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MEIOS DE CULTURA
TOLEDO
2008
DENISE APARECIDA ZEMPULSKI
JSSI CAUANA HECK
MAYARA CEREJA PASTORIZA
VANESSA LIZERIA ALFLEN
MEIOS DE CULTURA
Relatrio
apresentado
como
requisito
de
Engenharia
Qumica,
da
TOLEDO
2008
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS...................................................................................................iii
LISTA DE TABELAS..................................................................................................iv
RESUMO.....................................................................................................................v
1 NUTRIO E METABOLISMO BACTERIANOS1
1.1 FONTES DE ENERGIA1
1.2 FONTES DE MATERIAL PLSTICO2
1.2.1 Fontes de carbono2
1.2.2 Fontes de nitrognio2
1.2.3 ons Inorgnicos Essenciais3
1.2.4 Fatores de crescimento4
1.3 GUA4
1.4 OXIGNIO ATMOSFRICO4
2 MEIOS DE CULTURA5
2.1 COMPOSIO DOS MEIOS DE CULTURA5
2.2 ESTADOS FSICOS DOS MEIOS DE CULTURA8
2.2.1 Aplicaes de acordo com os estados fsicos 9
2.2.1.1 Meios slidos9
2.2.1.1.1 Gelose Simples (Columbia)9
2.2.1.1.2 Gelose Sangue9
2.2.1.1.3 Gelose Chocolate9
2.2.1.1.4 Gelose Tripcase Soja9
2.2.1.1.5 Isolamento seletivo e diferenciao de Salmonella e Shigella
2.2.1.1.6 Gelose Sabouraud10
2.2.1.1.7 Portagerm10
2.2.1.2 Meios Lquidos11
2.2.1.2.1 Meio de Todd-Hewitt11
2.2.1.2.2 Meio de Tioglicolato11
2.2.1.2.3 Meio de Carne11
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Bactria Thiobacillus2
Figura 2 (a) Bactrias Azotobacter, (b) Rhizobium3
Figura 3 - No meio de MacConkey em: (a) Escherichia coli, (b) Pseudomonas
aeruginosa6
Figura 4 Sistema de microcpsulas API 20E7
Figura 5 - Escherichia coli.13
Figura 6 - Lactobacillus acidophilus.14
Figura 7 - Treponema pallidum.15
Figura 8 - Fungos na Laranja16
Figura 9 - Fungos na carne17
Figura 10 - Tetrahymena pyriformis17
Figura 13 - Ansa de inoculao.
Figura 14 Tubos de ensaio rolhados contendo uma determinada cultura em meio
slido.
Figura 15 Tubos de ensaio rolhados.
Figura 16 Incubadora (espcie de geladeira) para conservao de
microrganismos em meios de cultura.
Figura 17- Frasco com substrato areno-orgnico, contendo microesclerdios de
Macrophomina phaseolina, e pronto para ser armazenado em temperatura de
geladeira (5 2C).
Figura 18 Botijes criognicos para armazenar culturas a baixas temperaturas.
Figura 19 Equipamento de liofilizao.
Figura 20 Modelo de ampolas utilizdas na liofilizao.
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Meio quimicamente definido para uma bactria quimioautotrfica.12
Tabela 2 - Meio quimicamente definido para uma bactria heterotrfica.14
Tabela 3 - Composio do caldo nutriente, um meio complexo para o crescimento de
uma bactria heterotrfica.15
RESUMO
(a)
(b)
compostos
orgnicos
indispensveis
para
um
determinado
2 MEIOS DE CULTURA
Em laboratrio, com condies artificiais, o crescimento de bactrias
conseguido atravs da semeadura das mesmas em meios de cultura, cuja
composio deve atender as necessidades nutritivas dos microorganismos. Pela
grande variedade de tipos nutritivos, no h um meio de cultura universal. Muitas
vezes, o que exigido por uma determinada bactria inibe totalmente o crescimento
das outras; e o que acontece com a matria orgnica necessria ao crescimento
de heterotrficas, que na maioria das vezes inibe o crescimento das autotrficas.
