Cuando se pretende analizar una muestra colorida como el azul de timol para

conocer su concentracin es necesario recordar la ley de la absorcin,

postulada por Lambert y Beer dice que una solucin da informacin
cuantitativa de cmo es que la atenuacin de la radiacin depende de la
concentracin de las molculas que la absorben y de la distancia que recorre el
rayo en el medio absorbente (SKOOG 2001), es decir, cuando la luz atraviesa
una solucin contenedora de una analito, azul de timol para este caso, la
intensidad de la misma disminuye a consecuencia de la excitacin del analito.
Dicha respuesta es medida como absorbancia (A) y transmitancia (T) ambas
expresadas como:
A=log P0/P

T = P/P0

Donde P0 es la intensidad de la radiacin infligida sobre la muestra y P la

radiacin saliente de la muestra.
Esto nos lleva a recurrir a un espectrofotmetro de luz visible, instrumento
mediante el cual se inflige un haz de luz de determinada longitud de onda () a
la solucin de Azul de timol con el fin de excitar las molculas del mismo. Las
molculas a l ser excitadas por radiacin visible experimentan un cambio
energtico, un electrn situado en un nivel bajo de energa molecular u orbital
atmico es trasferido a un orbital atmico de mayor energa.
De esta manera se sabe que para el azul de timol en la solucin problema debe
de existir un nivel de radiacin o longitud de onda en la que el nivel de
excitacin de las molculas constituyente para generar una respuesta analtica
(absorbancia y transmitancia). Cabe mencionar que en el espectro de luz
visible existen intervalos de longitud de onda que trasmiten un color de luz la
cual ser absorbida y posteriormente trasmitida en un color complementario.

Intervalo de longitudes
color de la luz absorbida
complementario transmitido
400-435

violeta

435-480

azul

480-490

azul-verde

490-500

verde-azul

500-560

verde

560-580

amarillo-verdoso

580-595
595-650
650-750

amarillo
anaranjado
rojo

color
amarillo-verdoso
amarillo
anaranjado
rojo
purpura
violeta
azul
azul-verdoso
verde-azul

Para poder hacer uso de espectrofotmetro para cuantificar la solucin de azul

de timol es necesario precisar una longitud de onda de trabajo. Existe una
manera de conocer la longitud ptima de trabajo misma longitud a la cual el
azul de timol es mayormente excitado por el haz de luz, encontrando el
intervalo de longitudes de onda donde el color complementario transmitido por
la solucin sea azul y realizar un espectro de absorcin. Un espectro de
absorcin es una grafico de la absorbancia o transmitancia en funcin de la
longitud de onda en donde el punto ms alto (para absorbancia) y el ms bajo
(para transmitancia) cortado en el eje de la absorbancia ser la longitud de
onda optima de trabajo.
Para la construccin de un espectro de absorcin de debe evaluar la respuesta
analtica en funcin de la longitud de onda haciendo uno de la solucin ms
concentrada de la serie de soluciones de la curva de calibracin puesto que al
ser la contenedora de azul de timol en mayor proporcin es la que nos brindara
una mejor respuesta pues al estar en mayor concentracin habr ms
molculas absorbiendo radiacin lo que se traduce en un mayor respuesta
analtica, abosrbancia para este caso.
Como se puede observar en los espectros de absorcin realizados el punto ms
para la absorcin y el ms bajo para la transmitancia al cortarlo con el eje de la
longitud de onda es de 595nm valor que se encuentra dentro del intervalo de
longitud correspondiente al el color trasmitido por la solucin el cual va de
580nm a 595nm eso quiere decir que en todo este rango la solucin se
encuentra excitada en mayor proporcin que a otras longitudes de onda pero a
595nm en la longitud donde su nivel de energa es superior y por lo tanto la
longitud de onda optima de trabajo.
Se pueden establecer algunas condiciones para construir un espectro de
absorcin lo cuales son:

Concentracin del analito a medir caiga dentro del rango de medicin

del equipo
Solucin no sea de un color cuyas longitudes de onda estn cercanas a
las de otro color
Que el analito sea qumicamente estable
Si los sistemas de la curva de valoracin contienen una solucin a parte
de la de inters cuantitativo que esta no interfiera con el mismo

