ORIGINAL

Farm Hosp 1996; 20 (3): 181-184

CARACTERIZACION DEL MODELO DE ERROR

DEL ENSAYO TDx CICLOSPORINA MONOCLONAL
EN SANGRE TOTAL
Aumente Rubio, M. D., Farmacutica Especialista en Farmacia Hospitalaria, Adjunta del Servicio
de Farmacia; Prez Suanes, A., Farmacutica Residente de III; Panadero Ruz, M. D., Farmacutica
Especialista en Farmacia Hospitalaria, Coordinadora del medicamento de la zona Crdoba Norte;
Alvarez Aguilar, J., Farmacutico Especialista en Farmacia Hospitalaria, Jefe de Servicio.
Servicio de Farmacia. Hospital Universitario Reina Sofa. Crdoba.

Palabras clave:
Modelo de error. Ciclosporina. Mtodo analtico.
Resumen:
El objetivo del presente trabajo es caracterizar el
modelo de error del ensayo TDx ciclosporina monoclonal en sangre total. Se analizaron replicados de muestras de distinta concentracin en
sangre de ciclosporina (intervalo de 0 a 800
ng/ml) ajustando la desviacin estndar de cada
concentracin a una ecuacin polinmica de segundo grado. Lo mismo se realiz con los resultados publicados por el UK cyclosporin QA
Scheme (D. Holt, St. Georges Hospital, London)
(intervalo de 0 a 1.500 ng/ml). La ecuacin polinmica que define el modelo de error interensayo
de nuestro laboratorio es: y = 2,24 + 0,029x +
0,000013x2, n = 7, r 2 = 0,97 (p < 0,001) y la del
modelo de error interlaboratorio: y = 4,59 + 0,052x +
0,000013x2, n = 48, r 2 = 0,96 (p < 0,001). Estas
ecuaciones pueden ser de utilidad para mejorar
el ajuste de cualquier modelo farmacocintico a
los datos de concentracin del paciente.
Key words:
Error model. Cyclosporine. Analytic method.
Summary:
The purpose of this study was to assess the error
model of monoclonal cyclosporine TDx assay in

Correspondencia: M. D. Aumente Rubio. Servicio de Farmacia. Hospital Universitario Reina Sofa. Avda. Menndez Pidal, s/n. 14004 Crdoba.
Trabajo presentado en forma reducida como pster en
el XXXIX Congreso de la Sociedad Espaola de Farmacia
Hospitalaria. Palma de Mallorca, octubre de 1994.
Fecha de recepcin: 14-9-1995.

whole blood. Replicates of blood samples with

different concentrations of cyclosporine (range 0
to 800 ng/ml) were analyzed adjusting each concentration to a second grade polynomial equation. The same procedure was applied to results published by UK cyclosporine QA Scheme
(D. Holt, St. Geoges Hospital, London) (range 0
to 1,500 ng/ml). The polynomial equations that
defined the interassay error of our laboratory and
the interlaboratory error model were as follows:
y = 2.24 + 0.029x + 0.000013x2, n = 7, r2 = 0.97
(p < 0.001), and y = 4.59 + 0.052x + 0.000013x2,
n = 48, r 2 = 0.96 (p < 0.001). These equation
may be useful to improve the adjustment of any
pharmacokinetic model to patients blood concentration data.
Farm Hosp 1996; 20: 181-184

INTRODUCCION
El ndice correcto de credibilidad de cualquier concentracin srica de frmaco viene determinado por el
recproco de su varianza (ndice de Fischer). Es muy
importante conocer la desviacin estndar (SD) de cada
concentracin, lo que nos permite aplicar este ndice a
cada valor experimental, asignndole su correspondiente credibilidad. Es decir, el peso o grado de incertidumbre que debe tener cada concentracin plasmtica experimental, independientemente de su magnitud en el modelo farmacocintico (1).
Sin embargo, en la prctica la mayora de los laboratorios clnicos slo se aseguran que la desviacin estndar del ensayo se encuentre entre unos lmites seleccionados como aceptables y el error real del ensayo es ignorado habitualmente en la monitorizacin de frmacos.
De este modo se asume una gran carga de incertidum-

