroscopia no infravermelho (IV)
m/z 59 m/z 73
m/z 87
m/z 87
m/z 71 m/z 43
55 m/z 57
M+ .
C-H (alif.)
C=O
C(=O)-O
Massa/carga do pico on-molecular = 130
Que corresponde frmula C7H14O2
27/02/2015
Espectroscopia de ressonncia magntica
nuclear do 1H (1H-RMN)
Espectroscopia de ressonncia magntica
nuclear do 13C (13C-RMN)
4 6
q 1
2H
3H
1H 2H
6H
55
Bibliografia
G. M. Lampman, D. L. Pavia, G. S. Kriz. Introduo a
espectroscopia. Editora Cengage Learning, 4 ed., Bellingham, 2010. R. M. Silverstein, G. C. Bassler, T. C. Morrill. Identificao Espectromtrica de Compostos Orgnicos, Editora Guanabara-Koogan, Rio de Janeiro, 7a edio, 2010. C. H. Collins, G. L. Braga, P. S. Bonato (coordenadores). Fundamentos em cromatografia Campinas: Editora Unicamp, 2006. C. M. O. Simes (organizador) et al. Farmacognosia: da Planta ao Medicamento 6 ed.- Porto Alegre/Florianpolis: Ed. Universitria/UFRGS/Ed. da UFSC, 2010.
