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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CINCIAS DA SADE DE PORTO ALEGRE

RELATRIO DE AULA PRTICA


BIOQUMICA I
Ana Paula Schonardie, Naiane Bassani e Susan Flach

HIDRLISE CIDA E ENZIMTICA DO AMIDO

INTRODUO:
O amido constitudo basicamente por resduos de glicose que so unidos pelas
ligaes alfa-1,4, amilose, e por ligaes alfa-1,6,amilopectina.
Na hidrlise cida o amido convertido, completamente, em glicose, isso ocorre
porque o cido hidrolisa tanto as ligaes alfa-1,4 quanto as alfa-1,6. Na hidrlise
enzimtica a -amilase no ataca as ligaes alfa-1,6, portanto no transforma todo
amido em glicose. Nessa hidrlise o amido transformado, progressivamente, em
acrodextrinas, glicose, maltose, isomaltose e oligolosdios. As acrodextrinas so
resultados da hidrlise da amilopectina, uma vez que a -amilase ataca apenas as
ligaes alfa-1,4, tm-se como resultado molculas de maltose, maltotriose e de
glicose com compostos ramificados (dextrinas).
A hidrlise do amido tem aplicao fisiolgica de grande relevncia, onde ele
transformado em molculas menores de acares pelas enzimas no processo de
digesto para que ocorra a absoro e utilizao dos nutrientes pelo metabolismo.
Alm disso, a hidrlise aplicada na indstria, para a obteno dos acares de
alimentos como, por exemplo, a mandioca.
Nessa aula prtica sero observados os dois tipos de hidrlise citados, assim como
os agentes que interferem na atividade da enzima alfa-amilase.

MATERIAIS E MTODOS:

Experimento 1: Hidrlise cida


Primeiramente, foram numerados oito tubos de ensaio seguindo a seguinte ordem
numrica: 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 e 21. Utilizou-se tambm uma placa-de-toque que foi
marcada seguindo a mesma numerao. Aps, foi pipetado 1 mL do regente de
Benedict em cada tubo. Em um Becker de 50 mL foi colocado 40 mL da soluo de
amido a 1g/dL e essa aquecida at a ebulio. Para que o volume no fosse perdido
durante a ebulio, o Becker foi mantido tampado durante o processo. soluo de
amido, foi adicionada e misturada com o uso de basto de vidro, 2 mL de uma soluo
de cido clordrico 50% (v/v). Imediatamente, aps a ebulio, foi retirado 1 mL da
mistura hidrolisada e colocado no tubo de nmero 0, ao mesmo tempo em que 5 gotas
da mesma mistura eram colocadas na cavidade 0 da placa-de-toque. Aps 3 minutos a
contar do tempo 0, a operao foi repetida e assim sucessivamente at que todos os
tubos e cavidades da placa tivessem sido preenchidos. Por fim, foi adicionada 1 gota

de uma soluo de Lugol em cada cavidade da placa-de-toque e, os tubos foram


aquecidos em banho-maria fervente de 1 a 2 minutos.

Experimento 2: Hidrlise Enzimtica


Para dar-se o incio ao procedimento, houve a coleta de aproximadamente 5 mL de
saliva, dissolvida posteriormente em 10 mL de gua destilada. Aps a coleta, 3 tubos
de ensaio foram numerados de 1 a 3 e, a eles, adicionado 5 mL de saliva. O contedo
do tubo de nmero 2 foi aquecido em banho-maria fervente at a ebulio. Ao tubo de
nmero 3 foi adicionado 1 mL de HCl a 5%. Para finalizar esta etapa, 1 mL da soluo
de amido 1g/dL foi adicionado em todos os tubos e estes levados para banho-maria a
40 C por 20 minutos.
Para a segunda etapa deste experimento, foram numerados mais 3 tubos com
numerao de 4 a 6. Ao tubo de nmero 4 foi adicionado 1 mL do contedo do tubo 1,
ao de nmero 5, 1 mL do tubo 2 e ao de nmero 6, 1 mL do contedo do tubo 3.
Imediatamente, foram adicionadas 2 gotas de Lugol aos tubos de nmero 1, 2 e 3 e 3
mL do reativo de Benedict aos tubos 4, 5 e 6. Os tubos 4, 5 e 6 foram novamente
aquecidos em banho-maria fervente por 3 minutos. Atravs disto, os resultados foram
analisados.