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bre para el valor determinado, puesto que no se establece ninguna dependencia respecto a su variabilidad. En
resumen, se dispone informacin sobre la magnitud de
la concentracin del frmaco en la muestra biolgica,
pero no del error asociado a la misma (2).
Cada laboratorio clnico debe determinar su propia
desviacin estndar de cada ensayo cubriendo todo el intervalo de concentracin de trabajo. De este modo puede
conocer el modelo de error de la tcnica analtica utilizada para la determinacin de cada frmaco. Las ventajas
son utilizar el modelo correcto de ponderacin para el
subsiguiente ajustado individual del modelo cintico a
las concentraciones plasmticas experimentales del paciente. En segundo lugar, si se ha desarrollado el mtodo
bayesiano, realizar predicciones de concentraciones plasmticas ms exactas y precisas al utilizar una varianza
fiable para obtener las estimadas de los parmetros. Y finalmente, cuando se utilizan mtodos no paramtricos,
conocer la distribucin de densidad de probabilidad de
los parmetros poblacionales con mayor precisin, ya que
el modelo de error analtico asumido en los mtodos de
modelizacin de las poblaciones condiciona de forma importante la densidad de probabilidad (frecuencia o discretizacin) de los parmetros farmacocinticos (3).
El objetivo del presente trabajo es caracterizar el modelo de error del ensayo TDx ciclosporina monoclonal
en sangre total, con objeto de poder ser utilizado en el
ajuste de cualquier modelo farmacocintico a los datos
de concentracin del paciente.

METODO
Se han analizado replicados de muestras de distinta
concentracin en sangre de ciclosporina (0, 100, 150,
250, 400, 500, 800 ng/ml). Con este inrtervalo de
concentracin se cubre todo el intervalo que se espera
obtener en cualquier paciente en tratamiento con ciclosporina, tanto la gama de concentraciones que define el denominado mbito teraputico, as como las
concentraciones potencialmente subteraputicas y txicas.
El anlisis se ha realizado por inmunoanlisis de fluorescencia polarizada (FPIA) con el analizador TDx (Abbott).
Este mtodo utiliza anticuerpos monoclonales y la matriz biolgica es sangre total. Como blanco se ha utilizado el calibrador A (0 ng/ml) del ensayo y para el resto
de las concentraciones los controles bajo (150 ng/ml),
medio (400 ng/ml) y alto (800 ng/ml), as como los calibradores B (100 ng/ml), C (250 ng/ml) y D
(500 ng/ml) que proporciona el fabricante.
Las concentraciones de referencia se han intercalado
entre las muestras de los pacientes y se han procesado
en das diferentes, calculando en cada una de ellas su
valor medio y desviacin estndar. Se abarca as la variabilidad intra e interensayo. En ningn caso se ha utilizado menos de 20 determinaciones por concentracin,
incluido el cero.
Con los valores obtenidos se ha realizado el ajuste a
un polinomio de segundo grado del tipo:

El valor de a3 = 0 se fij desde el principio y no se

ajust a los datos, al considerar innecesario el uso de un
polinomio de tercer grado para la caracterizacin del
error.
Siguiendo el mismo procedimiento se han examinado los resultados enviados por el UK cyclosporin QA
Scheme (D. Holt, Analytical Unit, St. Georges Hospital, London) un programa de control de calidad externo
en el que nuestro laboratorio participa. El hospital de
St. George enva mensualmente tres muestras de sangre
con una concentracin desconocida de ciclosporina a
numerosos laboratorios clnicos, los cuales tras su anlisis le remiten el resultado. Posteriormente el UK cyclosporin QA Scheme publica estos resultados junto
con la media y desviacin estndar de cada muestra y
el nmero de laboratorios participantes. Para hacer el
polinomio de error interlaboratorio se han utilizado los
datos correspondientes a los meses entre diciembre de
1992 y marzo de 1994, un total de 48 muestras y 86 laboratorios diferentes. Es decir, 86 replicados por muestra. El intervalo de concentracin abarcado es de 0 a
1.500 ng/ml.
RESULTADOS
Error interensayo
En la Tabla 1 se recogen las concentraciones de referencia, los valores experimentales obtenidos y sus desviaciones estndar utilizados para el clculo del error
interensayo de nuestro laboratorio.
La desviacin estndar tiene una relacin no lineal
con la concentracin, siendo ms baja en el intervalo
medio, a veces ms alta en el cero (blanco) y siempre
ms alta a concentraciones altas (error heteroscedstico). Con este ensayo se obtuvo una desviacin estndar
de 4,1 a 0,0 ng/ml (blanco) y una ponderacin o credibilidad de 0,06, la desviacin estndar se eleva a 31,8 ng/ml
a la concentracin de 800 ng/ml, descendiendo la ponderacin a 9,8 104; hay, por tanto, un factor de 60 en
la credibilidad dada a los datos de concentracin dentro
de este intervalo.
Una vez realizado el ajuste de los valores experimentales a un polinomio de segundo grado se obtuvieron
los coeficientes que se recogen en la Tabla 2. Por tanto,
Tabla 1. Resultados del anlisis de las concentraciones
de referencia
Concentracin
Concentracin
Nmero de
diana
media
rplicas
(ng/ml)
(ng/ml)
0
100
150
250
400
500
800

20
21
58
23
52
22
51

6,39
96
149
242
386
480
772

Desviacin
estndar
(ng/ml)
4,10
4,40
6,6
7,22
16,0
21,88
31,8

Y = a0x0 + a1x1 + a2x2

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Tabla 2. Coeficientes del polinomio que caracteriza

el error interensayo

Tabla 3. Coeficientes del polinomio que caracteriza

el error interlaboratorio

Coeficientes

Valor

Error estndar

Coeficientes

Valor

Error estndar

a0
a1
a2

2,24
0,029
0,000013

1,79
0,011
0,000014

a0
a1
a2

4,59
0,052
0,000013

1,15
0,006
4,6 106

el clculo de la desviacin estndar asociada a un determinado valor de concentracin en sangre queda reducido a la aplicacin de la siguiente ecuacin:
SD = 2,24 + 0,029x + 0,000013x2 (n = 7)
r = 0,98545 r2 = 0,97111 (p < 0,001)
En la figura 1 se representa grficamente la relacin
entre la desviacin estndar y la media de cada concentracin de referencia.
Error interlaboratorio
Utilizando los datos publicados por el UK cyclosporin QA Scheme, y ajustando los valores experimentales a un polinomio de segundo grado, se han obtenido
los coeficientes que se indican en la Tabla 3. Por tanto,
la ecuacin representativa del modelo de error analtico
interlaboratorio es:
SD = 4,59 + 0,052x + 0,000013x2 (n = 48)
r = 0,9822 r2 = 0,96476 (p < 0,001)
En este caso la desviacin estndar de la concentracin blanco 0,0 ng/ml es de 7 ng/ml, obtenindose una
ponderacin de 0,02. La desviacin estndar se eleva a
43 ng/ml a una concentracin de 710 ng/ml (ponderacin de 5,4 10 4) y a 107 ng/ml a una concentracin de
1.458 ng/ml (ponderacin de 8,7 105); hay, por tanto,
un factor de 37 en la credibilidad dada a los datos de
concentracin entre 0 y 700 ng/ml y de 229 entre 0 y
1.500 ng/ml.

Figura 1.Correlacin desviacin estndar vs concentracin

media de ciclosporina para el error interensayo.

