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Introduccin
La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa,
uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro
soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de
vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensin, otro
para aplicar la capa de adsorbente, y una cmara en la que se
desarrollen las placas cubiertas. Es preciso tambin poder guardar con
facilidad las placas preparadas y una estufa para activarlas.
La fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La
fase estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser por lo
general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los
componentes que se desplacen con mayor velocidad sern los menos
polares.
Polaridad de los compuestos orgnicos en orden creciente:
Hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehdo
Aldehdo < ester < alcohol < cetonas < aminas < cidos < amidas
Ventajas de la cromatografa en capa fina
La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a
otros mtodos cromatogrficos (en columna, en papel, en fase
gaseosa, ...) ya que el utillaje que precisa es ms simple. El tiempo que
se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la
separacin es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores
corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma. El mtodo es
simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace que
sea un mtodo adecuado para fines analticos.
Adsorbentes
Al realizar la eleccin del adsorbente se debe tener en cuenta el tamao
de las partculas del adsorbente, cuanto ms finamente dividido est
mayor ser su adhesin al soporte, aunque tambin sele puede aadir
un adherente (yeso,...). Algunos de los adsorbentes ms utilizados son:
-Celulosa
-Almidn
-Azucares
-Gel de slice (silicagel)
-xido de aluminio (almina)
-Carbn activo (carbn en polvo)
-Kieselguhr
Los tres primeros se utilizan para extraer componentes poli funcionales
de plantas y animales.
Silicagel
El gel de slice o cido silcico es uno de los ms utilizados, es
dbilmente cido, su pH oscila entre 4-5. Con lo cual no se deber
utilizar con sustancias que se corrompan con los cidos. Los geles de
slice normales suelen contener impurezas de hierro y/o aluminio, este
factor tambin se debe tener en cuentas respecto al uso de
componentes. El tamao del grano suele ser de 10 a 40 micras () y el
tamao de poro vara de 20 a 150.
Generalmente lleva incorporado un agente aglomerante, yeso (sulfato
de clcico semihidratado), para proporcionar firmeza al adsorbente.
Tambin han sido incorporados dos indicadores del ultravioleta, juntos o
por separados (amarillo y/o verde), en diversos tipos de gel de slice.
Se trata de un adsorbente polar, pero puede ser tratado con
hidrocarburos para neutralizar los grupos -OH, de forma que se haga
apto para separar componentes lipfilos (esteroides, cidos grasos,
ceras, vitaminas liposolubles, etc). A este proceso se le denomina
cromatografa de fase reversa (silanizado).
Almina
La almina u xido de aluminio es un adsorbente ligeramente bsico
debido a que en el proceso de extraccin de la almina a partir de la
bauxita quedan algunas molculas de hidrxido de aluminio adheridas a
la almina, dndole a sta un carcter bsico. No consigue un desarrollo
tan alto de la sustancia depositada como el gel de slice.
La almina puede ser tratada qumicamente para conseguir alminas
cidas, bsicas y neutras. Puede contener aglomerantes y/o indicadores
ultravioletas. Es un adsorbente de carcter polar, de tal forma que
retendr con mayor avidez a los componentes polares.
Preparacin de placas.
El adsorbente se desle en agua destilada. Para mezclar la papilla
homogneamente es preferible agitar de modo mecnico. La proporcin
de adsorbente y agua depende del tipo de adsorbente. Dos partes de
agua y una de adsorbente pueden tomarse como norma general, no
obstante, habrn de consultarse las instrucciones del fabricante.
Originariamente se utilizaban, como soporte del adsorbente, lminas de
vidrio, pero en la actualidad tambin se utilizan lminas de otros
compuestos orgnicos ms flexibles. Dependiendo del tipo de
separacin que se desee (cualitativa o preparativa) se utilizar un
tamao de placa u otro. En general para realizar una separacin
preparativa de un gramo de muestra es necesario una placa de vidrio de
20x20 cm., 35 gramos de adsorbente y 80 ml. de agua destilada.
Localizacin de sustancias
Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la
posicin de dichos compuestos, para ello existen dos tipos de mtodos:
Mtodos qumicos.
Mtodos fsicos.
Mtodos qumicos
Consisten en ralizar una reaccin qumica entre un reactivo revelador y
los componentes separados, para ello se pulveriza la placa con los
reactivos reveladores con la ayuda de un pulverizador de vidrio y una
pera de goma, o mediante un dispositivo que proporcione aire
comprimido.
Es preferible pulverizar con las placas en posicin horizontal. Si el
reactivo revelador es peligroso o muy corrosivo, la pulverizacin deber
realizarse en una vitrina de gases bien ventilada. La pulverizacin se
realizar poco a poco. En cromatografa en capa fina no puede realizarse
el baado del cromatograma (en cromatografa en papel s).
Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma
complejos coloreados con los componentes orgnicos (con tonos
amarillo-marrn), pero las manchas desaparecen con el tiempo con lo
que es conveniente sealar las manchas aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que
reacciona con los componentes orgnicos produciendo manchas negras.
Constantes Rf Y Rx
La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar
la posicin de un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal,
mide la retencin de un componente. Se define como:
Constantes Rf Y Rx
La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el
centro de la mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10.
Para que los RF sean reproducibles deben ser fijadas una serie de
condiciones (Espesor de la placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad
de muestra). El mximo valor de RF que se puede alcanzar es de 1, lo
ideal es un RF entre 0.65 y 0.7.
Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la
misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados
se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad
que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son
iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo.