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Universidade De So Paulo

Faculdade De Zootecnia E Engenharia De Alimentos


Engenharia De Biossistemas
Bioqumica aplicada Engenharia De Biossistemas
Prof. Dr. Fernando G. Tonin

Propriedades Gerais de Protenas e Aminocidos

Jssica Ciola Campos 7565240


Larissa Aparecida Augusto 7565107
Lisiane Brichi 7565195
Marcello Vincius Da Silva Ferreira 6908048

Pirassununga,
2011
Sumrio

1. Introduo.....................................................................................................................4
2. Objetivos.......................................................................................................................6
3. Metodologia..................................................................................................................6
3.1 Materiais utilizados................................................................................................6
3.2 Reagentes utilizados...............................................................................................6
3.3 Procedimentos........................................................................................................6
3.3.1 Reao do Biureto..........................................................................................6
3.3.2 Reao Xantoprotica.....................................................................................7
3.3.3 Reao de Ninhidrina.....................................................................................7
3.3.4 Precipitao de Protenas pelo Calor..............................................................7
4. Resultados e Discusso.................................................................................................7
4.1 Reao do Biureto..................................................................................................7
4.2 Reao Xantoprotica............................................................................................8
5. Concluso.....................................................................................................................8
6. Bibliografia...................................................................................................................8

1. Introduo
A palavra protena vem da palavra grega prtos que significa a primeira ou a mais
importante, sendo a macromolcula mais importante, pois est presente em diversas funes
nos seres vivos, a partir delas o organismo capaz de sintetizar enzimas, hormnios,
anticorpos, transportadores, msculos entre outras tantas coisas. So constitudas de
subunidades monomricas os aminocidos os quais se diferem em 20 tipos diferentes,
dando caractersticas diferentes a cada protena formada. Estes possuem uma estrutura
caracterstica, que contm um grupo carboxila e um grupo amina ligados a um mesmo
carbono, diferem entre si pelas diferentes cadeias laterais. Os aminocidos podem ser
classificados por uma de suas cadeias laterais (grupo R), podem ser aminocidos no polares
alifticos, possuem grupo R hidrofbico e no polar, aminocidos aromticos, onde seu grupo
R possui um anel benznico, aminocidos carregados positivamente

e carregados

negativamente, pois contem cargas positivas ou negativas respectivamente e polares neutros,


possuem caracterstica hidroflica. Os aminocidos formam ligaes peptdicas, na qual o
terminal amino de um aminocido se liga ao terminal carboxil de outro, dando origem a um
peptdeo. Podem agir como cidos e bases, pois quando dissolvido em agua, ele existe na
soluo como um on bipolar ou zwitterion (do alemo, on hibrido), essas substancias
so chamadas de anfteras. (NELSON, et al 2002).
A principal classificao para protenas quando se diz respeito a suas estruturas,
podendo ser classificada em estrutura primria, secundria, terciria e quaternria, a estrutura
primria diz respeito sequncia de resduos de aminocidos, a secundria, ao arranjo
espacial dos aminocidos, podendo ser -hlice ou placas--pregueadas, a terciria, ao arranjo
espacial das estruturas secundrias e a estrutura quaternria como esto dispostas no espao e
entre si as estruturas anteriores. (NELSON, et al 2002).
A solubilidade de protenas em meio aquoso depende da distribuio de cargas eltricas
ao longo da cadeia, quanto maior for interao entre as molculas de agua e os grupos
polares e/ou ionizados das molculas proteicas maior ser a solubilidade. Em altas
temperaturas as protenas sofrem desnaturao perda de sua conformao nativa, perda das
estruturas secundaria, terciaria e quaternria, mantendo a estrutura primaria, sem a quebra das
ligaes peptdicas ocorre uma diminuio da solubilidade, aumentando assim sua
precipitao em meio aquoso, outros agentes podem influenciar na precipitao das protenas,
como sais neutros, os quais quando esto em soluo ocorre um aumento da fora inica do
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sistema, as cargas provenientes da dissociao do sal passam a interagir com as molculas