Ento para compor um meio adequado, se faz necessrio conhecer a fisiologia das
bactrias em questo (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
2.3 COMPOSIO DOS MEIOS DE CULTURA
Os meios de cultura so divididos basicamente em dois grandes grupos: os
meios sintticos e os meios complexos.
Os meios sintticos so aqueles cuja composio qualitativa e
quantitativa. Tem-se como exemplo o seguinte meio: NH 4Cl, 1,0g; K2HPO4, 1,0g;
MgSO4.7H2O, 0,2g; FeSO4.7H2O, 0,01g; CaCl2, 0,02g; MnCl2.4H2O, 0,002g;
NaMoO4.2H2O, 0,001g; gua em quantidade suficiente para 1,0 L.. Este meio
tambm est de acordo com os princpios citados anteriormente, no que se refere
fonte de nitrognio e ons inorgnicos, no entanto no contm uma fonte de carbono
em de energia, mas isto acontece porque o meio foi planejado para a cultura de
fotolitotrficas, que s contem material inorgnico, a fonte de carbono o CO 2 que
vem do ar e a fonte de energia a luz solar. Para o desenvolvimento das bactrias
nesse meio elas devem ser incubadas em presena de luz e em condies de
aerobiose (TRABULSI e ALTERTHUM, 2005).
Se fosse adicionado 0,5g de glicose a esse meio, ele ainda seria
considerado sinttico, mas contendo uma fonte de orgnica de energia e carbono
(glicose), permitindo o crescimento de bactrias como a Escherichia coli (Figura 3),
habitantes normal do intestino de mamferos. Essas bactrias tm excepcionais
capacidades de sntese, pois a partir da glicose e dos sais minerais do meio
consegue fabricar todos os componentes do protoplasma. Se forem acrescentados
outros tipos de aminocidos, poder haver o crescimento de um numero cada vez
(a)
(b)
Pode ser utilizada sozinha ou adicionada com sangue (neste caso permitindo
o crescimento de bactrias mais exigentes e a leitura da hemlise).
2.2.1.1.5 Isolamento seletivo e diferenciao de Salmonella e Shigella
um meio de isolamento seletivo e de diferenciao destinado pesquisa de
Salmonella e Shigella a partir de amostras de fezes. Permite evidenciar colnias que
fermentam a lactose e que reduzem o tiosulfato por produo de H 2S.
Os microrganismos que fermentam a lactose originam colnias rosa, os que
no fermentam originam colnias incolores. Os microrganismos que produzem H 2S
reduzem o tiosulfato e originam colnias com centro negro. A presena de colnias
incolores ou fracamente coloridas com ou sem centro negro representa uma forte
presuno de Salmonella ou Shigella.
2.2.1.1.6 Gelose Sabouraud
Utilizada no isolamento de fungos. Permite o isolamento de todo o tipo de
fungos (leveduras e bolores).
2.2.1.1.7 Portagerm
Meio de transporte que mantm viabilidade de aerbios e anaerbios. Meio
slido para transporte de amostras. O agar do meio inibe a difuso de oxignio
presente quando se insere a amostra. Agentes redutores presentes no meio
combinam-se com o oxignio livre mantendo assim a atmosfera de anaerobiose.
Tem um indicador (resazurina) que indica a presena ou ausncia de
oxignio:
Meio de cor azul = presena de oxignio (bactrias anaerbias j inviveis)
Meio incolor = ausncia de oxignio.