RESULTADOS E DISCUSSO:

Experimento n 1: Hidrlise cida do Amido


Ao finalizar o protocolo experimental o seguinte resultado foi percebido:

Tempo (min)

Reao com lugol

Reao de Benedict

XXXXXXXX

XXXXXXX

XXXXXX

XXXXX

12

XXXX

15

XXX

18

XX

21

Legenda: x equivale a graduao da intensidade da cor.

Baseando-se nos resultados supracitados, possvel perceber que conforme a


reao com o lugol decresce a reao de Benedict se intensifica (fig1.), isso se deve
ao fato de que cada um desse reativos reagem com diferentes produtos. O lugol
uma soluo de iodo que apresenta cor azul escura na presena de amido e a medida
que diminui a quantidade de tal, a cor perde a intensidade, at que na sua ausncia
total a cor um marrom claro. O reagente de Benedict percebe a presena de
acares, neste caso da glicose, a verificao visual se d pela presena de um
precipitado marrom, conforme aumenta a presena de glicose o precipitado tambm
mais evidente.
A hidrlise cida baseia-se no fato de que em temperaturas elevadas o cido, no
caso apresentado o HCl, pode converter completamente o amido em seu constituinte
essencial que a glicose. Com a passagem do tempo a hidrolise progride e mais
molculas de glicose so evidentes, os cidos rompem tanto as ligaes alfa1-4 como
as alfa 1-6 do amido, por isso a total converso possvel. Com a progresso da
hidrlise o poder redutor da glicose vai aumentando, deste modo o hidrolisado deixa
de reagir com o iodo, que antes reagia com o amido por este ser um composto no
redutor.

Reao com Lugol e Benedict


5
4.5

I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

4
3.5
3
2.5

Reao com lugol

Reao de Benedict

2
1.5
1
0.5
0

Tempo de 0 a 21min ( de 3 em 3min)

Fig.1. Relao entre as reaes com Lugol e com Benedict, nos diferentes tempos.

Experimento n 2: Hidrlise Enzimtica


Para verificar como ocorre a hidrlise enzimtica, com a -amilase, presente na
saliva, foi realizado o procedimento j descrito e os seguintes resultados foram
adquiridos:

Tubo

Reao com lugol


Cor

Reao

Marron

Negativa

Azul escuro

Azul escuro

Tubo

Reao de Benedict
Cor

Reao

Verde

Positiva

Positiva

Azul

Negativa

Positiva

Azul

Negativa

Nessa situao o lugol continua com as mesmas caractersticas descritas


anteriormente, reagindo na presena do amido (no redutor) e revelando uma
colorao azul escura que diminui a intensidade medida que o amido vai sendo
hidrolisado em acares. O reativo de Benedict continuou azul nas reaes negativas,
ou seja, que no apresentavam acares e na reao positiva ficou verde, isso porque
na hidrlise enzimtica o amido no completamente hidrolisado em glicose. O amido
no completamente convertido pela alfa-amilase em glicose, porque essa enzima
ataca apenas as ligaes alfa-1,4 e inativa em relao s ligaes alfa-1,6. Essa
hidrlise produz molculas de maltose, maltotriose, poucas molculas de glicose e
todas essas citadas com um composto ramificado chamado dextrinas (ligaes alfa1,6).
O tubo 1 foi o nico que teve a reao de Benedict positiva, ou seja, foi o nico que
teve o amido convertido para algum dos acares citados acima, uma vez que nesse
tubo no foi adicionado nenhum agente que interferisse na ao enzimtica da alfaamilase. Essa confirmao respaldada pelo resultado negativo com a soluo de
iodo.
A soluo de saliva adicionada ao tubo 2 havia sido aquecida antes de adicionar a
soluo de amido, o que explica o fato da ao enzimtica no ter ocorrido. Em altas
temperaturas, a alfa-amilase, que uma protena, pode desnaturar e deixar de
executar suas atividades, logo no ocorreu a hidrlise do amido e a reao com iodo
foi positiva afirmando.
No tubo 3 antes de adicionar o amido foi colocado HCl, o que tambm ocasionou a
desnaturao da -amilase impossibilitando a hidrlise do amido e sua converso em
acares. Por este motivo a reao com iodo tambm foi positiva.