El azul de timol es un analito poseedor de dos pkas y tres colores dependiendo

en el pH en que se encuentre la solucin, rojo para un pH de 0 a 2, amarillo de
2 a 8.7 y azul a pH de 8.7 a 14. Segn SKOOG el color complementario
expresado por una solucin est dado por el color absorbido por la misma; si el
azul de timol se pretende analizarlo en sus formas coloridas roja o amarilla
encontramos que la longitud de onda de trabajo tendra que estar contenida en
un intervalo de 435 a 500 nm, intervalo en el cual tanto el color rojo y amarillo
trasmitido por la solucin absorben longitudes de onda bastante cercanas
haciendo que la longitud optima de trabajo sea inexistente provocando
interferencias unas con otras lo que lleva a la obtencin de valores inexactos

motivo suficiente para trabajar con el azul de timol en su forma colorida azul la
cual es asegurada al estar contenido en el solucin bsica, por esta razn
todos los sistemas de la curva de calibracion contienen 4 ml de NaOH
9.8659x10-3 asegurando as el amortiguamiento del pH y la forma colorida del
azul de timol.
Al agregar 4 ml de NaOH de concentracin 9.8659x10-3 volmenes de 1 a 5 ml
de la solucin de azul de timol y aforar a 10 ml el pH de las soluciones de la
curva de calibracion es calculado de la siguiente manera:
4 ml de NaOH x 9.8659x10-3 mol de NaOH/1000 ml = 3.9463x10-5 mol de
NaOH contenidos en un volumen total de 10 ml
3.9463x10-5 mol de NaOH/10ml x 1000 ml / 1L =3.9463x10-3 M
Segn la ecuacin 14 = pH + pOH realizando un despeje podemos calcular el
pH
PH = 14 pOH

pOH = -log (3.9463x10-3)

pH = 14 2.41 = 11.59

Si en un intervalo de pH de 8.7 a 14 el color del azul de timol es azul y el pH

de la solucin es de 11.59 entonces el color del azul de timol en las soluciones
de la curva de calibracion es ese, motivo por el cual la curva de calibracion es
preparada aadiendo 4 ml de NaOH.

En base a las grficas anteriores donde se grafica la absorbancia (A) en funcin

de la concentracin expresada en g/ml y M(molar) se puede el tratamiento
estadstico conocido como regresin lineal para cada una de las graficas
obteniendo los valores siguientes:
A= f(M)
Y=mx+b

b= -1.79x10-3
M=25072.1660

A=f(g7ml)
b=-1.81x10-3
m=0.0537

Dadp que la ecuacin de la lnea recta esta expreseda como y=mx+b la

absorbancia puede se adecuada a este modelo matemtico. La abosrbancia se
expresa como A=CK debido a que C esta representando la concentracin y K la
constante de proporcionalidad si tomamos en cuenta que y representa la
abosrbancia entonces m, la pendiente, representada por CK y tomando en
cuenta que K siempre siempre ser constante entonces la concentracin es
representada por X obteniendo la ecuacin siguiente A=CK+b donde A=Y K=m
C=X, caben mencionar que debido a l que la absorbancia no posee unidades K
debe estar expresada en las unidades correspondientes para que al ser
multiplicada por la concentracin estas sean eliminadas de la ecuacin y de un
resultado adimensional.
En relacin a las pendientes de las grficas obtenidas por regresin lineal la
unidades correspondientes son m=25072.1660mol-1L para A=f(M) y

m=0.0537 para A=f(g/ml) asi al multiplicar por la concentracin estas

unidades se cancelan y se obtiene la absorbancia sin unidades.
Haciendo uso de este modelo matemtico podemos cuantificar el azul de timol
contenido en la solucin problema. La absorbancia reportada por el
espectrofotmetro fue de 0.743 entonces la ecuacin para la determinacin de
la concentracin queda como:
0.743=25072.1660mol-1LC-1.7939x10-3 para A=f (M) y 0.732=0.0537g1mlC-1.8x10-3 despejando la concentracin de la ecuacin tenemos que
C=0.743-1.7939x10-3/25072.1660mol-1L=2.9563x10-5mol/L
C=0.743-1.8x10-3/0.0537g-1ml=13.8026g/ml
Debido a que para el anlisis espectrofotomtrico del sistema numero
6(sistema contenedor de la muestra problema) fue necesario hacer una
dilucin 1:10 puesto que el color de la solucin problema en el sistema no
entraba dentro de la curva de calibracin en realidad la concentracin total de
la muestra problema es 10 veces ms alta que la obtenida en el clculo, por lo
tanto
13.8026g/ml x 10 = 138.026 g/ml
2.9562x10-5Mx10=2.9562x10-4M
De esta forma se cuantifica el contenido de azul de timol dentro de la solucin
problema.