Funo
Fonte de nitrognio bem como de energia
Fonte de carbono na forma de CO2 em soluo aquosa
Tampo e ons essenciais
ons essenciais
ons essenciais
ons essenciais
ons essenciais
Solvente
Quantidade
0,5 g
0,5 g
13,5 g
0,7 g
0,1 g
0,0014 g
0,18 g
1000 ml
Funo
Fonte de energia e de carbono
Fonte de nitrognio, tampo e ons essenciais
Tampo e ons essenciais
Quantidade
1g
5g
1g
NaCl
MgSO4.7H2O
gua
ons essenciais
ons essenciais
Solvente
5g
0,2 g
1000 ml
Funo
Substncias hidrossolveis de tecido animal:
carboidratos, compostos de nitrognio
orgnico, vitaminas e sais
Quantidade
3g
Peptona
Cloreto de Sdio
gua
5g
8g
1000 ml
ou
de
outras
substancias
ricas
nutricionalmente,
ao
meio
de
fonte de nutrientes. Ao contrrio para dos meios para bactrias e fungos, existem
poucos meios prontos e padronizados, comercialmente disponveis para algas. Os
meios podem ser preparados a partir de seus ingredientes individuais. Ao preparar
um meio definido para algas marinhas, est poder se tornar uma tarefa tediosa se
todos os sais existentes na gua do mar tiverem de ser adicionados individualmente.
(PELCZAR et al, 1996)
2.4 MEIOS SELETIVOS E DIFERENCIAIS
2.4.1 Meios Com Finalidades Especiais Meios Especiais
So
utilizados
quando
se
quer
isolar,
identificar
ou
contar
os
anaerbios
so
organismos
que
toleram
baixas
para
selecionar
microrganismo
que
est
presente
em
- Destapar a placa de Petri que contem a cultura a usar como inculo, perto
da chama;
- Remover uma poro da cultura com a ansa arrefecida;
Um recipiente interno envolto com fita isolante, que utilizada para evitar a
perda condutvel. Para tal, a fita isolante de papel alumnio nunca deve entrar em
contato com outra parte da fita, que tambm de alumnio. Este contato poderia
causar perda condutvel ou escapamento de congelamento. Ao invs disso, o papel
alumnio entra em contato apenas com papel (www.scielo.br).
Os nicos pontos de contato entre o recipiente interno e o recipiente externo
so o pescoo e um pino pequeno na parte inferior. O pino, que geralmente
construdo de fibra de vidro, oco e evita que o recipiente interno balance dentro da
pele externa. O pescoo ento o maior ponto de contato entre as duas camadas.
Tambm construdo de fibra de vidro, o pescoo sustenta todo o peso do nitrognio
lquido, amostras e os organizadores de amostras. o calcanhar de Aquiles de
todos os botijes criognicos. Quanto maior o pescoo, maior a perda condutvel
(www.scielo.br).
O espao entre os recipientes interno e externo evacuado para menos de
10 mTorr. Mas a quantia exata que est abaixo de 10 mTorr varia entre os diferentes
fabricantes e determina o desempenho do dewar. Este desempenho refletido no
tempo de reteno esttico do recipiente ou no tempo que leva para um tanque
cheio esvaziar com a tampa no lugar. O desempenho do vcuo determinado pelo
tempo em que um fabricante deseja deixar o recipiente conectado a uma bomba de
vcuo. O bombeamento de dois dias normal para recipientes de laboratrio
(www.scielo.br).
Recipientes criognicos tendem a romper-se tanto quanto garrafas trmicas.
Apesar da disponibilidade dos acessrios com rodas, os recipientes duram mais
quando permanecem no lugar. A acelerao do nitrognio lquido e amostras por
movimento do dewar criam um torque no pescoo frgil, que eventualmente permite
a passagem de gases atmosfricos ou nitrognio lquido (se o dewar estiver muito
cheio) no espao entre os recipientes interno e externo. Quando o vcuo afetado,
o desempenho diminui rapidamente e as amostras instveis colocam-se em risco.
Esta possibilidade a razo para a popularidade de monitores de nvel que medem
o nvel do nitrognio lquido no interior do dewar sem a necessidade de remover a
tampa (www.scielo.br).
Sem considerar se as amostras so mantidas em uma fase lquida ou gasosa,
o objetivo manter os agentes bioqumicos ativos ou as clulas dos microrganismos
estril,
reduzindo
dessa
forma
suprimento
de
oxignio
e,
isto, terem
Para
se
contornar esse
www.scielo.br
Questes:
1) Qual a necessidade do estudo dos meios de cultura?