CONCLUSO:
O amido formado essencialmente por molculas de glicose. Nos dois tipos de
hidrlise estudados a cida a que consegue converter completamente o amido em
molculas de glicose, uma vez que ocorre a quebra tanto das ligaes alfa-1,4 quanto
das ligaes alfa-1,6. Na hidrlise enzimtica o amido transformado,
progressivamente, em acrodextrinas, glicose, maltose, isomaltose e oligolosdios, uma
vez que a alfa-amilase atua apenas nas ligaes alfa-1,4. Alm de observar a
diferena entre as hidrlises cidas e enzimticas, possvel entender como os
agentes desnaturantes (cido forte e temperatura elevada) interferem e impedem a
atividade enzimtica, j que eles desnaturam a protena e impossibilitam que o amido
seja convertido.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
SURMELY, R; ALVAREZ, H.; CEREDA, M.P.;VILPOUX,O.F. Hidrlise do Amido. Vol.3,
cap.15 Cultura de tuberosas amilceas latino-americanas. Fundao Cargill. 2003
DOMINICZAK, M. Metabolismo - Srie Carne e Osso III Srie. ELSEVIER, 2007. Cap. 21.
TRADUO DE: Flesh and Bones of Metabolism.

QUESTES:

1- Na hidrlise cida o amido convertido, completamente, em glicose, que seu


constituinte essencial. Isso ocorre porque o cido hidrolisa tanto as ligaes alfa-1,4
quanto as alfa-1,6; ligaes estas que unem os resduos de glicose. Na hidrlise
enzimtica a -amilase no ataca as ligaes alfa-1,6, portanto no transforma todo
amido em glicose. Nessa hidrlise o amido transformado, progressivamente, em
acrodextrinas, glicose, maltose, isomaltose e oligolosdios. As acrodextrinas so
resultados da hidrlise da amilopectina, uma vez que a -amilase ataca apenas as
ligaes alfa-1,4, tem-se como resultado molculas de maltose, maltotriose e de
glicose com composto ramificados (dextrinas).

2- A soluo fisiolgica possui pH 6,0, por isso se for adicionado algumas gotas dela
soluo de amido no ocorrer nada, uma vez que o pH ideal da ao enzimtica
6,7, bem prximo do pH da soluo fisiolgica.

3- Reao com Lugol: O lugol uma soluo de iodo que reage com o amido,
apresentando uma colorao azul escura na presena do mesmo.
Reao de Benedict: O Reagente de Benedict um reagente qumico de cor
azulada, usado para detectar a presena de acares, nos quais incluem a glicose,
galactose, maltose e manose. Tornando possvel a verificao da hidrlise do amido,
uma vez que ele composto essencialmente por glicose.
Demonstra diferentes cores de acordo com a quantidade de acares, conforme a
tabela abaixo:

Cor

Resultados

Cor inalterada (azul)

negativo

Verde-azulado ou verde

traos

Verde (qualquer
amarelo

tom)

com

precipitado

positivo +

Castanho ou marrom

positivo ++

Vermelho tijolo

positivo +++

Fonte: Prof. Raimundo Jnior; Departamento de Biologia da PUC de Gois

4- Ao chegar no estmago a amilase salivar torna-se inativa, uma vez que o pH do


estmago cido e o seu pH ideal 6,7 (prximo a neutralidade), ou seja, a amilase
inativa em meio cido.

5- Como j foi citado na resposta da questo nmero um, a amilase salivar no


converte todo o amido em glicose, porque ela ataca apenas as ligaes alfa-1,4 no
interior da molcula.

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