proteicas, isso faz com que aumente a solubilidade, ocorrendo um fenmeno chamado
salting-in, porem em condies de elevada fora inica, decorrentes de grandes quantidades
de sais, comeam ocorrer interaes entre a agua e as cargas provenientes dos sais, ocorrendo
assim precipitao das protenas. A solubilidade das protenas em solventes orgnicos bem
menor do que em meio aquoso, porque capacidade de interao com as partculas de soluto
diferente para cada solvente, existe uma grandeza que mede essa interao, a qual chamada
constante dieltrica, para agua essa constante de aproximadamente 80, fazendo com que
haja maior interao da protena-agua, enquanto isso em solventes orgnicos est constante
bem menor. (NEVES et al,2006).
Algumas reaes so importantes para a caracterizao das protenas ou dos
aminocidos presentes em sua composio, como a reao de precipitao por calor nesta
reao ocorre a desnaturao das protenas devido ao aquecimento, o que faz com que estas
percam suas conformaes nativas, a precipitao pode ser explicada pela exposio de
radicais hidrofbicos e outros que prejudicam a interao protena-agua e favorecem a
interao protena-protena, a reao xantoproteica, na qual se pode verificar a presena de
aminocidos que contenham como cadeia lateral anis benznicos, esses anis benznicos se
ligam ao acido ntrico, formando o nitrobenzeno, o qual quando est em meio alcalino d
colorao amarela a soluo e quando est em meio acido apresenta uma colorao
alaranjada.
O biureto reage com ons cpricos, em meio alcalino, formando um produto de
colorao violceo. A reao do biureto devida s ligaes peptdicas, dando positiva para
protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos. A reao tambm positiva
para substncias que contm duas carbonilas ligadas diretamente ou atravs de um nico
tomo de carbono ou nitrognio. Dependendo da complexidade da protena ou do peptdeo em
questo, a cor do produto de reao a presena do biureto varia substancialmente protenas
do colorao violeta, peptdios do colorao rosa. Para que a reao do biureto seja positiva
h necessidade da presena de pelo menos duas ligaes peptdicas na molcula, portanto,
aminocidos e dipeptdeos no do reao do biureto positiva (MOTA, 2003).
Na reao de ninhidrina pode-se verificar a presena de protenas ou aminocidos que
contenham um grupo amina em uma de suas extremidades, reagindo e produzindo uma
colorao purpura, com exceo da prolina e da hidroxiprolina, a qual adquire uma colorao

amarela, neste usado o reagente de ninhidrina, que uma mistura de SnCl2 em tampo
citrato + ninhidrina em metil celosolve (NEVES et al,2006).

2. Objetivos
Reconhecer algumas propriedades qumicas e fsicas das protenas e aminocidos.

3. Metodologia
3.1 Materiais utilizados
Banho-Maria
Pra de Borracha
Pipetador
Pipetas Graduadas
Pipeta Pasteur
Suporte para Tubos de Ensaio
Tubos de Ensaio

3.2 Reagentes utilizados


Soluo de cido Ntrico Concentrado
Soluo de Albumina de Ovo
Soluo Saturada de Cloreto de Clcio
Soluo de Glicina 0,1%
Soluo de NaOH 10%
Soluo de NaOH 40%
Soluo de Ninhidrina 0,1%
Soluo de Sulfato de Cobre 0,1%

3.3 Procedimentos
3.3.1 Reao do Biureto
Em um tubo de ensaio enumerado (tubo 1) adicionou-se 2 mL de Soluo de Albumina
de Ovo e em outro tubo de ensaio enumerado (tubo 2) adicionou-se 2 mL de Soluo de
Glicina 0,1%. Em ambos os tubos, foi pipetado 2 mL de Soluo de NaOH 10%. Aps agit-

los, pingou-se 2 gotas de Soluo de Sulfato de Cobre 0,1% e, novamente agitou-se os tubos
de ensaio.

3.3.2 Reao Xantoprotica


Em dois tubos de ensaio enumerados (tubo 1 e tubo 2), foi pipetado 1 mL de Soluo de
cido Ntrico Concentrado. Cuidadosamente, no tubo 1 foi adicionado pelas paredes do tubo
2 mL de Soluo de Albumina de Ovo. Agitou-se cuidadosamente o tubo 1. De modo
semelhante, ao tubo 2 adicionou-se pelas paredes do 2 mL de Soluo de Glicina 0,1%.
Agitou-se cuidadosamente o tubo 2. Ambos os tubos foram aquecidos a 95 C por 5 minutos
no banho-maria. Findado o aquecimento, adicionou-se Soluo de NaOH 40% at que
percebesse algum sinal de reao qumica.