La representacin grfica de la relacin entre la desviacin estndar y la media de cada concentracin se

muestra en la figura 2.
DISCUSION
Las desviaciones estndar de las concentraciones experimentales obtenidas en nuestro laboratorio cuantifican la variabilidad de la determinacin, tanto intra como interensayo, que de forma global existe en la tcnica analtica de nuestro laboratorio. Usando la ecuacin
polinmica obtenida se puede calcular fcilmente la
desviacin estndar ms probable de cualquier concentracin en sangre de ciclosporina dentro de este intervalo de concentracin. Ahora bien, estos valores pueden
ser sustancialmente distintos en otros laboratorios o
centros en los que las determinaciones se realicen en
otras condiciones analticas. Por esto se recomienda
que cada laboratorio clnico establezca su propio modelo de error.
Algunos programas de farmacocintica clnica, como el
conjunto de programas que constituyen el USC*PACK,
permiten almacenar los coeficientes de la ecuacin polinmica que describe el modelo de error de la tcnica
analtica, de modo que durante el procedimiento de
ajuste bayesiano se utilice una ponderacin correcta de
cada concentracin en suero del paciente (4). El objetivo del mtodo bayesiano es proporcionar un modelo
especfico individualizado a cada paciente basado en la
dosificacin del frmaco, datos de concentracin en
suero y descriptores clnicos que afecten al modelo. Para esto es muy importante que el error del ensayo sea
cuantificado correctamente para poder equilibrar la credibilidad de los datos de concentracin srica frente a
la de los parmetros poblacionales (5).

Figura 2.Correlacin desviacin estndar frente a concentracin media de ciclosporina para el error interlaboratorio.

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Cuando se utiliza el mtodo bayesiano se puede dar

igual peso a los datos de concentracin srica siempre
que estos tengan la misma desviacin estndar. Un ensayo con una desviacin estndar constante en su intervalo de trabajo se dice que es homocedstico (2). Pero
generalmente no todos los datos experimentales tienen
el mismo grado de fiabilidad ni estn afectados de error
de igual forma. Por esto si la varianza es distinta se debe dar una pesada estadstica igual al inverso de la varianza, de forma que a mayor varianza menor factor de
ponderacin y en consecuencia menor ser su contribucin al ajuste de la funcin (mtodos heterocedsticos).
El error analtico en la determinacin de ciclosporina es
heterocedstico, por cuanto que la desviacin estndar
cambia en el mbito de concentracin que define su intervalo teraputico, observndose adems un factor de
60 en la credibilidad dada a los datos de concentracin
dentro del intervalo estudiado. Por esto puede ocurrir
que al utilizar este modelo de error en el procedimiento
de ajuste bayesiano las concentraciones sanguneas altas se ignoren relativamente en comparacin con las bajas y el ajuste del modelo no se aproxime tanto a las
concentraciones altas como se puede desear. Pero aun
as, esta ecuacin polinmica se obtiene de la medida
de la desviacin estndar a lo largo de todo el intervalo
de trabajo del ensayo incluido el 0 y por esto constituye la estimacin ms correcta del error del ensayo.
Es importante disponer tanto en la caracterizacin
del error interensayo como del error interlaboratorio de
informacin de la variabilidad de la muestra blanco
(0,0 ng/ml), ya que si se desea establecer un modelo de
error con cierta fiabilidad la informacin referente a esta muestra es muy necesaria. Adems, la mayora de los
laboratorios clnicos caracterizan la sensibilidad de su
ensayo escogiendo como valor lmite dos veces la desviacin estndar por encima del blanco. Tambin es importante conocer el error de concentracin situadas en
el mbito txico del frmaco.

CONCLUSION
Concluimos indicando que se ha obtenido el modelo
de error analtico que mejor ajusta la correlacin entre
los valores de ciclosporina en sangre y sus respectivas
desviaciones estndar, lo que podra ser de utilidad para
mejorar la prediccin de parmetros cinticos y el ajuste
individualizado de la dosis.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al doctor D. Gonzalo Palacios,
de Laboratorios Abbott, su inters y colaboracin en la
realizacin de este trabajo.
BIBLIOGRAFIA
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