UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA /INSTITUTO DE CINCIAS DA SADE

DEPARTAMENTO DE BIOFUNO SETOR BIOQUMICA

Profa. Zenira Cardoso Vilasboas Viana
ESTUDO DA CINTICA ENZIMTICA DA CATALASE
EFEITO DA CONCENTRAO DO SUBSTRATO
REAGENTES
Soluo de H2O2 a 4% // catalase // soluo de ovoalbumina
TCNICA
a)Distribuir os reagentes como indicado na tabela abaixo, respeitando a ordem dos mesmos (da esquerda para a direita).
b)Aps a distribuio , homogeneizar os reagentes por uma nica inverso, tampando os tubos. Esperar 10 minutos e anotar o resultado (em mm de espuma
formada a partir da superfcie do lquido). Anotar o resultado na tabela abaixo.
Justificar todos os resultados encontrados.

Tubo
1
2
3
4
5
6

H2O2
mL 9
(Substrato)
0,4
0,8
1,2
1,6
2,0

H2O
destilada
mL
2,0
1,6
1,2
0,8
0,4
-

Soluo albumina
(gotas)
6
6
6
6
6
6

gua
sangnea
(mL)
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0

Resultados
(mm)

Efeito da concentrao do substrato

Observe o grfico V x [S] que voc obteve. Qual o efeito do aumento da concentrao de S?
O aumento da concentrao do substrato gera um aumento na velocidade da reao (tubo 1 ao tubo 4). isso ocorre devido
disponibilidade de enzimas na soluo, e enquanto elas estiverem livres o aumento da velocidade ser proporcional ao aumento da
concentrao do substrato, o que pode ser observado no aumento da coluna de espuma de acordo com o aumento da concentrao de
perxido de hidrognio. Em seguida (do tubo 4 ao tubo 6) apesar do aumento da concentrao do substrato a coluna de hidrognio no
aumenta, o que mostra que as enzimas atingiram um ponto de saturao, o que significa que todas as enzimas disponveis esto
associadas a substratos. A velocidade ento estaciona e se mantm constante.
Quais os resultados esperados?
- Espera q nos primeiro tubos a coluna de espuma aumente. Mostrando que a velocidade da reao esta aumentando.
- Espera que a partir de determinada concentrao, a altura da coluna permanea constante, mostrando que a atividade mxima foi
atingida e mesmo que aumentasse a concentrao do substrato no haver mais enzimas livres disponveis para catalisar a reao.
Os resultados obtidos no experimento no foram exatamente os que eram esperados. O esperado era que nos primeiros tubos
coluna de espuma aumentasse, mostrando que a velocidade da reao estava aumentando, a partir de uma determinada concentrao
a altura das colunas deveria se manter constante, mostrando que a velocidade mxima foi atingida e que mesmo que se aumentasse a
concentrao do substrato no haveria mais enzimas livres disponveis para catalisar a reao. Nos tubos 1, 3 e 4 o experimento
ocorreu conforme o esperado, o tubo 2 sofreu um desvio muito alm dos padres esperados, nos ltimos tubos (5 e 6) as colunas
deveriam ter se mantido com alturas semelhantes entre si e semelhantes mxima (tubo 4), o que no ocorreu.
O cianeto um inibidor da catalase?
O cianeto sim um inibidor da catalase, ou seja, liga-se fortemente ao centro ativo desta enzima, impedindo a ligao do perxido de hidrognio.
Na realizao do experimento a concentrao do inibidor manteve-se constante nos tubos 1 ao 6, variando apenas a concentrao do substrato.
Nos tubos 7 ao 10 o inibidor no seria colocado e apenas a concentrao do substrato iria variar. Desta forma, seria possvel a visualizao da ao do inibidor
na atividade da catalase, porm o inibidor, por erro de execuo do experimento, foi colocado nos tubos 7 ao 10; fato que invalidou o experimento.
a)

A inibio pode ser revertida aumentando-se a concentrao de S?

Sim. Tendo em vista o fato de o cianeto ligar-se reversivelmente catalase, a competio pode beneficiar o substrato pela adio de mais
substrato. Ou seja, quando a concentrao do substrato maior que a concentrao do inibidor, a probabilidade de uma molcula do inibidor se ligar enzima
ser mnima.