3.3.3 Reao de Ninhidrina


Em um tubo de ensaio enumerado (tubo 1) adicionou-se 2 mL de Soluo de Albumina
de Ovo e em outro tubo de ensaio enumerado (tubo 2) adicionou-se 2 mL de Soluo de
Glicina 0,1%. Em ambos os tubos, foi pipetado 2 mL de Soluo de Ninhidrina 0,1%. Aps
agit-los, os tubos foram aquecidos a 95 C em banho-maria, deixando-os esfriar aps 15
minutos de aquecimento.

3.3.4 Precipitao de Protenas pelo Calor


Em um tubo de ensaio enumerado (tubo 1) adicionou-se 2 mL de Soluo de Albumina
de Ovo e em outro tubo de ensaio enumerado (tubo 2) adicionou-se 2 mL de Soluo de
Albumina de Ovo e 5 gotas de Soluo Saturada de Cloreto de Clcio. Os tubos foram
aquecidos a 95 C em banho-maria, deixando-os esfriar aps 15 minutos de aquecimento.

4. Resultados e Discusso
4.1 Reao do Biureto
Aps a adio da Soluo NaOH 10% e da Soluo de Sulfato de Cobre 0,1%, notou-se
que no tubo 1, por conter uma protena (albumina) que possui vrias resduos de aminocidos
e vrias pares de carbonilas ligadas diretamente o ou atravs de um nico tomo de carbono
ou nitrognio, o contedo torna-se violceo, devido resposta positiva Reao do Biureto,
como explica pela literatura citada. O tubo 2 continha apenas aminocidos simples que no
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possua resduos de aminocidos, logo no havia como formar o complexo junto ao on Cu 2+


que alteraria o tom da soluo como no tubo 1.

4.2 Reao Xantoprotica


Aps a adio do acido ntrico no tubo 1, no houve nenhuma alterao de cor mas
ocorreu um aumento de temperatura devido alguma reao secundria (Checa isso por favor
Lisi). No tubo 2, ocorreu uma colorao amarelada, devido a reao do acido ntrico com um
anel benzeno contido na estrutura da albumina (composta de aminocidos diversos), dando
origem a um nitrobenzeno, a reao est descrita a baixo:

A soluo foi aquecida para acelerar a reao, aps o aquecimento foi possvel observar a
separao em duas fases no tubo 2, enquanto no tubo 1 no houve reao, visto que a glicina
no contm anel benzeno em sua cadeia.
Aps a adio de NaOH, a colorao se intensificou no tubo 2, ficando em um tom
alaranjado, e havendo liberao de calor e vapor, pois o nitrobenzeno em meio cido
apresenta uma colorao amarela, e colorao alaranjada em meio bsico.

5. Concluso
Blablabla blablabla blablabla blablabla blablabla blablabla blablabla blablabla blablabla
blablabla

6. Bibliografia
COX, M. M., NELSON, D. L.; Lehninger Princpios de Bioqumica: Carboidratos e
Glicoconjugados, 3 Edio So Paulo: Sarvier, 2002. Cap. 9, p. 89-112.
VALIM, Y. M. L.; et al; Prticas de Bioqumica e Conceitos Gerais. 2008. Disponvel em:
http://www.fcfrp.usp.br/dfq/Bioquimica-Odonto/APO_BIOQUIMICA_ Conceitos_Gerais ODONTO - 1o_sem_2008.pdf. Acesso em: 10 out. 2011. (No sei onde a Lari usou isso)
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NEVES, V. A, et al.; Experimentos de bioqumica. 2006. Disponvel em:


<www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/reacoes_coradastres.htm>
Acesso em : 11 Out. 2011
MOTA, I, C, S.; Reao de Caracterizao de Protenas. 2003. Disponvel em:
<www2.ucg.br/cbb/professores/19/Nutricao/Bioquimica/Reacao%20de%20Biureto.pdf>
Acesso em : 11 Out. 2011